DE2915160A1

DE2915160A1 - Glycoside der periandrin-reihe

Info

Publication number: DE2915160A1
Application number: DE19792915160
Authority: DE
Inventors: Yohei Hashimoto; Hiroyuki Ishizone; Masaru Ogura
Original assignee: Yamasa Shoyu KK
Current assignee: Yamasa Shoyu KK
Priority date: 1978-04-14
Filing date: 1979-04-12
Publication date: 1979-10-31
Also published as: FR2422684A1; GB2019407B; FR2422684B1; US4320225A; DE2915160C2; GB2019407A

Description

ELISABETH JUNG OaPHlL₁DtPL-CHEM.

JÜRGEN SCHIRDEWAHN drhblma GERHARD S C H M ITT- N I LS 0 N dr.-ing. GERHARD B. HAGEN drphil.
PETER HIRSCH DiPL-iNG.

PATENTANWÄLTE

:. ^i 40, O Q -Ι Γ -Ι β Λ

- P. O. BOX 401*68 *■ ^ ' ° I OU

* CLEM&NSSTRASSE 30 TELEFON: (089) 3450 67 TELEGRAMM/CABLE: INVENT MÖNCHEN TELEX: 5-29 686

Q 069 C (j/vdB/gs)
Case 790125

12. April 1979

YAMASA SHOYU KABUSHIKI KAISHA, Chiba, Japan

und

YOHEI.HASHIMOTO, Hyogo, Japan

Glycoside der Periandrin-Reihe

beanspruchte Prioritäten:

14. April I978 - Japan 9. Januar 1979 - Japan 9, Januar I979 - Japan 2. März 1979 - Japan

Nr. 43198/78 Nr. 404/79 Nr. 405/79 Nr. 23413/79

Die Erfindung betrifft Feriandrine, die als-süßschmeckende Substanzen in der Natur vorkommen.

Pflanzen der Gattung Periandra sind Sträucher, die zur Familie der Leguminosen gehören und die wild in den nördlichen und mittleren Teilen Brasiliens wachsen. In diesen Gebieten werden

die Wurzeln dieser Pflanzen von den Eingeborenen "Alcaqus de

909 8 U/0757

• if.. ".-■ : - -· terra" genannt, das "einheimisches Süßholz" bedeutet. Diese Wurzeln sind seit langer Zeit für medizinische Zwecke, beispielsweise als Expectorantien, verwendet worden. Die Wurzeln dieser Pflanzen besitzen Süße und auch einen erheblichen Anteil an Bitterstoffen. Deshalb konnten die durch Extrahieren dieser Wurzeln mit Wasser, Alkohol usw. erhaltenen Extrakte nicht so wie sie sind für Süßungsmittel oder Süßungshilfsmittel, wie Lakritzen- oder Süßholzextrakte, verwendet werden.

Im übrigen findet sich in "Chemical Abstracts" 36 (1942), S. 3319> der Hinweis, daß der in den Wurzeln von Periandra-Pflanzen vorliegende süßschmeekende Stoff Glycyrrhizin ist.

Vorliegender Erfindung lag nun die Aufgabe zugrunde, diese süßschmeckenden Stoffe zu isolieren. Die Erfindung löst diese Aufgabe.

Gegenstand der Erfindung sind Glycoside der Periandrin-Reihe der allgemeinen Formel Ia

M00(

(la)

in der R ein Rest der allgemeinen Formeln I" bis IV

809844/0757

23151

MOOC /CH,

H₃C CH₃ (H)

MOOG_x

^H3^C ■ CH. (HI)

9098U/0757

MOOC ,CH

3 ·

(IV)

/\H

H₃C CH₃

ist und M ein Wasserstoffatom oder ein gegenüber Menschen praktisch ungiftiges Kation bedeutet.

Die Glycoside mit den Resten der allgemeinen Formeln I bis IV werden nachstehend als Periandrine I, II, III und IV bezeichnet

In den Zeichnungen bedeuten die Fig. 1 bis 4 die Infrarotspektren der Periandrine I bis IV.

Bei den Untersuchungen lagen die Periandrine I und Il in Form der freien Säuren und die Periandrine III und IV in Form ihrer Monoammoniumsalze vor.

Nachstehend werden die chemischen Strukturformeln und die physikalischen und chemischen Eigenschaften der Periandrine I, II, III und IV angegeben.

Die erfindungsgemäßen Periandrine sind Glycoside der nachstehenden allgemeinen Formel Ia

809844/0767

MOO V

HO

vOH H/1

Μοο

(la)

HOV" ",/Η H OH

wobei der Rest R einen der vier Reste der Periandrine I bis IV darstellt.

Beim Periandrin I bedeutet der Rest M sowohl im Zuckerrest als auch beim Rest R der allgemeinen Formel Ia ein Wasserstoffatom oder ein gegenüber Menschen praktisch ungiftiges Kation, wie
ein Alkalimetall, beispielsweise Natrium oder Kalium, oder die Ammoniumgruppe oder Calcium.

Periandrin I

MOOC pH3

MOOC

HO V~~f H .H

\0H H/

HO I /Η

H OH

90984A/0757

Eeriandrin I in Form seiner "freien Säure (M=H) hat die nachstehenden physikalischen und chemischen Eigenschaften:

(a) Schmelzpunkt: > 300⁰C (wird bei etwa 190⁰C schwarz)

(b) Drehung: Ä/d° ⁼ "²^>⁰° ^⁰ " ^{1>0 in Wasser})

(c) Molekulargewicht: 822 (Massenspektrum nach der FeId-

desorptionsmethode: M⁺«H«Na = 846)

(d) Analyse für

4H₂O:	C	W)	H	W
ber.:	56	,36	7,	88
gef.:	56	,52	7,	61

(e) Summenformel: ^42^62^16

(f) IR-Spektrum (KBr):^_max 3^00, 3200, 1700, 1600, 1400,

1100, 625 cm"¹ (siehe Pig. I)

(g) Löslichkeit: leicht löslich in Wasser

löslich in Pyridin

schwer löslich in Methanol und Äthanol (h) Dünnschichtchromatographie:

(1) n-Butanol-Benzol-Methanol-28?öiger Ammoniak = 4:3:2:3; Rf-Wert: 0,18;

(2) Methylenchlorid-Methanol-Ä'thanol-4o^ige Essigsäure = 8:4:l:2j Rf-Wert: 0,44;

(3) Äthylacetat-n-Propanol-Wasser = 7:5:4; Rf-Wert: 0,17;

(i) UV-Spektrum: Endabsorption;

(j) Aussehen: farblose, rechteckige Plättchen (aus einem

Wasser-Methanol-Gemisch)

90984 A/07 57

/915160

Periandrin II

-3-

Beim Periandrin II hat der Rest M die gleiche Bedeutung wie beim Periandrin I.

MQOC pH,

MOOC

HO

MOOC

n^

OH

NfJj

H₀C CH.

H OH

Periandrin II in Form seiner freien Säure (M=H) hat die nachstehenden physikalischen und chemischen Eigenschaften:

(a) Schmelzpunkt: 216 bis 220⁰C (Zers.)

(b) Drehung: A^ ^: ⁺^'°° (° ⁼ °>²7 ^{in Wasser})

(c) Analyse für C42^H62°l6*^5H2^{0: C} ^ ^H ^

ber.: 57,52 7,82 gef.: 57,93 7,80

(d) Summenformel: ^c42^H62°l6

(e) IR-Spektrum (KBr): 0_mav 3^00, 3200, 2950, I7IO, I6OO,

1400, IO6O cm"¹ (siehe Fig. 2)

909844/0767

(f) Löslichkeit: leicht löslich in Wasser

löslich in Pyridin

schwer löslich in Methanol und Äthanol

(g) Dünnschichtchromatographie:

(1) n-Butanol-Benzol-Methanol-28^iger Ammoniak = 4:5:2:3; Rf-Wert: 0,18;

(2) Methylenehlorid-Methanol-Kthanol-40#ige Essigsäure = 8:4:1:2; Rf-Wert: 0,44;

(5) Äthylacetat-n-Propanol-Wasser

= 7:5:4; Rf-Wert: 0,15 (h) UV-Spektrum: Endabsorption;

(i) Aussehen: farblose, rechteckige Plättchen (aus einem Wasser-Methanol-Gemisch).

Periandrin III

Beim Periandrin III hat der Rest M die gleiche Bedeutung wie beim Periandrin I.

MOOC , .CH.

MOOC, ° /\

/~°\| ^H3^{C CH}

MOOQ

KOH H/ HO N -f H

H OH

S098AA/07B7

Periandrin III in Form seiner freien Säure (M=H) hat die nachstehenden physikalischen und chemischen Eigenschaften:

(a) Schmelzpunkt: >j500°C

(D) Drehung: /cij^ = -24,5° (c = 1,1 in Wasser)

(c) Analyse für C^H^O^^HgO: C(#) H {%)

ber.: 58,59 7,96 gef.: 58,07 8,17

(d) Summenformel: ^c2ip^H64°l6

(d) IR-Spektrum des Monoammoniumsalzes (KBr): "P 2400, 2930, I7OO, 1600, 1408, 1040 cm"¹ (siehe Pig. J)

(f) Löslichkeit: leicht löslich in Wasser

löslich in Pyridin

schwer löslich in Methanol und Äthanol

(g) Dünnschichtchromatographie:

(1) n-Butanol-Benzol-Methanol-28$iger Ammoniak 4O:2:3; Rf-Wert: 0,15

(2) Methylenchlorid—Methanol-Äthanol-40$ige Essigsäure 8:4:1:2; Rf-Wert: 0,40

(3) Ä'thylaeetat-n-Propanol-Wasser 7:5:4; Rf-Wert: 0,14

(h) UV-Spektrum: Endabsorption

(i) Aussehen: farbloses, kristallines Pulver

9098U/0757

.-29.3 5160

Periandrin IV

Beim Periandrin IV hat der Rest M die gleiche Bedeutung wie beim Periandrin I.

MOOC .CH₃

MOOC
H J—0

Periandrin IV in Form seiner freien Säure (M=H) hat die nachstehenden physikalischen und chemischen Eigenschaften:

(a) Schmelzpunkt: >J5OO°C

(b) Drehung: &Jv) ~ ⁺96° (c = 2,5 in Wasser)

(c) Analyse für ^c2j.₂ ^H64⁰l6*^^H2^{0: C} ^ ^H ^

ber.: 57,39 8,03 gef.: 57,01 7,70

(d) Summenformel: C,!|2^H64^Ol6

(e) IR-Spektrum des Monoammoniumsalzes (KBr): vl 3^00, 2920, I700, 1600, 1407, 1045 cm"*¹ (siehe Fig. 4)

909844/07St

ORIGINAL INSPECTED

(f) Löslichkeit: leicht löslich in Wasser

löslich in Pyridin

schwer löslich in Methanol und Äthanol

(g) Dünnschichtchromatographie:

(1) n-Butanol-Benzol-Methanol-28$iger Ammoniak = 4:3:2:3; Rf-Wert: 0,15;

(2) Methylenchlorid-Methanol-Äthanol-40#ige Essigsäure = 8:4:1:2; Rf-Wert: 0,40

(3) Ä'thyläcetat-n-Propanol-Wasser = 7:5:4; Rf-Wert: 0,19

(h) UV-Spektrum: Endabsorption

(i) Aussehen: farbloses, kristallines Pulver.

Die vorgenannten Periandrine kommen in den Wurzeln von Pflanzen der Gattung Periandra vor, von denen typische Vertreter Periandra mediteranea und Periandra dulcis sind. Die Wurzeln dieser Pflanzen oder die getrockneten Wurzeln werden gegebenenfalls nach einem Zerkleinern oder Mahlen einer Extraktion unterworfen.

Die Extraktion wird gewöhnlich durch Anwendung von (a) Wasser oder einem Gemisch aus Wasser und einem hydrophilen bzw. mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, wobei der Gehalt an diesem hydrophilen oder mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel nicht über 80 % liegt und als organische Lösungsmittel beispielsweise Methanol, Äthanol, Propanol, Butanol, Aceton oder Methy1-äthylketon unter der Bedingung eines pH-Wertes nicht unter 3 in Betracht kommen, oder

909 8 A U/07 57

915160

(b) einem Wasser enthaltenden oder einem wäßrigen hydrophilen organischen Lösungsmittel, z.B. Äthanol mit einem Gehalt von nicht über 15 % Wasser, unter sauren Bedingungen, und zwar eines pH-Wertes unter J5,

als Extraktionsmittel durchgeführt.

Die Temperatur für die Extraktion ist nicht in besonderem Maße beschränkt und kann im Bereich zwischen dem Gefrierpunkt und dem Siedepunkt des Lösungsmittels liegen. Die Extraktion bei einer niedrigen Temperatur ist insofern vorteilhaft, als der erhaltene Extrakt einen geringeren Anteil an Verunreinigungen aufweist, obwohl eine längere Extraktionszeit erforderlich ist. Bei einer höheren Temperatur wird die Extraktionszeit vorteilhafterweise abgekürzt. Die Dauer der Extraktion kann gegebenenfalls entsprechend der Art des Extraktionsmittels, der Exfcraktionstemperatur und anderer Bedingungen ausgewählt werden. Die Wirksamkeit der Extraktion kann durch Mitverwenden von Alkaliverbindungen, Polyphosphaten und/oder grenzflächenaktiven Verbindungen im Extraktionsmittel gesteigert werden.

Die Gewinnung und Reinigung der Periandrine aus den erhaltenen Extrakten kann mittels einer Kombination geeigneter üblicher Reinigungsverfahren durchgeführt werden, wie

(a) mittels Säurefällung,

(b) mittels Extrahieren mit einem Wasser enthaltenden oder mit einem wäßrigen, sauren, hydrophilen oder mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmitteln bei einem pH-Wert unter J5*

(c) mittels Ausfällen unter Verwendung von hydrophilen oder

mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmitteln bei einen;

909844/0757

-915160

pH-Wert nicht unter J5,

(d) mittels Ionenaustauscher--oder Adsorptionschromatographie,

(e) mittels Behandlung mit Molekularsieb- oder Dialyse-Membranen., oder

(f) durch Umkristallisieren.

Die Ausführung der typischen Reinigungsverfahren werden nachstehend näher erläutert.

Periandrine werden aus ihren wäßrigen Lösungen unter sauren Bedingungen, d.h. einem pH-Wert unter 3, ausgefällt. In diesem Fall verbleibt der größte Teil der Bittersubstanzen, die den Extrakt verunreinigen, in Lösung, so wie sie sind. Wenn Mineral säuren, wie Chlorwasserstoffsäure oder Schwefelsäure, zu einer wäßrigen Lösung gegeben werden, die unmittelbar aus dem Extrakt zur Durchführung der Säure fällung hergestellt worden ist, werden die Periandrine zusammen mit Proteinen und zahlreichen säureunlöslichen Substanzen ausgefällt.

Um ein Mitausfällen der Proteine und dergleichen zu verringern, ist es möglich, je nach Erfordernis eine Vorbehandlung durchzuführen, wie

(a) Umwandeln der säureunlöslichen Substanzen, wie Proteine, in säurelösliche Peptide oder Aminosäuren mittels einer Behandlung mit Enzymen, wie Protease,

(b) Erhitzen der Proteine auf 70°C oder höher, um sie zu koagulieren und zu entfernen, und

(c) Zufügen zu einer Lösung von Metallhydroxiden, wie Calciumhydroxid, Magnesiumhydroxid oder Aluminiumhydroxid, oder

909844/0757

ORIGINAL INSPECTED

Zufügen zuerst einer Lösung von organischen Salzen dieser Metalle und dann Einstellen der Lösung auf einen alkalischen pH-Wert, wobei sich Metallhydroxide in der Lösung bilden, wodurch die Proteine ausgefällt und entfernt werden können.

Im Fall der Säurefällungsbehandlung kann die Ausbeute an dem ausgefällten Produkt durch Aussalzen in Gegenwart von Neutralsalzen, wie Natriumchlorid, Natriumsulfat, Natriumnitrat, Natriumformiat oder Natriumacetat, erhöht werden.

Unter pH-Bedingungen im Bereich von schwach sauer, d.h., einem pH-Wert von J5 oder höher bis zu.alkalischen Bedingungen, ist die Löslichkeit der Periandrine in einem Lösungsmittel mit einem Gehalt von etwa 85 % oder mehr hydrophilen oder mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmitteln niedrig, jedoch sind die Bittersubstanzen darin löslich, wodurch die Periandrine und die bitter schmeckenden Substanzen getrennt werden können. Demzufolge kann ein Periandrin als Niederschlag abgetrennt und gesammelt werden, indem man ein hydrophiles oder ein mit Wasser mischbares organisches Lösungsmittel in einer Menge von 85 $ oder mehr, vorzugsweise 95 % oder mehr, zu dem wäßrigen Extrakt, zu einer konzentrierten Lösung oder zu dem Feststoff einer abgetrennten und gereinigten Extraktlösung oder zu einer solchen Lösung zugibt, die durch Neutralisieren und Auflösen des Niederschlags aus der vorgenannten Säurefällungsstufe hergestellt worden ist. Das Periandrin kann man als Niederschlag auch aus einem Extrakt erhalten, der nach dem Extraktionsverfahren mit V/asser enthaltenden, hydrophilen organischen Lösungsmitteln eines pH-Wertes unter 3 erhalten worden ist, in-

909844/0757

ORJGiNAL SMSPECTiD

dem man in einfacher Weise den pH-Wert des Extrakts mittels alkalischer Verbindungen auf J5 oder höher einstellt.

Da das Periandrin bei einem pH-Wert unter J5 in Wasser enthaltenden (oder wäßrigen) hydrophilen (oder mit Wasser mischbaren) organischen Lösungsmitteln, wie wäßrigem Äthanol, löslich ist, wird.der wäßrige Extrakt eingeengt und auf einen sauren pH-Wert eingestellt, oder der nach der vorgenannten Säurefällungsbehandlung gebildete Niederschlag wird gesammelt und dann mit einem hydrophilen organischen Lösungsmittel in einer solchen Menge versetzt, daß die Konzentration an dem Lösungsmittel 85 % oder höher, vorzugsweise 95 f₀ oder höher, beträgt. Dadurch können Periandrine extrahiert werden. Bezüglich eines Verfahrens zur Herstellung einer wäßrigen Lösung des Periandrins aus dem erhaltenen Extrakt werden unlösliche Rückstände aus dem Extrakt entfernt, und entweder wird der Extrakt als solcher oder nach einer Einengung in Wasser suspendiert und dann durch Neutralisieren gelöst_; oder zu dem Extrakt werden nicht-hydrophile (oder mit Wasser nicht mischbare) organische Lösungsmittel gegeben, die mit den hydrophilen oder mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmitteln mischbar sind, um das Periandrin in Form eines Niederschlags zu erzeugen, der dann in Wasser gelöst wird.

Die Abtrennung der Periandrine von anderen Verunreinigungen oder die Trennung der Periandrine voneinander kann dadurch erfolgen, daß man eine Periandrine enthaltende Lösung einer fraktionierten Absorptionsbehandlung oder einer fraktionierten Eluxerungsbehandlung mit Ionenaustauschern, wie schwach basi-

9 0 98U/0757

sehen anionischen Austauscherharzen oder vernetzten Diäthylaminoäthyldextranen, oder mit Adsorptionsmitteln, wie synthetischen Adsorptionsmitteln, Silikagel, granulierten Polyamiden, Aktivkohle, aktiviertem Aluminiumoxid,'aktiviertem Ton oder Diatomeenerde, unterwirft. Die Durchführung dieser Behandlungen erfolgt gewöhnlich mittels Säulenchromatographie. Die Arbeitsweisen und die Bedingungen können in geeigneter Weise entsprechend den Arten der verwendeten Trägermaterialien und anderer Paktoren ausgewählt und angewendet werden.

Die Reinigung wird in den nachstehenden Beispielen näher erläutert.

Beispiel 1

20 kg Wurzeln von Periandra dulcis werden in kleine Stücke geschnitten, die 24 Stunden mit 100 Liter V/asser bei 70 bis 80⁰C extrahiert werden. Die Extraktion wird zweimal wiederholt. Dann wird der Extrakt filtriert. Die Filtrate werden vereinigt und unter vermindertem Druck auf 8 Liter eingeengt. Der konzentrierten Flüssigkeit wird dann das Hf ache Volumen Äthanol (88 Liter) unter Rühren zugegeben. Das Gemisch läßt man über Nacht bei 5⁰Cabkühlen. Der gebildete Niederschlag (1,06 kg) wird abfiltriert und wieder in 4 Liter Wasser gelöst. Zu dieser Lösung fügt man unter Rühren das 11fache Volumen Äthanol (44 Liter) hinzu und läßt das Gemisch über Nacht bei 5⁰C abkühlen.

Die gleiche Arbeitsweise wird wiederholt. Man erhält 870 g einer süßschmeckenden Rohfraktion, die mittels Säulenchromatographie an Silikagel gereinigt wird. I50 g der süßschmeckenden

909844/0757

Rohfraktion werden an einer äquivalenten Menge Silikagel (Jkieselgel 6Ö) adsorbiert. Dann wird diese an Silikagel adsorbierte Fr-aktion auf eine säule von 6 cm Durchmesser und 70 cm Länge gegeben, die zuvor mit 1 kg Silikagel gefüllt worden ist. Anschließend eluiert man die süßschmeckende Fraktion mit einem Lösungsmittelgemisch aus n-Butanol, Benzol, Methanol und 28prozentigem Ammoniak im Verhältnis 4:3:2:2. Auf diese Weise erhält man eine Fraktion mit den Periandrinen I und II und eine andere Fraktion mit den Periandrinen III"und IV.

Man wiederholt zwei- bis dreimal die Chromatographie an Silikagel mit dem vorgenannten Lösungsmittelgemisch bei der Fraktion mit den Periandrinen I und II, bis die Periandrine I und II bei der Dünnschichtchromatographie einen einzigen Fleck zeigen. Als Laufmittel verwendet man ein Gemisch aus Methylenchlorid, Methanol, Äthanol und 40prozentiger Essigsäure im Verhältnis 8:4:1:2 und ein Gemisch aus Äthylacetat, n-Propanol und Wasser im Verhältnis 7:5:4. Nach der Bestätigung, daß die Substanzen bei der Dünnschichtchromatographie eine einzige Substanz zu sein scheinen, erhält man aus heißer Essigsäure 86O mg Periandrin I und aus einem Wasser-Alkohol-Gemisch 240 mg Periandrin II.

Die Fraktion mit den Periandrinen III und IV (1,1 g) wird an einer äquivalenten Menge Silikagel adsorbiert. Diese an Silikagel adsorbierte Fraktion wird dann auf eine Säule von 6 cm Durchmesser und 70 cm Länge gegeben, die zuvor mit 1 kg Silikagel gefüllt wordυη ist. Lie säule wird dann mit einem Lösungsmittelgemisch aus Chloroform, Methanol und Wasser im Verhältnis

8 44/075?

25 : 17 ί 3 eluiert. Man wiederholt die Chromatographie an Silikagel zwei- bis dreimal mit dem Eluierungsprodukt, bis die Periandrine III und IV bei der Dünnschichtchromatographie einen einzigen Fleck zeigen. Als Laufmittel verwendet man Äthylenchlorid, Methanol, Äthanol und 40prozentige Essigsäure im Verhältnis 8:4:1:2 und Äthylacetat, n-Propanol und Wasser im Verhältnis 7 ϊ 5 : 4. Nach der Bestätigung,, daß die erhaltenen Substanzen aufgrund der Dünnschichtchromatographie eine einzige Substanz zu sein scheinen, erhält man aus Wasser 40 mg Periandrin III und I9 mg Periandrin IV als kristalline Pulver.

Beispiel2

30 kg Wurzeln von Periandra dulcis werden in kleine Stücke geschnitten und dann 24 Stunden bei Raumtemperatur mit 150 Liter Wasser extrahiert, das mittels Chlorwasserstoffsäure auf pH 2,0 bis 2,5 eingestellt worden ist. Die Extraktion wird zweimal wiederholt. Dann wird der Extrakt filtriert. Die Filtrate werden vereinigt, mit alkalischen Verbindungen neutralisiert und unter vermindertem Druck auf 6 Liter eingeengt. Zu der eingeengten Flüssigkeit wird unter Rühren das Hf ache Volumen Äthanol (66 Liter) gegeben. Dann läßt man das Gemisch über Nacht bei 5⁰C abkühlen. Der gebildete Niederschlag wird abfiltriert und dann in 3 Liter Wasser gelöst. Zu dieser Lösung fügt man unter Rühren das Hf ache Volumen Äthanol (33 Liter) hinzu. Dann läßt man das Gemisch über Nacht bei 5⁰C abkühlen. Der gebildete Niederschlag (430 g) wird abfiltriert.

Die derart erhaltene süßschmeckende Rohfraktion wird mittels Säulenohroraatograpliie an silikagel gereinigt. 100 g der süß-

9098U/0757

ORIGINAL INSPECTED

- ¹^ -$14*-:..:'.. ' ^:..'-"ϊ ' : --^: schmeckenden Rohfraktion werden an einer äquivalenten Menge Silikagel ("Kieselgel βθ") adsorbiert. Diese an Silikagel adsorbierte Fraktion wird anschließend auf eine Säule von 4,5 cm Durchmesser und 8o cm Länge gegeben, die zuvor mit 500 g Silikagel beschickt worden ist. Die süßschmeckende Fraktion wird mit einem Gemisch aus n-Butanol, Benzol, Methanol und 28prozentigem Ammoniak im Verhältnis 4:3:2:2 eluiert. Man erhält eine. Fraktion mit den Periandrinen I und II und eine Fraktion mit den Periandrinen III und TV.

Mit der Fraktion mit den Periandrinen I und II wird die Säulenchromatographie an Silikagel mit dem vorgenannten Lösungsmittelgemisch ein- bis zweimal wiederholt, bis die Periandrine I und II bei der Dünnschichtchromatographie einen einzigen Punkt zeigen. Als Laufmittel verwendet man ein Gemisch aus Methylenchlorid, Methanol, Äthanol und 40prozentiger Essigsäure im Verhältnis 8:4:1:2 und ein Gemisch aus Äthylacetat, n-Propanol und Wasser im Verhältnis ¹J : 5 : ^ · Nach der Bestätigung, daß die Substanzen aufgrund der DünnschichtChromatographie eine einzige Substanz zu sein scheinen, erhält man aus heißer Essigsäure 700 mg kristallines Periandrin I und aus einem Wasser-Alkohol-Gemisch 170 mg kristallines Periandrin II.

Die Fraktion mit den Periandrinen III und IV (1,5 g) wird an einer äquivalenten Menge Silikagel adsorbiert. Die an Silikagel adsorbierte Fraktion wird dann auf eine Säule von 4,5 cm Durchmesser und 90 cm Länge gegeben, die zuvor mit 600 g Silikagel beschickt worden ist. Die Säule wird dann mit einem Gemisch aus Chloroform, Methanol und Wasser im Verhältnis

909844/075?

-».-3&.1' ■■..' :' .:■

25 : 17 : 3 eluiert. Das Eluat wird nochmals ein- oder zweimal einer Chromatographie an Silikagel unterworfen, bis die Periandrine III und IV bei der Dünnschichtchromatographie einen einzigen Fleck zeigen. Als Laufmittel verwendet man ein Gemisch aus Methylenchlorid, Methanol, Äthanol und 40prozentiger Essigsäure im Verhältnis 8:4:1:2 und ein Gemisch aus Äthylacetat, n-Propanol und Wasser im Verhältnis 7:5:4. Nach der Bestätigung, daß die Substanzen aufgrund der Dünnschichtchromatographie eine einzige Substanz zu sein scheinen, erhält man aus Wasser 23 mg kristallines Periandrin III und 9 mg kristallines Periandrin IV.

Der Geschmack der Periandrine ist erfrischend und wohlschmekkend süß. Die Ergebnisse von Untersuchungen hinsichtlich des Süßgrades werden in dem folgenden Vergleichsbeispiel erläutert.

Vergleichsbeispiel

Es wird eine Reihe von Standardlösungen mit Süßstoffen hergestellt. Die fünf Klassen von wäßrigen Lösungen enthalten auf jeweils 100 ml 0,3 g, 0,5 g, 1 g, 2gund 3 g Saccharose. Getrennt davon werden wäßrige Lösungen hergestellt, die jeweils in 100 ml 10 mg bzw. 20 mg der Periandrine I bis IV enthalten. Zu Vergleichszwecken werden wäßrige Lösungen mit 10 mg bzw. 20 mg Glycyrrhizin,je 100 ml hergestellt.

Der Grad der Süße dieser wäßrigen Lösungen mit einem Gehalt an den süßschmeckonden Substanzen wird im Vergleich mit den Saccharoselösungen durch eine Gruppe von 15 Gutachtern bewertet. Der Grad der Süße als ein mehrfaches des Grades von Saccha-

909844/0757

rose wird als Durchschnittswert der 15 Gutachter berechnet. Die Ergebnisse sind in der nachstehenden Tabelle angegeben.

Tabelle

Süßkomponenten enthal tende Lösungen 1	lOmg/lOOml	Saccharose äqui valente Konzen tration	Grad der Süße (Mehr faches der Süße von Saccharose
Periandrin I	20mg/100ml	0,90	90
	lOmg/lOOml	1,57	78,3
Periandrin II	20mg/100ml	0,95	95
	10mg/10OmI	1,53	76 ,5
Periandrin III	20mg/10OmI	0,92	92
	10mg/10OmI	1,64	82
Periandrin IV	20mg/100ml	0,85	85
	lOmg/lOOml	1,60	80
Glycyrrhizin	20mg/10OmI	0,93	93
	1,40	70

909844/07 57

Aus der Tabelle ist ersichtlich, daß die Periandrine praktisch die gleiche Süße wie Glycyrrhizin besitzen. Im Hinblick auf ■ den Vergleich der Süße besitzen die Periandrine nur einen sehr schwachen oder gar keinen bitteren Geschmack, wohingegen Glycyrrhizin einen bitteren Geschmack aufweist. Es wurde ferner festgestellt, daß die Süße von Periandrinen schneller empfunden wird. Demzufolge sind die Periandrine sehr wertvoll als natürliche Süßstoffe von guter Qualität.

Bei den vorgenannten Beispielen ist die Dünnschichtchromatographie an Silikagel "Kieselgel 60 F254" durchgeführt worden.

309844/075?

Leerseite

Claims

Patentansprüche

Glycoside der Periandrin-Reihe der allgemeinen Formel

R-

MOOC ^(> ι^ΩΗ H/

MOOC Q

in der R ein Rest der allgemeinen Formeln I bis IV

MOQC /^CH3

HLC

3" CH,

(D

MOOC^.-CH,

, OHC I CH

H j CH₃

H₃C CH₃

(H)

9098U/0757

H₃C CH₃ HOH

H₀C CH₀

MOOC ,CH₅

«<&Λψ_ί

(in)

und (IV)

ist und M ein Viasserstoff atom oder ein gegenüber Menschen praktisch ungiftiges Kation bedeutet.
2. Glycoside der Periandrin-Reihe nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß in den allgemeinen Formeln M Wasserstoff atome, Alkalimetall- ₃ Ammonium- und/oder Calciumionen bedeuten.

9098U/0757