EA015132B1

EA015132B1 - Лекарственное средство для лечения вирусных инфекций

Info

Publication number: EA015132B1
Application number: EA200800842A
Authority: EA
Inventors: Ирина Анатольевна Ленева
Original assignee: Закрытое Акционерное Общество "Мастерклон"
Priority date: 2005-12-28
Filing date: 2005-12-28
Publication date: 2011-06-30
Also published as: US20090326037A1; WO2007075102A1; EP1970061A1; JP2009522257A; EP1970061A4; EA200800842A1

Abstract

Изобретение относится к области медицины, а именно к поиску и разработке новых лекарственных средств для лечения и профилактики вирусных инфекций, преимущественно вирусов гриппа. Задачей изобретения является создание более эффективных и менее токсичных лекарственных средств за счет комбинации арбидола или его аналогов с противовирусным препаратом другого механизма действия. Такая комбинация усиливает эффективность низких доз препаратов, а также за счет снижения дозы позволяет уменьшить вероятность проявления побочных эффектов и возникновения резистентных штаммов вируса. Указанный результат достигается при совместном использовании арбидола или его аналогов и по крайней мере одного препарата, выбранного из следующей группы противовирусных препаратов: рибавирин, занамивир, осельтамивир, перамивир, амантадин или ремантадин.

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к поиску и разработке новых лекарственных средств для лечения и профилактики вирусных инфекций, преимущественно вирусов гриппа.

В настоящее время известно большое количество противовирусных препаратов. К первому поколению таких препаратов относятся препараты адамантанового ряда: амантадин и ремантадин. Противовирусный эффект этих препаратов обусловлен тем, что указанные препараты блокируют ионные каналы, образованные трансмембранной областью вирусного белка М2. Молекулы амантадина и ремантадина, соответствующие по размерам диаметру этих ионных каналов, ингибируют перенос протонов, повышая тем самым рН внутри эндосом. Благодаря этому внутри вириона создаются условия, препятствующие выходу рибонуклеопротеида и транскрипции вирусного генома. Следствием этого процесса является подавление репродукции вируса. Однако препараты адамантанового ряда эффективны только в отношении вирусов гриппа А. Кроме того, их применение ограничено наличием серьезных побочных эффектов и быстрым возникновением и распространением резистентным к ним штаммов.

Рибавирин - пуриновый аналог нуклеозидов, достаточно эффективен против вирусов гриппа А и В, но должен использоваться с осторожностью у пациентов с предшествующей анемией, диабетом или заболеванием коронарных артерий. Кроме того, рибавирин обладает тератогенным эффектом.

К препаратам второго поколения относятся ингибиторы нейраминидазы: занамивир, озельтамивир и перамивир. Нейраминидаза - один из основных ферментов, участвующих в репликации вирусов гриппа А и В. При его ингибировании затрудняется высвобождение новых вирусных частиц из инфицированных клеток и дальнейшее распространение вируса в организме. К недостаткам этих лекарств относятся достаточно частые (около 10%) побочные эффекты в виде тошноты и рвоты при приеме озельтамивира, возникновение раздражения носоглотки при приеме занамивира. Кроме того, они весьма дороги. Использование ингибиторов нейраминидазы в настоящее время осложняется еще и тем, что недавно, в феврале 2005 г., был выделен вирус гриппа Α, Η5Ν1, устойчивый к озельтамивиру (Иа1иге, 2005, νοί. 437, № 20). Для него подтверждена возможность передачи от человека к человеку.

Наиболее близким аналогом данного изобретения является гидрохлорид 1-метил-2-фенилтиометил3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола (арбидол), предназначенный для лечения и профилактики гриппа А и В у взрослых и детей (патент РФ № 2008004). Механизм противовирусного действия этого препарата точно не установлен, предполагается, что арбидол препятствует слиянию липидной оболочки вируса с клеточными мембранами. Но данный препарат эффективен преимущественно на начальных стадиях заболевания.

Учитывая изложенное, поиск новых препаратов для лечения вирусных инфекций остается весьма актуальным.

Техническим результатом настоящего изобретения является создание более эффективных и менее токсичных лекарственных средств за счет комбинации арбидола или его структурных аналогов, обладающих доказанной противовирусной активностью, с противовирусным препаратом, имеющим иной механизм действия. Такая комбинация усиливает эффективность низких доз препаратов, а также за счет снижения дозы позволяет уменьшить вероятность проявления побочных эффектов и возникновения резистентных штаммов вируса.

Указанный результат достигается при совместном использовании арбидола или его аналогов и по меньшей мере одного препарата, выбранного из следующих групп противовирусных препаратов: рибавирина; ингибиторов вирусной нейраминидазы, предпочтительно занамивира, озельтамивира или перамивира; блокаторов М₂-каналов, предпочтительно амантадина или ремантадина.

В заявленном изобретении арбидол (или его аналоги) совместно с занамивиром, перамивиром, озельтамивиром, адамантином, ремантадином или рибавирином проявляют значительно более высокую активность, благодаря чему стало возможным уменьшить их содержание в препарате при достижении того же или даже более сильного лечебного эффекта.

Активные аналоги арбидола, обладающие противовирусными свойствами, могут быть описаны при помощи формулы I

к₂ где Кц - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, оксиалкил, хлор;

К₂ - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, фенил, замещенный фенил, где в качестве заместителя могут использоваться алкил, оксиалкил, хлор, бром;

К₃ представляет собой Н или Вг;

К4 - Η, ΟΗ2Ν(ΟΗ3)2;

К - Η, СООС2Н5;

- 1 015132 η=0-2;

А - 8, 8О2, 80.

Аналоги арбидола, соответствующие формуле I, в том числе их синтез и физико-химические свойства, описаны в литературе (Химико-фармацевтический журнал, № 1, 1995, с. 51-53, Химикофармацевтический журнал; № 2; 1995, с. 5-8; Химико-фармацевтический журнал, № 1, 1998, с. 565-569). Среди указанных аналогов автором было выявлено наиболее активное соединение - 1-метил-2фенилтиометил-3-карбэтокси-5-окси-6-броминдола сульфон, имеющее следующую структурную формулу:

но.

Вг'

В результате исследований было неожиданно обнаружено, что 1-метил-2-фенилтиометил-3- карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола сульфон обладает значительно меньшей токсичностью, чем арбидол, в то время как достигаемый противовирусный эффект сравним и даже превосходит таковой у арбидола и других изученных аналогов арбидола. Данное соединение может применяться как самостоятельно для лечения вирусных инфекций, так и в комбинации с препаратами из указанных выше групп, что значительно повышает эффективность воздействия.

В наиболее общем варианте настоящее изобретение раскрывает лекарственные средства, в качестве одного из компонентов содержащие эффективное количество соединения общей формулы I, а в качестве другого - эффективное количество противовирусного средства с другим механизмом действия, принадлежащего к одной из перечисленных выше групп лекарственных средств, а именно препаратам адамантанового ряда, предпочтительно амантадин или ремантадин; ингибиторам нейраминидазы, предпочтительно занамивир, озельтамивир или перамивир; или ремантадин.

Наиболее предпочтительно такие композиции содержат гидрохлорид 1-метил-2-фенилтиометил-3карбокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола (арбидол) или 1-метил-2-фенилтиометил-3карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола сульфон (сульфон) или фармацевтически приемлемые соли этих соединений в комбинации с осельтамивиром.

Указанные выше комбинации могут применяться в виде различных лекарственных форм, например в виде твердой лекарственной формы, предпочтительно в виде таблеток или капсул, а также в виде раствора для инъекций. При этом могут быть использованы фармацевтические носители, принятые в фармацевтической химии для приготовления средства доставки активного компонента в организм пациента. Кроме того, препараты могут дополнительно содержать наполнители, связующие, целевые добавки и т.п. (например, как указано в 2й ей. Ьопйоп: ТКе Рйагшасеи11са1 Рге§§; 1994). Целевые добавки включают комплексообразующие агенты, такие как ЭДТА, аскорбиновую кислоту и другие антиоксиданты, углеводороды, такие как декстрин, гидроксиалкилцеллюлоза, гидроксиалкилметилцеллюлоза, стеариновая кислота и т.п. Помимо ингредиентов, упомянутых выше, препараты могут включать и другие традиционные добавки, например вкусовые, ароматические и т.п.

Комбинации лекарственных препаратов согласно данному изобретению также пригодны для получения фармацевтических препаратов с регулируемым высвобождением, в которых высвобождение активных ингредиентов контролируется и регулируется для уменьшения частоты приема лекарственной дозы и улучшения фармакокинетического профиля.

Эффективная доза активного компонента зависит от того, используется ли соединение профилактически (более низкие дозы) или для лечения вирусной инфекции. Кроме того, эффективная доза может зависеть также от веса, возраста, пола больного и наличия сопутствующих заболеваний.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Действие арбидола и его аналогов в комбинации с ингибиторами вирусной нейраминидазы на репродукцию вируса гриппа А/Сингапур/1/57 в культуре клеток МОСК.

Изучение противовирусной активности препаратов (во всех примерах) проводилось на культуре клеток МОСК методом иммуноферментного анализа. Процент ингибирования вирусной репродукции изучаемым препаратом определяли по формуле % ингибирования=100-(ОП₄₉₀ опыта-ОП₄₉₀ клеточного контроля)/(ОП₄₉₀ вирусного контроля в отсутствие соединения-ОП₄₉₀ клеточного контроля), где ОП490 - оптическая плотность при соответствующей длине волны.

Обозначения изучаемых соединений: А - арбидол, В - 1-метил-2-(4-метилфенилсульфометил)-3карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдол, С - 1-метил-2-(4-оксиэтилфенилсульфометил)-3карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдол. Соответствующие данным соединениям (А, В, С) проценты ингибирования приведены в табл. 1 через запятую.

- 2 015132

Таблица 1

А или В (мкг/мл)	Процент ингибирования ОП 490 (Время добавления препарата- 2 часа после инфицирования)
Занамивир (мкг)
0	0,3	1	3,3	10	33
0	нет ингиб.	27, 15	29, 15	36, 20	43,22	49, 28
0,3	нет ингиб.	20, 10	30, 15	37,21	48, 30	60, 40
1	нет ингиб.	33,21	40, 26	46, 30	100, 85	100, 83
3	нет ингиб.	60, 40	58, 45	93, 80	100, 90	100, 87
5	нет ингиб.	69, 52	85, 80	88, 75	100, 96	100, 95
10	22, 10	71,50	85, 75	98, 90	100, 100	100, 100
	Озельтамивир (мкг)
А или С (мкг/мл)	0	0,4	1,2	4,1	12,3	41
0	-	36, 18	39, 18	37, 20	48, 34	52,36
о,з	нет ингиб.	35, 15	40, 16	37, 18	47, 35	55,40
1	нет ингиб.	48, 30	59,31	56,41	100, 88	100, 90
3	нет ингиб.	62,35	58, 37	90, 60	100,91	100, 100
5	нет ингиб.	79, 50	84, 40	100, 96	98, 96	100, 100
10	20, 10	70, 46	85,65	100, 95	100, 95	100, 98

Из приведенной таблицы видно, что арбидол, добавленный к клеткам через 2 ч после их инфицирования, оказывает незначительное действие на репродукцию вируса. Аналогичным образом, и оба ингибитора вирусной нейраминидазы, взятые по отдельности, позволяют достичь лишь порядка 50% ингибирования. Однако совместное использование арбидола или его аналогов с ингибиторами нейраминидазы через 2 ч после инфицирования позволяет значительно усилить эффект обоих препаратов. Комбинация 3 мкг/мл арбидола и 3,3 мкг занамивира (озельтамивира) позволила достичь 90% ингибирования вируса, в то время как в 10 раз большее количество занамивира или озельтамивира без добавления арбидола подавляет репродукцию лишь на 50%.

При использовании 10-12 мкг занамивира или озельтамира, чтобы достичь 100% подавления репродукции вируса, достаточно всего 1 мкг арбидола.

Пример 2.

Действие арбидола (А) и его аналога - 1-метил-2-(п-метилфенилсульфометил)-3-карбэтокси-4диметиламинометил-5-окси-6-броминдола (Ό) - в комбинации с блокаторами М₂-каналов на репродукцию вируса гриппа А/Сингапур/1/57 в культуре клеток ΜΌ0Κ.

Соответствующие указанным соединениям (Α, Ό) проценты ингибирования приведены в табл. 2 через запятую.

Таблица 2

А или ϋ (мкг/мл)	Процент ингибирования ОП 490 (время добавления препарата - за 30 мин до инфицирования)
Амантадин (мкг/мл)	Ремантадин (мкг/мл)
0	0,3	1	5	10	0	0,3	1	5	10
0	нет	22,6	28,	50,	56	нет	25,	31,	56,	59,
ингиб	10	30	38	ингиб.	10	12	41	40
1	30, 15	30, 17	30, 18	52, 29	59, 45	30, 12	31, 18	33, 20	50, 36	59, 42
5	38, 24	60,38	68,	74,	81,	38, 20	63,	71,	74,	82,
41	53	70	48	44	50	73
10	67, 40	77, 57	81,	82,	85,	67, 54	78,	80,	82,	86,
70	75	80	69	69	70	75

Комбинация арбидола с блокаторами М₂-каналов позволяет также достичь более высокого противовирусного эффекта, чем при использовании тех же препаратов по отдельности, но в данном случае нужны более высокие концентрации арбидола, чем в примере 1. В опытах с амантадином, как видно из табл. 2, наибольший синергетический эффект наблюдался при концентрации арбидола, начиная с 5 мкг/мл и концентрации амантадина 0,3-5 мкг/мл. Аналогичные данные были получены и при использовании ремантадина.

- 3 015132

Пример 3.

Действие арбидола в комбинации с рибавирином на репродукцию вируса гриппа А/Сингапур/1/57 в культуре клеток МПСК.

Таблица 3

щий эффект, но степень увеличения оказалась различной при разных концентрациях. Наиболее удачной оказалась комбинация: 10 мкг арбидола+10 мкг рибавирина.

Пример 4.

Противовирусное действие арбидола в комбинации с озельтамивиром на репродукцию вируса птичьего гриппа (Η5Ν1) на экспериментальной модели (белые мыши).

Животные: белые мыши массой от 15 до 20 г, поставленные из питомника Вирусологического центра НИИМ МО РФ (г. Сергиев Посад).

Препараты вводили перорально.

Оценка эффективности препаратов проводилась по снижению уровня смертности мышей.

Таблица 4

Пример 5.

Определение токсичности 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-5-окси-6-броминдола сульфона в сравнении с арбидолом.

Таблица 5

Введение препаратов проводилось внутрижелудочно, период наблюдения за животными составлял 14 суток.

Как видно из таблицы, 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-5-окси-6-броминдола сульфон оказался существенно менее токсичным, чем арбидол. Это подтверждается значениями ЛД₅₀. Для арбидола этот параметр составил 860±50 мг/кг, а для сульфона - 3600±180мг/кг для мышей, т.е. в 4 раза больше. Тот же параметр для крыс соответственно 1720±70 мг/кг и 5350±250 мг/кг, т.е. в 3 раза больше, чем у арбидола.

Пример 6.

Оценка противовирусной активности 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-5-окси-6-броминдола сульфона в сравнении с арбидолом на примере вируса гриппа Ά/ΡΚ/8/34 в культуре клеток МОСК

Таблица 6

Соединение

Арбидол

Сульфон

Процент подавления репродукции вируса

60__

Эффективность препарата изучалась на примере вируса гриппа в культуре клеток МОСК стандартным методом иммуноферментного анализа. Результаты показали, что эффективность нового соединения превышает таковую для известного препарата арбидола.

- 4 015132

Пример 7.

Оценка эффективности 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-5-окси-6-броминдола сульфона в сравнении с арбидолом ΐπ νίνο.

_________________________Таблица 7 Соединение | концентрация | Процент выживших мышей

Арбидол

Сульфон

100

Профилактическая схема %' %~ %

%’

Арбидол Сульфон

Лечебно-профилактическая схема

100

80%

70%

40%

Лечебная схема

Арбидол Сульфон

100

60%

70%

50%

Изучение противовирусной активности на мышах, зараженных вирусом гриппа Η3Ν2, проводилось с использованием трех схем: профилактической - препараты вводились за 24 ч и потом еще за 1 ч до инфицирования; лечебно-профилактической - препараты вводились за 24 ч, за 1 ч до инфицирования и спустя 8 ч после инфицирования; лечебной - препараты вводились спустя 8 ч после инфицирования, и потом каждые 8 ч на протяжении 14 суток. Результаты показали, что действие сульфона сравнимо с действием арбидола в тех же концентрациях.

1-Метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-5-окси-6-броминдола сульфон может применяться в различных лекарственных формах, в том числе с использованием фармацевтических носителей, принятых в фармацевтической химии для приготовления средства доставки активного компонента в организм паци

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики вирусных инфекций, включающая соединение формулы I где Щ - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, оксиалкил, хлор;

Щ₂ - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, фенил, замещенный фенил, где в качестве заместителя могут использоваться алкил, оксиалкил, хлор, бром;

Щ представляет собой Н или Вг;

Щ - Н, СНМОДЬ;

Щ - Н, СООС2Н5;

п=0-2;

А - 8, 8О2, 8О;

или его фармацевтически приемлемые соли и/или гидраты, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит противовирусный агент блокатор М2-каналов, выбранный из группы, включающей амантадин и ремантадин.
2. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики вирусных инфекций, включающая соединение формулы I где Щ - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, оксиалкил, хлор;

Щ₂ - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, фенил, замещенный фенил, где в качестве заместителя могут использоваться алкил, оксиалкил, хлор, бром;

Щ представляет собой Н или Вг;

- 5 015132

Кд - Н, СН₂МСНз)₂;

К₅ - Н, СООС2Н5;

п=0-2;

А - 8, 8О2, 80;

или его фармацевтически приемлемые соли и/или гидраты, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит противовирусный агент, выбранный из следующей группы: занамивир, озельтамивир и перамивир.
3. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики вирусных инфекций, включающая соединение формулы I где Κι - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, оксиалкил, хлор;

К2 - алкил с числом атомов углерода от 1 до 5, фенил, замещенный фенил, где в качестве заместителя могут использоваться алкил, оксиалкил, хлор, бром;

К₃ представляет собой Н или Вг;

Кд - Н, СНМСНзЬ;

К5 - Н, СООС2Н5;

п=0-2;

А - 8, 8О2, 80;

или его фармацевтически приемлемые соли и/или гидраты, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит противовирусный агент рибавирин.
4. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что соединение общей формулы I представляет собой 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6броминдол, или 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола сульфон, или его фармацевтически приемлемые соли, и/или гидраты.
5. Способ лечения или профилактики вирусной инфекции, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп.1-4.

Евразийская патентная организация, ЕАПВ

Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2