DE69726313T2

DE69726313T2 - Ein amid und ein retinoid enthaltende zusammensetzungen für die hautpflege.

Info

Publication number: DE69726313T2
Application number: DE69726313T
Authority: DE
Inventors: Paton Stewart GRANGER; Anthony Vincent Rawlings; Richard Ian SCOTT
Original assignee: Unilever NV
Current assignee: Unilever NV
Priority date: 1996-09-27
Filing date: 1997-09-18
Publication date: 2004-05-27
Anticipated expiration: 2017-09-19
Also published as: JP2000504036A; CA2266927C; PL332542A1; CN1237899A; ES2210583T3; BR9712136B1; AU4555497A; TW491710B; US5747051A; DE69726313D1; CN1104889C; AR009097A1; PL188576B1; WO1998013017A1; EP0955996A1; KR100315319B1; RU2176498C2; KR20000048696A; AU715132B2; EP0955996B1

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Die Erfindung betrifft Hautpflegezusammensetzungen, die ein Amid und Retinol oder Retinylester enthalten, sowie kosmetische Verfahren, welche das Auftragen solcher Zusammensetzungen auf die Haut beinhalten.
ALLGEMEINER STAND DER TECHNIK
Retinol (Vitamin A) ist eine endogene Verbindung, die natürlicherweise im menschlichen Körper vorkommt und für die normale Differenzierung von Epithelzellen unentbehrlich ist. Natürliche und synthetische Vitamin-A-Derivate sind ausgiebig zur Behandlung verschiedener Hautkrankheiten und als Hautreparatur- oder -erneuerungsstoffe verwendet worden. Retinsäure ist zur Behandlung verschiedener Hautprobleme eingesetzt worden, z. B. bei Akne, Falten, Psoriasis, Altersflecken und Verfärbung. Siehe z. B. Vahlquist, A. et al., J. Invest. Dermatol., Bd. 94, Holland D. B. and Cunliffe, W. J. (1990), S. 496–498; Ellis, C. N. et al., „Pharmacology of Retinols in Skin", Vasel, Karger, Bd. 3, (1989), S. 249-252; Lowe, N. J. et al., „Pharmacology of Retinols in Skin", Bd. 3, (1989), S. 240–248; PCT-Patentanmeldung Nr. WO 93/19743.
Es wird angenommen, dass die Verwendung von Retinol oder Retinylestern gegenüber Retinsäure zu bevorzugen ist. Retinol ist eine endogene Verbindung. Ester von Retinol hydrolysieren in vivo unter Bildung von Retinol. Retinol und Retinylester gelten als unbedenklicher im Vergleich zu Retinsäure. Unglücklicherweise sind Retinol und Retinylester im Vergleich zu Retinsäure weniger wirksam beider Bereitstellung von Nutzen für die Haut.
Die vorliegende Erfindung gründet sich zum Teil auf der Entdeckung, dass eine Kombination von Retinol oder Retinylestern mit Amiden von Hydroxyfettsäuren eine synergistische Hemmung der Keratinozytendifferenzierung bewirkt. Die Effekte von Hydroxyfettsäureamiden in Verbindung mit Retinol oder einem Retinylester waren analog zu den Effekten von Retinsäure. Somit ahmt eine Mischung aus einem Hydroxyfettsäureamid mit Retinol oder Retinylestern Retinsäure nach, ist jedoch leichter und unbedenklicher zu verwenden als Retinsäure.
Thornfeldt (US-Patentschrift Nr. 5,057,501) offenbart ein Verfahren zur Behandlung papulosquamöser und ekzemischer Krankheiten mit einer Zusammensetzung, die eine Sesquiterpenverbindung und ungefähr 0,025% bis ungefähr 35% einer Monocarboxylfettsäure, eines Esters oder Amids enthält. Die Zusammensetzungen können auch ein Retinoid enthalten: Thornfeldt lehrt, dass bestimmte Retinoide, nämlich Isotretinoin, Tretinoin, Etretin (alles Stereoforme von Retinsäure) und Etretinat (ein Ester von Trimethoxyphenylretinsäure) ihre Wirksamkeit gegen papulosquamöse Krankheiten unter Beweis gestellt haben. Die PCT-Anmeldung WO 93/25177 (Procter and Gamble) offenbart Zusammensetzungen zur topischen Anwendung auf der Haut, die eine spezifische Art eines acyclischen Carboxamidkühlmittels enthalten und Retinoide wie etwa Retinsäure und deren Derivate (z. B. cis und trans) einschließen können. Die PCT-Anmeldung WO 94/03156 (Rhone Poulenc) offenbart eine topische Zusammensetzung, die Linolsäure oder ein Derivat als aktiven Inhaltsstoff zur Behandlung und Prophylaxe von unreiner Haut (z. B. Haut, die von Pickeln, Pusteln oder Komedonen betroffen ist) beinhaltet; die Zusammensetzung kann auch 0,025–0,1 Gew.% Tretinoin enthalten. Die europäische Patentanmeldung Nr. 0 388 275 (Pierre Fabre Cosmetique) offenbart Zusammensetzungen zur Behandlung von Seborrhöe, die Alkylcarboxamid und ein Zinksalz, welches Zinkretinoat sein kann, beinhalten.
Klaus et al. (US-Patentschrift Nr. 5,216,148) offenbaren die Verwendung spezifischer komplexer Carboxamide zur Behandlung und Vorbeugung von Neoplasmen, Dermatosen und Hautalterung. Van Scott et al. (US-Patentschrift Nr. 4,380,549) und Yu et al. (US-Patentschrift Nr. 4,363,815) offenbaren die Behandlung von Akne, trockener, blättriger, schuppiger Haut mit einer Hydroxysäure oder dem Amid davon. EP 0 582 458 offenbart die Verwendung von N,N-(1,4C-Alkyl)-Lauramid. EP 0 559 304 offenbart die Verwendung eines Amids, das eine Kohlenwasserstoffkette von wenigstens 25 Kohlenstoffatomen enthält, als Hautglättungsstoff. Beauquey et al. (US-Patentschrift Nr. 5,308,551) offenbaren eine Hautwasch- und-pflegezusammensetzung, die neben anderen Inhaltsstoffen ein 1-4C-Alkanolamid einer 8-16C-Fettsäure enthält. Die britische Patentschrift Nr. 1,126,289 (Hoffman-La Roche) offenbart ein Vitaminstammpräparat, das Vitamin-A-Alkohol oder einen Vitamin-A-Ester, einen Emulgator und ein Lösemittel, ausgewählt aus einem Alkohol oder einem Dialkylamid einer Monocarboxylsäure (z. B. N,N-Diethylacetamid, N,N-Dimethylacetamid oder N,N-Dimethylformamid), enthält. Das Vitaminpräparat hat einen sehr hohen Vitamingehalt, das heißt, die minimale Konzentration ist 250.000 I. E. Vitamin A/ml. Weiterhin ist Melinamid bei den Amiden, die in der '289er Anmeldung offenbart sind, nicht enthalten oder erwähnt.
Eine früher eingereichte europäische Patentanmeldung EP 0 742 005 (Unilever; Prioritätsdatum B. Mai 1995), veröffentlicht am 13. November 1996 (nach dem Prioritätsdatum der vorliegenden Anmeldung), offenbart Kombinationen von Fettsäureamiden mit Retinol oder Retinylestern. EP '005 enthält jedoch keine Lehre über Amide von Hydroxyfettsäuren.0.
Der oben zitierte Stand der Technik offenbart keine Hautkonditionierungszusammensetzungen, die auf synergistischen Kombinationen von Hydroxyfettsäureamiden mit Retinol oder Retinylester basieren. Keines der oben zitierten Dokumente erwähnt den Bedarf an einer wirksamen Alternative zu Retinsäure.
KURZDARSTELLUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung schließt, teilweise, eine Hautkonditionierungszusammensetzung ein, die

(1) von 0,001 o bis 10 o eines Retinoids ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Retinol und Retinylester;
(2) von 0,0001 o bis 50 o eines Amids einer Hydroxyfettsäure; und
(3) einen kosmetisch verträglichen Trägerstoff beinhaltet.

Die Erfindung stellt auch ein kosmetisches Verfahren zur Hautkonditionierung bereit, das die topische Anwendung der vorliegenden Zusammensetzung auf die Haut umfasst. Weiterhin wird ein kosmetisches Verfahren bereitgestelat, das die Wirkung von Retinsäure auf der Haut nachahmt, welches die topische Anwendung der vorliegenden Zusammensetzung auf die Haut umfasst.
Der Begriff „Konditionierung", wie hierein verwendet, bedeutet Vorbeugung und Behandlung eines oder mehrerer der folgenden Hautzustände: trockene Haut, photobeschädigte Haut, Auftreten von Falten, Altersflecken, gealterte Haut, Akne, Psoriasis, atopische Dermatose. Die Zusammensetzungen sind auch zum Erreichen von Hautaufhellung und/oder Kontrolle von Sebumexkretion und/oder Erhöhung der Flexibilität des Stratum corneum und im All-gemeinen zur Erhöhung der Hautqualität geeignet. Die Zusammensetzung kann zur Verbesserung der Hautabschuppung und der zellulären Proliferation verwendet werden.
Das Vorhandensein eines Hydroxyfettsäureamids im erfindungsgemäßen Produkt verbessert in erheblicher Weise die Leistung von Retinol oder Retinylester, das heißt ein Hydroxyfettsäureamid erhöht wesentlich die Fähigkeit von Retinol oder Retinylester die zelluläre Proliferation zu beeinflussen. Ein Hydroxyfettsäureamid hat keine oder geringe Wirkung auf die Verbesserung der vorteilhaften Hauteigenschaften, wenn es allein verwendet wird; eine wesentliche Steigerung vorteilhafter Hauteigenschaften wird nur erreicht, wenn ein Hydroxyfettsäureamid mit Retinol oder einem Retinylester kombiniert wird.
Kurz gesagt basiert die vorliegende Erfindung, wenigstens teilweise, auf der Entdeckung einer syergistischen Wechselwirkung zwischen Retinol oder Retinylester und einem Hydroxyfettsäureamid.
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird, durch Einschluss einer wirksamen Menge von Hydroxyfettsäureamid in Retinol oder einen Retinylester enthaltende Zusammensetzungen, die Leistung der Zusammensetzungen wesentlich verbessert. Alternativ können geringere Mengen von Retinol oder Retinylester in der ein Hydroxyfettsäureamid enthaltenden Zusammensetzung beinhaltet sein, um der Leistung einer ähnlichen Formulierung ohne das Amid zu entsprechen.
BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGSFORM
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen enthalten als einen ersten essentiellen Inhaltsstoff eine Verbindung, die ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Retinol, Retinylestern und Mischungen davon.
Der Begriff „Retinol" schließt unter anderem die folgenden Isomere von Retinol ein: all-trans-Retinol, 13-cis-Retinol, 11-cis-Retinol, 9-cis-Retinol, 3,4-Didehydroretinol. Bevorzugte Isomere sind all-trans-Retinol, 13-cis-Retinol, 3,4-Didehydroretinol, 9-cis-Retinol. Besonders bevorzugt ist all-trans-Retinol aufgrund seiner weit verbreiteten Erhältlichkeit im Handel.
Retinylester ist ein Ester von Retinol. Der Begriff „Retinol" wurde oben definiert. Zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung geeignete Retinylester sind C₁-C₃₀-Ester von Retinol, vorzugsweise C₂-C₂₀- Ester und besonders bevorzugt C₂-, C₃- und C₁₆- Ester, da diese leichter erhältlich sind. Beispiele von Retinylestern beinhalten aber sind nicht beschränkt auf:
Retinylpalmitat, Retinylformat, Retinylacetat, Retinylpropionat, Retinylbutyrat, Retinylvalerat, Retinylisovalerat, Retinylhexanoat, Retinylheptanoat, Retinyloctanoat, Retinylnonanoat, Retinyldecanoat, Retinylundecanoat, Retinyllaurat, Retinyltridecanoat, Retinylmyristat, Retinylpentadecanoat, Retinylheptadecanoat, Retinylstearat, Retinylisostearat, Retinylnonadecanoat, Retinylarachidonat, Retinylbehenat, Retinyllinoleat, Retinyloleat, Retinyllactat, Retinylglycolat, Retinylhydroxycaprylat, Retinylhydroxylaurat, Retinyltartrat.
Der zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung bevorzugte Ester wird ausgewählt aus Retinylpalmitat, Retinylacetat und Retinylpropionat, da diese am einfachsten im Handel erhältlich und daher am billigsten sind. Retinyllinoleat ist ebenso bevorzugt aufgrund seines Wirkungsgrades.
Das Retinoid wird in der erfindungsgemäßen Zusammen setzung in einer Menge von 0,001% bis 10%, vorzugsweise in einer Menge von 0,01% bis 1%, besonders bevorzugt in einer Menge von 0,01% bis 0,5% eingesetzt.
Der zweite essentielle Inhaltsstoff der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen ist ein Amid einer Hydroxyfettsäure. Die Struktur eines Amids einer Hydroxyfettsäure ist wie folgt:
wobei R₁, R₂ und R₄ jeweils unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Wasserstoff und aliphatischen gesättigten oder ungesättigten, geraden oder verzweigten Kohlenwasserstoffketten, die hydroxyliert sein können, welche 1 bis 20 Kohlenstoffatome enthalten; R₃ ist -(CH₂)_n worin n eine ganze Zahl von 0 bis 18 ist.
Bevorzugterweise enthalten R₁, R₂ und R₄ jeweils unabhängig voneinander 2 bis 20 Kohlenstoffatome, insbesondere 2 bis 15 Kohlenstoffatome, besonders bevorzugt 3 bis 13 Kohlenstoffatome.
Bevorzugterweise ist das Hydroxysäureamid ein Amid von αoder β-Hydroxysäure, das heißt n ist 0 oder 1.
Die für die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen besonders bevorzugten Hydroxyfettsäureamide sind: Lactamidmonoethanolamid, C₁₃,-β-Hydroxysäureamid (2-Hydroxy-C_l3-amid), N-Hydroxyethyl-2-hydroxy-C_l6-amid, 12-Hydroxy-N-(2-hydroxyethyl)octadecanamid und Monoethanolamid aus Rizinusöl.
Das Amid ist in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen in einer Menge im Bereich von 0,0001% bis 50%, vorzugsweise von 0,01 bis 10%, besonders bevorzugt von 0,1 bis 5% beinhaltet.
KOSMETISCH VERTRÄGLICHER TRÄGERSTOFF
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung umfasst auch einen kosmetisch verträglichen Trägerstoff, der als Verdünnungsmittel, Dispergiermittel oder Träger für das Retinol und/oder den Retinylester und das Hydroxyfettsäureamid in der Zusammensetzung fungiert, um, wenn die Zusammensetzung auf die Haut aufgetragen wird, deren Verteilung zu erleichtern.
Trägerstoffe verschieden von oder zusätzlich zu Wasser können flüssige oder feste Weichmacher, Lösemittel, Feuchthaltemittel, Dickungsmittel und Puder einschließen. Ein besonders bevorzugter nichtwässriger Träger ist ein Polydimethylsiloxan und/oder ein Polydimethylphenylsiloxan. Erfindungsgemäße Silikone können solche mit Viskositäten im Bereich von 10 bis 10.000.000 mm²/s (Centistoke) bei 25°C sein. Besonders wünschenswert sind Mischungen von Silikonen mit hohen und niedrigen Viskositäten. Diese Silikone sind von General Electric Company unter den Warenzeichen Vicasil, SE und SF und von Dow Corning Company aus der 200 und 550 Serie erhältlich. Die Silikonmengen, die in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen verwendet werden können, bewegen sich im Bereich von 5 bis 95 Gew.%, vorzugsweise von 25 bis 90 Gew.% der Zusammensetzung.
Der kosmetisch verträgliche Trägerstoff wird für gewöhnlich 5 bis 99, 9 Gew.%, vorzugsweise 25 bis 80 Gew.% der Zusammensetzung bilden und kann, in Abwesenheit anderer kosmetischer Zusätze, die Ausgewogenheit der Zusammensetzung herstellen. Vorzugsweise ist der Trägerstoff wenigstens 50 Gew.%, insbesondere 80 Gew.% Wasser per Gewicht der Zusammensetzung. Vorzugsweise umfasst Wasser wenigstens 50 Gew.% der erfindungsgemäßen Zusammensetzung, besonders bevorzugt von 60 bis 80 Gew.% per Gewicht der Zusammensetzung.
OPTIONALE MATERIALIEN FÜR VORTEILHAFTE HAUTEIGENSCHAFTEN UND KOSMETISCHE ZUSÄTZE
Ein Öl oder ein ölhaltiges Material kann gemeinsam mit einem Emulgator vorhanden sein, um entweder eine Wasserin-Öl Emulsion oder eine Öl-in-Wasser Emulsion bereitzustellen, was großenteils vom durchschnittlichen hydrophilen-lipophilen Gleichgewicht (HLG) des eingesetzten Emulgators abhängt.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen schließen vorzugsweise Sonnenschutzmittel ein. Sonnenschutzmittel schließen solche Materialien ein, die gemeinhin zur Abschirmung gegen ultraviolettes Licht eingesetzt werden. Typische Verbindungen sind die Derivate von PABA, Cinnamat und Salicylat. Beispielsweise können Octylmethoxycinnamat und 2-Hydroxy-4-methoxybenzophenon (auch bekannt als Oxybenzon) verwendet werden. Octylmethoxycinnamat und 2-Hydroxy-4-methoxybenzophenon sind im Handel unter den Warenzeichen Parsol MCX beziehungsweise Benzophenon-3 erhältlich. Die genaue Menge an Sonnenschutzmittel, die in den Emulsionen eingesetzt wird, kann in Abhängigkeit vom gewünschten Schutzgrad vor der UV Strahlung der Sonne variieren.
Ein weiterer bevorzugter optionaler Inhaltsstoff wird ausgewählt aus essentiellen Fettsäuren (EFS), das heißt solchen Fettsäuren, die für die Bildung der Plasmamembran aller Zellen essentiell sind. Bei Keratinozyten macht EFS Mangel die Zellen hyperproliferativ. Zusatz von EFS gleicht dieses aus. EFS steigern auch die Lipidbiosynthese der Epidermis und stellen Lipide für die Schrankenausbildung der Epidermis bereit. Die essentiellen Fettsäuren werden vorzugsweise ausgewählt aus Linolensäure, γ-Linolensäure, Homo-γ-linolensäure, Columbinsäure, Eicosa-(n-6,9,13)-triensäure, Arachidonsäure, Timnodonsäure, Hexaensäure und Mischungen davon.
Noch ein weiterer bevorzugter optionaler Inhaltsstoff wird ausgewählt aus Azolen, z. B. Climbazol, Bifonazol, Clotrimazol, Ketoconazol, Miconazol, Econazol, Itraconazol, Fluconazol, Terconazol, Butoconazol, Sulconazol, Lionazol und Mischungen davon. Das Azol kann in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen in einer Menge von 0,001 bis 50 Gew.%, vorzugsweise von 0,001 bis 10 Gew.%, besonders bevorzugt von 0,1 bis 5 o beinhaltet sein.
Weichmacher sind oftmals in die erfindungsgemäßen kosmetischen Zusammensetzungen aufgenommen. Der Gehalt an solchen Weichmachern kann sich im Bereich von 0,5 bis 50 Gew.%, vorzugsweise von 5 bis 30 Gew.% der gesamten Zusammensetzung bewegen. Weichmacher können in solch allgemeine chemische Kategorien eingeordnet werden wie Ester, Fettsäuren und Alkohole, Polyole und Hydrocarbone.
Ester können Mono- oder Diester sein. Geeignete Beispiele von Fettdiestern schließen Dibutyladipat, Diethylsebacat, Diisopropyldimerat und Dioctylsuccinat ein. Geeignete verzweigtkettige Fettester schließen 2-Ethylhexylmyristat, Isopropylstearat und Isostearylpalmitat ein. Geeignete tribasische Säureester schließen Triisopropyltrilinoleat und Trilaurylcitrat ein. Geeignete geradkettige Fettester schließen Laurylpalmitat, Myristyllactat, Oleyleurcat und Stearyloleat ein. Bevorzugte Ester schließen Cococaprylat/caprat (ein Gemisch von Cococaprylat und Cococaprat), Propylenglykolmyristyletheracetat, Diisopropyladipat und Cetyloctonoat ein.
Geeignete Fettalkohole und -säuren schließen solche Verbindungen ein, die 10 bis 20 Kohlenstoffatome aufweisen. Besonders bevorzugt sind solche Verbindungen wie etwa Cetyl-, Myristyl-, Palmitin- und Stearylalkohole und -säuren.
Unter den Polyolen, die als Weichmacher dienen können, sind lineare und verzweigtkettige Alkylpolyhydroxylverbindungen. Beispielsweise sind Propylenglykol, Sorbitol und Glyzerin bevorzugt. Ebenso können polymere Polyole wie etwa Polypropylenglykol und Polyethylenglykol nützlich sein. Butylen- und Propylenglykol sind ebenfalls besonders als Penetrationsförderer bevorzugt.
Beispielhafte Kohlenwasserstoffe, die als Weichmacher dienen können sind solche, die Kohlenwasserstoffketten von 12 bis 30 Kohlenstoffatomen aufweisen. Spezifische Beispiele schließen Mineralöl, Vaseline, Squalen und Isoparaffine ein.
Eine weitere Kategorie funktioneller Inhaltsstoffe innerhalb der kosmetischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung sind Verdickungsmittel. Ein Verdickungsmittel ist für gewöhnlich in Mengen von 0, 1 bis 20 Gew.%, vorzugsweise von 0,5 bis 10 Gew.% der Zusammensetzung vorhanden. Beispielhafte Verdickungsmittel sind quer vernetzte Polyacrylatmaterialien, die unter dem Warenzeichen Carbopol von der B. F. Goodrich Company erhältlich sind. Gums wie etwa Xanthan, Carrageenan, Gelatine, Karaya, Pektin und Johannisbrotgum können eingesetzt werden. Unter bestimmten Umständen kann die Verdickungsfunktion von einem Material erfüllt werden, das ebenso als Silikon oder Weichmacher dient. Beispielsweise weisen Silikon gums mit einer Viskosität von über 10 Centistoke und Ester, wie etwa Glycerolstearat, eine doppelte Funktionsfähigkeit auf.
Pulver können in die erfindungsgemäße kosmetische Zusammensetzung aufgenommen werden. Diese Pulver schließen Kreide, Talg, Kaolin, Stärke, Smektitton, chemisch modifiziertes Magnesiumaluminiumsilikat, organisch modifizierten Montmorillonitton, hydratisiertes Aluminiumsilikat, pyrogene Kieselerde, Aluminiumstärkeoctenylsuccinat und Mischungen davon ein.
Weitere zugesetzte kleinere Verbindungen können ebenso in die kosmetischen Zusammensetzungen aufgenommen werden. Diese Inhaltsstoffe können Färbemittel, Trübungsmittel und Parfums einschließen. Die Mengen dieser weiteren zugesetzten kleineren Verbindungen können sich im Bereich von 0,001 bis zu 20 Gew.% der Zusammensetzung bewegen.
VERWENDUNG DER ZUSAMMENSETZUNG
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung ist in erster Linie als ein Produkt zur topischen Auftragung auf die menschliche Haut gedacht, insbesondere als ein Mittel zur Konditionierung und Glättung der Haut und zur Vorbeugung oder Reduzierung des Auftretens von faltiger oder gealterter Haut.
Zur Verwendung wird eine geringe Menge der Zusammensetzung, beispielsweise von 1 bis 100 ml, auf exponierte Gebiete der Haut von einem geeigneten Behälter oder Applikator aus aufgetragen und, falls erforderlich, wird sie dann, unter Verwendung der Hand oder der Finger oder eines geeigneten Hilfsmittels, über die Haut verteilt und/oder in die Haut eingerieben.
PRODUKTFORM UND VERPACKUNG
Die topische Hautbehandlungszusammensetzung der Erfindung kann geeigneterweise als Lotion, Creme oder Gel formuliert werden. Die Zusammensetzung kann in einem geeigneten Behälter verpackt werden, um deren Viskosität und der beabsichtigten Verwendung des Konsumenten zu entsprechen. Beispielsweise kann eine Lotion oder Creme in einer Flasche oder einem Roll-Ball-Applikator oder einer durch Treibgas betriebenen Aerosolvorrichtung oder einem mit einer Pumpe zur Fingerbedienung ausgerüsteten Behälter verpackt werden. Wenn die Zusammensetzung eine Creme ist, kann sie in einfacher Weise in einer nichtdeformierbaren Flasche oder einem Druckbehälter wie etwa einer Tube oder einem bedeckelten Töpfchen, aufbewahrt werden. Die Zusammensetzung kann auch in Kapseln, wie denen in US-Patentschrift 5,063,057 beschriebenen, beinhaltet sein.
Die Erfindung stellt demgemäß auch einen geschlossenen Behälter bereit, der die kosmetisch verträgliche Zusammensetzung wie hierin definiert enthält.
Die folgenden spezifischen Beispiele veranschaulichen die Erfindung weiter. Retinoide wurden von Sigma erworben.
MATERIALIEN UND METHODEN
Zellkultur:
Von neonataler Vorhaut durch Trypsinbehandlung isolierte menschliche Keratinozyten wurden in Dulbecco Modification Eagle (DME) Hams F12 (1 : 1) Medium/10% fötalem Kalbsserum in Gegenwart von bestrahlten 3T3 Mäusefibroblasten zur Etablierung sich teilender Keratinozytenkolonien angezogen. Die Zellen wurden unter obigen Bedingungen bis zu ihrer zweiten Passage angezogen und zur späteren Verwendung eingefroren. Gefrorene Keratinozyten der zweiten Passage wurden aufgetaut und auf das obige Medium ausplattiert und 5 Tage wachsen gelassen, bevor sie auf ein serumfreies, auf MCDB-153 basierendes Medium, Keratinocyte Growth Medium (KGM) von Clonetics Corporation, San Diego, CA, mit 0,15 mM Ca, oder auf Keratinocyte serum-free Medium (KSFM) von GIBCO mit 0,09 mM Ca, überführt wurden. Am 7. Tag, als die Zellen zu 80–90% konfluent waren, wurden sie trypsiniert und auf serumfreies Medium für die vielfältigen Experimente ausplattiert.
TRANSGLUTAMINASE-ANALYSE Transalutaminase-Analyse und Keratinozytendifferenzierung
Während des Vorgangs der terminalen Differenzierung in der Epidermis wird eine 15 nm dicke Proteinschicht, bekannt als cornified envelope (CE), auf der inneren Öberfläche der Zellperipherie gebildet. Die CE ist aus zahlreichen unterschiedlichen Proteinen zusammengesetzt, die durch die Bildung von N^ε-(γ-glutamyl)lysinisodipeptid Bindungen, welche durch die Wirkung von wenigstens zwei verschiedenen in der Epidermis exprimierten Transglutaminasen katalysiert werden, miteinander quervernetzt wurden. Transglutaminase I (TGase I) wird im Überschuss in den differenzierten Schichten der Epidermis, insbesondere der Granularschicht exprimiert, aber ist in der undifferenzierten Basalepidermis nicht vorhanden. Somit ist TGase I ein nützlicher Marker der epidermalen Keratinozytendifferenzierung, wobei hohe TGase I Gehalte einen differenzierteren Zustand anzeigen. Eine auf ELISA basierende TGase-I-Analyse unter Verwendung eines TGase-I-Antikörpers wurde verwendet, um den Differenzierungszustand der in den folgenden Beispielen kultivierten Keratinozyten zu beurteilen.
Für Beispiel 1 wurde das folgende Verfahren verwendet:
Keratinozyten (wie oben beschrieben kultiviert) wurden in 96-Mulden-Mikrotiterplatten in einer Dichte von 3000 Zellen pro Mulde in 200 μl Medium ausplattiert. Nach 4 Tagen Inkubation wurde das Medium gegen Medium ausgetauscht, das Testverbindungen enthielt (sechs Replikate pro Test). Die Zellen wurden weitere 72 Stunden kultiviert, nach denen das Medium abgesaugt und die Platten bei –70°C gelagert wurden. Die Platten wurden aus dem Gefrierschrank genommen und die Zellen mit PBS gewaschen. 100 μl steriles Wasser wurden zugegeben und die Zellen wurden durch Gefrieren bei –70°C und anschließendem Auftauen aufgeschlossen. Die Zellen wurden eine Stunde bei Raumtemperatur (R/T) mit PBS/3% BSA (Waschpuffer, Rinderserumalbumin) inkubiert, dann mit einem frischen Aliquot Waschpuffer gespült. Die Zellen wurden mit 50 μl primärer Antikörper monoklonaler antimenschlicher Transglutaminase Mausantikörper (IgG), erworben von Biomedical Industries, 1 : 2000 verdünnt in Waschpuffer für eine Stunde bei 37°C inkubiert, anschließend zweimal mit Waschpuffer gespült. Die Zellen wurden dann mit 50 μl eines sekundären Antikörpers (Fab-Fragment, Peroxidasekonjugiertes Anti-Maus-IgG, erworben von Amersham), 1 : 4000 verdünnt in Waschpuffer, für eine Stunde bei 37°C inkubiert und dann zweimal mit Waschpuffer gespült. Die Zellen wurden mit Substratlösung (4 mg o-Phenylendiamin und 3,3 μl 30% H₂O₂ in 10 ml 0,1 M Citratpuffer pH 5,0) fünf Minuten lang, R/T, in der Dunkelheit (unter Aluminiumfolie) inkubiert. Die Reaktion wurde durch Zugabe von 50 μl 4N H₂SO₄, gestoppt. Die Absorption der Proben wurde bei 492 nm in einem Plattenlesegerät bestimmt. Unter den 6 Replikaten wurden vier mit beiden Antikörpern behandelt, zwei wurden nur mit dem sekundären Antikörper behandelt (d. h. um den Hintergrund der Bindung des enzym konjugierten Antikörpers zu bestimmen). Die TGase-I-Gehalte wurden durch Abzug des Hintergrunds von den Messdaten jeder Behandlung und durch Bestimmung des Mittelwerts +/- S. a. für die beiden Antikörpern ausgesetzten Replikate ermittelt.
Für Beispiel 2 wurde das folgende Verfahren verwendet:
Keratinozyten (wie oben beschrieben kultiviert) wurden in 96-Mulden-Mikrotiterplatten in einer Dichte von 3000 Zellen pro Mulde in 200 μl Zellkulturmedium ausplattiert. Nach 4 Tagen Inkubation wurde das Medium gegen Medium ausgetauscht, das Testverbindungen enthielt (sechs Replikate pro Test). Die Zellen wurden weitere 72 Stunden kultiviert, nach denen das Medium abgesaugt und die Platten bei –70°C gelagert wurden. Nach Entnahme der Platten aus dem Gefrierschrank wurden die Zellen weiterhin durch Gefrieren und Auftauen aufgeschlossen und dann 3 × mit PBS gewaschen. Die Zellen wurden eine Stunde bei Raumtemperatur (R/T) mit TBS/5% BSA Puffer inkubiert. Die Zellen wurden dann mit 100 μl eines monoklonalen antimenschlichen Transglutaminase-(IgG)-Mausantikörpers (primärer Antikörper), erworben von Biomedical Technologies Inc., 1 : 2000 verdünnt in TBS/1% BSA Puffer, für zwei Stunden bei 37°C inkubiert, und anschließend sechsmal mit Waschpuffer (TBS/1% BSA/0,05% Tween-20) gespült. Die Zellen wurden anschließend mit 100 μl Fab-Fragment, Peroxidase-konjugierter Anti-Maus-IgG-Antikörper (sekundärer Antikörper) von Amersham, 1 : 4000 verdünnt in Waschpuffer, für zwei Stunden bei 37°C inkubiert und dann dreimal mit Waschpuffer und dreimal mit PBS gespült. Die Zellen wurden mit Substratlösung (4 mg o-Phenylendiamin und 3,3 μl 30% H₂O₂ in 10 ml 0,1 M Citratpuffer, pH 5,0) fünf Minuten lang bei R/T und in der Dunkelheit (unter Aluminiumfolie) inkubiert. Die Reaktion wurde durch Zugabe von 50 μl 4N H₂SO₄, gestoppt.
Die Absorption der Proben wurde bei 492 nm in einem Plattenlesegerät bestimmt. Unter den 6 Replikaten wurden vier mit beiden Antikörpern behandelt, zwei wurden nur mit dem sekundären Antikörper behandelt (d. h., um den Hintergrund der Bindung des enzymkonjugierten Antikörpers zu bestimmen). Die TGase-I-Gehalte wurden durch Abzug des Hintergrunds von den Messdaten jeder Behandlung und durch Bestimmung des Mittelwerts +/- S. a. für die beiden Antikörpern ausgesetzten Replikate ermittelt.
DNA-ANALYSE
Der Gehalt an TGase I, der nach der Behandlung der Zellen festgestellt wurde, konnte durch die Zellzahl beeinflusst werden, d. h. je größer die Anzahl der Zellen desto größer der festgestellte Gehalt an TGase I. Der Gehalt an TGase I wurde auf den DNA Gehalt der Zellen in derselben Mulde normalisiert, wodurch Abweichungen aufgrund von Unterschieden in der Zellzahl ausgeschlossen wurden. DNA Quantifizierung ist ein besonders nützlicher Indikator der Zellzahl, einschließlich der Keratinozytenzellzahl, da jede Zelle im Grunde ein identisches Genom und daher eine identische Menge an DNA aufweist. Der gesamte Gehalt einer Mulde von Zellen ist daher direkt proportional zu der Zellzahl in dieser Mulde. Quantifizierung von DNA wurde zur Normalisierung der TGase Werte auf die Zellzahl verwendet.
Keratinozyten wurden in 96-Mulden-Mikrotiterplatten in einer Dichte von 3000 Zellen pro Mulde in 200 μl Medium ausplattiert. Nach 4 Tagen Inkubation wurde das Medium gegen Medium ausgetauscht, das Testverbindungen enthielt (sechs Replikate pro Test). Die Zellen wurden weitere 72 Stunden kultiviert, nach denen das Medium abgesaugt und die Platten wenigstens 1,5 Stunden lang bei –70°C gelagert wurden. Die Platten wurden aus dem Gefrierschrank genommen und 30 Minuten lang aufgetaut. 100 μl Hoechst Dye (1 μg/ml Endkonzentration)/Mulde wurden hinzugefügt und das ganze wurde 15 Minuten lang inkubiert, abgedeckt und dann in einem Fluorimeter gemessen (Ex. 360 nm und Em. 460 nm). Die Farbstofflösung wurde entfernt und die Mulden wurden in Vorbereitung auf die TGase-Analyse mit PBS gespült.
BEISPIEL 1
Retinsäure ist effektiver als Retinol zur Veränderung des Differenzierungszustandes von Keratinozyten
Die Wirkung auf den Gehalt an Transglutaminase, der auf den DNA-Inhalt der Zellen normalisiert wurde, nach Zugabe von Retinsäure (RS) und Retinol (ROH) wurde untersucht und die Ergebnisse sind in Tabelle 1 wiedergegeben.
Alle getesteten Konzentrationen von Retinsäure, d. h. 2,5 × 10^–7 M, 2,5 × 10^–8 M und 2,5 × 10^–9 M verminderten die Keratinozytendifferenzierung gegenüber der Ethanolkontrolle und zwar in einem signifikant größeren Ausmaß als jede einzelne der entsprechenden 2,5 × 10^–7 M, 2,5 × 10⁸ M und 2,5 × 10^–9 M Retinolbehandlungen. Die Abnahme des Transglutaminasegehalts war dosisabhängig für sowohl Retinsäure als auch Retinol. Dies ist damit vereinbar, dass Retinsäure eine stärker hemmende Wirkung auf die epitheliale Differenzierung aufweist als Retinol.
BEISPIEL 2
Amide von Hvdroxyfettsäuren und Retinol wirken synergistisch bei der Hemmung der Keratinozvtendifferenzierung
Die Wirkung auf den Gehalt an TGase 2, der auf den DNA-Inhalt der Zellen normalisiert wurde, wurde auf die Reaktion hinsichtlich einer 72-stündigen Behandlung mit den Testverbindungen hin untersucht. Das Amid wurde von Quest International erworben. C₁₃-β-Hydroxysäureamid hat die folgende Struktur:
2,5 × 10^–8 M Retinsäure zeigte sich zur Repression der TGase-I-Gehalte der Keratinozyten sehr wirksam (bis zu 6% des Gehaltes der Kontrollen). 2,5 × 10^–8 M Retinol war weniger wirksam als Retinsäure (79%), und 10^–9 M C₁₃-β-Hydroxysäureamid zeigte keine Wirkung auf den TGase-I-Gehalt der Keratinozyten, wenn es einzeln verwendet wurde. 2,5 × 10^–6 M Retinol + 10^–9 M C₁₃-β-Hydroxysäureamid unterdrückten jedoch den TGase-I-Gehalt der Keratinozyten auf 62% des Gehalts der Kontrollen. C_l3-β-Hydroxysäureamid und Retinol wirken somit synergistisch zur Reprimierung der Keratinozytendifferenzierung in analoger Weise zur Wirkung von Retinsäure.
Die Wirkung auf die auf den DNA-Gehalt der Zellen normalisierten TGase-I-Gehalte, wurden auf die Reaktion hinsichtlich einer 72 stündigen Behandlung mit den Testverbindungen hin untersucht. „Lactamid MEA" ist Lactamidmonoethanolamid. Es wurde von Croda Chemicals erworben. Lactamid MEA hat die folgende Struktur:
2,5 × 10^–7 M Retinsäure zeigte sich zur Repression der TGase-I-Gehalte der Keratinozyten wirksam (bis zu 73% des Gehaltes der Kontrollen). 2,5 × 10^–7 M Retinol und 10⁶ M Lactamid DEA waren weniger wirksam zur Hemmung des TGase-I-Gehalts der Keratinozyten, wenn sie einzeln verwendet wurden. 2,5 × 10^–7 M Retinol + 10^–6 M Lactamid DEA unterdrückten jedoch den TGase-I-Gehalt der Keratinozyten auf 72% des Gehalts der Kontrollen. Lactamid MEA und Retinol wirken somit synergistisch zur Reprimierung der Keratinozytendifferenzierung in analoger Weise zur Wirkung von Retinsäure.
Die Beispiele 1 und 2 zeigen, dass Retinsäure die Keratinozytendifferenzierung in dosisabhängiger Weise verminderte. In den Beispielen 1 und 2 wurde Retinsäure als Positivkontrolle und Referenzverbindung verwendet, mit der die anderen zu analysierenden Verbindungen verglichen wurden. Retinol war zur Verminderung der Keratinozytendifferenzierung unwirksam.
Unerwartete Ergebnisse der Beispiele 1 und 2 waren jedoch, dass die Wirkung von Retinol auf kultivierte Keratinozyten durch Kombination von Retinol oder Retinylester mit einem Amid einer Hydroxyfettsäure, einer Verbindung, die allein wenig oder gar keinen Vorteil zeigt, auf Ausmaße gesteigert werden konnte, die sich der von Retinsäure nähern. Die oben dokumentierten Ergebnisse zeigen, dass ein Amid einer Hydroxyfettsäure in synergistischer Weise mit Retinol oder Retinylester auf die Verminderung der Keratinozytendifferenzierung wirkt, wobei die Wirkung von Retinsäure nachgeahmt wird.
Die Beispiele 3–8 veranschaulichen erfindungsgemäße topische Zusammensetzungen. Die Zusammensetzungen können in herkömmlicher Weise verarbeitet werden. Sie sind zur kosmetischen Verwendung geeignet. Insbesondere sind die Zusammensetzungen zur Anwendung auf faltige, raue, trockene, schuppige, gealterte und/oder UV-beschädigte Haut geeignet, um deren Erscheinungsbild und Gefühl zu verbessern sowie für gesunde Haut, um deren Verfall vorzubeugen oder zu verzögern.
BEISPIEL 3
Dieses Beispiel veranschaulicht eine Wasser-in-Öl Emulsion mit hoher interner Phase, welche die erfindungsgemäße Zusammensetzung beinhaltet.
BEISPIEL 4
Dieses Beispiel veranschaulicht eine Öl-in-Wasser Creme, welche die erfindungsgemäße Zusammensetzung beinhaltet.
BEISPIEL 5
Dieses Beispiel veranschaulicht eine alkoholische Lotion, welche die erfindungsgemäße Zusammensetzung beinhaltet.
BEISPIEL 6
Dieses Beispiel veranschaulicht eine weitere alkoholische Lotion, welche die erfindungsgemäße Zusammensetzung beinhaltet.
BEISPIEL 7
Dieses Beispiel veranschaulicht eine Sonnenpflegecreme, welche die erfindungsgemäße Zusammensetzung beinhaltet.
BEISPIEL 8
Dieses Beispiel veranschaulicht eine nichtwässrige Hautpflegezusammensetzung, welche die erfindungsgemäße Kombination beinhaltet.

Claims

Hautkonditionierungszusammensetzung, die (a) von 0,001% bis 10% einer Verbindung ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Retinol, Retinylester und Mischungen davon; (b) von 0,0001% bis 50% eines Amids einer Hydroxyfettsäure; und (c) einen kosmetisch verträglichen Trägerstoff umfasst.
Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei der Retinylester ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Retinylpalmitat, Retinylacetat, Retinylpropionat, Retinyllinoleat und Mischungen davon.
Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei Inhaltsstoff (a) Retinol ist.
Kosmetisches Verfahren zur Hautkonditionierung, das die topische Anwendung einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1–3 umfasst.
Kosmetisches Verfahren zur Nachahmung der Wirkung von Retinsäure auf die Haut, das die Anwendung einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1–3 auf die Haut umfasst.