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GEBIET DER
ERFINDUNG
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Die Erfindung betrifft Hautpflegezusammensetzungen,
die ein Amid und Retinol oder Retinylester enthalten, sowie kosmetische
Verfahren, welche das Auftragen solcher Zusammensetzungen auf die
Haut beinhalten.
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ALLGEMEINER
STAND DER TECHNIK
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Retinol (Vitamin A) ist eine endogene
Verbindung, die natürlicherweise
im menschlichen Körper
vorkommt und für
die normale Differenzierung von Epithelzellen unentbehrlich ist.
Natürliche
und synthetische Vitamin-A-Derivate
sind ausgiebig zur Behandlung verschiedener Hautkrankheiten und
als Hautreparatur- oder -erneuerungsstoffe verwendet worden. Retinsäure ist
zur Behandlung verschiedener Hautprobleme eingesetzt worden, z.
B. bei Akne, Falten, Psoriasis, Altersflecken und Verfärbung. Siehe
z. B. Vahlquist, A. et al., J. Invest. Dermatol., Bd. 94, Holland
D. B. and Cunliffe, W. J. (1990), S. 496–498; Ellis, C. N. et al., „Pharmacology of
Retinols in Skin",
Vasel, Karger, Bd. 3, (1989), S. 249-252; Lowe, N. J. et al., „Pharmacology
of Retinols in Skin",
Bd. 3, (1989), S. 240–248;
PCT-Patentanmeldung Nr. WO 93/19743.
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Es wird angenommen, dass die Verwendung
von Retinol oder Retinylestern gegenüber Retinsäure zu bevorzugen ist. Retinol
ist eine endogene Verbindung. Ester von Retinol hydrolysieren in
vivo unter Bildung von Retinol. Retinol und Retinylester gelten
als unbedenklicher im Vergleich zu Retinsäure. Unglücklicherweise sind Retinol
und Retinylester im Vergleich zu Retinsäure weniger wirksam beider
Bereitstellung von Nutzen für
die Haut.
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Die vorliegende Erfindung gründet sich
zum Teil auf der Entdeckung, dass eine Kombination von Retinol oder
Retinylestern mit Amiden von Hydroxyfettsäuren eine synergistische Hemmung
der Keratinozytendifferenzierung bewirkt. Die Effekte von Hydroxyfettsäureamiden
in Verbindung mit Retinol oder einem Retinylester waren analog zu
den Effekten von Retinsäure.
Somit ahmt eine Mischung aus einem Hydroxyfettsäureamid mit Retinol oder Retinylestern
Retinsäure
nach, ist jedoch leichter und unbedenklicher zu verwenden als Retinsäure.
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Thornfeldt (US-Patentschrift Nr.
5,057,501) offenbart ein Verfahren zur Behandlung papulosquamöser und
ekzemischer Krankheiten mit einer Zusammensetzung, die eine Sesquiterpenverbindung
und ungefähr 0,025%
bis ungefähr
35% einer Monocarboxylfettsäure,
eines Esters oder Amids enthält.
Die Zusammensetzungen können
auch ein Retinoid enthalten: Thornfeldt lehrt, dass bestimmte Retinoide,
nämlich
Isotretinoin, Tretinoin, Etretin (alles Stereoforme von Retinsäure) und
Etretinat (ein Ester von Trimethoxyphenylretinsäure) ihre Wirksamkeit gegen
papulosquamöse
Krankheiten unter Beweis gestellt haben. Die PCT-Anmeldung WO 93/25177
(Procter and Gamble) offenbart Zusammensetzungen zur topischen Anwendung
auf der Haut, die eine spezifische Art eines acyclischen Carboxamidkühlmittels
enthalten und Retinoide wie etwa Retinsäure und deren Derivate (z.
B. cis und trans) einschließen
können.
Die PCT-Anmeldung WO 94/03156 (Rhone Poulenc) offenbart eine topische
Zusammensetzung, die Linolsäure
oder ein Derivat als aktiven Inhaltsstoff zur Behandlung und Prophylaxe
von unreiner Haut (z. B. Haut, die von Pickeln, Pusteln oder Komedonen
betroffen ist) beinhaltet; die Zusammensetzung kann auch 0,025–0,1 Gew.%
Tretinoin enthalten. Die europäische
Patentanmeldung Nr. 0 388 275 (Pierre Fabre Cosmetique) offenbart
Zusammensetzungen zur Behandlung von Seborrhöe, die Alkylcarboxamid und
ein Zinksalz, welches Zinkretinoat sein kann, beinhalten.
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Klaus et al. (US-Patentschrift Nr.
5,216,148) offenbaren die Verwendung spezifischer komplexer Carboxamide
zur Behandlung und Vorbeugung von Neoplasmen, Dermatosen und Hautalterung.
Van Scott et al. (US-Patentschrift Nr. 4,380,549) und Yu et al.
(US-Patentschrift Nr. 4,363,815) offenbaren die Behandlung von Akne,
trockener, blättriger,
schuppiger Haut mit einer Hydroxysäure oder dem Amid davon.
EP 0 582 458 offenbart die
Verwendung von N,N-(1,4C-Alkyl)-Lauramid.
EP 0 559 304 offenbart die Verwendung
eines Amids, das eine Kohlenwasserstoffkette von wenigstens 25 Kohlenstoffatomen
enthält,
als Hautglättungsstoff.
Beauquey et al. (US-Patentschrift Nr. 5,308,551) offenbaren eine
Hautwasch- und-pflegezusammensetzung, die neben anderen Inhaltsstoffen
ein 1-4C-Alkanolamid
einer 8-16C-Fettsäure
enthält.
Die britische Patentschrift Nr. 1,126,289 (Hoffman-La Roche) offenbart
ein Vitaminstammpräparat,
das Vitamin-A-Alkohol oder einen Vitamin-A-Ester, einen Emulgator
und ein Lösemittel,
ausgewählt
aus einem Alkohol oder einem Dialkylamid einer Monocarboxylsäure (z.
B. N,N-Diethylacetamid, N,N-Dimethylacetamid oder N,N-Dimethylformamid),
enthält. Das
Vitaminpräparat
hat einen sehr hohen Vitamingehalt, das heißt, die minimale Konzentration
ist 250.000 I. E. Vitamin A/ml. Weiterhin ist Melinamid bei den
Amiden, die in der '289er
Anmeldung offenbart sind, nicht enthalten oder erwähnt.
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Eine früher eingereichte europäische Patentanmeldung
EP 0 742 005 (Unilever;
Prioritätsdatum
B. Mai 1995), veröffentlicht
am 13. November 1996 (nach dem Prioritätsdatum der vorliegenden Anmeldung),
offenbart Kombinationen von Fettsäureamiden mit Retinol oder
Retinylestern. EP '005
enthält
jedoch keine Lehre über
Amide von Hydroxyfettsäuren.0.
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Der oben zitierte Stand der Technik
offenbart keine Hautkonditionierungszusammensetzungen, die auf synergistischen
Kombinationen von Hydroxyfettsäureamiden
mit Retinol oder Retinylester basieren. Keines der oben zitierten
Dokumente erwähnt
den Bedarf an einer wirksamen Alternative zu Retinsäure.
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KURZDARSTELLUNG
DER ERFINDUNG
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Die vorliegende Erfindung schließt, teilweise,
eine Hautkonditionierungszusammensetzung ein, die
- (1)
von 0,001 o bis 10 o eines Retinoids ausgewählt aus der Gruppe bestehend
aus Retinol und Retinylester;
- (2) von 0,0001 o bis 50 o eines Amids einer Hydroxyfettsäure; und
- (3) einen kosmetisch verträglichen
Trägerstoff
beinhaltet.
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Die Erfindung stellt auch ein kosmetisches
Verfahren zur Hautkonditionierung bereit, das die topische Anwendung
der vorliegenden Zusammensetzung auf die Haut umfasst. Weiterhin
wird ein kosmetisches Verfahren bereitgestelat, das die Wirkung
von Retinsäure
auf der Haut nachahmt, welches die topische Anwendung der vorliegenden
Zusammensetzung auf die Haut umfasst.
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Der Begriff „Konditionierung", wie hierein verwendet,
bedeutet Vorbeugung und Behandlung eines oder mehrerer der folgenden
Hautzustände:
trockene Haut, photobeschädigte
Haut, Auftreten von Falten, Altersflecken, gealterte Haut, Akne,
Psoriasis, atopische Dermatose. Die Zusammensetzungen sind auch
zum Erreichen von Hautaufhellung und/oder Kontrolle von Sebumexkretion
und/oder Erhöhung
der Flexibilität
des Stratum corneum und im All-gemeinen
zur Erhöhung
der Hautqualität
geeignet. Die Zusammensetzung kann zur Verbesserung der Hautabschuppung
und der zellulären
Proliferation verwendet werden.
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Das Vorhandensein eines Hydroxyfettsäureamids
im erfindungsgemäßen Produkt
verbessert in erheblicher Weise die Leistung von Retinol oder Retinylester,
das heißt
ein Hydroxyfettsäureamid
erhöht
wesentlich die Fähigkeit
von Retinol oder Retinylester die zelluläre Proliferation zu beeinflussen.
Ein Hydroxyfettsäureamid
hat keine oder geringe Wirkung auf die Verbesserung der vorteilhaften
Hauteigenschaften, wenn es allein verwendet wird; eine wesentliche
Steigerung vorteilhafter Hauteigenschaften wird nur erreicht, wenn
ein Hydroxyfettsäureamid
mit Retinol oder einem Retinylester kombiniert wird.
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Kurz gesagt basiert die vorliegende
Erfindung, wenigstens teilweise, auf der Entdeckung einer syergistischen
Wechselwirkung zwischen Retinol oder Retinylester und einem Hydroxyfettsäureamid.
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Gemäß der vorliegenden Erfindung
wird, durch Einschluss einer wirksamen Menge von Hydroxyfettsäureamid
in Retinol oder einen Retinylester enthaltende Zusammensetzungen,
die Leistung der Zusammensetzungen wesentlich verbessert. Alternativ
können
geringere Mengen von Retinol oder Retinylester in der ein Hydroxyfettsäureamid
enthaltenden Zusammensetzung beinhaltet sein, um der Leistung einer ähnlichen
Formulierung ohne das Amid zu entsprechen.
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BESCHREIBUNG
DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGSFORM
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Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen enthalten
als einen ersten essentiellen Inhaltsstoff eine Verbindung, die
ausgewählt
ist aus der Gruppe bestehend aus Retinol, Retinylestern und Mischungen
davon.
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Der Begriff „Retinol" schließt unter anderem die folgenden
Isomere von Retinol ein: all-trans-Retinol, 13-cis-Retinol, 11-cis-Retinol, 9-cis-Retinol,
3,4-Didehydroretinol. Bevorzugte Isomere sind all-trans-Retinol, 13-cis-Retinol,
3,4-Didehydroretinol, 9-cis-Retinol. Besonders bevorzugt ist all-trans-Retinol
aufgrund seiner weit verbreiteten Erhältlichkeit im Handel.
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Retinylester ist ein Ester von Retinol.
Der Begriff „Retinol" wurde oben definiert.
Zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung geeignete Retinylester
sind C1-C30-Ester von Retinol,
vorzugsweise C2-C20-
Ester und besonders bevorzugt C2-, C3- und C16- Ester,
da diese leichter erhältlich
sind. Beispiele von Retinylestern beinhalten aber sind nicht beschränkt auf:
Retinylpalmitat,
Retinylformat, Retinylacetat, Retinylpropionat, Retinylbutyrat,
Retinylvalerat, Retinylisovalerat, Retinylhexanoat, Retinylheptanoat,
Retinyloctanoat, Retinylnonanoat, Retinyldecanoat, Retinylundecanoat, Retinyllaurat,
Retinyltridecanoat, Retinylmyristat, Retinylpentadecanoat, Retinylheptadecanoat,
Retinylstearat, Retinylisostearat, Retinylnonadecanoat, Retinylarachidonat,
Retinylbehenat, Retinyllinoleat, Retinyloleat, Retinyllactat, Retinylglycolat,
Retinylhydroxycaprylat, Retinylhydroxylaurat, Retinyltartrat.
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Der zur Verwendung in der vorliegenden
Erfindung bevorzugte Ester wird ausgewählt aus Retinylpalmitat, Retinylacetat
und Retinylpropionat, da diese am einfachsten im Handel erhältlich und
daher am billigsten sind. Retinyllinoleat ist ebenso bevorzugt aufgrund
seines Wirkungsgrades.
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Das Retinoid wird in der erfindungsgemäßen Zusammen setzung
in einer Menge von 0,001% bis 10%, vorzugsweise in einer Menge von
0,01% bis 1%, besonders bevorzugt in einer Menge von 0,01% bis 0,5% eingesetzt.
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Der zweite essentielle Inhaltsstoff
der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen
ist ein Amid einer Hydroxyfettsäure.
Die Struktur eines Amids einer Hydroxyfettsäure ist wie folgt:
wobei R
1,
R
2 und R
4 jeweils
unabhängig
voneinander ausgewählt
sind aus Wasserstoff und aliphatischen gesättigten oder ungesättigten,
geraden oder verzweigten Kohlenwasserstoffketten, die hydroxyliert
sein können, welche
1 bis 20 Kohlenstoffatome enthalten; R
3 ist
-(CH
2)
n worin n
eine ganze Zahl von 0 bis 18 ist.
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Bevorzugterweise enthalten R1, R2 und R4 jeweils unabhängig voneinander 2 bis 20 Kohlenstoffatome, insbesondere
2 bis 15 Kohlenstoffatome, besonders bevorzugt 3 bis 13 Kohlenstoffatome.
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Bevorzugterweise ist das Hydroxysäureamid
ein Amid von αoder β-Hydroxysäure, das
heißt
n ist 0 oder 1.
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Die für die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen
besonders bevorzugten Hydroxyfettsäureamide sind: Lactamidmonoethanolamid,
C13,-β-Hydroxysäureamid
(2-Hydroxy-Cl3-amid), N-Hydroxyethyl-2-hydroxy-Cl6-amid, 12-Hydroxy-N-(2-hydroxyethyl)octadecanamid
und Monoethanolamid aus Rizinusöl.
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Das Amid ist in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen
in einer Menge im Bereich von 0,0001% bis 50%, vorzugsweise von
0,01 bis 10%, besonders bevorzugt von 0,1 bis 5% beinhaltet.
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KOSMETISCH
VERTRÄGLICHER
TRÄGERSTOFF
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Die erfindungsgemäße Zusammensetzung umfasst
auch einen kosmetisch verträglichen
Trägerstoff, der
als Verdünnungsmittel,
Dispergiermittel oder Träger
für das
Retinol und/oder den Retinylester und das Hydroxyfettsäureamid
in der Zusammensetzung fungiert, um, wenn die Zusammensetzung auf
die Haut aufgetragen wird, deren Verteilung zu erleichtern.
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Trägerstoffe verschieden von oder
zusätzlich
zu Wasser können
flüssige
oder feste Weichmacher, Lösemittel,
Feuchthaltemittel, Dickungsmittel und Puder einschließen. Ein
besonders bevorzugter nichtwässriger Träger ist
ein Polydimethylsiloxan und/oder ein Polydimethylphenylsiloxan.
Erfindungsgemäße Silikone
können
solche mit Viskositäten
im Bereich von 10 bis 10.000.000 mm2/s (Centistoke)
bei 25°C
sein. Besonders wünschenswert
sind Mischungen von Silikonen mit hohen und niedrigen Viskositäten. Diese
Silikone sind von General Electric Company unter den Warenzeichen
Vicasil, SE und SF und von Dow Corning Company aus der 200 und 550
Serie erhältlich.
Die Silikonmengen, die in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen verwendet
werden können,
bewegen sich im Bereich von 5 bis 95 Gew.%, vorzugsweise von 25
bis 90 Gew.% der Zusammensetzung.
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Der kosmetisch verträgliche Trägerstoff
wird für
gewöhnlich
5 bis 99, 9 Gew.%, vorzugsweise 25 bis 80 Gew.% der Zusammensetzung
bilden und kann, in Abwesenheit anderer kosmetischer Zusätze, die
Ausgewogenheit der Zusammensetzung herstellen. Vorzugsweise ist
der Trägerstoff
wenigstens 50 Gew.%, insbesondere 80 Gew.% Wasser per Gewicht der
Zusammensetzung. Vorzugsweise umfasst Wasser wenigstens 50 Gew.%
der erfindungsgemäßen Zusammensetzung,
besonders bevorzugt von 60 bis 80 Gew.% per Gewicht der Zusammensetzung.
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OPTIONALE
MATERIALIEN FÜR
VORTEILHAFTE HAUTEIGENSCHAFTEN UND KOSMETISCHE ZUSÄTZE
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Ein Öl oder ein ölhaltiges Material kann gemeinsam
mit einem Emulgator vorhanden sein, um entweder eine Wasserin-Öl Emulsion
oder eine Öl-in-Wasser
Emulsion bereitzustellen, was großenteils vom durchschnittlichen
hydrophilen-lipophilen Gleichgewicht (HLG) des eingesetzten Emulgators
abhängt.
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Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen schließen vorzugsweise
Sonnenschutzmittel ein. Sonnenschutzmittel schließen solche
Materialien ein, die gemeinhin zur Abschirmung gegen ultraviolettes
Licht eingesetzt werden. Typische Verbindungen sind die Derivate
von PABA, Cinnamat und Salicylat. Beispielsweise können Octylmethoxycinnamat
und 2-Hydroxy-4-methoxybenzophenon (auch bekannt als Oxybenzon)
verwendet werden. Octylmethoxycinnamat und 2-Hydroxy-4-methoxybenzophenon
sind im Handel unter den Warenzeichen Parsol MCX beziehungsweise
Benzophenon-3 erhältlich.
Die genaue Menge an Sonnenschutzmittel, die in den Emulsionen eingesetzt
wird, kann in Abhängigkeit
vom gewünschten
Schutzgrad vor der UV Strahlung der Sonne variieren.
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Ein weiterer bevorzugter optionaler
Inhaltsstoff wird ausgewählt
aus essentiellen Fettsäuren
(EFS), das heißt
solchen Fettsäuren,
die für
die Bildung der Plasmamembran aller Zellen essentiell sind. Bei
Keratinozyten macht EFS Mangel die Zellen hyperproliferativ. Zusatz
von EFS gleicht dieses aus. EFS steigern auch die Lipidbiosynthese
der Epidermis und stellen Lipide für die Schrankenausbildung der
Epidermis bereit. Die essentiellen Fettsäuren werden vorzugsweise ausgewählt aus
Linolensäure, γ-Linolensäure, Homo-γ-linolensäure, Columbinsäure, Eicosa-(n-6,9,13)-triensäure, Arachidonsäure, Timnodonsäure, Hexaensäure und
Mischungen davon.
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Noch ein weiterer bevorzugter optionaler
Inhaltsstoff wird ausgewählt
aus Azolen, z. B. Climbazol, Bifonazol, Clotrimazol, Ketoconazol,
Miconazol, Econazol, Itraconazol, Fluconazol, Terconazol, Butoconazol, Sulconazol,
Lionazol und Mischungen davon. Das Azol kann in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen in
einer Menge von 0,001 bis 50 Gew.%, vorzugsweise von 0,001 bis 10
Gew.%, besonders bevorzugt von 0,1 bis 5 o beinhaltet sein.
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Weichmacher sind oftmals in die erfindungsgemäßen kosmetischen
Zusammensetzungen aufgenommen. Der Gehalt an solchen Weichmachern
kann sich im Bereich von 0,5 bis 50 Gew.%, vorzugsweise von 5 bis
30 Gew.% der gesamten Zusammensetzung bewegen. Weichmacher können in
solch allgemeine chemische Kategorien eingeordnet werden wie Ester,
Fettsäuren
und Alkohole, Polyole und Hydrocarbone.
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Ester können Mono- oder Diester sein.
Geeignete Beispiele von Fettdiestern schließen Dibutyladipat, Diethylsebacat,
Diisopropyldimerat und Dioctylsuccinat ein. Geeignete verzweigtkettige
Fettester schließen 2-Ethylhexylmyristat,
Isopropylstearat und Isostearylpalmitat ein. Geeignete tribasische
Säureester
schließen Triisopropyltrilinoleat
und Trilaurylcitrat ein. Geeignete geradkettige Fettester schließen Laurylpalmitat,
Myristyllactat, Oleyleurcat und Stearyloleat ein. Bevorzugte Ester
schließen
Cococaprylat/caprat (ein Gemisch von Cococaprylat und Cococaprat),
Propylenglykolmyristyletheracetat, Diisopropyladipat und Cetyloctonoat
ein.
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Geeignete Fettalkohole und -säuren schließen solche
Verbindungen ein, die 10 bis 20 Kohlenstoffatome aufweisen. Besonders
bevorzugt sind solche Verbindungen wie etwa Cetyl-, Myristyl-, Palmitin-
und Stearylalkohole und -säuren.
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Unter den Polyolen, die als Weichmacher
dienen können,
sind lineare und verzweigtkettige Alkylpolyhydroxylverbindungen.
Beispielsweise sind Propylenglykol, Sorbitol und Glyzerin bevorzugt.
Ebenso können polymere
Polyole wie etwa Polypropylenglykol und Polyethylenglykol nützlich sein.
Butylen- und Propylenglykol sind ebenfalls besonders als Penetrationsförderer bevorzugt.
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Beispielhafte Kohlenwasserstoffe,
die als Weichmacher dienen können
sind solche, die Kohlenwasserstoffketten von 12 bis 30 Kohlenstoffatomen
aufweisen. Spezifische Beispiele schließen Mineralöl, Vaseline, Squalen und Isoparaffine
ein.
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Eine weitere Kategorie funktioneller
Inhaltsstoffe innerhalb der kosmetischen Zusammensetzungen der vorliegenden
Erfindung sind Verdickungsmittel. Ein Verdickungsmittel ist für gewöhnlich in
Mengen von 0, 1 bis 20 Gew.%, vorzugsweise von 0,5 bis 10 Gew.%
der Zusammensetzung vorhanden. Beispielhafte Verdickungsmittel sind
quer vernetzte Polyacrylatmaterialien, die unter dem Warenzeichen
Carbopol von der B. F. Goodrich Company erhältlich sind. Gums wie etwa
Xanthan, Carrageenan, Gelatine, Karaya, Pektin und Johannisbrotgum
können
eingesetzt werden. Unter bestimmten Umständen kann die Verdickungsfunktion
von einem Material erfüllt
werden, das ebenso als Silikon oder Weichmacher dient. Beispielsweise
weisen Silikon gums mit einer Viskosität von über 10 Centistoke und Ester,
wie etwa Glycerolstearat, eine doppelte Funktionsfähigkeit
auf.
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Pulver können in die erfindungsgemäße kosmetische
Zusammensetzung aufgenommen werden. Diese Pulver schließen Kreide,
Talg, Kaolin, Stärke,
Smektitton, chemisch modifiziertes Magnesiumaluminiumsilikat, organisch
modifizierten Montmorillonitton, hydratisiertes Aluminiumsilikat,
pyrogene Kieselerde, Aluminiumstärkeoctenylsuccinat
und Mischungen davon ein.
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Weitere zugesetzte kleinere Verbindungen
können
ebenso in die kosmetischen Zusammensetzungen aufgenommen werden.
Diese Inhaltsstoffe können
Färbemittel,
Trübungsmittel
und Parfums einschließen.
Die Mengen dieser weiteren zugesetzten kleineren Verbindungen können sich
im Bereich von 0,001 bis zu 20 Gew.% der Zusammensetzung bewegen.
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VERWENDUNG
DER ZUSAMMENSETZUNG
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Die erfindungsgemäße Zusammensetzung ist in erster
Linie als ein Produkt zur topischen Auftragung auf die menschliche
Haut gedacht, insbesondere als ein Mittel zur Konditionierung und
Glättung
der Haut und zur Vorbeugung oder Reduzierung des Auftretens von
faltiger oder gealterter Haut.
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Zur Verwendung wird eine geringe
Menge der Zusammensetzung, beispielsweise von 1 bis 100 ml, auf
exponierte Gebiete der Haut von einem geeigneten Behälter oder
Applikator aus aufgetragen und, falls erforderlich, wird sie dann,
unter Verwendung der Hand oder der Finger oder eines geeigneten
Hilfsmittels, über die
Haut verteilt und/oder in die Haut eingerieben.
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PRODUKTFORM UND VERPACKUNG
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Die topische Hautbehandlungszusammensetzung
der Erfindung kann geeigneterweise als Lotion, Creme oder Gel formuliert
werden. Die Zusammensetzung kann in einem geeigneten Behälter verpackt
werden, um deren Viskosität
und der beabsichtigten Verwendung des Konsumenten zu entsprechen.
Beispielsweise kann eine Lotion oder Creme in einer Flasche oder
einem Roll-Ball-Applikator oder einer durch Treibgas betriebenen
Aerosolvorrichtung oder einem mit einer Pumpe zur Fingerbedienung
ausgerüsteten
Behälter
verpackt werden. Wenn die Zusammensetzung eine Creme ist, kann sie
in einfacher Weise in einer nichtdeformierbaren Flasche oder einem
Druckbehälter
wie etwa einer Tube oder einem bedeckelten Töpfchen, aufbewahrt werden.
Die Zusammensetzung kann auch in Kapseln, wie denen in US-Patentschrift
5,063,057 beschriebenen, beinhaltet sein.
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Die Erfindung stellt demgemäß auch einen
geschlossenen Behälter
bereit, der die kosmetisch verträgliche
Zusammensetzung wie hierin definiert enthält.
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Die folgenden spezifischen Beispiele
veranschaulichen die Erfindung weiter. Retinoide wurden von Sigma
erworben.
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MATERIALIEN
UND METHODEN
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Zellkultur:
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Von neonataler Vorhaut durch Trypsinbehandlung
isolierte menschliche Keratinozyten wurden in Dulbecco Modification
Eagle (DME) Hams F12 (1 : 1) Medium/10% fötalem Kalbsserum in Gegenwart
von bestrahlten 3T3 Mäusefibroblasten
zur Etablierung sich teilender Keratinozytenkolonien angezogen.
Die Zellen wurden unter obigen Bedingungen bis zu ihrer zweiten
Passage angezogen und zur späteren
Verwendung eingefroren. Gefrorene Keratinozyten der zweiten Passage
wurden aufgetaut und auf das obige Medium ausplattiert und 5 Tage
wachsen gelassen, bevor sie auf ein serumfreies, auf MCDB-153 basierendes
Medium, Keratinocyte Growth Medium (KGM) von Clonetics Corporation,
San Diego, CA, mit 0,15 mM Ca, oder auf Keratinocyte serum-free
Medium (KSFM) von GIBCO mit 0,09 mM Ca, überführt wurden. Am 7. Tag, als
die Zellen zu 80–90%
konfluent waren, wurden sie trypsiniert und auf serumfreies Medium
für die
vielfältigen
Experimente ausplattiert.
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TRANSGLUTAMINASE-ANALYSE
Transalutaminase-Analyse und Keratinozytendifferenzierung
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Während
des Vorgangs der terminalen Differenzierung in der Epidermis wird
eine 15 nm dicke Proteinschicht, bekannt als cornified envelope
(CE), auf der inneren Öberfläche der
Zellperipherie gebildet. Die CE ist aus zahlreichen unterschiedlichen
Proteinen zusammengesetzt, die durch die Bildung von Nε-(γ-glutamyl)lysinisodipeptid
Bindungen, welche durch die Wirkung von wenigstens zwei verschiedenen
in der Epidermis exprimierten Transglutaminasen katalysiert werden,
miteinander quervernetzt wurden. Transglutaminase I (TGase I) wird
im Überschuss
in den differenzierten Schichten der Epidermis, insbesondere der
Granularschicht exprimiert, aber ist in der undifferenzierten Basalepidermis
nicht vorhanden. Somit ist TGase I ein nützlicher Marker der epidermalen
Keratinozytendifferenzierung, wobei hohe TGase I Gehalte einen differenzierteren
Zustand anzeigen. Eine auf ELISA basierende TGase-I-Analyse unter
Verwendung eines TGase-I-Antikörpers wurde
verwendet, um den Differenzierungszustand der in den folgenden Beispielen
kultivierten Keratinozyten zu beurteilen.
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Für
Beispiel 1 wurde das folgende Verfahren verwendet:
Keratinozyten
(wie oben beschrieben kultiviert) wurden in 96-Mulden-Mikrotiterplatten
in einer Dichte von 3000 Zellen pro Mulde in 200 μl Medium
ausplattiert. Nach 4 Tagen Inkubation wurde das Medium gegen Medium ausgetauscht,
das Testverbindungen enthielt (sechs Replikate pro Test). Die Zellen
wurden weitere 72 Stunden kultiviert, nach denen das Medium abgesaugt
und die Platten bei –70°C gelagert
wurden. Die Platten wurden aus dem Gefrierschrank genommen und die
Zellen mit PBS gewaschen. 100 μl
steriles Wasser wurden zugegeben und die Zellen wurden durch Gefrieren
bei –70°C und anschließendem Auftauen
aufgeschlossen. Die Zellen wurden eine Stunde bei Raumtemperatur
(R/T) mit PBS/3% BSA (Waschpuffer, Rinderserumalbumin) inkubiert,
dann mit einem frischen Aliquot Waschpuffer gespült. Die Zellen wurden mit 50 μl primärer Antikörper monoklonaler
antimenschlicher Transglutaminase Mausantikörper (IgG), erworben von Biomedical
Industries, 1 : 2000 verdünnt
in Waschpuffer für
eine Stunde bei 37°C
inkubiert, anschließend
zweimal mit Waschpuffer gespült.
Die Zellen wurden dann mit 50 μl
eines sekundären
Antikörpers
(Fab-Fragment, Peroxidasekonjugiertes Anti-Maus-IgG, erworben von
Amersham), 1 : 4000 verdünnt
in Waschpuffer, für
eine Stunde bei 37°C
inkubiert und dann zweimal mit Waschpuffer gespült. Die Zellen wurden mit Substratlösung (4
mg o-Phenylendiamin und 3,3 μl
30% H2O2 in 10 ml
0,1 M Citratpuffer pH 5,0) fünf
Minuten lang, R/T, in der Dunkelheit (unter Aluminiumfolie) inkubiert.
Die Reaktion wurde durch Zugabe von 50 μl 4N H2SO4, gestoppt. Die Absorption der Proben wurde
bei 492 nm in einem Plattenlesegerät bestimmt. Unter den 6 Replikaten
wurden vier mit beiden Antikörpern
behandelt, zwei wurden nur mit dem sekundären Antikörper behandelt (d. h. um den
Hintergrund der Bindung des enzym konjugierten Antikörpers zu
bestimmen). Die TGase-I-Gehalte
wurden durch Abzug des Hintergrunds von den Messdaten jeder Behandlung
und durch Bestimmung des Mittelwerts +/- S. a. für die beiden Antikörpern ausgesetzten
Replikate ermittelt.
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Für
Beispiel 2 wurde das folgende Verfahren verwendet:
Keratinozyten
(wie oben beschrieben kultiviert) wurden in 96-Mulden-Mikrotiterplatten
in einer Dichte von 3000 Zellen pro Mulde in 200 μl Zellkulturmedium
ausplattiert. Nach 4 Tagen Inkubation wurde das Medium gegen Medium
ausgetauscht, das Testverbindungen enthielt (sechs Replikate pro
Test). Die Zellen wurden weitere 72 Stunden kultiviert, nach denen
das Medium abgesaugt und die Platten bei –70°C gelagert wurden. Nach Entnahme
der Platten aus dem Gefrierschrank wurden die Zellen weiterhin durch
Gefrieren und Auftauen aufgeschlossen und dann 3 × mit PBS
gewaschen. Die Zellen wurden eine Stunde bei Raumtemperatur (R/T)
mit TBS/5% BSA Puffer inkubiert. Die Zellen wurden dann mit 100 μl eines monoklonalen
antimenschlichen Transglutaminase-(IgG)-Mausantikörpers (primärer Antikörper), erworben
von Biomedical Technologies Inc., 1 : 2000 verdünnt in TBS/1% BSA Puffer, für zwei Stunden
bei 37°C
inkubiert, und anschließend
sechsmal mit Waschpuffer (TBS/1% BSA/0,05% Tween-20) gespült. Die
Zellen wurden anschließend
mit 100 μl
Fab-Fragment, Peroxidase-konjugierter
Anti-Maus-IgG-Antikörper
(sekundärer
Antikörper)
von Amersham, 1 : 4000 verdünnt
in Waschpuffer, für
zwei Stunden bei 37°C
inkubiert und dann dreimal mit Waschpuffer und dreimal mit PBS gespült. Die
Zellen wurden mit Substratlösung
(4 mg o-Phenylendiamin und 3,3 μl
30% H2O2 in 10 ml
0,1 M Citratpuffer, pH 5,0) fünf
Minuten lang bei R/T und in der Dunkelheit (unter Aluminiumfolie)
inkubiert. Die Reaktion wurde durch Zugabe von 50 μl 4N H2SO4, gestoppt.
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Die Absorption der Proben wurde bei
492 nm in einem Plattenlesegerät
bestimmt. Unter den 6 Replikaten wurden vier mit beiden Antikörpern behandelt,
zwei wurden nur mit dem sekundären
Antikörper
behandelt (d. h., um den Hintergrund der Bindung des enzymkonjugierten
Antikörpers
zu bestimmen). Die TGase-I-Gehalte wurden durch Abzug des Hintergrunds
von den Messdaten jeder Behandlung und durch Bestimmung des Mittelwerts
+/- S. a. für
die beiden Antikörpern
ausgesetzten Replikate ermittelt.
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DNA-ANALYSE
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Der Gehalt an TGase I, der nach der
Behandlung der Zellen festgestellt wurde, konnte durch die Zellzahl
beeinflusst werden, d. h. je größer die
Anzahl der Zellen desto größer der
festgestellte Gehalt an TGase I. Der Gehalt an TGase I wurde auf
den DNA Gehalt der Zellen in derselben Mulde normalisiert, wodurch
Abweichungen aufgrund von Unterschieden in der Zellzahl ausgeschlossen
wurden. DNA Quantifizierung ist ein besonders nützlicher Indikator der Zellzahl,
einschließlich
der Keratinozytenzellzahl, da jede Zelle im Grunde ein identisches
Genom und daher eine identische Menge an DNA aufweist. Der gesamte
Gehalt einer Mulde von Zellen ist daher direkt proportional zu der
Zellzahl in dieser Mulde. Quantifizierung von DNA wurde zur Normalisierung
der TGase Werte auf die Zellzahl verwendet.
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Keratinozyten wurden in 96-Mulden-Mikrotiterplatten
in einer Dichte von 3000 Zellen pro Mulde in 200 μl Medium
ausplattiert. Nach 4 Tagen Inkubation wurde das Medium gegen Medium
ausgetauscht, das Testverbindungen enthielt (sechs Replikate pro
Test). Die Zellen wurden weitere 72 Stunden kultiviert, nach denen das
Medium abgesaugt und die Platten wenigstens 1,5 Stunden lang bei –70°C gelagert
wurden. Die Platten wurden aus dem Gefrierschrank genommen und 30
Minuten lang aufgetaut. 100 μl
Hoechst Dye (1 μg/ml
Endkonzentration)/Mulde wurden hinzugefügt und das ganze wurde 15 Minuten
lang inkubiert, abgedeckt und dann in einem Fluorimeter gemessen
(Ex. 360 nm und Em. 460 nm). Die Farbstofflösung wurde entfernt und die
Mulden wurden in Vorbereitung auf die TGase-Analyse mit PBS gespült.
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BEISPIEL 1
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Retinsäure ist
effektiver als Retinol zur Veränderung
des Differenzierungszustandes von Keratinozyten
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Die Wirkung auf den Gehalt an Transglutaminase,
der auf den DNA-Inhalt der Zellen normalisiert wurde, nach Zugabe
von Retinsäure
(RS) und Retinol (ROH) wurde untersucht und die Ergebnisse sind
in Tabelle 1 wiedergegeben.
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Alle getesteten Konzentrationen von
Retinsäure,
d. h. 2,5 × 10–7 M,
2,5 × 10–8 M
und 2,5 × 10–9 M
verminderten die Keratinozytendifferenzierung gegenüber der
Ethanolkontrolle und zwar in einem signifikant größeren Ausmaß als jede
einzelne der entsprechenden 2,5 × 10–7 M,
2,5 × 108 M und 2,5 × 10–9 M
Retinolbehandlungen. Die Abnahme des Transglutaminasegehalts war
dosisabhängig
für sowohl
Retinsäure
als auch Retinol. Dies ist damit vereinbar, dass Retinsäure eine
stärker
hemmende Wirkung auf die epitheliale Differenzierung aufweist als
Retinol.
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BEISPIEL 2
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Amide von
Hvdroxyfettsäuren
und Retinol wirken synergistisch bei der Hemmung der Keratinozvtendifferenzierung
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Die Wirkung auf den Gehalt an TGase
2, der auf den DNA-Inhalt
der Zellen normalisiert wurde, wurde auf die Reaktion hinsichtlich
einer 72-stündigen
Behandlung mit den Testverbindungen hin untersucht. Das Amid wurde
von Quest International erworben. C13-β-Hydroxysäureamid
hat die folgende Struktur:
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2,5 × 10–8 M
Retinsäure
zeigte sich zur Repression der TGase-I-Gehalte der Keratinozyten
sehr wirksam (bis zu 6% des Gehaltes der Kontrollen). 2,5 × 10–8 M
Retinol war weniger wirksam als Retinsäure (79%), und 10–9 M
C13-β-Hydroxysäureamid
zeigte keine Wirkung auf den TGase-I-Gehalt der Keratinozyten, wenn
es einzeln verwendet wurde. 2,5 × 10–6 M
Retinol + 10–9 M
C13-β-Hydroxysäureamid
unterdrückten
jedoch den TGase-I-Gehalt der Keratinozyten auf 62% des Gehalts
der Kontrollen. Cl3-β-Hydroxysäureamid und Retinol wirken
somit synergistisch zur Reprimierung der Keratinozytendifferenzierung
in analoger Weise zur Wirkung von Retinsäure.
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Die Wirkung auf die auf den DNA-Gehalt
der Zellen normalisierten TGase-I-Gehalte, wurden auf die Reaktion
hinsichtlich einer 72 stündigen
Behandlung mit den Testverbindungen hin untersucht. „Lactamid MEA" ist Lactamidmonoethanolamid.
Es wurde von Croda Chemicals erworben. Lactamid MEA hat die folgende
Struktur:
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2,5 × 10–7 M
Retinsäure
zeigte sich zur Repression der TGase-I-Gehalte der Keratinozyten
wirksam (bis zu 73% des Gehaltes der Kontrollen). 2,5 × 10–7 M
Retinol und 106 M Lactamid DEA waren weniger
wirksam zur Hemmung des TGase-I-Gehalts der Keratinozyten, wenn
sie einzeln verwendet wurden. 2,5 × 10–7 M Retinol
+ 10–6 M
Lactamid DEA unterdrückten
jedoch den TGase-I-Gehalt der Keratinozyten auf 72% des Gehalts
der Kontrollen. Lactamid MEA und Retinol wirken somit synergistisch
zur Reprimierung der Keratinozytendifferenzierung in analoger Weise
zur Wirkung von Retinsäure.
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Die Beispiele 1 und 2 zeigen, dass
Retinsäure
die Keratinozytendifferenzierung in dosisabhängiger Weise verminderte. In
den Beispielen 1 und 2 wurde Retinsäure als Positivkontrolle und
Referenzverbindung verwendet, mit der die anderen zu analysierenden
Verbindungen verglichen wurden. Retinol war zur Verminderung der
Keratinozytendifferenzierung unwirksam.
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Unerwartete Ergebnisse der Beispiele
1 und 2 waren jedoch, dass die Wirkung von Retinol auf kultivierte
Keratinozyten durch Kombination von Retinol oder Retinylester mit
einem Amid einer Hydroxyfettsäure, einer
Verbindung, die allein wenig oder gar keinen Vorteil zeigt, auf
Ausmaße
gesteigert werden konnte, die sich der von Retinsäure nähern. Die
oben dokumentierten Ergebnisse zeigen, dass ein Amid einer Hydroxyfettsäure in synergistischer
Weise mit Retinol oder Retinylester auf die Verminderung der Keratinozytendifferenzierung
wirkt, wobei die Wirkung von Retinsäure nachgeahmt wird.
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Die Beispiele 3–8 veranschaulichen erfindungsgemäße topische
Zusammensetzungen. Die Zusammensetzungen können in herkömmlicher
Weise verarbeitet werden. Sie sind zur kosmetischen Verwendung geeignet.
Insbesondere sind die Zusammensetzungen zur Anwendung auf faltige,
raue, trockene, schuppige, gealterte und/oder UV-beschädigte Haut
geeignet, um deren Erscheinungsbild und Gefühl zu verbessern sowie für gesunde
Haut, um deren Verfall vorzubeugen oder zu verzögern.
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BEISPIEL 3
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Dieses Beispiel veranschaulicht eine
Wasser-in-Öl
Emulsion mit hoher interner Phase, welche die erfindungsgemäße Zusammensetzung
beinhaltet.
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BEISPIEL 4
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Dieses Beispiel veranschaulicht eine Öl-in-Wasser
Creme, welche die erfindungsgemäße Zusammensetzung
beinhaltet.
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BEISPIEL 5
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Dieses Beispiel veranschaulicht eine
alkoholische Lotion, welche die erfindungsgemäße Zusammensetzung beinhaltet.
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BEISPIEL 6
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Dieses Beispiel veranschaulicht eine
weitere alkoholische Lotion, welche die erfindungsgemäße Zusammensetzung
beinhaltet.
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BEISPIEL 7
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Dieses Beispiel veranschaulicht eine
Sonnenpflegecreme, welche die erfindungsgemäße Zusammensetzung beinhaltet.
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BEISPIEL 8
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Dieses Beispiel veranschaulicht eine
nichtwässrige
Hautpflegezusammensetzung, welche die erfindungsgemäße Kombination
beinhaltet.
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