DK147076B - Fremgangsmaade til rensning af chenodesoxycholsyre - Google Patents

Description

147076

Opfindelsen angår en fremgangsmåde til rensning af rå chenodesoxycholsyre»

Chenodesoxycholsyre eller 3a,7ct-dihydroxy-5P-cho-lansyre muliggør opløsningen af cholesteroliske galdesten og benyttes i den humane medicin til behandling deraf.

Chenodesoxychlosyre fremstilles normalt ud fra et stof af naturlig oprindelåe. Den fremstilles gængs ud fra cholsyre eller 3a,7a,12a-trihydroxy-5P-cholansyre (som selv fås fra animalsk galde), hvis hydroxygruppe i 12-stil-lingen elimineres ved en række reaktioner (Feiser m.fl., J. A. C. S. 72, 5530 (1950)).

Chenodesoxycholsyre indeholder i rå tilstand som følge af sin fremstilling sekundære produkter, navnlig andre galdesyrer såsom lithocholsyre. Tilstedeværelsen af disse urenheder i et stof, som indgives i langvarig terapi, som det er tilfældet for cbenodesoxycholsyre, kan fremkalde uønskede bivirkninger.

Det er derfor vigtigt at benytte et stof med meget stor renhed og til dette formål at have en fremgangsmåde til rensning af chenodesoxycholsyre, som gør det muligt at opnå et meget rent produkt, I tysk patentskrift 2.302.744 har man foreslået at behandle chenodesoxycholsyre, idet man behandler råproduktet i methanolisk opløsning med et calciumsalt eller et strontiumsalt, idet man gør alkalisk, hvorefter man behandler det dannede calcium- eller strontiumsalt med en syre og ekstraherer chenodesoxycholsyren.

Man har ligeledes i fransk patentskrift nr.

2.273.011 til fremstilling af chenodesoxycholsyre foreslået at underkaste den rå syre i form af dens vandige alkalimetalsalt, fortrinsvis dens natrium- eller kaliumsalt, en kontinuerlig væske-væske-ekstraktion med et organisk opløsningsmiddel, fortrinsvis ethylacetat eller en blanding af isobutanol og toluen, derpå at syrne saltopløsningen med en fortyndet syre, fortrinsvis saltsyre, og at ekstrahere og at fælde chenodesoxycholsyren med vand.

Fransk patentskrift nr. 2.269.957 foreslår til rens- 2 147076 nirtg af chenodesoxycholsyre at fremstille et inclusions-kompleks af den rå syre og et clathrat af organisk opløsningsmiddel såsom især ethylacetat eller heptan efterfulgt af eliminering af det organiske opløsningsmiddel.

Fransk patentskrift nr. 2.346.370 beskriver rensningen af rå chenodesoxycholsyre ved krystallisation af acetonitril.

Formålet med den foreliggende opfindelse er at anvise en industriel fremgangsmåde til rensning af ehenodes-oxycholsyre, som gør det muligt at opnå en forbindelse, som svarer til de aktuelle krav i henseende til et lægemiddels renhed, og ved hvilket man undgår de intolerancemanifestationer og sekundære virkninger, som skyldes en tilstedeværelse i for store mængder, skønt meget små procentsatser, af generende urenheder såsom lithocholsyre.

Denne fordring til renheden gør sig særlig kraftigt gældende i tilfælde af chenodesoxycholsyre, som er et lægemiddel, som indgives patienten daglig gennem mange måneder.

Således gør fremgangsmåden ifølge opfindelsen det f.eks. muligt ud fra et råprodukt, som indeholder ca. 2$ urenheder i hovedsagen bestående af andre galdesyrer end chenodesoxycholsyre, hvoraf ca. 0,5$ 3a-hydroxycholansyre eller litnocholsyre,·at opnå et renset stof, som indeholder mindre end 1$ fremmede galdesyrer, hvoraf mindre end 0,1$ lithocholsyre.

En sådan renhedsgrad kan ikke - under tilfredsstillende udbyttebetingelser - nås i industriel målestok med de hidtil kendte rensningsprocesser.

Den foreliggende opfindelse anviser således en fremgangsmåde til rensning af chenodesoxycholsyre eller 3a,7oc-dihydroxy-5a-eholansyre, som er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del anførte.

Det dannede krystallinske stof udgøres* sandsynlig- 147076 3 vis af ren 3α,7α-άί&7όΐΓθχγ-5β-<ϊϊιο1αη37Γβ i en særlig krystallinsk form eller i form af et solvat af denne syre«

Krystallisationen af methylenchlorid gør det muligt at opnå bedre rensningsudbytter end dem, som man kan få med andre opløsningsmidler.

Under foretrukne betingelser for iværksættelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen går man frem som følger: - Man opløser først 3a,7a-dihydroxy*^-cholansy-ren i rå tilstand i en blanding af ethanol og methylenchlorid, hvorpå man tilsætter methylenchlorid.

- Krystallisationssystemet benyttes i forholdene fra 0,1:1 til 0,7:1 ethanol og 5,9:1 til 7,2:1 methylenchlorid i forhold til 3a,7oc-dihydroxy-5P-cholansyre.

- Krystallisationen udføres i varm tilstand, navnlig ved reaktionsmilieueis tilbagesvalingstemperatur.

- Man får 3a,7<x-dihydroxy-5P-cholansyren ved tørring af det krystallinske stof. Yed tørring skal forstås indvirkning af varme, af vakuum eller ved ventilation.

- Man kan ligeledes vinde 3a,7a-dihydroxy-5p--cholansyren fra det krystallinske produkt ved omkrystallisation af et andet opløsningsmiddel eller opløsningsmiddelsystem eller ved opløsning i et opløsningsmiddel eller opløsningsmiddelsystem, navnlig en blanding af acetone og vand, delvis afdampning af opløsningsmidlet eller opløsningsmiddelsystemet og isolering af det opnåede krystallinske produkt.

Nedenstående eksempel illustrerer fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

Eksempel.

Man opløser under kraftig omrøring 100 g rå cheno-desoxycholsyre indeholdende ca. 2$ urenheder hovedsagelig bestående af fremmede galdesyrer, hvoraf ca. 5 o/oo litho-cholsyre, i en blanding af 40 mllCO^’s ethanol denatureret med butanol, 210 ml methylenchlorid og 0,1 g natriumacetat ved en temperatur på 20-25°C, opvarmer til tilbagesvaling i 20 minutter, tilsætter under kraftig omrøring i lø- 4 147076 bet af ca, 10 minutter under opretholdelse af tilbagesvalingen 450 ml methylenchlorid, hvilket medfører en rigelig krystallisation, holder under tilbagesvaling i 1 time, afkøler suspensionen i løbet af 5 timer til en temperatur mellem 0°C og -2°C, omrører i 2 timer ved denne temperatur, frasuger og vasker 3 gange ved en temperatur mellem 0°C og -2°C med en blanding af 2,8 ml 100$'s ethanol denatureret med butanol og 47*2 ml methylenchlorid. Man tørrer i ventileret tørreskab ved 40°C og får 79 g renset chenodes-oxycholsyre med smp. 123°C og med et methylenchloridind-hold under 0,1%.

Man genopløser det opnåede produkt i 316 ml acetone tilsat 5% vand. Man omrører ved 20-25°0 indtil opløsning, tilsætter 0,79 g aktivkul, omrører i 15 minutter, filtrerer og skyller med 79 ml acetone med 5$ vand. Man sætter 74,2 ml vand til filtratet, opvarmer til kogning og destillerer derpå ved normalt tryk 237 ml vand-aeetone--blanding, tilsætter 237 ml vand, lader afkøle til 38°0, omrører i 2 timer og lader derpå afkøle til 20-22°C, omrører i 2 timer, suger fra, vasker med 3 gange 79 ml vand, tørrer og får 76,6 g renset chenodesoxyeholsyre. (Man beholder vaskevæskerne og krystallisationsmoderludene med henblik på isolering af et andet udbytte.) = +10,5° +1° (c = 10%, dioxan).

Ved tyndtlagschromatografi ser man, at det opnåede rensede produkt indeholder mindre end 1% andre galdesyrer end chenodesoxyeholsyre (navnlig cholsyre, 3a,7a-dihy-droxy-12-ketocholansyre, 3a-hydroxycholansyre eller li-thocholsyre og 3a,12<x-dihydroxycholansyre eller desoxy-cholsyre) og navnlig mindre end 1 o/oo lithocholsyre.

Tyndtlagschromatografien udføres på følgende måde:

Man benytter silicagelplader, Chenodesoxyeholsyre opløses i acetone (4%). Man foretager en aflejring af 10 μΐ. Som vandringsopløsningsmiddel benytter man opløsningsmiddelsystemet: isooetan, ethylacetat og ren eddikesyre (5*5*2).

5 147076

Man lader vandre i mættet beholder på 15 cm og lader derpå vandre i 1 time. Man fremkalder ved forstøvning af 10$'s svovlsyre i ethanol, opvarmer til 100°C og undersøger i U.V.lys.

Forsøg 1.

Rensning af chenodesoxycholsyre i 0.1 rumfang ethanol og 5*9 rumfang methylenchlorid.

Man indfører tinder omrøring 20 g chenodesoxycholsyre, som indeholder 2-3$ urenheder, der i hovedsagen udgøres af forskellige galdesyrer, i en blanding af ethanol denatureret med butahol (0,1 rumfang) og methylenchlorid (2,1 rumfang) ved 20-25°C, opvarmer til tilbagesvaling i 20 minutter, tilsætter under kraftig omrøring i løbet af ca. 10 minutter og under opretholdelse af tilbagesvalingen 3,8 rumfang methylenchlorid, fortsætter tilbagesvalingen i 1 time, afkøler i 3 timer til en temperatur mellem 0°C og -20°C, omrører i 2 timer ved denne temperatur, suger fra og vasker 3 gange med en blanding af 0,028 rumfang ethanol og 0,472 rumfang methylenchlorid. Man tørrer i ventileret tørreskab ved 40°C og får 18,8 g chenodesoxycholsyre indeholdende ca. 1,1$ galdesyrer.

Rorsøg 2.

Rensning af chenodesoxycholsyre i 0.1 rumfang ethanol og 7.2 rumfang methylenchlorid.

Man behandler på samme måde som i forsøget ovenfor 20 g chenodesoxycholsyre, som indeholder 2-3$ urenheder, der i hovedsagen består af forskellige galdesyrer, med 0,1 rumfang ethanol denatureret med butanol og 7,2 rumfang methylenchlorid (2,1 rumfang blandet med denatureret ethanol og derpå 5,1 rumfang).

Der fås 18,06 g chenodesoxycholsyre indeholdende ca. 1,1$ galdesyrer.