DK162171B - Monoklonale antistoffer, der er reaktive med eimeriaarters sporozoitters antigener, og fremgangsmaade til deres fremstilling - Google Patents
Monoklonale antistoffer, der er reaktive med eimeriaarters sporozoitters antigener, og fremgangsmaade til deres fremstilling Download PDFInfo
- Publication number
- DK162171B DK162171B DK304590A DK304590A DK162171B DK 162171 B DK162171 B DK 162171B DK 304590 A DK304590 A DK 304590A DK 304590 A DK304590 A DK 304590A DK 162171 B DK162171 B DK 162171B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- atcc
- hybridoma
- monoclonal antibodies
- sporozoites
- antibody
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 241000223924 Eimeria Species 0.000 title claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 8
- 210000003046 sporozoite Anatomy 0.000 claims description 43
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 34
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 33
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 33
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 30
- 241000223932 Eimeria tenella Species 0.000 claims description 27
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 6
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 claims description 5
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 5
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 108700039855 mouse a Proteins 0.000 claims 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims 1
- 208000003495 Coccidiosis Diseases 0.000 description 12
- 206010023076 Isosporiasis Diseases 0.000 description 12
- 241000894007 species Species 0.000 description 11
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 9
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 9
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 7
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 6
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 6
- 210000003250 oocyst Anatomy 0.000 description 6
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 6
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 6
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 210000003936 merozoite Anatomy 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010048685 Oral infection Diseases 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 210000001563 schizont Anatomy 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000004215 spore Anatomy 0.000 description 2
- 238000006557 surface reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087765 Antipain Proteins 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108091026815 Competing endogenous RNA (CeRNA) Proteins 0.000 description 1
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 description 1
- 238000008416 Ferritin Methods 0.000 description 1
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000609499 Palicourea Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 208000027954 Poultry disease Diseases 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- SDNYTAYICBFYFH-TUFLPTIASA-N antipain Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SDNYTAYICBFYFH-TUFLPTIASA-N 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000007499 fusion processing Methods 0.000 description 1
- 210000000973 gametocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229940124452 immunizing agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011236 particulate material Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002195 soluble material Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/20—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans from protozoa
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/44—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from protozoa
- C07K14/455—Eimeria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
DK 162171 B
Den foreliggende opfindelse angår monoklonale antistoffer, der reagerer specifikt mod sporozoitter fra parasitiske Eimeriaarter samt en fremgangsmåde til deres fremstilling. Disse antistoffer fås ved hybridomateknologi ved 5 hjælp af hybridomakulturer, der frembringer antistoffer mod Eimeriaarter, specielt E. tenella. Ved den foreliggende opfindelse er der identificeret og karakteriseret sporozoit-antigener, der sammen med visse monoklonale antistoffer er effektive til forebyggelse og behandling af coccidiose.
10 Antistofferne ifølge opfindelsen er derfor anvendelige til fremstilling af vacciner mod coccidiose.
Coccidiose er en sygdom hos dyr, der fremkaldes af en række forskellige parasitiske protozoer. Fuglecoccidiose er en ødelæggende fjerkræsygdom, der forårsages af arter af 15 slægten Eimeria. Denne sygdom har en kompliceret cyklus, der omfatter både kønnede og ukønnede stadier. Kyllinger inficeres til at begynde med med lidelsen efter indtagelse af fritlevende oocyster, der i reglen findes i forbindelse med fækalier. Oocyster udvikler sig til invaderende, ukønnede 20 sporozoitter i kyllingens mavetarmkanal. Sporozoitterne inficerer epithelceller og udvikles til flerkernestrukturer, der kaldes schizonter. Hver schizont modnes og frigør efterhånden mange invaderende, ukønnede strukturer, der kaldes merozoitter. Disse merozoitter forlader de inficerede celler 25 og invaderer igen andre epithelceller. De mangfoldige, invaderende, ukønnede stadier, der omfatter sporozoitter og merozoitter, er ansvarlige for meget af coccidiosens patologi. Coccidioses kønnede cyklus begynder, når merozoitterne diffenrentierer til gametocytter. Der sker befrugtning, og 30 produkterne heraf, der kaldes oocyster, frigøres i fæces. Parasittens livscyklus er således sluttet. Hos kyllinger afsluttes cyklussen for Eimeria tenella, der er en repræsentativ art, i løbet af ca. 7-9 døgn.
På grund af de kolossale økonomiske tab, som fjerkræ-35 industrien påføres af Eimeriaarter, er en vaccine yderst ønskværdig. Imidlertid er det på grund af parasittens kom-
DK 162171 B
2 plekse livscyklus og på grund af den varierende mængde antigener, der er til stede i hvert stadium, tidligere blevet iagttaget, at inaktiverede eller dræbte parasitter ikke har frembragt konsekvent immunitet. En løsning på dette problem 5 er at isolere og karakterisere særlige antigener fra parasitten og indgive dem i tilstrækkelig mængde til, at de kan fungere som immuniseringsmiddel. Sådanne antigener vil fortrinsvis yde beskyttelse mod infektion med alle vigtige arter. Man ved, at forskellige Eimeria-arter samt forskellige 10 stadier i denne arts livscyklus har både fælles og specifikke antigener [Z. Cerna, Folia Parasitologica (Prag), 17, 135-140 (1970), Davis m.fl., Immunol. 34, 879-888 (1978), M.E.
Rose, Immunol. 2, 112-122 (1959), Rose m.fl. Immunol., 5, 79-92 (1962), og Tanielian m.fl., Acta Parasitol. Yugosl.
15 7, 79-84 (1976)]. Man ved også, at udvikling af immunitet over for Eimeria er artsspecifik, og hos nogle arter tamfjerkræ er der klar stammespecifik immunitet [T.K. Jeffers, P.L. Long m.fl. udg., i Avian Coccidiosis, side 57-125,
Proc. 13. Poultry Sci. Symp. (1978), L.P. Joyner, Parasitol.
20 59, 725-732 (1969), P.L. Long, Parasitol. 69, 337-347 (1974), og Long m.fl., Parasitol. 79, 451-457 (1979)]. Indtil nu er immunogener af Eimeriaarter, der kan stimulere beskyttende immunitet hos fugle- og pattedyrværter, ikke blevet isoleret eller identificeret. Sådanne Eimeriaimmunogener vil sandsyn-25 ligvis give en vellykket immunisering mod coccidiose.
Udviklingen af lymphocyt-hybridomateknologi udgør et værktøj til frembringelse af forholdsvis store mængder specifikke antistoffer mod en række forskellige Eimeriaanti-gener. Ved at fusionere celler, som producerer et speci-30 fikt antistof (miltceller), med celler fra en myelomatumor, er det muligt at fremstille hybridomaceller, der udskiller monoklonale antistoffer rettet specifikt mod det oprindelige sensibiliseringsantigen (Kohier & Milstein, Nature (London) 256, 495-497 (1975)]. Hvis der kunne fås monoklonale anti-35 stoffer mod parasitten, ville det måske være muligt at overføre sådanne antistoffer til inficeret eller modtageligt
DK 162171 B
3 fjerkræ og således bibringe værtsorganismen et vist omfang af passiv immunitet. Når først sådanne hybridomakulturer, der producerer monoklonale antistoffer, er opnået, er det muligt ved hjælp af forskellige metoder at benytte sådanne 5 antistoffer til at isolere og identificere specifikke antigener, der igen kan benyttes som vaccine, således at værtsorganismer får et system af aktiv immunitet. Der kendes en række patentskrifter vedrørende hybridomakulturer og monoklonale antistoffer, nemlig US patentskrifterne nr.
10 4.172.124, 4.196.265, 4.271.145, 4.361.549, 4.631.550, 4.364.932, 4.364.933, 4.364.934, 4.364.935, 4.364.936, 4.381.292 og 4.381.295.
På baggrund af den ovennævnte omtale af coccidiosens økonomiske virkninger inden for dyrehold og især fjerkræin-15 dustrien, er en bekæmpelse af protozoparasitten yderst påkrævet. Det er således opfindelsens formål at tilvejebringe nye og værdifulde monoklonale antistoffer mod sporozoitter af slægten Eimeria. Endvidere er det opfindelsens formål at isolere og identificere specifikke E. tenella-antigener, 20 der kan anvendes til fremstilling af en vaccine til bekæmpelse af fjerkræcoccidiose.
I overensstemmelse hermed angår den foreliggende opfindelse monoklonale antistoffer, som er ejendommelige ved det i den kendetegnende del af krav 1 angivne.
25 Ved en udførelsesform for opfindelsen er de her om handlede, monoklonale antistoffer ejendommelige ved det i den kendetegnende del af krav 2 angivne, specielt ved det i den kendetegnende del af krav 3 angivne.
De her omhandlede, monoklonale antistoffer fremstilles 30 ved en fremgangsmåde, som er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 4 eller 5 angivne.
Der anvendes et præparat af E. tenella-sporozoitter til at immunisere mus, for at de efterhånden kan fremstille monoklonale antistoffer ifølge Kohiers og Milsteins metode, 35 som beskrevet nedenfor. De monoklonale antistoffer anvendes til at identificere parasittens antigener. Antigenerne, der
DK 162171 B
4 frembringer monoklonale antistoffer, der reagerer med spo-rozoitter og udviser neutralisering af parasitvækst, betragtes som beskyttende antigener. De beskyttende antigener, der forekommer hos forskellige arter af Eimeria, anses som 5 mulige kandidater til udvikling af en vaccine mod fuglecocci-diose.
Der fås opløselige antigener fra E. tenellas sporo-zoitter. Disse opløselige antigener adskilles elektrophore-tisk efter deres molekylvægt, og de, der reagerer specifikt 10 med monoklonale antistoffer ifølge opfindelsen, identifice res. Ved hjælp af passende standarder karakteriseres de reaktive antigener derpå på basis af molekylvægt.
For at kunne bedømme de monoklonale antistoffers evne til effektivt at neutralisere coccidiale sporozoitters 15 infektionsformåen udsættes kyllinger, der tidligere er blevet behandlet med forskellige monoklonale antistoffer ifølge opfindelsen, for sporozoitter af E. tenella. Dette in vivo forsøgssystem viser de udvalgte, monoklonale antistoffers beskyttelsesevne.
20 Kyllinger, der får injektion med opløseliggjorte sporozoitantigener, herunder dem, der er identificeret ved hjælp af de tilsvarende, monoklonale antistoffer, viser sig at være beskyttet mod oral infektion. Denne immuniseringsproces viser vaccinens evne til at udvikle sporozoitanti-25 gener, der kan erkendes af monoklonale antistoffer.
Opfindelsen vil i det følgende blive nærmere belyst ved hjælp af eksempler.
Eksempel 1 30 Konstruktion af hvbridomalinier
Sporozoitter af organismen Eimeria tenella fås ved at excystere oocyster med sporer ved anvendelse af kendte metoder [Doran m.fl., Proc. Helmintol. Soc. Wash., 34, 59-65 (1967)]. Et således opnået præparat af E. tenella-sporo-35 zoitter anvendes til at immunisere 18 uger gamle BALB/c-hunmus ved intraperitoneal injektion. Når det ved hjælp af
DK 162171B
5 indirekte immunfluorescensanalyse (IFA), der er kendt på området, er konstateret, at en immuniseret mus producerer anti-sporozoit-antistoffer, udvindes miltceller fra musen, og disse fusioneres med musemyelomacelle-linie P3X63,Ag8,653.
5 Fusionsprocessen udføres i nærvær af 30-35% polyethylenglycol (950-1050). Fremgangsmåden til opnåelse af hybridomaer er tidligere blevet beskrevet (jfr. Kennett m.fl., Monoclonal Antibodies, Plenum Press, 365-371 (1980)). Hybridomafusions-produkter dyrkes i HAT-medium [J.W. Littlefield, Science, 10 145, 709-710 (1964)] indeholdende Iscove's modificerede
Dulbecco's medium (IMDM) med 20% kalvefosterserumsupplement. Dyrkningsmedier overvåges for produktion af anti-sporozoit-antistof ved indirekte immunfluorescensanalyse (IFA) ved hjælp af glutaraldehydfikserede sporozoitter af E. tenella 15 som antigenkilde. Af alle de afprøvede kulturer viser 33 fordybninger sig at være positive ved IFA.
For at sikre hybridomakulturernes monoklonalicitet anvendes en begrænsende fortyndingsmetode. Efter E. tenella-sporozoitters udsættelse for forskellige, monoklonale, an-20 tistoffer ifølge opfindelsen iagttages tre hoved-lFA-reak-tivitetsmønstre på behandlede sporozoitter: (1) reaktion på hele overfladen af sporozoitter, (2) overfladereaktion som pletter på sporozitterne og (3) indvendig reaktion omkring kernemembranerne i sporozoitter. Disse reaktionsmønstre 25 bekræftes af ferritinmærkning og transmissionselektronmikroskopi (Speer m. fl., J. of Protozoology, i trykken). Bedømt ved IFA danner hybridomakulturer ifølge opfindelsen identiske antistoffer efter kloning. Kloner dyrkes enten in vitro eller i BALB/c-mus som peritoneale tumorer, og ascitesvæsken 30 indeholder antistoffer i en koncentration på op til ca. 10 mg/ml.
Eksempel 2
Fremstilling af antigener associeret med E. tenella-sporo-35 zoitter
Til antigenfremstillingen anvendes frist ekscysterede
DK 162171B
6 sporozoitter af E. tenella. Sporozoitternes ydermembrankom-ponenter ekstraheres ved hjælp af detergenter (dvs. 0,5% »Nonidet® P40", 0,5-2% "CHAPS" eller 0,5-1% "Triton® X-100") i 5 inM natriumphosphatpuffer med pH 7,8. Pufferen indeholder 5 følgende proteaseinhibitorer: aprotinin (2 trypsinenhe- der/ml), antipain (25 jug/ml), leupeptin (25 μq/^x^l), phenyl-methylsulfonylfluorid (4 mM) [Yoshida m.fl., J. Exp. Med., 154, 1225-1236 (1981)]. Det med detergent opløseliggjorte materiale centrifugeres ved 100.000 x G i 10 minutter for 10 at fjerne partikelformet materiale. Det klare, ovenstående lag indeholder opløselige antigener associeret med E. tenel-la-sporozoitter.
Eksempel 3 15 Antiqenkarakteristerincr
Opløselige antigener af E. tenella-sporozoitter adskilles efter molekylvægt ved anvendelse af SDS-polyacryl-amid-gelelektrophorese (PAGE) [U.K. Laemmli, Nature 227, 680-685 (1970)]. SDS-PAGE-adskilte proteiner overføres elek-20 trophoretisk på nitrocellulosemembraner ved hjælp af Westem-pletningsteknik [Towbinm.fi., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 76, 4350-4354 (1979)]. Nitrocellulosefilterne omsættes derpå med enten fortyndet ascitesvæske eller brugt hybridomadyrk-ningsvæske, der indeholder antistoffer. Bundne, monoklonale 25 antistoffer påvises derpå ved hjælp af radioimmunpåvisning, der omfatter 125I-mærket anti-muse-IgG-antistof (New England Nucelar). Det ubundne, andet antistof fjernes ved vask, og nitrocellulosefiltrene eksponeres derpå med "Kodak® XAR-5" røntgenfilm.
30 Alternativt identificeres specifikke antigen-mono- klonalt antistof-komplekser ved hjælp af en ELISA-teknik ved brug af peberrodsperoxidasekoblet kanin-IgG-antistof (Cappel Lab) mod museimmunoglobulin (Burnett m.fl., Anal. Biochem. 112, 195-203 (1981)]. Der anvendes "Bio-Rad Immuno 35 Blot" analysesættet.
De reaktive sporozoitantigeners tilsyneladende mole-
DK 162171 B
7 kylvægt bestemmes ved at sammenligne de elektrophoretiske Rf-værdier for antigenerne med Rf-værdier for forbindelser med kendte molekylvægte, der køres som standarder sammen med antigenerne i samme system. Forskellige antigeners for-5 søgsmolekylvægtsdata findes i tabel I.
Tabel I
Molekylvaeqtbestemmelse for forskellige E. tenella-sporozoit-antiqener 10
Hybridoma- Monoklonalt kultur antistof Antigens omtr. molekylvægt
S5E5 si 110 ± 16, 130 ± 20 kD
15 S4E2 s2 110 ± 16, 130 ± 20 kD
S1C4 S3 66 ± 9 kD, 55 ± 8 kD, 20-30 kD, 18 ± 3 kD,
15 ± 2 kD
S2G8 S4 55 ± 8 kD
20 S5B9 S5 55 ± 8 kD
SlA S6 54 ± 8 kD
S3C11 s7 50 ± 7 kD
S3D3 S8 29 ± 4 kD
S1E4 s9 58 ± 9 kD, 130 ± 20 kD
25 -
Eksempel 4
Neutralisering af E. tenella-sporozoitter med monoklonale antistoffer ved brug af in vivo kvllinaeprøve 30 Der anvendes et in-vivo-system til bedømmelse af monoklonale antistoffer ifølge opfindelsen produceret ud fra hybridomalinier til at neutralisere sporozoitter fra E. tenella. Fuglens coecum er stedet, hvor infektion med E. tenella finder sted, og den er tilgængelig ved hjælp af 35 kirurgi [Burns m.fl., Exp. Parasitol. 8, 515-526 (1959), Lawnm.fl., J. Parasitol. 68, 1117-1123 (1982)]. Kyllingers coecum blotlægger kirurgisk og infunderes med præparater af 8
DK 162171B
E. tenella-sporozoitter, der forud er blevet behandlet med monoklonale antistoffer ifølge opfindelsen.
Frisk ekscysterede sporozoitter inkuberes under sterile betingelser med varmeinaktiveret ascitesvæske, der 5 indeholder monoklonale antistoffer ifølge opfindelsen stammende fra hybridomalinier. Inkubationstiden er 30-60 minutter ved 25-37°C. En inkubationstid ved 37“C på 60 minutter foretrækkes. Derpå indføres behandlede sporozoitter i coecum på 3 uger gamle kyllinger ved hjælp af kirurgi. Ved slutningen 10 af inkubationstiden på 5 dage observeres de inficerede kyllingers coecum for læsioner. Inkubationstiden på 5 døgn repræsenterer det mest ødelæggende stadium af coccidiose. Resultaterne af dette forsøg er vist i tabel II. Det skal bemærkes, at de monoklonale antistoffer s3 og s8 begge giver 15 60% samlet beskyttelse mod infektion med sporozoitter af E.
tenella.
20 25 30 35
DK 162171 B
9
Tabel II
In-vivo bedømmelse af forskellige monoklonale antistoffer til bekæmpelse af E. tenella-sporozoitter 5
Behandling, hybridomalinie (kilde til Antal monoklonalt Monoklonalt sporo- % beskyttelse_ 10 antistof) antistof nr. zoitter Ingen Delvis Fuld --- --- 2000 70 21 9 S3D3 S8 2000 30 10 60 S2G8 S4 2000 100 0 0 15 S1C4 S3 2000 20 20 60 S1E4 S9 2000 60 0 40 s3D3 & s2G8 S8+S4 2000 25 19 56 S3D3 & slC4 S8+S3 2000 75 0 25 20 --- --- 3000 89 11 0 S3D3 S8 3000 60 40 0 S2G8 S4 3000 67 16 16 S1C4 S3 3000 50 0 50 S1E4 s9 3000 100 0 0 25 S3D3 & S2G8 S8+S4 4000 50 50 0 S3D3 & slC4 S8+S3 3000 50 0 50 S3D3 & slA S8+S6 3000 80 0 20 30
Eksempel 5
Immunisering med E. tenella-sporozoit-antiqener
Kyllinger, 1 uge gamle, immuniseres intraperitonealt med opløseliggjorte E. tenella-sporozoit-antigener. Til den 35 indledende injektion anvendes proteinmateriale, der stammer fra 1,5 x 107 sporozoitter i Freund's komplette adjuvans.
To boosterinjektioner følger med 10 dages mellemrum, hvor der til hver anvendes halvdelen af den indledende immuniseringsdosis i Freund's ukomplette adjuvans. 10 døgn efter 40 den sidste booster inficeres kyllingerne oralt med 50.000
DK 162171 B
10 oocyster. Fem døgn efter infektion iagttages coecumlæsioner. Resultaterne af dette forsøg er vist i tabel III. Det bemærkes, at opløselige antigener giver signifikant beskyttelse mod oral infektion med oocyster, hvorimod normale kyllinger 5 ikke beskyttes.
Tabel III
_% beskyttelse*) 10 Behandling Ingen Delvis Fuld
Kontrol 100 0 0
Immuniseret 0 33 66 15 * % af de afprøvede fugle.
De nye, monoklonale antistoffer nr. slC4, s3D3, slE4, s5B9, s5E5, slA og s2G8, der er isoleret som beskrevet ovenfor, er blevet deponeret hos American Type Culture Collection 20 (ATCC) i Rockville, Maryland, og er blevet optaget i den permanente samling. slC4 har fået tildelt nr. HB8333, S3D3 nr. HB8331, slE4 nr. HB8332, s5B9 nr. HB8402, s5E5 nr. HB8403, slA nr. HB8404 og s2G8 nr. HB8405. Disse antistoffer er tilgængelige for offentligheden ved udstedelse af patent 25 på grundlag af den prioritetsbegrundende ansøgning.
Nr. slC4 HB8333, nr. s3D3 HB8331 og nr. slE4 HB8332 blev deponeret hos ATCC den 11. august 1983. De nye, monoklonale antistoffer nr. s5B9 HB8402, nr. s5E5 HB8403, nr. slA HB8404 og nr. s3G8 HB8405 blev deponeret hos ATCC den 30 1. november 1983.
Claims (6)
1. Monoklonale antistoffer, kendetegnet ved, at de er produceret af hybridomaer dannet ved fusion af celler fra en musemyelomalinie og miltceller fra en mus, 5 der i forvejen er immuniseret med Eimeria tenella-sporozoit-ter, og som (a) reagerer specifikt med Eimeriaarters sporozoitters antigener, (b) reagerer specifikt med antigener af Eimeria tenella 10 med en molekylevægt på 13-150 kD.
2. Monoklonale antistoffer ifølge krav 1, kendetegnet ved, at de er fremstillet ud fra hybridomaer dannet ved fusion af P3x63,Ag8,653-myelomaceller og miltceller fra BALB/c-mus, der forud er immuniseret med E. tenella- 15 sporozoitter.
3. Monoklonalt antistof ifølge krav 2, kendetegnet ved, at det er produceret af hybridomaet betegnet klon nr. s5E5 og deponeret som ATCC HB8403, eller af hybridomaet betegnet klon nr. s4E2, eller af hybridomaet 20 betegnet klon nr. slC4 og deponeret som ATCC HB8333, eller af hybridomaet betegnet klon nr. s2G8 og deponeret som ATCC HB8405, eller af hybridomaet betegnet klon nr. s5B9 deponeret som ATCC HB8402, eller af hybridomaet betegnet klon nr. slA deponeret som ATCC HB8404, eller af hybridomaet betegnet 25 klon nr. s3Cll, eller af hybridomaet betegnet klon nr. s3D3 deponeret som ATCC HB8331, eller af hybridomaet betegnet klon nr. slE4 deponeret som ATCC HB8332.
4. Monoklonalt antistof ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det er fremstillet ved en fremgangsmåde 30 ifølge hvilken (a) mus immuniseres med E. tenella-sporozoitter, (b) milten hos disse mus fjernes, og der fremstilles en suspension heraf, (c) miltcellerne fusioneres med musemyelomceller i nærvær 35 af en fusionspromotor, (d) de fusionerede celler fortyndes og dyrkes i sepa- DK 162171B rate fordybninger i et medium, der ikke fremmer vækst af ikke-sammensmeltede myelomceller, (e) det ovenstående lag i hver fordybning indeholdende et hybridoma bedømmes for tilstedeværelse af antistof, 5 der er reaktivt med E. tenella-sporozoitter, (f) et hybridoma, der producerer antistof, der er reaktivt med E. tenella-sporozoitter, udvælges og klones, og (g) antistoffet udvindes fra det ovenstående lag eller ascitesproduktet af klonerne.
5. Fremgangsmåde til fremstilling af monoklonale antistoffer ifølge krav 1, kendetegnet ved, at klon nr. S5E5 (ATCC HB8403), S4E2, slC4 (ATCC HB8333), S2G8 (ATCC HB8405), S5B9 (ATCC HB8403), slA (ATCC HB8404), S3C11, s3D3 (ATCC HB8331) eller slE4 (ATCC HB8332) dyrkes i et 15 passende medium, og at antistoffet udvindes fra det ovenstående lag i en sådan hybridomakultur, eller at der i en mus injiceres en hybridomakultur betegnet klon nr. s5E5 (ATCC HB8403), s4E2, SlC4 (ATCC HB8333), S2G8 (ATCC HB8405), s5B9 (ATCC HB8402), SlA (ATCC HB8404), S3C11, S3D3 (ATCC 20 HB8331) eller slE4 (ATCC HB8332), og at antistoffet udvindes fra musens ascites eller serum.
6. Monoklont antistof, kendetegnet ved, at det er fremstillet ved fremgangsmåden ifølge krav 5.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US52481983A | 1983-08-19 | 1983-08-19 | |
| US52481983 | 1983-08-19 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK304590A DK304590A (da) | 1990-12-21 |
| DK304590D0 DK304590D0 (da) | 1990-12-21 |
| DK162171B true DK162171B (da) | 1991-09-23 |
| DK162171C DK162171C (da) | 1992-03-16 |
Family
ID=24090798
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK397184A DK397184A (da) | 1983-08-19 | 1984-08-17 | Antigener og monoklone antistoffer, der er reaktive mod eimeriaarters sporozoitter |
| DK304590A DK162171C (da) | 1983-08-19 | 1990-12-21 | Monoklonale antistoffer, der er reaktive med eimeriaarters sporozoitters antigener, og fremgangsmaade til deres fremstilling |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK397184A DK397184A (da) | 1983-08-19 | 1984-08-17 | Antigener og monoklone antistoffer, der er reaktive mod eimeriaarters sporozoitter |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0135712A3 (da) |
| JP (2) | JPS6067499A (da) |
| KR (1) | KR850001697A (da) |
| AU (1) | AU585484B2 (da) |
| CA (1) | CA1241923A (da) |
| DK (2) | DK397184A (da) |
| ES (4) | ES8607025A1 (da) |
| FI (1) | FI83667C (da) |
| IL (1) | IL72656A (da) |
| NO (1) | NO162179C (da) |
| NZ (1) | NZ209077A (da) |
| PT (1) | PT79075B (da) |
| ZA (1) | ZA846433B (da) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0135073A3 (en) * | 1983-08-19 | 1987-05-27 | American Cyanamid Company | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozites of eimeria spp. |
| CA1340520C (en) * | 1984-06-05 | 1999-05-04 | Karel Z. Newman Jr. | Antigenic proteins and vaccines containing them and protective antibodies directed to them for prevention of coccidiosis caused by eimeria tenella and eimeria necatrix |
| US4639372A (en) * | 1984-06-29 | 1987-01-27 | Merck & Co., Inc. | Coccidiosis vaccine |
| US5279960A (en) * | 1984-07-05 | 1994-01-18 | Enzon Corp. | 25 KD coccidial antigen of eimeria tenella |
| EP0190254A4 (en) * | 1984-07-05 | 1987-03-09 | Genex Corp | GENE CLONE AND PROCESS FOR THE PREPARATION AND USE THEREOF. |
| US5273901A (en) * | 1984-07-05 | 1993-12-28 | Enzon Corp. | Genetically engineered coccidiosis sporozoite 21.5 Kb antigen, ac-6b |
| US4724145A (en) * | 1985-11-18 | 1988-02-09 | Merck & Co., Inc. | Eimeria acervulina immunogens |
| ES2091861T3 (es) | 1985-12-03 | 1996-11-16 | Solvay | Proteinas antigenicas y vacunas que las contienen para la prevencion de la coccidiosis. |
| EP0241139A3 (en) * | 1986-03-13 | 1989-04-19 | Merck & Co. Inc. | Anti-idiotypic vaccine for coccidiosis |
| CA1340838C (en) | 1986-08-14 | 1999-12-07 | Michael Wallach | Coccidiosis vacine |
| US5496550A (en) * | 1986-08-14 | 1996-03-05 | Chilwalner | Method of reducing the output of Eimeria oocysts from a newborn chick |
| ATE145245T1 (de) * | 1987-03-06 | 1996-11-15 | Amgen Boulder Inc | Polypeptide zur verwendung bei der diagnose von kokkidien-infektion und rekombinant-dns, verfahren zur herstellung derselben |
| ZA893740B (en) * | 1988-06-03 | 1990-02-28 | Hoffmann La Roche | Recombinant coccidiosis vaccines |
| ZA902147B (en) * | 1989-03-28 | 1990-12-28 | Akzo Nv | Coccidiosis vaccine |
| JPH06504187A (ja) * | 1990-09-12 | 1994-05-19 | ジェネックス・コーポレーション | 遺伝子操作されたコクシジウム症ワクチン |
| US6008342A (en) * | 1991-07-12 | 1999-12-28 | Roche Vitamins Inc. | DNA encoding eimeria antigen |
| US5403581A (en) * | 1991-07-12 | 1995-04-04 | Hoffmann-La Roche Inc. | Coccidiosis vaccines |
| EP0872486A1 (en) * | 1997-04-09 | 1998-10-21 | Akzo Nobel N.V. | Eimeria proteins as vaccines |
| US6680061B1 (en) | 1998-10-07 | 2004-01-20 | Theodorus Cornelis Schaap | Coccidiosis vaccines |
| ZA200400479B (en) | 2001-07-06 | 2006-05-31 | Abic Biolog Lab Teva | Nucleic acids encoding recombinant 56 a 82 KDA antigens from gametocytes of Eimeria maxima and their use |
| BR0210850A (pt) | 2001-07-06 | 2004-12-07 | Biolog Lab Teva Ltd | ácidos nucléicos que codificam um antìgeno de 250 kda recombinante de esporozoìtos/merozoìtos de eimeria máxima e seus usos |
| JP2003088370A (ja) * | 2001-09-03 | 2003-03-25 | Avicore Biotechnology Institute Inc | 鳥類コクシジウム症を誘発するアイメリア種のスポロゾイトの表面抗原に対するｓｃＦｖ組換え抗体 |
| JP6155758B2 (ja) * | 2013-03-29 | 2017-07-05 | 株式会社Ihi | 低温液体タンク |
| CN106046136B (zh) * | 2016-06-03 | 2019-02-22 | 山东农业大学 | 一种鸡柔嫩艾美尔球虫微线蛋-2突变体EtMIC2-2119 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5649323A (en) * | 1979-09-29 | 1981-05-02 | Nisshin Flour Milling Co Ltd | Coccidiostat |
| EP0135073A3 (en) * | 1983-08-19 | 1987-05-27 | American Cyanamid Company | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozites of eimeria spp. |
| US4639372A (en) * | 1984-06-29 | 1987-01-27 | Merck & Co., Inc. | Coccidiosis vaccine |
-
1984
- 1984-07-27 EP EP84108925A patent/EP0135712A3/en not_active Ceased
- 1984-07-31 AU AU31332/84A patent/AU585484B2/en not_active Ceased
- 1984-08-01 NZ NZ209077A patent/NZ209077A/xx unknown
- 1984-08-09 FI FI843142A patent/FI83667C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-08-12 IL IL72656A patent/IL72656A/xx unknown
- 1984-08-13 PT PT79075A patent/PT79075B/pt unknown
- 1984-08-16 ES ES535203A patent/ES8607025A1/es not_active Expired
- 1984-08-17 DK DK397184A patent/DK397184A/da not_active Application Discontinuation
- 1984-08-17 JP JP59170518A patent/JPS6067499A/ja active Pending
- 1984-08-17 NO NO843293A patent/NO162179C/no unknown
- 1984-08-17 ZA ZA846433A patent/ZA846433B/xx unknown
- 1984-08-17 CA CA000461242A patent/CA1241923A/en not_active Expired
- 1984-08-18 KR KR1019840004994A patent/KR850001697A/ko not_active Application Discontinuation
-
1985
- 1985-07-26 ES ES545607A patent/ES8606901A1/es not_active Expired
-
1986
- 1986-01-31 ES ES551497A patent/ES8802164A1/es not_active Expired
- 1986-01-31 ES ES551496A patent/ES8900008A1/es not_active Expired
-
1990
- 1990-12-21 DK DK304590A patent/DK162171C/da not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-07-14 JP JP4208561A patent/JPH05317080A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES8900008A1 (es) | 1988-11-16 |
| PT79075A (en) | 1984-09-01 |
| AU3133284A (en) | 1985-02-21 |
| ES535203A0 (es) | 1986-06-01 |
| ES8607025A1 (es) | 1986-06-01 |
| KR850001697A (ko) | 1985-04-01 |
| JPS6067499A (ja) | 1985-04-17 |
| NO843293L (no) | 1985-02-20 |
| PT79075B (en) | 1986-07-22 |
| ES8802164A1 (es) | 1988-04-01 |
| IL72656A0 (en) | 1984-11-30 |
| AU585484B2 (en) | 1989-06-22 |
| DK162171C (da) | 1992-03-16 |
| EP0135712A3 (en) | 1987-05-27 |
| IL72656A (en) | 1989-06-30 |
| FI843142A (fi) | 1985-02-20 |
| ZA846433B (en) | 1985-03-27 |
| DK304590A (da) | 1990-12-21 |
| CA1241923A (en) | 1988-09-13 |
| FI843142A0 (fi) | 1984-08-09 |
| DK397184A (da) | 1985-02-20 |
| FI83667B (fi) | 1991-04-30 |
| DK304590D0 (da) | 1990-12-21 |
| NZ209077A (en) | 1988-08-30 |
| ES551497A0 (es) | 1988-04-01 |
| DK397184D0 (da) | 1984-08-17 |
| JPH05317080A (ja) | 1993-12-03 |
| ES8606901A1 (es) | 1986-05-16 |
| ES551496A0 (es) | 1988-11-16 |
| ES545607A0 (es) | 1986-05-16 |
| NO162179C (no) | 1989-11-22 |
| FI83667C (fi) | 1991-08-12 |
| CA1261285C (da) | 1989-09-26 |
| EP0135712A2 (en) | 1985-04-03 |
| NO162179B (no) | 1989-08-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK162171B (da) | Monoklonale antistoffer, der er reaktive med eimeriaarters sporozoitters antigener, og fremgangsmaade til deres fremstilling | |
| US4710377A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of Eimeria spp. | |
| US4650676A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozoites of Eimeria spp. | |
| Kovacs et al. | Monoclonal antibodies to Pneumocystis carinii: identification of specific antigens and characterization of antigenic differences between rat and human isolates | |
| Quakyi et al. | The 230-kDa gamete surface protein of Plasmodium falciparum is also a target for transmission-blocking antibodies. | |
| Read et al. | Transmission‐blocking antibodies against multiple, non‐variant target epitopes of the Plasmodium falciparum gamete surface antigen Pfs230 are all complement‐fixing | |
| US5001225A (en) | Monoclonal antibodies to a pan-malarial antigen | |
| Perrin et al. | Inhibition of P. falciparum growth in human erythrocytes by monoclonal antibodies | |
| FI84186C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av monoklonala antikroppar mot eimeria spp.-sporozoiter och merozoiter och foerfarande foer framstaellning av en antigen komposition. | |
| US5028694A (en) | Antigenic proteins and vaccines containing them for prevention of coccidiosis caused by eimeria Eimeria necatrix and Eimeria tenella | |
| Perrin et al. | Plasmodium falciparum: characterization of defined antigens by monoclonal antibodies. | |
| JPH0699475B2 (ja) | コクシジウムのモノクロ−ナル抗体 | |
| EP0390267B1 (en) | Coccidiosis vaccine | |
| US5932225A (en) | Vaccine comprising eimeria spp. gametocyte antigen | |
| Delbac et al. | Immunocytochemical identification of spore proteins in two microsporidia, with emphasis on extrusion apparatus | |
| Gregoire et al. | Protective monoclonal antibodies from mice vaccinated or chronically infected with Schistosoma mansoni that recognize the same antigens. | |
| CA1233134A (en) | Hybrid cell lines producing monoclonal antibodies directed against trichomonas vaginalis determinants | |
| CA1261285A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of eimeria spp | |
| Taylor et al. | Use of a two-sited monoclonal antibody assay to detect a heat-stable malarial antigen in the sera of mice infected with Plasmodium yoelii | |
| EP0241139A2 (en) | Anti-idiotypic vaccine for coccidiosis | |
| Deans | Protective antigens of bloodstage Plasmodium knowlesi parasites | |
| CA1261286A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozoites of eimeria spp | |
| US5502168A (en) | Monoclonal antibodies to a continuous and cross-reactive epitope and an isolated protein of a sexual stage of P. falciparum | |
| US4746612A (en) | Aotus interspecies hybridomas and monoclonal receptors produced thereby | |
| Chardonnet et al. | Identification of shared antigenic determinants of different polypeptides from Davis and Towne cytomegalovirus strains with monoclonal antibodies |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |