DE2600880C2

DE2600880C2 - Cephalosporinverbindungen

Info

Publication number: DE2600880C2
Application number: DE19762600880
Authority: DE
Inventors: Yutaka Toyama Kodama; Miwako Komatsu; Seitetsu Kuroda; Kaishu Shinminato Momonoi; Isamu Saikawa; Shuntaro Toyama Takano; Okuta Toyama Takashima; Takashi Yasuda; Chosaku Takaoka Yoshida
Original assignee: Toyama Chemical Co Ltd
Current assignee: Toyama Chemical Co Ltd
Priority date: 1976-01-12
Filing date: 1976-01-12
Publication date: 1984-09-13
Also published as: DE2600880A1

Description

Die Erfindung ist ein Zusatz zu dem deutschen Patent DE 25 59 932. Gegenstand dieses Patentes ist eine neue Klasse von 3-Stellung substituierten 7-Acylaminocephalosporansäuren, welche in α-Position zur Acylgruppe eine Aminogruppe aufweisen, wobei diese Aminogruppe einen, gegebenenfalls substituierten, 2,3-Dioxo-piperazinocarbonylrest trägt. Derartige Verbindungen zeigen ein breites antibaktenelles Spektrum gegen Gramnositive und Gram-negative Bakterien. Sie zeigen insbesondere eine antibakterielle Aktivität gegen Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae und Proleus-Arten. Darüber hinaus weisen diese Verbindungen eine hohe Beständigkeit gegen durch Bakterien gebildete /7-Lactamase auf und zeigen eine hohe antibakteriell Wirksamkeit selbst gegen klinisch isolierte Bakterien, welche vom klinischen Standpunkt zur Z.eit scnwer bekämpfbar sind. Die Verbindungen eignen sich somit hervorragend in der Humanmedizin und in der Veterinärmedizin zur Bekämpfung von Infektionskrankheiten, die durch die genannten pathogenen Mikroorganismen ^hTs^OwS^fenün^Wge^rfunden, daß aus der Klasse der Verbindungen gemäß DE 25 59 932 die Verbindung der nachstehenden Formel 1 im Hinblick aufdie oben erwähnten Eigenschaften besonders herausragen Darüber hinaus hat die Verbindung der Formel I eine äußerst geringe Toxizität und wird im lebenden Körper sehr gut absorbiert oder resorbiert. Sie wird im lebenden Körper nicht inaktiviert, zeigt keine hämolyt.sche Aktivität und führt zu einem hohen Konzentrationsmaximum im Blut. Aulgrund dieser herausragenden Eigenschaften stellt d!e Verbindung der Formel I ein äußerst wirksames und praktisch einsetzbares Mittel gegen Infektionskrankheiten dar, und zwar sowohl in der Humanmedizin als auch in der Tiermedizin. Gegenstand der Erfindung ist somit eine Cephalosporinverbindung der folgenden Formel 1

CH₃CH₂-N N- C — NH- CH- CONH

CH₃

50 OH

worin R¹ ein Wasserstoffatom oder ein nicht-toxisches Kation bedeutet. .

Als nicht-toxisches Kation kommen alle aufdcm Gebiet der Penicilline oder Cephalosporine üblichen Kationen in Frage, welche nicht toxische Salze bilden.

s, Als Salze kommen insbesondere Alkalimetallsalze in Frage wie Natr.umsalz, Kaliumsalz; Erdalkalimetall-" salze wie Calciumsalz, Magnesiumsalz; Ammoniumsalze und Salze mit stickstofThaltigen organischen Basen wie Procain Dibenzvlamin. N-BcnzyN/f-phenäthylamin, I-Ephenamin, N.N-Dibenzylathylendiam.n, Zusätzlich /u den obengenannten Kationen können Kationen verwendet werden welche s.eh^von anderen stickstoffhaltigen organischen Basen ableiten, wie Trimethylamine Triäthylamin, Tnbutylamin, Pyndin, D.methylan.lm, Mt N-Mcthylpiperidin, N-Mcthylmorpholin, niäthylamin, Dicyclohexylamin.

Die obengenannte Verbindung der Formel (!) umfaßten die optischen Isomeren, und zwar alle D-Isomeren, L -Isomeren und Racemale. Die F.rlmdun, umlaüt diese Isomeren sowie alle Kris.alllormen und Warnen. ' Hie Verbindung der Formel (1) kann nach einem der folgenden an sich bekannten Verfahren (D, (2) oder (J) hergestellt werden.

"' Verfahrend)

Eine Verbindung der allgemeinen Formel (II)

26 OO

R —NH- CH-CONH

•Ν

-CH₂R-

(H)

COOR'

OR¹

wird mit einem reaktiven Derivat der Carboxylgruppe der 4-Äthyl-2.3-dii>xo-l-piperdzino-carbonsäure der Formel (III) 10

O O

(III)

CH₃CH₂-N N —C —OH

umgesetzt.

Verfahren (2) Eine Verbindung der allgemeinen Formel (IV) R— NH-

COOR'

wird mit einer Verbindung der allgemeinen Formel (V) O O

CH₃CH₂-N N —C —NH-CH-COOH

oder mit einem reaktiven Derivat der Carboxylgruppe der Verbindung der Formel (V) umgesetzt.

Verfahren (3)

Eine Verbindung der allgemeinen Formel (VI) O O

CH₃CH₂-N N —C — NH-CH- CONH-

N J-CH₂R⁴

T ,

COOR¹

OH

wird mit einer Verbindung der allgemeinen Formel (VIII)

R⁵M

(IV)

(V)

(VI)

(VII)

umgesetzt.

In den obigen Formeln (II), (IV), (V) und (Vl) hat der Rest R¹ die oben angegebene Bedeutung, R³ bedeutet ein Wasserstoffatom oder eine übliche siliciuinhaltigc oder phosphorhaltige Schutzgruppe und R² bedeutet die 5-(l-

26 OO 880

Methyl-l,2,3,4,tetrazolyl)-thiogruppe.

In der obigen Formel (VI) bedeutet R⁴ einen Subslituentcn, welcher leicht durch ein nucleophiles Reagens ersetzt werden kann, z. B. ein Halo«cnatom wie Chlor oder Brom; eine niedere Alkanoyloxygruppe wie Formyloxy, Acetoxy, Propionyloxy, Butyryloxy, Pivaloyloxy; eine Arylcarbonyloxygruppe wie Benzoyloxy, Naphthoyloxy; eine Arylcarbonylthiogruppc wie Benzoylthio, Naphthoylthio; eine Carbamoyloxygruppe. Jede der Gruppen R⁴ kann substituiert sein, z. B. durch Halogenatome, Nitrogruppen, Alkylgruppen, Alkoxygruppen, Alkylthiogruppen, Acylgruppen.

In der obigen Formel (VIII) bedeutet R⁵ die 5-(l-Methyl-l,2,3,4-tetrazolyl)-thiogruppe, und ,Wbedeutet ein Wasserstoffatom oder ein Alkalimetall oder ein Erdalkalimetall.

j Als reaktive Derivate der Carboxylgruppe der Verbindung der Formel (III) verwendet man vorzugsweise reaktive Derivate der Carbonsäure, welche herkömmlicherweise zur Synthese von Säureamidverbindungen eingesetzt werden. Beispiele solcher reaktiver Derivate sind Säurehalogenide, Säureazide, Säurecyanide, gemischte Säureanhydride, aktive Ester, aktive Säureamide. Insbesondere bevorzugt sind Säurehalogenide wie Säurechloride, Säurebromide, und aktive Ester wie Cyanomethylester oder Trichlormethylester.

Reaktive Derivate der Carboxylgruppe der Verbindung der Formel (HI) können leicht erhalten werden, indem man z. B. 4-Äthyl-2,3-dioxo-l-piperazin [hergestellt nach dem Verfahren von J. L. Riebsomer, J. Org.Chem., 1668-73 (1950)] mit Phosgen oder dem Trichlormethylester der Chlorameisensäure umsetzt

Die Verbindung der allgemeinen Formel (V) kann leicht erhalten werden, indem man z. B. ein Alkaümetallsiilz oder ein Erdalkalimetallsalz einer a-Aniino-p-hydroxyphenylessigsäure (D-Isomeres, L-Isomeres oder ο Raceniat) oder ein Salz einer stickstoffhaltigen organischen Base und einer a-Amino-p-hydroxyphenylessigsäure (D-lsomeres, L-lsomeres oder Raccmat) mit einem reaktiven Derivat der Carboxylgruppe der Verbindung der Formel (III) in Gegenwart eines säurebindenden Mittels in einem unter den Reaktionsbedingungen inerten Lösungsmittel umsetzt.

Als reaktives Derivat der Carboxylgruppe der Verbindung der allgemeinen Formel (V) kann man jedes reak- >5 tive Derivat einer Carbonsäure verwenden, welches herkömmlicherweisc zur Synthese von Säureamiden herangezogen wird. Solche reaktiven Derivate umfassen z. B. Säurehalogenide, Säurcanhydride, gemischte Säureanhydride mit organischen oder anorganischen Säuren, aktive Säureamide, Säurecyanide oder aktive Ester. Insbesondere bevorzugt sind Säurcchloridc, gemischte Säureanhydride und aktive Säureamide. Beispiele der gemischten Säureanhydride sind gemischte Säurcanhydride mit substituierten Essigsäuren, Alkylkohlensäuren, Arylkohlensäuren und Aralkylkohlensäu.'cn. Beispiele der aktiven Ester sind Cyanomethylester, substituierte Phenylester, substituierte Benzylester und substituierte Thienylester. Beispiele der aktiven Säureamide sind N-Acylsaccharinc, N-Acylimidazole, N-Acylbenzoylamide, N.N-Dicyclohexyl-N'-acylharnstoffe und N-Acylsulfonamide.

Verbindung der Formel (VI) können z. B. nach dem Verfahren (1) oder (2) hergestellt werden. Einige der nach dem Verfahren (3) erhaltenen Verbindungen können wiederum als Ausgangsverbindung des Verfahrens (3) eingesetzt werden. Als Verbindung der Formel (Vl) kann man alle D-Isomern, L-Isomercn und Racemate einsetzen. Im folgenden sollen die Verfahren (1), (2) und (3) im einzelnen erläutert werden.

Die Verfahren (1) und (2) können unter im wesentlichen gleichen Bedingungen durchgeführt werden. Die Verbindung der Formel (II) oder (IV) wird in mindestens einem inerten Lösungsmittel aufgelöst odersuspendiert. Als inertes Lösungsmittel kann /.. B. Wasser, Aceton,Tetrahydrofuran, Dioxan, Acetonitril, Dimethylformamid, Methanol, Äthanol, Methoxyäthanol, Diäthyläther, Isopropyläther, Benzol, Toluol, Methylenchlorid, Chloroform, Älhylacetat oder Methylisobutylkcton dienen. Die erhaltene Lösung oder Suspension wird mit einem reaktiven Derivat der Verbindung der Formel (III) oder mit der Verbindung der Formel (V) oder mit einem reaktiven Derivat der Carboxylgruppe der Verbindung der Formel (V) in Gegenwart oder Abwesenheit einer Base bei einer Temperatur im Bereich von -60 bis 8O⁰C, vorzugsweise -40 bis 30⁰C, umgesetzt. Die Reaktionsdauer beträgt normalerweise 5 Minuten bis 5 Stunden. Beispiele der in obiger Reaktion verwendbaren Basen sind anorganische Basen wie Alkalihydroxide, Alkalihydrogencarbonate, Alkalicarbonate, Alkaliacetat; tertiäre Amine wie Trimethylamin, Triäthylamin, Tributylamin, Pyridin, N-Methylpiperidin, N-Methylmorpholin, Lutidin, Collidin; sekundäre Amine wie Dicyclohcxylaniin, Diäthylamin.

Wenn die Verbindung der Formel (V) in Form der freien Säure oder in Salzform bei dem Verfahren (2) eingesetzt wird, so kann die Umsetzung des Verfahrens (2) in Gegenwart eines dehydratisierenden Kondensationsmittels durchgeführt werden wie N.N'-Dicyclohexylcarixjdiirriid, N-Cyclohexyl-N'-morpholinoäthylcarbodiimid, Ν,Ν'-Diäthylcarbodiimid, N,N'-Carljonyl-di(2-mclhylimidazol), einem Trialkylester der phosphorigen Säure, einem Äthylester der Polyphosphorsäurc, l'hosphoroxychlorid, Phosphortrichlorid, 2-Chlor-l,3,2-dioxaphospholan oder Oxazolylchlorid. Die Salze der Verbindung der Formel (V) umfassen Alkalimetallsalze, Erdalkalimetallsalze, Ammoniumsalze und Salze mit organischen Basen wie Triäthylamin, Dicyclohexylamin.

Das Verfahren (3) kann in folgender Weise durchgeführt werden. Die Verbindung der Formel (VI) wird mit der Verbindung der Formel (VIl) in mindestens einem Lösungsmittel, z.B. Wasser, Methanol, Äthanol, Propanol, Isopropanol, Butanol, Aceton. Methylethylketon, Methylisobutylkcton, Tetrahydrofuran, Dioxan, Acetonitril, mi Äthylacetat, Methoxyüthanol, Dimcthoxyäthan, Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid, Dichlormethan, Chloroform oder einem Dichloräthan umgesetzt. Die obige Reaktion wird vorzugsweise in einem stark polaren Lösungsmittel wie Wasser durchgeführt. In diesem IV.'e wird der PIl der Reaktionslösung vorteilhafterweise auf 2 his 10 und insbesondere auf 4 bis S gehalten. IXtgewünschte pll-Werl kann (lurch Zugabe einer Pufferlösung wie N;ilnu!Hpho>ph,it eingestellt «erden. Die Ruiktioiisneilingungen unterliegen keinen besonderen (^ Beschränkungen. Normalerweise wird die llnisel/u'ig hei einer Temperatur im Beieich von 0 bis 100⁰C während einer Zeitdauer von einigen Stunden bis einigen /elin Stunden durehgelührt.

Die Reaktionsbedingungen der Verfahren (1), (2) und (3) sind nicht auf die oben angegebenen Reaktionsbedingungen beschränkt. Sie können ic nach Art der reagierenden Ausgangsstoffe variiert werden.

26 OO

Die nichttoxisehen Salze der allgemeinen lorniel (I), in der K' ein nicht-toxisches Kation bedeutet, können leicht in herkömmlicher Weise aus Verbindungen der allgemeinen lormcl (I), in der R¹ ein WasserstolTaiom bedeutet, hergestellt werden.

Es wurden verschiedenste Versuche hinsichtlich der Wirksamkeit der erfindungsgemälicn Verbindungen durchgeführt.

I) Minimale I lenimkon/enlralion (MIO

Die minimalen Ilemmkon/cntrationen (MIC) der Verbindungen gegenüber verschiedenen Standardbakterienstämmen sind in Tabelle I zusammengestellt. Die minimalen i lemmkon/entrationen wurden nach der Plattenmethode bestimmt, welche m »Chemotherapy« (Japan), Band 1(>. (1%8), Seiten 98 und W, beschrieben wurde. Als Kulturmedium wurde ein Mcrz-Inlusionsagar (pll 7,4) verwendet. Fs wurde mit KV Zellen/Platte inokuliert (10⁶ Zellen/ml).

Tabelle I

V'erbin- Verbindung
düngen

Sla- Kschc- Pseu- Kleb- Pro-

phy- richia domo- siella teus

lococ- coli nas pneu- vulga-

CUS NIHJ acru- nio- ris

aurcus ginosa niac 3027

209ρ I. F. O

(Natrium-cefaloglycin) ² Il JJ-CH₂CONH-

N y-ClljOCOCH,

COONu

(Natrium-cefalothin)
3 N=N

j ^N-CH₁CONH

(Natrium-cefazolin)
O O

N J-CH₂OCOCH.,

COONa

CH₃CH₂-N VcONHCHCONH-i

OH

CH₂S

Να

COONa

Il

N CH₃

<1.57 <1.57 >200 <1,57 100

<l.57 <l,57 >200 <1,57 100

<1.57 <1.57 >200 <l,57 200

<1,57 <0,l 6,25 <0.1 0,4

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2) Minimale Hcmmkonzcntrutioncn (MlC)

Die minimalen Hemmkonzentrationen (MIC) der erfindungsgemäßen Verbindung gegenüber klinisch isolierten Bakterienstämmen sind in den Tabellen 11-1 und 11-2 zusammengestellt. Diese minimalen Hemmkonzentrationen wurden in gleicher Weise bestimmt wie die zuvor angegebenen minimalen Hemmkonzentrationen.

Tabelle 11-1

10 Verbindungen

Kschcrichia coli

Gn 3481 CiN 3435 GN 3452 GN 3465 K-I

K.-2

K-3

K-4

Natriumcelaloglycin 3,13 Natriumcefalothin 12.5 Nalriumcefazolin 1.56

1,56	3,13	12,5	1,56	1,56	25	12,5
6.25	12,5	25	6,25	6,25	100	25
1,56	1,56	6,25	1,56	1,56	>200	3,13

3 1

c 5

Verbindung A

0.1

0,2

1,56

0,39

Tabelle II-2

25 Verbindung

l'seudomonas aeruginosa GN 1035 GN 376 GN 82

GN221 GN 1091 GN2565 GN2987 GN 16 GN244 GN383

Natrium- > 200 > 200 >200 > 200 > 200 >200 >200 >200 >200 >200 _£ cefaloglycin

I₁ Natrium- > 200 > 200 > 200 > 200 > 200 > 200 > 200 > 200 >200 >200 5 cefalothin

Natrium-

cefazolin > 200 > 200 >200 > 200 >200 > 200 > 200 > 200 > 200 >200

so as

c 'B

I Verbindung A 25 6.25 6,25 6,25 6,25 25 -

U >

3) Stabilität gegen /8-Lactamase

12,5 12,5

Die Stabilität der erfindungsgemäßen Ccfalosporinverbindung gegen /8-Lactamase wurde in folgender Weise bestimmt.

/8-Lactamase wurde von den Bakterien der Tabelle IiI isoliert. Über Nacht wurde eine Kultur mir Merz-Infusionsbrühe durchgeführt. 10 ml der Kulturbrühe wurden mit 100 ml eines Mediums verdünnt, welches 2 g Hefeextrakt, 10 g Polypepton, 2 g Glucose, 7 g Dinatriumhydrogenphosphat, 2 g Kaliumdihydrogenphosphat, 1.2 g Ammoniumsulfat und 0,4 g Magnesiumsulfat pro Liter enthielt. Der Ansatz wurde bei 37° C unter Schütteln kultiviert. Nach 2 Stunden wurde Penicillin G (50 μg/ml) als Induziermittel zugegeben, und danach wurde die Kuiiivieruüg weiter während 2 Stunden fortgesetzt. Die dabei gebildeten Zellen wurden durch Zentrifugieren (5000 U/min; 10 min) abgetrennt, zweimal mit einem 0,1 M Phosphospuffer gewaschen (pH 7,0) und nachfolgend einer Ultraschallbehandlung (20 kHz; 5 min) unterworfen und dann bei 15000 U/min während 60 Minuten zentrifugiert. Unter Verwendung der jeweils überstehenden Enzymflüssigkeit wurde die Stabilität der jeweiligen Verbindung gegenüber der gebildeten /8-Lactamasc bestimmt, und zwar nach der jodometrischen Assaymethode. Dabei wurden die in Tabelle III angegebenen Ergebnisse erzielt. Bei den in Tabelle IH angegebenen Zahlenwerten handelt es sich um einen relativen Aktivitätswert, berechnet unter der Annahme eines Aktivitätswertes 100 für das zum Vergleich herangezogene Cefaloridin.

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Tabelle III

Stabilität gegen /?-Lactamasc

	Verbindung	Relative llydrolysegeschwiiicligkeit (%)	1	l'rolciis	l'.schcriL'hiii	0,6	Kscherichia	Kschcrichia
		l'seudomonas		viilgaris	!.ου	4) Akute Toxi/ilät	l'rciindii	toli
		ucruginos»	CiN 7(>	CiN 54X2		CiN 346	CiN 5484
		CiN ^l)l8
	Vergleich		100	100	100	136
	Cefaloridin	100	150	14	29	2
	Cefalexin	13	105	100	17	11
	Cefalotin	91	440	130	150	40
1	Cefazolin	410	8	-	15	100
	Penicillin G	-	8	-	0,06	105
I	Ampicillin	-
I	Erfindungsgemäß		7	0,2	25
■'}■	Verbindung A
I I

Die Verbindung A wurde durch intravenöse Injektion einer Gruppe von lunl" männlichen ICR-Müusen (.Gewicht: 19±lg) einmal verabreicht und die Anzahl der überlebenden Mäuse wurde nach einer Woche bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle IV zusammengestellt.

Tabelle IV

Dosis (g/kg) 2

Verbindung*

Verbindung A

5) Schutz gegen Infektion 40

Es wurde eine Bakterienflüssigkeit von KJcbsiclla Y-3 oder Pseudomonas aeruginosa GN 1035 verwendet, und zwar nach Zugabe von Mucin in einer Endkonzentralion von 5%. Mit dieser Flüssigkeit wurde das Peritoneum einer männlichen ICR-Maus (Gewicht: 19 ± 1 g) geimpft. Eine Stunde nach der Verabreichung wurde die jeweilige Verbindung der Tabelle V einmal unter die Haut des Rückens der Maus injiziert, und die Wirkung wurde 45 eine Woche danach untersucht. Die Ergebnisse sind in Tabelle V zusammengestellt.

Tabelle V	KD₅„-Wcrt Klcbsiclla	(mg/Maus) Y-3 Pseudomonas aeruginosa ÜN 1035
Verbindung	<0,04 0,16	1,6 >25
Verbindung A Cefazolin

Die EDso-Werte wurden nach der Van-der-Wacnden-Mcthode berechnet.

6) Blutspiegel

Die Verbindungen A wurde Wistar-Ratlen (Gewicht etwa 300 g) durch intramuskuläre Injektion verabreicht, und zwar in einer Dosis von 20 mg/kg 15 min, 30 min, 60 min, 120 min und 180 min, danach wurde die Konzentration der Verbindung im Blut gemessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle VI zusammengestellt. Bei den Untersuchungsbakterien handelt es sich um Sarcina und Pscudomonas. Die mit Pseudomonas erhaltenen Meßwerte sind in Klammern angegeben.

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Tabelle VI

/eil y/ml

15 min 30 min 60 min 120 min 180 min

Verbindung Λ 11.0 8,2 3,4 1,4 0,46

(11,6) (7,1) «3,13) (<3,13) (<3,13)

7) Hiimolysctcsl

Der Test wurde nach der Methode von Akaish et al durchgeführt (Beobachtung mit dem unbewaffneten Auge). Die lirgcbnissc sind in Tabelle VlI zusammengestellt.

Tabelle VII

^Concentration
(mg/ml)
Verbindunp\ 250 167 125 62,5 41,8

Cefaloridin ***>**) *,

Celazolin _____

²> Cefalotin *)

Verbindung Λ _ _ _ _ _

Bemerkungen: ■m - = keine Hä'molysc

*) = schwache lliimolysc (rosa und klar) ··) ■= lliimolysc (rol und klar) ***! = starke llämolysc (rol und Irüh)

Aus den Tabellen I und II erkennt man, daß die erfindungsgemäße Verbindung ein breiteres antibakterielles Spektrum hat als die zum Vergleich herangezogenen Antibiotika sowie eine stärkere antibakterielle Aktivität, und zwar nicht nur gegenüber Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae und Proteus-Arten, sondern auch gegenüber Antibiotika resistentcn Bakterien. Ferner erkennt man aus Tabelle III, daß die erfindungsgemäße Verbindung eine größere Stabilität gegenüber /7-Lactamasc hat als die Vergleichsverbindungen. Aus Tabelle IV erkennt man, daß die erfindungsgemäße Verbindung eine sehr geringe Toxizität hat, und aus den Tabellen V und VI erkennt man, daß die erfindungsgcmüßc Verbindung im lebenden Körper gut absorbiert oder resorbiert wird und hier nicht inaktiviert wird und zu einer hohen maximalen Blutkonzentration führt. Ferner erkennt man aus Tabelle VII, daß die erfindungsgemälie Verbindung keine hämolytische Aktivität zeigt.

Die Verbindung der Formel (1) kann nicht nur in Form der freien Säure, sondern auch in Form der nichttoxisehen Salze verabreicht werden.

Die erfindungsgemäße Verbindung kann in der Humanmedizin und in der Tiermedizin angewandt werden, und zwar durch orale oder nicht-orale Verabreichung in einer physiologisch geeigneten Form, z. B. in Form von Tabletten, Kapseln, Sirupen, lnjeklionsflüssigkcilen. Dabei handelt es sich um die auf dem Gebiet der Penicilline und Cephalosphorinc üblichen Darrcichungsformen. Bei Anwendung der erfindungsgemäßen Verbindung

>o in der Humanmedizin verabreicht man diese vorzugsweise F.rwachsencn (60 kg) in einer Dosis von 250 mg bis 5 g, und zwar ! bis 4ma! pro Tag.

Im folgenden sollen die erfindungsgemäßen Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindung anhand von Beispielen erläutert werden.

Beispiel 1

(1) Zu einer Lösung von 3,01 g Natrium-DO-a-N-O-methoxycarbonyl-l-propen^-yO-amino-p-hydroxyphenyl-acetat in einem gemischten Lösungsmittel aus 25 ml wasserfreiem Methylenchlorid und 6ml Dimethylformamid gibt man 1 Tropfen N-Methylmorpholin. In die erhaltene Lösung gibt man 1,14 g Äthylchlorcarbonat bei-15 bis-10⁰C während einer Zeitdauer von 5 min, und dann wird die Mischung während 1 Stunde bei-15 bis -10⁰C umgesetzt. Nach der Umsetzung wird die erhaltene Reaktionsmischung mit 1,22 ml N,O-Bis-(trimethylsilyU-acetamid versetzte und die erhaltene Mischung wird auf-20°C abgekühlt. Andererseits gibt man 3,66 ml N,O-Bis-(trimethylsilyl)-acetamid zu einer Suspension von 3,28g 7-Amino-3-[5-(l-mcthyl-l,2,3,4-tetrazoIyl)-thiomethyl]-A'-cephem-4-carbonsäure, wobei eine Lösung gebildet wird. Die Lösung wird auf-20° C abgekühlt und in die zuvor hergestellte Lösung gegossen; sodann wird die erhaltene Mischung bei-5 bis-IO⁰C während 2 Stunden umgesetzt und dann während 2 Stunden bei -5 bis 0⁰C. Nach der Umsetzung wird die Reaktionsmischung mit 5 ml Methanol versetzt und die erhaltene Mischung wird während 30 min gerührt. Danach werden unlösliche Bestandteile abfiltricrl und zu dem Fillralgibt man 10 ml Wasser. Die erhaltene Lösung wird durch

26 OO 880 I

Zugabe von 6n Salzsäure auf pH 1,5 eingestellt und danach während 30min einer Hydrolyse unterworfen. '■■

Sodann wird die Lösung durch Zugabe von Triäthylamin auf pH 5 eingestellt und über Nacht bei 5 bis 10⁰C ;

gerührt, wobei Kristalle ausgeschieden werden. Die ausgeschiedenen Kristalle werden durch Filtration abgetrennt. Danach werden die Kristalle in 50 ml Äthanol suspendiert und die erhaltene Suspension wird wahrend 1 : Stunde gerührt. Danach werden die Kristalle abfiltricrt und mit Äthanol gewaschen und getrocknet. Man erhält 3,0 g 7-[D(-)-a-Amino-p-hydroxyphenyl-acetamido]-3-[5-( 1 -methyl 1,2,3,4-tetrazolyl)-thiomehtyl]-A³-cephem- , 4-carbonsäure, Fp. 161 bis 163°C (Zers.) in einer Ausbeute von 63,0%. "^;

IR (KBr) cm-¹ - v_c . „ 1760, 1685, 1600. g

(2) Zu einer Suspension von 3,0g 7-[D(-)-a-Amino-p-hydroxyphenyl-acetamido]-3-|5-(l-mcthyl-1.2..>,4-lctra- |i

zolyl)-thiomethylj-A³-cephem-4-carbonsäure in 29 ml Wasser gibt man 0,95 g wasserfreies Kaliumcarbonat.

Nach Bildung der Lösung gibt man 15 ml Äthylacetat hinzu. Die erhaltene Lösung wird mit l,35g4-Äthyl-2,3- ft

dioxo-l-piperazinocarbonal-chlorid bei 0 bis 5° C während einer Zeitdauer von 15 min versetzt und die erhaltene ;'^;

Mischung wird während 30min bei 0 bis 5°C umgesetzt Nach der Umsetzung wird die wäßrige Schicht abgetrennt und 40 ml Äthylacetat und IO ml Aceton werden zu der wäßrigen Schicht gegeben. Sodann wird die erhaltene Löseng durch Zugabe von verdünnter Salzsäure auf pH 2,0 eingestellt. Danach wird die organische Schicht abgetrennt und diese wird zweimal mit 10 ml Wasser gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird in 10 ml Aceton aufgenommen und die Lösung wird mit 60 ml 2-Propanof versetzt, wobei Kristalle ausgeschieden werden. Die ausgeschiedenen Kristalle werden abnitriert, mit 2-Propanol gewaschen und dann getrocknet. Man erhält 3,27g 7-[D(-)-a-(4-Äthyl-2,3-dioxo-l-piperazinocarbonalamino)-p-hydroxyphenyl-acetamido]-3-[5-(lmethyl-l,2,3,4-tetrazolyl)-thiomelhyl]-A⁵-cephcm-4-carbonsäurc, Ausbeute 80,7%.

IR (KBr) cm-¹ : v_c. „ 1775 (Lactam), 1705 (C-OOH), 1680, 1670 (-CON _χ) 25 £

Das durch Umkristallisieren des erhaltenen Produkts aus Acctonitril/Wasser (Volumcnverhällnis4 :7) erhal- i|

tene Produkt zersetzt sich bei 170 bis 171°C, und es schmilzt bei 188 bis 190⁰C unter Bildung eines dunkelbraunen Teers.

In einem gemischten Lösungsmittel aus 20 ml Aceton und 5 ml n-Butanol werden 3,0g des oben erhaltenen 3D Produktes aufgelöst. Zu der erhaltenen Lösung gibt man eine Lösung von 20ml n-Butanol, enthaltend 0,77 g ;

eines Natriumsalzes der 2-Äthylhexansäure. Sodann wird die gemischte Lösung während 1 Stunde gerührt, >'

wobei Kristalle ausgeschieden werden. Diese werden abfiltricrl, mit Aceton gewaschen und getrocknet. Man erhält 2,6g des Natriumsalzes der 7-[D(-)-a-(4-Äthyl-2,3-dioxo-l-pipera7.inoearbonylamin)-p-hydroxyphenylacetamido]-3-[5-(l-methyl-l,2,3,4-tetrazolyl)-thiomethyl]-A'-ccphem-4-carbonsäurc; Ausbeute 83,9%. 35 ■

Bezugsbeispiel

Zu einer Lösung von 3,36g D(-)-a-(4-Äthyl-2,3-dioxo-l-pipcrazinocarbonylamino)-p-hydroxyphcnylcssigsäure in 20 ml wasserfeiem Mcthylenchlorid und 5 ml Dimethylformamid gibt man 1,33 g N,N-Dimethylanilin. Dier erhaltene Mischung wird auf-15 bis-10⁰C abgekühlt und eine Lösung von 1,14g Äthylchlorcarbonat in 5 ml wasserfreiem Methylenchlorid wird während einer Zeildauer von 5 min in diese Mischung getropft. Die Mischung wird 60 min bei dieser Temperatur umgesetzt

Andererseits gibt man zu einer Suspension von 2,72 g 7-Amino-3-accloxymethyl-A^:i-cephem-4-carbonsäure in 65 ml wasserfreiem Acetonitril 3,04 g N,O-Bis-(trimcthylsilyl!-acetamid, wobei eine Lösung erhalten wird. Die Lösung wird auf-20⁰C abgekühlt und in die vorerwähnte Reaktionsmischung gegossen. Danach wird die Mischung bei -10 bis -5°C während 60 min und dann bei 5 bis 10⁰C während 60 min umgesetzt. Nach der Reaktion gibt man 5 ml Methanol zu der Reaktionsmischung und das erhaltene Gemisch wird durch Filtration von den unlöslichen Bestandteilen befreit. Danach wird das Lösungsmittel durch Destillation unter vermindertem Druck entfernt. Der Rückstand wird in einem gemischten Lösungsmittel aus 100 ml Wasser und 50 ml Äthylacetat aufgenommen und die erhaltene Lösung wird durch Zugabe von Natriumhydrogencabonat auf pH 7,5 bis 8,0 eingestellt. Dann wird die wäßrige Schicht abgetrennt und zu einem gemischten Lösungsmittel gegeben, welches 80 ml Äthylacetat und 20 ml Aceton umfaßt. Die erhaltene Lösung wird durch Zugabe von verdünnter Salzsäure auf pH 1,5 eingestellt. Nachfolgend wird die organische Schicht abgetrennt und genügend mit Wasser gewaschen. Sodann wird von der Äthylacctatschicht das Lösungsmittel durch Destillation unter vermindertem Druck abgetrennt. Der Rückstand wird in 10 ml Aceton aufgelöst, und zu dieser Lösung gibt man 60 ml 2-Propanol unter Rühren, wobei weiße Kristalle ausgeschieden werden. Die ausgeschiedenen Kristalle werden abllltriert und genügend mit 2-Propanol gewaschen. Nach dem Trocknen erhält man 4,94 g 7-[D(-)-e-(4-Äthyl-2,3-dioxo-l-piperazinocarbonylamino)-p-hydroxyphcnylacctamido]-3-acctoxymethyl-A'-cepgcm-4-earbonsäure, Fp. 168 bis 174⁰C (Zers.), in einer Ausbeute von 84,0%. Mi

/ IR(KBr)Cm-¹ : v₍ . „ 1770 (Lactam), 1710 (-COOH), 1680, 1670 (-CON _χ)

In einem gemischten Lösungsmittel aus 25 ml Aceton und IO ml n-Bulanol löst man 3,5 g des zuvor erhaltenen Produktes auf. Zu dieser Lösung gibt man eine Lösung von 20 ml n-Butanol, enthaltend 1,0g des Natriumsalzes von 2-Äthylhexansäure. Sodann wird die gemischte Lösung während I Stunde gerührt, wobei Krislalle ausgeschieden werden. Diese werden abllltricrt. mit Aceton gewaschen und getrocknet. Man erhält 3,3g des Natriumsalzes der 7-[D(-)-a-(4-Äthyl-2,3-dioxo-l-pipcra/.inocarbonylamino)-p-hydroxyphcnyl-acctiiimido]-3-

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acetoxymethyl-A³-cephem-4-carbonsäurc in einer Ausbeute von 90,9%.

Beispiel 2

Nach dem Verfahren des Bezugsbcispiels erhält man 7-|D(-)-a-(

no^p-hydroxyphenylacetamidol-S-lS-d-methyl-l^^^-tetrazolyD-thiomethyn-A'-cephem^-carbonsäure, in einer Ausbeute von 75,5% aus 7-Amino-3-[5-(l-mcthyl-l,2,3,4-tetrdzolyl)-thiomethyl]-A³-cephem-4-carbonsäure und DH-a-W-Äthyl-l^-dioxo-l-piperazinocarbonylaminoH'-hydroxyphenylessigsäure.

hi IR (KBr) cm-' : v_r, „ 1775 (Lactam), 1705 (-COOH), 1680, 1670 (-CON _χ)

Das so erhaltene Produkt wird durch Neutralisation mit einer wäßrigen Natriumhydrogencarbonat-Lö?ung auf pH 7,0 eingestellt und dann filtriert und einer Gefriertrocknung unterworfen. Aufdiese Weise erhält man das Natriumsalz.

Claims

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Patentanspruch:

Cephalosporinverbindung der folgenden Formel (1) O O

CH₃CH₂-N N —C —NH-CH-CUINH-| r ^ _N _N

worin R¹ ein Wasserstoffatom oder ein nicht-toxisches Kation bedeutet.