CH667658A5 - 1-ALPHA HYDROXYVITAMIN D2 ANALOG COMPOUNDS. - Google Patents

Description

BESCHREIBUNG DESCRIPTION

Technisches Gebiet Technical field

Die Erfindung betrifft biologisch aktive Vitamin D-Verbindungen. Insbesondere betrifft die Verbindung la-Hydro-xyvitamin D2-Analogverbindungen, welche unerwartete biologische Eigenschaften aufweisen. The invention relates to biologically active vitamin D compounds. In particular, the compound relates to la-hydro-xyvitamin D2 analog compounds which have unexpected biological properties.

Stand der Technik State of the art

Aufgrund der gut bekannten und deutlich festgelegten Wirksamkeit von la-Hydroxyvitamin D-Verbindungen bei der Calcium- und Phosphathomöostase bei Tieren oder Menschen bestand ein Interesse an der Herstellung der natürlichen Metaboliten und an der Entdeckung von Analogverbindungen mit geeigneten biologischen Eigenschaften. Dies hat zur Herstellung einer Vielzahl von Verbindungen geführt, die biologische Aktivität aufweisen (beispielsweise vgl. DeLuca et al., Topics in Current Chem., Band 83, Seite 1 (1979); Ann. Rev. Biochem. 52, 411 (1983); Yakhimovich, Russian Chem. Rev. 49, 371 (1980)). Das Interesse an derartigen Verbindungen besteht weiterhin, insbesondere deswegen, weil erkannt wurde, dass zusätzlich zu ihrer klassischen Funktion als Regulatoren der Calcium-Homöostase bestimmte Vitamin D-Derivate, insbesondere la,25-Dihydro-xyvitamin D3 und la-Hydroxyvitamin D3 ebenso Zell-Diffe-renzierungsprozesse beeinflussen und in der Lage sind, das Wachstum und die Verbreitung bestimmter Leukämiezellen zu inhibieren [Suda et al., US-PS 4 391 802; Suda et al., Due to the well-known and clearly defined effectiveness of la-hydroxyvitamin D compounds in calcium and phosphate homeostasis in animals or humans, there was interest in the production of natural metabolites and in the discovery of analogue compounds with suitable biological properties. This has resulted in the production of a variety of compounds that have biological activity (for example, see DeLuca et al., Topics in Current Chem., Volume 83, page 1 (1979); Ann. Rev. Biochem. 52, 411 (1983) ; Yakhimovich, Russian Chem. Rev. 49, 371 (1980)). Interest in such compounds continues, in particular because it has been recognized that, in addition to their classic function as regulators of calcium homeostasis, certain vitamin D derivatives, in particular la, 25-dihydro-xyvitamin D3 and la-hydroxyvitamin D3, are also cell- Affect differentiation processes and are able to inhibit the growth and proliferation of certain leukemia cells [Suda et al., U.S. Patent 4,391,802; Suda et al.,

Proc. Nati. Acad. USA 80, 201 (1983); Reitsma et al., Nature, 306, 492-494 (1983)]. Proc. Nati. Acad. USA 80, 201 (1983); Reitsma et al., Nature, 306, 492-494 (1983)].

Die meisten der bekannten Vitamin D-Metaboliten und -Analogverbindungen sind Derivate der Vitamin D3-Serie, d.h. sie besitzen gesättigte Steroid-Seitenketten. In der Seitenkette ungesättigte Vitamin D-Verbindungen sind jedoch ebenfalls bekannt, nämlich bestimmte Hydroxyderivate von Vitamin D2, wie 25-Hydroxyvitamin D2 (US-Patentschrift 3 585 221), 1 a,25-Dihydroxyvitamin D2 (US-Patentschrift 3 880 894), die 24-Hydroxy- und 24,25-Dihydroxyvitamin D2-Metaboliten (Jones et al., Arch. Biochem. Biophys. 202, 450 (1980)), la-Hydroxyvitamin D2 (US-Patentschrift 3 907 843), wie auch bestimmte verwandte 22-trans-Dehy- Most of the known vitamin D metabolites and analogue compounds are derivatives of the vitamin D3 series, i.e. they have saturated steroid side chains. However, unsaturated vitamin D compounds in the side chain are also known, namely certain hydroxy derivatives of vitamin D2, such as 25-hydroxyvitamin D2 (US Pat. No. 3,585,221), 1a, 25-dihydroxyvitamin D2 (US Pat. No. 3,880,894), the 24-hydroxy and 24,25-dihydroxyvitamin D2 metabolites (Jones et al., Arch. Biochem. Biophys. 202, 450 (1980)), la-hydroxyvitamin D2 (U.S. Patent 3,907,843), as well as certain related 22-trans-dehy-

dro-Verbindungen, welchen der 24-Methylsubstituent fehlt, wie sie beschrieben sind in der US-Patentschrift 3 786 062 und von Bogoslovskii et al., (J. Gen. Chem. USSR 48 (4), 828 (1978); Chem. Abstr. 89, 163848j, 89, 209016s). dro compounds lacking the 24-methyl substituent as described in U.S. Patent 3,786,062 and by Bogoslovskii et al., (J. Gen. Chem. USSR 48 (4), 828 (1978); Chem. Abstr. 89, 163848j, 89, 209016s).

Darstellung der Erfindung Presentation of the invention

Es sind nun neue Vitamin D-Analogverbindungen hergestellt worden, welche durch die Struktur charakterisiert sind, worin R ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxylgruppe bedeutet. Die erfindungsgemässe Verbindung, worin R ein Wasserstoffatom darstellt, kann als eine Zwischen Verbindung bei der Herstellung der Verbindung erhalten werden, in der R eine Hydroxylgruppe ist. New vitamin D analog compounds have now been produced, which are characterized by the structure in which R denotes a hydrogen atom or a hydroxyl group. The compound of the present invention, wherein R represents a hydrogen atom, can be obtained as an intermediate in the preparation of the compound in which R is a hydroxyl group.

Strukturmässig sind die erfindungsgemässen Verbindungen Analogverbindungen der Hydroxyvitamin D2-Verbin-dungen, denen der 24-Methylsubstituent fehlt, d.h. die Verbindungen sind la-Hydroxy-28-norvitamin D2 bzw. la,25-Dihydroxy-28 -norvitamin D2. In terms of structure, the compounds according to the invention are analogous compounds of the hydroxyvitamin D2 compounds which lack the 24-methyl substituent, i.e. the compounds are la-hydroxy-28-norvitamin D2 and la, 25-dihydroxy-28-norvitamin D2.

Sowohl das Produkt als auch die Zwischenverbindung zeigen eine starke biologische Aktivität und sind durch ein unerwartetes und neues Muster an Aktivität, wie es näher weiter unten beschrieben wird, charakterisiert. Both the product and the intermediate show strong biological activity and are characterized by an unexpected and new pattern of activity as described in more detail below.

Eine Ausführungsform des chemischen Verfahrens, welches zu den oben angegebenen Verbindungen führt, ist in dem Verfahrensschema I aufgezeichnet. In der folgenden Beschreibung dieses Verfahrens und in den Beispielen und Tabellen beziehen sich die durch arabische Zahlen angegebenen Verbindungszeichnungen (z.B. (1), (2), (3), . .. (10), (11), (12)) auf die so numerierten Strukturen in dem Verfahrensschema. An embodiment of the chemical process which leads to the compounds indicated above is recorded in process scheme I. In the following description of this process and in the examples and tables, the connection drawings indicated by Arabic numbers (for example (1), (2), (3), ... (10), (11), (12)) refer to the structures numbered in this way in the process scheme.

Das Ausgangsmaterial ist der Dien-geschützte Aldehyd der Struktur (1) (vgl. Verfahrensschema I), der aus dem Er-gosterolacetat nach dem Verfahren von Barton et al., (J.Chem.Soc. (C) 1968 (1971)) hergestellt worden ist. Die Umsetzung des Aldehyds (1) mit 3-Methyl-l -butylphenyl-sulfon der nachstehend angegebenen Struktur The starting material is the diene-protected aldehyde of structure (1) (cf. Process Scheme I), which is derived from the ergosterol acetate by the method of Barton et al., (J.Chem.Soc. (C) 1968 (1971)) has been manufactured. The reaction of the aldehyde (1) with 3-methyl-1-butylphenyl sulfone of the structure given below

(CH3)2CHCH2CH2-S02Ph in einem organischen Lösungsmittel in Gegenwart einer starken organischen Base ergibt die Hydroxysulfon-Zwischen-verbindung der Struktur (2 , wie sie in dem Verfahrensschema I dargestellt ist. Die Behandlung der Zwischenverbindung (2) mit Natriumamalgam in gepufferter Alkohollösung liefert dann das 22,23-trans-Olefin (22E-01efin) der Struktur (3). (CH3) 2CHCH2CH2-S02Ph in an organic solvent in the presence of a strong organic base gives the hydroxysulfone intermediate of structure (2, as shown in Process Scheme I). Treatment of intermediate (2) with sodium amalgam in buffered alcohol solution provides then the 22,23-trans olefin (22E-01efin) of structure (3).

Die Umsetzung des 22E-01eflns (3) mit einem starken Hydrid-Reduktionsmittel (z.B. LiAlH4) in einem Ether-Lö-sungsmittel ergibt die 5,7-Dien-Zwischenverbindung (4). Diese Zwischenverbindung wird sodann mit ultraviolettem Licht in einem organischen Lösungsmittel bestrahlt, um das entsprechende Provitamin D-Derivat zu erhalten, welches isoliert wird und in einem organischen Lösungsmittel auf eine Temperatur erhitzt wird, die sich im Bereich von Raumtemperatur bis zur Rückflusstemperatur bewegt, um das Provitamin D-Chromophor zu dem Vitamin D-Chromo-phor zu isomerisieren, wodurch die 22E-Dehydrovitamin The reaction of the 22E-01efln (3) with a strong hydride reducing agent (e.g. LiAlH4) in an ether solvent gives the 5,7-diene intermediate (4). This intermediate compound is then irradiated with ultraviolet light in an organic solvent to obtain the corresponding provitamin D derivative, which is isolated and heated in an organic solvent to a temperature ranging from room temperature to the reflux temperature, around which Provitamin D chromophore to isomerize to the vitamin D chromophore, causing the 22E dehydrovitamin

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

3 3rd

667 658 667 658

D3-Verbindung der Struktur (5) erhalten wird. Verbindung (5) ist eine bekannte Vitamin D-Analogverbindung, die zuvor nach einem weniger bequemen Verfahren hergestellt wurde (Bogoslovskii et al., an oben angegebener Stelle). D3 compound of structure (5) is obtained. Compound (5) is a known vitamin D analogue compound previously prepared using a less convenient method (Bogoslovskii et al., Supra).

Die Zwischenverbindung (5) wird sodann am Kohlenstoffatom 1 hydroxyliert nach dem allgemeinen Verfahren von DeLuca et al. (US-Patentschriften 4 195 027 und 4 260 549). Diese Reaktionsschritte umfassen die Reaktion der Verbindung (5) mit Toluolsulfonylchlorid in herkömmlicher Weise, um das entsprechende 3ß-Tosylatderivat zu erhalten, welches direkt in gepuffertem Methanol solvolysiert wird, um die 3,5-Cyclovitamin D-Zwischenverbindung zu erhalten, welche durch die Struktur (6) im Verfahrensschema I angegeben ist. Durch Behandlung der letzteren Verbindung mit Selendioxid und tert.-Butylhydroperoxid wird nach chromatographischer Reinigung das entsprechende 1-hydro-xylierte Produkt erhalten, welches überwiegend die la-Hy-droxycyclovitamin D-Verbindung der Struktur (7) enthält. Eine kleine Menge des entsprechenden 1 ß-Hydroxy-Epimers kann ebenfalls in dem Produkt erhalten sein, jedoch ist die Trennung der Epimeren, obwohl diese mittels Chromatographie möglich ist, in dieser Stufe nicht erforderlich. Das Erhitzen dieser 1-Hydroxycyclo vitamin D-Zwischen Verbindung in Eisessig bei 40 bis 60 ' C liefert sodann ein Gemisch der 3-acetylierten Solvolyseprodukte, woraus durch Chromatographie die 5,6-cis- bzw. 5,6-trans-Verbindungen der Strukturen (8) und (9) isoliert werden. Wenn das 1-Hydroxy-cyclovitamin D-Produkt, welches der Solvolyse unterworfen wird, einen Anteil 1 ß-Hydroxy-Epimer enthielt, so enthält das Solvolysegemisch ebenfalls die 1 ß-Hydroxy-Epimeren entsprechend zu den Verbindungen (8) oder (9) und, sofern dies gewünscht wird, können diese Verbindungen durch Chromatographie isoliert werden. Intermediate (5) is then hydroxylated on carbon 1 by the general procedure of DeLuca et al. (U.S. Patents 4,195,027 and 4,260,549). These reaction steps involve reacting Compound (5) with toluenesulfonyl chloride in a conventional manner to obtain the corresponding 3β-tosylate derivative, which is solvolysed directly in buffered methanol to obtain the 3,5-cyclovitamin D intermediate, which by structure (6) is specified in process scheme I. Treatment of the latter compound with selenium dioxide and tert-butyl hydroperoxide gives the corresponding 1-hydro-xylated product after chromatographic purification, which predominantly contains the la-hydroxycyclovitamin D compound of structure (7). A small amount of the corresponding 1β-hydroxy epimer can also be obtained in the product, but the separation of the epimers, although possible by means of chromatography, is not necessary at this stage. Heating this 1-hydroxycyclo vitamin D intermediate compound in glacial acetic acid at 40 to 60 ° C then provides a mixture of the 3-acetylated solvolysis products, from which the 5,6-cis or 5,6-trans compounds of the structures are obtained by chromatography (8) and (9) are isolated. If the 1-hydroxy-cyclovitamin D product which is subjected to solvolysis contains a portion of 1β-hydroxy-epimer, the solvolysis mixture also contains the 1β-hydroxy-epimers corresponding to compounds (8) or (9) and, if desired, these compounds can be isolated by chromatography.

Die herkömmliche Basenhydrolyse der Acetatfunktion in der Verbindung (8) ergibt das Diolprodukt der Struktur (10). Conventional base hydrolysis of the acetate function in compound (8) gives the diol product of structure (10).

Dieses Diol (10) wird sodann einer enzymatischen Hy-droxylierung am Kohlenstoffatom 25 in vitro unterworfen, wobei ein Leberhomogenisat verwendet wird, welches von Ratten mit Vitamin D-Mangel hergestellt wurde (gemäss der Beschreibung in der US-Patentschrift 4 307 025), um nach chromatographischer Trennung des Produktgemisches das gewünschte la,25-dihydroxylierte Produkt in reiner Form zu erhalten, welches durch die Struktur (12) angegeben ist. This diol (10) is then subjected to enzymatic hydroxylation on carbon atom 25 in vitro using a liver homogenate made by rats deficient in vitamin D (as described in US Pat. No. 4,307,025) after chromatographic separation of the product mixture to obtain the desired la, 25-dihydroxylated product in pure form, which is indicated by the structure (12).

In der folgenden detaillierten Beschreibung des Syntheseverfahrens, welches oben in Grundzügen dargestellt wurde, wurden die physikochemischen Daten erhalten unter Verwendung der unten angegebenen Verfahren und Vorrichtungen. Hochdruck-Flüssigkeitschromatographie (HPLC) wurde mittels der Vorrichtung der Firma Waters Associates Model ALC/GPC 204 unter Verwendung einer Säule aus Zor-bax-Sil (DuPont) (6,2 mm x 25 cm Abmessungen der Säule, Fliessgeschwindigkeit 4 ml/min, 1500 psi) durchgeführt. Die Säulenchromatographie wurde durchgeführt über Silikagel 60, 70-230 mesh ASTM (Merck). Die präparative Dünnschichtchromatographie (TLC) wurde durchgeführt über Si-lika 60 PF-254 (20 x 20 cm-Platten, 1 mm Silikagel). Die Bestrahlungen wurden durchgeführt unter Verwendung einer Quecksilberdampflampe Hanovia 608A36, die mit einem Vycor-Filter ausgerüstet war. Alle Reaktionen werden vorzugsweise unter einer Inertgasatmosphäre durchgeführt (z.B. Argon). In the following detailed description of the synthetic procedure outlined above, the physicochemical data were obtained using the procedures and devices given below. High pressure liquid chromatography (HPLC) was carried out using the device from Waters Associates Model ALC / GPC 204 using a column made of Zor-bax-Sil (DuPont) (6.2 mm × 25 cm dimensions of the column, flow rate 4 ml / min, 1500 psi). Column chromatography was performed on silica gel 60, 70-230 mesh ASTM (Merck). Preparative thin layer chromatography (TLC) was carried out over Si-lika 60 PF-254 (20 x 20 cm plates, 1 mm silica gel). Irradiations were carried out using a Hanovia 608A36 mercury lamp equipped with a Vycor filter. All reactions are preferably carried out under an inert gas atmosphere (e.g. argon).

3-Methyl-l -butylphenylsulfon (Isopentylphenylsulfon) 3-methyl-1-butylphenyl sulfone (isopentylphenyl sulfone)

PhS02Na (1,97 g, 12 mMol) wurde zu einer gerührten Lösung von 3-Methyl -1-brombutan (1,51 g 1,2 ml, 10 mMol) in DMF (20 ml) bei 75 °C gegeben. Das Gemisch wurde 5 Stunden auf 75 °C erhitzt, sodann abgekühlt, in PhS02Na (1.97 g, 12 mmol) was added to a stirred solution of 3-methyl-1-bromobutane (1.51 g 1.2 ml, 10 mmol) in DMF (20 ml) at 75 ° C. The mixture was heated at 75 ° C for 5 hours, then cooled, in

Wasser eingegossen und mit Benzol extrahiert. Die organische Schicht wurde mit 5% HCl, 5% NaHC03 und Wasser gewaschen, über Na2S04 getrocknet und eingedampft. Das ölige Sulfonprodukt (1,69 g, 80%) war im wesentlichen rein 5 und wurde ohne jegliche Reinigung verwendet; NMR 5 0,88 (6H, d, J = 6,5 Hz, 2 x CH3), 1,61 (3H,m, CH2-CH), 3,08 (2H, m, S02-CH2-), 7,50-7,95 (5H, m, Ar-H); IR: 1300 (br), 1147, 1088, 745, 692, 564, 539 cm-1; Massenspektrum m/e 212 (M+, 3), 143 (92), 77 (57), 71 (73), 70 (73), 55 (42), io 43 (100), 41 (47). Poured in water and extracted with benzene. The organic layer was washed with 5% HCl, 5% NaHC03 and water, dried over Na2S04 and evaporated. The oily sulfone product (1.69 g, 80%) was essentially pure 5 and was used without any purification; NMR 5 0.88 (6H, d, J = 6.5 Hz, 2 x CH3), 1.61 (3H, m, CH2-CH), 3.08 (2H, m, S02-CH2-), 7 , 50-7.95 (5H, m, Ar-H); IR: 1300 (br), 1147, 1088, 745, 692, 564, 539 cm-1; Mass spectrum m / e 212 (M +, 3), 143 (92), 77 (57), 71 (73), 70 (73), 55 (42), io 43 (100), 41 (47).

(22E)-5a,8a-(4-Phenyl-l,2-urazol) -cholesta-6,22-dien-3$ -ol (22E) -5a, 8a- (4-phenyl-1,2-urazole) cholesta-6,22-diene-3 $ -ol

(3) (3)

n-Butyllithium (1,7 M-Lösung in Hexan, 4,12 ml, 7 15 mMol) wurde einer gerührten Lösung von Diisopropylamin (707 mg, 1 ml, 7 mMol) in wasserfreiem THF (14 ml) zugesetzt und das Gemisch wurde 15 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Das Sulfon gemäss der Herstellung in Beispiel 1 (1,50 g, 7,07 mMol) in wasserfreiem THF (11 ml) wurde in-20 nerhalb von 10 Minuten tropfenweise zugesetzt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur gerührt für weitere 15 Minuten, sodann abgekühlt auf 0 °C und der Aldehyd (1) (545 mg, 1 mMol) in wasserfreiem THF (7 ml) wurde zugesetzt. Das Rühren wurde 2 Stunden bei 0 °C fortgesetzt und die Lö-25 sung wurde langsam auf Raumtemperatur erwärmt (30 Minuten). Das Gemisch (welches das Hydroxysulfonprodukt (2) enthielt) wurde in gesättigte Lösung von Na2HP04 in Methanol (200 ml) eingegossen, Natriumamalgam (5,65%, 10 g) wurde zugesetzt und das Reaktionsgemisch wurde für 30 17 Stunden bei 4 °C gerührt. Ausgefallenes Quecksilber wurde abfiltriert und nach der Einengung des Reaktionsgemisches auf etwa 5 ml wurde es mit Wasser verdünnt und mit Methylenchlorid extrahiert. Der organische Extrakt wurde mit Wasser gewaschen, getrocknet (Na2S04), unter ver-35 mindertem Druck eingeengt und der ölige Rückstand wurde über eine Silikagelsäule chromatographiert. Überschüssiges Sulfonreagens wurde mit Benzol-Ether (7:3)-Gemisch eluiert. n-Butyllithium (1.7 M solution in hexane, 4.12 ml, 7 15 mmol) was added to a stirred solution of diisopropylamine (707 mg, 1 ml, 7 mmol) in anhydrous THF (14 ml) and the mixture was added Stirred for 15 minutes at room temperature. The sulfone as prepared in Example 1 (1.50 g, 7.07 mmol) in anhydrous THF (11 ml) was added dropwise over 20 minutes. The solution was stirred at room temperature for an additional 15 minutes, then cooled to 0 ° C and the aldehyde (1) (545 mg, 1 mmol) in anhydrous THF (7 ml) was added. Stirring was continued at 0 ° C for 2 hours and the solution was slowly warmed to room temperature (30 minutes). The mixture (containing the hydroxysulfone product (2)) was poured into saturated solution of Na2HP04 in methanol (200 ml), sodium amalgam (5.65%, 10 g) was added and the reaction mixture was stirred at 4 ° C for 30 hours . Precipitated mercury was filtered off and after the reaction mixture was concentrated to about 5 ml, it was diluted with water and extracted with methylene chloride. The organic extract was washed with water, dried (Na2SO4), concentrated under reduced pressure and the oily residue was chromatographed on a silica gel column. Excess sulfone reagent was eluted with benzene-ether (7: 3) mixture.

Die Eluation mit Benzol-Ether (6:4) lieferte das reine Pro-40 dukt (3) (375 mg, 67%) als einen Schaum: NMR 5 0,81 (3H, s, 18-H3), 0,86 (6H, d, J = 6,7 Hz, 26-H3 und 27-H3), 0,97 (3H, s, 19-H3), 1,03 (3H, d, J=6,8 Hz, 21-H3), 3,16 (1H, dd, J, =4,4 Hz, J, = 14 Hz, 9-H), 4,44 (1H, m, 3-H), 5,25 (2H, br, m, 22-H und 23-H), 6,22 und 6,39 (2H, AB q, J=8,5 45 Hz, 6-H und 7-H), 7,40 (5H, br m, Ar-H); IR: 3444, 1754, 1701, 1599, 1402, 969, 757 cm~', Massenspektrum, m/e 557 (M+, 1%), 382 (70), 349 (51), 253 (28), 251 (45), 119 (PhNCO, 83), 55 (100). Elution with benzene ether (6: 4) provided the pure product (3) (375 mg, 67%) as a foam: NMR 5 0.81 (3H, s, 18-H3), 0.86 (6H, d, J = 6.7 Hz, 26-H3 and 27-H3), 0.97 (3H, s, 19-H3), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz, 21 -H3), 3.16 (1H, dd, J, = 4.4 Hz, J, = 14 Hz, 9-H), 4.44 (1H, m, 3-H), 5.25 (2H, br, m, 22-H and 23-H), 6.22 and 6.39 (2H, AB q, J = 8.5 45 Hz, 6-H and 7-H), 7.40 (5H, br m, Ar-H); IR: 3444, 1754, 1701, 1599, 1402, 969, 757 cm ~ ', mass spectrum, m / e 557 (M +, 1%), 382 (70), 349 (51), 253 (28), 251 (45 ), 119 (PhNCO, 83), 55 (100).

50 (22E)-Cholesta -5,7,22-trien-3$-ol (4) 50 (22E) -Cholesta -5,7,22-triene-3 $ -ol (4)

Das Addukt (3) (330 mg, 0,6 mMol) und Lithiumaluminiumhydrid (700 mg) in wasserfreiem THF (40 ml) wurden unter Rückfluss auf 18 Stunden erhitzt. Das überschüssige Reagens wurde mit einigen Tropfen Wasser zersetzt. Wasser-55 freies Na2S04 wurde zugesetzt und die organische Phase wurde dekantiert und eingeengt, um einen kristallinen Rückstand zu ergeben, der über einer Silikagelsäule gereinigt wurde. Die Eluation mit Benzol-Ether (94:6)-Gemisch ergab reines Dien (4) (180 mg, 80%), welches aus Methanol umkri-60 stallisiert wurde: Schmelzpunkt 119,5-122,5 °C; The adduct (3) (330 mg, 0.6 mmol) and lithium aluminum hydride (700 mg) in anhydrous THF (40 ml) were heated under reflux for 18 hours. The excess reagent was decomposed with a few drops of water. Water-55 free Na2S04 was added and the organic phase was decanted and concentrated to give a crystalline residue which was purified over a silica gel column. Elution with benzene / ether (94: 6) mixture gave pure diene (4) (180 mg, 80%), which was recrystallized from methanol: melting point 119.5-122.5 ° C .;

[aß4= -118° (c = 1,2, CHC13); NMR S 0,63 (3H, s,18-H3), 0,87 (6H, d, J = 6,7 Hz, 26-H3 und 27-H3), 0,95 (3H, s,19-H3), 1,03 (3H, d, J=6,8 Hz, 21-H3), 3,64 (1H, m, 3-H), 5,25 (2H, br m, 22-H und 23-H), 5,38 und 5,57 (2H, AB q, 65 J = 6 Hz, 7-H und 6-H); UV l!mK 281 nm; IR: 3436,1461, 1382,1366, 1062,1036, 968 cm-1; Massenspektrum, m/e 382 (M+, 100), 349 (M+ -H20-Me, 71), 323 (34), 271 (M+-Sei-tenkette, 16), 253 (M+-Seitenkette-H20, 32). [a4 = -118 ° (c = 1.2, CHC13); NMR S 0.63 (3H, s, 18-H3), 0.87 (6H, d, J = 6.7 Hz, 26-H3 and 27-H3), 0.95 (3H, s, 19-H3 ), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz, 21-H3), 3.64 (1H, m, 3-H), 5.25 (2H, br m, 22-H and 23- H), 5.38 and 5.57 (2H, AB q, 65 J = 6 Hz, 7-H and 6-H); UV l! MK 281 nm; IR: 3436.1461, 1382.1366, 1062.1036, 968 cm-1; Mass spectrum, m / e 382 (M +, 100), 349 (M + -H20-Me, 71), 323 (34), 271 (M + side chain, 16), 253 (M + side chain-H20, 32).

667 658 667 658

4 4th

(5ZJE22Ej-9 JO-Secocholesta-5,7,10 ( 19),22 -tetraen-3ß-ol (5ZJE22Ej-9 JO-Secocholesta-5,7,10 (19), 22 -tetraen-3ß-ol

(5) (5)

Eine Lösung der Verbindung (4 (100 mg, 0,26 mMol) in Ether (120 ml)-Benzol (30 ml)-Gemisch wurde mit Argon für 40 Minuten entgast. Die Lösung wurde bei 0 C für 13 Minuten bestrahlt in einer Quarztauchquelle, die mit einer UV-Lampe und einem Filter ausgerüstet war. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt und der Rückstand wurde durch HPLC getrennt, wobei 1% 2-Propanol in Hexan als Eluationsmittel verwendet wurde, um das reine Provitamin D-Derivat zu erhalten (40,4 mg, 40%), welches bei 24 ml gesammelt wurde; NMR 8 0,72 (3H, s, 18-H3), 0,87 (6H, d, J = 6,7 Hz, 26-H3 und 27-H3), 1,04 (3H, d, J = 6,8 Hz, 21-H3), 1,65 (3H, s, 19-H3), 3,91 (1H, m, 3-H), 5,28 (2H, br m, 22-H und 23-H), 5,50 (1H, m, 11-H), 5,69 und 5,96 (2H, AB q, J = 12,5 Hz, 7-H und 6-H); UV ^max 260,5 nm; A.min 234 nm. A solution of the compound (4 (100 mg, 0.26 mmol) in ether (120 ml) -benzene (30 ml) mixture was degassed with argon for 40 minutes. The solution was irradiated at 0 C for 13 minutes in a quartz immersion source equipped with a UV lamp and filter, the solvent was removed under reduced pressure and the residue was separated by HPLC using 1% 2-propanol in hexane as eluent to obtain the pure provitamin D derivative (40.4 mg, 40%), which was collected at 24 ml; NMR 8 0.72 (3H, s, 18-H3), 0.87 (6H, d, J = 6.7 Hz, 26-H3 and 27-H3), 1.04 (3H, d, J = 6.8 Hz, 21-H3), 1.65 (3H, s, 19-H3), 3.91 (1H, m, 3-H ), 5.28 (2H, br m, 22-H and 23-H), 5.50 (1H, m, 11-H), 5.69 and 5.96 (2H, AB q, J = 12, 5 Hz, 7-H and 6-H); UV ^ max 260.5 nm; A.min 234 nm.

Das Provitamin (40 mg, 0,1 mMol) in Ethanol (100 ml) wurde unter Rückfluss für 3 Stunden erhitzt. Nach dem Abzug des Lösungsmittels wurde das Produktgemisch durch HPLC getrennt (Eluation mit 1% 2-Propanol in Hexan). Die Ausbeute des Vitamins (5) (gesammelt bei 34 ml) betrug 30,8 mg (77%); Schmelzpunkt (Hexan) (99-101 C; NMR 8 0,56 (3H, s, 18-H3), 0,88 (6H, d, J = 6,7 Hz, 26-H, und 27-H3), 102 (3H, d, J = 6,6 Hz, 21-H3), 3,96 (1H, m, 3-H), 4,82 und 5,05 (2H, jeweils enges m, 19-H-,), 5,27 (2H, br m, 22-H und 23-H), 6,03 und 6,24 (2H, AB q, J = 11,4 Hz, 7-H und 6-H); UV À.max 265 nm, Xmin 228 nm; IR: 3420, 1458, 1441, 1378, 1366, 1050, 970, 943, 891, 862 cm"1; Massenspektrum, m e (M+, 22), 349 (M+ -H20-Me, 4), 271 (M+-Seitenkette, 8), 253 (M+-Seitenketten-~H->0, 13), 136 (100), 118(80). The provitamin (40 mg, 0.1 mmol) in ethanol (100 ml) was heated under reflux for 3 hours. After the solvent had been removed, the product mixture was separated by HPLC (elution with 1% 2-propanol in hexane). The yield of vitamin (5) (collected at 34 ml) was 30.8 mg (77%); Melting point (hexane) (99-101 C; NMR 8 0.56 (3H, s, 18-H3), 0.88 (6H, d, J = 6.7 Hz, 26-H, and 27-H3), 102 (3H, d, J = 6.6 Hz, 21-H3), 3.96 (1H, m, 3-H), 4.82 and 5.05 (2H, each narrow m, 19-H-, ), 5.27 (2H, br m, 22-H and 23-H), 6.03 and 6.24 (2H, AB q, J = 11.4 Hz, 7-H and 6-H); UV À.max 265 nm, Xmin 228 nm; IR: 3420, 1458, 1441, 1378, 1366, 1050, 970, 943, 891, 862 cm "1; mass spectrum, me (M +, 22), 349 (M + -H20- Me, 4), 271 (M + side chain, 8), 253 (M + side chain- ~ H-> 0, 13), 136 (100), 118 (80).

(5Z,7E,22E)-3$-Acetoxy -9,10-secocholesta-5,7,10( 19),22-tretraen-la-ol (8_) (5Z, 7E, 22E) -3 $ -acetoxy -9,10-secocholesta-5,7,10 (19), 22-tretraen-la-ol (8_)

Ein frisch umkristallisiertes p-Toluolsulfonylchlorid (50 mg, 0,26 mMol) wurde einer Lösung des Vitamins (5) (30 mg, 0,08 mMol) in wasserfreiem Pyridin (300 |il) zugesetzt. Nach 30 Stunden bei 4 C wurde das Reaktionsgemisch in Eis gesättigte NaHC03 unter Rühren eingegossen. Das Gemisch wurde 15 Minuten gerührt und mit Benzol extrahiert. Der organische Extrakt wurde mit gesättigter NaHC03, gesättigtem Kupfersulfat und Wasser gewaschen, getrocknet (Na2S04) und unter vermindertem Druck eingeengt, um das ölige 3ß-Tosylderivat zu erhalten. Das rohe Tosylat wurde mit NaHC03 (150 mg) in wasserfreiem Methanol (10 ml) behandelt und das Gemisch wurde 8,5 Stunden bei 55 C gerührt. Nach dem Abkühlen und Einengen auf etwa 2 ml wurde das Gemisch mit Benzol (80 ml) verdünnt, mit Wasser gewaschen, getrocknet (Na2S04) und unter vermindertem Druck eingeengt. A freshly recrystallized p-toluenesulfonyl chloride (50 mg, 0.26 mmol) was added to a solution of the vitamin (5) (30 mg, 0.08 mmol) in anhydrous pyridine (300 | il). After 30 hours at 4 C, the reaction mixture was poured into ice-saturated NaHCO 3 with stirring. The mixture was stirred for 15 minutes and extracted with benzene. The organic extract was washed with saturated NaHCO 3, saturated copper sulfate and water, dried (Na 2 SO 4) and concentrated under reduced pressure to obtain the oily 3β-tosyl derivative. The crude tosylate was treated with NaHCO 3 (150 mg) in anhydrous methanol (10 ml) and the mixture was stirred at 55 C for 8.5 hours. After cooling and concentrating to about 2 ml, the mixture was diluted with benzene (80 ml), washed with water, dried (Na2S04) and concentrated under reduced pressure.

Die erhaltene ölige 3,5-Cyclovitamin D-Analogverbindung (6) war hinreichend rein, um für die folgende Oxida-tionsstufe ohne jegliche Reinigung eingesetzt zu werden. Einer heftig gerührten Suspension von Se02 (4 mg, 0,036 mMol) in wasserfreiem CH2C12 (5 ml) wurde tert.-Butylhy-droperoxid (13,2 jj.1, 0,094 mMol) zugesetzt. Nach 30 Minuten wurde wasserfreies Pyridin (40 jj.1) zugesetzt und das Gemisch wurde weitere 25 Minuten bei Raumtemperatur gerührt, mit CH2C12 (3 ml) verdünnt und auf 0 C abgekühlt. Das rohe 3,5-Cyclovitaminprodukt (6) in CH2C12 (4,5 ml) wurde sodann zugegeben und die Reaktion wurde bei 0 C für 15 Minuten fortschreiten gelassen. Das Gemisch wurde sodann langsam (30 Minuten) auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. Das Gemisch wurde in einen Trenntrichter überführt und mit 30 ml 10%iger-NaOH geschüttelt. Ether (150 ml) wurde zugesetzt und die abgetrennte organische Phase wurde mit 10% NaOH, Wasser gewaschen und über The oily 3,5-cyclovitamin D analog compound (6) obtained was sufficiently pure to be used for the following oxidation step without any purification. To a vigorously stirred suspension of Se02 (4 mg, 0.036 mmol) in anhydrous CH2C12 (5 ml) was added tert-butylhydroperoxide (13.2jj.1, 0.094 mmol). After 30 minutes, anhydrous pyridine (40jj.1) was added and the mixture was stirred for a further 25 minutes at room temperature, diluted with CH2C12 (3 ml) and cooled to 0 ° C. The crude 3,5-cyclovitamin product (6) in CH2C12 (4.5 ml) was then added and the reaction was allowed to proceed at 0 C for 15 minutes. The mixture was then allowed to warm slowly (30 minutes) to room temperature. The mixture was transferred to a separatory funnel and shaken with 30 ml 10% NaOH. Ether (150 ml) was added and the separated organic phase was washed with 10% NaOH, water and over

Na2S04 getrocknet. Die Einengung zur Trockne unter vermindertem Druck ergab einen gelben öligen Rückstand, der über Silikagel-TLC-Platten gereinigt wurde, welche entwik-kelt wurden in einem 7:3-Gemisch von Hexan-Ethylacetat (Rf 0,35 wodurch das 1-Hydroxycyclovitaminprodukt erhalten wurde (14,4 mg, 45%) NMR 8 0,55 (3H, s, 18-H3), 0,64 (1H, m, 3-H), 0,88 (6H, d, J= 6,9 Hz, 26-H3 und 27-H3), 1,03 (3H, d, J = 6,9 Hz, 21-H3), 3,26 (3H, s, -OCH3), 4,2 (2H, m, 1-H und 6-H), 4,95 (1H, d, J = 9,3 Hz, 7-H), 5,1-5,4 (4H,br m, 19-Hi, 22-H und 23-H); Massenspektrum m/e 412 (M+, 27),~380 (M+-MeOH, 46), 339 (22), 269 (M+-Seitenketten-MeOH), 29), 245 (18), 135 (100). Das oben angegebene Produk enthielt überwiegend die la-Hy-droxycyclovitamin D-Analogverbindung der Struktur (7) und eine kleine Menge des entsprechenden lß-Epimers. Eine Lösung dieses 1-Hydroxycyclovitamin D-Produkts (12 mg) in Eisessig (0,5 ml) wurde für 15 Minuten auf 55 °C erhitzt. Das Gemisch wurde sorgfältig in Eis/gesättigte NaHC03 eingegossen und mit Benzol und Ehter extrahiert. Die vereinten Extrakte wurden mit Wasser gewaschen, getrocknet (Na2S04) und eingeengt. Das erhaltene Produktgemisch wurde der HPLC unterworfen (1,5% 2-Propanol in Hexan als Eluationsmittel), um 4,9 mg der Verbindung (8) zu erhalten (Eluation bei 42 ml) und 3,1 mg der Verbindung (9) (Eluation bei 50 ml). Na2S04 dried. Concentration to dryness under reduced pressure gave a yellow oily residue which was purified on silica gel TLC plates which were developed in a 7: 3 mixture of hexane-ethyl acetate (Rf 0.35 to give the 1-hydroxycyclovitamin product was (14.4 mg, 45%) NMR 8 0.55 (3H, s, 18-H3), 0.64 (1H, m, 3-H), 0.88 (6H, d, J = 6, 9 Hz, 26-H3 and 27-H3), 1.03 (3H, d, J = 6.9 Hz, 21-H3), 3.26 (3H, s, -OCH3), 4.2 (2H, m, 1-H and 6-H), 4.95 (1H, d, J = 9.3 Hz, 7-H), 5.1-5.4 (4H, br m, 19-Hi, 22- H and 23-H); mass spectrum m / e 412 (M +, 27), ~ 380 (M + -MeOH, 46), 339 (22), 269 (M + side chain MeOH), 29), 245 (18), 135 (100). The above product contained predominantly the la-hydroxycyclovitamin D analogue compound of structure (7) and a small amount of the corresponding lß epimer. A solution of this 1-hydroxycyclovitamin D product (12 mg) in glacial acetic acid (0.5 ml) was heated to 55 ° C for 15 minutes. The mixture was poured carefully into ice / saturated NaHCO 3 and extracted with benzene and ether. The combined extracts were washed with water, dried (Na2S04) and concentrated. The product mixture obtained was subjected to HPLC (1.5% 2-propanol in hexane as eluent) to obtain 4.9 mg of compound (8) (elution at 42 ml) and 3.1 mg of compound (9) ( Elution at 50 ml).

Verbindung (8): NMR S 0,56 (3H, s, 18-H3), 0,88 (6H, d, J = 7,0 Hz), 26-H3 und 27-H3), 1,02 (3H, d, J = 6,8 Hz, 21-H3), 2,04 (3H, s, -OCOCH3), 4,41 (1H, m, 1-H), 5,02 (1H, enges m, 19-H), 5,1-5,4 (4H, br m, 3-,19-, 22- und 23-H), 6,03 und 6,35 (2H, AB q, J = 11,4 Hz, 7-H und 6-H); UV Àmax 264 nm, /,mm 227,5 nm; Massenspektrum, m/e 440 (M+, 15), 380 (M+-HOAc, 84), 362 (M*-HOAc-HzO, 9), 269 (M+-Seitenketten-HOAc, 40), 251 (15), 135 (100), 134 (94). Compound (8): NMR S 0.56 (3H, s, 18-H3), 0.88 (6H, d, J = 7.0 Hz), 26-H3 and 27-H3), 1.02 (3H , d, J = 6.8 Hz, 21-H3), 2.04 (3H, s, -OCOCH3), 4.41 (1H, m, 1-H), 5.02 (1H, narrow m, 19 -H), 5.1-5.4 (4H, br m, 3-, 19-, 22- and 23-H), 6.03 and 6.35 (2H, AB q, J = 11.4 Hz , 7-H and 6-H); UV Àmax 264 nm, /, mm 227.5 nm; Mass spectrum, m / e 440 (M +, 15), 380 (M + -HOAc, 84), 362 (M * -HOAc-HzO, 9), 269 (M + side chain HOAc, 40), 251 (15), 135 (100), 134 (94).

Verbindung (9): NMR 8 0,57 (3H, s, 18-H3), 0,89 (6H, d,J = 7,0 Hz, 26-Hi und 27-H3), 1,03 (3H, d, J = 6,8 Hz, Compound (9): NMR 8 0.57 (3H, s, 18-H3), 0.89 (6H, d, J = 7.0 Hz, 26-Hi and 27-H3), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz,

21-H3), 2,04 (3H, s, -OCOCH3), 4,49 (1H, m, 1-H), 5,00 und 5,14 (2H, jeweils enges m, 19-H-.), 5,25 (3H, br m, 3-, 21-H3), 2.04 (3H, s, -OCOCH3), 4.49 (1H, m, 1-H), 5.00 and 5.14 (2H, each narrow m, 19-H-.) , 5.25 (3H, br m, 3-,

22- und 23-H), 5,81 und 6,58 (2H, AB q, J = 12,0 Hz, 7-H und 6-H); UV X max 269,5 nm, ^min 228 nm; Massenspektrum, m/e 440 (M + , 6), 380 (47), 269 (15), 135 (100), 134 (62). 22- and 23-H), 5.81 and 6.58 (2H, AB q, J = 12.0 Hz, 7-H and 6-H); UV X max 269.5 nm, ^ min 228 nm; Mass spectrum, m / e 440 (M +, 6), 380 (47), 269 (15), 135 (100), 134 (62).

Ebenfalls wurde aus dem Solvolyse-Produktgemisch eine geringe Menge (0,87 mg) des 1 ß-Hydroxy-Epimers entsprechend der Verbindung (8) erhalten, welches durch die folgenden Daten charakterisiert ist: NMR 8 0,55 (3H, s, 18-H3), 0,87 (6H, d, J = 6,9 Hz, 26-H3, und 27-H3), 1,01 (3H, d, J = 6, 9 Hz, 21-H3), 2,06 (3H, s, -OCOCH ,), 4,17 (1H, m, 1-H), 4,99 (2H, m, 3-H und 19-H), 5,1-5,4 (3H, br m, 19-, A small amount (0.87 mg) of the 1β-hydroxy epimer corresponding to compound (8) was also obtained from the solvolysis product mixture, which is characterized by the following data: NMR 8 0.55 (3H, s, 18 -H3), 0.87 (6H, d, J = 6.9 Hz, 26-H3, and 27-H3), 1.01 (3H, d, J = 6.9 Hz, 21-H3), 2 , 06 (3H, s, -OCOCH,), 4.17 (1H, m, 1-H), 4.99 (2H, m, 3-H and 19-H), 5.1-5.4 ( 3H, br m, 19-,

22- und 23-H), 6,00 und 6,38 (2H, AB q, J = 11,3 Hz, 7-H und 6-H); UV /lmax 262,5 nm, A.min 227 nm; Massenspektrum, m/e 440 (M + , 27), 380 (78), 362 (12), 269 (28), 251 (20), 135 (100), 134 (78). 22- and 23-H), 6.00 and 6.38 (2H, AB q, J = 11.3 Hz, 7-H and 6-H); UV / lmax 262.5 nm, A.min 227 nm; Mass spectrum, m / e 440 (M +, 27), 380 (78), 362 (12), 269 (28), 251 (20), 135 (100), 134 (78).

Hydrolyse der 3ß-A ceto.xygruppe in den Verbindungen (8) und (9) Hydrolysis of the 3ß-A ceto.xygruppe in the compounds (8) and (9)

Eine Lösung des 3ß-Aeetoxyvitamin-Derivats (8) (0,7-6 mg) in Ethanol (0,1 ml) wurde mit 10% KOH in Methanol (0,8 ml) behandelt und das Gemisch wurde für 1 Stunde auf 50 C erhitzt. Nach der üblichen Aufarbeitung und abschliessenden HPLC-Reinigung (8% 2-Propanol in Hexan als Eluationsmittel) wurde das la,3ß-Diol der Struktur (10) in 84%iger Ausbeute erhalten: NMR 8 0,56 (3H, s, 18-H3), 0.87 (6H, d, J = 7, 0 Hz, 26 H, und 27-H3), 1,02 (3H, d, ' J = 6,8 Hz, 21-H3), 4,22 (1H, m, 3-H), 4,42 (1H, m, 1-H), 5,00 (1H, enges m, 19-H), 5,1-5,4 (3H, br m, 19-, 22- und A solution of the 3β-acetoxyvitamin derivative (8) (0.7-6 mg) in ethanol (0.1 ml) was treated with 10% KOH in methanol (0.8 ml) and the mixture was brought to 50 for 1 hour C. heated. After the usual work-up and final HPLC purification (8% 2-propanol in hexane as eluent), the la, 3β-diol of structure (10) was obtained in 84% yield: NMR 8 0.56 (3H, s, 18 -H3), 0.87 (6H, d, J = 7.0 Hz, 26 H, and 27-H3), 1.02 (3H, d, 'J = 6.8 Hz, 21-H3), 4.22 (1H, m, 3-H), 4.42 (1H, m, 1-H), 5.00 (1H, narrow m, 19-H), 5.1-5.4 (3H, br m, 19-, 22- and

23-H), 6,01 und 6,38 (2H, AB q, J = 11,4 Hz, 7-H und 6-H); UV A.miiX 264,5 nm, /.min 227,5 nm; Massenspektrum, m/e 398 23-H), 6.01 and 6.38 (2H, AB q, J = 11.4 Hz, 7-H and 6-H); UV A.miiX 264.5 nm, /.min 227.5 nm; Mass spectrum, m / e 398

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

5 5

667 658 667 658

(M+, 21) 380 (M+ - H20, 9) 2,87 (M+-Seitenkette, 6), 269 (M+ -ß-Seitenketten -H20, 8), 251 (5), 152 (38), 134 (100). Die Verbindung (10) eluiert bei 40 ml in dem obigen HPLC-System. (M +, 21) 380 (M + - H20, 9) 2.87 (M + side chain, 6), 269 (M + -ß side chains -H20, 8), 251 (5), 152 (38), 134 (100 ). Compound (10) elutes at 40 ml in the above HPLC system.

Die analoge Behandlung des Acetoxyderivats (9) ergab nach HPLC-Reinigung das 5,6-trans-lcc,3ß-Diol der Struktur (11) in 72%iger Ausbeute: NMR 5 0,58 (3H, s, I8-H3), 0,87 (6H, d, J=7,0 Hz, 26-H3 und 27-H3), 1,03 (3H, d, J = 6,8 Hz, 2I-H3), 4,24 (lH,m,3-H), 4,49 (1H, m, 1-H), 4,97 und 5,13 (2H, jeweils enges m, 19-H2), 5,25 (2H, br m, 22-H und 23-H), 5,88 und 6,58 (2H, AB q, J= 11,5 Hz, 7-H und 6-H); UV Xmax 273 nm, Xmin 229,5 nm; Massenspektrum, m/e 398 (M+, 21), 380 (5), 287 (6), 269 (5), 251 (4), 152 (33), 134 (100). Die Verbindung (11) eluiert bei 38 ml. The analogous treatment of the acetoxy derivative (9) after HPLC purification gave the 5,6-trans-lcc, 3β-diol of structure (11) in 72% yield: NMR 5 0.58 (3H, s, I8-H3) , 0.87 (6H, d, J = 7.0 Hz, 26-H3 and 27-H3), 1.03 (3H, d, J = 6.8 Hz, 2I-H3), 4.24 (lH , m, 3-H), 4.49 (1H, m, 1-H), 4.97 and 5.13 (2H, each narrow m, 19-H2), 5.25 (2H, br m, 22 -H and 23-H), 5.88 and 6.58 (2H, AB q, J = 11.5 Hz, 7-H and 6-H); UV Xmax 273 nm, Xmin 229.5 nm; Mass spectrum, m / e 398 (M +, 21), 380 (5), 287 (6), 269 (5), 251 (4), 152 (33), 134 (100). Compound (11) elutes at 38 ml.

25-Hydroxylierung der Verbindung (10) 25-hydroxylation of compound (10)

Das 5,6-cis-la,3ß-Diol der Struktur (10) gemäss obiger Darstellung wurde sodann 25-hydroxyliert nach dem folgenden Verfahren: Männliche Weanling-Ratten wurden mit einer Diät mit geringem Calcium-Vitamin D-Mangel nach der Beschreibung von Suda et al., J. Nutr. 100, 1049 (1970) für 2 Wochen behandelt. Sie wurden durch Enthauptung getötet und ihre Lebern wurden entfernt. Ein 20%iges (w/v) Homogenisat wurde hergestellt in eisgekühlter 0,25 M Sucrose. Die Inkubation wurde in 10 ml Inkubationsmedium in einem 125 ml fassenden Erlenmayer-Kolben durchgeführt, der eine aliquote Menge an Leberhomogenisat enthielt, die 1 g Gewebe, 0,125 M Sucrose, 50 mM Phosphatpuffer (pH 7,4), 22,4 mM Glucose-6-phosphat, 20 mM ATP, 160 mM Nicotinsäureamid, 25 mM Succinat, 0,4 mM NADP, 5 mM MgCl2, 0,1 M KCl und 0,5 Einheiten Glucose-6-phosphat-dehydro-genase enthielt. Die Reaktion wurde initiiert durch Zugabe von 400 /ig der Verbindung (10), die in 100 (il 95%igem Ethanol gelöst war. Das Gemisch wurde bei 37 °C inkubiert, unter Schütteln mit 80 Auslenkungen/min für 3 Stunden. Die Reaktion wurde durch Zugabe von 20 ml Methanol und 10 ml Dichlormethan gestoppt. Nach weiterer Zugabe von 10 ml Dichlormethan wurde die organische Phase gesammelt, während die wässrige Phase mit 10 ml Dichlormethan erneut extrahiert wurde. Die organischen Phasen von insgesamt drei Extraktionen wurden vereint und mit einem Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand, der das gewünschte Produkt enthielt, wurde in 1 ml CHCl3:Hexan (63:35)-Gemisch gelöst und auf eine Sephadex-LH-20-Säule (0,7 cm x 14 cm) gepackt, äquilibriert und mit demselben Lösungsmittel eluiert. Die ersten 10 ml wurden verworfen, während die nächsten 40 ml gesammelt und eingedampft wurden. Der Rückstand wurde sodann in 8% 2-Propanol in Hexan gelöst und der Hochleistungs-Flüssigkchromatogra-phie unterworfen (Modell LC/GPC 204 HPLC, Waters Associates, Medford, MA) unter Verwendung einer Zorbax-Sil-Säule (4,6 mm x 25 cm, DuPont, Inc., Wilmington, DE), welche unter einem Druck von 1000 psi mit einer Fliessgeschwindigkeit von 2 ml/min arbeitete. Das gewünschte 25-hydroxylierte Produkt wurde bei 42 ml eluiert. Das Produkt wurde ferner durch Hochleistungs-Flüssigchromatogra-phie gereinigt, wobei eine Umkehrphasen Säule verwendet wurde (Richrosorb Rp-18,4,6 mm x 25 cm, E. Merck, Darmstadt, West-Deutschland), die unter einem Druck von 1200 psi und einer Fliessgeschwindigkeit von 2 ml/min betrieben wurde. Die Säule wurde mit 22 ml eluiert. Das Produkt wurde bei 50 ml eluiert. Das Produkt wurde ferner durch HPLC unter Verwendung von Zorbax-Sil gereinigt und die Bedingungen entsprachen der obigen Beschreibung. Das erhaltene Produkt wurde durch die folgenden Daten charakterisiert: UV-Absorption (95% Ethanol) Xmax 265 nm, Xmin 228 nm; Massenspektrum, m/z 414 (Molekül-Ion M+), 396 (M+-H20), 378 (M+-2 x H20), 287 (M+ Seitenkette), The 5,6-cis-la, 3ß-diol of structure (10) as shown above was then 25-hydroxylated according to the following procedure: Male Weanling rats were on a diet with a low calcium vitamin D deficiency according to the description of Suda et al., J. Nutr. 100, 1049 (1970) treated for 2 weeks. They were killed by beheading and their livers were removed. A 20% (w / v) homogenate was made in ice-cooled 0.25 M sucrose. The incubation was carried out in 10 ml of incubation medium in a 125 ml Erlenmayer flask containing an aliquot of liver homogenate containing 1 g of tissue, 0.125 M sucrose, 50 mM phosphate buffer (pH 7.4), 22.4 mM glucose- 6-phosphate, 20 mM ATP, 160 mM nicotinamide, 25 mM succinate, 0.4 mM NADP, 5 mM MgCl2, 0.1 M KCl and 0.5 units of glucose-6-phosphate dehydrogenase. The reaction was initiated by adding 400 µg of compound (10) dissolved in 100 ml of 95% ethanol. The mixture was incubated at 37 ° C with shaking at 80 deflections / min for 3 hours. The reaction was stopped by adding 20 ml of methanol and 10 ml of dichloromethane. After further addition of 10 ml of dichloromethane, the organic phase was collected while the aqueous phase was extracted again with 10 ml of dichloromethane. The organic phases from a total of three extractions were combined and combined with one The residue, which contained the desired product, was dissolved in 1 ml CHCl3: hexane (63:35) mixture and packed on a Sephadex-LH-20 column (0.7 cm x 14 cm), equilibrated and The first 10 ml was discarded while the next 40 ml was collected and evaporated, the residue was then dissolved in 8% 2-propanol in hexane and subjected to high performance liquid chromatography (Model LC / GPC 204 HPLC, Waters Associates, Medford, MA) using a Zorbax-Sil column (4.6 mm x 25 cm, DuPont, Inc., Wilmington, DE) which was pressurized at 1000 psi a flow rate of 2 ml / min worked. The desired 25-hydroxylated product was eluted at 42 ml. The product was further purified by high performance liquid chromatography using a reverse phase column (Richrosorb Rp-18.4.6 mm x 25 cm, E. Merck, Darmstadt, West Germany) operating under a pressure of 1200 psi and a flow rate of 2 ml / min was operated. The column was eluted with 22 ml. The product was eluted at 50 ml. The product was further purified by HPLC using Zorbax-Sil and the conditions were as described above. The product obtained was characterized by the following data: UV absorption (95% ethanol) Xmax 265 nm, Xmin 228 nm; Mass spectrum, m / z 414 (molecular ion M +), 396 (M + -H20), 378 (M + -2 x H20), 287 (M + side chain),

269 (M+-Seitenketten-H20), 251 M+-Seitenketten-2 x H20), 152 (Ring A, C 7/8 Bindungsspaltung), 134 (152-H20) und 59 (CH3)2C = OH)+ erhalten aus der C24/25-Bindungsspal-tung). 269 (M + side chains-H20), 251 M + side chains-2 x H20), 152 (ring A, C 7/8 bond cleavage), 134 (152-H20) and 59 (CH3) 2C = OH) + obtained from the C24 / 25 bond cleavage).

5 Die obigen Daten, insbesondere die charakteristische Ul-traviolett-Absorption und die hervortretenden und diagnostischen Peaks bei m/z 152, 134 und 59 in dem Massenspektrum zeigen, dass es sich bei dem Produkt um die gewünschte 25-hydroxylierte Verbindung handelt, die durch die Struk-10 tur (12) (Verfahrensschema I) angegeben wird. 5 The data above, in particular the characteristic ultraviolet absorption and the prominent and diagnostic peaks at m / z 152, 134 and 59 in the mass spectrum, show that the product is the desired 25-hydroxylated compound which can be obtained by the structure-10 tur (12) (process scheme I) is given.

Wenn es gewünscht wird, können die erfmdungsgemäs-sen Verbindungen leicht in kristalliner Form erhalten werden durch Umkristallisation aus geeigneten Lösungsmitteln, z.B. Hexan, Ethern, Alkoholen oder Gemischen davon, wie 15 den Fachleuten auf diesem Gebiet bekannt ist. If desired, the compounds of the invention can easily be obtained in crystalline form by recrystallization from suitable solvents, e.g. Hexane, ethers, alcohols, or mixtures thereof, as is known to those skilled in the art.

Biologische Aktivität der Seitenketten-Dehydrovitamin D-Verbindungen Biological activity of the side chain dehydrovitamin D compounds

Die biologische Wirksamkeit der oben beschriebenen De-20 hydrovitamin D-Analogverbindungen wurde durch Versuche in vivo an Ratten und im Vergleich mit la-Hydroxyvitamin D-Verbindungen bekannter Wirksamkeit nachgewiesen. Beide Produkte, (12) und die Schlüssel-Zwischenverbindung, Verbindung (10), wurden getestet und als hoch aktiv 25 befunden. The biological activity of the De-20 hydrovitamin D analog compounds described above was demonstrated by experiments in vivo in rats and in comparison with known activity of la-hydroxyvitamin D compounds. Both products, (12) and the key interconnect, compound (10), were tested and found to be highly active.

Biologische Aktivität der Verbindung (10) Biological activity of the compound (10)

Der Versuch wurde folgendermassen durchgeführt: Männliche Weanling-Ratten wurden von der Firma Holtz-30 man Co., Madison, WI gekauft und ad libitum mit Wasser und einer Diät mit geringem Calciumgehalt, adäquatem Phosphor und Vitamin D-Mangel gemäss der Beschreibung von Suda et al (J. Nutr. 100, 1049 (1970)) für drei Wochen gefüttert. Die Ratten wurden sodann in Gruppen von jeweils 35 6 Ratten eingeteilt und sie erhielten 650 pMol der Verbindung (10) oder von la-Hydroxyvitamin D3 (la OH-D3) gelöst in 0,05 ml 95%igem Ethanol intrajugular 18 Stunden vor ihrer Tötung. Die Ratten in der Kontrollgruppe bekamen den Ethanolträger in der gleichen Weise. Die Ratten 40 wurden sodann durch Enthauptung getötet und das Blut wurde gesammelt. Das durch Zentrifugieren erhaltene Serum des Blutes wurde mit 0,1% Lanthanchloridlösung (1:20) verdünnt und die Serum-Calcium-Konzentration wurde mit einem Atomabsorptionsspektrophotometer gemessen. Die Er-45 gebnisse sind in der nachstehenden Tabelle I angegeben: The experiment was carried out as follows: Male weanling rats were purchased from the company Holtz-30 man Co., Madison, WI and ad libitum with water and a diet with a low calcium content, adequate phosphorus and vitamin D deficiency as described by Suda et al (J. Nutr. 100, 1049 (1970)) for three weeks. The rats were then divided into groups of 35 6 rats each and received 650 pmol of compound (10) or of la-hydroxyvitamin D3 (la OH-D3) dissolved in 0.05 ml of 95% ethanol intrajugularly 18 hours before their killing . The rats in the control group received the ethanol vehicle in the same way. Rats 40 were then beheaded and the blood collected. The blood serum obtained by centrifugation was diluted with 0.1% lanthanum chloride solution (1:20) and the serum calcium concentration was measured with an atomic absorption spectrophotometer. The results are shown in Table I below:

Tabelle I Table I

Anstieg der Serum-Calcium-Konzentration in Ansprache 50 auf eine Einzeldosis von 650 pMol der Verbindung (10) oder der Verbindung la-OH- D3, verabfolgt 18 Stunden vor der Tötung Increase in serum calcium concentration in response 50 to a single dose of 650 pmol of compound (10) or compound la-OH-D3, administered 18 hours prior to killing

± Stan- ± standard

Biologische Aktivität der Verbindung (12) Biological activity of the compound (12)

Die Untersuchung wurde gemäss folgender Beschreibung 65 durchgeführt: Männliche Weanling-Ratten wurden mit einer Diät mit geringem Calciumgehalt und Vitamin D-Mangel für 3 Wochen gemäss obiger Beschreibung behandelt. Sie wurden sodann in Gruppen von jeweils 5 Ratten unterteilt. The investigation was carried out according to the following description 65: Male weanling rats were treated with a diet with a low calcium content and vitamin D deficiency for 3 weeks as described above. They were then divided into groups of 5 rats each.

Verabfolgte Verbindung Serum-Calcium-1 55 tion (mg/100 ml) Administered compound Serum-Calcium-1 55 tion (mg / 100 ml)

dardabweichung standard deviation

Ethanol 3,2 ± 0,la) Ethanol 3.2 ± 0, la)

Verbindung (10) 4,5 ± 0,4b) Connection (10) 4.5 ± 0.4b)

60 la-OH-Dj 4,7 ± 0,5b> 60 la-OH-Dj 4.7 ± 0.5b>

b) ist deutlich unterschiedlich vona) p < 0,001 b) is significantly different from a) p <0.001

667 658 667 658

6 6

Ratten in einer Kontrollgruppe erhielten 0,05 ml 95%iges Ethanol intrajugular, während Ratten in den Testgruppen 325 pMol der Verbindung (12) oder von la,25-Dihydroxy-vitamin D3 (la,25-(OH)2D3) gelöst in 0,05 ml 95%igem Ethanol erhielten. 18 Stunden später wurden sie durch Enthauptung getötet und das Blut wurde gesammelt. Die Se-rum-Calcium-Konzentration wurde mit einem Atomab-sorptionsspektrophotometer gemäss obiger Beschreibung ermittelt. Die Ergebnisse sind in der nachstehenden Tabelle II angegeben: Rats in a control group received 0.05 ml of 95% ethanol intrajugular, while rats in the test groups 325 pmol of the compound (12) or of la, 25-dihydroxy-vitamin D3 (la, 25- (OH) 2D3) dissolved in 0 , 05 ml of 95% ethanol. 18 hours later, they were beheaded and the blood was collected. The serum calcium concentration was determined using an atomic absorption spectrophotometer as described above. The results are shown in Table II below:

Tabelle II Table II

Anstieg der Serum-Calcium-Konzentration in Ansprache auf eine Einzeldosis von 325 pMol der Verbindung (12) oder der Verbindung la,25-(OH)2D3 verabfolgt 18 Stunden vor der Tötung Increase in serum calcium concentration in response to a single dose of 325 pmol of compound (12) or compound la, 25- (OH) 2D3 administered 18 hours before sacrifice

Verabfolgte Verbindung Serum-Calcium-Konzentration (mg/100 ml) ± Standardabweichung Compound administered Serum calcium concentration (mg / 100 ml) ± standard deviation

Ethanol 4,2 ± 0,la) Ethanol 4.2 ± 0, la)

Verbindung (12) 5,0 ± 0,4b) Connection (12) 5.0 ± 0.4b)

la,25-(OH)2D3 5,4 ± 0,4b> la, 25- (OH) 2D3 5.4 ± 0.4b>

b) ist deutlich unterschiedlich vona) p <0,001. b) is significantly different from a) p <0.001.

Die obigen Ergebnisse zeigen, dass beide Verbindungen (10) und das Endprodukt (12) gemäss der Erfindung hoch aktiv sind bezüglich der Förderung eines Anstiegs der Se-rum-Calcium-Niveaus von Ratten mit Vitamin D-Mangel. Sie sind tatsächlich äquivalent bezüglich ihrer biologischen Wirksamkeit im Vergleich zu entsprechenden bekannten, in der Seitenkette gesättigten Verbindungen, la-OH-D3 und la,25-(OH)2D3, deren hohe Wirksamkeit und pharmazeutische Verwendbarkeit durch viele Berichte allgemein und in der Patentliteratur (z.B. vgl. US-Patentschrift 4 225 596) dokumentiert ist. The above results show that both compounds (10) and the final product (12) according to the invention are highly active in promoting an increase in the serum calcium levels of rats with vitamin D deficiency. They are actually equivalent in terms of their biological activity compared to corresponding known compounds saturated in the side chain, la-OH-D3 and la, 25- (OH) 2D3, whose high effectiveness and pharmaceutical usability have been reported in many reports in general and in the patent literature ( For example, see U.S. Patent 4,225,596).

Besonders bemerkenswert und unerwartet ist die überlegene Aktivität von Verbindung (10) bei der Mineralisierung der Knochen von Tieren (Küken), die sich gegenüber der physiologischen Verwendung von Vitamin D2-Verbindungen unterscheidet. Dies ist eine Verstärkung, welche durch die folgenden Daten erläutert wird. Particularly noteworthy and unexpected is the superior activity of compound (10) in mineralizing the bones of animals (chicks), which differs from the physiological use of vitamin D2 compounds. This is a gain which is illustrated by the following data.

Verfahren method

1 Tag alte weisse männliche Leghorn-Küken wurden von der Firma Northern Hatcheries (Beaver Dam, WI) erhalten. Sie wurden mit der Sojaproteindiät mit Vitamin D-Mangel gemäss der Beschreibung in Omdahl et al (Biochemistry 10, 2935, 2940, 1971) für 3 Wochen gefüttert, wonach sie einen Vitamin D-Mangel aufwiesen. Sie wurden sodann in Gruppen von jeweils 6 Küken eingeteilt. Eine Gruppe erhielt Wes-son-Öl-Träger oral verabfolgt; die anderen Gruppen erhielten die angegebene Verbindung (vgl. Tabelle III) gelöst in derselben Menge von Wessen-Ol jeden Tag für eine Zeit von 7 Tagen. 24 Stunden nach der letzten Verabfolgung wurden alle Küken durch Umdrehen des Halses getötet. Ihre Tibiae (Schienbeine) wurden entfernt und von anhaftendem weichem und Verbundgewebe befreit und für 24 Stunden in Alkohol extrahiert, woran sich 24 Stunden in Diethylether unter Verwendung eines Soxhlet-Extraktors anschlössen. Die Knochen wurden sodann bei 100 "F auf ein konstantes Gewicht getrocknet und gewogen. Sie wurden sodann bei 650 °C für 24 Stunden in einem Muffelofen verascht. Die Asche wurde gewogen und der prozentuale Aschegehalt in jedem der Tibiae wurde berechnet. Die Ergebnisse sind in der Tabelle III nachfolgend aufgeführt. One day old white male Leghorn chicks were obtained from Northern Hatcheries (Beaver Dam, WI). They were fed the soy protein diet with vitamin D deficiency as described in Omdahl et al (Biochemistry 10, 2935, 2940, 1971) for 3 weeks, after which they had a vitamin D deficiency. They were then divided into groups of 6 chicks each. One group received Wes-son oil carriers orally; the other groups received the specified compound (see Table III) dissolved in the same amount of Wessen-Ol every day for a period of 7 days. 24 hours after the last administration, all chicks were killed by turning the neck. Her tibiae were removed and adherent soft and composite tissue removed and extracted in alcohol for 24 hours, followed by 24 hours in diethyl ether using a Soxhlet extractor. The bones were then dried to constant weight at 100 "F and weighed. They were then incinerated in a muffle furnace at 650 ° C for 24 hours. The ash was weighed and the percent ash content in each of the tibiae was calculated. The results are in listed in Table III below.

Tabelle III Table III

Mineralisierung von rachitischen Kükenknochen Mineralization of rachitic chick bones

Verbindung connection

Menge amount

Anzahl number

%Asche %Ash

(pMol/d/7 (pmol / d / 7

der Tiere the animals

Tage) Days)

-D -D

0 0

6 6

32,0 ± 1,0 32.0 ± 1.0

l,25-(OH)2D3 1.25- (OH) 2D3

130 130

6 6

41,0 ± 3,4' 41.0 ± 3.4 '

1cc-OH-D3 1cc-OH-D3

130 130

6 6

42,0 ± 3,2' 42.0 ± 3.2 '

la-OH- D2 la-OH-D2

1300 1300

6 6

38,0 ± 4,0' 38.0 ± 4.0 '

Verbindung connection

130 130

6 6

38,0 ± 3,9' 38.0 ± 3.9 '

'Diese Werte sind nicht wesentlich unterschiedlich. 'These values are not significantly different.

Die Ergebnisse zeigen, dass 130 pMol von l,25-(OH)2D3 oder lcc-OH-D3 oder von der neuen Verbindung (10) gemäss der Erfindung in gleichem Mass wirksam sind bezüglich der Steigerung des Mineralgehaltes der rachitischen Tibia. Um jedoch das gleiche Mass an Effektivität zu erreichen, waren 1300 pMol la-OH-D2 erforderlich. Dies stimmt mit den vorangehenden Ergebnissen überein, worin gezeigt wurde, dass eine lOfach grössere Dosis von la-OH- D2 als von la-OH-D3 erforderlich ist, um die gleiche Mineralisierung der Tibia von rachitischen Küken zu erzeugen. Diese Ergebnisse zeigen überraschenderweise, dass die Verbindung (10), obwohl sie eine Analogverbindung von la-OH-D2 ist, eine unerwartete und überlegene Wirksamkeit bezüglich der Mineralisierung der Knochen von Tieren bietet, als sie bekannt ist zur Unterscheidung gegen die Vitamin Do-Verbindungen in physiologischer Verwendung. Dies ist ein unerwartetes Merkmal dieser neuen Analogverbindung und zu deren Anwendung. Da diese unerwartete Aktivität in vivo der Verbindung (10) unzweifelhaft nach der Hydroxylierung zur entsprechenden la,25-DihydroxyVerbindung (Verbindung (12)) in vivo auftritt, sollte die Verbindung, d.h. Verbindung (12), welche die 24-Desmethyl-Analogverbindung von der bekannten Verbindung la,25-Dihydroxyvitamin D3 ist, wirksam sein, um eine Knochenmineralisation bei Küken zu schaffen, die äquivalent zu derjenigen ist, die durch la,25-Dihydroxyvitamin D3 gezeigt wird; somit würde diese neue Vitamin D2-Analogverbindung in Küken voll wirksam sein. Diese hohe Wirksamkeit der Verbindungen (10 ) und (12) in einem Tier, welche sie gegenüber Derivaten vom Vitamin D2-Typ unterscheidet ist neu und ein unterscheidendes Merkmal dieser Substanzen. The results show that 130 pmol of l, 25- (OH) 2D3 or lcc-OH-D3 or of the new compound (10) according to the invention are equally effective in increasing the mineral content of the rachitic tibia. However, to achieve the same level of effectiveness, 1300 pmol la-OH-D2 was required. This is consistent with the previous results, which showed that a 10-fold greater dose of la-OH-D2 than la-OH-D3 is required to produce the same tibial mineralization in rachitic chicks. These results surprisingly show that although compound (10) is an analogue of la-OH-D2, it offers an unexpected and superior activity in mineralizing animal bones than is known to distinguish it from vitamin Do compounds in physiological use. This is an unexpected feature of this new analog connection and its application. Since this unexpected activity in vivo of compound (10) undoubtedly occurs after the hydroxylation to the corresponding la, 25-dihydroxy compound (compound (12)) in vivo, the compound, i.e. Compound (12), which is the 24-desmethyl analogue compound of the known compound la, 25-dihydroxyvitamin D3, can be effective to provide bone mineralization in chicks equivalent to that shown by la, 25-dihydroxyvitamin D3 becomes; thus this new vitamin D2 analogue compound would be fully effective in chicks. This high activity of the compounds (10) and (12) in an animal, which distinguishes them from derivatives of the vitamin D2 type, is new and a distinguishing feature of these substances.

Aufgrund der ausgeprägten biologischen Aktivität werden die erfindungsgemässen Verbindungen leicht Anwendung finden als Ersatzstoffe für verschiedene der bekannten Vitamin D-Metaboliten in der Therapie oder Prophylaxe von Unregelmässigkeiten des Calcium-Metabolismus, wie Rachitis, Hypoparathyroidismus, Osteodystrophie, Knochenerweichung oder Osteoporose bei Menschen oder verwandten Calcium-Mangel-Erkrankungen (z.B. Milchfieber) bei Tieren. Entsprechend können diese Verbindungen bei der Behandlung von bestimmten bösartigen Erkrankungen, z.B. bei menschlicher Leukämie eingesetzt werden. Unter Berücksichtigung der ausgeprägten und unerwarteten Wirksamkeit der erfindungsgemässen Verbindungen (Verbindungen (10) und (12)) bei der Förderung der Mineralisierung von Knochen bei Vögeln (vgl. Tabelle III) können diese Verbindungen eine spezielle Verwendung haben bei der Abwendung oder der Behandlung von Zuständen, die durch Calcium-Ungleichgewicht erzeugt werden (z.B. Dünne der Eischale, Schwäche von Geflügelbeinen) bei Geflügel, wobei alle die bekannten Vitamin D2-Derivate eine sehr schlechte Wirksamkeit aufweisen. Because of the pronounced biological activity, the compounds according to the invention are easily used as substitutes for various of the known vitamin D metabolites in the therapy or prophylaxis of irregularities in calcium metabolism, such as rickets, hypoparathyroidism, osteodystrophy, bone softening or osteoporosis in humans or related calcium Deficiency diseases (eg milk fever) in animals. Accordingly, these compounds can be used in the treatment of certain malignant diseases, e.g. used in human leukemia. Taking into account the pronounced and unexpected effectiveness of the compounds according to the invention (compounds (10) and (12)) in promoting the mineralization of bone in birds (cf. Table III), these compounds can have a special use in the prevention or treatment of conditions , which are caused by calcium imbalance (eg thinness of the eggshell, weakness of poultry legs) in poultry, where all the known vitamin D2 derivatives have a very poor effectiveness.

Zu therapeutischen Zwecken können die Verbindungen The compounds can be used for therapeutic purposes

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

7 7

667 658 667 658

auf jeden herkömmlichen Verabfolgungswege und in jeder Form, die für die ausgewählte Verabfolgungsmethode geeignet ist, verabfolgt werden. Die Verbindungen können mit jedem verträglichen und unschädlichen pharmazeutischen Träger formuliert werden in Form von Pillen, Tabletten, Gelatinekapseln oder Suppositorien oder als Lösungen, Emulsionen, Dispersionen oder Suspensionen in unschädlichen Lösungsmitteln oder Ölen, und eine derartige Formulierung kann ebenfalls andere therapeutisch wirksame und vorteilhafte Bestandteile enthalten, wie sie für die speziellen Verabfolgungen zweckmässig sein können. Für Verabfolgungen an Menschen werden die Verbindungen vorteilhafterweise in Mengen von 0,5 bis 10 jag pro Tag verabfolgt, wobei die spe-5 zielle Dosis eingestellt wird in Übereinstimmung mit der speziellen verabfolgten Verbindung, der zu behandelnden Krankheit und dem Zustand und der Ansprache des Patienten, wie den Fachleuten auf diesem Gebiet verständlich ist. by any conventional route of administration and in any form suitable for the mode of administration selected. The compounds can be formulated with any compatible and harmless pharmaceutical carrier in the form of pills, tablets, gelatin capsules or suppositories or as solutions, emulsions, dispersions or suspensions in harmless solvents or oils, and such a formulation can also contain other therapeutically active and advantageous ingredients how they can be appropriate for the special administrations. For human administrations, the compounds are advantageously administered in amounts of 0.5 to 10 days per day, with the specific dose being adjusted in accordance with the particular compound administered, the disease to be treated, and the condition and response of the patient , as is understandable to specialists in this field.

C C.

1 Blatt Zeichnungen 1 sheet of drawings

Claims (7)

667 658 667 658 2 2nd PATENTANSPRÜCHE 1. Verbindungen der Formel PATENT CLAIMS 1. Compounds of the formula OH OH worin R ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxylgruppe ist. wherein R is a hydrogen atom or a hydroxyl group. 2. Verbindung nach Anspruch 1, worin R ein Wasserstoffatom ist. 2. A compound according to claim 1, wherein R is a hydrogen atom. 3. Verbindung nach Anspruch 2 in kristalliner Form. 3. A compound according to claim 2 in crystalline form. 4. Verbindung nach Anspruch 1, worin R eine Hydroxylgruppe ist. 4. A compound according to claim 1, wherein R is a hydroxyl group. 5. Verbindung nach Anspruch 4 in kristalliner Form. 5. A compound according to claim 4 in crystalline form. 6. Pharmazeutische Zusammensetzung, welche die Verbindung nach Anspruch 2 und einen pharmazeutisch unbedenklichen Exzipienten enthält. 6. A pharmaceutical composition containing the compound of claim 2 and a pharmaceutically acceptable excipient. 7. Pharmazeutische Zusammensetzung, welche die Verbindung nach Anspruch 4 und einen pharmazeutisch unbedenklichen Exzipienten enthält. 7. A pharmaceutical composition containing the compound of claim 4 and a pharmaceutically acceptable excipient.