DE2654189A1 - Verfahren zur in-vitro-bestimmung der biologischen aktivitaet von faktor xa-inhibitor im blut - Google Patents

Verfahren zur in-vitro-bestimmung der biologischen aktivitaet von faktor xa-inhibitor im blut

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Description

PATENTANWÄLTE
DR. WALTER KRAUS DIPLOMCHEMIKER ■ DR.-ING. ANNEKÄTE WElSERT DIPU-INS. FACHRICHTUNG CHEMIE IRMeARDSTRASSEI5 · D-8OOO MÜNCHEN 71 -TELEFON 089/797077-797078 · TELEX O5-212156 kpat d
TELEGRAMM KRAUSPATENT
1415 AW/MY
PHARMACIA AB, Uppsala / Schweden
Verfahren zur in-vitro-Bestimmung der biologischen Aktivität von Faktor Xa-Inhibitor im Blut
Die Erfindung betrifft ein in-vitro-Verfahren zur Bestimmung des Plasmainhibitors für aktivierten Faktor X (XaI), der ein α-2-Globulin mit einem Molekulargewicht von 58 000 bis 65 000 ist und der unterschiedlich als Antithrombin III, Heparin-Cofaktor und α-2-Antitrvpsin bezeichnet wurde.
Für die zeitige Erkennung des Anfangsstadiums eines offenkundigen thrombotischen Zustands bei Menschen oder Tieren gibt es zur Zeit kein zufriedenstellendes biochemisches Verfahren. Thromboembolische Erkrankungen sind eine zunehmend wichtige Ursache für Arbeitsunfähigkeit und Tod, da die Fortschritte in den chirurgischen Verfahren kompliziertere Operationen ermöglichen und, bedingt durch die vielfache Verwendung von Östrogen enthaltenden Verbindungen, als orale, konzeptionsverhütende Mittel.
In den vergangenen Jahren wurden in der Literatur viele Ergebnisse von Versuchen beschrieben sowohl in vitro als auch in vivo, aus denen hervorgeht, daß die Wirksamkeit
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von XaI als natürlich vorkommendes Antikoagulans während der Blutkoagulation stärker von der Inaktivierung des zuerst gebildeten Faktor Xa, wodurch die Thrombinbildung verhindert wird, abhängt als davon, daß man verhindert, daß Thrombin Fibrinogen angreift. Diese Ansicht wird besonders durch den Bericht untermauert, daß Spurenmengen an Heparin die Inhibierung des Faktors Xa durch XaI merklich verstärken.
Aus bestimmten Erscheinungen kann man fast sicher folgern, daß bei einigen Patienten vor und nach der Operation ein sog. zuvor nicht vorhandener "Hyper-Cogerinnungsfähigkeits- bzw. Hyper-Kpsfgulierbarkeitszustand" erzeugt wird. Dieser hyper-koagulierbare Zustand wird nicht thrombonisch bleiben, solange die Rate der Faktor Xa-Entf ernung durch XaI die der Faktor Xa-Bildung überschreitet. Man hat weiterhin angenommen, daß Frauen, die ora3ß Antiovulationsmittel einnehmen, bei Verletzungen anfälliger gegenüber Thrombose sind, da die Konzentration an XaI in ihrem Blut erniedrigt ist.
Dieses Wissen hat die Möglichkeit eröffnet, daß niedrige Gehalte an XaI eine Hyperkoagulierbarkeit andeuten bzw. bedeuten. Man kann daher vermuten, daß die Plasma Xal-Aktivität ein praktisches Zeichen für einen hyper-koagulierbaren Zustand sein könnte. Diese Hypothese wird durch die folgenden Beobachtungen weiter untermauert:
(a) Patienten, die ererbt Mangel an Antithrombin III (XaI) besitzen, sind thrombophil bzw. besitzen eine Neigung zur Thrombusbildung;
(b) Frauen, die oral konzeptionsverhütende Mittel einnehmen und die eine niedrige Xal-Aktivität in ihrem Plasma besitzen, zeigen als Gruppe ein höheres Vorkommen von postoperativer tiefer Venenthrombose als solche Frauen, die keine "Pille" nehmen.
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Es besteht daher ein großer Bedarf nach spezifischen Verfahren zur Bestimmung der biologischen Aktivität von XaI im Blutplasma.
Einige Verfahren sind verfügbar, mit denen eine Bestimmung der Xal-Aktivität versucht wird- Die am häufigsten verwendeten Verfahren basieren auf der immunologischen Bestimmung und der Inhibierung von Thrombin. Diese Verfahren besitzen jedoch verschiedene Nachteile. Das immunologische Verfahren zeigt, obgleich es das Antigen cCp-Globulin feststellt, nicht die biologische Aktivität des Inhibitors an. Man hat berichtet, daß das Blut bestimmter Patienten, die erblich an der biologischen Aktivität dieses Inhibitors Mangel haben, keinen Mangel zeigt, wenn die Messungen nach dem Immuno-Verfahren erfolgten [Sas et al, Thromb. Diath. Haemorrh. (1974), Seite 105].
Für diesen Inhibitor ist das Thrombin-Verfahren nicht spezifisch, da bei diesem Verfahren gleichzeitig die Aktivität anderer Serumproteinase-Inhibitoren bestimmt wird [Whigham et al, Thromb. Diath. Haemorrh. 34 (1975), Seite 365]. Es ist weiterhin gegenüber sehr geringen Mengen an Heparin und heparinähnlichen Substanzen und Fibrinogen-Abbauprodukten, die im Blutplasma vorhanden sind, empfindlich.
Überraschenderweise wurde gefunden, daß die biologische Aktivität von XaI im Blut in vitro ohne diese Nachteile unter Verwendung des erfindungsgemäßen Verfahrens bestimmt werden kann. Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren wird eine Blutplasmaprobe mit einem Polysaccharid-polysulfat und mit aktiviertem Faktor X (Xa) während einer vorbestimmten Zeit inkubiert, und anschließend wird die verbleibende Menge an Xa-Aktivität in an sich bekannter Weise bestimmt.
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Die verbleibende Menge bzw. Restmenge bzw. Residualmenge (diese Ausdrücke werden in der vorliegenden Anmeldung synonym verwendet) an Faktor Xa kann unter Verwendung der Fibrinbildung als Endpunkt (Bestimmung der Koagulierungszeit) in an sich bekannter ¥eise erfolgen. Sie kann ebenfalls durch Messung der Esterase-Aktivität oder amidoIytischen Aktivität unter Verwendung geeigneter Substrate bestimmt werden.
Das Polysaccharid-polysulfat kann 0,10 bis 3,0, z.B. 0,45 bis 3,0, Sulfatgruppen/Monosaccharid-Einheit enthalten.
Bei Verwendung von Dextransulfat als Polysaccharidpolysulfat beträgt der Substitutionsgrad der Sulfatgruppen 0,10 bis 3,0, bevorzugt 0,90 bis 3,0, pro Monosaccharid-Einheit. Bei Verwendung von Dermatansulfat oder Heparansulfat beträgt der Substitutionsgrad der Sulfatgruppen 0,45 bis etwa ZjO/Monosaccharid-Einheit.
Das durchschnittliche Molekulargewicht des Polysaccharid-polysulfats ist nicht kritisch. Man kann so wasserlösliche Polysaccharid-polysulfate mit einem Molekulargewicht von etwa 1000 bis zu mindestens 10 000 000 verwenden. Man kann ebenfalls wasserlösliche und wasserunlösliche vernetzte Polysaccharid-polysulfate verwenden.
Gegebenenfalls kann das Polysaccharid-polysialfat an einen wasserunlöslichen Träger wie ein vernetztes Dextran gekuppelt bzw. gebunden sein. Man kann das Polysaccharidpolysulfat ebenfalls an das entsprechende unsubstituierte Polysaccharid kuppeln bzw. binden. In einem solchen Fall wird der Substitutionsgrad der Sulfatgruppen auf Grundlage des substituierten Teils eines solchen Produktes berechnet.
Bei der Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens ist es bevorzugt, die Probe mit Salzlösung oder mit einem
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- r-
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Puffer zu verdünnen. Eine Verdünnung von mehr als etwa 1/10, bevorzugt mehr als 1/30, wird dann verwendet. Die Störung durch Mittel, die ein Koagulations system nachteilig beeinflussen, wird vermieden.
Die angewendete Inkubationszeit hängt von den Konzentrationen der Reaktionsteilnehmer in der Inkubationslösung und ebenfalls von der Inkubationstemperätur ab. Die optimale Zeit kann für jeden Fall leicht bestimmt werden. Die* Inkubationstemperatur kann im Bereich von etwa 20 bis etwa 37°C liegen.
Bei dem Verfahren ist es bevorzugt, bei einem pH-Wert von etwa 7,0 bis 8,0 zu arbeiten. Die Mengen an Polysaccharidpolysulfat und aktiviertem Faktor X (Xa) sind nicht kritisch. Zweckmaßigerweise werden 1 bis 2000/Ug/ml Polysaccarid-polysulfat und 1 bis 10 Einheiten Xa/ml verwendet. Die optimalen Konzentrationen können leicht für jeden Fall bestimmt werden.
Bei den Untersuchungen für die vorliegende Erfindung wurde gezeigt, daß Polysaccharid-polysulfate bei der Blutkoagulation drei Haupteigenschaften besitzen können:
(a) die Fähigkeit, die Inhibitorwirkung einer menschlichen Plasmakomponente bei dem Neutralisationsmechanismus von Xa durch den Xa-Inhibitor zu überwinden,
(b) eine schwache heparinähnliche Aktivität,
(c) eine synergistische Wirkung auf die antikoagulierende Aktivität von Spurenmengen an Heparin.
Bei der erfindungsgemäßen Bestimmung des Xa-Inhibitors kann es zweickmäßig sein, die heparinartige-Aktivität des P0I3 saccharid-polysulfats durch Zugabe eines Heparin-Neutralisationsmittels wie Hexadimethrinbromid (Polybrene^ ' der Abbott Laboratories, USA) oder Protaminsalze zu dem Substratplasma zu neutralisieren. Sonst werden die Koagulationsζeiten unverhältnismäßig lang sein.
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Unter Anwendung des synergistischen Effekts der Polysaccharid-polysulfate auf die Antikoagulationsaktivität von Spurenmengen an Heparin kann das erfindungsgemäße Verfahren als ultraempfindlicher Heparintest verwendet werden. Eine geringe Menge an Polysaccharid-polysulfat, die zu dem Testplasma gegeben wird, welche Menge selbst keine meßbare heparinartige Antikoagulationsaktivität besitzt, verstärkt die Heparin-Antikoagulationsaktivität um das Mehrfache.
,? Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung.
Beispiel 1
Für die Bestimmung der XaI biologischen Aktivität im Blutplasma werden die folgenden Reagentien hergestellt.
(a) Aktivierter Faktor X (Faktor Xa) aus Rinderplasma
Dieses Reagens kann nach irgendeinem in der Literatur beschriebenen Verfahren hergestellt werden. Im allgemeinen wird eine an Faktor X reiche Fraktion aus Rinderplasma, das als BaS(K-Eluat bekannt ist, das dann entweder mit Rüsselfs Viperngift oder Trypsin in Anwesenheit von Calciumchlorid behandelt wird, hergestellt. Der Faktor X wird dann zum Faktor Xa aktiviert. Das aktivierte Gemisch wird dann an einer Ionenaustauschsäule (z.B. DEAE-Cellulose) entsprechend Yin et al in J.Biol.Chem. 243 (1968), Seite 112, zur Isolierung des von anderen Substanzen, insbesondere dem Schlangengift freien Faktor Xa chromatographiert. Der isolierte Faktor Xa wird dann in kristallisiertem Rinderserumalbumin gemäß Yin et al in J.Lab.Clin.Med. 81 (1973), Seite 298 (Ref.1), stabilisiert.
(B) Antikoagulans-freies Rinderplasma (AFBP), hergestellt gemäß Yin et al (Ref.1) wird mit Cephalin (Säugetierhirn oder Sojabohnen-phosphatiden) vermischt. Dieses Gemisch wird anschließend als AFBP-Cephalin bezeichnet.
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(c) Puffer-Mono-tris-(hydroxymethyl)-aminomethanmaleat. Eine Konzentration von 0,02 M, pH 7,5, wird bei diesem Versuch verwendet.
0,5 ml Citrat enthaltendes menschliches Plasma werden mit Salzlösung (z.B. 0,9% NaGl) auf 1:50 verdünnt. Es wird dann in ein Reagenzglas, das 0,4 ml Natriumsalz einer Lösung aus Dextransulfat (Molekulargewicht = 20 000, Substitutionsgrad =1,15 Sulfatgruppen/Monosaccharid-Einheit) in dem Puffer enthält, gegeben. Die Konzentration an Dextransulfat beträgt 50/ug/ml in diesem Inkubationsgemisch. Dieses Gemisch wird dann in einem 37°C Wasserbad 1 min vorerwärmt, dann wird 0,1 ml Faktor Xa zugegeben und dann wird eine erste Stoppuhr angestellt.
90 see nach der Zugabe von Xa wird 0,1 ml des Inkubationsgemisches in ein zweites, sauberes, in einem 37°C Wasserbad vorerwärmtes Reagenzglas gegeben. Nach 110 see auf der ersten Stoppuhr wird 0,1 ml 0,03 M CaCIp in das zweite Reagenzglas gegeben. Nach genau 120 see auf der ersten Stoppuhr werden 0,2 ml des AFBP-Cephalin-Gemisches kraftvoll in das zweite Reagensglas geblasen und eine zweite Stoppuhr wird gleichzeitig angestellt. Die Zeit (in Sekunden), die für die Bildung eines festen Koagulats erforderlich ist, wird dann gemessen. Eine Xal-Aktivität-Eichkurve wird dann aufgestellt, indem man Reihendoppelverdünnungen der Plasmaprobe unter Verwendung der 1:50 Anfangsverdünnung als 100% Aktivität (Tabelle I) herstellt.
Analog wird eine andere Xal-Aktivität-Eichkurve aufgestellt, indem man unterschiedliche Anfangsplasmaverdünnungen und Konzentrationen an Dextransulfat verwendet (Tabelle I).
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% Xal- 25 2654189
"f Aktivität 12,5
100 6,25
unter Verwendung von 50 /ug Dextran- 50 0 Koagulations-
• Tabelle I sulfat/ml Inkubationsgemisch 100 zeit (see)
Plasmaverdünnung bei einer 50 79,5
1009ii*en Xal-Aktivität 25 53,0
1
50		 12,5 38,5
1 0 31,0
unter Verwendung von 33/Ug Dex- 27,0
transulfat/ml Inkubationsgemisch 24,5
58
39
32
27,5
24
Aus dieser Tabelle geht eindeutig hervor, daß eine Enzym-Inhibitor (Xa - XaI)-Zwischenwirkung mit hoher Sensitivitat gemessen werden kann.
Beispiel 2
Das Verfahren von Beispiel 1 wird unter Verwendung einer Lösung des Natriumsalzes von Dermatansulfat
I^ =30 000 bis 50 000, Substitutionsgrad = 1,0 SuIf atgruppe/Disaccharid-Einheit) anstelle des Dextransulfats wiederholt. Man erhält die folgenden Ergebnisse.
Tabelle II % Xal- 12,5 Koagulations
Plasmaverdünnung bei einer Aktivität 0 zeit (see)
100$6i£en Xal-Aktivität 100 57,5
1
Τδσ		 50 ' 40,0
unter Verwendung von 15/ug Dermatansulfat/ml Inkubations- 25 27,5
gemisch 23,0
17,4
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Aus dieser Tabelle geht eindeutig hervor, daß eine Enzym-Inhibitor(Xa - XaI)-Zwischenwirkung mit hoher Empfindlichkeit gemessen werden kann.
Beispiel 5
Zur Erläuterung der möglichen Bestimmung von niedrigen Heparin-Konzentrationen nach dem erfindungsgemäßen Verfahren wird das Verfahren von Beispiel 1 mit den folgenden Ausnahmen wiederholt: .,
(a) Unverdünntes Plasma wird in dem Inkubationsgemisch verwendet;
(b) Das Plasma enthält Heparin in einer bekannten Konzentration von 0,006 Einheiten/ml.
Die Zugabe des Natriumsalzes von Dextransulfat M^ = 20 000, Substitutionsgrad =1,15 SuIfatgruppen/Mfonosaccharid-Einheit) bis zu einer Endkonzentration von 10/ug/ml in dem Inkubationsgemisch ermöglicht die Feststellung einer heparinartigen Aktivität entsprechend 0,05 Einheiten/ml. Dies beweist, daß die Empfindlichkeit bei dem Heparintest entsprechend diesen Grundsätzen ungefähr um den Faktor 10 erhöht werden kann. 10/Ug Dextransulfat zeigen selbst keine meßbare heparinartige Antikoagulationsaktivität bei diesem Untersuchungssystem.
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Claims (7)

2654Ϊ89 Patentansprüche
1. Verfahren für die in-vitro-Bestimmung der biologischen Aktivität von Faktor Xa-Inhibitor (XaI) im Blut, dadurch gekennzeichnet, daß die Blutplasmaprobe mit einem Polysaccharid-polysulfat und mit Faktor Xa während einer vorbestimmten Zeitperiode inkubiert wird und danach die Restmenge an Faktor Xa-Aktivität in an sich bekannter Weise bestimmt wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Restmenge an Faktor Xa-Aktivität unter Anwendung der Fibrinbildung als Endpunkt bestimmt wird.
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Restmenge an Faktor Xa-Aktivität durch Messung seiner Esterase-Aktivität oder der amidolytischen Aktivität bestimmt wird.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3> dadurch gekennzeichnet, daß das Polysaccharid-pulysulfat 0,10 bis 3,0 Sulfatgruppen/Monosaccharid-Einheit enthält.
5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß das Polysaccharid-polysulfat ein Dextransulfat mit 0,10 bis 3»0 Sulfatgruppen/Monosaccharid-Einheit ist.
6. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß das Polysaccharid-polysulfat ein Dermatansulfat oder ein Heparansulfat mit 0,45 bis 2,0 Sulfatgruppen/Monosaccharid-Einheit ist.
7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß das Polysaccharid-polysulfat an einen wasserunlöslichen Träger gebunden bzw. gekuppelt ist.
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DE2654189A 1975-12-01 1976-11-30 Verfahren zur in-vitro-Bestimmung der biologischen Aktivität von Faktor Xa-Inhibitor im Blut Expired DE2654189C3 (de)

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NL (1) NL7613376A (de)
NO (1) NO148960C (de)
SE (1) SE419871B (de)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0003474A1 (de) 1977-12-24 1979-08-22 Roche Diagnostics GmbH Verfahren zur Prothrombin-Bestimmung, dazu verwendetes Reagenz und Verfahren zur Herstellung eines Faktor-Xa-Präparats

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4302538A (en) * 1978-03-27 1981-11-24 Ortho Diagnostics Inc. Buffer system in an anti-thrombin III test
SE422081B (sv) * 1979-08-22 1982-02-15 Ird Biomaterial Ab Sett att pavisa proteolytiska enzymer
CA1161432A (en) * 1980-02-12 1984-01-31 Lars G. Svendsen Tripeptide derivatives and their application in assaying enzymes
US4496653A (en) * 1980-10-09 1985-01-29 Boehringer Mannheim Gmbh Process for the determination of antithrombin-BM
US4753875A (en) * 1981-11-02 1988-06-28 Ryan James W Method for assaying proteases with tagged proteinaceous inhibitors
US5221614A (en) * 1988-03-03 1993-06-22 Nippon Shoji Kabushiki Kaisha Method and reagent for determining the biological activity of antithrombin III by measuring coagulation time
GB9602166D0 (en) * 1996-02-02 1996-04-03 Zeneca Ltd Aminoheterocyclic derivatives
DE19634312A1 (de) * 1996-08-24 1998-02-26 Behringwerke Ag Verfahren zur Herstellung von Faktor V-Mangelplasma und ein so erhaltenes Mangelplasma
US6432658B1 (en) 2000-09-13 2002-08-13 Affinity Biologicals, Inc. Method for measuring antithrombin activity
EP2818871A1 (de) * 2013-06-28 2014-12-31 Roche Diagniostics GmbH Mittel und Verfahren zur universellen Kalibrierung von anti-Faktor-Xa-Tests

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE380257B (sv) * 1972-05-02 1975-11-03 Bofors Ab Nya diagnostiskt verksamma substrat med hog specificitet till trombin och andra proteolytiska enzymer av typen peptidyl-peptid-hydrolaser
US3985618A (en) * 1975-05-02 1976-10-12 Irving Innerfield Method for detection of thrombosis and prethrombosis

Non-Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Adv. Carbohydr. Chem. 10, 1955, 335-367 *
Arch. Biochem. Biophys. 101, 1963, 436-438 *
Arzneim.-Forsch. 20, 1970, 379-381 *
Biochem. J. 51, 1952, 129-133 *
Proteases and Biological Control, Cold Spring Harbor Laboratory, 1975, S. 367-386 *
Reallexikon der Medizin, 3. Bd., S. H134, rechte Sp., Stichwort Heparansulfat bzw. ?-Heparin
Reallexikon der Medizin, 3. Bd., S. H134, rechte Sp., Stichwort Heparansulfat bzw. beta-Heparin *
Thrombos. Diathes. haemorrh. 30, 1973, 471-479 *
Thrombos. Diathes. haemorrh. 33, 1974, 43-50 *
Thrombos. Diathes. haemorrh. 34, 1975, 347 *
Thrombosis Research 7, 1975, 5-16 *
Thrombosis Research, 6, 1975, S. 287-294 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0003474A1 (de) 1977-12-24 1979-08-22 Roche Diagnostics GmbH Verfahren zur Prothrombin-Bestimmung, dazu verwendetes Reagenz und Verfahren zur Herstellung eines Faktor-Xa-Präparats

Also Published As

Publication number Publication date
FI763446A (de) 1977-06-02
ATA891076A (de) 1978-07-15
AU508343B2 (en) 1980-03-20
SE7513495L (sv) 1977-06-02
US4139415A (en) 1979-02-13
FI63494C (fi) 1983-06-10
AU2006176A (en) 1978-06-08
NO148960B (no) 1983-10-10
FR2334109B1 (de) 1982-03-12
DE2654189B2 (de) 1979-03-08
NO148960C (no) 1984-01-18
CH625052A5 (de) 1981-08-31
AT348687B (de) 1979-02-26
BE848932A (fr) 1977-05-31
NL7613376A (nl) 1977-06-03
NO764081L (de) 1977-06-02
DK537676A (da) 1977-06-02
FI63494B (fi) 1983-02-28
SE419871B (sv) 1981-08-31
JPS5915640B2 (ja) 1984-04-10
CA1060324A (en) 1979-08-14
GB1562808A (en) 1980-03-19
DE2654189C3 (de) 1985-10-03
JPS5297792A (en) 1977-08-16
FR2334109A1 (fr) 1977-07-01

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