DE2815724A1 - Indolderivate, verfahren zu ihrer herstellung und sie enthaltende arzneimittel - Google Patents

Description

Dr.-Ing. K. Schönwald, Köln Dr.-Ing. Th. Meyer, Köln Dr.-Ing. K. W. Eishold, Bad Soden Dr. J. F. Fues, Köln
Dipl.-Chem. Alek von Kreisler, Köln Dipl.-Chem. Carola Keller, Köln Dipl.-Ing. G. Selling, Köln

5 KÖLN I

DEICHMANNHAUS AM HAUPTBAHNHOF

11. April 1978 AvK/Ax

Agence Nationale de Valorisation de la Recherche ANVAR 13, Rue Madeleine Michelis, Neuilly-sur-Seine, Frankreich

Indolderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und sie enthaltende Arzneimittel

S09843/0726

Telefon: (02 21) 234541 - 4 · Telex r 888 2307 dopa d - Telegramm: Dompaienl Köln

2B

Die Erfindung betrifft Dipyrido/4,3-b/Z3,4-f_/indole undein Verfahren zu ihrer Herstellung sowie sie enthaltende Arzneimittelzubereitungen.

Es ist bekannt, daß 9-Methoxy~ellipticin, sein O-Dimethylderivat und vor allem das 2-N-Methyl-9-hydroxy-ellipticiniumacetat interessante therapeutische Eigenschaften auf dem Gebiet der Krebsbekämpfung aufweisen. Diese Verbindungen sind Pyrido/4,3-b7carbazole der allgemeinen Formeln

HO

(la)

(Ib)

worin R für eine CH-.-Gruppe oder Wasserstoff steht. Hierzu wird auf die folgenden Veröffentlichungen verwiesen: J.B. Le Pecq, C.Gosse, Nguyen Dat Xuang, S.Cros und C.Paoletti in Cancer Research 36 (1976) 3067-3076 und J.B. Le Pecq, C.Gosse, Nguyen Dat Xuong und C.Paoletti in CR. Acad.^ci. Paris Serie D 281 (1975) 1365.

Gegenstand der Erfindung sind neue Verbindungen, die Dipyrido/4,3-b_7/3,4-f/indole, die ebenfalls therapeutisch interessante Eigenschaften auf dem Gebiet der Krebsbekämpfung aufweisen.

SG9843/072S

Die DipyridoZ4, 3-b_/Y3,4-£/indole gemäß der Erfindung haben die Formel

II

in der R'. Wasserstoff, eine Hydroxylgruppe, ein vorzugsweise niederer Alkylrest, ein Alkylthiorest oder Alkoxyrest, ein Halogenatom, z.B. ein Chloratom,oder eine Aminogruppe und R'_ Wasserstoff oder ein niederer Alkylrest, vorzugsweise ein Methylrest ist.

Im Rahmen der vorliegenden Beschreibung bezeichnet der Ausdruck "niederer Alkylrest" Alkylreste mit 1 bis 3 C-Atomen, vorzugsweise den Methylrest.

Als geeignete Aminogruppen sind Aminogruppen der Formel

/R' „

NH-CH-(CH₀) , 2 η

^RI6

•R'

zu nennen. Hierin steht η für eine Zahl von 1 bis 3, R'_fi für Wasserstoff oder einen niederen Alkylrest, z.B. eine CH^-Gruppe, und R¹^ und R'₅ sind gleich oder verschieden und stehen jeweils für ein Wasserstoffatom oder einen niederen Alkylrest. Die Reste R\ und R'₅ sind vorzugsweise gleich und stehen für Wasserstoff, Methylreste oder Äthylreste.

Die Erfindung umfaßt außerdem die pharmazeutisch unbe- | denklichen Salze der Dipyridoindole der Formel (II) sowie

' T

ihre isomeren und tautomeren Formen, soweit diese exi- |

stieren.

Die Erfindung ist ferner auf die Herstellung der Dipyrido-

809843/0726

/4,3-b/Z3,4-f_7indole nach einem Verfahren gerichtet, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man

1) ein 6-Aminoisochinolin mit 3-Nitro-4-chlorpyridin zum entsprechenden e-Z^'-O'-NitropyridyDaminoZisochinolin umsetzt,

2) das hierbei erhaltene Isochinolin zuf entsprechenden Aminoverbindung hydriert,

3) die entsprechende Aminoverbindung mit Natriumnitrit zum entsprechenden Triazolpyridin umsetzt,

4) das hierbei erhaltene Triazolpyridin in das entsprechende Dipyrido/4, 3-b_7/3,4-f7indol umwandelt und

5) gegebenenfalls das pharmazeutisch unbedenkliche Salz des erhaltenen Dipyridoindols bildet.

Das Verfahren gemäß der Erfindung kann durch das folgende Reaktionsschema dargestellt werden:

01 EN.

(in)

Stufe 1

Stufe 2

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ICT

Stufe 3

(VTI)

Stufe 4

Stufe 5

(Vl)

Z = Alkylrest

(VIII)

Die beim Verfahren gemäß der Erfindung eingesetzten
Ausgangsprodukte sind somit das 3-Nitro-4-chlorpyridin
der Formel (III) und die 6-Aminoisochinoli-ne der Formel
(IV).

In der Stufe (1) des Verfahrens gemäß der Erfindung wird 3-Nitro-4-chlorpyridin der Formel (III) mit einem : 6—Aminoisochinolin der Formel (IV) kondensiert. Diese
Kondensation kann nach verschiedenen Arbeitsweisen
durchgeführt werden, die dem Fachmann bekannt sind und
in Abhängigkeit von der Art der Substituenten R¹^ und I R¹ ₂ des eingesetzten 6-Aminoisochinolins variieren. Wenn beispielsweise das eingesetzte 6-Aminoisochinolin keine J Hydroxylgruppen als Substituenten enthält, kann wie

809843/0726

no

folgt gearbeitet werden:

Man löst das 6-Aminoisochinolin in einem geeigneten inerten Lösungsmittel, z.B. 1,2-Dimethoxyäthan, gibt eine Lösung einer wasserfreien Säure, z.B. Salzsäure, in einem wasserfreien Lösungsmittel und anschließend das 3-Nitro-4-chlorpyridin zu. Man erhitzt das so erhaltene Reaktionsgemisch am Rückfluß bis zum praktisch vollständigen Verschwinden eines der Reaktionsteilnehmer. Dies kann durch Dünnschichtchromatographie bestimmt werden. Anschließend dampft man das Lösungsmittel ab.

Wenn das eingesetzte 6-Aminoisochinolin eine Hydroxylgruppe als Substituenten enthält, ist es zweckmäßig, bei Umgebungstemperatur zu arbeiten. Die Ausgangsverbindungen können in einem inerten Lösungsmittel, z.B. Dimethylformamid, gelöst werden. Man halt das durch Mischen der Lösungen der beiden Ausgangsverbindungen erhaltene Reaktionsgemisch bei Umgebungstemperatur, bis die Ausgangsverbindungen, die in der Dünnschichtchromatographie an Kieselgel sichtbar sind, verschwunden sind. Die gebildete Fällung wird anschließend nach üblichen Verfahren isoliert.

Zweckmäßig werden äquimolare oder praktisch äquimolare Mengen der beiden Ausgangsverbindungen verwendet.

In der Stufe (2) des Verfahrens gemäß der Erfindung wird das in der vorstehend beschriebenen Stufe (1) erhaltene _; 6-/71 ■ ( 3 ' -Nitropyridyl) amino_7-isochinolin hydriert. Diese Hydrierung wird in Gegenwart eines Hydrierkatalysators, z.B. Palladiumkohle, chgeführt. Das 6-/4'-(3'-Nitro- ! pyridyl)amino/isochinoiin wird in einem organischen Lösungsmittel, z.B. Essigsäure, gelöst. Dieser Lösung wird eine geeignete Menge Palladiumkohle zugesetzt, worauf in einer Wasserstoffatmosphäre bis zur theoretischen, Wasserstoffaufnahme gerührt wird. Der Katalysator wird

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anschließend abfiltriert. Das Lösungsmittel wird abgedampft und der erhaltene Rückstand aus einem organischen Lösungsmittel, z.B. Methanol, Äthanol, Acetonitril oder Xylol, umkristallisiert.

In der Stufe (3) des Verfahrens.gemäß der Erfindung wird das entsprechende Triazolpyridin durch Behandlung von e-Z^'-O'-AminopyridyDaminoZ-isochinoliTi der Formel (VI) mit Natriumnitrit hergestellt. Zweckmäßig wird wie folgt gearbeitet: Man löst das 6-/4'-(3'-AminopyridyD-

10 amino7-isochinolin in einer organischen Säure, z.B.

Essigsäure, kühlt das erhaltene Gemisch auf etwa 0°C und gibt allmählich eine wässrige Lösung von Natriumnitrit in der Mindestmenge Wasser zu. Das Reaktionsgemisch wird gerührt, bis es wieder Raumtemperatur angenommen hat. Die gebildete Fällung wird anschließend nach üblichen Verfahren gewaschen und getrocknet.

In der Stufe (4) des Verfahrens gemäß der Erfindung wird das in der Stufe (3) erhaltene Triazolpyridin in das entsprechende Dipyrido/4, 3-b_//3 ,4-f_7indol umgewandelt. Während dieser Umwandlung finden Öffnung des Triazolrings und Cyclisierung unter Bildung eines Dipyridoindols der Formel (VIII) statt. Diese Operation wird in einem inerten Mittel, z.B. Paraffin oder Phenanthren, durchgeführt, dessen Siedepunkt so hoch ist, daß die genannte Umwandlung, die auf thermischem Wege erfolgt, stattfinden kann. Im allgemeinen wird bei einer Temperatur von 320 bis 35O°C gearbeitet. j

Nachstehend werden Ausführungsbeispiele für diese Stufe gegeben.

Das in der beschriebenen Weise erhaltene Dipyrido/"4,3-b_7 /3,4-f/indol wird anschließend gegebenenfalls in ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz umgewandelt. Zur Herstellung dieser pharmazeutisch unbedenklichen Salze ist es wichtig, die dem Fachmann bekannten geeigneten Mittel,

509843/0726

- ie -

z.B. Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Bernsteinsäure, Milchsäure, Essigsäure, Phosphorsäure und beliebige
andere allgemein zur Bildung dieser Salze verwendeten Säuren zu verwenden.

Die Reaktionsschemas der bevorzugten Ausführungsformen des Verfahrens gemäß der Erfindung werden nachstehend gezeigt.

Ausführungsform 1

Bei dieser Ausführungsform v/erden Dipyridoindole der
Formel (II) hergestellt, in denen R'.. Wasserstoff und R'2 ein Alkylrest, z.B. ein Methylrest ist. Diese Arbeitsweise wird durch das nachstehende Schema für die Verbindung der Formel (II) dargestellt, in der R¹ ₂ ein Methylrest ist.

809843/0726

ta ty

Diese Ausführungsform wird durch die Beispiele 1 bis 4 veranschaulicht.

Ausführungsform 2

Bei dieser Ausführungsform werden Dipyridoindole der Formel (II) hergestellt, in der R^ eine Hydroxylgruppe und R'_? Wasserstoff oder ein niederer ALkylrest ist.

GXH

(12)

(13)

^ ^Γ

² 0

309843/0726

^Rf2 OH

(3)

Die nachstehend in den Ausführungsbeispielen beschriebenen Verbindungen 19 bis 25 wurden gemäß dieser Ausführungsform hergestellt. In den Verbindungen 19 bis 25 ist R'₂ Wasserstoff, Während R die folgenden Bedeutungen ' hat:

Verbindung	19	I	-	R=OH	2CH2CH	2-<	^C2H5	•
Verbindung	20	22	R=Cl			N:2h5
Verbindung	21	R=NH-CH			/CH3
			2-N/
Verbindung	R=NH-CH

-CH.

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Verbindung 23

-TS-Ko

R=NH-CH₂-CH₂-N

CH.

CH.

Verbindung 24

Verbindung 25 Verbindung 26

R=NH-CH-(CH₉)O-N(C₉H^) CH₃

R=NH-CH₂-CH₂-CH₂-NH₂

R'₂ = CH₃
R = OH

Durch diese Arbeitsweise kann das Produkt der Formel (15), das eine Ausgangsverbindung für das Verfahren gemäß der Erfindung ist und in seiner tautomeren Form (15a) vorliegen kann:

(15)

(15a)

aus Zimtsäure der Formel (12) nach dem folgenden Verfahren hergestellt werden: Zunächst wird das entsprechende Azid (13) gebildet. Anschließend wird das Azid unter Bildung des entsprechenden Isochinolons cy— clisiert und schließlich die Schutzgruppe der Aminogruppe entfernt, wobei das 5-Methyl-6-aminoisochinolon der Formel (15) gebildet wird. Anschließend wird in der vorstehend für die Herstellung der erfindungsgemäßen ι Verbindung (19), in der R eine Hydroxylgruppe ist (Ver— ; bindung (19), beschriebenen Weise gearbeitet. Anschlies—, send kann die Hydroxylgruppe dieser Verbindung mit einem Chloratom odef einer Aminogruppe, z.B. mit Gruppen der nachstehenden Formeln substituiert werden, wobei die Verbindungen 19 bis 26 erhalten werden.

3098/>3/0728

- te -

C₂H₅

C₂H₅

.CH.

η = 2 oder 3

CH

-^C2^H5

C₂H₅

-NH-CH₂-CH₂-CH₂-NH₂

Die als Ausgangsprodukt bei der vorstehend beschriebenen Ausfürungsform Nr.2 verwendete Zimtsäure der Formel (12) kann nach verschiedenen Verfahren hergestellt werden. Nachstehend werden drei Verfahren beschrieben, die zur Herstellung der Zimtsäure der Formel (12) geeignet sind (Verfahren (a) bis (c)) .

Verfahren (a)

ΊΟ.ί)

.(10b)

(11)

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Hierin hat R' die vorstehend genannte Bedeutung.

(12)

Bei dieser Arbeitsweise wird die Zimtsäure der Formel (12) aus 2-Methyl-3-aminobenzonitril der Formel (10a) nach einem Verfahren hergestellt, bei dem man die Aminogruppe dieser Verbindung in die Acetylaminogruppe unter Bildung der Verbindung der Formel (10b) umwandelt, anschließend die Cyangruppe von 2-Methyl-3-acetylaminobenzonitril in die Aldehydgruppe umwandelt und hierdurch die Verbindung der Formel (11) bildet und anschließend die Aldehydgruppe der letztgenannten Verbindung mit Malonsäure kondensiert, wobei die Zimtsäure der Formel (12) gebildet wird. Diese Arbeitsweise wird durch Beispiel 5 veranschaulicht.

Verfahren (b)

(30)

CßOH

809843/0728

:λ/

Hierin hat R'₂ die vorstehend genannte Bedeutung.

Bei diesem Verfahren wandelt man das 2-Methyl-3-nitroanilin der Formel (30) in (2-Methyl-3-nitrophenYl)chlorpropionsäure der Formel (31) um, wandelt diese Verbindung durch Entfernung von HCl in 2-Methyl-3-nitrozimtsäure der Formel (32) um und wandelt anschließend die Nitrogruppe der letztgenannten Verbindung über die Stufe der Aminogruppe (Formel 33) in die Acetylaminogruppe um und bildet hierdurch die Verbindung der Formel (12). Diese Arbeitsweise wird später in Beispiel 13 veranschaulicht.

Verfahren (c)

Dieses Verfahren eignet sich zur Herstellung der Verbindung der Formel (12), in der R¹ ~ für -CH₃ steht.

809843/0728

^CH

^C»i

(12)

(D)

Bei diesem Verfahren wandelt man den Chlormethylrest der Verbindung der Formel (A) in eine Aldehydgruppe um (Verbindung der Formel (B)), kondensiert anschließend die Aldehydgruppe mit Malonsäure unter Bildung der Zimtsäure der Formel (C), reduziert dann die Nitrogruppe der Verbindung der Formel (C) zu einer Aminogruppe (Verbindung der Formel (D)) und wandelt dann die Aminogruppe in eine Acetylaminogruppe um, wobei die Verbindung der Formel (12) .erhalten wird. Dieses Verfahren wird später durch Beispiel 12 veranschaulicht.

Die nach dem vorstehend beschriebenen Verfahren Nr.2 und den Verfahren (a), (b) und (c) erhaltenen Zwischenprodukte und, soweit sie existieren, ihre isomeren und

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tautomeren Formen fallen ebenfalls in den Rahmen der Erfindung.

Von den Verbindungen gemäß der Erfindung sind insbesondere die folgenden zu nennen:

5 5,11-Dimethyldipyrido/Ϊ,3-b7/3,4-f7indol,

2,5,9,11 -Tetramethyldipyrido/3, 4-b_7/3, 4-fJindolinium-

diacetat.

Dimethyl

5,11 -Dipyrido/4, 3 ,b7/3,4-fJindolacetat,

5 ,11-Dimethyldipyrido/I, 3-b_7/3,4-f /indoldihydrochlorid,

i-Chlor-S-xnethyldipyrido^a, 3-b7/3,4-fJindol,

1 -Amino- (^f-di.Hthy 1 aminopropy 1) -5-methyldipyrido-

/4, 3-b7/l, 4-f/indol,

1-Amino- (j'-dimethylaminopropyl) -5-inethylpyrido-/4,3-b7^,4-f7indol,

1 -Amino- (ß-Dimethylaminofithyl) -5-methyldipyrido-

/4, 3-b7/3, 4-f_7indol,

1-^/(üt-Methyl-o-dih'thylaminobutyl) -amino7-5-methyldinvrido/1, 3-b//l, 4-f_7indol,
¹ ~Z"( /-Am i η op ropy 1) aminq7-5-methyldipyrido/^i, 3-W/ß, 4-f_7-

indol und

1, 2-Dihydro-1-oxo-5,11-dimethyldipyrido/1, 3-b7/3, 4-f_7-

indol.

Die Erfindung umfaßt ferner Arzneimittelzubereitungen mit Antiviruswirkung und tumorhemmender Wirkung, die eine therapeutisch wirksame Menge einer erfindungsge- ^: mäßen Verbindung der Formel (II) in Kombination mit einen) pharmazeutisch unbedenklichen Träger enthalten. Die Arzneimittelzubereitungen gemäß der Erfindung können insbesondere in Form von Lösungen für die intravenöse oder intramuskuläre Injektion formuliert werden.

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Die tumorhemmenden Eigenschaften der Verbindungen gemäß der Erfindung wurden durch ihre heilende Wirkung auf die experimentell übertragene Leukämie L-1210 bestimmt. Diese Leukämie ermöglichte die Auswahl zahlreieher Verbindungen, die wirksam sind und in der Humanmedizin verwendet werden (CG. Zubrod, Proc.Nat.Acad.Sci. 69 (1972) 1042-1047 und SA. Schepartz Screening 1971, Cancer Chemother.Rep.Part 3, Band 2, Seite 3).

Diese Leukämie wird in aszitischer Form durch Übertragung (intraperitoneal) auf Mäuse CBDl (C57 B16 χ DBA/2)F1 aufrecht erhalten. Die zu untersuchenden Präparate werden intraperitoneal wenigstens einen Tag nach der Übertragung der Zellen (eine einzige Injektion) injiziert. Die Ergebnisse werden als prozentuale Verlängerung der Überlebenszeit (ILS %) gemäß Kessel und Mitarbeiter, Cancer Res.31 (1971) 1883-1887) oder auch als Prozentsatz der Zahl der durch das Produkt abgetöteten Zellen ausgedrückt (die Überlebensdauer der Tiere ist proportional der Zahl der injizierten Zellen).

Ferner wurde die Schutzwirkung der Verbindungen gemäß der Erfindung gegen die durch das Friendsche Virus ausgelöste Leukämie untersucht (J.Exp.Med. 105 (1957) 307-318). Hierbei wurde gefunden, daß die Verbindungen gemäß der Erfindung Antivirusmittel und tumorhemmende Mittel sind.

Die Untersuchung der Entwicklung des durch Viren induzierten Sarkoms nach Moloney (Nat.Cancer.Inst. Monograph 22 (1966) 139-142) ermöglichte ebenfalls die Feststellungen, daß die Verbindungen gemäß der Erfindung Anti- ί virusmittel und tumorhemmende Mittel sind. |

Ferner wurden₍die toxische Dosis und die akute Toxizität in vivo, d.h. die Letaldosen DL^₀₀ und DL₅₀ bestimmt.

Es wurde außerdem nachgewiesen, daß die Verbindungen gemäß der Erfindung bei Konzentrationen zwischen 0,2 und

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10 LiMoI zytotoxisch sind und daß die Verbindung 21 ge- ' maß der Erfindung ebenso wirksam oder wirksamer ist als die z.Zt. als tumorhemmende Mittel verwendeten Produkte.

Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele weiter erläutert.

Beispiel 1

Herstellung von 5, ll-Dimethyldipyrido/4, 3-b7/3 ,4-f7indol (Verbindung der Formel 8)

A. SjS-Dimethyl-e-Z^'-O'-nitropyridyDaminoJisochinolin der Formel (5) .

Man löst 36 g 5,8~Dimethyl-6-aminoisochinolin der Formel (4) in 1,5 1 1,2-Dimethoxyäthan und gibt 33,14 g 3-Nitro-44-chlorpyridin der Formel (3) und dann 95,85 ml einer auf 4,362 Mol titrierten Lösung von trockener Salzsäure in Äther zu (2 molare Äquivalente im Verhältnis zum Aminoisochinolin der Formel (3)). Man erhitzt 192 Stunden am Rückfluß, dampft das Lösungsmittel ab, nimmt den Rückstand unter Rühren für eine Stunde in 1,5 1 Wasser auf und nutscht die unlösliche Fällung ab, wobei man 1,7 g

20 3-Nitro-4-hydroxypyridin erhält.

Unter ständiger Überwachung des pH-Werts gibt man zur wässrigen Phase allmählich Kaliumcarbonat. Die von pH 4 ab erscheinende Fällung nutscht man ab, sobald ein pH-Wert von 5,5 erreicht ist. Nach dem Trocknen kristall!— : siert man die Fällung aus Benzol um und erhält hierbei 17,6 g entsprechend 28,6% gelbe Mikrokristalle von ! Schmelzpunkt 2O6°C, die der gewünschten Verbindung entsprechen.

E lernen tar an a Iy se: £ H_- N_

Berechnet für '^C ₁6^H14^N4^O3^: 65,29 4,80 19,04 j

Gefunden: - 65,09 4,81 18,86 J

Man macht die Mutterlauge bis pH 10 alkalisch und erhält

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hierbei 13 g entsprechend 36% Aminoisochinolin der Formel (4), das nach Kristallisation einen Schmelzpunkt von 149°C hat.

B. 5,8-Dimethy1-6-/4'-(3'-aminopyridyl)amino7isochinolin der Formel (6)

In 1 1 absolutem Äthanol, dem 2 g 10%ige. Palladiumkohle zugesetzt worden sind, werden 20 g des nitrierten Derivats der Formel (5) gelöst. Das Gemisch wird unter einer Wasserstoffatmosphäre bei Umgebungstemperatur und Normaldruck gerührt, bis die theoretische Wasserstoffmenge aufgenommen worden ist. Der Katalysator wird abfiltriert, das Lösungsmittel abgedampft und der Rückstand aus Äthanol umkristallisiert, wobei 16,9 g (93,7% beigefarbene Kristalle vom Schmelzpunkt 235-25O°C (Zers.) erhalten werden. Dies entspricht der mit 0,5 Mol Äthanol kristallisierten gewünschten Verbindung.

ElernentaranaIyse;

Berechnet für C,,H._CN. · 0,5 C,H_c0H Ib Ib 4 Z ο

Gefunden:

C. l-/6'-(5' ,8'-Dimethylisochinolyl)_/triazolZ4,5-Q7.

pyridin der Formel (7)

In 300 ml Essigsäure, die auf etwa O⁰C gekühlt worden ist, werden 16,8 g des Amins der Formel (6) gelöst. Der Lösung wird unter ständigem Kühlen allmählich eine Lösung von 4,83 g Natriumnitrit in 150 ml Wasser zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wird 2 Stunden unter Kühlen und dann eine weitere Stunde, während der man es Umgebungstemperatur erreichen läßt, gerührt. Das Lösungsmittel wird abgedampft, der Rückstand in 300 ml Wasser aufgenommen und die unlösliche Fällung abfiltriert.

Nach Umkristallisation aus Äthanol werden 14,8 g (84,5%) blaßgelbe Kristalle vom Schmelzpunkt 215-22O°C entspre-" chend dem gewünschten Produkt erhalten.

809843/0726

	C	6	H_	19	N-
71	,05	6	,66	19	,50
70	,78	,77	,18

	£	28	1	5724
	,80		H	H
69	,67	4,	76	25,44
69	4,	77	25,23

Elementaranalyse:

Berechnet für C₁₁₄-H,.-N₁-:
Ib Io b

Gefunden:

D. 5,ll-Dimethyldipyrido/4,3-h7/3,4-f7indol der Formel (8)

12 g Triazolpyridin der Formel (7) werden mit 39 g Paraffin vom Schmelzpunkt 54-56°C gemischt. Das Gemisch wird unter einer Stickstoffatmosphäre bis zum Aufhören der Gasentwicklung (20-25 Minuten) erhitzt. Man läßt das Reaktionsgemisch abkühlen, gibt 100 ml schweren Petroläther (Siedepunkt 100-140°C bei Normaldruck) zu, erhitzt zum Sieden und nutscht den unlöslichen schwarzen Feststoff ab. Man nimmt diesen Feststoff in Äthanol in Gegenwart von Tierkohle auf, filtriert, engt das Filtrat in der Kälte ein und kristallisiert dann aus Pyridin um, wobei man 5,4 g (40,6%) gelbe Mikrokristalle erhält, die bis 35O°C unschmelzbar sind.

Elementaranalyse:	C	Beispiel 2	ä	N-
Berechnet für ClgH	I13N3: 77,71 5	5,9,ll-Tetramethyldipyrido/4	,30 16,	99
Gefunden:	77,52 5	der Formel IX (X = CH3COO)	,32 16,	98
Herstellung von 2,	,3-bV /3,	4-f7
indoliniumdiacetat

In 750 ml Aceton werden 274 mg der gemäß Beispiel 1 hergestellten Verbindung der Formel (8) suspendiert. Die Suspension wird in Gegenwart eines großen Überschusses von Methyljodid (1,42 g) 6 Stunden am Rückfluß erhitzt. Nach Zugabe der gleichen Menge Methyljodid wird weitere Stunden am Rückfluß erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird dann gekühlt und genutscht, wobei 487 mg (92%) unlösliches Produkt erhalten werden, das dem Dijodid entspricht (Verbindung der Formel (IX), in der X für J steht).

809843/0726

E lernen tar analyse: C_ _H N

Berechnet für ^C ₁₈ ^H ₁₉ ^J ₂ ^N3^: 40,68 3,58 7,91

Gefunden: 40,55 3,67 7,88

Eine Lösung von 450 mg des in der beschriebenen Weise erhaltenen Produkts in 100 ml Wasser wird durch eine Säule des Ionenaustauscherharzes "Dowex 1X2" geleitet, das mit Acetationen beladen ist. Das Lösungsmittel wird abgedampft. Der Rückstand wird in Isobutylalkohol aufgenommen, wobei das gewünschte Produkt in Form von gelborangefarbenen Mikrokristallen vom Schmelzpunkt 23O-235°C erhalten wird. Bei der Dünnschichtchromatographie an Aluminiumoxyd unter Verwendung eines Gemisches von Methanol und Wasser (Volumenverhältnis 4:1) als Elutionsmittel entsteht ein einziger Flecken. Das kernmagnetische Resonanzspektrum (NMR) ergibt, daß es sich um die gewünschte Verbindung handelt, deren Elementaranalyse jedoch dem teilweise hydratisierten gewünschten Produkt entspricht.

Beispiel 3

Herstellung von 5,ll-Dimethyldipyrido/4,3-b7/3,4-f/indolacetat

Ein Gemisch von 1 g der gemäß Beispiel 1 hergestellten Verbindung der Formel (8) und 20 ml Essigsäure wird zum Sieden erhitzt und die überschüssige Essigsäure sofort abgedampft. Der in Aceton aufgenommene und abfiltrierte Rückstand ergibt 1 g einer unlöslichen Fällung in Form von ockergelben Mikrokristallen, die bis 310⁰C unschmelzbar sind und dem Monohydrat der gewünschten Verbindung entsprechen.

Elementaranalyse:

Berechnet Gefunden:

30 Berechnet für ^ci8^H19^N3°3^:

	C	5	_H	12	ü
66,	44	5	,89	12	,92
66,	58	,83	,79

809843/0726

Beispiel 4 5 , ll-Dimethyldipyrido/4, 3-b_7Z3,4-f_/indoldihydrochlorid

In 20 ml absolutem Äthanol werden 200 mg der gemäß Beispiel 1 hergestellten Base der Formel (8) gelöst. Nach Zugabe von 1 ml Äthanol, das mit Salzsäure gesättigt ist, wird das Lösungsmittel auf dem Wasserbad unter vermindertem Druck abgedampft. Der Rückstand wird in Aceton aufgenommen und abgenutscht, wobei 200 mg ockerfarbene Mikrokristalle erhalten werden, die bis 310⁰C unschmelzbar sind und dem Monohydrat des gewünschten Dihydrochlorids entsprechen.

E lernen tar an a Iy se: £ H_- CL N_

Berechnet für C₁₅H₁₇Cl₂N₃O:. 56,80 5,02 21,01 12,43 Gefunden: 56,34 4,78 21,20 12,56

Beispiel 5

Herstellung von 1,2-Dihydro-l-oxo-5-methyldipyrido/4,3-b7 Z3,4-f7indol (Verbindung 19)

A. 2-Methyl-3-acetylaminobenzaldehyd der Formel (11)

In 75 ml Essigsäure werden 39 g (0,3 Mol) 2-Methyl-3-aminobenzonitril gelöst. Nach Zugabe von 30 ml (0,3 Mol) Essigsäureanhydrid wird 5 Minuten am Rückfluß erhitzt und gekühlt. Der hierbei gebildete feststoff wird abgenutscht. Durch Abdampfen des Lösungsmittels wird eine weitere Feststoffmenge erhalten, die mit dem vorher erhaltenen Feststoff zusammengegeben wird. Nach Umkristallisation des Feststoffs aus Toluol werden 44 g (95%) farblose Plättchen vom Schmelzpunkt 160°C erhalten.

Elementaranalyse: Berechnet für C₁₀H₁₀N₂O: 30 Gefunden:

B. 2-Methyl-3-acetylaminozimtsäure der Formel (12)

In einen 6 1-Dreihalskolben werden 60 g (0,34 Mol) des Nitrils der Formel (10) und 1 1 Ameisensäure, die mit

809843/0726

	£	5	_H	16	H
68	,95	5	,79	15	,08
68	,82	,83	,9.9

Wasser auf 50% verdünnt worden ist, gegeben, worauf zum Sieden erhitzt wird. Während das Gemisch am Rückfluß erhitzt wird, werden in fünf Portionen in Abständen von 30 Minuten 120 g Raney-Legierung zugesetzt, worauf weitere 30 Minuten am Rückfluß erhitzt wird Und die Salze und der Überschuss der unlöslichen Reaktionsteilnehmer abfiltriert werden.

Die Fällung wird mit heißem V/asser gewaschen. Das gesamte Filtrat wird wenigstens zehnmal mit je 500 ml Chloroform extrahiert.

Durch Abdampfen der organischen Phase wird als Destillat ein Rückstand erhalten, der 39 g eines Produkts (Siedepunkt 21O-225°C/11 mm Hg) ergibt, das dem Gemisch des eingesetzten Nitrils und des Aldehyds der Formel (11), d.h. 2-Kethyl-3-acetylaminobenzaldehyd, entspricht. Durch Umkristallisation aus Benzol oder Toluol werden feine farblose Nadeln vom Schmelzpunkt 124-128⁰C erhalten.

Elementaranalyse:

Berechnet für ^cio^Hll^N02^: 20 Gefunden:

Das bei der Destillation erhaltene rohe Gemisch (38 g) wird in 50 ml trockenem Pyridin gelöst. Der Lösung wird auf einmal eine Lösung von 22,5 g Malonsäure und 1 ml Piperidin in 300 ml Pyridin zugesetzt. Das Gemisch wird 1,5 Stunden am Rückfluß erhitzt. Das Pyridin wird unter vermindertem Druck abgedampft und der Rückstand mit einer Natriumhydroxydlösung im Überschuß in Gegenwart von Chloroform behandelt. Nach dem Dekantieren wird durch Abdampfen des Chloroforms ein Rückstand erhalten, der aus einer Fraktion des eingesetzten Nitrils der Formel (10) besteht.

Durch Ansäuern der alkalischen Schicht mit Salzsäure wird die Acrylsäure der Formel (12) erhalten, die aus Essig-

809843/0728

	£	6	H	7	ü
67	,78	6	,26	8	,91
68	,07	,27	,05

— 2*6 -

	C	5	H	6	ü
65	,74	6	,98	6	,39
65	,58	,12	,52

säure umkristallisiert wird, wobei 25 g (34%, bezogen auf die eingesetzte Menge des Nitrils der Formel (10)) farblose Plättchen vom Schmelzpunkt 265-267⁰C erhalten werden.

5 Elementaranalyse;

Berechnet für ^C-₁2^H13^NO2^: Gefunden:

C) 2-Methyl-3-acetylaminocinnamoylazid der Formel (13)

Zu einer Lösung von 17 g Triäthylamin in 150 ml Aceton werden 36 g der Acrylsäure der Formel (12) gegeben. Das Gemisch wird auf O⁰C gekühlt. Unter Aufrechterhaltung dieser Temperatur wird tropfenweise eine Lösung von 24,3 g Athylchlorformiat in 150 ml Aceton zugesetzt. Das Gemisch wird eine Stunde bei O⁰C gerührt, worauf allmählich eine aus 16 g Natriumazohydrat und 40 ml Wasser hergestellte Lösung zugesetzt wird. Das Reaktionsgemisch wird nach erfolgter Zugabe noch 1 Stunde in der Kälte gerührt, worauf 27,8 g (71%) eines farblosen Feststoffs abgenutscht werden, der dem gewünschten Azid entspricht, das sich durch Schmelzen von 150⁰C an zersetzt. Durch Abdampfen des Acetons von der Mutterlauge auf dem Wasserbad unter vermindertem Druck, wobei die Temperatur 30⁰C nicht üDerschreitet, wird eine weitere Menge der gewünschten Verbindung erhalten, die nunmehr gelb gefärbt ist. Dieses Produkt wird anschließend ohne weitere Reinigung für die Synthese verwendet.

D) l-Hydroxy-5-methyl—6-acetylaminoisochinolin oder -S-methyl-e-acetylamino-l-isochinolin der Formel (14)

Ein Gemisch von 1,5 1 Diphenylether und 33 g Tributylamin wird in einem 4 1-Dreihalskolben auf 240°C erhitzt. In 300 ml Diphenyläther werden 41 g des vorher im Exsiccator unter vermindertem Druck getrockneten Azids der Formel (13) suspendiert. Die Suspension wird in kleinen

809843/0726

Portionen, aber möglichst schnell unter kräftigem Rühren zu der vorstehend genannten Lösung gegeben, wobei weiter erhitzt wird, um zu vermeiden, daß die Temperatur unter 22C°C fällt.

Nach erfolgter Zugabe wird das Gemisch erneut auf 240⁰C erhitzt und 10 Minuten bei dieser Temperatur gehalten, worauf es der Abkühlung überlassen wird. Die hierbei gebildete Fällung wird abfiltriert, mit Benzol gewaschen und aus Äthanol, in dem es sehr schwer löslich ist, umkristallisiert, wobei 25 g (69%) farblose Mikrokristalle, die bis 32O°C unschmelzbar sind, erhalten werden.

Elementaranalyse: Berechnet 15 Gefunden:

Berechnet für ^ci2^H12^N2°2^:

	C	5	H-	12	N
66	,65	5	,59	12	,96
66	,98	,64	,87

E) S-Methyl-e-amino-l-isochinolin der Formel (15)

Ein Gemisch von 500 ml Äthanol, 100 ml Salzsäure und 25 g der Verbindung der Formel (14) wird 2,5 Stunden am Rückfluß erhitzt. Durch Abdampfen des Lösungsmittels wird ein Rückstand erhalten, der in heißem Wasser aufgenommen und filtriert wird. Das Filtrat wird mit In— Natriumhydroxyd alkalisch gemacht, wobei 16,3 g (81%) einer Verbindung erhalten werden, die bei der Umkristallisation farblose Nadeln vom Schmelzpunkt 26O-285°C (Zers.)

25 ergibt.

Elementaranalyse: Berechnet für C_1nH_1nNpO: Gefunden:

F) 5-Methy1-6-/4'-(3'-nitropyridyl)amino7-l-isochinolin der Formel (16)

In 400 ml Dimethylformamid (DMF) werden 17,4 g der Verbindung der Formel (15) gelöst. Zur Lösung wird eine

B098Ä3/0726

	£	5	IH	16	ü
68	,95	5	,79	15	,08
68	,97	,83	,85

Lösung von 15,9 g Chlornxtropyridin der Formel (3) in 100 ml DMF gegeben. Das Gemisch wird 12 Tage bei Umgebungstemperatur stehen gelassen. Die hierbei gebildete Fällung wird abgenutscht. Durch Abdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck wird eine weitere Feststoffmenge erhalten. Der gesamte Feststoff wird in heißem Wasser aufgenommen und dann mit "ln-Natriumhydroxyd alkalisch gemacht. Die hierbei gebildete Fällung wird aus DMF umkristallisiert, wobei 21,3 g (72%) gelbe Prismen erhalten werden, die bis 33O°C unschmelzbar sind und der Verbindung der Formel (16) entsprechen.

ElernentaranaIyse:	H12N4O3:	60	C_	4	H	18	ä
Berechnet für C15		60	,80	4	,.03	18	,91
Gefunden:		,46	,08	,62

Wenn die Reaktion in Gegenwart eines Überschusses von 1 bis 3% des 3-Nitro-4-chlorpyridins der Formel (3) durchgeführt wird, werden außer dem vorstehend beschriebenen Produkt 10 bis 15% eines Nebenprodukts isoliert, das in DMF weniger leicht löslich ist und durch Umkristallisation aus diesem Lösungsmittel rote Prismen ergibt, die bis 33O°C unschmelzbar sind. Das Produkt entspricht dem 3-Nitro-4-amino-diZN-l, N-4(l^f-hydroxy-5'-methy1-6■-isochinolyl)pyridin_7·

Elementaranalyse:

Berechnet für C₃₅H₁₉N₅O₄-O,5 H₂O: Gefunden:

G) 5-Methyl-6-Z.4' -(3'-aminopyridyl)amino_7isochinolin

der Formel (17)

In 500 ml Essigsäure werden 12,6 g des vorstehend beschriebenen nitrierten Derivats gelöst. Nach Zusatz von 0,6 g 10%iger Palladiumkohle wird die Lösung unter Wasserstoff gerührt, bis die theoretische Wasserstoffmenge aufgenommen worden ist. Dann werden 500 ml Essig-

809843/0726

	C_	4	H-	14	Ά
64	,95	4	,35	14	,38
64	,72	,19	,28

	£	5	H	19	N-
63	,86	5	,67	19	,71
63	,84	,44	,47

säure zugesetzt, die erhitzt ist, um die gebildete Fällung zu lösen. Der Katalysator wird abfiltriert, das Lösungsmittel abgedampft und der Rückstand in Wasser gelöst. Die Lösung wird bis pH 9 alkalisch gemacht. Die hierbei gebildete Fällung wird abfiltriert und aus Acetonitril umkristallisiert, wobei 10,2 g (84,3%) cremefarbene Mikrokristalle gebildet werden, die dem Hydrat des Amins der Formel (17) entsprechen.

Elementaranalyse;

10 Berechnet für C^r-H. _CN.O₀:

Io Ib 4 iL

Gefunden:

H) 1-Z6'-(1',2^l-Dihydro-l·-oxo-5^l-methylisochinolyll7-triazol/4,5-c7pyridin der Formel (18)

In einem mit Thermometer, mechanischem Rührer und Tropftrichter versehenen 500 ml-Dreihalskolben werden 10,2 g des Amins der Formel (17) und 70 ml Essigsäure gemischt. Das Reaktionsgemisch wird auf etwa O⁰C gekühlt, worauf eine Lösung von 3 g Natriumnitrit in der Mindestmenge Wasser allmählich zugesetzt wird. Das Reaktionsgemisch wird noch eine Stunde gerührt, wobei man es Raumtemperatur erreichen läßt. Die gebildete Fällung wird anschliessend abfiltriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Hierbei werden 8,3 g (83,5%) farblose Mikrokristalle vom Schmelzpunkt 3O9-31O°C erhalten. Diese Kristalle bestehen aus dem Hydrat von Triazolpyridin der Formel (18).

Elementaranalyse: Berechnet für C₁J-H^t-N₅Op: Gefunden:

	C	4,	H	23	ü
61,	01	4,	44	23	,72
60,	92	15	,44

309843/0728

	C	4	H_	N	27
69	,75	4	,68	16,	14
70	,04	,40	16,

I) 1,2-Dihydro-l-oxo-5-methyldipyridor4, Z-YjΠ , 4-f7-indol der Formel (XIX), in der R = OH (Verbindung 19)

Man gibt 8 g Triazolpyridin der Formel (18) zu 60 g geschmolzenem und dann auf 34O°C erhitztem Phenanthren. Man rührt das Reaktionsgemisch.20 Minuten bei dieser Temperatur und läßt dann abkühlen. Man extrahiert das ■ Phenanthren mit Petroläther oder Hexan 'und kristallisiert den unlöslichen Rückstand aus DMF um, wobei man 4,2 g (58%) graue Mikrokristalle erhält, die bis 310°C unschmelzbar sind und dem Hemihydrat des Produkts der Formel (19) entsprechen.

Elementaranalyse:

Berechnet für C₁₅H₁₁N₃CO^ H₃O:

Gefunden:

15 Beispiel 6

l-Chlor-5-methyldipyrido/4,3-b/Z3,4-f7-indol

(Verbindung der Formel (XIX), in der R = Cl (Verbindung 20))

Man mischt 1,5 g des Dipyridoindols (Verbindung 19) mit 250 ml Phosphoroxychlorid, das 1,5 g Phosphorpentachlorid enthält. Man erhitzt das Gemisch 20 Stunden am Rückfluß. Man entfernt das überschüssige Oxychlorid und Pentachlorid auf dem Wasserbad unter vermindertem Druck und nimmt den Rückstand mehrmals in lauwarmem Wasser auf, wobei man bei jeder Aufnahme eine Stunde bis zur Erschöpfung rührt. Die vereinigten und gekühlten wässrigen Filtrate werden mit Natrium- oder Kaliumcarbonatlösung neutralisiert. Die hierbei gebildete Fällung wird abgenutscht, getrocknet und aus DMF umkristallisiert, wobei 875 mg (54%) gelbe Mikrokristalle, die bis 32O°C unschmelzbar sind und dem Hemihydrat des chlorierten Derivats (20) entsprechen, erhalten werden.

809843/0726

Elemenbaranalyse: £ H N Cl

Berechnet für C₁₅H₁₀N₃Cl.O,5 H₃O: 65,10 3,97 15,19 12,84 Gefunden: 64,77 3,92 14,97 13,21

Beispiel 7

l-(Y-Diäthylaminopropyl)amino-5-methyldipyrido/?,3-b/-/3,4-f_7indol (Verbindung der Formel (XIX), worin

/^C2^H5
R= -NH-CH₂-CH₂-CHp-N , d.h. Verbindung (21))

Ein Gemisch von 875 mg des gemäß Beispiel 6 hergestellten Chlorderivats und 10 g γ-Diäthylaminopropylamin wird 30 Minuten auf dem Ölbad bei 150°C erhitzt. Der Überschuss des Amins wird auf dem Wasserbad unter vermindertem Druck entfernt. Der Rückstand wird dreimal mit je 60 ml siedendem Benzol extrahiert. Der unlösliche Rückstand wird in Chloroform in Gegenwart von Natriumhydroxyd aufgenommen. Die Chloroformschicht wird mit Wasser gewaschen, das Chloroform abgedampft, der Rückstand in vorher verwendetem Benzol aufgenommen und das Gemisch auf etwa 50 ml eingeengt und gekühlt. Durch Abfiltrieren des suspendierten Feststoffs werden 180 mg (15%) gelbe Mikrokristalle vom Schmelzpunkt 215-218°C erhalten. Dieses Produkt entspricht dem mit 1 Mol Wasser kristallisierten gewünschten Amin.

Elementaranalyse: Berechnet für CppHp₇N,- .HpO: 25 Gefunden:

Es wurde gefunden, daß bei Verwendung von γ-Diäthylaminopropylamin im Überschuss die Ausbeute verbessert werden kann. Bei dieser Variante der Arbeitsweise wird ein Gemisch von 4 g des gemäß Beispiel 6 hergestellten Chlorderivats und 100 ml γ-Diäthylaminopropylamin 4 Stunden am Rückfluß erhitzt. Das überschüssige Amin wird unter

S09843/0726

	£	7,	_H	18	ü
69	,63	7,	70	18	,46
70	,02	39	,29

vermindertem Druck entfernt. Der erhaltene Rückstand wird in ln-Natriumhydroxydlösung aufgenommen. Die hierbei gebildete Fällung wird abgenutscht, getrocknet und aus Xylol umkristallisiert, wobei 4,1 g (73%) des gewünschten Derivats mit 1 Mol Kristallwasser erhalten werden.

Elementaranalyse: £ H_ N_

Berechnet für C₂₂H₂₇N₅-H₂O: 69,63 7,70 18,45 Gefunden: 69,82 7,49 18,33

Beispiel 8

1- (γ-Dimethylaminopropy 1) -amino-S-methyldipyrido/Ä, 3-b_7-/3,4-f7indol (Verbindung der Formel (XIX))

R = -NH-CH₂-CH₂-CH₂-N^ (Verbindung 22)

^CH3
Der Versuch wird auf die in Beispiel 7 beschriebene Weise nach der ersten Arbeitsweise durchgeführt, wobei das Dimethylaminopropylamin 7 Stunden im Siedezustand gehalten wird. Nach der oben beschriebenen Behandlung wird das Produkt aus Benzol umkristallisiert, wobei blaßgelbe Mikrokristalle vom Schmelzpunkt 24O°C, die dem Hemihydrat des gewünschten Produkts entsprechen, erhalten werden.

Elementaranalyse:

Berechnet für C₂₀H₂₃N₅.0,5 H₂O:

Gefunden:

Bei Durchführung des Versuchs auf die in Beispiel 7 beschriebene Weise wird eine Ausbeute von 73% erhalten. Bei dieser Variante des Verfahrens wird das gemäß Bei- · spiel 5 hergestellte Chlorderivat mit einem großen Überschuss von "γ-Dimethylaminopropylamin 4 Stunden am Rückfluß erhitzt. Nach Entfernung des Aminüberschusses unter

309843/0728

	£	7	H_	20	N
70	,09	6	,00	20	,44
70	,27	,85	,13

vermindertem Druck wird das Produkt aus Benzol umkristallisiert, wobei 73% Mikrokristalle vom Schmelzpunkt 24O⁰C erhalten werden. Dieses Produkt entspricht dem Hemihydrat des gewünschten Produkts.

Man löst 1 g der in der beschriebenen Weise erhaltenen Verbindung in 30 ml Äthanol, das mit Salzsäure gesättigt ist. Man erhitzt die Lösung zum Sieden und kühlt sofort. Die gebildete Fällung wird aus Äthanol umkristallisiert, wobei 1 g farblose Nadeln vom Schmelzpunkt 266-268°C erhalten werden. Dieses Produkt entspricht dem hydratisieren Trihydrochlorid der vorstehend genannten Verbindung 22.

Blementaranalyse: £ _H N_- _C1_

Berechnet für C₂₀H₂₃N₅^HCLH₂O: 52,11 6,08 15,20 23,12 Gefunden: 51,72 6,21 14,83 22,88

Beispiel 9

l-(ß-Dimethylarninoäthyl) amino-5-methyldipyrido/4, 3-b_7-/3,4-f7indol (Verbindung der Formel (XIX))

CH₃

R = -NH-CH₂-CH₂-N. (Verbindung 23)

CH₃

Der Versuch wird auf die in Beispiel 7 und 8 beschriebene Weise durchgeführt, wobei die Chlorverbindung (20) in ß-Dimethylaminoäthylamin 15 Stunden im Siedezustand gehalten wird. Nach der in Beispiel 7 und 8 beschriebenen Behandlung wird das Produkt umkristallisiert und dann in äthanolischer Salzsäure aufgenommen, wobei das entsprechende Trihydrochlorid gebildet wird, das aus Äthanol umkristallisiert wird und hierbei farblose Prismen vom Schmelzpunkt 262-269°C ergibt, die dem Dihydrat des Trihydrochlorids' der gewünschten Verbindung (23) entsprechen.

30 Ausbeute 37%.

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Elementaranalyse: Berechnet für C₁₉ Gefunden:

C H N Cl
N₅.3HCl.2H₂O: 49,08 6,02 15,07 22,93

49,58 5,77- 14,52 23,26

Beispiel 10

l-/(a-Methyl-ü-diäthylaminobutyl)-arnino7-5-methyldipyridoZ4,3-b7/3,4-f_7indol (Verbindung der Formel (XIX),

N(C₂H₅J₃, Verbindung 24)

in der R = NH-CH-CH₂-CH₂-CH₂-CH₃

500 mg des gemäß Beispiel 6 hergestellten Chlorderivats werden in 10 ml^-Amino-S-diäthylaminopentan gegeben.

Das Gemisch wird 13 Stunden bei der Rückflußtemperatur des Amins unter Stickstoff und unter Ausschluß von Licht gehalten. Das überschüssige Amin wird entfernt und der Rückstand in ln-Natriumhydroxydlösung aufgenommen. Die gebildete Fällung wird abgenutscht, mit Wasser gewaschen, getrocknet und aus Toluol umkristallisiert, wobei 120 mg (17%) gelbe Mikrokristalle, die einen Schmelzpunkt von etwa 160⁰C haben, erhalten werden.

Elementaranalyse für C₃₄H₃₁

20 Berechnet:
Gefunden:

Beispiel 11

l-Z"(Y-Aminopropyl)aminp7-5-methyldipyrido/4,3-b7/3,4-f7-

Indol

25 Verbindung der Formel (XIX), in der R = NH-CH₂-CH₂-CH₂-NH₂ (Verbindung 25)

Der Versuch wird auf die in Beispiel 7 beschriebene Weise durchgeführt. Ein Gemisch von 400 mg des gemäß Beispiel 6 hergestellten Chlorderivats und 10 ml 1,3-Diaminopropan wird 1 Stunde am Rückfluß erhitzt. Der Überschuss des 1,3-Diaminopropans wird entfernt und der Rückstand in ln-Natriumhydroxydlösung aufgenommen. Die

H2O =	405	,5	7	H1	17	ä.
	C-		7	,71	17	,22
71	,08		,94		,59
70	,78

309843/0728

gebildete Fällung wird abgenutscht und aus Dimethylformamid umkristallisiert, wobei 190 mg (42%) blaßgelbe Mikrokristalle vom Schmelzpunkt 268-269°C erhalten werden.

Elementaranalyse: Berechnet für C₁₈ Gefunden:

. SL ϊί M.

N₅.0,33 H₂O=311: 69,45 6,32 22,51

69,33 6,50 22,43

Beispiel 12

Herstellung von 1, 2-Dihydro-l-oxo-5,11-dimetnyldipyrido-/4,3-b_7/3,4-f/indol (Verbindung der Formel (L)= Ver-

bindunq (25))

Das allgemeine Schema der Herstellung dieser Verbindung ist nachstehend dargestellt. Die Herstellung erfolgt nach der Arbeitsweise (c), wobei die Verbindung der Formel (E) (Reaktionen 1 bis 4), die insbesondere der allgemeinen Formel (12) entspricht, und nach der Arbeitsweise (2) (Reaktionen 5 bis 11). Die nachstehend dargestellten Verbindungen (G) bis (L) können in ihrer tautomeren Form vorliegen.

009843/0726

cMo

2,5-Dimethyl-3-nitrobenzaldehyd (B)

Ein Gemisch von 610 g 2,5-Dimethyl-3-nitrobenzylchlorid (A), das gemäß M.J.Winchester und F.D.Popp (J.Het.Chem. 12 (1975) 547 hergestellt worden war, 1280 ml Essigsäure, 1280 ml Wasser und 855 g Hexamethylentetramin wurde unter Rühren 2 Stunden am Rückfluß erhitzt. Dann wurden innerhalb von 10 Minuten 1037 ml konzentrierte Salzsäure zugesetzt, worauf weitere 20 Minuten am Rückfluß erhitzt wurde. Das Gemisch wird auf O⁰C gekühlt, wobei ein Feststoff gebildet wird, der abgenutscht, getrocknet und aus

S098 4 3/0728

- 38 -

Ucr

4 1 Cyclohexan umkristallisiert wird, wobei 290,5 g (53%) gelbe Nadeln vom Schmelzpunkt 9O-93°C erhalten werden, die dem Aldehyd der Formel (B) entsprechen.

Elementaranalyse für C_gH_gNO =179

Berechnet:

Gefunden:

£ Jj. ü 60,30 5,06 7,80

60,13 4,97 7,71

ooy

2, 5-Dimethy1-3-nitro-träns-zimtsäure (C)

Ein Gemisch von 193,7 g des Aldehyds der Formel (B), 112,5 g Malonsäure, 1,5 1 Pyridin, das über Kaliumhydroxyd getrocknet worden ist, und 9 ml Piperidin wird 24 Stunden am Rückfluß erhitzt, wobei jedoch zweimal je 112,5 g Malonsäure nach 3,5- bzw. 6-stündigem Erhitzen am Rückfluß zugesetzt werden. Nach dem Abdampfen des Lösungsmittels wird der Rückstand in Aceton aufgenommen, abgenutscht, mit Wasser und erneut mit Aceton gewaschen, wobei die reine Verbindung C erhalten wird, die aus Äthanol umkristallisiert wird, wobei ockerfarbene Mikrokristalle vom Schmelzpunkt 228°C erhalten werden. Ausbeute 173 g entsprechend 72%.

Elementaranalyse für C^.H^.N

Berechnet:
Gefunden:

= .221,21	5	H-	6,	E
C	4	,01	6,	33
59,72		,91		21
59,74

3088*3/0726

2,S-Djmethyl-S-acetylamino-trans-zimtsäure (E)

141 g Nitrozimtsäure der formel (c) werden in 1260 ml Essigsäure suspendiert. Diesem Gemisch werden 170 g Raney-Nickel, das mit Essigsäure gewaschen worden ist, und Wasserstoff zugesetzt, wobei unter Wasserstoff bei Normaldruck gerührt wird, bis die Aufnahme von Wasserstoff aufhört (d.h. bis die theoretische Wasserstoffmenge aufgenommen worden ist). Das Gemisch wird zur Entfernung des Katalysators heiß filtriert, worauf die Hälfte der Essigsäure abgedampft wird. Eine kleine Probe wird zur Trockene eingedampft, in Wasser aufgenommen, mit Ammoniak neutralisiert, abgenutscht und aus Äthanol umkristallisiert, wobei farblose Mikrokristalle, die einen Schmelzpunkt von 185°C haben und der 2,5-Dimethyl-3-amino-trans-zimtsäure der Formel (D) entsprechen, erhalten werden.

E lernen tar analyse; Berechnet für C₁₁ Gefunden:

C_ JH N_

H₂O=2OO, 23:65,98 7,05 7,00 65,62 6,82 7,07

Zum restlichen Produkt, das beim Abdampfen der Hälfte der Essigsäure erhalten wird, werden 150 ml Essigsäureanhydrid gegeben. Das Gemisch wird 1,5 Stunden am RückRückfluß erhitzt und dann zur Trockene eingedampft. Der feste Rückstand wird in wässriger Salzsäure aufgenommen, eine Stunde gerührt und abgenutscht· Hierbei wird ein

309843/0726

Feststoff erhalten, der aus Essigsäure umkristallisiert wird, wobei 126,2 g (84%) farblose Plättchen vom Schmelzpunkt 27O°C, die der Säure der Formel (E) entsprechen, erhalten werden.

Elementaranalyse für C₁₃H₁₅NO₃= 233: £ ü H Berechnet: ' 66,93 6,48 6,01

Gefunden: 66,78 6,51 6,11

2,S-Dimethyl-S-acetylamino-trans-zinnamoylazid (F)

Ein Gemisch von 125 g der Zimtsäure (E), 1,1 1 Aceton

und 54 g Triäthylamin wird auf O⁰C gekühlt, worauf allmählich unter Rühren eine Lösung von 78,8 g Äthylchlorformiat in 460 ml Aceton zugesetzt wird, während die
Temperatur bei 0°C gehalten wird. Man rührt eine weitere Stunde bei 0°C und gibt eine Lösung von 52,5 g Natrium— acetat in der Mindestmenge Wasser zu, während man weiter kühlt, um die Temperatur unter 5°C zu halten. Nach erfolgter Zugabe wird noch 1 Stunde bei 0⁰C gerührt, worauf man das Reaktionsgemisch der Erwärmung auf Raumtemperatür überläßt. Das Gemisch wird in 5 1 Wasser gegossen

und die hierbei gebildete Fällung abgenutscht. Sie wird gut in Wasser; gewaschen, wobei man zum Schluß destilliertes Wasser verwendet, dann mit etwa Aceton gewaschen und schließlich getrocknet, wobei 107 g (77%) feine

flockige Nadeln erhalten werden, die von 150°C ab

SQ9843/0728

schmelzen und bei der Dünnschichtchromatographie an Kieselgel einen einzigen Flecken ergeben. Diese Verbindung (F) wird als solche bei der anschließenden Synthese verwendet.

G-

1,2-Dihydro-l-oxo-5,8-dimethyl-6-acetylaminoisochinolin (G)

Einem bei 240°C gehaltenen Gemisch von 500 ml Diphenyläther und 28,6 g Tributylamin wird unter kräftigem Rühren allmählich innerhalb von 15 Minuten eine bei 40°C gehaltene Suspension von 39,6 g des Azids F in 450 ml Diphenylether zugesetzt, wobei darauf geachtet wird, daß die Temperatur nicht unter 235°C fällt. Nach erfolgter Zugabe wird noch 15 Minuten bei 240⁰C gerührt, worauf das Gemisch der Abkühlung überlassen wird, während ein Teil des Diphenyläthers unter vermindertem Druck entfernt wird. Hierbei wird Kristallisation eines Feststoffs beobachtet. Nach Zugabe von 350 ml Benzol wird die Fällung abgenutscht. Sie wird in 400 ml siedendem Äthanol aufgenommen. Der unlösliche Anteil wird abgenutscht und aus 400 ml Dimethylformamid umkristallisiert. Das Gemisch wird heiß filtriert, wobei 18,7 g (53%) der Verbindung (G) in Form von farblosen Plättchen erhalten werden.

3098A3/0726

E lernen tar ana Iy se: Berechnet für ^C^ Gefunden:

CH N_-

,= 230,3: 67,80 6,13 12,17

67,54 6,42 11,96

?«s P

Ci

G-

1,2-Dihydro-l-oxo-5,8--dimethyl-6-aminoisochinolin (H)

Ein Gemisch von 10,6 g der Verbindung G, 175 ml Äthanol und 35 ml konzentrierter Salzsäure wird 2,5 Stunden am Rückfluß erhitzt. Nach Zugabe von 300 ml Wasser wird erneut zum Sieden erhitzt und zur Entfernung eines geringen unlöslichen Anteils filtriert. Das gekühlte Filtrat wird mit ln-Natriumhydroxydlösung auf pH 9 eingestellt. Die hierbei gebildete Fällung wird abgenutscht und dann aus Äthanol umkristallisiert, wobei 7,35 g (85%) des gewünschten Amins der Formel (H) in Form von cremefarbenen Plättchen vom Schmelzpunkt 242⁰C erhalten werden.

Elementaranalyse; Berechnet für ^cii Gefunden:

C H_ N₁

= 188,2: 70,18 6,43 14,88

70,25 6,15 14,52

SQ98A3/0726

l,2-Dihydro-l-oxo-5,8-dimethyl-6Z4^f-(3'-nitropyridyl)-amino/isochinolin oder -δ,β-αΐσιβ^γΐ-δτ^¹-(3·-nitropyridyl)amino/isochinolin (I)

Ein Gemisch von 34,7 g des Amins der Formel (H), 27,3 g 3-Nitro-4-chlorpyridin und 1 1 Dimethylformamid wird 15 Tage bei Umgebungstemperatur gerührt, worauf das Lösungsmittel abgedampft wird. Der Rückstand wird in 3 1 ln-Salzsäure aufgenommen und der unlösliche Anteil abgenutscht. Dieser unlösliche Anteil besteht im wesentlichen aus einem unerwünschten Nebenprodukt, das aus Dimethylsulfoxyd umkristallisiert wird, wobei orangerote Mikrokristalle, die bis 300⁰C unschmelzbar sind, erhalten werden.

Elementaranalyse; £ ü ü

Berechnet für C₂₇H₃₃N₅O₄.H₂0=499,5: 64,92 5,04 14,02 Gefunden: 65,19 4,81 13,79

Die wässrige Phase wird mit ln-Natriumhydroxydlösung auf pH 9 bis 10 eingestellt. Die hierbei gebildete Fällung wird abgenutscht und dann aus Dimethylformamid. umkristallisiert, wobei 22 g (39%) der Verbindung der Formel (I)"in Form von gelben Mikrokristallen vom Schmelzpunkt 310-315⁰C erhalten werden.

309843/0726

Ub

Elementaranalyse;

Berechnet für ^c-i6^Hi4^N4⁰3 =310,3:

Gefunden:

61,93 4,55 18,06 61,53 4,71 17,76

1, 2-Dihydro-l-oxo-5, S-dimethyl-G-Z^'-O¹ -aminopyridyl )-amino_7isochinolin (J) und 1-Z6¹ (I¹ , 2¹ -Dihydro-l'-oxo-5' ,8^l-dimethylisochinolyl)7'triazol-/i,5c7pyridin (K)

Zu 16,8 g des nitrierten Derivats (I) in 1 1 Essigsäure werden 17 g Raney-Nickel und Wasserstoff gegeben, wobei das Gemisch unter Wasserstoff bei Umgebungstemperatur und Normaldruck gerührt wird. Die theoretische Wasserstoff menge wird in etwa 1 Stunde aufgenommen, worauf der Katalysator abfiltriert wird und 50 ml der gebildeten Lösung entnommen werden.

Diese Lösung wird eingedampft und der Rückstand in Wasser aufgenommen und durch Zusatz von ln-Natriumhy-

309843/0728

droxydlösung alkalisch gemacht. Die hierbei gebildete Fällung wird abgenutscht und aus Acenitril und dann aus Anisol umkristallisiert, wobei das Amin der Formel (J) in Form von farblosen Mikrokristallen vom Schmelzpunkt 212-215⁰C erhalten wird.

E lernen tar ana Iy se: ' £ _H N_

Berechnet für ^C ₁₆ ^H ₁₆ ^N4⁰·H₂O=298: ' 64,41 6,08 18,76 Gefunden: 64,14 5,83 18,83

Die gesamte verbleibende Lösung wird auf 14⁰C gekühlt und unter Rühren innerhalb von 15 Minuten mit einer Lösung von 3,61 g Natriumnitrit in der Mindestmenge Wasser versetzt. Dann wird noch 1,5 Stunden gerührt, wobei man das Gemisch der Erwärmung auf Umgebungstemperatur überläßt. Das Lösungsmittel wird entfernt und der Rückstand in Wasser aufgenommen und abgenutscht. Die Fällung wird mit Wasser gewaschen. Der erhaltene Feststoff wird in 1,5 1 siedendem Äthanol aufgenommen, abfiltriert und dann auf 600 ml eingeengt, wobei nach dem Abkühlen 12 g (80%) des T_riazolpyridins der Formel (K) in Form von cremefarbenen Mikrokristallen vom Schmelzpunkt 3OO-3O2°C erhalten werden.

E lernen tar analyse: Berechnet für C₁₆I-L-N₅O = Gefunden:

	C_	4,	J4	5	24	H
65	,97	4,	70	24	,04
65	,66		,39

S09843/0726

2875724

1,2-Dihydro-l-oxo-S,ll-dimethyl-dipyrido/4, 3-b_7/3,4-f/-indol (L)

16 g Triazolpyridin der Formel (K) werden mit 80 g Phenanthren gemischt. Unter Rühren wird das Gemisch 30 Minuten auf dem Metallbad bei 34O°C erhitzt. Nach dieser Zeit hat die Stickstoffentwicklung praktisch aufgehört. Das Gemisch wird dann 2 Minuten auf 36O⁰C erhitzt, der Abkühlung überlassen und in 600 ml Hexan gegossen. Die unlösliche Fällung wird abgenutscht, mit siedendem Hexan gewaschen und dann aus Dimethylformamid umkristallisiert, wobei 5,7 g (36,5%) graue Nadeln, die bis 33O°C unschmelzbar sind, erhalten werden.

E lernen tar ana Iy se: Berechnet für C₁₆ Gefunden:

£. H Κ

,5 H₂O=272,3:70,57 5,18 15,43

70,63 5,32 15,22

Beispiel 13

Dieses Beispiel veranschaulicht die Arbeitsweise (b) zur Herstellung der Verbindung der Formel (12), in der R' Wasserstoff ist, d.h. der Verbindung der folgenden Formel (12a).

309843/0726

^XCOOH

COOH

(3Oa) (31Q) ₍32a)

2-Methyl-3-nitro-trans-zimtsäure (32a)

In einen 1 1-Dreihalskolben wird eine Lösung von 15,2 g 2-Methyl-3-nitroanilin (30a) in 200 ml Aceton gegeben. Der Lösung werden 17 ml konzentrierte Salzsäure zugesetzt, worauf das Gemisch auf O⁰C gekühlt wird. Die Lösung wird unter 5°C gehalten und unter Rühren durch allmähliche Zugabe einer Lösung von 7,5 g Natriumnitrit in 25 ml Wasser diazotiert. Die Lösung wird 30 Minuten gerührt und langsam in einen Dreihalskolben gegossen, der ein Gemisch von 100 ml Acrylsäure und einer Lösung von 7,6 g Kupfer(II)-chlorid in 25 ml Wasser und 100 ml Aceton enthält. Das Gemisch wird während der gesamten Zugabe, die 15 bis 25 Minuten dauert, bei einer Temperatür von 35°C gehalten. Das Gemisch wird eine Stunde bei 35°C gerührt, worauf das Aceton und die überschüssige Acrylsäure abgedampft werden. Der Rückstand wird in Chloroform aufgenommen und mit Wasser gewaschen. Die Chloroformphase wird durch zweimalige Zugabe von je 50 ml kaltem 2n-Natriumhydroxyd neutralisiert. Durch Ansäuern mit Salzsäure wird die 2-Methyl-3-nitrophenylchlorpropionsäure (31a) ausgefällt und dann abgenutscht und getrocknet.

Die Säure wird 30 Minuten in 100 ml Methanol, das 10 g Kaliumhydroxyd enthält, am Rückfluß erhitzt und dann eingedampft-. Der Rückstand wird in Wasser aufgenommen und mit Salzsäure kalt angesäuert. Die Fällung wird abfiltriert, getrocknet und aus Xylol umkristallisiert,

609843/0726

wobei 2-Methyl-3-nitrozimtsäure (32a) vom Schmelzpunkt 222°C erhalten wird. Ausbeute 11,9 g entsprechend 57,5%, bezogen auf eingesetztes Amin.

(32a)

COOH

CH₃CONH

COOH

CH

3
(12a)

2-Methyl-3-acetylamino-trans-zimtsäure (12a)

Zu einer Lösung von 84,5 g der Nitrosäure (32a) in 750 ml Essigsäure in einem 2 1-Dreihalskolben werden 100 g handelsübliches Raney-Nickel, das mit Essigsäure gewaschen worden ist, und dann Wasserstoff unter Rühren in einer Wasserstoffatmosphäre bei Normaldruck und Umgebungstemperatur gegeben. Die Hydrierung wird abgebrochen, wenn die aufgenommene Wasserstoffmenge die theoretische Menge überschritten hat (28,4 1 an Stelle der notwendigen Menge von 27,4 1). Dies ist nach einer Rührdauer von 4,25 Stunden der Fall. Der Katalysator wird abgenutscht und mit Essigsäure gewaschen, worauf die Hälfte des Lösungsmittels abgedampft wird. Nach Zugabe von 90 ml Essigsäureanhydrid wird das Gemisch 1,5 Stunden am Rückfluß erhitzt und dann zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in 500 ml siedender Essigsäure aufgenommen und hqiß filtriert, um die unlöslichen Nickelsalze zu entfernen. Durch Abkühlen werden 44 g der gewünschten Säure erhalten. Durch Einengen der Mutterlauge werden noch etwa 10 g der gewünschten Verbindung (12a)

30984370726

vom Schmelzpunkt 265-267°C gewonnen. Die Gesamtausbeute beträgt wenigstens 54 g entsprechend 60,2%.

Pharmakologische Versuche

Die nachstehend beschriebenen Versuche wurden, falls nicht anders angegeben, mit Gruppen von je 10 Mäusen durchgeführt.

Versuch 1

Untersuchung der tumorhemmenden Wirkung der verbindunqen gemäß der Erfindung auf die Leukämie L 1210

Die tumorhemmenden Eigenschaften der Verbindungen gemäß der Erfindung wurden anhand ihrer heilenden Wirkung auf die experimentell übertragene Leukämie L 1210 untersucht. Diese Leukämie wird bei Mäusen des Stamms CBDl (C 57 B 16 χ DBA/2)F1 erzeugt. Die Testverbindungen werden einen oder mehrere Tage nach der Übertragung der Zellen (eine einzige Injektion) intraperitoneal injiziert. Die in der folgenden Tabelle I genannten Ergebnisse sind als prozentuale Steigerung der Überlebensdauer (ILS %) und als Prozentsatz der durch die Test- verbindung abgetöteten Zellen ausgedrückt, wobei die Überlebensdauer der Tiere proportional der injizierten Zellen ist.

Die prozentuale Verlängerung der Überlebensdauer ILS % (Cancer.Res. 31 (1971) 1883-1887) ist das Verhältnis

S^fc S^c

25 ILS % = — =— χ 100

S^c

S = Überlebensdauer der behandelten Tiere S = Überlebensdauer der Vergleichstiere

Die Ergebnisse in Tabelle I zeigen, daß die Produkte gemäß der Erfindung tumorhemmende Eigenschaften haben.

809843/0726

Tabelle I

Untersuchung der tumorhemmenden Eigenschaften der Verbindungen gemäß der Erfindung auf die
Leukämie L 1210

Testverbindung Versuch

Nr.

Zahl der injizierten Zellen Menge in ILS % Zahl der Zahl der mg/Maus wiederge- abgetötet

(mg/kg) fundenen ten Zellen

Zellen

Überlebende Mäuse

Verbindung von
Beispiel 1
(Formel 8)

Tag 0 +2'

10"

10: ιοmg/Maus
(50 mg/
kg)

34,32
15,73
14,78

40.000 6000

800

90% 60%

40%

20%

0 0

1/10

dto.

Tag 0+1*·

io;

10 1 mg/Maus

(50 mg/kg) 47,3 8000 99%

38,1 2000 98%

11,8 5000 50%

Verbindung von
Beispiel 1
(Formel 8)

0,1 mg/
Maus
0,05 mg/
Maus

kein signifikanter Unterschied zu den Vergleichstieren mit 10^ Zellen

IO³ Zellen

Verbindung 20
(Beispiel 5)

0,1 mg/ 0,1 mg toxisch und kein Unterschied gegen-Maus über den Vergleichstieren mit ΙΟ** Zellen

IO³ Zellen

Tabelle I (Forts.)

is»
σ>

Untersuchung der tumorhemmenden Eigenschaften der Verbindungen gemäß der Erfindung auf die Leukämie L 1210

Testverbindung	Versuch	Zahl der	Menge in	ILS %	Zahl der	Zahl der	Überlebende
		injizier	mg/Maus		wiederge	abgetöte	Mäuse
	Nr.	ten Zellen	(mg/kg)		fundenen	ten Zellen
					Zellen

Verbindung 21
(Beispiel 7)

Produkt intraperitoneal injiziert Tag 0+1··

10"

0,1 mg/ 33,3 60 99,94

(0,5 mg/kg)

0,1 mg/ _

Maus 11,5 10 90 (5 mg/kg)

0,01 mg/ 17,4 80 92

(0,5 mg/

0,1 mg/ 23,2 40 96

(5 mg/kg)

HUM'

Produkt intraperitoneal injiziert Tag 0+1··

0,1 mg/

(5 mg/kg)

0,1 mg/
(5 mg/kg)

0,1 mg
(5 mg/kg)

22,6

22,15

400

60

96

94

1/10

5/10

1/10

3/10

*HUM = 2-N-Methyl-9-hydroxyellipticiniumacetat
••Tag 0+1 bzw. 0 + 2 = Injektion 1 bzw. 2 Tage nach der Übertragung der Zellen.

cn }fr

Versuch 2

Durch Viren induzierte Leukämie; Friendsche Leukämie

Die Schutzwirkung der Verbindungen gemäß der Erfindung gegen die Friendsche Leukämie, die durch Impfen von 5 bis 6 Wochen alten Mäusen des Stamms DBA 2 ausgelöst wird, wird untersucht. Das Virus-Inokulum stammt aus einem Homogenat von leukämischen Ratten (Gew.-/VoI.), das in isotonischem Phosphatpuffer ohne Ca⁺⁺ und ohne Mg⁺⁺ (PBS) auf 1:250 verdünnt war. Dies entsprach 100 SD™ (d.h. der Virusdosis, die eine Splenomegalie bei 50% der geimpften Mäuse hervorruft).

Das Virus wird intraperitoneal in einem Volumen von 0,2 ml injiziert. Die Testverbindung wird 5 Stunden nach dem Virus bzw. 1 Tag nach dem Virus in der genannten Dosis bei einem Volumen von 0,1 ml (i.p.) injiziert. Jede Gruppe von 20 Vergleichstieren erhält das Virus und ein Placebo bzw. die Testverbindung. 10 Mäuse werden am 21.Tag getötet. Die Milz wird entnommen und gewogen. Die Mäuse werden als leukämisch angesehen, wenn das Gewicht der Milz 200 mg übersteigt. Die Überlebensdauer der Tiere wurde an 10 Mäusen ermittelt.

Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengestellt. Diese Ergebnisse zeigen, daß die" Produkte gemäß der Erfindung außer ihrer tumorhemmenden Wirkung eine antivirale Wirkung aufweisen.

809843/0722

Tabelle II Durch Viren induzierte Leukämie: Friendsche Leukämie

CD O <Ό OO

Mäuse	Virus	Testver bindung	•VFA 1/250(1); VFA 1/250(2)!	Verbindung v.Beispiel 1 (Formel 8) 5 Std.nach dem Virus 0,1	Mittlere Überlebens dauer··, Tage	ILS %♦··	Gewicht der Milz in mg arn 21,Tag
Ver gleichs- tiere	VFA 1/250	0,5	31,7 (26-47) 28 (14-47)		2519 mg (2866-1919)
Behan delte Tiere	1 mg	47,6 (26-78)	59,5	2013 mg (887-2793)
34,2 (22-54)	14,6	(1803 mg) (718-2635)
41,7 (14-81)	39,7	959,6mg (373-1230)

Männliche Mäuse des Stamms DBA2, Alter 5 bis 6 Wochen.

Versuch am 4.8.19 76:

•VFA: Virus der Friendschen Leukämie, intraperitoneal in einer

Menge von 0,2 ml injiziert; Verdünnung 1:250, etwa 100 SD„_0<

••Mittlere Uberlebendauer (die Zahlen in Klammern bedeuten die Tage, an denen die erste und letzte Maus starben).

cn..

ISJ) CO

Verlängerung der Überlebensdauer in %,

Versuch 3

Untersuchung der Entwicklung des durch Viren induzier-

ten Moloney—Sarkoms

Die intramuskuläre Injektion des Moloney-Virus (C.Jasmin und Mitarbeiter, J.Nat.Cancer Jnst. 53 (1974) 469-474) bei frisch geborenen Mäusen führt nach 10 Tagen zur Bildung eines Sarkoms. Das Auftreten des Tumors ist proportional der injizierten Virusdosis. Das Virus-Inokulum besteht aus dem im Verhältnis von 1:250 verdünnten gemahlenen Tumor. Dies entspricht 10 TID₅₀, d.h. der Virus-Dosis, die das Auftreten des Tumors bei 50% der infizierten Tiere hervorruft. Bei dieser Dosis entwickeln 80 bis 100% der Tiere einen Tumor, und 100% der überlebenden Tiere sind leukämisch geworden. Der Versuch besteht somit in der Ermittlung der Zahl der Mäuse, die Tumore aufweisen, des Rückganges (oder nicht) dieser Tumore und schließlich in der Tötung der überlebenden Tiere nach 2 Monaten, um festzustellen, ob Splenomegalie vorliegt oder nicht ( Zeugnis einer Leukämie). Das Virus wird frisch geborenen Mäusen nach 3 bis 5 Tagen intramuskulär eingeimpft. Die Mäuse erhalten am folgenden Tag (Tag 0+1) bzw. 5 Stunden später (Tag 0+5 Stunden) eine intraperitoneale Injektion der Testverbindung. Die folgenden Ergebnisse wurden erhalten:

25 Mit dem Virus infizierte

Vergleichstiere: 80% der frischgeborenen Mäuse

weisen Tumore auf.

10% der Tumore gehen zurück.

30% der Tiere überleben, woTöei

alle Tiere Leukämie aufweisen.

Verbindung von Beispiel 7: , Injiziert am Tag 0 + 1; 1 jug/ Maus (0,5 mg/kg) '

70% der Mäuse haben Tumore.. 90% der Tumore gehen zurück.

90% der Tiere überleben. 0% Leukämie

8Q98/>3/072S

HUM: Injektion am Tag 0+1: 5 ug/Maus (2,5 mg/kg)

20% der Mäuse haben einen Tumor. 100% der Tumore gehen zurück. 10% der Mäuse sind leukämisch.

HUM: Injektion am Tag 0+1: lug/Maus (0,5 mg/kg)

30% der Mäuse zeigen einen Tumor« 90% der Tumore gehen zurück. 90% der Mäuse überleben. 33% der Mäuse sind leukämisch.

Mit dem Virus infi— 90% der Tiere zeigen einen Tumor, tiere? ^Vergleichs- 40% der Tumore gehen zurück.

90% der Mäuse überleben. 45% der Mäuse sind leukämisch.

Verbindung von Injektion am Tag 0+5 Std.; Beispiel 7: 1 ug/Maus (0,5 mg/kg)

5% der Tiere zeigen einen Tumor. 100% der Tumore gehen zurück. 100% der Tiere überleben. 40% der Tiere sind leukämisch.

Verbindung von Injektion am Tag 0+5 Std.; 1 ug/ Beispiel 1: Maus (0,5 mg/kg) ^/

50% der Tiere zeigen einen Tumor. 30% der Tumore gehen zurück. 75% der Tiere überleben. . 65% der Tiere sind leukämisch.

Versuch 4

Ermittlung der Toxizität

Die toxische Dosis für ausgewachsene Mäuse (Stamm C-57, BL6 χ DBA/2)F1 und für frisch geborene Mäuse wurde für die Verbindungen gemäß der Erfindung bei intraperitonealer Verabreichung ermittelt. Die erhaltenen Ergebnisse sind -nachstehend genannt.

809843/0726

1) Ausgewachsene Mäuse Fl (C 57 BL 6 χ DBA/2)F1 (intraperitoneal)

a) Verbindung von Beispiel 1:

Injektion von 2 mg/Maus (80 mg/kg) = 5 tote Tiere/6 1 mg/Maus (40 mg/kg) = 1 totes Tier/8

0,5 mg/Maus (20 mg/kg) = 1 totes Tier/6

b) Verbindung von Beispiel 7:

Injektion von 1 mg/Maus (50 mg/kg) = 1 totes Tier/3

0,6 mg/Maus (30 mg/kg) = 5 tote Tiere/10

0,5 mg/Maus (25 mg/kg) = 0 tote Tiere/5

0,3 mg/Maus (15 mg/kg) = 0 tote Tiere/6

Die DL₁-Q der Verbindung von Beispiel 7 beträgt somit 30 mg/kg.

2) Frisch geborene Mäuse (intraperitoneal)

5 /jg: 2,5 mg/kg = 3 tote Mäuse/8, schwächliches Aussehen der Mäuse.
HUM 10 lig: 5 mg

Diese Ergebnisse zeigen, daß die toxische Dosis der Verbindung von Beispiel 7 über 2,5 mg/kg Maus liegt.

Versuch 5

Zytotoxische Wirkung in vitro

Die zytotoxischen Wirkungen der Verbindungen gemäß der Erfindung wurden an Zellkulturen des Hamsters, des Menschen und der Maus in vitro ermittelt. Im einzelnen wurden der Stamm BHK21 von Hamsterzellen und ein von diesem Stamm abgeleiteter und von dem Virus des Hamstersarkoms umgewandelter Klon (Klon HS5) verwendet. Nach Abtrennung m£t Trypsin wurden die Zellen in Petrischalen aus-Kunststoff von 35 mm Durchmesser bei einer Konzentration von 2 χ 10 Zellen/Petrischale in "Eagle"-Kulturmedium kultiviert, dem "Bactotryptophosphate

809843/0726

Broth" "Difco" und 10% Kalbsserura zugesetzt worden waren (M.Stoker und I.MacPherson, Virology 14 (1961) 359).

Nach 5 Stunden wurden die Zellen auf einen Kunststoffträger gegeben, worauf die Testverbindungen zugesetzt wurden, die in Wasser oder, wenn sie in Wasser schwerlöslich waren rait DMSO (Dimethylsulfoxyd) verdünnt wurden. Im letzteren Fall wurde ein Vergleichsversuch mit der gleichen Endkonzentration von DMSO im Kultur— medium durchgeführt.

Der Zustand der Zellen wurde 24, 48 und 72 Stunden später untersucht. Die erhaltenen Ergebnisse (Tabelle III) zeigen eindeutig, daß die Produkte bei Konzentrationen zwischen 0,2 und 12 ,uMol deutlich zytotoxisch sind und daß das aktivste Produkt, die Verbindung von Beispiel 7, ebenso wirksam ist wie die bereits bekannten Derivate, das 2-Methyl-9-hydroxyellipticiniumacetat und das 9-Hydroxyellipticin.

Die Wirkungen auf die beiden Zelltypen, d.h. die normalen Zellen und die umgewandelten Zellen, sind ähnlich.

Tabelle III

Mindestdosis, die vollständige Hemmung des Wachstums bewirkt. +

Zellen Verbindung von Beispiel HE*

25 12 4 5 6

C13/8 0,5,UMoI 2 5 2 0,25 0,25 HS 5 0,5yuMol 2 5 2 0,25 0,25

*HE = 9-OH-Hydroxyellipticin

oder 2-Acetomethylat-9-hydroxyellipticinium

8098/>3/Q726

Versuch 6

Wirkung auf die Synthese von Makromolekülen

Die Wirkung der Verbindungen gemäß der Erfindung wurde durch Zugabe von Vorstufen, die mit radioaktiven Isotopen markiert waren, untersucht:

Mit C14 markiertes Methylthymidin zur Untersuchung der" DNA-Synthese,

mit H5 markiertes Uridin für die Untersuchung der Synthese von RNA

mit Hv markierten Valin für die Untersuchung der Synthese von Proteinen.

Diese Vorstufen wurden während einer Dauer von 30 Minuten zu unterschiedlichen Zeiten nach der Zugabe der Testverbindung zugegeben. Die Aufnahme wurde nach Lysis der Zellen für 1% Natriumdodecylsulfat und Ausfällung durch 5% Trichloressigsäure gemessen. Die säurelösliche Fällung wurde auf Glasfaserfiltern "Whatman GF/A" aufgefangen. Die Filter wurden getrocknet, worauf in einem Flüssigkeitsszintillationsspektrometer gezählt wurde. Die Ergebnisse, die für die Verbindung von Beispiel 1, d.h. 5,ll-DimethyldipyridoZ4,3-b7Z3,4-f7indol typisch sind, sind in Tabelle IV genannt. Es ist festzustellen, daß diese Verbindung in den ersten Stunden nach ihrer Zugabe die Synthese von DNA und RNA und in geringerem Maße die Synthese der Proteine sehr schnell vermindert.

Versuche, die an synchronisierten Zellen durchgeführt wurden (G.Torpier, J.Gruest und L.Montagnier, Experimental Cell Research 85 (1974) 437), haben gezeigt, daß die Verbindung von Beispiel 1 bereits nach den ersten Minuten ihrer Zugabe die Vermehrung von DNA zum Stillstand bringt, und zwar sowohl in ihrer Auslösungsphase als auch in ihrer Verlängerungsphase (phases d¹initiation" et d·elongation).

8098A3/0726

10

Tabelle IV

Hemmung der Synth.ese von Makromolekülen durch die Verbindung von Beispiel 1

Zeit der Markie- Aufnahme in Aufnahme irr Aufnahme in

rung nach Zugabe des Produkts, Std.

. 0,5

9 24

DNA (in %
der unbehandelten
Vergleichsprobe)

in RNA

.(in % d.
unbeh. Vergleichsprobe '

Proteinen (in % d. unbeh. Zellen)

41
14

6,3

33
13

3,7

31

40 37 16 17 17

15

20

25

Die Konzentration des Produkts beträgt 5 iiHol. Die HS5-Zellen werden 24 Stunden vorher in einer Konzentration von 5 χ 10 pro Petrischale von 60 mm Durchmesser in das Kulturmedium übertragen.

Versuch 7

Untersuchung der tumorhemmenden Wirkung in vitro

Diese Wirkung wurde an einem Tumorstamm der auf das Virus von C.Friend zurückzuführenden murinen Leukämie untersucht.

Die Tumorzellen vermehren sich in Suspension im Medium "RPMI 1640" (Katalog von GIBCO Bio-Cult.Ltd., Washington Road, Sandyford Industrial Estate PAISLEY PA 3 4EP RENFREWSHIRE, Schottland), dem 20% Serum vom Kalbsembryo Penicillin und Streptomycin zugesetzt worden ist. Die Verdoppelungszeit dieser Zellen beträgt 11 Stunden. Die "growth fraction" liegt bei 1 oder sehr dicht bei 1 (alle Zellen befinden sich im Zyklus). Die Kulturen werden zum Zeitpunkt t = 0 bei einer Konzentration von 2 χ 10 Zellen pro ml in "Faicon"-i.chalen überführt, die 4 ml Medium enthalten. 24 Stunden später, d.h. zu einem Zeitpunkt, zu dem die Kulturen sich in der Exponential-

809843/0726

wachstumsphase befinden, wird die Testverbindung zugesetzt. 24 Stunden nach der Zugabe des Produkts werden die Zellen gezählt. Der Prozentsatz der lebenden Zellen wird nach dem Ausschließungstest mit "Trypanblau" ermittelt. Es ist somit möglich, zwei Dosen zu bestimmen: 1) die Letaldosis 50% und 2) die Letaldosis 100%.

DL

DL

50

Vergleichsprodukt:

2-N-Methy1-9-hydroxy-

el1ipticiniumacetat

(HUM) 7x10

Verbindung von Beispiel 1 5x10

Verbindung von Beispiel 2 5x10

Verbindung von Beispiel 5 6x10

Verbindung von Beispiel 6 5x10

Verbindung von Beispiel 7 5x10

-6

-6

-6

-8

3x10

-7

10

-7

1,5x10

-6

2x10

-6

10

-6

10

-8

Aktivität* =DL₅₀ HUM

1 3

0,2 0,15 0,3 20

»Aktivität: Diese völlig willkürliche Zahl'(Verhältnis der DL,-_n von HUM zur DLq_n der Testverbindung) ermöglicht es, sich eine Vorstellung von der Wirksamkeit der verschiedenen Produkte durch Vergleich mit HUM, dem wirksamsten Produkt in der Reihe der Ellipticine, zu

30 machen.

Versuch 8

Akute Toxizität in vivo

Die Testverbindungen wurden Gruppen von 10 Mäusen in verschiedenen Verdünnungen intraperitoneal injiziert. An jedem Tag wurde die Zahl der toten Tiere notiert.

609843/0726

- ββ -

Wenn die Dosen gut gewählt werden, kann für jedes Produkt eine Letaldosis 100% und eine Letaldosis 50% ermittelt werden. Diese Untersuchung ist auf 2 Monate begrenzt. Zwei Stämme von Mäusen gleichen Geschlechts wurden systematisch verwendet: C3H/He und ICFW.

	Mäuse stamm	' DL100 m9/k9	DL50 mg/kg-
Verbindung Beispiel 1	von C3H ICFW	200 >200	100 150
Verbindung Beispiel 7 Versuch 9	von C3H ICFW	35 25	20 15
Wirkung auf	chlormonozytäre	Tumorzellen

Bei diesem Versuch wurde die Wirkung der Produkte gemäß der Erfindung auf chlormonozytäre Tumorzellen nach dem Test der in der Einheit 22 (B.Tambourin und F.Wendung) desInstitut National de la Sante et de la Recherche Medicale (I .N.S .E.R.M.) isolierten Chlorleukämie der Maus (ICFW-Mäuse, Stamm CFW co-sanguine) an Mäusen ermittelt, denen eine Variante des Friendschen Virus injiziert worden war.

Der Tumor tötet alle Tiere, denen die Injektion an den Tagen 19,3 _+ 2 verabreicht wird. Dieser Tumor entwickelt sich in halbfester Form im Bauchwasser. Das Peritoneum ist gleichzeitig mit festen Tumormassen und Zellen, die im Bauchwasser suspendiert sind, befallen. Der Tumor wird durch die Zellen der Suspension übertragen, aus denen Tumormassen und Zellen im Bauchwasser entstehen.

009843/0728

Mittlere Überlebensdauer ohne Behand-Iunq

Verbindung der Formel

8 (4O mg/kg, 6 Std.

nach Übertragung) 18,5 +_ 2 Tage

Verbindung

(1 mg/kg 24 Std. nach

der Übertragung) 18,9 +_ 1,8 Tage

Versuch

Mittlere Überlebensdauer nach Behandlung

25,3 i 3,1 Tage

29,0 +_ 3,0 Tage

Vergleich der tumorhemmenden Wirkung der Verbindung von Beispiel 7 mit derjenigen bekannter Produkte

Mäusen, die von Leukämie L 1210 befallen waren, wurden die Verbindung von Beispiel 7, d.h. (γ-Diäthylaminopropyl)-l-amino-5-methyldipyrido/4, 3-b//3, 4-f_7indol bzw. bekannte Verbindungen 1 bis 3 Tage nach der Übertragung der Zellen in den in Tabelle V bis VII genannten Dosen injiziert. Die mittlere Überlebensdauer (MÜD) und die prozentuale Verlängerung der Überlebensdauer (ILS %) wurden ermittelt.

Angaben über die bei diesem Versuch verwendeten bekannten Produkte, insbesondere ihre tumorhemmenden Eigenschaften, ihre Nebenwirkungen sowie ihre Verwendung beim Menschen finden sich in "La Chimiotherapie des Cancers" von G. Mathe und Y.Kenis, Expansion Scientifique Francaise, 3.Auflage, Paris 1975.

309843/0728

Tabelle

	Testverbindung	Injektion	Menge pro Maus	Zeit bis Eintritt	15	zum MUD des Todes	11	ILS %
	Vergleichstiere,						lebt bis zum
	ΙΟ4 Zellen			10 -	17	Tage	13,8
	Verbindung von Beispiel 7	Tag 0+1	0,2 mg	6	11	1 Maus 30. Tag	11
CO O (O	Verbindung von Beispiel 7	Tag 0+3	0,2 mg	11 -	15	Tage	11,54	25,45
co	Thiotepa	Tag 0+3	0,1 mg	10 -	12	Tage	11,1	0
	Mitomycin	Tag 0+3	0,016 mg'	10 -	17	Tage	15,9	4,95
O	BCNU	Tag 0+3	0,1 mg	10 -		Tage	leben bis zum	0,9
to	Methotrexat	Tag 0+3	0,250 mg	15 -	Tage	44,62
a»	Endoxan	Tag 0+3	4 mg	13	3 Mäuse	30.Tag/l

Menge in mg/Maus

Tabelle	0+3	VI	10	zum des	MUD	ILS
Injektion	0+3		10	Tage	9,06
	0+3	Zeit bis Eintritt Todes	10	Tage	9,2	1,54
Tag	0+3	9 -	9	Tage	9,06	0
Tag	0+1 0+3	9 -	14	Tage	8,8	0
Tag	9 -	16 15	Tage	12,62	39,35
Tag	8 -		Tage Tage	12,6 12,27	39,07 35,43
Tag Tag	12 -
	. 9 - 10 -

Vergleichstiere,
ΙΟ⁵ Zellen

Thiotepa
Mitomycin C
BCNU

•i> Methotrexat

° Verbindung von
K> Beispiel 7

Endoxan

0,1 mg 0,016 mg 0,1 mg 0,250 mg

0, 2 mg

4 mg Tag 0+3

15 - 21 Tage 18,6 105,30

TestVerbindung

Tabelle VII

Injektion Menge Zeit bis

Eintritt Todes zum des

MUD

ILS %

Vergleichstiere,
10⁵ Zellen

C3» Verbindung von
O Beispiel 7
to

4?* ON COVIN

Tag 0+3

0,2 mg/Maus 10 - 11 Tage

13 - 16 Tage 14,18

Tag 0+3 0,5 ug/Maus 10 - 13 Tage 10,8

36,35 3,85

feg

Versuch 11

Mäusen, auf die die Leukämie L 1210 übertragen worden war, wurde die Verbindung von Beispiel 8 (Verbindung 22), d.h. (Y-Dimethylaminopropyl)-l-amino-5-methyldipyrido/.^, 3-137/3,4-f/indol einen Tag nach der Übertragung der Zellen (Tag 0+1) in den in Tabelle VIII gen_annten Dosen injiziert. Die mittlere Überlebensdauer (MÜD) und die prozentuale Verlängerung der Überlebenszeit (ILS %) wurden ermittelt.

3 4 5 Dieser Versuch wurde mit 10 , 10 und 10 Leukämiezellen am Tag 0 durchgeführt. Ferner wurde dieser Versuch mit der Verbindung von Beispiel 7, d.h. (γ-Diäthylaminopropyl) -l-amino-5-methyldipyrido/4~, 3-b_7/~3, 4-f7"indol (Verbindung 21) durchgeführt.

Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle VIII genannt. Ferner ist in dieser Tabelle die Zahl der überlebenden Mäuse angegeben. Eine Maus gilt als überlebend, wenn sie wenigstens 2 bis 3 Monate nach der Übertragung der Leukämiezellen überlebt hat.

S09843/072S

Tabelle VIII

Zahl der am Tag O injizierten Zellen L 1210	Verwendete Verbindung	Injizierte Menge in rng/ Maus*	MUD	ILS %	Zahl der über lebenden Mäuse
103	Vergleichs tiere		13
	Beispiel 8 " 8	0,1 0,05	16,4 14,7	50,5 34,9	3 1
	" 7	0,2	16,3	25,4	7
	u 7	0,1	15	15,4	4
104	Vergleichs tiere		10,9
	Beispiel 7	0,1	18	65,1	1
	Beispiel 8	0,1	13,7	25,7	3
	Beispiel 8	0,05	14,7	34,9	1 '
105	Vergleichs tiere		9,05
	Beispiel 8	0,1 0,05	13,8 11,6	52,5 28,1

CO •Dosis in mg/Maus χ 50 = Dosis in mg/kg s,

Versuch 12

Untersuchung des Schutzes von leukämischen Mäusen (übertragene Zellen L 1210) durch eine einmalige

Dosis oder eine geteilte Dosis

Leukämischen Mäusen (L 1210) wurde die Verbindung von Beispiel 7, d.h. (γ-Diäthylaminopropyl)—l-amino-5-me— ~ thyldipyrido^, 3-b_7/3 ,4-f/indol, in einer einzigen Injektion (10 mg/kg am Tag 0+3) bzw. in geteilten Dosen (2,5 mg/kg bei jeder Injektion an den Tagen 0 + 3, 0 + 4, 0 + 5 und 0+6) injiziert.

Die Ergebnisse in Tabelle IX zeigen, daß eine einmalige Dosis eine stärkere tumorhemmende Wirkung hat als die gleiche Dosis, die in vier Teile unterteilt wird.

309843/0726

Tabelle IX

Zahl der am Tag O injizierten Zellen L 1210

Menge der Verbindung von Beispiel 7 in mg/Maus Injektion

MÜD

ILS %

Überlebende Mäuse

10

Vergleichstiere

0,2 mg/Maus

4 χ(0,05 mg/ Maus) einmal am
Tag 0+3

geteilt am
Tag 0+3+4+5+6

11,9 14,2

14,4

19,32

21

10"

Vergleichstiere

0,2 mg/Maus

4 x(0,05 mg/ Maus) einmal am
Tag 0+3

geteilt am

Tag 0+3+4+5+6 13,4

10,4

14,18 36,35 28,85

Versuch 13 Lewis-Karzinom

Bezüglich dieses Versuchs wird auf die folgenden Veröffentlichungen verwiesen:

1) Carcinome pulmonaire de Lewis (3LL) von K.Sugiura und C.C.Stock, Cancer Res. 15 (1955) 38-51.

2) La Chimiotherapie des cancers von G. Mathe und

Ykenis in Expansion Scientifique Francaise, S.Auflage, Paris 1975.

10 3) S.A.Schepartz, Screening 1971, Cancer Chemiother. Rep. Part 3, Band 2, Seite 3.

Bei diesem Versuch erhalten Mäuse (BDF₁) durch intramuskuläre Injektion Zellen (10 Zellen), die einer vom Tumor befallenen Maus entnommen werden. Die Mäuse entwickeln 10 bis 15 Tage nach dem Impfen einen Tumor an der Injektionsstelle. Ferner ra^tastasieren diese Zellen zur Lunge unter Bildung von Kolonien auf der Lungenoberfläche. An den in dieser Weise behandelten Mäusen kann somit die turnorhemmende und antimetasta-

20 sische Wirkung eines Produkts beurteilt werden.

Untersuchung der antimetastasischen Wirkung der er-

findunqsqemäßen Verbindungen der Beispiele 7 und 8

Gruppen von je 10 Mäusen erhalten durch intramuskuläre Injektion (linke Pfote) 10 Zellen, die einer vom Tumor befallenen Maus entnommen werden. Die Testverbindungen werden intraperitoneal am Tag 0 + 5 in einer einzigen Dosis oder in geteilten Dosen injiziert. Die mittlere Überlebensdauer (MÜD) und die prozentuale Verlängerung der Überlebenszeit (ILS %) werden ermittelt,

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Zahl der Injektionen MÜD ILS %

Unbehandelte

Vergleichstiere 25

Mit der Verbindung 4 Injektionen am

von Beispiel 7 Tag 0 + 5+6+10+11 27,4 9,6 behandelte Mäuse _{j(j 2?5 mg/kg}

dto. 1 Injektion am

Tag 0+5
10 mg/kg 32,7 30,8

10 Mit der Verbindung _τ ο + 5

von Beispiel 8 ₅ J _{/k 27 44 9 8}

behandelte Mause ^y ^ ' '

Hinsichtlich des Befalls der Lunge mit Metastasen kann auf eine Schutzwirkung der Verbindungen der Beispiele und 8 geschlossen werden. Eine behandelte Maus und eine unbehandelte Maus wurden am Tag 0+22 getötet und die Metastasen auf der Lunge gezählt. Bei der unbehandelten Maus wurden 77 Metastasen und bei der Maus, die am Tag 0+5 (eine einzige Injektion) mit der Verbindung von Beispiel 7 behandelt worden war, 35 Metastasen gezählt.

Versuch 14

Virusinduzierte Leukämie: Friendsche Leukämie

A) Wie beim oben beschriebenen Versuch 2 wurde ein Virus-Inokulum der Friendschen Leukämie aus leukämischer Milz hergestellt und so verdünnt, daß es 100 SD₅₀ZO,2 ml (SD₅₀ = milzvergrößernde Dosis 50%) enthielt. Als Testverbindung wurde die Verbindung 21 (gemäß Beispiel 7 hergestellt) verwendet. Sie wurde intraperitoneal als einmalige Injektion 1 Tag nach dem Beimpfen mit dem Virus verabreicht.

Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle Xa genannt. Die Behandlung mit dieser Verbindung 21 sowie mit der Verbindung von Beispiel 1 (siehe Tabelle II) hatte eine bedeutende Verlängerung der Lebensdauer zur Folge.

809843/0726

- Ά3 -

Die Hälfte der mit der Verbindung von Beispiel 1 gemäß dem Test 2 oder mit der Verbindung 21 in der oben beschriebenen Weise behandelten Mäuse wurde 21 Tage nach dem Impfen mit dem Virus getötet. Ihre Milz wurde entfernt und gewogen. Das mittlere Gewicht der Milz bei den Kontrolltieren betrug 2520 mg (1919-2866). Es betrug bei den mit 5 mg/kg der Verbindung von Beispiel 1 behandelten Mäusen 2013 mg (887-2793), bei den mit 25 mg/kg behandelten Mäusen 1803 (718-2635) und bei den mit 50 mg/kg behandelten Mäusen 960 (373-1230). Bei den mit der Verbindung 21 am Tage nach dem Impfen mit dem Virus behandelten Mäusen betrug das mittlere Gewicht der Milz 1935 mg (500-2950). Der Rückgang der Splenomegalie steht in direkter Beziehung zur Verlängerung der Lebensdauer und läßt erkennen, daß die Verbindung gleichzeitig als Antivirusmittel in diesem System wirksam ist.

Tabelle Xa Wirkung der Verbindung (21) auf die Friendsche Leukämie

Menge der Verbindung, mg/kg

Eintritt des Todes nach ... Tagen

MUD

ILS %

Vergleichstiere

Mit der Verbindung

21

(Beisp.7) behandelte Mäuse

20 - 56

32-

27 - 52

44,5

39

B) Der Versuch wurde in der gleichen Weise wie der Versuch.2 durchgeführt, wobei als Verbindung gemäß der Erfindung die gemäß Beispiel 7 hergestellte Verbindung (21), d.h. l-Amino-(Y-diäthylaminopropyl)-5-methyldipyrido/4,3-b//3,4-f7indol verwendet wurde. Dieser Ver-

809843/0728

•ta -

ns

such wurde mit einer einmaligen Dosis der Verbindung (21) (20 mg/kg) und mit verschiedenen Virusdosen durchgeführt. Die erhaltenen Ergebnisse sind nachstehend in Tabelle Xb genannt.

Tabelle Xb '

Virusinduzierte Leukämie: Friendsche Leukämie (Verbindung 21): einmalige Dosis von 20 mg/kg. Unterschiedliche Virusdosen

Vergleichstiere
Virus 1/500
(1000 SD₅₀)

Verbindung 21,
Tag 0 + 1

Vergleichstiere
Virus 1/2000
(250 SD₅₀)

Verbindung 21,
Tag 0 + 1

Zeit bis zum Eintritt des Todes⁽¹^

MÜD⁽²⁾ ILS %⁽³⁾Über-

lebende Tiere 4 Mon. nach dar

Impfung

24-38

31-51

29,1

40,7

25-44

50-82

33,8

55,4

40

0 0

64

Vergleichstiere
(Virus 1/1000)

Verbindung 21
Tag 0+1

(D,

18-36 30-54

24,3 44,4

82,7

0 0

Zeit bis zum Eintritt des Todes: Die erste Zahl gibt den Tag an, an dem die erste Maus stirbt, und die zweite Zahl bedeutet den Tag, an dem die letzte Maus stirbt.

⁽²⁾MÜD: Mittlere Überlebensdauer

ILS % (increased life span) = Verlängerung der Überlebenszeit; berück sijtch ti at nur die toten Tiere.

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MUD, - MUD - x 100

MUD. = behandelte Tiere; MÜD = Kontrolltiere

Versuch 15 Leukämie L 1210

Der Versuch wurde in der gleichen Weise wie der Versuch 1 mit der gemäß Beispiel 1 hergestellten Verbindung Nr.8, d.h. 5,ll-DimethyldipyridoA, 3-b7/3, 4-f7-indol durchgeführt. Bei diesem Versuch wurde die Verbindung (8) 4 Tage nach Übertragung der Zellen in einer Dosis von 50 mg/kg injiziert. Die Ergebnisse sind in Tabelle XI genannt, in der außerdem die Ergebnisse angegeben sind, die mit der gleichen, jedoch einen Tag nach der Übertragung der Zellen injizierten Verbindung erhalten wurden (siehe Versuch Nr.2 in Tabelle I).

Die Ergebnisse zeigen, daß die prozentuale Überlebensdauer (ILS %) höher ist, weil das Produkt früher nach der Übertragung der Zellen verabreicht wurde.

309843/0726

Tabelle XI

Die Verbindung wird 1 Tag (+1) bzw. 4 Tage (+4) nach der Übertragung der Zellen verabreicht.

Verbindung von Beispiel 1 = 5,ll-Dimethyldipyrido^,3-b/^3,4-f/indol

Zahl der Zellen

Verbindung Dosis Tag der Bereich der MUD mg/kg Impfung Todesfälle Tage

ILS

Versuch-2

O
CD
OO

Versuch 4

10

10

10"

10*

10

10*

10*

10'

10*

10'

—	1	0
Beispiel		50
-	1	0
Beispiel		50
-	1	0
Beispiel	50

Beispiel 1

Beispiel 1 0

Beispiel 1

0 + 1

0 + 1

0 + 1

0 +4

+4 0

+4

7-12	Tage	v,	8	47,	3
9-15	Il	11,	5
8-11	11	9,	3	38,	1
10-13	ti	12,	85
10-13	ti	11		11,	8
11-14	Il	12,	,3
6 -7	tt	6.	,7	34,	3
8-13	It	9
8-12	tt	8,	,9	15,	7
10-11	It	10	,3
10-11	It	10	,5	14
10-16	It	1?

cn •-J co

Versuch 16

Beziehung zwischen Struktur und Wirksamkeit verschiedener Dipyridoindole, die verschiedene Substituenten R¹,. enthalten

Der Substituent R^₁ in der 1-Stellung scheint sehr wichtig für die Schutzwirkung der Derivate gegen das Wachstum der Tumorzellen L 1210 zu sein.

Die Leukämie L 1210 wurde durch wöchentliche Übertragungen auf Mäuse (C 57 B 16 χ DBA/2)F1 aufrecht erhalten. Am Tag 0 wurden die Mäuse intraperitoneal mit einer unterschiedlichen Zahl von aszitischen Tumorzellen L 1210 in einer Menge von 0,1 ml geimpft. Anschließend wurden die angegebenen Verbindungen inPES-Lösungen, die frei von Ca und Mg waren (Gibco), bzw. in MacCoy·s-Medium (Gibco bzw. Microbiological Associates) verabreicht.

Die Beziehung zwischen der Größe des intraperitoneal gegebenen Inokulums der leukämischen Zellen und die Lebensdauer des Wirts wurde an Gruppen von 10 Mäusen nach Übertragung von 10 bis 10 Zellen in 0,1 ml MacCoy-Medium ermittelt. Die Verkürzung der durchschnittlichen Überlebensdauer zwischen jeder aufeinanderfolgenden zehnfachen Steigerung der Größe des Inokulums der leukämischen Zellen betrug 2 Tage. Nach der Berechnungsmethode von Dombernowsky betrug die Verdoppelungszeit 0,615 Tage.

Wenn die Verbindungen γ-Diäthylaminopropyl (Verbindung 21) oder γ-Dimethylaminopropyl (Verbindung 22) als Substituenten R¹^ enthalten, haben diese Verbindungen eine ähnliche oder stärkere tumorhemmende Wirkung. Wie die Ergebnisse in Tabelle XII zeigen, sind die Verbindungen 21 und 22 dem Ellipticiniumacetat (HUM) überlegen, ein Zeichen, daß die Pyridoindolstruktur wirksatner ist als der Pyridocarbazolring (Ellipticin).

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	Verabreichte Verbindung	21	Dosis mg/kg	Tag der Impfung	+4	Tabelle XII	MÜD	ILS	%	3	Überlebende Tiere bis 60 Tage
Zahl der Zellen	-		0	O	Zeitbe reich des Todesein tritts,Tage	11,8	—		5	O
ΙΟ4	Verbindung		5	41	10-14	16,2	33,	6	1
ίο4	dto.		0,5	+ 1	13-21	13,54	11,		O
ίο4 . ■	HUM	21	5	+ 1	11-15	14,9	22,	2	1
ίο4 .	-		O	O	14-20	13,8	-	4	O
ΙΟ3	Verbindung		5	+ 1'	13-16	17	23,	15	5
ΙΟ3	dto.		0,5	+1	15-22	16,2	17,		3
ΙΟ3	HUM	21	5	+ 1	14-20	16,86	22,	1	3
ΙΟ3	-	22	O	O	14-20	10,9		7	O
ίο4	Verbindung		5	+ 1	10-12	18	65,	9	1
ΙΟ4	Verbindung		5	+ 1	14-21	13,7	25,		3
ΙΟ4	dto.	22	2,5	+ 1	12-15	14,7	34,	5	1
ίο4	-		O	O	10-19	9,05
ίο5	Verbindung	von	5	+ 1	8-14	13,8	52,	9	O
ΙΟ5	-		O	O	11-16	11,2
ίο4	Verbindung Beispiel 2	20	10-13	11,3	O,	O
ΙΟ4			10-17

Versuch 17

Beziehung zwischen der Länge der substituierenden

Kette und der Aktivität

Die Wichtigkeit des Substituenten R¹. an der 1-Stellung für die tumorhemmende Wirkung dieser Verbindungen wurde vorstehend veranschaulicht. Wenn jedoch die Länge der Seitenkette verlängert wird und γ-Diäthylaminopropylamino-1 als Substituent (Verbindung 21) oder γ-Dimethylaminoäthylamino-l (Verbindung 23) verwendet wird, sind, wie die Tabelle XIII zeigt, beide Verbindungen gegen die Leukämie L 1210 bei der gleichen Dosis wirksam. Die Verbindung 21 ist jedoch weniger toxisch (50 mg/kg im Vergleich zu 25 mg/kg bei der Verbindung 23) und hat einen höheren ILS %-Wert als die Verbindung 23, wobei eine Maus bis zu 60 Tage überlebte. Diese Ergebnisse zeigen, daß die Substitution mit der Diäthylaminopropylamino-1-Gruppe der besten Kettenlänge für die therapeutische Wirkung des Derivats entspricht. Bei Verlängerung der Seitenkette durch l-Amino(a-methylcf-diäthylaminobutyl) , wie es beispielsweise bei der Verbindung 24 der Fall ist, ist eine ähnliche tumorhemmende Wirkung festzustellen. Dies bestätigt, daß die Verbindung 21 die größte Wirkung bei den Mäusen aufweist.

	21	21	Tabelle XIII	Zeitbe reich des Todesein tritts, Tage	MÜ D	ILS%	Überle bende Tie re bis 60 Tage
Verbindung	23 t	24	Tag der Impfung	8-9	8,8
	Kontrolitiere		12-18	14,9	69,2	1
	Verbindung	+ 1	11-18	14,6	65,2	0
Kontrolltiere	Verbindung	+ 1	10-13	11,2
Verbindung		14-32	18,5	65,6	0
Verbindung	+4	12-20	17,5	56,25	0
+4

8098^3/0726

Versuch 18

Beziehung zwischen Dosis und tumorhemmender Wirkung der

Verbindung 21 gegen Leukämie L 1210

Die Wirksamkeit der Verbindung 21 gegen Leukämie L 1210 beim Versuch 1 ändert sich mit der Dosis wie folgt:

Bei 5 mg/kg tritt eine bedeutende Verlängerung der Überlebenszeit (MÜD) ein (ILS = 87%). Bei höheren Dosen der Verbindung 21 tritt stets eine starke Verlängerung der Überlebenszeit ein (ILS = 52% bei 10 mg/ kg und 75% bei 20 mg/kg), wobei einige Tiere bis zu 60 Tage überlebten (10% der geimpften Mäuse bei 10 mg und 20% der geimpften Mäuse bei 20 mg/kg).

Versuch 19
Einfluß des Zeitpunkts der Verabreichung der Verbin-

dung 21

Wie die Ergebnisse in Tabelle XIV zeigen, verlängerte eine einmalige Injektion der Verbindung 21 die mittlere Überlebensdauer erheblich, wenn sie bis zu 6 Tage nach der Übertragung der Zellen L 1210 verabreicht wurde.

Die Ergebnisse bestätigen, daß die Verbindung 21 um so wirksamer ist, je früher sie nach der Übertragung der Zellen verabreicht wird (ILS 56,4% am Tag +2, 43% am Tag +3 im Vergleich zu 20,8% am Tag +6 bzw.2% am Tag +7). Die fehlende Schutzwirkung am Tag +7 könnte dadurch erklärt werden, daß einige Zellen durch ein Gefäß wandern, das für die Verbindung unzugänglich ist (Annahme von J.B. Le Pecq für 9-Hydroxyellipticin).

8098/>3/0726

Tabelle XIV

Tag der Zeitbe-

Verabreichung·*

reich des

Todeseintritts, Tage

MÜD ILS % Geschätzte Zahl der Zellen·*·

Kon-

troll-

tiere

BD 40*

+2
+ 3
+4
+5
+6
+ 7

10-11 15-17 12-17 10-14 10-13 10-14 10-13

10,1 15,8 14,4 12,4 11,9 12,2 10,3

56,4 43,0 22,8 17,8 20,8 2,0

10"

10^€ 5xlO⁶

5xlO

•BD 40 wird intraperitoneal in einer Menge von 0,1 ml verabreicht, die 0,4 mg Wirkstoff/Maus enthält (20 mg/kg). (Verbindung 21)

••Der Tag 0 ist der Tag der intraperitonealen Über-

4
tragung von 10 Zellen L 1210.

**»Ermittlung der Zahl von Leukämiezellen durch Berechnung der Verdoppelungszeit (gemäß P.Dombernowsk^.

Versuch 20

Untersuchung von Kombinationen der Verbindung 21 mit

anderen Arzneimitteln

Eine Steigerung der Schutzwirkung auf Mäuse, die mit dem Lewis-Lungenkarzinom 14 Tage vor einer niedrigen Belastungsdosis mit anschließender hoher Belastungsdosis von Endoxan geimpft worden waren, wurde 1978 von J.Millar"Tenth Congress of Chimiotherapy 1978, im Druck, berichtet. G.A. Preasant, "Cancer" Bd. 4o, 1977, 987-993 verwendete für die Therapie von Brustkrebs, der gegen die Therapie durch Arzneimittel resistent ist, am folgenden Tag eine Kombination von Endoxan,BCNU und Adriamycin.

809843/0726

Die Ergebnisse ähnlicher Versuche mit der Verbindung 2T bei Lewis-Karzinom und Arzneimittel-resistentem Brustkrebs sind in Tabl. XV genannt. Eine Belastungsdosis von

Endoxan (100 mg/kg) wurde 3 Tage nach 10 Leukämiezellen verabreicht (20 Mäuse). Am folgenden Tag erhielten 10 Mäuse 0,1 ml PBS (Kontrolltiere) und 10 Mäuse 20 mg/kg der Verbindung 21. Die Verlängerung der Lebensdauer bei den Mäusen, die Endoxan und die Verbindung 21 erhielten, war erheblich größer als bei den Mäusen, die Endoxan bzw. die Verbindung 21 allein erhielten. Die in Tabelle XV genannten Ergebnisse lassen erkennen, daß die Schutzwirkung durch die Verbindung 21, die den Mäusen 1 Tag nach Endoxan oder Endoxan-BCNU gegeben wird, größer ist als bei Endoxan, Endoxan + BCNU oder der allein verabreichten Verbindung 21.

Wenn man als Kontrolltiere die mit Endoxan behandelten Mäuse nimmt, beträgt die mittlere Überlebensdauer bei den mit der Kombination von Endoxan + Verbindung 21 behandelten Mäusen 57% und bei den mit der Kombination Endoxan + BCNU + Verbindung 21 behandelten Mäusen 63%.

Tabelle XV	MÜD	ILS %
Zeitbe reich des Todesein-	11,2	-
10-13	13,1	16,9
11-17	18,5	65,2
21 14-32	20,6	84
18-24	13,7	22,3
10-17	21,4	91
18-24

Kontrolltiere
Endoxan

BD 40 ι Verbindun
Endoxan + BD 40
Endoxan + BCNU
Endoxan +BCNU+BD 40

Die Verbindung BD 40 wird intraperitoneal am Tag +4 verabreicht (20 mg/kg).

Endoxan wird intraperitoneal am Tag +3 (100 mg/kg) und die Verbindung BCNU unmittelbar nach dem Endoxan (2 mg/kg) verabreicht.

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Der Tag O ist der Tag, an dem 10 Zellen intraperitoneal übertragen werden.

Versuch 21

Toxizität der Verbindungen 21, 22, 23 und 24

Alle Verbindungen wurden in wässrigen Lösungen verab-_ reicht, die mit Essigsäure auf pH 5 eingestellt waren, und den Mäusen in einem Volumen von 0,1 ml nach Verdünnung in MacCoy-Medium intraperitoneal verabreicht. Die Toxitität der Verbindungen nach intraperitonealer Injektion wurde aus der Mortalitätsrate bis zum 30.Tag ermittelt. Die Mindestmenge, die zum Tod von 100% der Tiere führte, betrug 50 mg/kg für die Verbindung 24, 50 mg/kg für die Verbindungen 21 und 22 und 25 mg/kg für die Verbindung 23. Im allgemeinen starben die Tiere frühzeitig nach der Verabreichung des Arzneimittels (4 bis 6 Tage bei der Verbindung 24, 4 bis 8 Tage bei der Verbindung 21, 3 bis 5 Tage bei der Verbindung 22 und 4 bis 6 Tage bei der Verbindung 23.

Claims (11)

1. Patentansprüche 1. Dipyrido/T,3-b7/J,4-f7indole der Formel

   in der R¹.. Wasserstoff, eine Hydroxylgruppe, ein vorzugsweise niederer Alkylrest, ein Alkylthiorest oder Alkoxyrest, ein Halogenatom oder eine Aminogruppe und R¹-Wasserstoff oder ein niederer Alkylrest, vorzugsweise ein Methylrest ist, und ihre pharmazeutisch unbedenklichen Salze.
2. 2. Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R¹.. eine Hydroxylgruppe, ein Chloratom, eine Gruppe der Formel

   NH-CH-(CH₀) -N^
   ι ί η ν.

   ^R16 «'s

   ist, in der η eine Zahl zwischen 1 und 3, R'_g Wasserstoff oder ein niederer Alkylrest, z.B. CH₃ ist, und R¹. und R'c gleich oder verschieden sind und jeweils für ein Wasserstoffatom oder einen niederen Alkylrest stehen und vorzugsweise gleich sind und für Wasserstoff, Methylreste oder fithylreste stehen.
3. 3. Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß R¹ - ein Methylrest und R¹.. Wasserstoff ist.
4. 4. Verbindungen nach Anspruch 1 bis 3, nämlich 5,11-Dimethyldipyrido/4,3-57/3,4-f7indol,

   2,5,9,11-Tetramethyldipyrido/3,4-bJ/3,4-f/indolinium-

   diacetat,,, _Ί

   Dxmethyl-

   5,11-Dipyridp/4,3,hj D>,4-f7indolacetat,

   803843/0728

   ORIGINAL INSPECTED

   5,11-Dimethyldipyrido/T,3-bJ/l,4-f7indoldihydrochlorid, 1,2-Dihydro-1-oxo-5-methyldipyrido/4", 3-b7/3~, 4-f/indol, i-Chlor-S-methyldipyrido/T,3-b7/T,4-7indol, 1-Amino- (^-diäthylaminopropyl) -5-methyldipyrido-

   /4,3-E7/I,4-f7indol,

   ~ di

   1-Amino- (^-dimethylaminopronyl) -5-methy]lr)yrido-

   /1,3-b//3,4-f7indol,

   1-Amino- (ß-Dimethylaminorithyl) -5-methyldiDyrido-/4,3-b7/3,4-f7indol_f

   1-/T<^x-Methyl-i-di?5thylaminobutyl)-amino7-5-methyldin^rido/^!, 3-V/3, 4-f7indol,

   "!-/"(/-Aminopropyl) aminqZ-S-methyldinyrido/I, 3-hJ/l, 4-fJ-indol und

   1,2-Dihydro-i-oxo-S,11-dimethyldipyrido/4,3-b//3,4-f7-indol.
5. 5. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen nach Anspruch 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß man

   a) ein 6-Aminoisochinolin mit 3-Nitro-4-chlorpyridin zum entsprechenden 6-Z-4'(3'-Nitropyridyl)amino7-isochinolin umsetzt,

   b) das hierbei erhaltene Isochinolin zur entsprechenden Aminoverbindung hydriert,

   c) die Aminoverbindung mit Natriumnitrit zum entsprechenden Triazolpyridin umsetzt,

   d) das hierbei erhaltene Triazolpyridin in das entsprechende Dipyrido/4,3-b//3,4-f/indol umwandelt und

   e) gegebenenfalls das hierbei erhaltene Dipyridoindol in das pharmazeutisch unbedenkliche Salz umwandelt.
6. 6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß man die Hydrierung in der Stufe (b) in Gegenwart eines Hydrierkatalysators, z.B. Palladiumkohle, durchführt.

   £09843/0728

   281572*
7. 7. Verfahren nach Anspruch 5 oder 6, dadurch gekennzeichnet, daß man die Stufe (d) in Gegenwart eines inerten Stoffs, z.B. Paraffin oder Phenanthren, durchführt, der einen so hohen Siedepunkt hat, daß die Reaktion auf thermischem Wege vonstatten geht.
8. 8. Verfahren nach Anspruch 5 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß das Ausgangsprodukt der Formel (IV), in der R^ die in Anspruch 1 genannte Bedeutung hat und R¹^ eine Hydroxylgruppe ist, d.h. die Verbindung der Formel (15) oder (15a) (tautomere Form)

   H₂N

   (15a)

   nach einem Verfahren erhalten worden ist, bei dem man die Arninogruppe von 2-^fiethyl-3-aminobenzonitril in die Acetylaminogruppe umwandelt und hierdurch eine Verbindung der Formel (10) bildet, anschließend die Cyangruppe von 2-Methyl-3-acetylaminobenzonitril in die Aldehydgruppe umwandelt und die letztere dann mit Malonsäure unter Bildung der Säure der Formel (12) kondensiert, anschließend das entsprechende Azid (13) bildet, durch Cyclisierung das entsprechende Isochinolon bildet und schließlich die Schutzgruppe der Aminogruppe entfernt und hierdurch das 5-Methyl-6-Aminoisochinolon der Formel (15) bildet.
9. 9. Verfahren nach Anspruch 5 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß die Ausgangsverbindung der Formel (IV), in der R¹^ eine Hydroxylgruppe ist und R^ die in Anspruch 1 genannte Bedeutung hat, d.h. Verbindungen der Formel

   009843/0720

   (15) oder (15a) (tautomere Form) nach einem Verfahren hergestellt worden ist, bei dem man 2-Methyl-3-nitroanilin der Formel (30) in (2-Methyl-3-nitrophenyl)chlorpropionsäure der Formel (31) umwandelt, die letztgenannte Verbindung durch Eliminierung von HCl in 2-Methyl-3-nitrozimtsäure der Formel (32) umwandelt, anschließend die Nitrogruppe dieser Verbindung fiber die Stufe der Aminogruppe (Formel 3 3) in die Acetylaininogruppe umwandelt und hierdurch die Verbindung der Formel (12) bildet und die Verbindung der Formel (12) anschließend in die Verbindung der Formel (15) oder (15a) nach Anspruch 8 umwandelt.
10. 10. Verfahren nach Anspruch 5 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß das Ausgangsprodukt der Formel (IV), in der R^ eine OH-Grunne und R'₂ CH., ist, d.h.

    die Verbindungen der Formel (15) oder (15a), worin R¹^

    QH ist, nach einem Verfahren hergestellt worden ist, bei dem man die Chlormethylgruppe der Verbindung der Formel (A) in eine Aldehydgruppe umwandelt (Verbindung der Formel (B)), die Aldehydgruppe anschließend mit Malonsäure kondensiert und hierdurch die Zimtsäure der Formel (C) bildet, die Nitrogruppe der Verbindung der Formel (C) zu einer Aminogruppe reduziert (Verbindung der Formel (D)), die man dann in die Acetylamjnogruppe umwandelt und hierdurch die Verbindung der Formel (12) bildet, die man anschließend in die Verbindung der Formel (15) oder (15a) nach Anspruch 8 umwandelt.
11. 11. Arzneimittelzubereitungen, enthaltend eine therapeutisch v/irksame Menge einer Verbindung nach Anspruch 1 bis 4 und einen pharmazeutisch" unbedenklichen Träger.

    50S8A3/0726

    12· 2-Methyl-3-acetylaminobenzaldehyd, 2-Methyl-3-acetylaminozimtsäure,
    Z-Methyl-S-acetylaminocinnamoylazid, 1-Hydroxy-S-methyl-e-acetylaminoisochinolin, i-Hydroxy-S-methyl-e-aminoisochinolin und seine tautomeren Form, 2 ,S-DimethylO-nitrobenzaldehyd, 2,5-Dimethyl-3-nitro-trans-zimtsäure, 2,S-Dimethyl-B-acetylamino-trans-zimtsäure, 2, S-Dimethyl^-amino-trans-zixntsäure, 2,S-Dimethyl-S-acetylamino-trans-hinnamoylazid, 1,2-Dihydro-1-oxo-5,8-dimethyl-6-acetylaminoisochinolin, 1,2-Dihydro-i-oxo-5,e-dimethyl-e-aminoisochinolin, 5, 8-Dimethyl-6~ /Ϊ¹ - (3' -nitropyridyl) amino7isochinolin, 1,2-Dihydro-1-oxo-5,8-diraethyl-6-/^4' - (3' -aminopyridy 1) amino7~isochinolin,

    1-/~6'-(l'^'-Dihydro-i'-oxo-S¹,8¹-dimethylisochinclyl]/· triazol(4_r5-c)-pyridin und ihre tautomeren Formen, so weit sie existieren, (2-Methyl-3-nitrophenyl)chlorpropionsäure und 2-Methyl-3-Nitrozimtsäure.

    S098/>3/0728