DE559143C

DE559143C - Verfahren zur getrennten Gewinnung von Hypophysenhinterlappenhormon und Hypophysenvorderlappenhormon

Info

Publication number: DE559143C
Application number: DEI33421D
Authority: DE
Inventors: Dr Carl Ludwig Lautenschlaeger; Dr Willy Ludwig; Dr Otto Schaumann
Original assignee: IG Farbenindustrie AG
Current assignee: IG Farbenindustrie AG
Priority date: 1928-02-05
Filing date: 1928-02-05
Publication date: 1932-09-16

Description

Verfahren zur getrennten Gewinnung von Hypophysenhinterlappenhormon und Hypophysenvorderlappenhormon Extrakte aus dem Hypophysenhinterlappen finden bereits seist vielen Jahren als Wehen erregendes Mittel in der Medizin Verwendung; spezifische Wirkungen der Extrakte des Vorderlappens werden erst in den neueren Forschungsarbeiten erwähnt. Die Isolierung des Hypophysenhinterlappenhormons und des Hypophysenvorderla.ppenhormons erfolgtebisher durch gesonderte Aufarbeitung der vorher anatomisch abgetrennten Hinter- und Vorderlappen. Dabei wurde die Loslösung des Vorderlappenhormons durch lang dauernde Behandlung des Vorderlappens mit niedrig konzentrierten hydrolysierenden Mitteln durchgeführt. In den einschlägigen Arbeiten wird die Empfindlichkeit der wirksamen Substanzen sowohl des Vorder- als auch des Hinterlappens, und zwar sowohl gegenüber Säuren wie gegenüber Alkali betont.
Es wurde nun gefunden, daß es trotz der erwähnten Empfindlichkeit der Extrakte gegen Säuren und Alkali gelingt, in einem Arbeitsgang das Hypophysenhinterlappenhormon und das Hypophysenvo,rderlappenhormon aus der Gesamtdrüse zu gewinnen, ohne die Drüse vorher zerlegen zu müssen, wenn man die ganze frische oder frisch getrocknete Hypophyse nacheinander kurzfristig mit hydrolysierenden Mitteln steigender Konzentration bei niedriger oder mäßig erhöhter Temperatur, die 6o° C nicht überschreitest, behandelt. Bei derartiger Behandlung kann man wesentlich stärkere Konzentrationen des Hydrolysiermittels (z. B. NaOH, H Cl) anwenden, als es bisher z. B. für die Behandlung des Hypophysenvorderlappens beschrieben ist. Beispielsweise läßt sich sogar eine n/i-Natronlauge und eine i o n-Salzsäure verwenden, wenn nur dafür Sorge getragen wird, daß die Behandlung nur kurze Zeit und bei niedriger oder mäßig erhöhter Temperatur ausgeführt wird.
Durch dieses Verfahren werden die Eiweißstoffe weitgehend hydrolysiert. Die entstandenen Alkali.- oder Acidalbuminat@e bzw. Globulinate werden durch Abstumpfen der Hydrolysiermittel zur Abscheidung gebracht und entfernt, während die wirksamen Substanzen in der Lösung zurückbleiben. Die so erhaltenen Hypophysenvorderlappen- bzw. Hypophysenhinterlappenextrakte können jeder für sich zwecks weiterer Reinigung und zwecks Zerlegung in die einzelnen wirksamen Komponenten nach bekannten Methoden weiterbehandelt werden.
Dar Vorteil des Verfahrens besteht darin, da.ß man zur Gewinnung und Isolierung der wirksamen Substanzen des Hypophys:envorder- und -hinterlapp:ens, die: beiden Drüsenteile nicht mehr - getrennt` zu verarbeiten braucht, was zeitraubend und kostspielig ist, sondern daß man die Gesamtdrüsen in einem Arbeitsgang auf die wirksamen Substanzen verarbeiten kann. Bei diesem Verfahren ist eine Trennung der Inkrete beider Drüsenteile dadurch ermöglicht, daß man die Gesamtdrüse zunächst mit hydrolysierenden Mitteln von schwächerer Konzentration behandelt, wodurch nur die Hypophys,enhinterlapp:ensubstanz gelöst wird, während aus dein nach Abtrennen des Hinterlappenextraktes verbleibenden Rückstand die Vorderlappensubstanz offenbar erst durch tiefere Eingriffe freigelegt und der Extraktion zugängig gemacht wird. Das Verfahren schafft aber auch noch den Vorteil, daß es durch kurzfristige Anwendung der höheren Konzentration der hydrolysierenden Agenzien gegenüber dem bekannten Verfahren (langfristige Behandlung mit niedrig konzentrierten hydrolysierenden Mitteln) die Gefahr einer Zersetzung der freigelegten wirksamen Substanz verringert. Beispiele I. 30 g frische Hypophysen werden gemahlen und etwa I5 Minuten mit Soccm n/ I oo-Salzsäure extrahiert. Diese Extraktion wird gegebenenfalls nochmals wiederholt. Nach Abtrennen des das Hypophys.enhinterl.appenhormon enthaltenden Extraktes, welcher nach bekannten Methoden weitergereinigt werden kann, wird der Drüsenrückstand in Wasser suspendiert und bei etwa I5° C 3o Minuten lang Salzsäuregas eingeleitet. Hierauf wird zentrifugiert, das klar braune Zentrifugat abgegossen und der Rückstand nochmals in der gleichen Weise behandelt. Die vereinigten Zentrifugate werden dann mit starker Natronlauge neutralisiert, die ausfallenden Albuminate und Globulinate zentrifugiert, und der klare, schwach gelb gefärbte Extrakt wird entweder direkt auf Vorderla.ppenwirkung am geeigneten Tier ausgewertet oder zuerst mit einem organischen Lösungsmittel, z. B. Aceton, behandelt und hierauf ausgewertet. I g Hypophysentrockenpulver wird in 2o ccm n/2-Natronlauge bei 35 bis 40'C 2o Minuten lang gerührt und abzentrifugiert. Das Zentrifugat enthält den größten Teil der wirksamen Hinterlappensubstanz. Der Zentrifugenrückstand wird wiederholt mit 2o ccm n/I-Natronlauge bei 25°C 2o Minuten lang behandelt. Das jetzt erhaltene Zentrifugat enthält die Hauptmenge der wirksamen Vorderlappensubstanz. Die Zentrifugate mit der wirksamen Vorderlappensubstanz können getrennt oder zusammen mit z n-Salzsäure zur Flockung gebracht werden. Die flockigen Niederschläge werden zentrifugiert; sie enthalten nur Spuren der wirksamen Substanzen. Die Filtrate werden dann auf ihre biologische Wirksamkeit eingestellt.
3. 34g Hypophysen werden 2o Minuten mit 5o ccm n/5-h,latronlauge extrahiert und zentrifugiert. Das Zentrifugatenthält die Hinterlapplensubstanz. Der Zentrifugenrückstand wird nun mit 5o ccm einer 3 %igen Natriumsulfidlösung 2o Minuten lang bei I5° C extrahiert und dann zentrifugiert; nach dem Zentrifugieren wird die alkalische Lösung sofort abgestumpft. Diese Extraktion wird noch zweimal wiederholt und die vereinigten Zentrifugate bei etwa PH= 5 zur Flo.ckung gebracht und filtriert. Der frei werdende Schwefelwasserstoff wird nach einer der üblichen Methoden, jedoch ohne Anwendung höherer Temperatur, entfernt und der erhaltene Extrakt am geeigneten Tier auf Vorderlappenwirkung ausgewertet.

Claims

PATENTANSPRUCIi: Verfahren zur getrennten Gewinnung von Hypophysenhinterlappenhormon und Hypophysenvorderlapp.enhormon, dadurch gekennzeichnet, daß man die ganze frische oder frisch getrocknete Hypophyse nacheinander kurzfristig mit hydrolysierenden Mitteln steigender Konzentration bei niedriger oder nur so weit erhöhter Temperatur, daß die Hormone in ihrer Wirksamkeit nicht beeinflußt werden, behandelt und dann die .erhaltenen Extrakte getrennt nach bekannten Verfahren weiterverarbeitet.