DE3590080C2

DE3590080C2 -

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Publication number: DE3590080C2
Application number: DE3590080A
Authority: DE
Inventors: Hector F. Deluca; Heinrich K. Madison Wis. Us Schnoes; Rafal R. Warschau/Warszawa Pl Sicinski; Yoko Delmar N.Y. Us Tanaka
Original assignee: Wisconsin Alumni Research Foundation
Current assignee: Wisconsin Alumni Research Foundation
Priority date: 1984-03-05
Filing date: 1985-01-22
Publication date: 1992-08-06
Anticipated expiration: 2005-01-23
Also published as: JPH064536B2; IL74168A; CH667658A5; AU584071B2; FR2560597B1; AU3889585A; JPS61501447A; WO1985003939A1; GB8505486D0; NL8520021A; DK153145B; DE3590080T; GB2155478B; DK506985A; DK153145C; BE901879A; DK506985D0; GB2155478A; IE850520L; IL74168A0

Description

Die Erfindung betrifft neue 1α-Hydroxyvitamin D₂- Analogverbindungen, welche unerwartete biologische Eigenschaften aufweisen, sowie solche Verbindungen entaltende Arzneimittel.The invention relates to new 1α-hydroxyvitamin D₂- Analog compounds that have unexpected biological properties have, as well as such compounds containing compounds.

Aufgrund der allgemein bekannten und anerkannten Wirksamkeit von 1α-Hydroxyvitamin D-Verbindungen bei der Calcium- und Phosphathomöostase bei Tieren oder Menschen bestand ein Interesse an der Herstellung der natürlichen Metaboliten und an der Auffindung von Analogverbindungen mit geeigneten biologischen Eigenschaften. Dies hat zur Herstellung einer Vielzahl von Verbindungen geführt, die biologische Aktivität aufweisen (vgl. z. B. DeLuca et al., Topics in Current Chem., Band 83, Seite 1 (1979); Ann. Rev. Biochem. 52, 411 (1983); Yakhimovich, Russian Chem. Rev. 49, 371 [1980]). Das Interesse an derartigen Verbindungen besteht weiterhin, insbesondere deswegen, weil erkannt wurde, daß zusätzlich zu ihrer klassischen Funktion als Regulatoren der Calcium-Homöostase bestimmte Vitamin D-Derivate, insbesondere 1α,25-Dihydroxyvitamin D₃ und 1α-Hydroxyvitamin D₃ auch Zell-Differenzierungsprozesse beeinflussen und in der Lage sind, das Wachstum und die Verbreitung bestimmter Leukämiezellen zu inhibieren (Suda et al., US-PS 43 91 802; Suda et al., Proc. Natl. Acad. USA 80, 201 [1983]; Reitsma et al., Nature, 306, 492- 494 [1983]). Due to the generally known and recognized effectiveness of 1α-Hydroxyvitamin D compounds in the calcium and Phosphate homeostasis in animals or humans has been of interest in the production of natural metabolites and in the Discovery of analogue compounds with suitable biological Properties. This has to produce a variety of Compounds that have biological activity (cf. e.g. B. DeLuca et al., Topics in Current Chem., Volume 83, page 1 (1979); Ann. Rev. Biochem. 52, 411 (1983); Yakhimovich, Russian Chem. Rev. 49, 371 [1980]). The interest in such Connections still exist, especially because was recognized that in addition to their classic function as Regulators of calcium homeostasis certain vitamin D derivatives, in particular 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃ and 1α-hydroxyvitamin D₃ also affect and able to differentiate cell differentiation processes are the growth and spread of certain leukemia cells inhibit (Suda et al., U.S. Patent 4,391,802; Suda et al., Proc. Natl. Acad. USA 80, 201 [1983]; Reitsma et al., Nature, 306, 492- 494 [1983]).

Die meisten der bekannten Vitamin D-Metaboliten und -Analogverbindungen sind Derivate der Vitamin D₃-Serie, d. h. sie besitzen gesättigte Steroid-Seitenketten. In der Seitenkette ungesättigte Vitamin D-Verbindungen sind jedoch ebenfalls bekannt, nämlich bestimmte Hydroxyderivate von Vitamin D₂, wie 25- Hydroxyvitamin D₂ (US-Patentschrift 35 85 221), 1α,25- Dihydroxyvitamin D₂ (US-Patentschrift 38 80 894), die 24-Hydroxy- und 24,25-Dihydroxyvitamin D₂-Metaboliten (Jones et al., Arch. Biochem. Biophys. 202, 450 [1980]), 1α-Hydroxyvitamin D₂ (US- Patentschrift 39 07 843), wie auch bestimmte verwandte 22-trans- Dehydro-Verbindungen, welche der 24-Methylsubstituent fehlt, und wie sie beschrieben sind in der US-Patentschrift 37 86 062 und von Bogoslovskii et al. (J. Gen. Chem. USSR 48 (4), 828 (1978); Chem. Abstr. 89, 163848j, 89, 209016s).Most of the well-known vitamin D metabolites and -Analog compounds are derivatives of the vitamin D₃ series, d. H. they have saturated steroid side chains. In the side chain unsaturated vitamin D compounds are also known, namely certain hydroxy derivatives of vitamin D₂, such as 25- Hydroxyvitamin D₂ (US Pat. No. 35 85 221), 1α, 25- Dihydroxyvitamin D₂ (US Patent 38 80 894), the 24-hydroxy and 24,25-dihydroxyvitamin D₂ metabolites (Jones et al., Arch. Biochem. Biophys. 202, 450 [1980]), 1α-hydroxyvitamin D₂ (US Patent Specification 39 07 843), as well as certain related 22-trans Dehydro compounds lacking the 24-methyl substituent, and as described in US Pat. No. 3,786,062 and by Bogoslovskii et al. (J. Gen. Chem. USSR 48 (4), 828 (1978); Chem. Abstr. 89, 163848j, 89, 209016s).

Bei den erfindungsgemäß vorgeschlagenen neuen Vitamin D- Analogverbindungen handelt es sich um 1α,3β(9,10-Secocholesta-5Z,7E,-10(19))22E-tetraen-1,3-diol- Derivate der allgemeinen FormelWith the new vitamin D Analog connections are concerned 1α, 3β (9,10-secocholesta-5Z, 7E, -10 (19)) 22E-tetraen-1,3-diol- Derivatives of the general formula

worin R ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxylgruppe darstellt. Die erfindungsgemäße Verbindung, worin R ein Wasserstoffatom darstellt, kann als eine Zwischenverbindung bei der Herstellung der Verbindung erhalten werden, in der R eine Hydroxylgruppe ist.wherein R is a hydrogen atom or represents a hydroxyl group. The compound according to the invention, wherein R represents a hydrogen atom can be used as one Interconnect in making the connection can be obtained in which R is a hydroxyl group.

Strukturmäßig sind die erfindungsgemäßen Verbindungen Analogverbindungen der Hydroxyvitamin D₂-Verbindungen, denen der 24-Methylsubstituent fehlt, d. h. die Verbindungen können als 1α-Hydroxy-28-norvitamin D₂ bzw. 1α-25-Dihydroxy-28- norvitamin D₂ aufgefaßt werden.Structurally, the compounds according to the invention are analog compounds the hydroxyvitamin D₂ compounds, which the 24-methyl substituent is absent, i.e. H. the connections can as 1α-hydroxy-28-norvitamin D₂ or 1α-25-dihydroxy-28- norvitamin D₂ be understood.

Die beiden erfindungsgemäßen Verbindungen weisen eine starke biologische Aktivität auf und sind durch ein unerwartetes und neues Aktivitätsspektrum charakterisiert, wie es näher weiter unten beschrieben wird.The two compounds according to the invention have a strong biological activity and are due to an unexpected and characterized new activity spectrum as it continues closer is described below.

Eine Methode zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen ist in dem Verfahrensschema I dargestellt. In der folgenden Beschreibung dieses Schemas und in den Beispielen und Tabellen beziehen sich die durch arabische Zahlen angegebenen Verbindungsbezeichnungen (z.B. (1), (2), (3), . . . (10), (11), (12)) auf die so numerierten Strukturformeln in dem Verfahrensschema.A method for the preparation of the compounds according to the invention is shown in process scheme I. In the following description of this scheme and in the examples and tables, the compound designations (eg ( 1 ), ( 2 ), ( 3 ), ... ( 10 ), ( 11 ), ( 12 )) indicated by Arabic numbers refer the structural formulas numbered in this way in the process scheme.

Das Ausgangsmaterial ist der Dien-geschützte Aldehyd der Struktur (1) (vgl. Verfahrensschema I), der aus dem Ergosterolacetat nach dem Verfahren von Barton et al. (J. Chem. Soc. (C) 1968 (1971)) hergestellt worden ist. Die Umsetzung des Aldehyds (1) mit 3-Methyl-1-butylphenylsulfon der nachstehend angegebenen FormelThe starting material is the diene-protected aldehyde of structure ( 1 ) (cf. process scheme I), which is derived from the ergosterol acetate by the method of Barton et al. (J. Chem. Soc. (C) 1968 (1971)). The reaction of the aldehyde ( 1 ) with 3-methyl-1-butylphenyl sulfone of the formula given below

(CH₃)₂CHCH₂CH₂-SO₂Ph(CH₃) ₂CHCH₂CH₂-SO₂Ph

in einem organischen Lösungsmittel und in Gegenwart einer starken organischen Base ergibt die Hydroxysulfon-Zwischenverbindung der Struktur (2), wie sie in dem Verfahrensschema I dargestellt ist. Die Behandlung der Zwischenverbindung (2) mit Natriumamalgam in gepufferter Alkohollösung liefert dann das 22,23-trans-Olefin (22E-Olefin) der Struktur (3).in an organic solvent and in the presence of a strong organic base, the hydroxysulfone intermediate gives structure ( 2 ) as shown in Process Scheme I. Treatment of intermediate ( 2 ) with sodium amalgam in a buffered alcohol solution then provides the 22,23-trans olefin (22E olefin) of structure ( 3 ).

Die Umsetzung des 22E-Olefins (3) mit einem starken Hydrid- Reduktionsmittel (z. B. LiAlH₄) in einem Ether-Lösungsmittel ergibt die 5,7-Dien-Zwischenverbindung (4). Diese Zwischenverbindung wird sodann mit ultraviolettem Licht in einem organischen Lösungsmittel bestrahlt, um das entsprechende Provitamin D-Derivat zu erhalten, welches isoliert wird und in einem organischen Lösungsmittel auf eine Temperatur erhitzt wird, die sich im Bereich von Raumtemperatur bis zur Rückflußtemperatur bewegt, um das Provitamin D- Chromophor zu dem Vitamin D-Chromophor zu isomerisieren, wodurch die 22E-Dehydrovitamin D₃-Verbindung der Struktur (5) erhalten wird. Verbindung (5) ist eine bekannte Vitamin D-Analogverbindung, die zuvor nach einem weniger bequemen Verfahren hergestellt wurde (Bogoslovskii et al., an oben angegebener Stelle).The reaction of the 22E olefin ( 3 ) with a strong hydride reducing agent (e.g. LiAlH₄) in an ether solvent gives the 5,7-diene intermediate ( 4 ). This intermediate compound is then irradiated with ultraviolet light in an organic solvent to obtain the corresponding provitamin D derivative, which is isolated and heated in an organic solvent to a temperature ranging from room temperature to the reflux temperature, around which Isomerize provitamin D chromophore to the vitamin D chromophore, whereby the 22E-dehydrovitamin D₃ compound of structure ( 5 ) is obtained. Compound ( 5 ) is a known vitamin D analogue compound previously prepared using a less convenient method (Bogoslovskii et al., Supra).

Die Zwischenverbindung (1) wird sodann am Kohlenstoffatom 1 hydroxyliert nach dem allgemeinen Verfahren von DeLuca et al. (US-Patentschriften 41 95 027 und 42 60 549). Diese Reaktionsschritte umfassen die Reaktion der Verbindung (5) mit Toluolsulfonylchlorid in herkömmlicher Weise, um das entsprechende 3β-Tosylatderivat zu erhalten, welches direkt in gepuffertem Methanol solvolysiert wird, um die 3,5-Cyclovitamin D-Zwischenverbindung zu erhalten, welche durch die Struktur (6) im Verfahrensschema I angegeben ist. Durch Behandlung der letzteren Verbindung mit Selendioxid und tert.-Butylhydroperoxid wird nach chromatographischer Reinigung das entsprechende 1-hydroxylierte Produkt erhalten, welches überwiegend die 1α-Hydroxycyclovitamin D-Verbindung der Struktur (7) enthält. Eine kleine Menge des entsprechenden 1β-Hydroxy-Epimers kann ebenfalls in dem Produkt erhalten sein, jedoch ist die Trennung der Epimeren, obwohl diese mittels Chromatographie möglich ist, in dieser Stufe nicht erforderlich. Das Erhitzen dieser 1-Hydroxycyclovitamin D-Zwischenverbindung in Eisessig bei 40 bis 60°C liefert sodann ein Gemisch der 3-acetylierten Solvolyseprodukte, woraus durch Chromatographie die 5,6-cis- bzw. 5,6-trans-Verbindungen der Strukturen (8) und (9) isoliert werden. Wenn das 1-Hydroxycyclovitamin D-Produkt, welches der Solvolyse unterworfen wird, einen Anteil 1β-Hydroxy-Epimer enthielt, so enthält das Solvolysegemisch ebenfalls die 1β-Hydroxy-Epimeren entsprechend zu den Verbindungen (8) oder (9) und, sofern dies gewünscht wird, können diese Verbindungen durch Chromatographie isoliert werden.Intermediate ( 1 ) is then hydroxylated on carbon 1 by the general procedure of DeLuca et al. (U.S. Patent Nos. 41 95 027 and 42 60 549). These reaction steps involve reacting Compound ( 5 ) with toluenesulfonyl chloride in a conventional manner to obtain the corresponding 3β-tosylate derivative, which is directly solvolysed in buffered methanol to obtain the 3,5-cyclovitamin D intermediate, which by structure ( 6 ) is specified in process scheme I. Treatment of the latter compound with selenium dioxide and tert-butyl hydroperoxide gives the corresponding 1-hydroxylated product after chromatographic purification, which predominantly contains the 1α-hydroxycyclovitamin D compound of structure ( 7 ). A small amount of the corresponding 1β-hydroxy epimer may also be present in the product, but separation of the epimers, although possible by chromatography, is not required at this stage. Heating this 1-hydroxycyclovitamin D intermediate in glacial acetic acid at 40 to 60 ° C then provides a mixture of the 3-acetylated solvolysis products, from which the 5,6-cis or 5,6-trans compounds of the structures ( 8 ) and ( 9 ) are isolated. If the 1-hydroxycyclovitamin D product which is subjected to solvolysis contains a portion of 1β-hydroxy-epimer, the solvolysis mixture also contains the 1β-hydroxy-epimers corresponding to compounds ( 8 ) or ( 9 ) and, if so if desired, these compounds can be isolated by chromatography.

Die herkömmliche Basenhydrolyse der Acetatfunktion in der Verbindung (8) ergibt das Diolprodukt der Struktur (10).Conventional base hydrolysis of the acetate function in compound ( 8 ) gives the diol product of structure ( 10 ).

Dieses Diol (10) wird sodann einer enzymatischen Hydroxylierung am Kohlenstoffatom 25 in vitro unterworfen, wobei ein Leberhomogenisat verwendet wird, welches von Ratten mit Vitamin D-Mangel hergestellt wurde (gemäß der Beschreibung in der US-Patentschrift 43 07 025), um nach chromatographischer Trennung des Produktgemisches das gewünschte 1α,25-dihydroxylierte Produkt in reiner Form zu erhalten, welches durch die Struktur (12) angegeben ist.This diol ( 10 ) is then subjected to an enzymatic hydroxylation on carbon atom 25 in vitro using a liver homogenate which has been produced by rats with vitamin D deficiency (as described in US Pat. No. 4,3 07,025) in order to determine chromatographically Separation of the product mixture to obtain the desired 1α, 25-dihydroxylated product in pure form, which is indicated by structure ( 12 ).

In der folgenden detaillierten Beschreibung des Syntheseverfahrens, welches oben in Grundzügen dargestellt wurde, wurden die physikochemischen Daten erhalten unter Verwendung der unten angegebenen Verfahren und Vorrichtungen. Hochdruck-Flüssigkeitschromatographie (HPLC) wurde mittels der Vorrichtung der Firma Waters Associates Model ALC/GPC 204 unter Verwendung einer Säule aus Zorbax-Sil (DuPont) (6,2 mm × 25 cm Abmessungen der Säule, Fließgeschwindigkeit 4 ml/min, 1500 psi) durchgeführt. Die Säulenchromatographie wurde durchgeführt über Silikagel 60, 70-230 mesh ASTM (Merck). Die präparative Dünnschichtchromatographie (TLC) wurde durchgeführt über Silika 60 PF-254 (20×20 cm- Platten, 1 mm Silikagel). Die Bestrahlungen wurden durchgeführt unter Verwendung einer Quecksilberdampflampe Hanovia 608A36, die mit einem Vycor-Filter ausgerüstet war. Alle Reaktionen werden vorzugsweise unter einer Inertgasatmosphäre durchgeführt (z. B. Argon).In the following detailed description of the synthesis process, which has been outlined above, the physicochemical data were obtained using of the methods and devices given below. High pressure liquid chromatography (HPLC) was by means of the device from Waters Associates Model ALC / GPC 204 using a Zorbax-Sil (DuPont) column (6.2 mm × 25 cm dimensions of the column, flow rate 4 ml / min, 1500 psi). Column chromatography was performed on silica gel 60, 70-230 mesh ASTM (Merck). Preparative thin layer chromatography (TLC) was performed on silica 60 PF-254 (20 x 20 cm- Plates, 1 mm silica gel). The irradiations were carried out using a mercury lamp Hanovia 608A36, which is equipped with a Vycor filter was. All reactions are preferably carried out under an inert gas atmosphere carried out (e.g. argon).

3-Methyl-1-butylphenylsulfon (Isopentylphenylsulfon)3-methyl-1-butylphenyl sulfone (isopentylphenyl sulfone)

PhSO₂Na (1,97 g, 12 mMol) wurde zu einer gerührten Lösung von 3-Methyl-1-brombutan (1,51 g, 1,2 ml, 10 mMol) in DMF (20 ml) bei 75°C gegeben. Das Gemisch wurde 5 Stunden auf 75°C erhitzt, sodann abgekühlt, in Wasser eingegossen und mit Benzol extrahiert. Die organische Schicht wurde mit 5% HCl, 5% NaHCO₃ und Wasser gewaschen, über Na₂SO₄ getrocknet und eingedampft. Das ölige Sulfonprodukt (1,69 g, 80%) war im wesentlichen rein und wurde ohne jegliche Reinigung verwendet; NMR δ 0,88 (6H, d, J = 6,5 Hz, 2×CH₃), 1,61 (3H, m, -CH₂-CH), 3,08 (2H, m, SO₂-CH₂-), 7,50-7,95 (5H, m, Ar-H); IR: 1300 (br), 1147, 1088, 745, 692, 564, 539 cm^-1; Massenspektrum m/e 212 (M⁺, 3), 143 (92), 77 (57), 71 (73), 70 (73), 55 (42), 43 (100), 41 (47).PhSO₂Na (1.97 g, 12 mmol) was added to a stirred solution of 3-methyl-1-bromobutane (1.51 g, 1.2 ml, 10 mmol) in DMF (20 ml) at 75 ° C. The mixture was heated to 75 ° C for 5 hours, then cooled, poured into water and extracted with benzene. The organic layer was washed with 5% HCl, 5% NaHCO₃ and water, dried over Na₂SO₄ and evaporated. The oily sulfone product (1.69 g, 80%) was essentially pure and was used without any purification; NMR δ 0.88 (6H, d, J = 6.5 Hz, 2 × CH₃), 1.61 (3H, m, -C H₂ -C H ), 3.08 (2H, m, SO₂-C H ₂-), 7.50-7.95 (5H, m, Ar- H ); IR: 1300 (br), 1147, 1088, 745, 692, 564, 539 cm ^-1 ; Mass spectrum m / e 212 (M⁺, 3), 143 (92), 77 (57), 71 (73), 70 (73), 55 (42), 43 (100), 41 (47).

(22E)-5α,8α-(4-Phenyl-1,2-urazol)-cholesta-6,22-dien-3β- ol (3)(22E) -5α, 8α- (4-phenyl-1,2-urazole) -cholesta-6,22-dien-3β-ol ( 3 )

n-Butyllithium (1,7 M-Lösung in Hexan, 4,12 ml, 7 mMol) wurde einer gerührten Lösung von Diisopropylamin (707 mg, 1 ml, 7 mMol) in wasserfreiem THF (14 ml) zugesetzt und das Gemisch wurde 15 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Das Sulfon gemäß der Herstellung in Beispiel 1 (1,50 g, 7,07 mMol) in wasserfreiem THF (11 ml) wurde innerhalb von 10 Minuten tropfenweise zugesetzt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur gerührt für weitere 15 Minuten, sodann abgekühlt auf 0°C und der Aldehyd (1) (545 mg, 1 mMol) in wasserfreiem THF (7 ml) wurde zugesetzt. Das Rühren wurde 2 Stunden bei 0°C fortgesetzt und die Lösung wurde langsam auf Raumtemperatur erwärmt (30 Minuten). Das Gemisch (welches das Hydroxysulfonprodukt (2) enthielt) wurde in gesättigte Lösung von Na₂HPO₄ in Methanol (200 ml) eingegossen, Natriumamalgam (5,65%, 10 g) wurde zugesetzt und das Reaktionsgemisch wurde für 17 Stunden bei 4°C gerührt. Ausgefallenes Quecksilber wurde abfiltriert und nach der Einengung des Reaktionsgemisches auf etwa 5 ml wurde es mit Wasser verdünnt und mit Methylenchlorid extrahiert. Der organische Extrakt wurde mit Wasser gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄), unter vermindertem Druck eingeengt und der ölige Rückstand wurde über eine Silikagelsäule chromatographiert. Überschüssiges Sulfonreagens wurde mit Benzol-Ether (7 : 3)-Gemisch eluiert. Die Eluation mit Benzol-Ether (6 : 4) lieferte das reine Produkt (3) (375 mg, 67%) als einen Schaum: NMR δ 0,81 (3H, s, 18-H₃), 0,86 (6H, d, J = 6,7 Hz, 26-H₃ und 27-H₃), 0,97 (3H, s, 19-H₃), 1,03 (3H, d, J = 6,8 Hz, 21-H₃), 3,16 (1H, dd, J₁ = 4,4 Hz, J₂ = 14 Hz, 9-H), 4,44 (1H, m, 3-H), 5,25 (2H, br m, 22-H und 23-H), 6,22 und 6,39 (2H, AB q, J = 8,5 Hz, 6-H und 7-H), 7,40 (5H, br m, Ar-H); IR: 3444, 1754, 1701, 1599, 1402, 969, 757 cm^-1; Massenspektrum, m/e 557 (M⁺, 1%), 382 (70), 349 (51), 253 (28), 251 (45), 119 (PhNCO, 83), 55 (100).n-Butyllithium (1.7 M solution in hexane, 4.12 ml, 7 mmol) was added to a stirred solution of diisopropylamine (707 mg, 1 ml, 7 mmol) in anhydrous THF (14 ml) and the mixture became 15 Minutes at room temperature. The sulfone as prepared in Example 1 (1.50 g, 7.07 mmol) in anhydrous THF (11 ml) was added dropwise over 10 minutes. The solution was stirred at room temperature for an additional 15 minutes, then cooled to 0 ° C and the aldehyde ( 1 ) (545 mg, 1 mmol) in anhydrous THF (7 ml) was added. Stirring was continued at 0 ° C for 2 hours and the solution was slowly warmed to room temperature (30 minutes). The mixture (which contained the hydroxysulfone product ( 2 )) was poured into saturated solution of Na₂HPO₄ in methanol (200 ml), sodium amalgam (5.65%, 10 g) was added and the reaction mixture was stirred at 4 ° C. for 17 hours. Precipitated mercury was filtered off and after the reaction mixture was concentrated to about 5 ml, it was diluted with water and extracted with methylene chloride. The organic extract was washed with water, dried (Na₂SO₄), concentrated under reduced pressure and the oily residue was chromatographed on a silica gel column. Excess sulfone reagent was eluted with benzene-ether (7: 3) mixture. Elution with benzene ether (6: 4) provided the pure product ( 3 ) (375 mg, 67%) as a foam: NMR δ 0.81 (3H, s, 18-H₃), 0.86 (6H, d, J = 6.7 Hz, 26-H₃ and 27-H₃), 0.97 (3H, s, 19-H₃), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz, 21-H₃) , 3.16 (1H, dd, J₁ = 4.4 Hz, J₂ = 14 Hz, 9-H), 4.44 (1H, m, 3-H), 5.25 (2H, br m, 22- H and 23-H), 6.22 and 6.39 (2H, AB q, J = 8.5 Hz, 6-H and 7-H), 7.40 (5H, br m, Ar- H ); IR: 3444, 1754, 1701, 1599, 1402, 969, 757 cm ^-1 ; Mass spectrum, m / e 557 (M⁺, 1%), 382 (70), 349 (51), 253 (28), 251 (45), 119 (PhNCO, 83), 55 (100).

(22E)-Cholesta-5,7,22-trien-3β-ol (4)(22E) -Cholesta-5,7,22-trien-3β-ol ( 4 )

Das Addukt (3) (330 mg, 0,6 mMol) und Lithiumaluminiumhydrid (700 mg) in wasserfreiem THF (40 ml) wurden unter Rückfluß für 18 Stunden erhitzt. Das überschüssige Reagens wurde mit einigen Tropfen Wasser zersetzt. Wasserfreies Na₂SO₄ wurde zugesetzt und die organische Phase wurde dekantiert und eingeengt, um einen kristallinen Rückstand zu ergeben, der über einer Silikagelsäule gereinigt wurde. Die Eluation mit Benzol-Ether (94 : 6)-Gemisch ergab reines Dien (4) (180 mg, 80%), welches aus Methanol umkristallisiert wurde: Schmelzpunkt 119,5-122,5°C; [α] = -118° (c = 1,2, CHCl₃); NMR δ 0,63 (3H, s, 18-H₃), 0,87 (6H, d, J = 6,7 Hz, 26-H₃ und 27-H₃), 0,95 (3H, s, 19-H₃), 1,03 (3H, d, J = 6,8 Hz, 21-H₃), 3,64 (1H, m, 3-H), 5,25 (2H, br m, 22-H und 23-H), 5,38 und 5,57 (2H, AB q, J = 6 Hz, 7-H und 6-H); UV λ_max 281 nm; IR: 3436, 1461, 1382, 1366, 1062, 1036, 968 cm^-1; Massenspektrum, m/e 382 (M⁺, 100), 349 (M⁺-H₂O-Me, 71), 323 (34), 271 (M⁺-Seitenkette, 16), 253 (M⁺-Seitenkette-H₂O, 32).The adduct ( 3 ) (330 mg, 0.6 mmol) and lithium aluminum hydride (700 mg) in anhydrous THF (40 ml) were heated under reflux for 18 hours. The excess reagent was decomposed with a few drops of water. Anhydrous Na₂SO₄ was added and the organic phase was decanted and concentrated to give a crystalline residue, which was purified over a silica gel column. Elution with benzene-ether (94: 6) mixture gave pure diene ( 4 ) (180 mg, 80%), which was recrystallized from methanol: melting point 119.5-122.5 ° C; [α] = -118 ° (c = 1.2, CHCl₃); NMR δ 0.63 (3H, s, 18-H₃), 0.87 (6H, d, J = 6.7 Hz, 26-H₃ and 27-H₃), 0.95 (3H, s, 19-H₃ ), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz, 21-H₃), 3.64 (1H, m, 3-H), 5.25 (2H, br m, 22-H and 23- H), 5.38 and 5.57 (2H, AB q, J = 6 Hz, 7-H and 6-H); UV λ _max 281 nm; IR: 3436, 1461, 1382, 1366, 1062, 1036, 968 cm ^-1 ; Mass spectrum, m / e 382 (M⁺, 100), 349 (M⁺-H₂O-Me, 71), 323 (34), 271 (M⁺ side chain, 16), 253 (M⁺ side chain-H₂O, 32 ).

(5Z,7E,22E)-9,10-Secocholesta-5,7,10(19),22-tetraen-3β-ol (5)(5Z, 7E, 22E) -9,10-secocholesta-5,7,10 (19), 22-tetraen-3β-ol ( 5 )

Eine Lösung der Verbindung (4) (100 mg, 0,26 mMol) in Ether (120 ml)-Benzol (30 ml)-Gemisch wurde mit Argon für 40 Minuten entgast. Die Lösung wurde bei 0°C für 13 Minuten bestrahlt in einer Quarztauchquelle, die mit einer UV-Lampe und einem Filter ausgerüstet war. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand durch HPLC getrennt, wobei 1% 2-Propanol in Hexan als Eluationsmittel verwendet wurde, um das reine Provitamin D-Derivat zu erhalten (40,4 mg, 40%), welches bei 24 ml gesammelt wurde; NMR δ 0,72 (3H, s, 18-H₃), 0,87 (6H, d, J = 6,7 Hz, 26-H₃ und 27-H₃), 1,04 (3H, d, J = 6,8 Hz, 21-H₃), 1,65 (3H, s, 19-H₃), 3,91 (1H, m, 3-H), 5,28 (2H, br m, 22-H und 23-H), 5,50 (1H, m, 11-H), 5,69 und 5,96 (2H, AB q, J = 12,5 Hz, 7-H und 6-H); UV λ_max 260,5 nm; λ_min 234 nm.A solution of compound ( 4 ) (100 mg, 0.26 mmol) in ether (120 ml) -benzene (30 ml) mixture was degassed with argon for 40 minutes. The solution was irradiated at 0 ° C for 13 minutes in a quartz immersion source equipped with a UV lamp and a filter. The solvent was removed under reduced pressure and the residue was separated by HPLC using 1% 2-propanol in hexane as eluent to give the pure provitamin D derivative (40.4 mg, 40%) which was at 24 ml was collected; NMR δ 0.72 (3H, s, 18-H₃), 0.87 (6H, d, J = 6.7 Hz, 26-H₃ and 27-H₃), 1.04 (3H, d, J = 6 , 8 Hz, 21-H₃), 1.65 (3H, s, 19-H₃), 3.91 (1H, m, 3-H), 5.28 (2H, br m, 22-H and 23- H), 5.50 (1H, m, 11-H), 5.69 and 5.96 (2H, AB q, J = 12.5 Hz, 7-H and 6-H); UV λ _max 260.5 nm; λ _min 234 nm.

Das Provitamin (40 mg, 0,1 mMol) in Ethanol (100 ml) wurde unter Rückfluß für 3 Stunden erhitzt. Nach dem Abzug des Lösungsmittels wurde das Produktgemisch durch HPLC getrennt (Eluation mit 1% 2-Propanol in Hexan). Die Ausbeute des Vitamins (5) (gesammelt bei 34 ml) betrug 30,8 mg (77%); Schmelzpunkt (Hexan) 99-101°C; NMR δ 0,56 (3H, s, 18-H₃), 0,88 (6H, d, J = 6,7 Hz, 26-H₃ und 27-H₃), 102 (3H, d, J = 6,6 Hz, 21-H₃), 3,96 (1H, m, 3-H), 4,82 und 5,05 (2H, jeweils enges m, 19-H₂), 5,27 (2H, br m, 22-H und 23-H), 6,03 und 6,24 (2H, AB q, J = 11,4 Hz, 7-H und 6-H); UV λ_max 265 nm, λ_min 228 nm; IR: 3420, 1458, 1441, 1378, 1366, 1050, 970, 943, 891, 862 cm^-1; Massenspektrum, m/e (M⁺, 22), 349 (M⁺-H₂O-Me, 4), 271 (M⁺-Seitenkette, 8), 253 (M⁺-Seitenketten-H₂O, 13), 136 (100), 118 (80). The provitamin (40 mg, 0.1 mmol) in ethanol (100 ml) was heated under reflux for 3 hours. After the solvent had been removed, the product mixture was separated by HPLC (elution with 1% 2-propanol in hexane). The yield of vitamin ( 5 ) (collected at 34 ml) was 30.8 mg (77%); Melting point (hexane) 99-101 ° C; NMR δ 0.56 (3H, s, 18-H₃), 0.88 (6H, d, J = 6.7 Hz, 26-H₃ and 27-H₃), 102 (3H, d, J = 6.6 Hz, 21-H₃), 3.96 (1H, m, 3-H), 4.82 and 5.05 (2H, each narrow m, 19-H₂), 5.27 (2H, br m, 22- H and 23-H), 6.03 and 6.24 (2H, AB q, J = 11.4 Hz, 7-H and 6-H); UV λ _max 265 nm, λ _min 228 nm; IR: 3420, 1458, 1441, 1378, 1366, 1050, 970, 943, 891, 862 cm ^-1 ; Mass spectrum, m / e (M⁺, 22), 349 (M⁺-H₂O-Me, 4), 271 (M⁺-side chain, 8), 253 (M⁺-side chain-H₂O, 13), 136 (100) , 118 (80).

(5Z,7E,22E)-3β-Acetoxy-9,10-secocholesta-5,7,10(19),22- tetraen-1α-ol (8)(5Z, 7E, 22E) -3β-acetoxy-9,10-secocholesta-5,7,10 (19), 22-tetraen-1α-ol ( 8 )

Ein frisch umkristallisiertes p-Toluolsulfonylchlorid (50 mg, 0,26 mMol) wurde einer Lösung des Vitamins (5) (30 mg, 0,08 mMol) in wasserfreiem Pyridin (300 µl) zugesetzt. Nach 30 Stunden bei 4°C wurde das Reaktionsgemisch in Eis/gesättigte NaHCO₃ unter Rühren eingegossen. Das Gemisch wurde 15 Minuten gerührt und mit Benzol extrahiert. Der organische Extrakt wurde mit gesättigter NaHCO₃, gesättigtem Kupfersulfat und Wasser gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und unter vermindertem Druck eingeengt, um das ölige 3β-Tosylderivat zu erhalten. Das rohe Tosylat wurde mit NaHCO₃ (150 mg) in wasserfreiem Methanol (10 ml) behandelt und das Gemisch wurde 8,5 Stunden bei 55°C gerührt. Nach dem Abkühlen und Einengen auf etwa 2 ml wurde das Gemisch mit Benzol (80 ml) verdünnt, mit Wasser gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und unter vermindertem Druck eingeengt.A freshly recrystallized p-toluenesulfonyl chloride (50 mg, 0.26 mmol) was added to a solution of the vitamin ( 5 ) (30 mg, 0.08 mmol) in anhydrous pyridine (300 µl). After 30 hours at 4 ° C, the reaction mixture was poured into ice / saturated NaHCO₃ with stirring. The mixture was stirred for 15 minutes and extracted with benzene. The organic extract was washed with saturated NaHCO₃, saturated copper sulfate and water, dried (Na₂SO₄) and concentrated under reduced pressure to obtain the oily 3β-tosyl derivative. The crude tosylate was treated with NaHCO₃ (150 mg) in anhydrous methanol (10 ml) and the mixture was stirred at 55 ° C for 8.5 hours. After cooling and concentrating to about 2 ml, the mixture was diluted with benzene (80 ml), washed with water, dried (Na₂SO₄) and concentrated under reduced pressure.

Die erhaltene ölige 3,5-Cyclovitamin D-Analogverbindung (6) war hinreichend rein, um für die folgende Oxidationsstufe ohne jegliche Reinigung eingesetzt zu werden. Einer heftig gerührten Suspension von SeO₂ (4 mg, 0,036 mMol) in wasserfreiem CH₂Cl₂ (5 ml) wurde tert.-Butylhydroperoxid (13,2 µl, 0,094 mMol) zugesetzt. Nach 30 Minuten wurde wasserfreies Pyridin (40 µl) zugesetzt und das Gemisch wurde weitere 25 Minuten bei Raumtemperatur gerührt, mit CH₂Cl₂ (3 ml) verdünnt und auf 0°C abgekühlt. Das rohe 3,5-Cyclovitaminprodukt (6) in CH₂Cl₂ (4,5 ml) wurde sodann zugegeben und die Reaktion wurde bei 0°C für 15 Minuten fortschreiten gelassen. Das Gemisch wurde sodann langsam (30 Minuten) auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. Das Gemisch wurde in einen Trenntrichter überführt und mit 30 ml 10%iger NaOH geschüttelt. Ether (150 ml) wurde zugesetzt und die abgetrennte organische Phase wurde mit 10% NaOH, Wasser gewaschen und über Na₂SO₄ getrocknet. Die Einengung zur Trockne unter vermindertem Druck ergab einen gelben öligen Rückstand, der über Silikagel-TLC- Platten gereinigt wurde, welche entwickelt wurden in einem 7 : 3-Gemisch von Hexan-Ethylacetat (R_f 0,35), wodurch das 1-Hydroxycyclovitaminprodukt erhalten wurde (14,4 mg, 45%): NMR δ 0,55 (3H, s, 18-H₃), 0,64 (1H, m, 3-H), 0,88 (6H, d, J = 6,9 Hz, 26-H₃ und 27-H₃), 1,03 (3H, d, J = 6,9 Hz, 21-H₃), 3,26 (3H, s, -OCH₃), 4,2 (2H, m, 1-H und 6-H), 4,95 (1H, d, J = 9,3 Hz, 7-H), 5,1-5,4 (4H, br m, 19-H₂, 22-H und 23-H); Massenspektrum, m/e 412 (M⁺, 27), 380 (M⁺-MeOH, 46), 339 (22), (M⁺-Seitenketten-MeOH), 29), 245 (18), 135 (100). Das oben angegebene Produkt enthielt überwiegend die 1α-Hydroxycyclovitamin D-Analogverbindung der Struktur (7) und eine kleine Menge des entsprechenden 1β-Epimers. Eine Lösung dieses 1-Hydroxycyclovitamin D- Produkts (12 mg) in Eisessig (0,5 ml) wurde für 15 Minuten auf 55°C erhitzt. Das Gemisch wurde sorgfältig in Eis/gesättigte NaHCO₃ eingegossen und mit Benzol und Ether extrahiert. Die vereinten Extrakte wurden mit Wasser gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und eingeengt. Das erhaltene Produktgemisch wurde der HPLC unterworfen (1,5% 2-Propanol in Hexan als Eluationsmittel), um 4,9 mg der Verbindung (8) zu erhalten (Eluation bei 42 ml) und 3,1 mg der Verbindung (9) (Eluation bei 50 ml).The oily 3,5-cyclovitamin D analog compound ( 6 ) obtained was sufficiently pure to be used for the subsequent oxidation step without any purification. A vigorously stirred suspension of SeO₂ (4 mg, 0.036 mmol) in anhydrous CH₂Cl₂ (5 ml) was added with tert-butyl hydroperoxide (13.2 µl, 0.094 mmol). After 30 minutes, anhydrous pyridine (40 µl) was added and the mixture was stirred for a further 25 minutes at room temperature, diluted with CH₂Cl₂ (3 ml) and cooled to 0 ° C. The crude 3,5-cyclovitamin product ( 6 ) in CH₂Cl₂ (4.5 ml) was then added and the reaction was allowed to proceed at 0 ° C for 15 minutes. The mixture was then allowed to warm slowly (30 minutes) to room temperature. The mixture was transferred to a separatory funnel and shaken with 30 ml of 10% NaOH. Ether (150 ml) was added and the separated organic phase was washed with 10% NaOH, water and dried over Na₂SO₄. Concentration to dryness under reduced pressure gave a yellow oily residue, which was purified on silica gel TLC plates which were developed in a 7: 3 mixture of hexane-ethyl acetate (R _f 0.35), giving the 1-hydroxycyclovitamin product was obtained (14.4 mg, 45%): NMR δ 0.55 (3H, s, 18-H₃), 0.64 (1H, m, 3-H), 0.88 (6H, d, J = 6.9 Hz, 26-H₃ and 27-H₃), 1.03 (3H, d, J = 6.9 Hz, 21-H₃), 3.26 (3H, s, -OCH₃), 4.2 ( 2H, m, 1-H and 6-H), 4.95 (1H, d, J = 9.3 Hz, 7-H), 5.1-5.4 (4H, br m, 19-H₂, 22-H and 23-H); Mass spectrum, m / e 412 (M⁺, 27), 380 (M⁺-MeOH, 46), 339 (22), (M⁺ side chain MeOH), 29), 245 (18), 135 (100). The above product contained predominantly the 1α-hydroxycyclovitamin D analog compound of structure ( 7 ) and a small amount of the corresponding 1β epimer. A solution of this 1-hydroxycyclovitamin D product (12 mg) in glacial acetic acid (0.5 ml) was heated to 55 ° C for 15 minutes. The mixture was poured carefully into ice / saturated NaHCO₃ and extracted with benzene and ether. The combined extracts were washed with water, dried (Na₂SO₄) and concentrated. The product mixture obtained was subjected to HPLC (1.5% 2-propanol in hexane as eluent) to obtain 4.9 mg of compound ( 8 ) (elution at 42 ml) and 3.1 mg of compound ( 9 ) ( Elution at 50 ml).

Verbindung (8): NMR δ 0,56 (3H, s, 18-H₃), 0,88 (6H, d, J = 7,0 Hz, 26-H₃ und 27-H₃), 1,02 (3H, d, J = 6,8 Hz, 21-H₃), 2,04 (3H, s, -OCOCH₃), 4,41 (1H, m, 1-H), 5,02 (1H, enges m, 19-H), 5,1-5,4 (4H, br m, 3-, 19-, 22- und 23-H), 6,03 und 6,35 (2H, AB q, J = 11,4 Hz, 7-H und 6-H); UV λ_max 264 nm, λ_min 227,5 nm; Massenspektrum, m/e 440 (M⁺, 15), 380 (M⁺-HOAc, 84), 362 (M⁺-HOAc-H₂O, 9), 269 (M⁺-Seitenketten- HOAc, 40), 251 (15), 135 (100), 134 (94).Compound ( 8 ): NMR δ 0.56 (3H, s, 18-H₃), 0.88 (6H, d, J = 7.0 Hz, 26-H₃ and 27-H₃), 1.02 (3H, d, J = 6.8 Hz, 21-H₃), 2.04 (3H, s, -OCOC H ₃), 4.41 (1H, m, 1-H), 5.02 (1H, narrow m, 19-H), 5.1-5.4 (4H, br m, 3-, 19-, 22- and 23-H), 6.03 and 6.35 (2H, AB q, J = 11.4 Hz, 7-H and 6-H); UV λ _max 264 nm, λ _min 227.5 nm; Mass spectrum, m / e 440 (M⁺, 15), 380 (M⁺-HOAc, 84), 362 (M⁺-HOAc-H₂O, 9), 269 (M⁺ side chain HOAc, 40), 251 (15 ), 135 (100), 134 (94).

Verbindung (9): NMR δ 0,57 (3H, s, 18-H₃), 0,89 (6H, d, J = 7,0 Hz, 26-H₃ und 27-H₃), 1,03 (3H, d, J = 6,8 Hz, 21-H₃), 2,04 (3H, s, -OCOCH₃), 4,49 (1H, m, 1-H), 5,00 und 5,14 (2H, jeweils enges m, 19-H₂), 5,25 (3H, br m, 3-, 22- und 23-H), 5,81 und 6,58 (2H, AB q, J = 12,0 Hz, 7-H und 6-H); UV λ_max 269,5 nm, λ_min 228 nm; Massenspektrum, m/e 440 (M⁺, 6), 380 (47), 269 (15), 135 (100), 134 (62).Compound ( 9 ): NMR δ 0.57 (3H, s, 18-H₃), 0.89 (6H, d, J = 7.0 Hz, 26-H₃ and 27-H₃), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz, 21-H₃), 2.04 (3H, s, -OCOC H ₃), 4.49 (1H, m, 1-H), 5.00 and 5.14 (2H , each narrow m, 19-H₂), 5.25 (3H, br m, 3-, 22- and 23-H), 5.81 and 6.58 (2H, AB q, J = 12.0 Hz, 7-H and 6-H); UV λ _max 269.5 nm, λ _min 228 nm; Mass spectrum, m / e 440 (M⁺, 6), 380 (47), 269 (15), 135 (100), 134 (62).

Ebenfalls wurde aus dem Solvolyse-Produktgemisch eine geringe Menge (0,87 mg) des 1β-Hydroxy-Epimers entsprechend der Verbindung (8) erhalten, welches durch die folgenden Daten charakterisiert ist: NMR δ 0,55 (3H, s, 18-H₃), 0,87 (6H, d, J = 6,9 Hz, 26-H₃ und 27-H₃), 1,01 (3H, d, J = 6,9 Hz, 21-H₃), 2,06 (3H, s, -OCOCH₃), 4,17 (1H, m, 1-H), 4,99 (2H, m, 3-H und 19-H), 5,1-5,4 (3H, br m, 19-, 22- und 23-H), 6,00 und 6,38 (2H, AB q, J = 11,3 Hz, 7-H und 6-H); UV λ_max 262,5 nm, λ_min 227 nm; Massenspektrum, m/e 440 (M⁺, 27), 380 (78), 362 (12), 269 (28), 251 (20), 135 (100), 134 (78).A small amount (0.87 mg) of the 1β-hydroxy epimer corresponding to the compound ( 8 ) was also obtained from the solvolysis product mixture, which is characterized by the following data: NMR δ 0.55 (3H, s, 18- H₃), 0.87 (6H, d, J = 6.9 Hz, 26-H₃ and 27-H₃), 1.01 (3H, d, J = 6.9 Hz, 21-H₃), 2.06 (3H, s, -OCOC H ₃), 4.17 (1H, m, 1-H), 4.99 (2H, m, 3-H and 19-H), 5.1-5.4 (3H , br m, 19-, 22- and 23-H), 6.00 and 6.38 (2H, AB q, J = 11.3 Hz, 7-H and 6-H); UV λ _max 262.5 nm, λ _min 227 nm; Mass spectrum, m / e 440 (M⁺, 27), 380 (78), 362 (12), 269 (28), 251 (20), 135 (100), 134 (78).

Hydrolyse der 3β-Acetoxygruppe in den Verbindungen (8) und (9)Hydrolysis of the 3β-acetoxy group in compounds ( 8 ) and ( 9 )

Eine Lösung des 3β-Acetoxyvitamin-Derivats (8) (0,7-6 mg) in Ethanol (0,1 ml) wurde mit 10% KOH in Methanol (0,8 ml) behandelt und das Gemisch wurde für 1 Stunde auf 50°C erhitzt. Nach der üblichen Aufarbeitung und abschließenden HPLC-Reinigung (8% 2-Propanol in Hexan als Eluationsmittel) wurde das 1α-3β-Diol der Struktur (10) in 84%iger Ausbeute erhalten: NMR δ 0,56 (3H, s, 18-H₃), 0,87) 6H, d, J = 7,0 Hz, 26-H₃ und 27-H₃), 1,02 (3H, d, J = 6,8 Hz, 21-H₃), 4,22 (1H, m, 3-H), 4,42 (1H, m, 1-H), 5,00 (1H, enges m, 19-H), 5,1-5,4 (3H, br m, 19-, 22- und 23-H), 6,01 und 6,38 (2H, AB q, J = 11,4 Hz, 7-H und 6-H); UV λ_max 264,5 nm, λ_min 227,5 nm; Massenspektrum, m/e 398 (M⁺, 21), 380 (M⁺-N₂O, 9), 2,87 (M⁺-Seitenkette, 6), 269 (M⁺-Seitenketten-H₂O, 8), 251 (5), 152 (38), 134 (100). Die Verbindung (10) eluiert bei 40 ml in dem obigen HPLC- System. A solution of the 3β-acetoxyvitamin derivative ( 8 ) (0.7-6 mg) in ethanol (0.1 ml) was treated with 10% KOH in methanol (0.8 ml) and the mixture was brought to 50 for 1 hour ° C heated. After the usual work-up and final HPLC purification (8% 2-propanol in hexane as eluent), the 1α-3β-diol of structure ( 10 ) was obtained in 84% yield: NMR δ 0.56 (3H, s, 18 -H₃), 0.87) 6H, d, J = 7.0 Hz, 26-H₃ and 27-H₃), 1.02 (3H, d, J = 6.8 Hz, 21-H₃), 4, 22 (1H, m, 3-H), 4.42 (1H, m, 1-H), 5.00 (1H, narrow m, 19-H), 5.1-5.4 (3H, br m , 19-, 22- and 23-H), 6.01 and 6.38 (2H, AB q, J = 11.4 Hz, 7-H and 6-H); UV λ _max 264.5 nm, λ _min 227.5 nm; Mass spectrum, m / e 398 (M⁺, 21), 380 (M⁺-N₂O, 9), 2.87 (M⁺ side chain, 6), 269 (M⁺ side chain H₂O, 8), 251 (5th ), 152 (38), 134 (100). Compound ( 10 ) elutes at 40 ml in the above HPLC system.

Die analoge Behandlung des Acetoxyderivats (9) ergab nach HPLC-Reinigung das 5,6-trans-1α,3β-Diol der Struktur (11) in 72%iger Ausbeute: NMR δ 0,58 (3H, s, 18-H₃), 0,87 (6H, d, J = 7,0 Hz, 26-H₃ und 27-H₃), 1,03 (3H, d, J = 6,8 Hz, 21-H₃), 4,24 (1H, m, 3-H), 4,49 (1H, m, 1-H), 4,97 und 5,13 (2H, jeweils enges m, 19-H₂), 5,25 (2H, br m, 22-H und 23-H), 5,88 und 6,58 (2H, AB q, J = 11,5 Hz, 7-H und 6-H); UV λ_max 273 nm, λ_min 229,5 nm; Massenspektrum, m/e 398 (M⁺, 21) 380 (5), 287 (6), 269 (5), 251 (4), 152 (33), 134 (100). Die Verbindung (11) eluiert bei 38 ml.The analogous treatment of the acetoxy derivative ( 9 ) after HPLC purification gave the 5,6-trans-1α, 3β-diol of structure ( 11 ) in 72% yield: NMR δ 0.58 (3H, s, 18-H₃) , 0.87 (6H, d, J = 7.0 Hz, 26-H₃ and 27-H₃), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz, 21-H₃), 4.24 (1H , m, 3-H), 4.49 (1H, m, 1-H), 4.97 and 5.13 (2H, each narrow m, 19-H₂), 5.25 (2H, br m, 22 -H and 23-H), 5.88 and 6.58 (2H, AB q, J = 11.5 Hz, 7-H and 6-H); UV λ _max 273 nm, λ _min 229.5 nm; Mass spectrum, m / e 398 (M⁺, 21) 380 (5), 287 (6), 269 (5), 251 (4), 152 (33), 134 (100). Compound ( 11 ) elutes at 38 ml.

25-Hydroxylierung der Verbindung (10)25-hydroxylation of compound ( 10 )

Das 5,6-cis-1α,3β-Diol der Struktur (10) gemäß obiger Darstellung wurde sodann 25-hydroxyliert nach dem folgenden Verfahren: Männliche Weanling-Ratten wurden mit einer Diät mit geringem Calcium-Vitamin-D-Mangel nach der Beschreibung von Suda et al., J. Nutr. 100, 1049 (1970) für 2 Wochen behandelt. Sie wurden durch Enthauptung getötet und ihre Lebern wurden entfernt. Ein 20%iges (w/v) Homogenisat wurde hergestellt in eisgekühlter 0,25 M Sucrose. Die Inkubation wurde in 10 ml Inkubationsmedium in einem 125 ml fassenden Erlenmeyer-Kolben durchgeführt, der eine aliquote Menge an Leberhomogenisat enthielt, die 1 g Gewebe, 0,125 M Sucrose, 50 mM Phosphatpuffer (pH 7,4), 22,4 mM Glucose-6-phosphat, 20 mM ATP, 160 mM Nicotinsäureamid, 25 mM Succinat, 0,4 mM NADP, 5 mM MgCl₂, 0,1 M KCl und 0,5 Einheiten Glucose-6-phosphat-dehydrogenase enthielt. Die Reaktion wurde initiiert durch Zugabe von 400 µg der Verbindung (10), die in 100 µl 95%igem Ethanol gelöst war. Das Gemisch wurde bei 37°C inkubiert unter Schütteln mit 80 Auslenkungen/min für 3 Stunden. Die Reaktion wurde durch Zugabe von 20 ml Methanol und 10 ml Dichlormethan gestoppt. Nach weiterer Zugabe von 10 ml Dichlormethan wurde die organische Phase gesammelt, während die wäßrige Phase mit 10 ml Dichlormethan erneut extrahiert wurde. Die organischen Phasen von insgesamt drei Extraktionen wurden vereint und mit einem Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand, der das gewünschte Produkt enthielt, wurde in 1 ml CHCl₃ : Hexan (65 : 35)-Gemisch gelöst und auf eine Sephadex-LH-20-Säule (0,7 cm × 14 cm) gepackt, äquilibriert und mit demselben Lösungsmittel eluiert. Die ersten 10 ml wurden verworfen, während die nächsten 40 ml gesammelt und eingedampft wurden. Der Rückstand wurde sodann in 8% 2-Propanol in Hexan gelöst und der Hochleistungs-Flüssigchromatographie unterworfen (Modell LC/GPC 204 HPLC, Waters Associates, Medford, MA) unter Verwendung einer Zorbax-Sil-Säule (4,6 mm × 25 cm, DuPont, Inc., Wilmington, DE), welche unter einem Druck von 1000 psi mit einer Fließgeschwindigkeit von 2 ml/min arbeitete. Das gewünschte 25-hydroxylierte Produkt wurde bei 42 ml eluiert. Das Produkt wurde ferner durch Hochleistungs- Flüssigchromatographie gereinigt, wobei eine Umkehrphasen-Säule verwendet wurde (Richrosorb Rp-18, 4,6 mm × 25 cm), die unter einem Druck von 1200 psi und einer Fließgeschwindigkeit von 2 ml/min betrieben wurde. Die Säule wurde mit 22% H₂O in Methanol eluiert und das Produkt wurde bei 50 ml eluiert. Das Produkt wurde ferner durch HPLC unter Verwendung von Zorbax-Sil gereinigt und die Bedingungen entsprachen der obigen Beschreibung. Das erhaltene Produkt wurde durch die folgenden Daten charakterisiert: UV-Absorption (95% Ethanol) λ_max 265 nm, λ_min 228 nm; Massenspektrum, m/z 414 (Molekül-Ion M⁺), 396 (M⁺-H₂O), 378 (M⁺-2 × H₂O), 287 (M⁺-Seitenkette), 269 (M⁺-Seitenketten- H₂O), 251 (M⁺-Seitenketten-2 × H₂O), 152 (Ring A, C 7/8 Bindungsspaltung), 134 (152-H₂O) und 59 ((CH₃)₂C=OH)⁺ erhalten aus der C24/25-Bindungsspaltung).The 5,6-cis-1α, 3β-diol of structure ( 10 ) as shown above was then 25-hydroxylated according to the following procedure: Male Weanling rats were dieted with a low calcium vitamin D deficiency as described by Suda et al., J. Nutr. 100, 1049 (1970) treated for 2 weeks. They were killed by beheading and their livers were removed. A 20% (w / v) homogenate was made in ice-cooled 0.25 M sucrose. Incubation was carried out in 10 ml incubation medium in a 125 ml Erlenmeyer flask containing an aliquot of liver homogenate containing 1 g tissue, 0.125 M sucrose, 50 mM phosphate buffer (pH 7.4), 22.4 mM glucose. 6-phosphate, 20 mM ATP, 160 mM nicotinamide, 25 mM succinate, 0.4 mM NADP, 5 mM MgCl₂, 0.1 M KCl and 0.5 units glucose-6-phosphate dehydrogenase contained. The reaction was initiated by adding 400 ug of compound ( 10 ), which was dissolved in 100 ul 95% ethanol. The mixture was incubated at 37 ° C with shaking at 80 deflections / min for 3 hours. The reaction was stopped by adding 20 ml of methanol and 10 ml of dichloromethane. After further addition of 10 ml of dichloromethane, the organic phase was collected while the aqueous phase was extracted again with 10 ml of dichloromethane. The organic phases from a total of three extractions were combined and concentrated using a rotary evaporator. The residue, which contained the desired product, was dissolved in 1 ml CHCl₃: hexane (65:35) mixture and packed on a Sephadex-LH-20 column (0.7 cm × 14 cm), equilibrated and with the same solvent eluted. The first 10 ml was discarded while the next 40 ml was collected and evaporated. The residue was then dissolved in 8% 2-propanol in hexane and subjected to high performance liquid chromatography (Model LC / GPC 204 HPLC, Waters Associates, Medford, MA) using a Zorbax-Sil column (4.6 mm x 25 cm , DuPont, Inc., Wilmington, DE) which operated under a pressure of 1000 psi at a flow rate of 2 ml / min. The desired 25-hydroxylated product was eluted at 42 ml. The product was further purified by high performance liquid chromatography using a reverse phase column (Richrosorb Rp-18, 4.6 mm x 25 cm) which was operated under a pressure of 1200 psi and a flow rate of 2 ml / min. The column was eluted with 22% H₂O in methanol and the product was eluted at 50 ml. The product was further purified by HPLC using Zorbax-Sil and the conditions were as described above. The product obtained was characterized by the following data: UV absorption (95% ethanol) λ _max 265 nm, λ _min 228 nm; Mass spectrum, m / z 414 (molecular ion M⁺), 396 (M⁺-H₂O), 378 (M⁺-2 × H₂O), 287 (M⁺ side chain), 269 (M⁺ side chain- H₂O), 251 (M⁺ side chains-2 × H₂O), 152 (ring A, C 7/8 bond cleavage), 134 (152-H₂O) and 59 ((CH₃) ₂C = OH) ⁺ obtained from the C24 / 25 bond cleavage) .

Die obigen Daten, insbesondere die charakteristische Ultraviolett-Absorption und die hervortretenden und diagnostischen Peaks bei m/z 152, 134 und 59 in dem Massenspektrum zeigen, daß es sich bei dem Produkt um die gewünschte 25-hydroxylierte Verbindung handelt, die durch die Struktur (12) (Verfahrensschema I) angegeben wird. The above data, in particular the characteristic ultraviolet absorption and the prominent and diagnostic peaks at m / z 152, 134 and 59 in the mass spectrum show that the product is the desired 25-hydroxylated compound which is characterized by the structure ( 12 ) (process scheme I) is given.

Wenn es gewünscht wird, können die erfindungsgemäßen Verbindungen leicht in kristalliner Form erhalten werden durch Umkristallisation aus geeigneten Lösungsmitteln, z. B. Hexan, Ethern, Alkoholen oder Gemischen davon, wie den Fachleuten auf diesem Gebiet bekannt ist.If desired, the compounds of the invention easily obtained in crystalline form by recrystallization from suitable solvents, e.g. B. hexane, ethers, alcohols or mixtures thereof, such as is known to those skilled in the art.

Biologische Aktivität der Seitenketten-Dehydrovitamin D- VerbindungenBiological activity of side chain dehydrovitamin D- links

Die biologische Wirksamkeit der oben beschriebenen Dehydrovitamin D-Analogverbindungen wurde durch Versuche in vivo an Ratten und im Vergleich mit 1α-Hydroxyvitamin D-Verbindungen bekannter Wirksamkeit nachgewiesen. Beide Produkte, (12) und die Schlüssel-Zwischenverbindung, Verbindung (10), wurden getestet und als hoch aktiv befunden.The biological activity of the dehydrovitamin D analog compounds described above was demonstrated by experiments in vivo in rats and in comparison with 1α-hydroxyvitamin D compounds of known activity. Both products, ( 12 ) and the key interconnect, compound ( 10 ), have been tested and found to be highly active.

Biologische Aktivität der Verbindung (10)Biological activity of the compound ( 10 )

Der Versuch wurde folgendermaßen durchgeführt: Männliche Weanling-Ratten wurden von der Firma Holtzman Co., Madison, WI, gekauft und ad libtum mit Wasser und einer Diät mit geringem Calciumgehalt, adäquatem Phosphor und Vitamin D-Mangel gemäß der Beschreibung von Suda et al. (J. Nutr. 100, 1049 [1970]) für drei Wochen gefüttert. Die Ratten wurden sodann in Gruppen von jeweils 6 Ratten eingeteilt und sie erhielten 650 pMol der Verbindung (10) oder von 1α-Hydroxyvitamin D₃ (1α-OH-D₃) gelöst in 0,05 ml 95%igem Ethanol intrajugular 18 Stunden vor ihrer Tötung. Die Ratten in der Kontrollgruppe bekamen den Ethanolträger in der gleichen Weise. Die Ratten wurden sodann durch Enthauptung getötet und das Blut wurde gesammelt. Das durch Zentrifugieren erhaltene Serum des Blutes wurde mit 0,1% Lanthanchloridlösung (1 : 20) verdünnt und die Serum-Calcium-Konzentration wurde mit einem Atomabsorptionsspektrophotometer gemessen. Die Ergebnisse sind in der nachstehenden Tabelle I angegeben: The experiment was carried out as follows: Male weanling rats were purchased from Holtzman Co., Madison, WI and ad libtum with water and a diet with a low calcium content, adequate phosphorus and vitamin D deficiency as described by Suda et al. (J. Nutr. 100, 1049 [1970]) for three weeks. The rats were then divided into groups of 6 rats each and they received 650 pmol of the compound ( 10 ) or of 1α-hydroxyvitamin D₃ (1α-OH-D₃) dissolved in 0.05 ml of 95% ethanol intrajugular 18 hours before their killing . The rats in the control group received the ethanol vehicle in the same way. The rats were then beheaded and the blood collected. The blood serum obtained by centrifugation was diluted with 0.1% lanthanum chloride solution (1:20) and the serum calcium concentration was measured with an atomic absorption spectrophotometer. The results are shown in Table I below:

Tabelle I Table I

Anstieg der Serum-Calcium-Konzentration als Reaktion auf eine Einzeldosis von 650 pMol der Verbindung (10) oder der Verbindung 1α-OH-D₃, verabreicht 18 Stunden vor der Tötung Increase in serum calcium concentration in response to a single dose of 650 pmol of compound ( 10 ) or compound 1α-OH-D₃ administered 18 hours before sacrifice

Biologische Aktivität der Verbindung (12)Biological activity of the compound ( 12 )

Die Untersuchung wurde gemäß folgender Beschreibung durchgeführt:
Männliche Weanling-Ratten wurden mit einer Diät mit geringem Calciumgehalt und Vitamin D-Mangel für 3 Wochen gemäß obiger Beschreibung behandelt. Sie wurden sodann in Gruppen von jeweils 5 Ratten unterteilt. Ratten in einer Kontrollgruppe erhielten 0,05 ml 95%iges Ethanol intrajugular, während Ratten in den Testgruppen 325 pMol der Verbindung (12) oder von 1α,25-Dihydroxyvitamin D₃ (1α,25-(OH)₂D₃) gelöst in 0,05 ml 95%igem Ethanol erhielten. 18 Stunden später wurden sie durch Enthauptung getötet und das Blut wurde gesammelt. Die Serum-Calcium- Konzentration wurde mit einem Atomabsorptionsspektrophotometer gemäß obiger Beschreibung ermittelt. Die Ergebnisse sind in der nachstehenden Tabelle II angegeben: The investigation was carried out according to the following description:
Male weanling rats were treated with a low calcium and vitamin D deficient diet for 3 weeks as described above. They were then divided into groups of 5 rats each. Rats in a control group received 0.05 ml of 95% ethanol intrajugular, while rats in the test groups 325 pmol of the compound ( 12 ) or of 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃ (1α, 25- (OH) ₂D₃) dissolved in 0.05 ml of 95% ethanol received. 18 hours later, they were beheaded and the blood was collected. The serum calcium concentration was determined using an atomic absorption spectrophotometer as described above. The results are shown in Table II below:

Tabelle II Table II

Anstieg der Serum-Calcium-Konzentration als Reaktion auf eine Einzeldosis von 325 pMol der Verbindung (12) oder der Verbindung 1α,25-(OH)₂D₃, verabreicht 18 Stunden vor der Tötung Increase in serum calcium concentration in response to a single dose of 325 pmol of compound ( 12 ) or compound 1α, 25- (OH) ₂D₃, administered 18 hours before sacrifice

Die obigen Ergebnisse zeigen, daß beide Verbindungen (10) und das Endprodukt (12) gemäß der Erfindung hoch aktiv sind bezüglich der Förderung eines Anstiegs der Serum- Calcium-Niveaus von Ratten mit Vitamin D-Mangel. Sie sind tatsächlich äquivalent bezüglich ihrer biologischen Wirksamkeit im Vergleich zu entsprechenden bekannten, in der Seitenkette gesättigten Verbindungen, 1α-OH-D₃ und 1α,25-(OH)₂D₃, deren hohe Wirksamkeit und pharmazeutische Verwendbarkeit durch viele Berichte allgemein und in der Patentliteratur (z. B. vergleiche Patentschrift 42 25 596) dokumentiert ist.The above results show that both compounds ( 10 ) and the final product ( 12 ) according to the invention are highly active in promoting an increase in serum calcium levels in rats with vitamin D deficiency. They are actually equivalent in terms of their biological activity in comparison to corresponding known compounds saturated in the side chain, 1α-OH-D₃ and 1α, 25- (OH) ₂D₃, the high effectiveness and pharmaceutical usability of many reports in general and in the patent literature ( e.g. see patent specification 42 25 596).

Besonders bemerkenswert und unerwartet ist die überlegene Aktivität von Verbindung (10) bei der Mineralisierung der Knochen von Tieren (Küken), die sich gegenüber der physiologischen Verwendung von Vitamin D₂-Verbindungen unterscheidet. Dies ist eine Verstärkung, welche durch die folgenden Daten erläutert wird.Particularly noteworthy and unexpected is the superior activity of compound ( 10 ) in mineralizing the bones of animals (chicks), which differs from the physiological use of vitamin D₂ compounds. This is a gain which is illustrated by the following data.

Verfahrenmethod

1 Tag alte weiße männliche Leghorn-Küken wurden von der Firma Northern Hatcheries (Beaver Dam, WI) erhalten. Sie wurden mit der Sojaproteindiat mit Vitamin D-Mangel gemäß der Beschreibung in Omdahl et al. (Biochemistry 10, 2935, 2940, 1971) für 3 Wochen gefüttert, wonach sie einen Vitamin D-Mangel aufwiesen. Sie wurden sodann in Gruppen von jeweils 6 Küken eingeteilt. Eine Gruppe erhielt Wesson-Öl- Träger oral verabfolgt; die anderen Gruppen erhielten die angegebene Verbindung (vgl. Tabelle III) gelöst in derselben Menge von Wesson-Öl jeden Tag für eine Zeit von 7 Tagen. 24 Stunden nach der letzten Verabfolgung wurden alle Küken durch Umdrehen des Halses getötet. Ihre Tibiae (Schienbeine) wurden entfernt und von anhaftendem weichem und Verbundgewebe befreit und für 24 Stunden in Alkohol extrahiert, woran sich 24 Stunden in Diethylether unter Verwendung eines Soxhlet-Extraktors angeschlossen. Die Knochen wurden sodann bei 100°F auf ein konstantes Gewicht getrocknet und gewogen. Sie wurden sodann bei 650°C für 24 Stunden in einem Muffelofen verascht. Die Asche wurde gewogen und der prozentuale Aschegehalt in jedem der Tibiae wurde berechnet. Die Ergebnisse sind in der Tabelle III nachfolgend aufgeführt.1 day old white male Leghorn chicks were bred by the Northern Hatcheries (Beaver Dam, WI). they were according to the soy protein diet with vitamin D deficiency the description in Omdahl et al. (Biochemistry 10, 2935, 2940, 1971) for 3 weeks, after which they received a vitamin D lack. They were then divided into groups of 6 chicks each. One group received Wesson oil Carrier administered orally; the other groups received the specified compound (cf. Table III) dissolved in the same Amount of Wesson oil every day for a period of 7 days. 24 hours after the last administration all chicks killed by turning their necks. Your tibiae (Shins) were removed and adherent soft and composite tissue freed and in alcohol for 24 hours extracted, whereupon 24 hours in diethyl ether Connected using a Soxhlet extractor. The bones were then dried to constant weight at 100 ° F and weighed. They were then at 650 ° C for Ashed for 24 hours in a muffle furnace. The ashes were weighed and the percentage ash content in each of the Tibiae was calculated. The results are in the table III listed below.

Tabelle III Table III

Mineralisierung von rachitischen Kükenknochen Mineralization of rachitic chick bones

Die Ergebnisse zeigen, daß 130 pMol von 1,25-(OH)₂D₃ oder 1α-OH-D₃ oder von der neuen Verbindung (10) gemäß der Erfindung in gleichem Maß wirksam sind bezüglich der Steigerung des Mineralgehaltes der rachitischen Tibia. Um jedoch das gleiche Maß an Effektivität zu erreichen, waren 1300 pMol 1α-OH-D₂ erforderlich. Dies stimmt mit den vorangehenden Ergebnissen überein, worin gezeigt wurde, daß eine 10fach größere Dosis von 1α-OH-D₂ als von 1α-OH-D₃ erforderlich ist, um die gleiche Mineralisierung der Tibia von rachitischen Küken zu erzeugen. Diese Ergebnisse zeigen überraschenderweise, daß die Verbindung (10), obwohl sie eine Analogverbindung von 1α-OH-D₂ ist, eine unerwartete und überlegene Wirksamkeit bezüglich der Mineralisierung der Knochen von Tieren bietet, als sie bekannt ist zur Unterscheidung gegen die Vitamin D₂-Verbindungen in physiologischer Verwendung. Dies ist ein unerwartetes Merkmal dieser neuen Analogverbindung und zu deren Anwendung. Da diese unerwartete Aktivität in vivo der Verbindung (10) unzweifelhaft nach der Hydroxylierung zur entsprechenden 1α,25-Dihydroxyverbindung (Verbindung (12)) in vivo auftritt, sollte die Verbindung, d. h. Verbindung (12), welche die 24-Desmethyl-Analogverbindung von der bekannten Verbindung 1α,25-Dihydroxyvitamin D₃ ist, wirksam sein, um eine Knochenmineralisation bei Küken zu schaffen, die äquivalent zu derjenigen ist, die durch 1α,25-Dihydroxyvitamin D₃ gezeigt wird; somit würde diese neue Vitamin D₂-Analogverbindung in Küken voll wirksam sein. Diese hohe Wirksamkeit der Verbindungen (10) und (12) in einem Tier, welche sie gegenüber Derivaten vom Vitamin D₂-Typ unterscheidet ist neu und ein unterscheidendes Merkmal dieser Substanzen.The results show that 130 pmol of 1,25- (OH) ₂D₃ or 1α-OH-D₃ or of the new compound ( 10 ) according to the invention are equally effective in increasing the mineral content of the rachitic tibia. However, to achieve the same level of effectiveness, 1300 pmoles of 1α-OH-D₂ were required. This is consistent with the previous results, which have shown that a 10-fold greater dose of 1α-OH-D₂ than 1α-OH-D₃ is required to produce the same tibial mineralization of rachitic chicks. These results surprisingly show that compound ( 10 ), while being an analogue of 1α-OH-D₂, offers unexpected and superior activity in mineralizing animal bones than is known to distinguish it from vitamin D₂ compounds in physiological use. This is an unexpected feature of this new analog connection and its application. Since this unexpected activity in vivo of compound ( 10 ) undoubtedly occurs after the hydroxylation to the corresponding 1α, 25-dihydroxy compound (compound ( 12 )) in vivo, the compound, ie compound ( 12 ), which is the 24-desmethyl analogue compound of the known compound 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃ is effective to provide chick bone mineralization equivalent to that shown by 1α, 25-dihydroxyvitamin D₃; thus this new vitamin D₂ analogue compound would be fully effective in chicks. This high activity of the compounds ( 10 ) and ( 12 ) in an animal, which differentiates them from derivatives of the vitamin D₂ type, is new and a distinguishing feature of these substances.

Aufgrund der ausgeprägten biologischen Aktivität werden die erfindungsgemäßen Verbindungen leicht Anwendung finden als Ersatz für verschiedene der bekannten Vitamine D-Metaboliten in der Therapie oder Prophylaxe von Unregelmäßigkeiten des Calcium-Metabolismus, wie Rachitis, Hypoparathyroidismus, Osteodystrophie, Knochenerweichung oder Osteoporose bei Menschen oder verwandten Calcium- Mangel-Erkrankungen (z. B. Milchfieber) bei Tieren. Entsprechend können diese Verbindungen bei der Behandlung von bestimmten bösartigen Erkrankungen, z. B. bei menschlicher Leukämie, eingesetzt werden. Unter Berücksichtigung der ausgeprägten und unerwarteten Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen (Verbindungen (10) und (12)) bei der Förderung der Mineralisierung von Knochen bei Vögeln (vgl. Tabelle III) können diese Verbindungen eine spezielle Verwendung haben bei der Abwendung oder der Behandlung von Zuständen, die durch Calcium-Ungleichgewicht erzeugt werden (z. B. Dünne der Eischale, Schwäche von Geflügelbeinen) bei Geflügel, wobei alle die bekannten Vitamin D₂-Derivate eine sehr schlechte Wirksamkeit aufweisen.Due to the pronounced biological activity, the compounds according to the invention are easily used as a replacement for various of the known vitamin D metabolites in the therapy or prophylaxis of irregularities in calcium metabolism, such as rickets, hypoparathyroidism, osteodystrophy, bone softening or osteoporosis in humans or related calcium Deficiency diseases (e.g. milk fever) in animals. Accordingly, these compounds can be used in the treatment of certain malignant diseases, e.g. B. be used in human leukemia. Taking into account the pronounced and unexpected effectiveness of the compounds according to the invention (compounds ( 10 ) and ( 12 )) in promoting the mineralization of bone in birds (cf. Table III), these compounds can have a special use in the prevention or treatment of conditions , which are produced by calcium imbalance (e.g. thinness of the eggshell, weakness of poultry legs) in poultry, where all the known vitamin D₂ derivatives have a very poor effectiveness.

Zu therapeutischen Zwecken können die erfindungsgemäßen Verbindungen auf jede herkömmliche Weise und in jeder Form, die für die ausgewählte Verabreichungsart geeignet ist, angewandt werden. Die Verbindungen können mit jedem verträglichen und unschädlichen pharmazeutischen Träger formuliert werden in Form von Pillen, Tabletten, Gelatinekapseln oder Suppositorien oder als Lösungen, Emulsionen, Dispersionen oder Suspensionen in unschädlichen Lösungsmitteln oder Ölen. Eine derartige Formulierung kann andere therapeutisch wirksame und vorteilhafte Bestandteile enthalten, wie sie für die speziellen Anwendungen zweckmäßig sein können. Für die Verabreichung an Menschen werden die Verbindungen vorteilhafterweise in Mengen von 0,5 bis 10 µg pro Tag angewandt, wobei die spezielle Dosis eingestellt wird unter Berücksichtigung der im Einzelfall verabreichten Verbindung, der zu behandelnden Krankheit und dem Zustand sowie der Ansprache des Patienten. The compounds according to the invention can be used for therapeutic purposes any conventional way and in any form, which is suitable for the selected route of administration, be applied. The connections can be made with any compatible and harmless pharmaceutical carriers are in the form of pills, tablets, gelatin capsules or suppositories or as solutions, emulsions, Dispersions or suspensions in harmless solvents or oils. Such a formulation can other therapeutically effective and beneficial Contain ingredients as they are for special applications can be useful. For administration to Humans will advantageously use the connections Amounts of 0.5 to 10 µg applied per day, the special dose is set taking into account the compound administered in the individual case, the one to be treated Disease and the condition as well as the address of the Patient.

Verfahrensschema I Process Scheme I

Claims

1. 1α,3β(9,10-Secocholesta-5Z,7E,10(19))-22E-tetraen-1,3-diol- Derivate der allgemeinen Formel I worin R ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxylgruppe darstellt.1. 1α, 3β (9,10-secocholesta-5Z, 7E, 10 (19)) - 22E-tetraen-1,3-diol derivatives of the general formula I wherein R represents a hydrogen atom or a hydroxyl group.

2. Arzneimittel, enthaltend eine der Verbindung nach Anspruch 1 zusammen mit einem pharmazeutisch unbedenklichen Exzipienten.2. Medicament containing one of the compound according to claim 1 together with a pharmaceutically acceptable excipient.