DE60005485T2

DE60005485T2 - Indolderivate und ihre verwendung als mcp-1 rezeptor antagonisten

Info

Publication number: DE60005485T2
Application number: DE60005485T
Authority: DE
Inventors: Alan Wellington Macclesfield FAULL; Jason Macclesfield KETTLE
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 1999-02-05
Filing date: 2000-01-31
Publication date: 2004-07-01
Anticipated expiration: 2020-02-01
Also published as: DE60005485D1; AU2304300A; WO2000046197A1; ATE250577T1; GB9902453D0; JP2002536360A; EP1150953B1; US6613760B1; EP1150953A1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft chemische Verbindungen, deren Herstellung sowie pharmazeutische Zusammensetzungen, die sie enthalten, sowie deren Verwendung in der Therapie, insbesondere von entzündlichen Erkrankungen.
MCP-1 gehört zur Chemokin-Familie pro-inflammatorischer Cytokine, die die Chemotaxis und Aktivierung von Leukozyten steuern. MCP-1 ist ein C-C-Chemokin, bei dem es sich um eines der wirksamsten und selektivsten bekannten chemoattraktiven und aktivierenden Mittel für T-Zellen und Monozyten handelt. MCP-1 wurde mit der Pathophysiologie einer großen Anzahl entzündlicher Krankheiten einschließlich rheumatoider Arthritis, glomerulärer Nephritis, Lungenfibrose, Restenose (Internationale Patentanmeldung WO 94/09128), Alveolitis (Jones et al., 1992, J. Immunol., 149, 2147) und Asthma in Zusammenhang gebracht. Andere Krankheitsgebiete, von denen man annimmt, daß MCP-1 eine Rolle in deren Pathologie spielt, sind Atherosklerose (z.B. Koch et al., 1992, J. Clin. Invest., 90, 772–779), Schuppenflechte (Deleuran et al., 1996, J. Dermatological Science, 13, 228–236), Überempfindlichkeitsreaktionen der Haut vom Spättyp, entzündliche Darmerkrankung (Grimm et al., 1996, J. Leukocyte Biol., 59, 804–812), multiple Sklerose und Hirntrauma (Berman et al., 1996, J. Immunol., 156, 3017–3023). MCP-1-Inhibitoren können auch zur Behandlung von Schlaganfall, Reperfusionsverletzungen, Ischämie, Herzinfarkt und Transplantatabstoßung geeignet sein.
MCP-1 wirkt über den MCP-1-Rezeptor (der auch als CCR2-Rezeptor bekannt ist). Auch MCP-2 und MCP-3 können zumindest teilweise über den MCP-1-Rezeptor wirken. In dieser Beschreibung schließt daher, wenn auf „MCP-1-Inhibierung bzw. -antagonismus" oder „durch MCP-1 vermittelte Wirkungen" Bezug genommen wird, dies die Inhibierung bzw. Antagonisierung von durch MCP-2 und/oder MCP-3 vermittelte Wirkungen ein, wenn MCP-2 und/oder MCP-3 über den MCP-1-Rezeptor wirken.
In den ebenfalls anhängigen internationalen Patentan meldungen Nr. PCT/GB98/02 340 und PCT/GB98/02 341 werden Gruppen von Verbindungen beschrieben und beansprucht, denen die Indol-Ringstruktur zugrundeliegt und bei denen es sich um Inhibitoren von MCP-1 handelt und die daher therapeutische Anwendungen haben.
Die Verwendung bestimmter Indolderivate als NMDA-Antagonisten ist in USP 5 051 442, WO 9 312 780 und EP-483 881 beschrieben. Andere Indole und deren Verwendung als Inhibitoren der Leukotrien-Biosynthese sind beispielsweise in EP-A-275 667 beschrieben.
Die Anmelderin hat gefunden, daß eine bestimmte Substitution am Indolring zu vorteilhaften Ergebnissen bei der therapeutischen Verwendung als MCP-1-Inhibitoren führt.
Gemäß der vorliegenden Erfindung werden Verbindungen der Formel (I) bereitgestellt
wobei x für CH₂ oder SO₂ steht; R¹ für einen gegebenenfalls substituierten Aryl- oder Heteroarylring steht; R² für Carboxy, Cyano, -C(O) CH₂OH, -CONHR⁸, -SO₂NHR⁹, Tetrazol-5-yl, SO₃H oder eine Gruppe der Formel (VI)
steht, wobei R⁸ aus Wasserstoff, Alkyl, Aryl, Cyano, Hydroxy, -SO₂R¹², wobei R¹² für Alkyl, Aryl, Heteroaryl oder Halogenalkyl steht, ausgewählt ist, oder R⁸ für eine Gruppe (CHR¹³)_r-COOH steht, wobei r für eine ganze Zahl von 1–3 steht und die R¹³-Gruppen jeweils unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Wasserstoff und Alkyl; R⁹ für Wasserstoff, Alkyl, gegebenenfalls substituiertes Aryl, wie gegebenenfalls substituiertes Phenyl oder gegebenenfalls substituiertes Heteroaryl, wie 5- oder 6gliedrige Heteroarylgruppen, oder eine Gruppe COR¹⁴, wobei R¹⁴ für Alkyl, Aryl, Heteroaryl oder Halogenalkyl steht, steht; R¹⁰ und R¹¹ unabhängig voneinander aus Wasserstoff und Alkyl, insbesondere C_1-4-Alkyl, ausgewählt sind;
R³ für Wasserstoff, eine funktionelle Gruppe, gegebenenfalls substituiertes Alkyl, gegebenenfalls substituiertes Alkenyl, gegebenenfalls substituiertes Alkinyl, gegebenenfalls substituiertes Aryl, gegebenenfalls substituiertes Heterocyclyl, gegebenenfalls substituiertes Alkoxy, gegebenenfalls substituiertes Aralkyl, gegebenenfalls substituiertes Aralkyloxy, gegebenenfalls substituiertes Cycloalkyl steht;
R⁴ für eine Gruppe C(O) NR¹⁵R¹⁶ oder eine Gruppe (CH₂)_tR¹⁷ steht;
wobei R¹⁵ und R¹⁶ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Wasserstoff, gegebenenfalls substituiertem Alkyl, gegebenenfalls substituiertem Alkenyl, gegebenenfalls substituiertem Alkinyl, gegebenenfalls substituiertem Cycloalkyl oder gegebenenfalls substituiertem Heterocyclyl, mit der Maßgabe, daß R¹⁵ und R¹⁶ nicht beide für Wasserstoff stehen, oder R¹⁵ und R¹⁶ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen gegebenenfalls substituierten heterocyclischen Ring bilden, der gegebenenfalls weitere Heteroatome enthält;
R¹⁷ aus NR¹⁸R¹⁹, OR²⁰ oder S(O)_sR²¹ ausgewählt ist;
wobei R¹⁸ und R¹⁹ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Wasserstoff, gegebenenfalls substituiertem Hydrocarbyl und gegebenenfalls substituiertem Heterocyclyl, oder R¹⁸ und R¹⁹ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen gegebenenfalls substituierten heterocyclischen Ring bilden, der gegebenenfalls weitere Heteroatome enthält;
R²⁰ für substituiertes Alkyl, gegebenenfalls substituiertes Alkenyl, gegebenenfalls substituiertes Alkinyl, gegebenenfalls substituiertes Cycloalkyl oder gegebenenfalls substituiertes Heterocyclyl steht;
R²¹ für gegebenenfalls substituiertes Hydrocarbyl oder gegebenenfalls substituiertes Heterocyclyl steht;
s für 0, 1 oder 2 steht und t für eine ganze Zahl von 1–4 steht;
R⁵, R⁶ und R⁷ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Wasserstoff, einer funktionellen Gruppe oder gegebenenfalls substituierten Hydrocarbylgruppen oder gegebenenfalls substituierten Heterocyclylgruppen.
Die Erfindung stellt weiterhin die pharmazeutisch unbedenklichen Salze, in vivo hydrolysierbaren Ester und Amide der Verbindungen der Formel (I) bereit.
Die Verbindungen der Formel (I) sind Inhibitoren des Monocyte Chemoattractant Protein-1. Darüber hinaus scheinen sie die RANTES- (Regulated upon Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted-)induzierte Chemotaxis zu hemmen. Bei RANTES handelt es sich um ein weiteres Chemokin aus der gleichen Familie wi.e MCP-1 mit einem ähnlichen biologischen Profil, das jedoch über den CCR1-Rezeptor wirkt. Als Folge davon lassen sich diese Verbindungen zur Behandlung von durch diese Mittel vermittelten Krankheiten, insbesondere entzündlichen Krankheiten, verwenden. Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist daher die Bereitstellung einer Verbindung der Formel (I) zur Behandlung entzündlicher Erkrankungen.
In der vorliegenden Beschreibung schließt der Ausdruck „Alkyl", entweder für sich alleine oder als Suffix verwendet, geradkettige und verzweigte Strukturen ein. Diese Gruppen können bis zu 10, vorzugsweise bis zu 6 und besonders bevorzugt bis zu 4 Kohlenstoffatome enthalten. In ähnlicher Weise beziehen sich die Ausdrücke „Alkenyl" und „Alkinyl" auf ungesättigte geradkettige oder verzweigte Strukturen, die beispielsweise 2 bis 10, vorzugsweise 2 bis 6 Kohlenstoffatome enthalten. Cyclische Einheiten wie Cycloalkyl, Cycloalkenyl und Cycloalkinyl sind in ihrer Beschaffenheit ähnlich, enthalten jedoch wenigstens 3 Kohlenstoffatome. Ausdrücke wie „Alkoxy" umfassen Alkylgruppen, wie es sich im Stand der Technik versteht.
Der Ausdruck „Halogen" schließt Fluor, Chlor, Brom und Iod ein. Verweise auf Arylgruppen schließen aromatische carbocyclische Gruppen wie Phenyl und Naphthyl ein. Der Ausdruck „Heterocyclyl" oder „heterocyclisch" schließt aromatische oder nicht aromatische Ringe mit beispielsweise 4 bis 20, geeigneterweise 5 bis 8, Ringatomen ein, von denen wenigstens eines ein Heteroatom wie Sauerstoff, Schwefel oder Stickstoff ist. Stickstoffheteroatome können beispielsweise je nach verfügbaren Bindungen durch Wasserstoff oder Hydrocarbyl substituiert sein. Schwefelatome können als S, S(O) oder S(O)₂ vorliegen.
Zu diesen Gruppen gehören beispielsweise Furyl, Thienyl, Pyrrolyl, Pyrrolidinyl, Imidazolyl, Triazolyl, Thiazolyl, Tetrazolyl, Oxazolyl, Isoxazolyl, Pyrazolyl, Pyridyl, Pyrimidinyl, Pyrazinyl, Pyridazinyl, Triazinyl, Chinolinyl, Isochinolinyl, Chinoxalinyl, Benzothiazolyl, Benzoxazolyl, Benzothienyl oder Benzofuryl.
„Heteroaryl" bezieht sich auf die oben beschriebenen Gruppen mit aromatischem Charakter. Der Ausdruck „Aralkyl" bezieht sich auf arylsubstituierte Alkylgruppen wie Benzyl.
Zu den anderen in der Beschreibung verwendeten Bezeichnungen gehört „Hydrocarbyl", was sich auf eine beliebige Struktur mit Kohlenstoff- und Wasserstoffatomen bezieht. Hierbei kann es sich beispielsweise um Alkyl, Alkenyl, Alkinyl, Aryl, Heterocyclyl, Alkoxy, Aralkyl, Cycloalkyl, Cycloalkenyl oder Cycloalkinyl handeln.
Der Ausdruck „funktionelle Gruppe" bezieht sich auf reaktive Substituenten. Sie können Elektronenspender oder Elektronenakzeptoren enthalten. Sie sind aus Halogen, Cyano, Nitro, C(O)_nR²², OR²², S(O)_mR²², NR²³R²⁴, C(O)NR²³R²⁴, OC(O) NR²³R²⁴, -NR²³C(O)_nR²⁴ , -NR²²CONR²³R²⁴, -N=CR²³R²⁴ , S(O)_mNR²³R²⁴ oder -NR²³S(O)_mR²⁴ ausgewählt, wobei R²², R²³ und R²⁴ unabhängig voneinander aus Wasserstoff oder gegebenenfalls substituiertem Hydrocarbyl ausgewählt sind, oder R²³ und R²⁴ zusammen einen gegebenenfalls substituierten, wie oben definierten heterocyclischen Ring bilden, der gegebenenfalls weitere Heteroatome wie Schwefel, S(O), S(O)₂, Sauerstoff und Stickstoff enthält, n für eine ganze Zahl 1 oder 2 steht und m für eine ganze Zahl 1 oder 2 steht.
Geeignete gegebenenfalls vorhandene Substituenten für die Hydrocarbylgruppen R²², R²³ und R²⁴ schließen Halogen, Perhalogenoalkyl wie z.B. Trifluormethyl, Mercapto, Hydroxy, Carboxy, Alkoxy, Heteroaryl, Heteroaryloxy, Alkenyloxy, Alkinyloxy, Alkoxyalkoxy, Aryloxy (wobei die Arylgruppe gegebenenfalls durch Halogen, Nitro oder Hydroxy substituiert sein kann), Cyano, Nitro, Amino, Mono- oder Dialkylamino, Oximino oder S(O)_mR²⁵, wobei m' für 1 oder 2 steht und R²⁵ für Alkyl steht.
Bilden R²³ und R²⁴ eine heterocyclische Gruppe, so kann diese gegebenenfalls durch Hydrocarbyl wie Alkyl sowie durch die oben für Hydrocarbylgruppen aufgezählten Substituenten substituiert sein.
Zu den für diese Hydrocarbylgruppen bzw. heterocyclischen Gruppen R⁵, R⁶ und R⁷ geeigneten Substituenten gehören die oben für R²², R²³ und R²⁴ aufgeführten Substituenten.
R¹ steht geeigneterweise für einen gegebenenfalls substituierten Phenyl-, Pyridyl-, Naphthyl-, Furyloder Thienylring und insbesondere für einen substituierten Phenyl- oder Pyridylring.
Zu den gegebenenfalls vorhandenen Substituenten für R¹ in Formel (I) gehören Alkyl, Alkenyl, Alkinyl, Halogen, Halogenalkyl, einschließlich Perhalogenalkyle wie z.B. Trifluormethyl, Mercapto, Alkoxy, Halogenalkoxy, Alkenyloxy, Alkinyloxy, Hydroxyalkoxy, Alkoxyalkoxy, Alkanoyl, Alkanoyloxy, Cyano, Nitro, Amino, Mono- oder Dialkylamino, Oximino, Sulfonamido, Carbamoyl, Monooder Dialkylcarbamoyl oder S(O)_mR²⁶, wobei m wie oben definiert ist und R²⁶ für Hydrocarbyl steht.
Besondere Beispiele für Substituenten R⁵, R⁶ und R⁷ schließen Wasserstoff, Hydroxy, Halogen, gegebenenfalls substituiertes Alkyl wie z.B. Aralkyl, Carboxyalkyl oder das Amidderivat davon; Alkoxy; Aryloxy; Aralkyloxy; oder eine gegebenenfalls durch Alkyl, Aryl oder Aralkyl substituierte Aminogruppe ein. Eine spezifische funktionelle Gruppe, die für R⁵, R⁶ und/oder R⁷ geeignet ist, ist eine Gruppe der Unterformel (IV).
Besondere Beispiele für die Gruppen R⁵, R⁶ und R⁷ sind Wasserstoff, Hydroxy, Halogen oder Alkoxy. R⁶ und R⁷ stehen insbesondere für Wasserstoff. R⁵ kann für Wasserstoff stehen, ist jedoch weiterhin geeigneterweise ein kleiner Substituent wie Hydroxy, Halogen oder Methoxy.
Zu den besonderen Substituenten für R¹ gehören Trifluormethyl, C₁_₄-Alkyl, Halogen, Trifluormethoxy, C_1- ₄-Alkoxy, C_1-4-Alkanoyl, C_1-4-Alkanoyloxy, Nitro, Carbamoyl, C_1-4-Alkoxycarbonyl, C_1-4-Alkylsulfanyl, C_1-4-Alkylsulfinyl, C₁_₄-Alkylsulfonyl, Sulfonamido, Carbamoyl-C_1-4-alkyl, N-(C_1-4-Alkyl) Carbamoyl-C₁-C₄-alkyl, N- (C_1-4-Alkyl)₂-carbamoyl-C_1-4-alkyl, Hydroxy-C₁-C₄-alkyl oder C_1-4-Alkoxy-C_1-4-alkyl.
Darüber hinaus bzw. alternativ dazu können zwei Substituenten zusammen einen divalenten Rest der Formel -O(CH₂)_1-4-O- bilden, der an benachbarte Kohlenstoffatome am Ring R¹ gebunden ist.
Bevorzugte Substituenten für R¹ sind ein oder mehrere unpolare Substituenten wie Halogen.
R¹ ist insbesondere durch eine oder mehrere Halogengruppen, insbesondere Chlor, substituiert. Ein besonderes Beispiel für eine R¹-Gruppe ist 3,4-Dichlorphenyl, 3-Fluor-4-chlorphenyl, 3-Chlor-4-fluorphenyl oder 2,3-Dichlorpyrid-5-yl.
Zu den R²-Gruppen gehören beispielsweise Carboxy; Cyano; Tetrazol-5-yl; S0₃H; -CONHR⁸, wobei R⁸ aus Cyano, Hydroxy, -SO₂R¹², wobei R¹² für Alkyl wie z. B. C₁_₄-Alkyl steht, Aryl wie z.B. Phenyl, Heteroaryl oder Trifluormethyl ausgewählt ist, oder R⁸ für eine Gruppe -(CHR¹⁰)_r-COOH steht, wobei r für eine ganze Zahl 1–3 und die Gruppen R¹⁰ jeweils unabhängig voneinander aus Wasserstoff oder Alkyl wie z.B. C_1-4-Alkyl ausgewählt sind; oder R² steht für eine Gruppe -SO₂NHR⁹, wobei R⁹ für gegebenenfalls substituiertes Phenyl oder eine gegebenenfalls substituierte 5- oder 6gliedrige Heteroarylgruppe oder eine Gruppe COR¹⁴ steht, wobei R¹⁴ für Alkyl wie z.B. C₁_₄-Alkyl, Aryl wie z.B. Phenyl, Heteroaryl oder Trifluormethyl steht, oder R² steht für eine Gruppe der Formel (VI)
wobei R¹⁰ und R¹¹ unabhängig voneinander aus Wasserstoff oder Alkyl, insbesondere C₁_₄-Alkyl, ausgewählt sind.
R² steht vorzugsweise für Carboxy oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder einen pharmazeutisch unbedenklichen Ester davon.
Als Gruppen R³ eignen sich beispielsweise Wasserstoff, Fluor, Chlor, Brom, Iod, Methyl, Cyano, Trifluormethyl, Hydroxymethyl, Alkoxyalkyl wie z.B. C₁_₄-Alkoxymethyl, Methoxy, Benzyloxy, Carboxyalkoxy wie z.B. Carboxymethoxy, Methylsulfanyl, Methylsulfinyl, Methylsulfonyl oder Carboxy-C_3-6-cycloalkyl, –(CHR²⁷)_r-NR²⁸R²⁹ (wobei r für 0-2 steht und die Reste R² ⁷ unabhängig voneinander für Wasserstoff oder Alkyl, insbesondere C_1-4-Alkyl, stehen, R²⁸ und R²⁹ unabhängig voneinander aus H und C_1-4-Alkyl ausgewählt sind oder R²⁸ und R²⁹ zusammen mit dem Stickstoff, an den sie gebunden sind, einen 5- oder 6gliedrigen Ring bilden, der gegebenenfalls ein weiteres Heteroatom ausgewählt aus O, N, S, S(O) oder SO₂ enthält. Geeigneterweise bilden R²⁸ und R²⁹ zusammen einen heterocyclischen Ring wie Morpholino oder Piperazinyl.
Zu den anderen Gruppen R³ dieser Art gehören gegebenenfalls substituierte Arylgruppen wie z.B. gegebenenfalls substituierte Phenyl- oder Naphthylgruppen. Geeignete Substituenten für Phenylgruppen R³ sind beispielsweise eine oder mehrere Gruppen ausgewählt aus Chlor, Fluor, Methyl, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Amino, Formyl, Phenyl, Methoxy, Phenoxy oder Phenyl.
R³ kann eine Reihe der oben aufgeführten Substituenten umfassen, insbesondere Wasserstoff oder eine kleine Substituentengruppe wie z.B. C_1-4-Alkyl, insbesondere Methyl, oder Trifluormethyl, und ist vorzugsweise Wasserstoff.
Geeignete Substituenten für die in der Definition von R⁴ vorkommenden Hydrocarbylgruppen und heterocyclischen Gruppen R¹⁵, R¹⁶, R¹⁸, R¹⁹, R²⁰ und R²¹ schließen die oben in bezug auf R²², R²³ und R²⁴ genannten ein.
Beispiele für R⁴ sind Gruppen C(O)NR¹⁵R¹⁶, in denen einer der Reste R¹⁵ und R¹⁶ für Wasserstoff oder Alkyl wie z.B. Methyl und der andere Rest für gegebenenfalls substituiertes Heterocyclyl oder gegebenenfalls substituiertes Alkyl wie C₁ _-2-Alkyl, insbesondere Methyl, steht, oder R¹⁵ und R¹⁶ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen gegebenenfalls substituierten heterocyclischen Ring bilden, der gegebenenfalls weitere Heteroatome enthält. In diesem Fall sind geeignete, gegebenenfalls an den heterocyclischen Gruppen R¹⁵ und R¹⁶ vorhandene Substituenten Alkylgruppen wie z.B. Methyl, oder Oxogruppen. Als gegebenenfalls an Alkylgruppen R¹⁵ und R¹⁶ vorhandene Substituenten eignen sich eine oder mehrere Gruppen ausgewählt aus Amino; Mono- oder Dialkylamino; Carboxy; Heterocyclyl, gegebenenfalls substituiert durch beispielsweise eine Alkylgruppe wie z.B. Methyl oder eine Oxogruppe; oder eine Gruppe NHSO₂R³⁰, wobei R³⁰ für Alkyl wie z. B. Methyl steht.
Eine bevorzugte Gruppe für R⁴ ist eine Gruppe C(O)NR¹⁵R¹⁶, wobei einer der Reste R¹⁵ oder R¹⁶ für Wasserstoff und der andere für Heterocyclyl oder Alkyl, substituiert durch eine oder mehrere Gruppen ausgewählt aus Amino, Mono- oder Dialkylamino, Carboxy oder gegebenfalls substituiertes Heterocyclyl, steht, oder R¹⁵ und R¹⁶ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen gegebenenfalls substituierten heterocyclischen Ring bilden, der gegebenenfalls weitere Heteroatome enthält.
Steht einer der Reste R¹⁵ oder R¹⁶ für Wasserstoff, so sind für den anderen Rest geeignete Heterocyclyle beispielsweise Imidazol, Imidazolinon oder Tetrahydrothiophen-1,1-dioxid.
Vorzugsweise steht einer der Reste R¹⁵ oder R¹⁶ für Wasserstoff und der andere für gegebenenfalls substituiertes Alkyl, beispielsweise C_1-2-Alkyl. Als Substituenten eignen sich beispielsweise eine oder mehrere Gruppen ausgewählt aus Amino, Mono- oder Dialkylamino, eine Gruppe NHSO₂R³⁰, wobei R³⁰ für Methyl, Carboxy oder gegebenenfalls substituiertes Heterocyclyl steht, wie z.B. gegebenenfalls durch Alkyl wie Methyl mono- oder disubstituiertes Isoxazol.
Bilden R¹⁵ und R¹⁶ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen gegebenenfalls substituierten heterocyclischen Ring, der gegebenenfalls weitere Heteroatome enthält, so handelt es sich bei diesem Ring beispielsweise um einen Morpholinring. Alternativ dazu steht R⁴ für eine wie oben angeführte Gruppe der Unterformel (IV).
Alternativ dazu ist R⁴ vorzugsweise eine Gruppe (CH₂)_tR^l7, wobei t für 1 steht und R¹⁷ für eine Gruppe NR¹⁸R¹⁹ steht. Besondere Beispiele für R¹⁸ und R¹⁹ schließen Wasserstoff und gegebenenfalls substituiertes Alkyl ein, oder R^l8 und R¹⁹ bilden zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen gegebenenfalls substituierten heterocyclischen Ring, der gegebenenfalls weitere Heteroatome enthält, wie z.B. Pyrazol oder Tetrahydropyranyl. R¹⁸ und R¹⁹ bilden insbesondere zusammen einen Morpholinring.
X steht für CH₂ oder SO₂ und ist vorzugsweise CH₂.
Als pharmazeutisch unbedenkliche Salze der Verbindungen der Formel (I) eignen sich beispielsweise Säureadditionssalze wie Methansulfonat, Fumarat, Hydrochlorid, Hydrobromid, Citrat, Maleat und mit Phosphorund Schwefelsäure gebildete Salze. Gemäß einem anderen Aspekt sind Basensalze wie z.B. Alkalisalze, beispielsweise Natriumsalze, Erdalkalisalze, beispielsweise Calcium- oder Magnesiumsalze, oder organische Aminsalze, beispielsweise Triethylaminsalze, Morpholinsalze, N- Methylpiperidinsalze, N-Ethylpiperidinsalze, Prokainsalze, Dibenzylaminsalze, N,N-Dibenzylethylaminsalze, oder Aminosäuresalze, beispielsweise Lysinsalze, als Salze geeignet. Je nach der Anzahl der geladenen Funktionen und der Wertigkeit der Kationen bzw. Anionen kann mehr als ein Kation bzw. Anion vorhanden sein. Bevorzugte pharmazeutisch unbedenkliche Salze sind die Natriumsalze.
Bei einem in vivo hydrolysierbaren Ester einer Verbindung der Formel (I) mit einer Carboxy- oder Hydroxylgruppe handelt es sich beispielsweise um einen pharmazeutisch unbedenklichen Ester, der im Körper des Menschen bzw. eines Tieres unter Bildung der Säure- oder Alkohol-Stammverbindung hydrolysiert wird.
Als pharmazeutisch unbedenkliche Ester für Carboxy eignen sich beispielsweise Alkylester wie C_1-6-Alkylester, beispielsweise Ethylester, C₁ _-6-Alkoxymethylester, beispielsweise Methoxymethylester, C_1-6-Alkanoyloxymethylester, beispielsweise Pivaloyloxymethylester, Phthalidylester, C_3-8-Cycloalkoxycarbonyloxy-C₁ _-6-alkylester, beispielsweise 1-Cyclohexylcarbonyloxyethylester; 1,3-Dioxolen-2-onylmethylester, beispielsweise 5-Methyl-l,3-dioxolen-2-onylmethylester; und C_1-6-Alkoxycarbonyloxyethylester, beispielsweise 1-Methoxycarbonyloxyethylester, die an einer beliebigen Carboxygruppe in den erfindungsgemäßen Verbindungen gebildet werden können.
Geeignete pharmazeutisch unbedenkliche Ester von Verbindungen der Formel (I) sind in vivo hydrolysierbare Ester einer Verbindung der Formel (I), die eine Hydroxylgruppe enthalten, einschließlich anorganischer Ester wie Phosphatester und α-Acyloxyalkylether und verwandte Verbindungen, die als Folge der in-vivo-Hydrolyse des Esterabbaus die Hydroxystammgruppe liefern. α-Acyloxyalkylether sind beispielsweise Acetoxymethoxy und 2,2-Dimethylpropionyloxymethoxy. Eine Auswahl von Gruppen für Hydroxyl, die in vivo hydrolysierbare Ester bilden, schließen Alkanoyl, Benzoyl, Phenylacetyl und substituiertes Benzoyl sowie Phenylacetyl, Alkoxycarbonyl (wodurch man Alkylcarbonatester erhält), Dialkylcarbamoyl und N-(Dialkylaminoethyl)-Nalkylcarbamoyl (wodurch man Carbamate erhält), Dialkylaminoacetyl und Carboxyacetyl ein.
Ester, die nicht in vivo hydrolysierbar sind, eignen sich als Zwischenprodukte bei der Herstellung von Verbindungen der Formel (I) und bilden daher einen weiteren Aspekt der Erfindung.
Zu den Verbindungen der Formel (I) gehören daher beispielsweise die folgenden: Tabelle 1

Gemäß noch einem weiteren Aspekt der vorliegenden Erfindung werden pharmazeutische Zusammensetzungen bereitgestellt, die eine wie oben definierte Verbindung der Formel (I) enthalten.
Verbindungen der Formel (I) werden geeigneterweise durch Verfahren wie die in den internationalen Patentanmeldungen PCT/GB98/02 340 und PCT/GB98/02 341 beschriebenen dargestellt.
Insbesondere können Verbindungen der Formel (I) dargestellt werden, indem man eine Verbindung der Formel (VII)
in der X, R¹ , R³ , R⁵ , R⁶ und R⁷ wie unter Formel (I) definiert sind und R^2' für eine Gruppe R², wie unter Formel (I) definiert, oder eine geschützte Form davon steht , R⁴⁰ für eine Gruppe C(O) oder eine Gruppe (CH₂)_t steht, wobei t wie unter Formel (I) definiert ist, und Z für eine Abgangsgruppe steht,
entweder (a), wenn R⁴⁰ für C(O) steht, mit einer Verbindung der Formel (VIII) HNR¹⁵R¹⁶ (VIII) in der R¹⁵ und R¹⁶ wie unter Formel (I) definiert sind, umsetzt;
oder (b), wenn R⁴⁰ für eine Gruppe (CH₂)_t steht, mit einer Verbindung der Formel (IX) HR¹⁷ (IX) in der R¹⁷ wie unter Formel (I) definiert ist; umsetzt; und anschließend, falls erforderlich oder gewünscht, eine Gruppe R²' zu einer Gruppe R² entschützt oder eine Gruppe R² in eine andere solche Gruppe umwandelt.
Zu den geeigneten Abgangsgruppen Z gehört Halogen wie z.B. Chlor. Die Umsetzung wird geeigneterweise in einem organischen Lösungsmittel wie Dichlormethan oder Tetrahydrofuran in Gegenwart einer Base wie Triethylamin durchgeführt. Bei der Reaktion kommen mäßige Temperaturen von beispielsweise 0° bis 50°C und zweckmäßigerweise Raumtemperatur zur Anwendung.
Die Verbindungen der Formel (VII) weisen geeigneterweise eine Estergruppe wie R²' auf. Solche Verbindungen können dann durch Esterhydrolyse, beispielsweise mit Natriumhydroxid in einer Mischung von Methanol und Tetrahydrofuran, in die entsprechende Säure umgewandelt werden.
Verbindungen der Formel (VII), in denen R⁴⁰ für C(O) steht, werden geeigneterweise in situ durch Umsetzung der entsprechenden Carbonsäure mit einem Halogenierungsmittel wie Oxalylchlorid dargestellt. Die Säure wird geeigneterweise aus einer Verbindung der Formel (X)
in welcher X, R¹, R²', R³, R⁵, R⁶ und R⁷ wie oben definiert sind, durch eine Abfolge von Reaktionen, in denen die Hydroxylgruppe zunächst beispielsweise durch Umsetzung mit 2,3-Dichlor-5,6-dicyanobenzochinon in ein Carbonsäurealdehyd umgewandelt wird, das dann unter Anwendung herkömmlicher Methoden zur entsprechenden Säure oxidiert wird, erhalten.
Verbindungen der Formel (X) stellt man geeigneterweise dar, indem man eine Verbindung der Formel (XI)
in welcher X, R²', R³, R⁵, R⁶ und R⁷ wie oben definiert sind und R⁴¹ für eine Schutzgruppe steht, mit einer Verbindung der Formel (XII) R¹-X-Z¹ (XII) wobei R¹ und X wie für Formel (I) definiert sind und Z¹ für eine Abgangsgruppe steht, umsetzt und anschließend die Schutzgruppe R⁴¹ entfernt.
Als Abgangsgruppen Z¹ eignen sich beispielsweise Halogenide wie Chlorid, Bromid oder Iodid sowie Mesylat und Tosylat. Die Umsetzung wird geeigneterweise in einem organischen Lösungsmittel wie Dimethylformamid (DMF), Tetrahydrofuran (THF) oder DCM in Gegenwart einer Base wie Natriumhydrid, Natriumhydroxid oder Kaliumcarbonat durchgeführt. Gegebenenfalls führt man die Reaktion in Gegenwart eines Phasentransfer katalysators durch. Die Wahl der Base und des Lösungsmittels richtet sich in gewissem Grade danach, daß bestimmte Lösungsmittel nur mit einigen Basen kompatibel sind, wie im Stand der Technik bekannt. So wird beispielsweise Natriumhydrid vorzugsweise mit Dimethylformamid oder Tetrahydrofuran verwendet, und Natriumhydroxid wird vorzugsweise mit Dichlormethan und einem Phasentransferkatalysator verwendet.
Die Umsetzung kann bei mäßigen Temperaturen, beispielsweise von 0 bis 50°C, durchgeführt werden, und wird zweckmäßigerweise ungefähr bei Raumtemperatur durchgeführt.
Vorzugsweise steht R²' in der Verbindung der Formel IX für eine Estergruppe, die anschließend durch herkömmliche Methoden später im Verfahren in eine Säure oder einen anderen Ester oder ein Salz umgewandelt werden kann.
Als Schutzgruppen R⁴¹ eignen sich beispielsweise Acetyl, Benzyl oder Tetrahydropyranyl. Die angewandten Reaktionsbedingungen sind unterschiedlich und hängen von der Beschaffenheit der Schutzgruppe R⁴⁰ ab und sollten dem Fachmann bekannt sein. Acetylgruppen lassen sich durch Umsetzung mit starken Basen wie Natriummethanolat abspalten, während Benzylgruppen durch Hydrierung, beispielsweise in Gegenwart eines Katalysators wie einem Palladiumkatalysator entfernt werden können. Tetrahydropyranyl-Schutzgruppen lassen sich mit p-Toluolsulfonsäure abspalten, wie im folgenden erläutert.
Verbindungen der Formel (X) lassen sich darstellen, indem man eine Verbindung der Formel (XIII)
in welcher R⁵, R⁶, R⁷ und R⁴¹ wie oben definiert sind und R⁴² und R⁴³ für eine Kombination von Gruppen stehen, die sich unter Bildung eines entsprechend substituierten Pyrrolrings cyclisieren lassen. R⁴² kann beispielsweise für eine Gruppe der Formel -CH=C(R⁴⁴)N₃ stehen, wobei R⁴⁴ für eine wie oben definierte Gruppe R² oder eine geschützte Form davon steht, und R⁴³ kann für Wasserstoff stehen. Die Cyclisierung unter Bildung einer Verbindung der Formel (XII) läßt sich dann durch Erhitzen bewerkstelligen, beispielsweise unter Rückfluß in einem organischen Lösungsmittel, insbesondere einem Lösungsmittel mit hohem Siedepunkt wie Xylol oder Toluol.
Alternativ dazu kann R⁴³ für Nitro und R⁴² für eine Gruppe der Formel -CH₂C(O)R²' stehen, wobei R²' wie oben für Formel (VII) definiert ist. Diese Verbindungen cyclisieren in Gegenwart eines Katalysators wie Palladium-auf-Aktivkohle in Gegenwart von Wasserstoff. Die Umsetzung läßt sich bei mäßigen Temperaturen, beispielsweise von 0 bis 80°C, zweckmäßigerweise ungefähr bei Raumtemperatur, durchführen.
Zu den Verbindungen der Formel (XIII) zählen somit beispielsweise Verbindungen der Formel (XIV) und (XV)
Verbindungen der Formel (XIII), in denen R3 für Wasserstoff steht, lassen sich beispielsweise darstellen, indem man eine Verbindung der Formel (XVI)
mit einer Verbindung der Formel (XVII) N₃CH₂R²' (XVII) in welcher R⁵, R⁶, R⁷, R⁴¹ und R²' wie oben definiert sind, umsetzt. Die Reaktion kann in einem organischen Lösungsmittel wie Ethanol bei niedrigen Temperaturen von –20 bis 0°C, geeigneterweise bei etwa 0°C, durchgeführt werden. Die Umsetzung wird geeigneterweise in Gegenwart einer Base wie eines Alkoholats, insbesondere eines Ethanolats, beispielsweise Kaliumethanolat, durchgeführt.
Falls erforderlich oder gewünscht kann R³ anschließend im Reaktionsschema unter Anwendung herkömmlicher Methoden von Wasserstoff in eine andere Gruppe R³ umgewandelt werden.
Verbindungen der Formel (XVII) werden geeigneterweise dargestellt, indem man eine Verbindung der Formel (XVIII) R⁴⁷CH₂R²' (XVIII) in welcher R²' wie oben definiert ist und R⁴⁷ für eine Abgangsgruppe wie Halogenid, insbesondere Bromid, steht, mit einem Azidsalz wie einem Alkaliazidsalz, insbesondere Natriumazid, umsetzt.
Verbindungen der Formel (XV) lassen sich darstellen, indem man eine Verbindung der Formel (XIX)
in welcher R⁵, R⁶, R⁷, R³, R⁴⁰ und R²' wie oben definiert sind, mit einer Verbindung der Formel (XX)
in welcher R²' wie oben definiert ist und R⁴⁸ für eine Abgangsgruppe wie Hydroxy steht, umsetzt. Beispiele für Verbindungen der Formel (XX) sind Oxalate wie Oxal-säurediethylester. Diese Umsetzung erfolgt geeigneterweise in Gegenwart einer Base wie Natriumhydrid in einem organischen Lösungsmittel wie THF. Es kommen gemäßigte Temperaturen von 0° bis 40°C und zweckmäßigerweise Raumtemperatur zur Anwendung.
Verbindungen der Formel (VII), in denen R⁴⁰ für (CH₂)_t steht, lassen sich darstellen, indem man eine Verbindung der Formel (XXI)
in welcher t , R¹, R²', R³, R⁵ , R⁶ und R⁷ wie oben definiert sind, halogeniert. Die Verbindung (X) oben ist ein besonderes Beispiel einer Verbindung der Formel (XXI), und andere lassen sich nach Verfahren analog den für Formel (X) beschriebenen darstellen. Bei den Verbindungen der Formel (XI), (XVI), (XVII), (XVIII), (XIX) und (XX) handelt es sich entweder um bekannte Verbindungen, oder sie können durch herkömmliche Verfahren aus bekannten Verbindungen hergestellt werden.
Gemäß einem weiteren Aspekt der Erfindung wird eine wie hier definierte Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder ein in vivo hydrolysierbarer Ester davon zur Verwendung in einem Verfahren zur therapeutischen Behandlung des Körpers eines Menschen oder Tieres bereitgestellt. Die Verbindungen kommen insbesondere in Verfahren zur Behandlung entzündlicher Erkrankungen zur Anwendung.
Gemäß einem weiteren Aspekt der Erfindung wird ein Verfahren zur Antagonisierung einer durch MCP-1 vermittelten Wirkung in einem Warmblüter, wie dem Menschen, der einer solchen Behandlung bedarf, bereitgestellt, bei dem man dem Tier eine wirksame Menge einer Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes oder eines in vivo hydrolysierbaren Esters davon verabreicht.
Die Erfindung stellt weiterhin eine wie hier definierte Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder einen in vivo hydrolysierbaren Ester davon zur Verwendung als Medikament bereit.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können in einer für eine orale Verabreichung (zum Beispiel als Tabletten, Lutschtabletten, harte oder weiche Kapseln, wäßrige oder ölige Suspensionen, Emulsionen, dispergierbare Pulver oder Granulate, Sirupe oder Elixiere), für eine topische Verabreichung (beispielsweise als Crems, Salben, Gele, oder als wäßrige oder ölige Lösungen oder Suspensionen), für eine Verabreichung durch Inhalation (beispielsweise als feinteiliges Pulver oder als flüssiges Aerosol), zur Verabreichung durch Einblasen (beispielsweise als feinteiliges Pulver) oder für eine parenterale Verabreichung (beispielsweise als sterile wäßrige oder ölige Lösung für intravenöse, subkutane, intramuskuläre oder intramuskuläre Verabreichung oder als Zäpfchen für rektale Verabreichung) geeigneten Form vorliegen.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen lassen sich durch herkömmliche Verfahren unter Verwendung von herkömmlichen pharmazeutischen Hilfsstoffen, die vom Stand der Technik gut bekannt sind, erhalten. So können für eine orale Verabreichung bestimmte Zusammensetzungen beispielsweise ein oder mehrere Farbstoffe, Süßstoffe, Geschmacksstoffe und/oder Konservierungsstoffe enthalten.
Zu den für eine Tablettenformulierung geeigneten pharmazeutisch verträglichen Hilfsstoffen gehören beispielsweise inerte Verdünnungsmittel wie z.B. Lactose, Natriumcarbonat, Kalziumphosphat oder Kalziumcarbonat, Granulierungs- und Sprengmittel, wie z.B. Maisstärke oder Algensäure; Bindemittel, wie z.B. Stärke; Gleitmittel wie z.B. Magnesiumstearat, Sterinsäure oder Talk; Konservierungsmittel wie z.B. p-Hydroxybenzoesäureethylester oder -propylester, und Antioxidationsmittel, wie z.B. Ascorbinsäure. Tablettenformulierungen können unbeschichtet oder beschichtet sein, entweder um ihren Zerfall und die anschließende Resorption des Wirkstoffs im Magen-Darm-Trakt zu modifizieren, oder um ihre Stabilität und/oder ihr Aussehen zu verbessern, wobei in beiden Fällen herkömmliche Beschichtungsmittel und vom Stand der Technik gut bekannte Verfahren angewendet werden.
Zusammensetzungen zur oralen Verabreichung können in der Form von Hartgelatinekapseln vorliegen, wobei der Wirkstoff mit einem inerten festen Verdünnungsmittel, beispielsweise Kalziumcarbonat, Kalziumphosphat oder Kaolin, gemischt wird, oder als Weichgelatinekapseln, wobei der Wirkstoff mit Wasser oder einem Öl wie Erdnußöl, flüssigem Paraffin oder Olivenöl gemischt wird.
Wäßrige Suspensionen enthalten den Wirkstoff im allgemeinen in fein pulverisierter Form zusammen mit einem oder mehreren Suspensionsmitteln, wie z.B. Natriumcarboxymethylcellulose, Methylcellulose, Hydroxypropylmethylcellulose, Natriumalginat, Polyvinylpyrrolidon, Tragantgummi und Gummiarabicum; Dispersions- oder Netzmitteln, wie z.B. Lecithin oder Kondensaten von einem Alkylenoxid mit Fettsäuren (beispielsweise Polyoxyethylenstearat) oder Kondensaten von Ethylenoxid mit langkettigen aliphatischen Alkoholen, beispielsweise Heptadecaethylenoxycetanol, oder Kondensaten von Ethylenoxid mit von Fettsäuren und einem Hexitol abgeleiteten unvollständigen Estern wie z.B. Polyoxyethylensorbit-Monooleat, oder Kondensaten von Ethylenoxid mit langkettigen aliphatischen Alkoholen, beispielsweise Heptadecaethylenoxycetanol, oder Kondensaten von Ethylenoxid mit von Fettsäuren und einem Hexitol abgeleiteten unvollständigen Estern, wie z.B. Polyoxyethylensorbit-Monooleat, oder Kondensaten von Ethylenoxid mit von Fettsäuren und Hexitolanhydriden abgeleiteten unvollständigen Estern, beispielsweise Polyethylensorbitan-Monooleat. Die wäßrigen Suspensionen können weiterhin ein oder mehrere Konservierungsmittel (wie z.B. p-Hydroxybenzoesäureethylester oder -propylester), Antioxidationsmittel (wie z.B. Ascorbinsäure), Farbstoffe, Geschmacksstoffe und/oder Süßstoffe (wie z.B. Saccharose, Saccharin oder Aspartam) enthalten.
Ölige Suspensionen lassen sich formulieren, indem man den Wirkstoff in einem Pflanzenöl (wie z.B. Erdnußöl, Olivenöl, Sesamöl oder Kokosnußöl) oder in einem Mineralöl (wie z.B. flüssigem Paraffin) suspendiert. Die öligen Suspensionen können weiterhin Verdickungs mittel wie Bienenwachs, hartes Paraffin oder Cetylalkohol enthalten. Man kann Süßstoffe wie z.B. die oben genannten und Geschmacksstoffe zusetzen, wodurch man schmackhafte orale Zubereitungen erhält. Diese Zusammensetzungen können durch Zusatz eines Antioxidationsmittels wie z.B. Ascorbinsäure konserviert werden.
Dispergierbare Pulver und Granulate, die für die Zubereitung von wäßrigen Suspensionen durch Zusatz von Wasser geeignet sind, enthalten den Wirkstoff im allgemeinen zusammen mit einem Dispersions- bzw. Netzmittel, Suspensionsmittel und einem oder mehreren Konservierungsstoffen. Zu den geeigneten Dispersionsbzw. Netzmitteln und Suspensionsmitteln gehören beispielsweise die bereits oben erwähnten. Zusätzliche Hilfsstoffe wie z.B. Süßmittel, Geschmacksstoffe und Farbstoffe können ebenfalls enthalten sein.
Die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zubereitungen können auch in Form von Öl-in-Wasser-Emulsionen vorliegen. Bei der Ölphase kann es sich um ein Pflanzenöl wie z.B. Olivenöl oder Erdnußöl oder ein Mineralöl wie z.B. flüssiges Paraffin oder eine Mischung davon handeln. Geeignete Emulgatoren sind beispielsweise natürliche Gummis wie z.B. Gummi arabicum oder Tragantgummi, natürliche Phosphatide wie z.B. Sojabohnen, Lecithin, von Fettsäuren und Hexitolanhydriden abgeleitete Ester oder unvollständige Ester (beispielsweise Sorbitan-Monooleat) und Kondensate dieser unvollständigen Ester mit Ethylenoxid, beispielsweise Polyoxyethylensorbitan-Monooleat. Die Emulsionen können darüber hinaus Süßmittel, Geschmacksstoffe und Konservierungsmittel enthalten.
Sirupe und Elixiere lassen sich mit Süßmitteln wie Glycerin, Propylenglycol, Sorbit, Aspartam oder Saccharose darstellen, und sie können weiterhin reizlindernde Stoffe, Konservierungsmittel, Geschmacksstoffe und/oder Farbstoffe enthalten.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können weiterhin in Form einer sterilen, injizierbaren wäßrigen oder öligen Suspension vorliegen, die man nach bekannten Verfahren unter Verwendung von einem oder mehreren geeigneten der oben erwähnten Dispersions-, Netz- und Suspensionsmittel formuliert. Bei der sterilen injizierbaren Zubereitung kann es sich auch um eine sterile injizierbare Lösung oder Suspension in einem nichttoxischen, parenteral verträglichen Verdünnungs- oder Lösungsmittel, beispielsweise eine Lösung in 1,3-Butandiol, handeln.
Zäpfchenformulierungen lassen sich darstellen, indem man den Wirkstoff mit einem geeigneten, nichtreizenden Hilfsmittel, das bei Raumtemperatur fest, jedoch flüssig bei der Rektaltemperatur ist und somit im Rektum schmilzt und den Wirkstoff freisetzt, mischt. Geeignete Hilfsstoffe sind beispielsweise Kakaobutter und Polyethylenglycole.
Topische Formulierungen wie z.B. Crems, Salben, Gele und wäßrige oder ölige Lösungen oder Suspensionen lassen sich allgemein dadurch erhalten, daß man einen Wirkstoff mit einem herkömmlichen topisch verträglichen Vehikel bzw. Verdünnungsmittel unter Verwendung von dem Fachmann wohlbekannten herkömmlichen Verfahren formuliert.
Zusammensetzungen zur Verabreichung durch Einblasen können in Form von feinteiligen Pulvern mit Partikeln von einem durchschnittlichen Durchmesser von beispielsweise 30 μ oder deutlich weniger vorliegen, wobei das Pulver selbst entweder nur den Wirkstoff enthält oder den mit einem oder mehreren physiologisch verträglichen Trägerstoffen wie z.B. Lactose verdünnten Wirkstoff. Das Pulver zum Einblasen wird dann vorteilhaft in eine Kapsel abgefüllt, die beispielsweise 1 bis 50 mg Wirkstoff enthält und für den Gebrauch mit einem Turbo-Inhalationsgerät, wie es beispielsweise zum Einblasen des wohlbekannten Mittels Natriumcromoglycat verwendet wird, bestimmt ist.
Zusammensetzungen zur Verabreichung durch Inhalation können in der Form von herkömmlichen, unter Druck stehenden Aerosolen vorliegen, die so konstruiert sind, daß der Wirkstoff als ein Aerosol, das entweder feinteiligen Feststoff oder flüssige Tröpfchen enthält, abgegeben wird. Dabei können herkömmliche Aerosoltreibmittel wie z.B. leichtflüchtige Fluorkohlenwasserstoffe oder Kohlenwasserstoffe verwendet werden, wobei das Aerosolgerät vorteilhafterweise so konstruiert ist, daß eine abgemessene Wirkstoffmenge abgegeben wird.
Für weitere Informationen über Formulierungen sei der Leser auf Kapitel 25.2 im Band 5 von Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990, verwiesen.
Die mit einem oder mehreren Hilfsstoffen zu einer Einzeldosisform kombinierte Wirkstoffmenge hängt zwangsläufig von dem behandelten Wirt und dem gewählten Verabreichungsweg ab. So wird eine für eine orale Verabreichung an Menschen bestimmte Formulierung im allgemeinen beispielsweise von 0,5 mg bis 2 g Wirkstoff, vermengt mit einer angemessenen und vorteilhaften Menge an Hilfsstoffen, die von etwa 5 bis etwa 98 Gew.-% der gesamten Zusammensetzung variieren kann, enthalten. Einzeldosisformen enthalten im allgemeinen von etwa 1 mg bis etwa 500 mg eines Wirkstoffs. Für weitere Informationen über Verabreichungswege und Dosierungen sei der Leser auf Kapitel 25.3 in Band 5 von Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board) Pergamon Press 1990, verwiesen.
Die Größe der Dosis einer Verbindung der Formel (I) für therapeutische bzw. prophylaktische Zwecke hängt naturgemäß von der Art und dem Schweregrad der Erkrankung, dem Alter und Geschlecht des Tieres bzw. Patienten und dem Verabreichungsweg ab, gemäß wohlbekannten medizinischen Prinzipien. Wie oben erwähnt eignen sich die Verbindungen der Formel (I) zur Behandlung von Erkrankungen oder medizinischen Zuständen, die ganz oder teilweise auf die Folgen der Farnesylierung von Ratten zurückzuführen sind.
Bei der Verwendung einer Verbindung der Formel (I) für therapeutische bzw. prophylaktische Zwecke wird die Verbindung im allgemeinen so verabreicht, daß die Tagesdosis beispielsweise im Bereich von 0,5 mg bis 75 mg pro kg Körpergewicht liegt, gegebenenfalls in Teildosen verabreicht. Dabei werden im allgemeinen niedrigere Dosen verabreicht, wenn ein parenteraler Verabreichungsweg beschritten wird. So wird beispielsweise bei einer intravenösen Verabreichung im allgemeinen eine Dosis im Bereich von z.B. 0,5 mg bis 30 mg pro kg Körpergewicht verwendet. Gleichermaßen wird bei einer inhalativen Verabreichung eine Dosis im Bereich von z.B. 0,5 mg bis 25 mg pro kg Körpergewicht verwendet. Eine orale Verabreichung ist jedoch bevorzugt.
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele näher erläutert, jedoch nicht eingeschränkt, wobei, wenn nicht anders angegeben, die folgenden allgemeinen Vorschriften angewendet wurden.
Darstellung 1
N-(3,4-Dichlorbenzyl)-4-(2-tetrahydropyranyloxy)methylindol-2-carbonsäureethylester
4-(2-Tetrahydropyranyloxy)methylindol-2-carbonsäureethylester (5,1 g) (Chun-gi Shen et al., Heterocycles, 43, 1996, 891–898) und Natriumhydrid (741 mg, 60% in Mineralöl) wurden unter Argon bei Raumtemperatur 20 Minuten lang in DMF (100 ml) gerührt. 3,4-Dichlorbenzylchlorid (2,79 ml) wurde zugegeben, und die Mischung wurde über Nacht gerührt und dann zwischen Essigsäureethylether (150 ml) und Wasser (150 ml) verteilt. Die organische Phase wurde mit Wasser (2 × 150 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum eingeengt, und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie mit Isohexan und dann mit Essigsäureethylester:Isohexan (5/95) als Laufmittel gereinigt, wodurch man das Produkt als gelbes Öl (4,39 g, 56%) erhielt; NMR δ (CDCl₃) 1,40 (t, 3H) , 1,50–2,00 (m, 6H) , 3,60 (m, 1H) , 4,00 (m, 1H) , 4,35 (q, 2H) , 4,75 (m, 1H) , 4,85 (d, 1H) , 5,10 (d, 1H) , 5,80 (s, 2H) , 6,85 (m, 1H) , 7,15–7,40 (m, 5H), 7,50 (s, 1H); M/z (+) 462,5 (MH⁺).
Darstellung 2
N-(3,4-Dichlorbenzyl)-4-hydroxymethylindol-2-carbonsäureethylester
N-(3,4-Dichlorbenzyl)-4-(2-tetrahydropyranyloxy)methylindol-2-carbonsäureethylester (4,38 g) und p-Toluolsulfonsäure (100 mg) wurden bei Raumtemperatur 3 Stunden lang in Ethanol (100 ml) gerührt und dann im Vakuum eingeengt, und der Rückstand wurde in Essigsäureethylester (100 ml) gelöst, mit Wasser (100 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingeengt, wodurch man das Produkt als einen schmutzigweißen Feststoff (3,22 g, 90%) erhielt; NMR δ (CD₃SOCD₃) 1,25 (t, 3H) , 4,25 (q, 2H), 4,80 (d, 2H), 5,20 (m, 1H), 5,80 (s, 2H), 6,85 (m, 1H) , 7,10 (d, 1H) , 7,30 (m, 2H) , 7,50 (m, 3H) ; M/z (+) 378,3 (MH⁺) .
Darstellung 3
4-Formyl-N-(3,4-dichlorbenzyl)indol-2-carbonsäureethylester
N-(3,4-Dichlorbenzyl)-4-hydroxymethylindol-2-carbonsäureethylester (5,17 g) und 2,3-Dichlor-5,6-dicyanobenzochinon (3,10 g) wurden über Nacht bei Raumtemperatur in Dioxan (100 ml) gerührt. Die Reaktionsmischung wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand wurde in Dichlormethan (100 ml) gelöst und abfiltriert. Das Filtrat wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie unter Verwendung von 10% Essigsäureethylester:Isohexan als Laufmittel gereinigt, wodurch man das Produkt als einen gelben Feststoff (4,88 g, 95%) erhielt; NMR δ (CD₃SOCD₃) 1,30 (t, 3H), 4,30 (q, 2H), 5,90 (s, 2H), 6,85 (m, 1H), 7,90 (m, 1H, 8,00 (m, 1H) , 10,22 (s, 1H) ; M/z (+) 376,3 (MH⁺) .
Darstellung 4
N-(3,4-Dichlorbenzyl)-2-ethoxycarbonylindol-4-carbonsäure
Eine Lösung von Natriumchlorid (9,70 g) und Natriumdihydrogenorthophosphat (13,02 g) in Wasser (50 ml) wurde tropfenweise zu einer Lösung von 4-Formyl-N(3,4-dichlorbenzyl)indol-2-carbonsäureethylester (4,47 g) und 2-Methylbut-2-en (50 ml) in tert.-Butylalkohol (100 ml) gegeben, und die Mischung wurde 72 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt und dann im Vakuum eingeengt, und der so erhaltene Niederschlag wurde abfiltriert und getrocknet, wodurch man das Produkt als einen schmutzigweißen Feststoff (4,16 g, 89%) erhielt; NMR δ (CD₃SOCD₃) 1,25 (t, 3H), 4,30 (q, 2H), 5.85 (s, 2H), 6,85 (m, 1H) , 7,35 (m, 1H) , 7,40 (q, 1H) , 7,50 (m, 1H), 7,80 (m, 3H) ; M/z (+) 390,1 (MH⁺).
Darstellung 5
4-Chlormethyl-N-(3,4-dichlorbenzyl)indol-2-carbonsäureethylester
N-(3,4-Dichlorbenzyl)-4-hydroxymethylindol-2-carbonsäureethylester (0,89 g), Dimethylformamid (0,5 ml) und Thionylchlorid (189 μl) wurden über Nacht bei Raumtemperatur in Dichlormethan (40 ml) gerührt, und der so erhaltene Niederschlag wurde abfiltriert und im Vakuum getrocknet, wodurch man das Produkt als einen weißen Feststoff (0,62 g, 67%) erhielt; NMR δ (CD₃SOCD₃) 1,30 (t, 3H) , 4,30 (q, 2H) , 5,10 (s, 2H) , 5,85 (s, 2H) , 6,90 (m, 1H), 7,30 (m, 3H), 7,55 (m, 3H); M/z (+) 396,2 (MH⁺) .
Darstellung 6
5-Hydroxyindol-2-carbonsäureethylester
Eine gerührte Lösung von 5-Methoxyindol-2-carbonsäureethylester (20 g) in trockenem Dichlormethan (1000 ml) wurde bei –78°C unter einer Argonatmosphäre tropfenweise mit Bortribromid (64,58 g) versetzt. Der Ansatz wurde auf Raumtemperatur erwärmen gelassen und weitere 2 Stunden lang gerührt. Der Ansatz wurde unter Rühren in Eis/gesättigte wäßrige Natriumhydrogencarbonatlösung gegossen und mit Essigsäureethylester extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung, Wasser und wäßriger gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄). Die Lösung wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie unter Verwendung von 0–60% Diethylether; Isohexan als Laufmittel gereinigt, wodurch man das Produkt als weißen Feststoff erhielt (9,02 g, 48%) ; NMR δ (CD₃SOCD₃) 1,31 (t, 3H) , 4,29 (q, 2H), 6,79 (dd, 1H), 6,90 (dd, 1H), 7,22 (d, 1H), 8,84 (s, 1H) , 11,52 (brs, 1H) ; M/z (+) 206 (MH⁺) .
Darstellung 7
5-Acetoxyindol-2-carbonsäureethylester
Eine gerührte Lösung von 5-Hydroxyindol-2-carbonsäureethylester (7,79 g) und DMAP (20 mg) in Essigsäureanhydrid (80 ml) wurde 4 Stunden lang auf 80°C erhitzt. Der Ansatz wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand wurde in Essigsäureethylester gelöst. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit Salzsäure (2,0 M), gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung, Wasser und wäßriger gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄). Die Lösung wurde im Vakuum eingeengt, wodurch man das Produkt als einen gelben Feststoff (9,39 g, 100%) erhielt; NMR δ (CD₃SOCD₃) 1,20 (t, 3H), 2,10 (s, 3H), 4,19 (q, 2H), 6,86 (dd, 1H), 6,97 (d, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,29 (d, 1H) ; M/z (+) 248 (MH⁺).
Darstellung 8
5-Acetoxy-N-(3,4-dichlorbenzyl)indol-2-carbonsäureethylester
Eine gerührte Lösung von 5-Acetoxyindol-2-carbonsäureethylester (5,4 g) und Kaliumcarbonat (6,94 g) in Acetonitril (500 ml) wurde unter einer Argonatmosphäre mit 3,4-Dichlorbenzylbromid (5,96 g) versetzt. Der Ansatz wurde 16 Stunden lang auf 80°C erhitzt und dann im Vakuum eingeengt, und der Rückstand wurde zwischen Essigsäureethylester und Wasser verteilt. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit Wasser und gesättigter wäßriger Kochsalzlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄). Das Lösungsmittel wurde im Vakuum abgezogen und der Rückstand wurde mit Isohexan verrieben, wodurch man das Produkt als einen cremefarbenen Feststoff (5,55 g, 63%) erhielt; NMR δ (CD₃SOCD₃) 1,27 (t, 3H), 2,27 (s, 3H), 4,28 (q, 2H), 5,82 (s, 2H), 6,90 (d, 1H), 7,09 (dd, 1H), 7,33–7,40 (m, 2H), 7,46 (d, 1H), 7,52 (d, 1H).
Darstellung 9
N-(3,4-Dichlorbenzyl)-5-hydroxyindol-2-carbonsäureethylester
Eine gerührte Lösung von 5-Acetoxy-N-(3,4-dichlorbenzyl)indol-2-carbonsäureethylester (5,55 g) in Ethanol (50 ml) wurde unter einer Argonatmosphäre mit Natriumethanolat (1,86 g) versetzt. Der Ansatz wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt und dann im Vakuum eingeengt, und der Rückstand wurde mit wäßriger Salzsäure (2,0 M) angesäuert und mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit Wasser und gesättigter wäßriger Kochsalzlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄). Das Lösungsmittel wurde im Vakuum abgezogen und der Rückstand wurde mit Hexan/Diethylether verrieben, wodurch man das Produkt als einen weißen Feststoff (3,17 g, 92%) erhielt; NMR δ (CD₃SOCD₃) 1,26 (t, 3H), 4,25 (q, 2H), 5,75 (s, 2H), 6,81–6,91 (m, 2H) , 6,98 (d, 1H) , 7,19 (s, 1H) , 7,29 (d, 1H) , 7,38 (d, 1H) , 7,50 (d, 1H) , 9,06 (s, 1H) ; M/z (+) 364 (MH⁺) .
Beispiel 1
Ethylester von Verbindung 1
N-(3,4-Dichlorbenzyl)-2-ethoxycarbonylindol-4-carbonsäure (100 mg), DMF (1 Tropfen) und eine Lösung von Oxalsäurechlorid in Dichlormethan (2M, 140 μl) wurden unter Argon bei Raumtemperatur 7 Stunden lang in Dichlormethan (4 ml) gerührt. Die Reaktionsmischung wurde im Vakuum eingeengt und in Dichlormethan (4 ml) gelöst. 3-Aminotetrahydrothiophen-l,l-dioxid (69 mg) und Triethylamin (71 μl) wurden zugesetzt, und der Ansatz wurde über Nacht unter Argon gerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit Dichlormethan (20 ml) verdünnt, mit wäßr. 2M HCl (30 ml) und Wasser (30 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum eingeengt, und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie unter Verwendung eines Essigsäureethylester:Isohexan-Gradienten (Gradient 25/75-100/0) als Laufmittel gereinigt, wodurch man das Produkt als einen schmutzigweißen Feststoff (73 mg, 56%) erhielt. M/z(+) 509,3 (MH⁺).
Beispiel 2
Die oben in Beispiel 1 beschriebene Vorschrift wurde mit dem entsprechenden Amin wiederholt. Auf diese Weise erhielt man die unten beschriebenen Verbindungen.
Ethylester von Verbindung 4
48% Ausbeute; M/z(+) 461,5 (MH⁺).
Ethylester von Verbindung 2
96% Ausbeute; M/z (+) 500,4 (MH⁺).
Ethylester von Verbindung 3
60% Ausbeute; M/z (+) 509,3 (MH+).
Ethylester von Verbindung 6
63% Ausbeute; M/z(+) 462,2 (MH+).
Ethylester von Verbindung 7
72% Ausbeute; M/z(+) 503,2 (MH+).
Ethylester von Verbindung 8
51% Ausbeute; M/z (+) 500,2 (MH+).
Ethylester von Verbindung 9
13% Ausbeute; M/z(+) 512,1 (MH+).
Beispiel 3
Ethylmethyldiester von Verbindung 10
N-(3,4-Dichlorbenzyl)-2-ethoxycarbonylindol-4-carbonsäure (150 mg), L-Histidinmethylester-dihydrochlorid (93 mg), 2-Ethoxy-1-ethoxycarbonyl-l,2-dihydrochinolin (123 mg) und Triethylamin (107 μl) wurden über Nacht bei Raumtemperatur in Dichlormethan (15 ml) gerührt. Die Reaktionsmischung wurde im Vakuum eingeengt und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie unter Verwendung von Essigsäureethylester:Isohexan (Gradient 10/90 – 100/0), dann 10% Methanol:Essigsäureethylester als Laufmittel gereinigt, wodurch man das Produkt als ein weißes Gummi (35 mg, 17%) erhielt; M/z(+) 543,2 ( MH+) .
Beispiel 4
Verbindung 4
Der Ethylester der Verbindung 4 (50 mg) wurde in Tetrahydrofuran (2 ml) gelöst. Natronlauge (2M, 2 ml) und Methanol (1 ml) wurden zugegeben, und die Mischung wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt und dann im Vakuum eingeengt, und der Rückstand wurde in Wasser (4 ml) gelöst und mit Essigsäure angesäuert, und der so erhaltene Niederschlag wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet, wodurch man das Produkt als einen weißen Feststoff (19 mg, 40%) erhielt; NMR δ (CD₃SOCD₃) 3,30–3,90 (m, 8H), 6,00 (s, 2H), 7,05 (m, 1H), 7,20 (m, 2H), 7,40 (t, 1H), 7,50 (m, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,70 (m, 1H); M/z (-) 431,4 (M–H^–).
Beispiel 5
Die oben in Beispiel 4 beschriebene Vorschrift wurde mit dem entsprechenden Ester wiederholt. Auf diese Weise erhielt man die unten beschriebenen Verbindungen.
Verbindung 1
77% Ausbeute; NMR δ (CD₃SOCD₃) 2,20 (m, 1H), 3,05–3,60 (m, 5H) , 4,70 (m, 1H) , 5,90 (s, 2H), 6,90 (m, 1H) , 7,30 (m, 2H) , 7,50 (m, 2H) , 7,60 (s, 1H) , 7,70 (m, 1H) , 8,70 (d, 1H); M/z(-) 481,3 (M–H^–).
Verbindung 2
90% Ausbeute; NMR δ (CD₃SOCD₃) 2,20 (m, 3H), 2,40 (s, 3H) , 4,20 (d, 2H) , 6,00 (s, 2H) , 7,00 (m, 1H) , 7,20 (t, 1H), 7,35 (m, 3H), 7,50 (m, 1H), 7,55 (m, 1H), 8,60 (t, 1H) ; M/z(-) 470, 1 (M–H^–) .
Verbindung 3
53% Ausbeute; M/z(-) 479,1 (M–H^–).
Verbindung 6
81% Ausbeute; NMR δ (CD₃SOCD₃) 2,40 (m, 6H), 2,75 (m, 2H) , 3,45 (m, 2H) , 5,85 (s, 2H) , 6,85 (m, 1H) , 7,25 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,60 (m, 2H), 8,35 (m, 1H); M/z(-) 432, 2 (M–H^–) .
Verbindung 7
98% Ausbeute; NMR δ (CD₃SOCD₃) 3,22 (m, 2H), 3,40 (m, 2H) , 5,90 (s, 2H) , 6,23 (s, 1H) , 6,90 (m, 1H) , 7,30 (m, 2H), 7,50 (m, 2H), 7,65 (m, 2H), 8,40 (m, 1H); M/z(-) 473,2 (M–H^–) .
Verbindung 8
100 Ausbeute; M/z(-) 470,2 (M-H-).
Verbindung 9
85% Ausbeute; NMR δ (CD₃SOCD₃) 2,90 (s, 3H), 3,15 (m, 2H) , 3,40 (m, 2H) , 5,95 (s, 2H) , 6,90 (m, 1H) , 7,15 (m, 1H), 7,30 (m, 2H), 7,50 (m, 2H), 7,60 (m, 1H), 7,65 (m, 1H), 8,40 (m, 1H); M/z(-) 482,4 (M–H^–).
Verbindung 10
51% Ausbeute; M/z(-) 499,1 (M–H^–).
Verbindung 11
50% Ausbeute; NMR δ (CD₃SOCD₃) 2,40 (m, 4H), 3,50 (m, 4H) , 3, 70 (s, 2H) , 5, 85 (s, 2H) , 6, 90 (m, 1H) , 7, 05 (m, 1H), 7,20 (m, 1H), 7,30-7,60 (m, 4H); M/z(-) 417,2 (M–H^–) .
Beispiel 6
Ethylester von Verbindung 11
4-Chlormethyl-N-(3,4-dichlorbenzyl)indol-2-carbonsäureethylester (150 mg), Morpholin (50 μl) und Triethylamin (106 μl) wurden 4 Tage lang bei Raumtemperatur in Tetrahydrofuran (5 ml) gerührt und dann im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in Essigsäureethylester (30 ml) gelöst, mit Wasser (30 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und im Vakuum eingeengt. Der rohe Rückstand wurde mit To1uo1 verrieben und der so erhaltene weiße Feststoff wurde abfiltriert und getrocknet (79 mg, 47%); NMR δ (CDCl₃) 1,42 (t, 3H), 2,98 (m, 2H), 3,37 (m, 2H), 3,95 (m, 2H), 4,20–4,60 (m, 6H), 5,80 (s, 2H), 6,90 (m, 1H), 7,20 (m, 1H), 7,25–7,60 (m, 4H) , 7,70 (m, 1H) ; M/z (+) 447,3 (MH⁺) .
Beispiel 7
N-(3,4-Dichlorbenzyl)-4-dimethylaminomethyl-5-hydroxyindol-2-carbonsäureethylester (Ethylester von Verbindung 5)
Eine gerührte Lösung von N-(3,4-Dichlorbenzyl)-5-hydroxyindol-2-carbonsäureethylester (2,1 g) in Ethanol (50 ml) wurde nacheinander mit wäßrigem Dimethylamin (40%, 0,5 ml) und wäßrigem Formaldehyd (0,5 ml) versetzt. Die Lösung wurde über Nacht stehengelassen, und die so erhaltenen Kristalle wurden abfiltriert und im Vakuum getrocknet, wodurch man das Produkt als blaßgelbe Kristalle (1,7 g, 70%) erhielt; NMR δ (CD₃SOCD₃) 1,24 (t, 3H), 2,23 (s, 6H), 3,81 (s, 2H), 4,24 (q, 2H), 5,75 (s, 2H), 6,82 (d, 1H), 6,90 (dd, 1H), 7,30 (m, 3H), 7,50 (d, 1H); M/z (+) 423, 421 (MH⁺) , 378, 376.
Beispiel 8
N-(3,4-Dichlorbenzyl)-4-dimethylaminomethyl-5-hydroxyindol-2-carbonsäure (Verbindung 5)
Unter Anwendung der Methode von Beispiel 5 wurde der Ester aus Beispiel 7 in die Titelverbindung umgewandelt.
72% Ausbeute; NMR δ (CD₃SOCD₃) 2,43 (s, 6H), 4,04 (s, 2H), 5,85 (s, 2H), 6,78 (d, 1H), 7,00 (dd, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,22 (d, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), M/z (+) 393, 391 (MH⁺) , 348, 347.
Beispiel 9
Biologische Assays für hMCP-1-Antagonisten
Biologische Tests
Die folgenden biologischen Testmethoden, Daten und Beispiele dienen zur Erläuterung der vorliegenden Erfindung.

Abkürzungen
ATCC American Type Culture Collection, Rockville, USA
BCA Bicinchroninsäure (wird zusammen mit Kupfersulfat für den Proteinassay verwendet)
BSA Rinderserumalbumin
DMEM Dulbeccos modifiziertes Eagle-Medium
EGTA Ethylenbis(oxyethylennitrilo)tetraessigsäure
FCS Fetales Kälberserum
HEPES (N-[2-Hydroxyethyl]piperazin-N'-[2-ethansulfonsäure])
HBSS Hanks Balanced Salt Solution
hMCP-1 Humanes Monocyte Chemoattractant Protein-1
PBS Phosphatgepufferte Kochsalzlösung
PCR Polymerase-Kettenreaktion

AMPLITAQ^TM, erhältlich von Perkin-Elmer Cetus, wird als Quelle für thermostabile DNS-Polymerase verwendet.
Der Bindungspuffer besteht aus 50 mM HEPES, 1 mM CaCl₂, 5 mM MgCl₂, 0,5% fetalem Kälberserum, mit 1 M NaOH eingestellt auf pH 7,2.
Nicht-essentielle Aminosäuren (100 × Konzentrat) besteht aus: L-Alanin, 890 mg/l; L-Asparagin, 1320 mg/l; L-Asparaginsäure, 1330 mg/l; L-Glutaminsäure, 1470 mg/l; Glycin, 750 mg/l; L-Prolin, 1150 mg/l und L-Serin, 1050 mg/l.
Hypoxanthin- und Thymidinzusatz (50 × Konzentrat) besteht aus: Hypoxanthin, 680 mg/l ; und Thymidin, 194 mg/l.
Penicillin-Streptomycin besteht aus: Penicillin G (Natriumsalz); 5000 Einheiten/ml; Streptomycinsulfat, 5000 μg/ml.
Zellen der humanen Monozyten-Zellinie THP-1 sind von ATCC, Zugangsnumer ATCC TIB-202, erhältlich.
Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) wurde von Gibco bezogen; siehe Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1949, 71, 196.
Das synthetische Zellkulturmedium RPMI 1640 wurde von Gibco bezogen; es enthält anorganische Salze [Ca(NO₃)₂·4 H₂O 100 mg/l; KCl 400 mg/l; MgSO₄·7 H₂O 100 mg/l; NaCl 6000 mg/l; NaHCO₃ 2000 mg/l und NaHP₂O₄ (wasserfrei) 800 mg/l], D-Glucose 2000 mg/l, reduziertes Glutathion 1 mg/l, Aminosäuren und Vitamine.
Bei FURA-2/AM handelt es sich um 1-[2-(5-Carboxyoxazol-2-yl)-6-aminobenzofuran-5-oxy]-2-(2'-amino-5'-methylphenoxy) ethan-N,N,N',N'-tetraessigsäurepentaacetoxymethylester, der von Molecular Probes, Eugene, Oregon, USA, bezogen wurde.
Blutsedimentationspuffer enthält 8,5 g/l NaCl und 10 g/l Hydroxyethylcellulose.
Lysepuffer besteht aus 0,15 M NH₄Cl-, 10 mM KHCO₃, 1 mM EDTA.
Ganzzellen-Bindungspuffer besteht aus 50 mM HEPES, 1 mM CaCl₂, 5 mM MgCl₂, 0,5% BSA, 0,01% NaN₃, mit 1 M NaOH eingestellt auf pH 7,2.
Waschpuffer besteht aus 50 mM HEPES, 1 mM CaClz, 5 mM MgCl₂, 0,5% hitzeinaktiviertes FCS, 0,5 M NaCl, mit 1 M NaOH eingestellt auf pH 7,2.
Im allgemeinen können molekularbiologische Vorschriften aus allen der in "Molecular Cloning – A Laboratory Manual" 2. Auflage, Sambrook, Fritsch und Maniatis (Gold Spring Harbor Laboratory, 1989) beschriebenen Methoden angewendet werden.
i) Klonieren und Exprimieren des hMCP-1-Rezeptors
Die cDNA des MCP-1-Rezeptors B (CCR2B) wurde durch PCR von THP-1-Zellen-RNA unter Verwendung geeigneter, auf veröffentlichten MCP-1-Rezeptorsequenzen basierenden Oligonukleotidprimern kloniert (Charo et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, 2752). Die so erhaltenen PCR-Produkte wurden in den Vektor PCR-IITM (InVitrogen, San Diego, CA.) kloniert. Fehlerfreie CCR2B-cDNA wurde als Hind III-Not I-Fragment in den eukaryotischen Expressionsvektor pCDNA3 (InVitrogen) subkloniert, wodurch man pCDNA3/CC-CKR2A. bzw. pCDNA3/CCR2B erhielt.
Linearisierte pCDNA3/CCR2B-DNA wurde durch Calciumphosphatausfällung (Wigler et al., 1979, Cell, 16, 777) in CHO-K1-Zellen transfektiert. Die transfektierten Zellen wurden durch Zugabe von 1 mg/ml Geniticinsulfat (G418, Gibco BRL) 24 Stunden nach der Transfektion der Zellen ausgewählt. Die Herstellung der RNA und Northern-Blotting wurden wie beschrieben durchgeführt (Needham et al., 1995, Prot. Express. Purific., 6, 134). Der CHO-K1-Klon 7 (CHO-CCR2B) wurde als der höchste B-Expressor des MCP-1-Rezeptors identifiziert.
ii) Herstellung von Membranfragmenten
CHO-CCR2B-Zellen wurden in DMEM kultiviert, dem 10% fetales Kälberserum, 2 mM Glutamin, 1x nicht essentielle Aminosäuren, 1x Hypoxanthin- und Thymidin-Supplement und Penicillin-Streptomycin (50 μg Streptomycin/ml, Gibco BRL) zugesetzt worden waren. Membranfragmente wurden unter Anwendung von Zellyse/Differentialzentrifugationsverfahren wie zuvor beschrieben (Siciliano et al., 1990, J. Biol. Chem., 265, 19658) hergestellt. Die Proteinkonzentration wurde durch einen BCA-Proteinassay (Pierce, Rockford, Illinois) gemäß den Anweisungen des Herstellers abgeschätzt.
iii) Assay
¹²⁵I-MCP-1 wurde durch Bolton-Hunter-Konjugation (Bolton et al., 1973, Biochem. J., 133, 529; Amersham International plc) hergestellt. Die Gleichgewichts-Bindungsassays wurden nach der Methode von Ernst et al., 1994, J. Immunol., 152, 3541 durchgeführt. Kurz gesagt wurden verschiedene Mengen von mit ¹²⁵I-markiertem MCP-1 zu 7μg gereinigten CHO-CCR2B-Zellmembranen in 100 μl Bindungspuffer gegeben. Nach 1 Stunde Inkubation bei Raumtemperatur wurden die Bindungsreaktionsmischungen filtriert und 5mal über einen Plattenwascher (Brandel Cell Harvester MLR-96T) unter Verwendung von eiskaltem Bindungspuffer gewaschen. Filtermatten (Brandel GF/B) wurden vor der Verwendung 60 Minuten in 0,3% Polyethylenimin eingeweicht. Nach Filtration wurden einzelne Filter in 3,5 ml Röhrchen (Sarstedt Nr. 55.484) verteilt und gebundenes 125I-markiertes MCP-1 wurde bestimmt (LKB 1277 Gammamaster). Kalte Kompetitionsstudien wurden wie oben unter Verwendung von 100 pM mit 125I-markiertem MCP-1 in Gegenwart verschiedener Konzentrationen an nicht markiertem MCP-1 durchgeführt. Die unspezifische Bindung wurde durch Zusatz eines 200fachen molaren Überschusses an nicht markiertem MCP-1 zum Ansatz bestimmt.
Ligandenbindungsstudien mit aus CHO-CCR2B-Zellen hergestellten Membranfragmenten zeigten, daß der CCR2B-Rezeptor in einer Konzentration von 0,2 pmol/mg Membranprotein vorlag und sich selektiv und mit hoher Affinität (IC₅₀ = 110 pM, Kd = 120 pM) an MCP-1 band. Die Bindung an diese Membranen war vollständig reversibel und erreichte nach 45 Minuten bei Raumtemperatur ein Gleichgewicht, und es bestand eine lineare Beziehung zwischen der MCP-1-Bindung und der CHO-CCR2B-Zellenmembrankonzentration bei MCP-1-Konzentrationen zwischen 100 pM und 500 pM.
Die in DMSO (5 μl) gelösten Testverbindungen wurden kompetitiv mit 100 pM markiertem MCP-1 über einen Konzentrationsbereich (0,01–50 μM) getestet, wobei die einzelnen Werte der acht Punkte der Dosis-Reaktions-Kurven jeweils zweimal gemessen wurden, und die IC₅₀-Konzentrationen wurden berechnet.
Die untersuchten erfindungsgemäßen Verbindungen wiesen im hier beschriebenen hMCP-1-Rezeptorbindungsassay IC₅₀-Werte von 50 μM oder weniger auf.
b) Durch MCP-1 vermittelter Calciumstrom in THP-1-Zellen
Die humane Monozytenzellinie THP-1 wurde in dem synthetischen Zellkulturmedium RPMI 1640, dem 10% fetales Kälberserum, 6 mM Glutamin und Penicillin-Streptomycin (50 μg Streptomycin/ml, Gibco BRL) zugesetzt worden waren, inkubiert. Die THP-1-Zellen wurden in HBSS (ohne Ca²⁺ und Mg²⁺) + 1 mg/ml BSA gewaschen und im gleichen Puffer in einer Dichte von 3 × 10⁶ Zellen/ml resuspendiert. Die Zellen wurden dann 30 Minuten lang bei 37°C mit 1 mM FURA-2/AM geladen, zweimal in HBSS gewaschen und zu 1 × 10⁶ Zellen/ml resuspendiert. Die THP-1-Zellsuspension (0,9 ml) wurde in eine 5-ml-Einwegküvette mit Magnetrührer und 2,1 ml vorgewärmter (37°C) HBSS mit 1 mg/ml BSA, 1 mM MgCl₂ und 2 mM CaC1₂ gegeben. Die Küvette wurde in ein Fluoreszenzspektrophotometer (Perkin Elmer, Norwalk, CT) eingesetzt und unter Rühren 4 Minuten lang bei 37°C vorinkubiert. Die Fluoreszenz wurde über 70 sec aufgenommen, und die Zellen wurden nach 10 sec durch Zugabe von hMCP-1 zur Küvette stimuliert. [Ca²⁺]i wurde durch abwechselnde Anregung bei 340 nm und 380 nm und anschließende Messung der Fluoreszenzemission bei 510 nm bestimmt. Das Verhältnis der Intensitäten des emittierten Fluoreszenzlichts nach Anregung bei 340 nm und 380 nm, (R), wurde berechnet und angegeben, wodurch man nach der Gleichung:
in der K_d für den FURA-2-Ca²⁺-Komplex bei 37°C mit 224 nm angenommen wurde, einen Schätzwert für die [Ca²⁺] im Cytoplasma erhielt. Rmax ist das maximale Fluoreszenzverhältnis, bestimmt nach Zugabe von 10 mM Ionomycin, Ri_n ist das minimale Verhältnis, bestimmt durch anschließende Zugabe einer Ca²⁺-freien Lösung mit 5 mM EGTA, und Sf2/Sb2 ist das Verhältnis der Fluoreszenzwerte bei einer Anregung bei 380 nm, bestimmt für R_min bzw. R_max.
Die Stimulierung von THP-1-Ze11en mit hMCP-1 induzierte einen schnellen, vorübergehenden Anstieg der [CA²⁺]_i in spezifischer, dosisabhängiger Weise. Die Dosis-Reaktions-Kurven deuten auf einen ungefähren EC₅₀ von 2 nm. Die in DMSO (10 μl) gelösten Testverbindungen wurden auf die Inhibierung der Calciumfreisetzung untersucht, indem man sie 10 sec vor der Zugabe des Liganden zur Zellsuspension gab und die Abnahme des vorübergehenden Anstiegs der [CA²⁺]i bestimmte. Die Testverbindungen wurden weiterhin auf fehlenden Agonismus untersucht, indem man sie anstelle von hMCP-1 zusetzte.
c) Durch hMCP-1 und RANTES vermittelte Chemotaxis
Die in vitro Chemotaxisassays wurden mit der humanen Monozyten-Zellinie THP-1 durchgeführt. Die Wanderung der Zellen durch Polycarbonatmembranen wurde gemessen, indem man die die Membran passierenden Zellen entweder direkt in einem Coulter-Zähler oder indirekt mit einem colorimetrischen Viability Assay, bei dem die Spaltung eines Tetrazoliumsalzes durch die mitochondriale Atmungskette (Scudiero D.A., et al., 1988, Cancer Res., 48, 4827-4833) gemessen wurde, zählte.
In eine Mikrotiterplatte mit 96 Vertiefungen, die die untere Vertiefung einer mit einer PVP-freien Polycarbonatfiltermembran (NeuroProbe MB series, Cabin John, MD 20818, USA) mit einer Porengröße von 5 μm und Kleberahmen ausgestatteten Chemotaxiskammer bildet, wurden gemäß den Anweisungen des Herstellers Chemoattraktoren gegeben. Der Chemoattraktor wurde in geeigneter Weise mit synthetischem Zellkulturmedium, RPMI 1640 (Gibco) verdünnt oder mit 2 mM Glutamin und 0,5% BSA, oder alternativ dazu mit HBSS mit Ca²⁺ und Mg²⁺ ohne Phenolrot (Gibco) plus 0,1% BSA ergänzt. Die einzelnen Verdünnungen wurden 30 min unter Vakuum entgast und in die unteren Vertiefungen der Kammer gegeben (400 μl), und in den einzelnen Vertiefungen der oberen Kammer wurden THP-1-Zellen (5×10⁵ in 100 μl RPMI 1640 + 0,5% BSA) inkubiert. Zur Inhibierung der Chemotaxis wurde der Chemoattraktor auf einer konstanten submaximalen Konzentration, die zuvor bestimmt worden war (1 nM für MCP-1), gehalten, und zusammen mit verschiedenen Konzentrationen der in DMSO (DMSO-Endkonzentration < 0,05% Vol.-%) gelösten Testverbindungen zur unteren Vertiefung gegeben. Die Kammer wurde 2 h bei 37°C unter 5% CO₂ inkubiert. Das Medium aus den oberen Vertiefungen wurde entfernt, die Vertiefungen wurden mit 200 μl physiologischer Kochsalzlösung ausgewaschen, und die Kammer wurde dann geöffnet, die Membranoberfläche wurde trocken gewischt und die Platte mit den 96 Vertiefungen wurde zum Sammeln der Zellen 5 min bei 600 g zentrifugiert. Der Überstand (150 μl) wurde abgesaugt, und 10 μl Zellproliferationsreagens, WST-1, {4-[3-(4-Iodphenyl)-2-(4-nitrophenyl)-2H-5-tetrazolio]-1,3-phenyldisulfonat} plus ein Elektronkupplungsreagens (Boehringer Mannheim, Kat.-Nr. 1644 807) wurde in die Vertiefungen gegeben. Die Platte wurde 3 h bei 37°C inkubiert, und die Absorbtion des löslichen Formazanprodukts wurde bei 450 nm auf einem Mikrotiterplattenlesegerät gelesen. Die Daten wurden in ein Tabellenkalkulationsprogramm eingegeben und auf eine etwaige zufällige Wanderung in Abwesenheit von Chemoattraktor korrigiert, und die mittleren Absorbtionswerte, die Standardabweichung und Signifikanztests wurden berechnet. hMCP-1 induziert in konzentrationsabhängiger Weise die Zellwanderung, mit einer charakteristischen biphasischen Reaktion von maximal 0,5–1,0 nm.
Bei einer alternativen Form des obigen Assays kann man zur Endpunktbestimmung fluoreszenzmarkierte Zellen verwenden. In diesem Fall werden die THP-1-Ze11en durch 45minütige Inkubation im Dunkeln in Gegenwart von 5 mM Calcein AM (Glycin-N,N'-[[3',6'-bis(acetyloxy)-3-oxospiro[isobenzofuran-1(3H),9'-[9H]xanthen]-2',7'-diyl]bis(methylen)]bis[N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]]-bis[(acetyloxy)methyl]ester; Molecular Probes) fluoreszenzmarkiert. Die Zellen werden durch Zentrifugieren gesammelt und in HBSS (ohne Phenol Rot) mit Ca²⁺, Mg²⁺ und 0,1% BSA resuspendiert. 50 μl (2×105 Zellen) der Zellsuspension werden auf den Filter über den einzelnen Vertiefungen gegeben, und die Einheit wird wie oben 2 Stunden lang bei 37°C und unter 5% CO₂ inkubiert. Nach Ende der Inkubation werden die Zellen mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung von der oberen Oberfläche des Filters abgewaschen, der Filter wird aus der Platte entnommen, und die Anzahl an Zellen, die entweder an der Unterseite des Filters oder der unteren Vertiefung haften, wird durch Ablesen der Fluoreszenz bei einer Anregungswellenlänge von 485 nm und einer Emissionswellenlänge von 538 nm (fmax. Molecular Devices) abgelesen. Die Daten wurden in ein Tabellenkalkulationsprogramm übertragen und auf eine etwaige zufällige Wanderung in Abwesenheit von Chemoattraktor korrigiert, und es lassen sich die durchschnittlichen Fluoreszenzwerte, die Standardabweichung, die prozentuale Inhibierung und der IC₅₀ von Verbindungen im Test und in Signifikanztests berechnen. Mit dieser alternativen Form des Assays wurde zusätzlich zur MCP-1-induzierten Chemotaxis auch die Hemmung der durch RANTES (2 nM) induzierten Chemotaxis gemessen.
d) Bindung an humane, mononukleare Zellen aus periphärem Blut (human peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)
Herstellung von humanen PBMCs
Frisches menschliches Blut (200 ml) von freiwilligen Spendern wurde in Behältern mit Natriumcitrat-Antikoagulationsmittel gesammelt, so daß sich eine Endkonzentration von 0,38 ergab. Das Blut wurde mit Sedimentationspuffer gemischt und 20 Minuten lang bei 37°C inkubiert. Der Überstand wurde abgetrennt und 5 Minuten bei 1700 U/min zentrifugiert (Sorvall RT6000D). Das erhaltene Pellet wurde in 20 ml RPMI/BSA (1 mg/ml) resuspendiert, und 4 x 5 ml Lymphoprepä (Nycomed) wurden in 15-ml-Zentrifugenröhrchen vorsichtig mit 4 x 5 ml Zellen überschichtet. Die Röhrchen wurden 30 Minuten bei 1700 U/min zentrifugiert (Sorvall RT6000D) und die so erhaltene Zellschicht wurde abgenommen und in 50-ml-Falcon-Röhrchen überführt. Die Zellen wurden zum Entfernen von möglicherweise noch verbliebenen roten Blutkörperchen zweimal mit Lysepuffer gewaschen und dann zweimal in RPMI/BSA gewaschen. Die Zellen wurden in 5 ml Bindungspuffer resuspendiert. Die Zellzahl wurde in einem Coulter-Zähler bestimmt, und es wurde mit zusätzlichem Bindungspuffer bis zu einer Endkonzentration von 1,25 x 10⁷ PBMCs/ml versetzt.
Assay
[¹²⁵I]MCP-1 wurde unter Anwendung der Bolton-und-Hunter-Konjugation (Bolton et al., 1973, Biochem. J., 133, 529; Amersham International plc] hergestellt. Die Gleichgewichts-Bindungsassays wurden nach der Methode von Ernst et al., 1994, J. Immunol., 152, 3541, durchgeführt. Kurz gesagt wurden 50 μl von mit 125I markiertem MCP-1 (Endkonzentration 100 pM) zu 40 μl (5 x 105 Zellen) Zellsuspension in einer Platte mit 96 Vertiefungen gegeben. Die Verbindungen wurden, verdünnt in Ganzzellen-Bindungspuffer aus einer Stammlösung von 10 mM in DMSO, in einem Endvolumen von 5 μl zugesetzt, damit die DMSO-Konzentration im Assay auf 5% konstant gehalten wurde. Die Gesamtbindung wurde in Abwesenheit der Verbindung bestimmt. Die nichtspezifische Bindung wurde durch Zugabe von 5 μl kaltem MCP-1 zu einer Endkonzentration von 100 nM definiert. Die Assay-Vertiefungen wurden mit Ganzzellen-Bindungspuffer auf ein Endvolumen von 100 μl aufgefüllt, und die Platten wurden versiegelt. Nach 60minütiger Inkubation bei 37°C wurden die Bindungsreaktionsmischungen filtriert und unter Anwendung eines Plattenwaschers (Brandel MLR-96T Cell Harvester) 10 Sekunden lang mit eiskaltem Waschpuffer gewaschen. Die Filtermatten (Brandel GF/B) wurden vor der Verwendung 60 Minuten lang in 0,3% Polyethylenimin plus 0,2% BSA voreingeweicht. Nach dem Filtrieren wurden die einzelnen Filter in 3,5-ml-Röhrchen (Sarstedt Nr. 55484) getrennt, und das gebundene, mit ¹²⁵I markierte MCP-1 wurde bestimmt (LKB 1277 Gammamaster) .
Die Wirksamkeit der Testverbindungen wurde jeweils zweimal in einem Assay mit Dosis-Reaktions-Kurven mit sechs Punkten bestimmt, und die IC₅₀-Konzentrationen wurden bestimmt.
Die im hier beschriebenen hMCP-1-Rezeptorbindungsassay getesteten Verbindungen der vorliegenden Erfindung hatten IC₅₀-Werte von unter 5 μM. Die Verbindung 9 beispielsweise hatte einen IC_SO von 0,64 μM.
Bei den untersuchten erfindungsgemäßen Verbindungen wurde bei der effektiven Dosis keine physiologisch bedenkliche Toxizität beobachtet.
Beispiel 10
Pharmazeutische Zusammensetzungen
Mit dem folgenden Beispiel werden pharmazeutische Dosierungsformen der Erfindung wie hier definiert (der Wirkstoff wird als „Verbindung X" bezeichnet) zur therapeutischen bzw. prophylaktischen Anwendung in Menschen erläutert; durch dieses Beispiel soll die Erfindung jedoch nicht eingeschränkt werden: (a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
(i)
(j)
(k)
(l)
Anmerkung:
Bei der Verbindung X in den obigen Formulierungen kann es sich um eine der in Beispielen 1 bis 6 erläuterten Verbindungen handeln. Die obigen Formulierungen lassen sich durch in der pharmazeutischen Technik gut bekannte, herkömmliche Vorschriften erhalten. Die Tabletten (a)–(c) können auf herkömmliche Weise magensaftresistent beschichtet sein, beispielsweise mit einem Überzug aus Celluloseacetatphthalat. Die Aerosolformulierungen (h)–(k) können in Verbindung mit Standardaerosoldispensiergeräten zur dosierten Verabreichung eingesetzt werden, und die Suspendiermittel Sorbitantrioleat und Sojalecithin können durch alternative Suspendiermittel wie Sorbitanmonooleat, Sorbitansesquioleat, Polysorbat 80, Polyglycerinoleat oder Ölsäure ersetzt werden.

Claims

Verbindungen der Formel (I)
wobei X für CH₂ oder SO₂ steht; R¹ für einen gegebenenfalls substituierten Aryl- oder Heteroarylring steht; R² für Carboxy, Cyano , -C(O)CH₂OH, -CONHR⁸ , -SO₂NHR⁹ , Tetrazol-5-yl, SO₃H oder eine Gruppe der Formel (VI)
steht, wobei R⁸ aus Wasserstoff, Alkyl, Aryl, Cyano, Hydroxy, -SO₂R¹², wobei R¹² für Alkyl, Aryl, Heteroaryl oder Halogenalkyl steht, ausgewählt ist, oder R⁸ für eine Gruppe (CHR¹³)_r-COOH steht, wobei r für eine ganze Zahl von 1–3 steht und die R¹³-Gruppen jeweils unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Wasserstoff und Alkyl; R⁹ für Wasserstoff, Alkyl, gegebenenfalls substituiertes Aryl, wie gegebenenfalls substituiertes Phenyl oder gegebenenfalls substituiertes Heteroaryl, wie 5- oder 6gliedrige Heteroarylgruppen, oder eine Gruppe COR¹⁴ , wobei R¹⁴ für Alkyl , Aryl , Heteroaryl oder Halogenalkyl steht, steht; R¹⁰ und R¹¹ unabhängig voneinander aus Wasserstoff und Alkyl, insbesondere C_1-4-Alkyl, ausgewählt sind; R³ für Wasserstoff, eine funktionelle Gruppe, gegebenenfalls substituiertes Alkyl, gegebenenfalls substituiertes Alkenyl, gegebenenfalls substituiertes Alkinyl, gegebenenfalls substituiertes Aryl, gegebenenfalls substituiertes Heterocyclyl, gegebenenfalls substituiertes Alkoxy, gegebenenfalls substituiertes Aralkyl, gegebenenfalls substituiertes Aralkyloxy, gegebenenfalls substituiertes Cycloalkyl steht; R⁴ für eine Gruppe C(O)NR¹⁵R¹⁶ oder eine Gruppe (CH₂)_tR¹⁷ steht; wobei R¹⁵ und R¹⁶ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Wasserstoff, gegebenenfalls substituiertem Alkyl, gegebenenfalls substituiertem Alkenyl, gegebenenfalls substituiertem Alkinyl, gegebenenfalls substituiertem Cycloalkyl oder gegebenenfalls substituiertem Heterocyclyl, mit der Maßgabe, daß R¹⁵ und R¹⁶ nicht beide für Wasserstoff stehen, oder R¹⁵ und R¹⁶ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen gegebenenfalls substituierten heterocyclischen Ring bilden, der gegebenenfalls weitere Heteroatome enthält; R¹⁷ aus NR¹⁸R¹⁹, OR²⁰ oder S(O)_sR²¹ ausgewählt ist; wobei R¹⁸ und R¹⁹ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Wasserstoff, gegebenenfalls substituiertem Hydrocarbyl und gegebenenfalls substituiertem Heterocyclyl, oder R¹⁸ und R¹⁹ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen gegebenenfalls substituierten heterocyclischen Ring bilden, der gegebenenfalls weitere Heteroatome enthält; R²⁰ für substituiertes Alkyl, gegebenenfalls substituiertes Alkenyl, gegebenenfalls substituiertes Alkinyl, gegebenenfalls substituiertes Cycloalkyl oder gegebenenfalls substituiertes Heterocyclyl steht; R²¹ für gegebenenfalls substituiertes Hydrocarbyl oder gegebenenfalls substituiertes Heterocyclyl steht; s für 0, 1 oder 2 steht und t für eine ganze Zahl von 1–4 steht; R⁵, R⁶ und R⁷ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Wasserstoff, einer funktionellen Gruppe oder gegebenenfalls substituierten Hydrocarbylgruppen oder gegebenenfalls substituierten Heterocyclylgruppen, und die pharmazeutisch unbedenklichen Salze, in vivo hydrolysierbaren Ester und Amide der Verbindungen der Formel (I).
Verbindungen nach Anspruch 1, wobei R⁴ für eine Gruppe C(O)NR¹⁵R¹⁶ steht, wobei einer der Reste R¹⁵ und R¹⁶ für Wasserstoff oder Alkyl und der andere für gegebenenfalls substituiertes Heterocyclyl oder gegebenenfalls substituiertes Alkyl steht, oder R¹⁵ und R¹⁶ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen gegebenenfalls substituierten heterocyclischen Ring bilden, der gegebenenfalls weitere Heteroatome enthält.
Verbindungen nach Anspruch 2, wobei R⁴ für eine Gruppe C(O)NR¹⁵R¹⁶ steht, wobei einer der Reste R¹⁵ und R¹⁶ für Wasserstoff und der andere für Heterocyclyl oder Alkyl, substituiert durch eine oder mehrere Gruppen ausgewählt aus Amino, Mono- oder Dialkylamino, Carboxy und gegebenenfalls substituiertem Heterocyclyl, steht.
Verbindungen nach Anspruch 2, wobei R⁴ für eine Gruppe C(O)NR¹⁵R¹⁶ steht und R¹⁵ und R¹⁶ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen Morpholinring bilden, oder R⁴ für eine Gruppe der Teilformel (IV)
steht.
Verbindungen nach Anspruch 1, wobei R⁴ vorzugsweise für eine Gruppe (CH₂)_tR^l ⁷ steht, wobei t für 1 steht und R¹⁷ für eine Gruppe NR¹⁸R¹⁹ steht und R¹⁸ und R¹⁹ wie in Anspruch 1 definiert sind.
Verbindungen nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei R¹ für 3,4-Dichlorphenyl, 3-Fluor-4-chlorphenyl, 3-Chlor-4-fluorphenyl oder 2,3-Dichlorpyrid-5-yl steht.
Verbindungen nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei X für CH₂ steht.
Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend eine Verbindung nach einem der vorhergehenden Ansprüche zusammen mit einem pharmazeutisch unbedenklichen Träger.
Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 7 zur Verwendung bei der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei der Behandlung von entzündlichen Erkrankungen.
Verfahren zur Herstellung einer wie in Anspruch 1 definierten Verbindung der Formel (I), bei dem man eine Verbindung der Formel (VII)
in der X, R¹, R³ , R⁵ , R⁶ und R⁷ wie unter Formel (I ) definiert sind und R²' für eine Gruppe R², wie unter Formel (I) definiert, oder eine geschützte Form davon steht , R⁴⁰ für eine Gruppe C(O) oder eine Gruppe (CH₂)_t steht, wobei t wie unter Formel (I) definiert ist, und Z für eine Abgangsgruppe steht, entweder (a), wenn R⁴⁰ für C(O) steht, mit einer Verbindung der Formel (VIII) HNR¹⁵R¹⁶ (VIII) in der R¹⁵ und R¹⁶ wie unter Formel (I) definiert sind, umsetzt; oder (b), wenn R⁴⁰ für eine Gruppe (CH₂)_t steht, mit einer Verbindung der Formel (IX) HR¹⁷ (IX) in der R¹⁷ wie unter Formel (I) definiert ist, umsetzt; und anschließend, falls erforderlich oder gewünscht, eine Gruppe R²' zu einer Gruppe R² entschützt oder eine Gruppe R² in eine andere solche Gruppe umwandelt.