DK163062B - Antigen, immunogen, proteinholdig vaccine imod coccidiose - Google Patents
Antigen, immunogen, proteinholdig vaccine imod coccidiose Download PDFInfo
- Publication number
- DK163062B DK163062B DK396884A DK396884A DK163062B DK 163062 B DK163062 B DK 163062B DK 396884 A DK396884 A DK 396884A DK 396884 A DK396884 A DK 396884A DK 163062 B DK163062 B DK 163062B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- antigen
- monoclonal antibodies
- merozoites
- sporozoites
- atcc
- Prior art date
Links
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 29
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 29
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 27
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 11
- 208000003495 Coccidiosis Diseases 0.000 title description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title description 4
- -1 IMMUNOGENE Proteins 0.000 title 1
- 210000003936 merozoite Anatomy 0.000 claims description 29
- 210000003046 sporozoite Anatomy 0.000 claims description 27
- 241000223932 Eimeria tenella Species 0.000 claims description 23
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 claims 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 16
- 241000894007 species Species 0.000 description 13
- 206010023076 Isosporiasis Diseases 0.000 description 11
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 8
- 241000223924 Eimeria Species 0.000 description 7
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 7
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 6
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 6
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 3
- 241000223934 Eimeria maxima Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 3
- 210000003250 oocyst Anatomy 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 241000224483 Coccidia Species 0.000 description 2
- 241000223931 Eimeria acervulina Species 0.000 description 2
- 241000499566 Eimeria brunetti Species 0.000 description 2
- 241000499563 Eimeria necatrix Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001563 schizont Anatomy 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound C1CN(CC2=NNN=C21)CC(=O)N3CCN(CC3)C4=CN=C(N=C4)NCC5=CC(=CC=C5)OC(F)(F)F LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound NCC(O)=O.OCC(N)(CO)CO AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WONRDHPFOHAWOG-UHFFFAOYSA-N 2-chloronaphthalen-1-ol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=C(Cl)C=CC2=C1 WONRDHPFOHAWOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010087765 Antipain Proteins 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091026815 Competing endogenous RNA (CeRNA) Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 208000027954 Poultry disease Diseases 0.000 description 1
- 101710194807 Protective antigen Proteins 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- SDNYTAYICBFYFH-TUFLPTIASA-N antipain Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SDNYTAYICBFYFH-TUFLPTIASA-N 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000973 gametocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 229940124452 immunizing agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920002523 polyethylene Glycol 1000 Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/44—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from protozoa
- C07K14/455—Eimeria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/20—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans from protozoa
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
i
DK 163062 B
Den foreliggende opfindelse angår en antigen, immunogen, proteinholdig vaccine, som er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 1 angivne.
I den her omhandlede vaccine indgår et antigen for 5 monoklonale antistoffer, der reagerer specifikt mod mero-zoitter og sporozoitter af parasitten Eimeria tenella, og eventuelt tillige en stabilisator og/eller et pharmaceutisk acceptabelt adjuvans herfor. Disse antistoffer er opnået ved hjælp af hybridomateknologi, nemlig ved hjælp af hybri-10 domakulturer, der frembringer antistoffer mod E. tenella, samt merozoitantigener. Disse antigener er sammen med visse, monoklonale antistoffer effektive til forebyggelse og behandling af coccidiose. Vaccinen ifølge opfindelsen er derfor anvendelig mod coccidiose.
15 Coccidiose er en sygdom hos dyr, der fremkaldes af en række forskellige parasitiske protozoer. Fuglecoccidiose er en ødelæggende fjerkræsygdom, der forårsages af arter af slægten Eimeria. Denne sygdom har en kompliceret cyklus, der omfatter både kønnede og ukønnede stadier. Kyllinger 20 inficeres til at begynde med med lidelsen efter indtagelse af fritlevende oocyster, der i reglen findes i forbindelse med fækalier. Oocyster udvikler sig til invaderende, ukønnede sporozoitter i kyllingens mavetarmkanal. Sporozoitterne inficerer epithelceller og udvikles til flerkernestrukturer, 25 der kaldes schizonter. Hver schizont modnes og frigør efterhånden mange invaderende, ukønnede strukturer, der kaldes merozoitter. Disse merozoitter forlader de inficerede celler og invaderer igen andre epithelceller. De mangfoldige, invaderende, ukønnede stadier, der omfatter sporozoitter og 30 merozoitter, er ansvarlige for meget af coccidiosens patologi. Coccidioses kønnede cyklus begynder, når merozoitterne diffenrentierer til gametocytter. Der sker befrugtning, og produkterne heraf, der kaldes oocyster, frigøres i fæces. Parasittens livscyklus er således sluttet. Hos kyllinger 35 afsluttes cyklussen for Eimeria tenella, der er en repræsentativ art, i løbet af ca. 7-9 døgn.
DK 163062 B
2 På grund af de kolossale økonomiske tab, som fjerkræindustrien påføres af Eimeriaarter, er en vaccine yderst ønskværdig. Imidlertid er det på grund af parasittens komplekse livscyklus og på grund af den 5 varierende mængde antigener, der er til stede i hvert stadium, ikke tidligere blevet påvist, at deaktiverede eller dra±>te parasitter har danne tilsvarende immunitet.
En løsning på dette problem er at isolere og karakterisere særlige antigener fra parasitten og indgive 10 dem i tilstrækkelig mængde til, at de kan fungere som immuniseringsmiddel. Sådanne antigener vil fortrinsvis yde beskyttelse mod infektion med alle vigtige arter.
Man ved, at forskellige Eimeria-arter samt forskellige stadier i denne arts livscyklus har både fælles og spe-15 cifikke antigener [Z. Cerna, Folia Parasitologica (Prag), 17, 135-140 (1970), Davis m.fl., Immunol. 34, 879-888 (1978), M.E. Rose, Immunol. 2, 112-122 (1959),
Rose m.fl., Immunol., 5, 79-92 (1962), og Tanielian m. fl., Acta Parasitol. Yugosl. 7, 79-84 (1976)]. Man ved 20 også, at udvikling af immunitet over for Eimeria er arts-specifik og hos nogle arter tamfjerkræ er der klar stamme-specifik immunitet [T.K. Jeffers,, I P.L. Long m.fl. udg., Avian Coccidiosis, side 57-125, Proc. 13.
Poultry Sci. Symp. (1978), L.P. Joyner, Parasitol. 59, 25 725-732 (1969), P.L. Long Parasitol. 69, 337-347 (1974), og Long m.fl., Parasitol. 79, 451-457 (1979)]. Indtil nu er immunogener af Eimeria-arter, der kan stimulere beskyttende immunitet hos fugle- og pattedyrværter, ikke blevet isoleret eller identificeret. Sådanne Eime-20 ria-immunogener vil sandsynligvis yde en vellykket immunisering mod coccidiose.
Udviklingen af lymphocyt-hybridomteknologi udgør et værktøj til frembringelse af forholdsvis store mængder specifikke antistoffer mod en række forskelli-35 ge Eimeria-antigener. Ved at sammensmelte specifikt-an-tistof-producerende celler (miltceller) med celler fra 0 3
DK 163062 B
en myelomtumor, er det muligt at fremstille hybridomcel-ler, der udskiller monoklone antistoffer rettet specifikt mod det oprindelige sensibiliseringsantigen (Kohier & Milstein, Nature (London) 256, 495-497 (1975)]. Hvis 5 der fås monoklone antistoffer mod parasitten, ville det være muligt at fremstille sådanne antistoffer mod inficeret eller modtageligt fjerkræ og således bibringe værtsorganismen et vist omfang af passiv immunitet.
Når først sådanne hybridomkulturer, der producerer mo-10 noklone antistoffer, er opnået, er det muligt ved hjælp af forskellige metoder at benytte sådanne antistoffer til at isolere og identificere specifikke antigener, der igen kan benyttes som vaccine, så at værtsorganismer får et system af aktiv immunitet. Der kendes en række 15 patentskrifter vedrørende hybridomkulturer og monoklone antistoffer, nemlig USA patentskrifterne nr. 4.172.124, 4.196.265, 4.271.145, 4.361.549, 4.631.550, 4.364.932, 4.364.933, 4.364.934, 4,364,935, 4.364.936, 4.381.292 og 4.381.295.
20 På baggrund af den ovennævnte omtale af coc- cidiosens økonomiske virkninger inden for dyrehold og især fjerkræindustrien, er en bekæmpelse af protozoparasitten yderst påkrævet. Det er således opfindelsens formål at angive nye og anvendelige monoklone antistof-25 fer mod merozoitter af parasitten E. tenella. Endvidere er det opfindelsens formål at isolere og identificere specifikkke E. tenella-antigener, der kan anvendes som vaccine til bekæmpelse af fjerkræcoccidiose. Disse formål fremgår klart af den følgende bskrivelse og 30 de medfølgende krav.
Eimeria tenella, den art, der inficerer coe-cum hos kyllinger, er en særlig ødelæggende parasit, der forårsager svære blødende læsioner hos inficerede dyr.
E. tenella har to merozoit-stadier i sin livscyklus, 35 der betegnes hhv. første og anden generationsmerozoit-ter. Immunitet over for E. tenella, ved man, udvikles 0 4
DK 163062 B
under denne livscyklus' ukønnede merozoitstadier (P.
Long, (udg.), The Biology of the Coccidia, University Park Press, Baltimore, Md (1982).
Der anvendes et præparat af E. Teneralla-mero- 5 zoitter til at immunisere mus, for at de efterhånden kan danne monoklone antistoffer ifølge den nedenfor beskrevne metode. De monoklone antistoffer anvendes til at identificere parasittens antigener. Monoklone antistoffer bedømmes endvidere for at fastslå deres evne til at neu-10 tralisere væksten af parasitten in vivo. Antigener, der fremkalder monoklone antistoffer, der reagerer med mindst én Eimeria-art eller med enten merozoitter eller sporo-zoitter, og udviser neutralisering af parasitvækst, anses for at være beskyttende antigener. Beskyttende anti- ' 15 gener anses som mulige kandidater ved udviklingen af en vaccine mod fuglecoccidiose.
Opfindelsen vil i det følgende blive nærmere beskrevet ved hjælp af eksempler.
20
Eksempel 1
Kvantitativ radioimmunanalyse
Til at bedømme antistoffers kvalitet udvikles en kvantitativ radioimmunanalyse. Glutaradehyd-fik- serede sporozoitter eller merozoitter (i reglen 2-5 x 10^ 25 pr. fordybning) centrifugeres på polyvinylchlorid med 96 fordybninger eller "Removawell'^-plader (Dynatech) ved 1400 x G i 10 minutter for at binde organismen til bunden af fordybningerne. Sporozoitter eller merozoitter, der hænger fast på pladens bund, omsættes med serumprø-30 ver af mus immuniseret med parasit- eller monoklont antistof i overpå flydende hybridomkultur. Inkubering med antistoffer sker i 16-18 timer ved 4°C eller i to timer ved stuetemperatur. Det bundne antistof påvises med et radioaktivt-mærket andet antistof, 187,1, der er et mo-35 noklont rotteantistof, der er specifikt for muse-k-let-kæde. Anti-muse-k-let-kæde-antistoffet mærkes biosynte- 35
DK 163062 B
0 5 tisk med S-methionin [D.E. Yelton m.fl., Hybridoma, 1, 5-11 (1982)]. Radioaktiviteten overvåges ved væske-scin-tillationstælling. Radioimmunanalysemetoden anvendes derpå på overflade membraner, der fås fra E. tenella-spo-5 rozoitter, for at sikre antistoffernes reaktivitet i immune musesera med membranproteiner.
Eksempel 2
Opbygning af hybridomkulturer 10 Primære kulturer af kyllingenyreceller infi ceres med frisk excysterede sporozoitter ved hjælp af kendte metoder. Merozoitter, der er frigjort i mediet fem dage efter infektion, høstes ved centrifugering ved 350 x G i 10 minutter. 18-Uger gamle BALB/c-hunmus 7 15 immuniseres intraperitonealt (i.p.) med 1 x 10 intakte eller framenterede E. tenella-merozoitter i komplet Freund's adjuvans. Dyrene igangsættes med to i.p.-injektioner af merozoitter i medium 199 (Gibco) med to mellemrum på 5 uger efter indledende immunisering. Det 20 serum, der fås tre dage efter hver igangsætning, kontrolleres for tilstedeværelse af antistoffer mod E. tenella-merozoitter ved indirekte immunfluorescensanalyse (IFA) og radioimmunanalyse (RIA). Begge disse analyser udføres på glutaraldehyd-fikserede parasitter.
25 Hybridomer derivatiseres ved hjælp af gængse metoder [Kwan m.fl. (1980), Genetic Engineering, udg. af J.K. Setlow & A. Hollander, Plenum Publishing Corp.,
New York, side 31-96]. Miltceller fra to mus, der er immuniseret med E. tenella-merozoitter, sammensmeltes 30 med et ikke-sekreterende klon af P3-myelom, P3-x 63.Ag-8,653 i nærvær af 30% polyethylenglycol (PEG 1000 fra Baker Chemical) i 8 minutter. Sammensmeltede celler fordeles i vævskulturskåle med 96 fordybninger (Linbro) og holdes i HAT selektionsmedium [J.W. Littlefield, 35 Science, 145, 709-710 (1964)]. HAT-Mediet fremstilles i Dulbecco's modificerede Eagle's medium indeholdende 20%
DK 163062 B
0 6 kalvefosterserum (Gibco) og 10% NCTC 10A (Microbiological Associates). Hybrider dyrkes i en inkubator ved 37°C og 10% C02.
Kulturer analyseres med mellemrum for tilste-5 deværelse af antistof, der er reaktivt med E. tenella-merozoitter ved hjælp af IFA- og RIA-metoder. Positive kulturer flyttes til vævsdyrkningsskåle med 24 fordybninger i et medie uden hypoxanthin, aminopterin og thymidin. Hybridomer klones i blød agarose over et rot-10 te-embryo-fibroblast-tilførselslag [Coffins m.fl., J»
Cell Physiol., 79, 429-440, (1972)]. Positive hybrido-me kloner får et subklonnummer (dvs. en klon 15.84.4 er en subklon nr. 4 af et hybridom betegnet 15.84.).
Klasse og underklasse af immunglobulin, der udsondres 15 af vel-beskrevne subkloner, bestemmes ved hjælp af en dobbelt agar-diffusionsmetode. Detergent-(NP-40)-opløselige ekstrakter af hybridomer anvendes sammen med rotte-anti-muse-antistof-reagenser (Meloy). 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 35
Eksempel 3 2
Karakteristik af anti-merozoit-monoklone antistoffer 3
Kendetegnede på 8 anti-merozoit-monoklone an 4 tistoffer er vist i tabel I. Størstedelen af de mono 5 klone antistoffer reagerer med merozoitter samt med spo- 6 rozoitter ved IFA og RIA. Monoklone antistoffer 1,90 7 og 4,76 reagerer ikke med sporozoitter ved IFA og lej 8 lighedsvis ved RIA (jfr. * i tabel I). Monoklont an 9 tistof 15.84 reagerer ikke med merozoitter ved IFA, men 10 reagerer lige godt med sporozoitter og merozoitter ved 11 RIA. De data, der er anført i tabel I, viser, at alle de monoklone antistoffer, der er afledt ud fra anti-merozoit-fusionen er kryds-reaktive med sporozoitter og merozoitter af E. tenella.
DK 163062 B
0 7
Tabel I
Karakteristik af anti-merozoit-monoklone antistoffer __Specificitet_
IFA RIA
5 Monoklont antistof_Mero Sporo_Me ro Sporo
Ml (1,90) + + * M2 (4,76) + + * M3 (2,03) + + + + M4 (13,90) + + + + 10 M5 (10,08) + + + + M6 (10,84) + + + + M7 (8,03) + + + + M8 (15,84) + + + 15
Eksempel 4
Anti-merozoit-monoklone antistoffers reaktivitet mod sporozoitter af forskellige arter
De monoklone antistoffer analyseres ved IFA 20 mod sporozoitter afledt ud fra fem fugle-coccidia-para-sitarter, der har økonomisk interesse. Data fra disse forsøg findes i tabel II. 6 monoklone antistoffer, der i IFA omsættes med sporozoitter afledt ud fra E. tenella, anvendes til at undersøges arternes kryds-re-25 aktivitet. Resultaterne viser, at 5 monoklone antistoffer krydsreagerer med sporozoitter afledt ud fra E. ne-catrix og E. maxima, og et monoklont antistof (15,84) reagerer med alle fem afprøvede Eimeria-arter. 1 35
DK 163062B
, 8 0
Tabel II
Anti-merozoit-monoklones reaktivitet mod sporozoitter af forskellige arter
Monoklont 5 antistof E. tenella E.necatrix E.acervulina E.maxima E.brunetti M3 (2,03) + + + M4 (13,90) + + + M5 (10,08) + + + M6 (10,84) + + +/- 10 M7 (8,03) + + + M8 (15,84) + + + + +
Eksempel 5 15 In-vivo-neutraliseringanalvse
En in-vivo-metode til analysering af monoklone antistoffer anvendes til at bedømme de monoklone antistoffer. Tre monoklone antistoffer, der reagerer med E. tenella-sporozoitter, bedømmes ved denne prøve.
20 Frisk isolerede sporozoitter inkuberes under sterile betingelser med varme-inaktiveret ascitesvæske afledt ud fra tre forskellige hybridomer. Inkubationstiden er 1 time ved stuetemperatur. Sporotozitterne indføres derpå i 3-uger gamle kyllingers coecum ad kirurgisk vej.
25 Parasitudviklingen får lov at forløbe i 5 dage efter in-okulering. Ved afslutningen af dette tidsrum gives læsionerne points for at bedømme infektionens omfang. Resultaterne af disse forsøg udtrykkes som procent beskyttelse, som det monoklone antistof yder, og anføres i ta- 30 bel III. Disse data viser, at hvert antistof er i det mindste delvis beskyttende under visse betingelser i dette prøvesystem.
35 0
DK 163062 B
9
Tabel III
In-vivo-neutaliseringsprøve med E. tenella-sporozoitter og anti-merozoit-monoklone
Antal % beskyttelse 5 Behandling_dyr Ingen Delvis Fuld I. Let infektion (200 sporozoitter/dyr)
Kontrol 14 65 35 M6 (10,84) 13 15 85 10 M8 (15,84) 18 5 17 78 II. Svær infektion (1000 sporozoitter/dyr)
Kontrol 7 100 M4 (13,90) 9 89 11 15 M6 (10,84) 8 75 25 M8 (15,84) 9 33 44 23 III. Svær infektion (3000 sporozoitter/dyr)
Kontrol 7 100 20 M6 (10,84) 7 86 14 M8 (15,84) 4 100
Eksempel 6 25 Antigenkarakteristik E. tenella-antigener, der genkendes af monoklone antistoffer, identificeres ved SDS-polyacrylamid--gelelektrophorse (PAGE) efterfulgt af en nitrocelluloseaftræksmetode [Towbin m.fl., Proced. Natl. Acad. Sci.
30 (USA), 76, 4350-4354 ]1979)1.
E. tenella-sporozoitter og -merozoitter lyses og ekstraheres med 1% "Nonidet P-40" (Bethesda Research Laboratory), i 10 mmolær tris puffer (pH 7,5) indeholdende 155 mmolær NH^Cl, 1,5 mmolær MgAc2 med protease-35 -inhibitorerne leupeptin og antipain ved 30^ug/ml, 4 mmolær phenylmethylsulfonylfluorid og aprotinin (2 tryp-
DK 163062 B
10 o sin-inhiberende enheder/ml). Denne lysemetode omfatter inkubation i 30 minutter ved 0°C efterfulgt af centrifugering ved 2.500 x G i 30 minutter. Pellet'en kasseres, og det opløseliggjorte materiale anvendes derpå 5 til gel-elektrophorese. SDS-Polyacrylamid-gelelektro-phorse af prøver, reduceret med 2-mercaptoethanol udføres i et diskontinuerligt tris-glycinsystem på 7-15% polyacrvlamid-gradientgeler.
De ved SDS PAGE fraskilte proteiner overføres 10 til et nitrocellulose filter elektrophoretisk i 45 minutter. Nitrocellulosefilteres omsættes derpå enten med ascitesvæsken (1-100 fortynding) eller brugt dyrkningsvæske fra hybridomer i 16-18 timer ved 4°C. Normal kaninserum medtages i en koncentration på 10% i al- 15 le inkubationer med antistoffer. Det bundne monoklone 125 antistof påvises med omsætning med et I-mærket kanin--antimuse-IgG-antistof (New England Nuclear). Reaktionen med det andet antistof varer i reglen 3-4 timer ved stuetemperatur. Det ubundne andet antistof fjernes 20 ved vask. Nitrocellulosefiltrene eksponeres derpå med Kodak røntgenfilm XAR-5 eller SB-5.
Alternativt udvikles pletterne ved en ELISA-metode, hvorved der anvendes peberrodsperoxidase-koblet kanin-antimuse-IgG (Miles) og chlornaphthol (Aldrich) 25 og #2®2 som substrater. Proteinantigenernes mo lekylvægt bestemmes i forhold til molekylvægtstandarder.
De antigener, der genkendes af det monoklone antistof 15,84 er illustrerende. Monoklont antistof 15,84 reagerer med en dublet med en omtrentlig molekyl-30 vægt på 130 + 20 kD. Imidlertid er beregningen af proteiners molekylvægt i størrelsesordenen 100 kD underkastet variation afhængigt af de anvendte molekylvægt-standarder. Foruden 130 + 20 kD-arterne reagerer 15,84 også med et bånd, der har en tilsyneladende molekylvægt 35 på 300 + 50 kD. Det største molekylevægt-bånd udgør ca. 15-20% af antigenet og er måske enten et aggregat
DK 163062 B
11 o eller en polymer form af 130 + 20 kD-arterne. Et kontrolforsøg med et monoklont antistof, som man ved reagerer med proteinantigener, anvendes til at bevise anti-merozoit-antistofernes specificitet. Desuden vi-5 ser andre kontrolforsøg, at de monoklone antistoffer er parasit-specifikke og ikke reagerer med det værts--specifikke protein.
I tabel IV findes anført molekvlevægtdata for antigener, der genkendes af forskellige antistoffer.
10 Det signifikante træk er tilstedeværelsen af immungenetiske antigener med en molekylvægt i enten ^T20 kD- eller 100 kD-interval i E. tenerella-merozoitter.
Tabel IV
15 Molekylevægtdata
Anti-merozoit- monoklont antistof_Antigens omtr. molekylevægt
Ml (1,90) M2 (4,76) 300 - 50 kD* 20 M6 (10'84) 130 + 20 kD.
M8 (15,84) M3 (2,03) M4 (13,90) l8 + 3 kD, M5 (10,08) 25 M7 (8,03)
Monoklont antistof 15,84 betragtes som et neutraliserende antistof, og antigenet, der genkendes, anses for et beskyttende antigen. Desuden er 15,84-anti- 30 stoffet kryds-reaktivt med merozoitter og sporozoitter af E. tenella samt sporozoitter isoleret fra E. maxima, E. necatrix, E. acervulina og E. brunetti.
De nye monoklone antistoffer 1,90, 15,84, 13,90, 10,84, 8,03 og 2,03, der er isoleret ovenfor, er 33 blevet deponeret i the American Type Culture Collection (ATTC) i Rockville, Maryland, og er blevet indlemmet i 12 0
DK 163062 B
den permanente samling. Nr. 1,90 har fået tildelt nummeret HB8336, nr. 15,84 har fået tildelt nummeret HB8335, nr. 13,90 har fået tildelt nummeret HB8337, nr. 10,84 har fået tildelt nummeret HB8387, nr. 8,03 har fået 5 tildelt nummeret HB8388, og nr. 2,03 har fået tildelt nummeret HB8389. Antistofferne er tilgængelige under den prioritetsbærende ansøgnings behandling for enhver, der godkendes af Commissioner of Patents and Trademarks som værende berettiget dertil under 37 C.F.R. 1,14 og 35 10 U.S.C. 122, og alle restriktioner med hensyn til tilgængelighed for offentligheden til HB8333, BH8336, HB8337, HB8388 og HB8389 vil uigenkaldeligt blive ophævet, når der er udstedt patent i nærværende ansøgnings prioritetsansøgning.
Nr. 1,90 HB8336, 15,84 HB8335 og 13,90 HB8337 15 blev deponeret hos ATCC 16. august 1983. Nr. 10,84 HB 8287, 8,03 HB8388 og 2,03 HV8389 blev deponeret hos ATCC 20. oktober 1983.
20 25 1 35
Claims (3)
1. Antigen, immunogen, proteinholdig vaccine, kendetegnet ved, at den er opløselig i nærvær af en detergentholdig puffer og indeholder et antigen for Eime- 5 ria tenella-merozoitter, hvilket antigen har en omtrentlig molekylvægt på 300 ± 59 kD og er specifikt reaktivt med antimerozoit-monoklonale antistoffer, der udskilles af hy-bridomakloner 1.90 (ATCC HB8336) og 4.76, eller har en omtrentlig molekylvægt på 130 ± 20 kD og er specifikt reaktivt 10 med anti-merozoit-monoklonale antistoffer, der udskilles af hybridomakloner 10.84 (ATCC HB8387) og 15.84 (ATCC HB8335), eller har en omtrentlig molekylvægt på 18 ± 3 kD og er specifikt reaktivt med anti-merozoit-monoklonale antistoffer udskilt af hybridomakloner nr. 10.08, 8.03 (ATCC HB8388), 15 2.03 (ATCC HB8389), 13.90 (ATCC HB 8337).
2. Vaccine ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den yderligere omfatter en stabilisator og/eller et pharmaceutisk acceptabelt adjuvans herfor.
3. Antigenvaccine ifølge krav 1, kendeteg-20 net ved, at den er fremstillet ved, at (a) sporozoitter og/eller merozoitter i E. tenella er ekstraheret og opløseliggjort, (b) det opløseliggjorte materiale er adskilt ved gængse isolations- og rensningsmetoder omfattende, men ikke 25 begrænset til chromatografi og affinitetskolonneme toder til opnåelse af renset antigen. 1 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US52495383A | 1983-08-19 | 1983-08-19 | |
| US52495383 | 1983-08-19 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK396884D0 DK396884D0 (da) | 1984-08-17 |
| DK396884A DK396884A (da) | 1985-02-20 |
| DK163062B true DK163062B (da) | 1992-01-13 |
| DK163062C DK163062C (da) | 1992-06-15 |
Family
ID=24091317
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK396884A DK163062C (da) | 1983-08-19 | 1984-08-17 | Antigen, immunogen, proteinholdig vaccine imod coccidiose |
| DK304490A DK162170C (da) | 1983-08-19 | 1990-12-21 | Monoklonale antistoffer, der er reaktive mod eimeriaarters merozoitter |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK304490A DK162170C (da) | 1983-08-19 | 1990-12-21 | Monoklonale antistoffer, der er reaktive mod eimeriaarters merozoitter |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0135073A3 (da) |
| JP (2) | JPS6072827A (da) |
| KR (1) | KR850001698A (da) |
| AU (1) | AU571249B2 (da) |
| CA (1) | CA1241924A (da) |
| DK (2) | DK163062C (da) |
| ES (4) | ES8701786A1 (da) |
| FI (1) | FI84186C (da) |
| IL (1) | IL72629A (da) |
| NO (1) | NO162797C (da) |
| NZ (1) | NZ209076A (da) |
| PT (1) | PT79076A (da) |
| ZA (1) | ZA846436B (da) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0135712A3 (en) * | 1983-08-19 | 1987-05-27 | American Cyanamid Company | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of eimeria spp. |
| US4639372A (en) * | 1984-06-29 | 1987-01-27 | Merck & Co., Inc. | Coccidiosis vaccine |
| US5279960A (en) * | 1984-07-05 | 1994-01-18 | Enzon Corp. | 25 KD coccidial antigen of eimeria tenella |
| US5273901A (en) * | 1984-07-05 | 1993-12-28 | Enzon Corp. | Genetically engineered coccidiosis sporozoite 21.5 Kb antigen, ac-6b |
| US4724145A (en) * | 1985-11-18 | 1988-02-09 | Merck & Co., Inc. | Eimeria acervulina immunogens |
| ES2091861T3 (es) | 1985-12-03 | 1996-11-16 | Solvay | Proteinas antigenicas y vacunas que las contienen para la prevencion de la coccidiosis. |
| CA1340838C (en) | 1986-08-14 | 1999-12-07 | Michael Wallach | Coccidiosis vacine |
| US5824656A (en) * | 1988-01-15 | 1998-10-20 | Merck & Co., Inc. | Recombinant and native group B eimeria tenella immunogens useful as coccidiosis vaccines |
| NZ227597A (en) * | 1988-01-15 | 1991-11-26 | Merck & Co Inc | Eimeria tenella group b immunogens and their production |
| US5122471A (en) * | 1988-02-12 | 1992-06-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Cloned genes coding for avian coccidiosis antigens which induce a cell-mediated immune response |
| ZA889230B (en) * | 1988-02-12 | 1989-08-30 | Us Agriculture | Cloned genes coding for avian coccidiosis antigens which induce a cell-mediated immune response and method of producing the same |
| ZA893740B (en) * | 1988-06-03 | 1990-02-28 | Hoffmann La Roche | Recombinant coccidiosis vaccines |
| ZA894726B (en) * | 1988-06-27 | 1990-03-28 | Akzo Nv | Coccidiosis vaccine |
| ZA902147B (en) * | 1989-03-28 | 1990-12-28 | Akzo Nv | Coccidiosis vaccine |
| ZA9010461B (en) * | 1990-01-26 | 1991-10-30 | Hoffmann La Roche | Recombinant coccidiosis vaccines-5-7 eimeria surface antigen |
| US6008342A (en) * | 1991-07-12 | 1999-12-28 | Roche Vitamins Inc. | DNA encoding eimeria antigen |
| US5403581A (en) * | 1991-07-12 | 1995-04-04 | Hoffmann-La Roche Inc. | Coccidiosis vaccines |
| JP3995541B2 (ja) * | 2002-06-28 | 2007-10-24 | 株式会社ゲン・コーポレーション | 抗鶏コクシジウム症組成物 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5649323A (en) * | 1979-09-29 | 1981-05-02 | Nisshin Flour Milling Co Ltd | Coccidiostat |
| EP0135712A3 (en) * | 1983-08-19 | 1987-05-27 | American Cyanamid Company | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of eimeria spp. |
-
1984
- 1984-07-27 EP EP84108926A patent/EP0135073A3/en not_active Ceased
- 1984-07-31 AU AU31333/84A patent/AU571249B2/en not_active Ceased
- 1984-08-01 NZ NZ209076A patent/NZ209076A/xx unknown
- 1984-08-09 FI FI843143A patent/FI84186C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-08-09 IL IL72629A patent/IL72629A/xx not_active IP Right Cessation
- 1984-08-13 PT PT79076A patent/PT79076A/pt not_active IP Right Cessation
- 1984-08-16 ES ES535202A patent/ES8701786A1/es not_active Expired
- 1984-08-17 ZA ZA846436A patent/ZA846436B/xx unknown
- 1984-08-17 JP JP59170519A patent/JPS6072827A/ja active Pending
- 1984-08-17 DK DK396884A patent/DK163062C/da not_active IP Right Cessation
- 1984-08-17 NO NO843294A patent/NO162797C/no unknown
- 1984-08-17 CA CA000461243A patent/CA1241924A/en not_active Expired
- 1984-08-18 KR KR1019840004995A patent/KR850001698A/ko not_active Application Discontinuation
-
1985
- 1985-07-26 ES ES545606A patent/ES8606900A1/es not_active Expired
-
1986
- 1986-01-31 ES ES551495A patent/ES8900150A1/es not_active Expired
- 1986-01-31 ES ES551494A patent/ES8802163A1/es not_active Expired
-
1990
- 1990-12-21 DK DK304490A patent/DK162170C/da not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-07-14 JP JP4208553A patent/JPH05284993A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES8900150A1 (es) | 1989-03-16 |
| AU3133384A (en) | 1985-02-21 |
| JPH05284993A (ja) | 1993-11-02 |
| ES8606900A1 (es) | 1986-05-16 |
| DK304490A (da) | 1990-12-21 |
| FI843143A0 (fi) | 1984-08-09 |
| EP0135073A3 (en) | 1987-05-27 |
| DK304490D0 (da) | 1990-12-21 |
| ES535202A0 (es) | 1986-12-16 |
| IL72629A0 (en) | 1984-11-30 |
| FI84186B (fi) | 1991-07-15 |
| NZ209076A (en) | 1989-01-06 |
| CA1261286C (da) | 1989-09-26 |
| DK162170C (da) | 1992-03-16 |
| DK162170B (da) | 1991-09-23 |
| KR850001698A (ko) | 1985-04-01 |
| ES8802163A1 (es) | 1988-04-01 |
| NO162797B (no) | 1989-11-13 |
| DK163062C (da) | 1992-06-15 |
| ES8701786A1 (es) | 1986-12-16 |
| PT79076A (en) | 1984-09-01 |
| DK396884D0 (da) | 1984-08-17 |
| AU571249B2 (en) | 1988-04-14 |
| ES551495A0 (es) | 1989-03-16 |
| FI843143A (fi) | 1985-02-20 |
| ES551494A0 (es) | 1988-04-01 |
| CA1241924A (en) | 1988-09-13 |
| ZA846436B (en) | 1985-04-24 |
| NO162797C (no) | 1990-02-21 |
| NO843294L (no) | 1985-02-20 |
| FI84186C (fi) | 1991-10-25 |
| JPS6072827A (ja) | 1985-04-24 |
| EP0135073A2 (en) | 1985-03-27 |
| DK396884A (da) | 1985-02-20 |
| ES545606A0 (es) | 1986-05-16 |
| IL72629A (en) | 1989-02-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4650676A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozoites of Eimeria spp. | |
| DK163062B (da) | Antigen, immunogen, proteinholdig vaccine imod coccidiose | |
| Quakyi et al. | The 230-kDa gamete surface protein of Plasmodium falciparum is also a target for transmission-blocking antibodies. | |
| DK162171B (da) | Monoklonale antistoffer, der er reaktive med eimeriaarters sporozoitters antigener, og fremgangsmaade til deres fremstilling | |
| US5001225A (en) | Monoclonal antibodies to a pan-malarial antigen | |
| US4710377A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of Eimeria spp. | |
| Vermeulen et al. | Sequential expression of antigens on sexual stages of Plasmodium falciparum accessible to transmission-blocking antibodies in the mosquito. | |
| Teixeira et al. | Stage-specific surface antigens of metacyclic trypomastigotes of Trypanosoma cruzi identified by monoclonal antibodies | |
| DANFORTH et al. | Specificity and crossreactivity of immune serum and hybridoma antibodies to various species of avian coccidia | |
| EP0390267B1 (en) | Coccidiosis vaccine | |
| Crane et al. | Passive protection of chickens against Eimeria tenella infection by monoclonal antibody | |
| Jendoubi et al. | Characterization of one polypeptide antigen potentially related to protective immunity against the blood infection by Plasmodium falciparum in the squirrel monkey. | |
| Whitmire et al. | Inhibition of penetration of cultured cells by Eimeria bovis sporozoites by monoclonal immunoglobulin G antibodies against the parasite surface protein P20 | |
| Ak et al. | Monoclonal antibodies of three different immunoglobulin G isotypes produced by immunization with a synthetic peptide or native protein protect mice against challenge with Plasmodium yoelii sporozoites | |
| CA1261286A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozoites of eimeria spp | |
| Burgess et al. | Identification of antigens of Sarcocystis cruzi sporozoites, merozoites, and bradyzoites with monoclonal antibodies | |
| EP0241139A2 (en) | Anti-idiotypic vaccine for coccidiosis | |
| Crandall et al. | Plasmodium falciparum: naturally occurring rabbit immunoglobulins recognize human band 3 peptide motifs and malaria-infected red cells | |
| EP0141616A2 (en) | Hybrid cell lines producing monoclonal antibodies directed against trichomonas vaginalis determinants | |
| Taylor et al. | Use of a two-sited monoclonal antibody assay to detect a heat-stable malarial antigen in the sera of mice infected with Plasmodium yoelii | |
| Deans | Protective antigens of bloodstage Plasmodium knowlesi parasites | |
| US5376370A (en) | Monoclonal antibody - specific merozoite antigens | |
| Procell et al. | Circumsporozoite protein of the human malaria parasite Plasmodium ovale identified with monoclonal antibodies | |
| Tachibana et al. | Monoclonal antibodies to Trypanosoma cruzi: Characterization of specific antigens in epimastigote stage | |
| US5502168A (en) | Monoclonal antibodies to a continuous and cross-reactive epitope and an isolated protein of a sexual stage of P. falciparum |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |