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Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Korrektur der
Eichkurve in trockenen analytischen Verfahren, die zur
quantitativen Analyse eines bestimmten Bestandteils
(Analyts) in unterschiedlichen Flüssigkeiten,
typischerweise Blut, durchgeführt werden.
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Bei der Durchführung eines analytischen Verfahrens unter
Verwendung eines trockenen analytischen Elements (das
heißt ein analytisches trocken-chemisches Element) wird
zunächst eine Eichkurve, die eine Beziehung zwischen dem
Gehalt oder der Konzentration eines Analyts und der daran
gemessenen optischen Dichte aufgestellt, wobei eine
Vielzahl von flüssigen Proben, die diesen Analyten in
bekannter unterschiedlicher Konzentration enthalten, verwendet
wird. Eine Konzentration (dies stellt sowohl die
Konzentration als auch den Gehalt dar) des Analyten in einer
Testprobe wird dann unter Verwendung der, wie oben
aufgestellten, Eichkurve bestimmt.
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Im allgemeinen besteht eine Eichkurve für ein trockenes
analytisches Element innerhalb des gesamten meßbaren
Konzentrationsbereichs nicht aus einer geraden Linie sondern
aus einer Kurve. Deshalb wird eine Eichkurve für die
Verwendung in einer genauen Analyse im allgemeinen dadurch
aufgestellt, daß man mindestens drei analytische Meßwerte,
die bei mindestens drei Proben mit bekannter Konzentration
bestimmt worden sind, in Folge graphisch miteinander
verbindet.
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Es ist bekannt, daß die Eigenschaften eines trockenen
analytischen Elements geringfügig in Abhängigkeit von der
Zersetzung der Reagentien in dem Element im Verlauf der
Lagerung, von der Änderung der Meßtemperatur, von der
Änderung der Herstellungsbedingungen des Elements usw.
geringfügig variieren. Das bedeutet, daß diese Werte der
optischen Dichte, die bei derselben flüssigen Probe unter
Verwendung von analytischen Elementen, die gemäß derselben
Vorschrift hergestellt worden sind, schwanken können. Die
Beziehung zwischen den Konzentrationen des Analyten und
den Werten der optischen Dichte kann deshalb durch Kurve B
(verschobene Eichkurve) in Fig. 1, die verschieden (oder
verschoben) von Kurve A (Standardeichkurve) ist,
dargestellt werden. In diesem Fall wird ein Wert der optischen
Dichte, der bei einer bestimmten flüssigen Probe unter
Verwendung eines trockenen analytischen Elements gemessen
wurde und die verschobene Eichkurve zeigt, von einem Wert
der optischen Dichte verschoben, der gegeben sein sollte,
wenn ein analytisches Standardelement für die Aufstellung
der Standardeichkurve verwendet wird. In dem Fall wird,
wenn der verschobene Wert oder die Veränderung der
Eichkurve vor oder kurz vor der Analyse unter Verwendung des
denaturierten (oder veränderten usw.) analytischen
Elements bestimmt wird, die korrigierte Konzentration des
Analyten dadurch gegeben, daß man die verschobene
Eichkurve in Übereinstimmung mit der Standardeichkurve
korrigiert.
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Bei dem bislang bekannten Verfahren zur Korrektur der
Eichkurve werden eine oder mehrere Referenzflüssigkeiten
(das heißt flüssige Proben, die den Analyten in einer
bekannten Konzentration enthalten) zur Abschätzung des
verschobenen Werts der optischen Dichte verwendet,
anschließend wird der abgeschätzte verschobene Wert einer
Berechnung gemäß einer vorher bestimmten Gleichung zur Korrektur
der Eichkurve unterworfen.
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Bei dem voranstehenden Verfahren ist es notwendig, daß
mindestens eine Referenzflüssigkeit, die den Analyten in
bekannter Konzentration enthält, verwendet wird. Des
weiteren ist es notwendig, daß mindestens ein analytisches
Element nur für das Verfahren der Korrektur der Eichkurve
verwendet wird, da ein trockenes analytisches Element, das
für die Korrektur verwendet worden ist, an sich nicht mehr
für eine Analyse verwendet werden kann.
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Des weiteren erfordert das oben genannte bekannte
Verfahren zur Korrektur der Eichkurve nicht nur Zeit um die
Referenzflüssigkeit auf dem analytischen Testelement auf
zubringen und nach der Inkubation den Wert der optischen
Dichte photometrisch zu bestimmen, sondern auch Zeit, die
Konzentration des Analyten in der Referenzflüssigkeit
unter Verwendung eines anderen Standardmeßverfahrens genau
zu bestimmen.
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Des weiteren ist es möglich, daß die Referenzflüssigkeit,
die den Analyten in einer bekannten Konzentration enthält,
in ihrer Analyten-Konzentration im Laufe der Lagerung oder
infolge der Verunreinigung mit anderen Bestandteilen
schwankt. In diesem Fall wird die Korrektur der Eichkurve
nicht genau durchgeführt.
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Wie vorstehend beschrieben, weist eine Eichkurve für ein
trockenes analytisches Element im allgemeinen Kurvenform
auf, obwohl sie einen Teil einer scheinbar geraden Linie
enthält. Demgemäß hat man angenommen, daß eine genaue
Korrektur der Eichkurve eine numerische Korrektur unter
Verwendung einer Kombination aus einer linearen Gleichung,
einer quadratischen Gleichung, einer Gleichung dritten
Grades und Gleichungen höheren Grades erfordert.
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Die Erfinder haben nun überraschenderweise gefunden, daß
die genaue Korrektur der Eichkurve dadurch erzielt werden
kann, daß man einen Wert der optischen Dichte, der bei
einem analytischen Element ohne Aufbringen einer
Referenzflüssigkeit oder einem analytischen Element unter
Aufbringen einer Flüssigkeit, die keinen Analyten enthält,
gemessen wurde, unter Verwendung einer Korrekturgleichung, die
eine bestimmte lineare oder quadratische Gleichung umfaßt,
verarbeitet.
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Demgemäß ist es eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung,
ein Verfahren für die Korrektur einer Eichkurve für ein
trockenes analytisches Element bereitzustellen, von dem
man annimmt, daß es sich in seiner Empfindlichkeit infolge
der Zersetzung von Reagentien in dem Element im Lauf
längerer Aufbewahrung, durch Erhöhung der
Umgebungstemperatur, usw., oder infolge einer Modifikation (oder
Veränderung) der Herstellungsbedingungen des Elements usw.,
verändert hat.
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Es ist eine weitere Aufgabe der Erfindung, ein Verfahren
zur Korrektur einer verschobenen Eichkurve des oben
erwähnten denaturierten oder modifizierten analytischen
Elements mit praktisch genügend hoher Genauigkeit
bereitzustellen, bei dem keine Referenzflüssigkeit (das heißt
wäßrige Flüssigkeitsprobe, die den Analyten in bekannter
Konzentration enthält) verwendet wird.
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Durch die vorliegende Erfindung wird ein Verfahren zur
Korrektur einer Eichkurve in einem trockenen analytischen
Verfahren zur quantitativen Analyse eines Analyten in
einer flüssigen Probe bereitgestellt, bei dem eine
Standardeichkurve, die zuvor zur Analyse des Analyten unter
Verwendung eines trockenen analytischen Standardelements
bestimmt worden ist, zur Anwendung auf ein trockenes
analytisches Element, das von dem trockenen analytischen
Standardelement
in seiner Empfindlichkeit gegenüber dem
Analyten abgewichen ist, korrigiert wird, wobei man eine
optische Dichte, die an dem abgewichenen trockenen
analytischen Element ohne Aufbringen einer den Analyten
enthaltenden flüssigen Probe bestimmt worden ist, und die
folgende Gleichung verwendet:
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DS - DS* = (aDS + b) · (FD - FD*)
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worin DS eine optische Dichte, die unter Verwendung des
trockenen analytischen Standardelements und der flüssigen
Probe gemessen worden ist, bedeutet, DS* eine optische
Dichte, die unter Verwendung des abgewichenen trockenen
analytischen Elements und der flüssigen Probe gemessen
worden ist, bedeutet, FD eine optische Dichte, die unter
Verwendung des trockenen analytischen Standardelements,
auf das keine flüssige Probe aufgebracht worden war,
gemessen worden ist, bedeutet, FD* eine optische Dichte, die
unter Verwendung des abgewichenen trockenen analytischen
Elements, auf das keine flüssige Probe aufgebracht worden
war, gemessen worden ist, bedeutet und "a" und "b" jeweils
experimentell bestimmte Konstanten sind.
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Dem erfindungsgemäßen Verfahren entsprechend kann die
Korrektur einer verschobenen Eichkurve einfach dadurch
erzielt werden, daß man eine optische Dichte (FD*) eines
analytischen Elements (das in seiner Empfindlichkeit
variiert oder von dem man annimmt, daß es variiert) ohne
punktförmiges Aufbringen einer Referenzflüssigkeit auf das
analytische Element mißt.
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Die Fig. 1 zeigt schematisch eine Beziehung zwischen
einer Standard-(Normal)-Eichkurve A und einer verschobenen
Eichkurve B.
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Die Fig. 2 zeigt schematisch eine Standardeichkurve und
drei (infolge einer verstärkten Zersetzung des Reagenz in -
dem analytischen Element) verschobene Eichkurven, die auf
der Basis der durch Reflektionsphotometrie erhaltenen
Werte der optischen Dichte, die in dem nachstehend
gegebenen Beispiel 1, Tabelle 2, aufgeführt sind, illustriert
werden.
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Bei dem analytischen Verfahren, bei dem ein trockenes
analytisches Element verwendet wird, werden ein oder mehrere
Tropfen einer flüssigen Probe, die den Analyten in
unbekannter Konzentration enthält, zunächst auf einer
Oberfläche des Elements oder auf der Oberfläche einer
Überzugsschicht, die auf dem analytischen Element sitzt, zunächst
aufgebracht (im weiteren als "Auftüpfeln" bezeichnet). Das
analytische Element wird dann bei einer gegebenen
Temperatur eine gegebene Zeitdauer inkubiert, um eine Färbung
oder eine Farbänderung in dem Element zu erzielen. Die
Farbe wird dann photometrisch gemessen und der gemessene
Wert wird in eine Analyten-Konzentration unter Verwendung
der vorher bestimmten Eichkurve umgewandelt. Die Eichkurve
wird unter Verwendung einer Beziehung zwischen der
Konzentration des Analyten (C) und aus dem gemessenen Wert der
optischen Dichte (DS) gemäß einer Funktion (f), die wie
folgt, gegeben ist:
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C = f(DS) ---(1)
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aufgestellt.
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Die Eichkurve kann in einem Graphen oder in einer Tabelle
ausgedrückt werden.
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Wie vorstehend beschrieben, liefern ein analytisches
Standardelement und ein denaturiertes oder modifiziertes
analytisches
Element beim Auftüpfeln einer flüssigen, den
Analyten in derselben Konzentration enthaltenden Probe
wahrscheinlich Werte der optischen Dichte, die voneinander
verschieden sind. Darüberhinaus liefern das analytische
Standardelement und das denaturierte oder modifizierte
analytische Element auch dann voneinander abweichende
Werte der optischen Dichte, wenn keine flüssige Probe
aufgetüpfelt wird und keine Inkubation ausgeführt wird, wenn
eine flüssige Probe aufgetüpfelt wird und eine Inkubation
durchgeführt wird, oder wenn reines Wasser einer
Flüssigkeit, die keinen Analyten enthält, wie ein Kontrollserum
oder eine physiologische Salzlösung, aufgetüpfelt wird und
eine Inkubation durchgeführt wird.
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Den Studien der Erfinder gemäß hat man gefunden, daß es
eine gewisse Beziehung zwischen den Graden des
Unterschieds des Werts der optischen Dichte, die in diesen
unterschiedlichen Phasen an einem analytischen
Standardelement und an einem denaturierten oder modifizierten
analytischen Element gemessen wurden, gibt. Die Beziehung kann
in der folgenden Weise beschrieben werden:
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DS1 - DS1* = G&sub1;(FD1 - FD1*) ---(2)
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DS2 - DS2* = G&sub2;(FD2 - FD2*) ---(3)
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In den obigen Gleichungen
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bedeuten DS1 und DS2 jeweils Werte der optischen Dichte,
die an zwei flüssigen Proben oder zwei
Referenzflüssigkeiten, die den Analyten in bekannten aber unterschiedlichen
Konzentrationen enthalten, unter Verwendung eines
trokkenen analytischen Standard-(das heißt Normal)-Elements
und unter Ausführung der normalen analytischen
Verfahrensschritte (was das Auftüpfeln einer flüssigen Probe auf
einem trockenen analytischen Element, die Inkubation des
Elements und das Messen der auf dem Element gebildeten
Farbe durch Reflektionsphotometrie umfaßt), gemessen
wurden;
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bedeuten DS1* und DS2* jeweils Werte der optischen Dichte,
die an zwei gleichen flüssigen Proben oder
Referenzflüssigkeiten wie oben unter Verwendung eines denaturierten
(oder infolge der Änderung der Herstellungsbedingungen
eines analytischen Elements modifizierten) trockenen
analytischen Elements und Ausführung der normalen analytischen
Verfahrensschritte, gemessen wurden;
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bedeuten FD1 und FD2 jeweils Werte der optischen Dichte,
die an dem normalen trockenen analytischen Element, auf
das keine flüssige Probe aufgetüpfelt worden war und das
nicht inkubiert worden war, an dem normalen trockenen
analytischen Element, auf das keine flüssige Probe
aufgetüpfelt worden war, das aber inkubiert worden war oder an dem
normalen trockenen analytischen Element, auf das eine
flüssige Probe aufgebracht worden war, das aber nicht
inkubiert worden war, gemessen wurden;
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bedeuten FD1* und FD2* jeweils Werte der optischen Dichte,
die an dem denaturierten oder modifizierten trockenen
analytischen Element auf das keine flüssige Probe
aufgetüpfelt worden war und das nicht inkubiert worden war, an dem
denaturierten oder modifizierten trockenen analytischen
Element, auf das keine flüssige Probe aufgetüpfelt worden
war, das aber inkubiert worden war, oder an dem
denaturierten oder modifizierten trockenen analytischen Element,
auf das eine flüssige Probe aufgetüpfelt worden war, das
aber nicht inkubiert worden war, gemessen wurden.
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Die oben beschriebene Beziehung kann durch die folgende
allgemeine Gleichung dargestellt werden:
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DS - DS * = G(FD - FD*) ---(4)
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Wie oben beschrieben, gibt es eine bestimmte Beziehung
zwischen der Differenz von G&sub1; und G&sub2; und der Differenz von
DS1 und DS2, die durch die folgende Gleichung ausgedrückt
werden kann:
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G&sub1; - G&sub2; = a(DS1 - DS2) ---(5)
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(in der Gleichung ist "a" eine Konstante).
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Die Gleichung (5) kann durch Integration in die folgende
allgemeine Gleichung umgewandelt werden:
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G = aDS + b ---(6)
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(in der Gleichung ist "b" eine weitere Konstante).
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Die Gleichungen (4) und (6) werden miteinander verbunden,
um die folgende Gleichung zu ergeben:
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DS - DS* = (aDS + b) · (FD - FD*) ---(7)
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Die Gleichungen (1) und (7) werden miteinander verbunden,
um die folgende Gleichung zu ergeben:
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C = f((aDS + b) (FD - FD*) + DS*) ---(8)
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Daher kann, wenn FD von vornherein bekannt ist, das
folgende getan werden:
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(1) eine verschobene Eichkurve kann für ein
denaturiertes oder modifiziertes analytisches Element dadurch
erhalten werden, daß man einfach die optische Dichte (der
Farbe) des denaturierten oder modifizierten Elements mißt
und eine Standardeichkurve unter Verwendung der gemessenen
optischen Dichte korrigiert;
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(2) eine verschobene Eichkurve kann für ein
denaturiertes oder modifiziertes analytisches Element dadurch
erhalten werden, daß man eine optische Dichte des denaturierten
oder modifizierten Elements mißt, nachdem es einfach
inkubiert wurde, ohne daß man eine flüssige Probe auftüpfelte
und anschließend eine Standardeichkurve unter Verwendung
der gemessenen optischen Dichte korrigiert;
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(3) eine verschobene Eichkurve für ein denaturiertes
oder modifiziertes analytisches Element kann dadurch
erhalten werden, daß man eine optische Dichte des
denaturierten oder modifizierten Elements mißt, nachdem Wasser
(z. B. reines Wasser) oder eine wäßrige, keinen Analyten
(z. B. Kontrollserum oder physiologische Salzlösung)
enthaltende Flüssigkeit aufgetüpfelt wurde und keine
Inkubation durchgeführt wurde und eine Standardeichkurve unter
Verwendung der gemessenen optischen Dichte korrigiert; und
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(4) eine verschobene Eichkurve für ein denaturiertes
oder modifiziertes analytisches Element kann dadurch
erhalten werden, daß man eine optische Dichte des
denaturierten oder modifizierten Elements mißt, nachdem Wasser
oder die wäßrige keinen Analyten enthaltende Flüssigkeit
aufgetüpfelt wurde und es anschließend inkubiert wurde und
dann eine Standardeichkurve unter Verwendung der
gemessenen optischen Dichte korrigiert.
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Eine verschobene Eichkurve kann auch nach dem obigen
Verfahren in eine Standardeichkurve umgewandelt werden.
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Bei jedem der obigen Verfahren kann eine befriedigend
genaue Korrektur der Standardeichkurve zu einer verschobenen
Eichkurve oder umgekehrt erzielt werden.
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Das erfindungsgemäße Korrekturverfahren kann auf
analytische Verfahren unter Verwendung der folgenden trockenen
analytischen Elemente angewendet werden: ein integrales
analytisches Mehrschichtelement, das eine
Benetzungsschicht aus Gewebe besitzt, wie es beispielsweise in den
vorläufigen japanischen Patentveröffentlichungen Nr.
55(1980)-164356 und Nr. 57(1982)-66395 beschrieben wird;
ein integrales analytisches Mehrschichtelement, das eine
Benetzungsschicht aus gewirktem Stoff besitzt, wie es
beispielsweise in der vorläufigen japanischen
Patentpublikation Nr. 60(1985)-222769 beschrieben wurde; ein integrales
analytisches Mehrschichtelement, das eine einen
organischen Polymerfaserbrei enthaltende Benetzungsschicht aus
Papier besitzt, wie sie beispielsweise in der vorläufigen
japanischen Patentveröffentlichung Nr. 57(1982)-148250
beschrieben wird; ein integrales analytisches
Mehrschichtelement, das eine mittels poröser (partieller) Adhäsion
verbundene poröse Schicht besitzt, wie es beispielsweise
in der vorläufigen japanischen Patentveröffentlichung Nr.
61(1986)-4959 beschrieben wird; ein integrales
analytisches Mehrschichtelement, das eine faserartige
Benetzungsschicht besitzt, die durch Aufschichten einer
Faserdispersion hergestellt worden ist, wie es beispielsweise in der
vorläufigen japanischen Patentveröffentlichung Nr.
57(1982)-125847 erwähnt wird; ein integrales analytisches
Mehrschichtelement, das eine nicht-faserige isotrope
poröse Benetzungsschicht, wie einen Membranfilter (getrübte
Polymerschicht) oder eine kontinuierliche
Hohlräume-enthaltende poröse Schicht, die Polymer-Mikroperlen in einem
hydrophilen Polymer-Bindemittel umfaßt, besitzt, wie
beispielsweise in der japanischen Patentveröffentlichung Nr.
53(1978)-21677 und dem U.S. Patent 3,992,158 erwähnt; ein
integrales analytisches Mehrschichtelement, das eine
nicht-faserige isotrope poröse Benetzungsschicht aus
einerkontinuierlichen Hohlräume-enthaltenden porösen Schicht
(drei-dimensionale aus Granulat zusammengesetzte
Gittermatrix) besitzt, die aneinander über Punkt-zu-Punkt-Kontakt
durch ein in Wasser nicht quellendes polymeres Haftmittel
verbundene Polymer-Mikroperlen umfaßt und andere ähnliche
integrale analytische Mehrschichtelemente, wie sie
beispielsweise in der vorläufigen japanischen
Patentveröffentlichung Nr. 55(1980)-90859 beschrieben sind; ein
analytisches Mehrschichtelement, das ein fixiertes Laminat
einer porösen Schicht besitzt, wie beispielsweise in der
vorläufigen japanischen Patentveröffentlichung Nr.
49(1974)-11395 beschrieben; ein analytisches
Mehrschichtelement für Immunoassays, das eine faserartige poröse
Schicht besitzt, wie sie beispielsweise in der vorläufigen
japanischen Patentveröffentlichung Nr. 59(1984)-77356
beschrieben wird; und ein analytisches Element vom
verbesserten Stick-Typ, wie es beispielsweise in den vorläufigen
japanischen Patentveröffentlichungen Nr. 57(1982)-53661
und Nr. 58(1983)-45565 beschrieben wird. Das
erfindungsgemäße Korrekturverfahren wird besonders vorteilhaft bei
einem analytischen Verfahren angewendet, das sich eines
integralen analytischen Mehrschichtelements bedient.
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Die folgenden Beispiele sollen die vorliegende Erfindung
mehr im Detail illustrieren.
Referenzbeispiel 1
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Auf einen farblosen transparenten
Polyethylenterephthalat(PET)-Film (Dicke 185 um, dient als Träger), der eine
Zwischenschicht aus Gelatine aufwies, wurde mit einer
Farb-bildenden Schicht einer Farb-bildenden
Reagenszusammensetzung zur Bestimmung von Glukose beschichtet. Die
Farb-bildende Schicht wurde dadurch hergestellt, daß man
den Träger mit einer solchen Menge einer wäßrigen Lösung
der Reagenszusammensetzung beschichtete, daß jede
Komponente der Reagenszusammensetzung in der nachstehend
beschriebenen Menge aufgeschichtet wurde und daß man dann
die aufgebrachte Schicht trocknete.
Farbbildende Reagenszusammensetzung (aufgeschichtete
Menge
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Peroxidase 5000 IU/m²
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1,7-Dihydroxynaphthalin 250 mg/m²
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4-Amino-2,3-dimethyl-1-(2,4,6-
trichlorphenyl)-3-pyrazolin-5-on 1,8 g/m²
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Gelatine 20 g/m²
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Nonylphenoxypolyethoxyethanol
(enthält im Durchschnitt 10
Oxyethylen-Einheiten) 200 mg/m²
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Auf die Farb-gebende Schicht wurde eine
Glukoseoxidaseenthaltende Licht-undurchlässige Schicht aufgebracht. Die
Licht-undurchlässige Schicht wurde dadurch hergestellt,
daß man die Farb-bildende Schicht mit einer wäßrigen
Lösung der folgenden Zusammensetzung in einer solchen Menge
beschichtete, daß jede Komponente in der nachstehend
beschriebenen Menge aufgeschichtet wurde und daß man dann
die aufgebrachte Schicht trocknete.
Zusammensetzung für die Licht-undurchlässige Schicht
(aufgeschichtete Menge)
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Glukoseoxidase 4000 IU/m²
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Nonylphenoxypolyethoxyethanol
(enthält im Durchschnitt 10
Oxyethylen-Einheiten) 200 mg/m²
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Feine Titandioxid-Partikel 40 g/m²
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Auf die Glukoseoxidase-enthaltende Licht-undurchlässige
Schicht wurde eine Haftschicht aufgebracht, indem man auf
die Licht-undurchlässige Schicht eine wäßrige Lösung der
folgenden Zubereitung in einer solchen Menge
aufschichtete, daß jede Komponente in der nachstehend beschriebenen
Menge aufgeschichtet wurde und man dann die aufgebrachte
Schicht trocknete.
Zusammensetzung für die Haftschicht (aufgeschichtete
Menge)
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Gelatine 6,7 g/m²
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Nonylphenoxypolyethoxyethanol
(enthält im Durchschnitt 10
Oxyethylen-Einheiten) 200 mg/m²
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Um die Haftschicht zu benetzen, wurde Wasser in einer
Menge von 30 g/m² auf die Haftschicht aufgebracht und dann
zur Laminierung ein breiter Stoff (100% Baumwolle) leicht
aufgedrückt. Der breite Stoff wurde getrocknet und man
erhielt eine poröse Benetzungsschicht. Auf diese Weise wurde
ein integrales analytisches Mehrschichtelement zur
quantitativen Analyse von Glukose hergestellt.
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Das analytische Mehrschichtelement wurde in quadratische
Schnipsel (15 mm·15 mm) zerschnitten, die dann, wie in
der vorläufigen japanischen Patentpublikation Nr.
57(1972)-62452 beschrieben, in Plastikfassungen eingesetzt
wurden, wobei man Analysenplättchen für die
Glukosebestimmung erhielt.
Beispiel 1
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Es wurden die folgenden sechs flüssigen Proben, die
Glukose in einer bekannten Menge enthielten, hergestellt. Die
Glukosekonzentration wurde gemäß der Hexokinase-G-6-PDH-
Methode bestimmt.
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Probe 11: Menschliches Serumalbumin 700 mg
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Natriumchlorid 90 mg
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zugesetztes Wasser auf:
(Glukosekonzentration: 0 mg/dl) 10 ml
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Probe 12: Monitrol IX (erhältlich von der American
Dade Corp.)
(Glukosekonzentration: 90 mg/dl)
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Probe 13: Monitrol IIX (erhältlich von der American
Dade Corp.)
(Glukosekonzentration: 229 mg/dl)
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Probe 14: Monitrol IX versetzt mit Glukose und
aufgelöst
(Glukosekonzentration: 493 mg/dl)
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Probe 15: Menschliches Serumalbumin 700 mg
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Natriumchlorid 90 mg
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Glukose 10 mg
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zugesetztes Wasser auf: 10 ml
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(Glukosekonzentration: 100 mg/dl)
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Probe 16: Menschliches Serumalbumin 700 mg
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Natriumchlorid 90 mg
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Glukose 30 mg
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zugesetztes Wasser auf: 10 ml
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(Glukosekonzentration: 300 mg/dl)
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Eine Vielzahl von Analysenplättchen, die nach der in
Referenzbeispiel
1 beschriebenen Weise hergestellt worden
waren, wurde in drei Gruppen eingeteilt, die dadurch
denaturiert wurden, daß man sie unter den Bedingungen einer
Umgebungstemperatur von 35ºC und einer relativen
Luftfeuchtigkeit von 30% 3 Monate bzw. 7 Monate bzw. 12 Monate
aufbewahrte.
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Die obigen denaturierten Plättchen und ein frisch
hergestelltes Analysenplättchen (das in der gleichen Weise, wie
in Referenzbeispiel 1 beschrieben, zur Aufstellung einer
Standardeichkurve hergestellt worden war) wurden durch
Reflektionsphotometrie unter Verwendung eines von der PET-
Trägerseite aus eingestrahlten sichtbaren Lichtstrahls mit
einer Zentralwellenlänge von 510 nm auf die optische
Dichte der Farb-bildenden Reagenzschicht hin gemessen,
ohne daß eine flüssige Probe aufgetüpfelt und inkubiert
wurde. Die gemessenen Werte der optischen Dichte für das
frische Element (FD) und die denaturierten Elemente (FD*)
sind in Tabelle 1 aufgeführt.
Tabelle 1
Aufbewahrung Keine (Frisch) Monate Optische Dichte
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10 ul von jeder der Proben 11-14 wurden auf das oben
erwähnte analytische Element aufgebracht, das anschließend
bei 37ºC 6 Minuten lang inkubiert wurde. Sofort nach der
Beendigung der Inkubation wurde die optische Dichte der
Farb-bildenden Schicht mittels Reflektionsphotometrie
unter Verwendung eines sichtbaren Lichtstrahls
(Zentralwellenlänge: 510 nm), der von der PET-Trägerseite
aus eingestrahlt wurde, gemessen.
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Die gemessenen Werte der optischen Dichte für das frische
Element (DS) und die denaturierten Elementen (DS*) sind in
Tabelle 2 aufgeführt.
Tabelle 2 (DS; DS*)
Aufbewahrung Probe Keine Monate
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Demgemäß nehmen eine Eichkurve für das frische Plättchen
zur Glukosebestimmung und die Eichkurven der durch
Lagerung denaturierten drei Plättchen, die schematisch in
Figur 2 illustrierten Formen an.
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Unabhängig davon wurde ein Analysenplättchen nach der in
Referenzbeispiel 1 beschriebenen Weise hergestellt und
dadurch denaturiert, daß man es bei einer
Umgebungstemperatur von 35ºC und einer relativen Luftfeuchtigkeit von 30%
5 Monate lang aufbewahrte.
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Das obige denaturierte Plättchen und ein frisch
hergestelltes Analysenplättchen (das in der gleichen Weise, wie
in Referenzbeispiel 1 beschrieben, zur Aufstellung einer
Standardeichkurve hergestellt worden war) wurden unter
Verwendung eines von der PET-Trägerfläche aus
eingestrahlten sichtbaren Lichtstrahls mit einer Zentralwellenlänge
von 510 nm auf die optische Dichte der Farb-bildenden
Reagensschicht hin vermessen, ohne daß eine flüssige Probe
aufgetüpfelt und inkubiert worden war. Die gemessenen
Werte der optischen Dichte für das frische Element (FD)
und das denaturierte Element (FD*) sind in Tabelle 3
aufgeführt.
Tabelle 3
Aufbewahrung Keine (Frisch) Monate Optische Dichte
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10 ul von jeder der Proben 15 und 16 wurden auf das oben
erwähnte analytische Element aufgebracht, das anschließend
bei 37ºC 6 Minuten lang inkubiert wurde. Sofort nach der
Beendigung der Inkubation wurde die optische Dichte der
Farb-bildenden Schicht mittels Reflektionsphotometrie
unter Verwendung eines sichtbaren Lichtstrahls
(Zentralwellenlänge: 510 nm), der von der PET-Trägerseite
aus eingesetzt wurde, gemessen.
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Die gemessenen Werte der optischen Dichte für das frische
Element (DS) und des denaturierten Elements (DS*) sind in
Tabelle 4 aufgeführt.
Tabelle 4
Aufbewahrung Keine (Frisch) Monate Probe
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Die obigen FD- und FD*-Werte und die DS- und DS*-Werte für
die Proben 15 und 16 wurden in die vorher erwähnte
Gleichung
(7) eingesetzt und das Gleichungssystem wurde zur
Bestimmung der Konstanten "a" und "b" gelöst. Die
Ergebnisse sind unten angegeben:
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a = -3,492 b = +1,644
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Der "DS"-Wert wurde aus dem "DS*"-Wert der optischen
Dichte, der in Tabelle 2 angegeben ist, unter Verwendung
der obigen Werte für "a" und "b" und der Gleichung (7)
berechnet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 aufgeführt.
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Unabhängig davon wurde der Wert der optischen Dichte, der
in Tabelle 2 angegeben ist, in eine Glukosekonzentration
unter Verwendung einer Standardeichkurve (Gleichung (1)),
die unter Verwendung des frisch hergestellten normalen
Analysenplättchens aus Referenzbeispiel 1 aufgestellt
worden war, umgewandelt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 6
aufgeführt. Der Wert der optischen Dichte, der in Tabelle
5 angegeben ist, wurde in derselben Weise in eine in
Tabelle 7 angegebene Glukosekonzentration umgewandelt.
Tabelle 5 (DS)
Aufbewahrung Probe Keine (Frisch) Monate
Tabelle 6 (Einheit: mg/dl)
Aufbewahrung Probe Keine (Frisch) Monate
Tabelle 7 (Einheit: mg/dl)
Aufbewahrung Probe Keine (Frisch) Monate
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Der Vergleich der in Tabelle 7 und 6 aufgeführten
Konzentrationswerte zeigt klar, daß das denaturierte
Analysenplättchen über einen weiten Bereich der
Glukosekonzentration genaue Glukosekonzentrationen (die denen unter
Verwendung eines frisch hergestellten normalen
Analysenplättchens erhaltenen fast identisch sind) liefert.
Beispiel 2
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Die folgenden sieben flüssigen Proben, die Bilirubin in
einer bekannten Menge enthielten, wurden hergestellt. Die
Bilirubin-Konzentration wurde gemäß der
Jendrassik-Grofdiazo-Methode
bestimmt.
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Probe 21: Monitrol IX
(Bilirubin-Konzentration: 0,9 mg/dl)
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Probe 22: Monitrol IIX
(Bilirubin-Konzentration: 4,5 mg/dl)
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Probe 23: Monitrol IX versetzt mit Bilirubin und
aufgelöst
(Bilirubinkonzentration: 8,4 mg/dl)
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Probe 24: Monitrol IX versetzt mit Bilirubin und
aufgelöst
(Bilirubinkonzentration: 13,0 mg/dl)
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Probe 25: Bilirubin-Kontrolle (erhältlich von American
Dade Corp.)
(Bilirubinkonzentration: 17,1 mg/dl)
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Probe 26: Menschliches Serumalbumin 700 mg
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Natriumchlorid 90 mg
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Bilirubin 0,1 mg
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zugesetztes Wasser auf: 10 ml
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(Bilirubinkonzentration: 1,0 mg/dl)
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Probe 27: Menschliches Serumalbumin 700 mg
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Natriumchlorid 90 mg
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Bilirubin 1 mg
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zugesetztes Wasser auf: 10 ml
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(Bilirubinkonzentration: 10,1 mg/dl)
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Eine Vielzahl von Analysenplättchen zur quantitativen
Analyse der Gesamtmenge an Bilirubin in Blutproben, die wie
in Beispiel 1 der vorläufigen japanischen
Patentpublikation
61(1986)-71363 hergestellt und in Plastikfassungen
eingesetzt worden waren (im weiteren als
"Bilirubin-Analysenplättchen" bezeichnet), wurden in vier Gruppen
eingeteilt, die dadurch denaturiert wurden, daß sie bei einer
Umgebungstemperatur von 45ºC und einer relativen
Luftfeuchtigkeit von 30% 4 Tage lang bzw. 7 Tage lang bzw. 10
Tage lang bzw. 14 Tage lang aufbewahrt wurden.
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Die obigen denaturierten Plättchen und ein frisch
hergestelltes Analysenplättchen (das in der gleichen Weise wie
oben beschrieben, zur Aufstellung einer Standardeichkurve
hergestellt worden war) wurden durch
Reflektionsphotometrie unter Verwendung eines von der PET-Trägerseite aus
eingestrahltem sichtbaren Lichtstrahls mit einer
Zentralwellenlänge von 540 nm auf die optische Dichte der
Farbbildenden Reagensschicht hin gemessen, ohne daß eine
flüssige Probe aufgetüpfelt und inkubiert wurde. Die
gemessenen Werte der optischen Dichte für das frische
Element (FD) und die denaturierten Elemente (FD*) sind in
Tabelle 8 aufgeführt.
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10 ul von jeder der Proben 21-25 wurden auf das oben
erwähnte analytische Element aufgebracht, das anschließend
bei 37ºC 6 Minuten lang inkubiert wurde. Sofort nach der
Beendigung der Inkubation wurde die optische Dichte der
Farb-bildenden Schicht mittels Reflektionsphotometrie
unter Verwendung eines sichtbaren Lichtstrahls
(Zentralwellenlänge: 540 nm), der von der PET-Trägerseite
aus eingestrahlt wurde, gemessen.
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Die gemessenen Werte der optischen Dichte für das frische
Element (DS) und die denaturierten Elemente (DS*) sind in
Tabelle 9 aufgeführt.
Tabelle 8
Aufbewahrung Keine Tage Optische Dichte
Tabelle 9 (DS; DS*)
Aufbewahrung Keine (Frisch) Probe Nr. Tage
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Unabhängig davon wurde ein Bilirubin-Analysenplättchen in
der oben beschriebenen Weise hergestellt, und dadurch
denaturiert, daß man es bei einer Temperatur von 45ºC und
einer relativen Luftfeuchtigkeit von 30% 12 Tage lang
aufbewahrte.
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Das obige denaturierte Plättchen und ein frisch
hergestelltes Analysenplättchen (das in der gleichen Weise wie
in Referenzbeispiel 1 beschrieben zur Aufstellung einer
Standardeichkurve hergestellt worden war) wurden unter
Verwendung eines von der PET-Trägerseite aus
eingestrahlten sichtbaren Lichtstrahls mit einer Zentralwellenlänge
von 540 nm auf die optische Dichte der Farb-bildenden
Reagensschicht hin vermessen, ohne daß eine flüssige Probe
aufgetüpfelt und inkubiert worden war. Die gemessenen
Werte der optischen Dichte für das frische Element (FD)
und das denaturierte Element (FD*) sind in Tabelle 10
aufgeführt.
Tabelle 10
Aufbewahrung Keine Tage Optische Dichte
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10 ul von jeder der Proben 26 & 27 wurden auf das oben
erwähnte analytische Element aufgebracht, das anschließend
bei 37ºC 6 Minuten lang inkubiert wurde. Sofort nach der
Beendigung der Inkubation wurde die optische Dichte der
Farb-bildenden Schicht mittels Reflektionsphotometrie
unter Verwendung eines sichtbaren Lichtstrahls
(Zentralwellenlänge: 540 nm), der von der PET-Trägerseite
aus eingestrahlt wurde, gemessen.
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Die gemessenen Werte der optischen Dichte für das frische
Element (DS) und das denaturierte Element (DS*) sind in
Tabelle 11 aufgeführt.
Tabelle 11
Aufbewahrung Keine (Frisch) Tage Probe
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Die obigen FD- und FD*-Werte und die DS- und DS*-Werte für
die Proben 26 und 27 wurden in die vorher erwähnte
Gleichung (7) eingesetzt und das Gleichungssystem wurde zur
Bestimmung der Konstanten "a" und "b" gelöst. Die
Ergebnisse sind unten angegeben:
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a = -0,923 b = +1,266
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Der "DS"-Wert wurde aus dem "DS*"-Wert der optischen
Dichte, der in Tabelle 9 angegeben ist, unter Verwendung
der obigen Werte für "a" und "b" und der Gleichung (7)
berechnet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 12 aufgeführt.
Tabelle 12 (DS)
Aufbewahrung Probe Nr. Keine (Frisch) Tage
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Unabhängig davon wurde der Wert der optischen Dichte, der
in Tabelle 9 angegeben ist, in eine Bilirubinkonzentration
unter Verwendung einer Standardeichkurve (Gleichung (1)),
die unter Verwendung des frisch hergestellten normalen
Bilirubin-Analysenplättchens hergestellt wurde, umgewandelt.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 13 aufgeführt. Der Wert der
optischen Dichte, der in Tabelle 12 angegeben ist, wurde
in derselben Weise in eine, wie in Tabelle 14 angegebene,
Bilirubinkonzentration umgewandelt.
Tabelle 13 (Einheit: mg/dl)
Aufbewahrung Probe Nr. Keine (Frisch) Tage
Tabelle 14 (Einheit: mg/dl)
Aufbewahrung Probe Nr. Keine (Frisch) Tage
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Der Vergleich der in Tabelle 13 und 14 aufgeführten
Konzentrationswerte zeigt klar, daß das denaturierte
Analysenplättchen über einen weiten Bereich der
Bilirubinkonzentration genaue Bilirubinkonzentrationen (die denen
unter Verwendung eines frisch hergestellten normalen
Analysenplättchens erhaltenen fast identisch sind) liefert.