DE2436694A1

DE2436694A1 - Verfahren zur herstellung von 1-n(s)-alpha-hydroxy-omega-aminoacyl)-derivaten von 3',4'-dideoxyneamin oder 3', 4'-dideoxyribostamycin

Info

Publication number: DE2436694A1
Application number: DE2436694A
Authority: DE
Inventors: Eiichi Akita; Yukio Horiuchi; Osamu Tsuchiya; Hamao Umezawa; Sumio Umezawa; Shuntaro Yasuda
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Priority date: 1973-08-01
Filing date: 1974-07-30
Publication date: 1975-03-20
Also published as: JPS553359B2; GB1463544A; FR2239479A1; JPS5035130A; US3948882A; FR2239479B1

Description

PATENTANWÄLTE

DR. ING. A.VAN DERWERTF DR. FRANZ LEDERER

21 HAMBURG 90 8 MÖNCHEN 80

WILSTORFER STR. S2 TEL. .0 40) 77 08 61 LUCILE-ORAHN-STR.aa · TEL. (089· «7 29 47

2A36694

München, 30. Juli 1974 69219

ZAIDAN HOJIN BISEIBUTSU KAGAKU KENKYU KAI, No. 14 - 23, 3-chome, Kamiosaki, Shinagawa-ku, Tokio, Japan

"Verfahren zur Herstellung von 1-N-((S)-(^-Hydroxy-W-aminoaryl) Derivaten von 3',4'-Dideoxyneamin oder 3'»4'-Dideoxyribosta

Il

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von -. ·-.. 1-N-((S)-ct-Hydroxy-W-aminoacyl)-Derivaten von 3',4'-Dideoxyneamin oder 3',4'-Dideoxyribostamycin., die zur Behandlung von zahlreichen durch Bakterien hervorgerufenen Infektionen wertvoll sind. Insbesondere ist die Erfindung auf ein Verfahren zur Herstellung von 1-N-( (S)-c£-Hydroxy-^-amino-rL-butyryl)-3',4'-dideox3>-neamin bzw. -3' ^'-dideoxyribostamycin gerichtet.

Kanamycine und Neamin (das ist Neomycin A) sind bekannte aminoglycosidisch.e Antibiotica, und Ribostamycin, ursprünglich als Vistamycin oder Antibioticum SF-733 bezeichnet ("Journal of Antibiotics" 22 (1970), Nr. 3, Seiten 1?5 - 161, und Nr. 4, Seiten 173 - 183) > ist auch ein bekanntes aminoglycosidisch.es Antibioti-

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cum. Ribostamycin ist als 5-0-ß-D-Ribofuranosyl-neamin identifiziert worden. Diese aminoglycosidischen Antibiotica sind weit verbreitete wertvolle chemotherapeutische Wirkstoffe, doch sind zahlreiche arzneimittelresistente Stämme, die gegenüber diesen bekannten aminoglycosidischen Antibioticas resistent sind, in den letzten Jahren aufgetreten. Demgemäß ist der Mechanismus der Resistenz der arzneimittelresistenten Bakterien gegenüber den bekannten aminoglycosidischen Antibioticas untersucht worden. Zum Beispiel haben H. Umezawa und Mitarbeiter gefunden, daß einige von Patienten isolierte Stämme gramnegativer Bakterien, die den R-Faktor enthalten, nämlich Staphylococcus aureus und Pseudomonas aeruginosa, resistent gegenüber Kanamycinen sind und daß aufgrund des Resistenzmecha.nismus dieser kanamycinresistenten Stämme ein Enzym erzeugt wird, das die 3'-Hydroxylgruppe des Karamycins phosphoryliert und mit Hilfe dieses phosphorylierenden Enzyms die Kanamycine inaktiviert ("Science" 157 (1967), Seite 1559).

Aufgrund dieser Peststellungen haben H. Umezawa und Mitarbeiter 3'-Deoxykanamycin und 3¹ ,4^f-Dideoxykanamycin B, bei denen die 3'-Hydroxylgruppe des Kanamycin-Moleküls entfernt worden ist, sowie das 3¹,4'-Dideoxyneamin und das 3' ,4^f-Dideoxyribostamyciit, nämlich das 3',^'-Dideoxyvistamycin, halbsynthetisch hergestellt ("Journal of Antibiotics" Ser. A, 21 (1971), Seiten 274· - 275, 2£ (1971), Seiten 485- 487 und 711 - 712, und 25. (1972), Seiten 613 - 617). 3'-Deoxykanamycin, 3'»4¹-Dideoxykanamycin B, 3»,4'- -Dideoxyneamin und 3',4'-Dideoxyribostamycin sind gegen die vorgenannten kanamycinresistenten Stämme wirksam, doch hat man festgestellt, daß diese Deoxy-Derivate gegen eine andere Art von ka-

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namycinresistenten Stämmen praktisch unwirksam'sind, wie gegen
Escherichia coli JR66/W677, das von anderen Patienten isoliert
worden ist. Von H. Umezawa und Mitarbeitern wurde gefunden, daß die letztgenannte Art der kanamycinresistenten Stämme einen Resistenzmechanismus aufweist, der ein Enzym erzeugt, das die 2"-Hydroxylgruppen des Kanamycins oder des 3',4'-Dideoxykanamycin-Moleküls mit ATP (Adenosin-triphosphat) adenylieren kanm. Durch
diese Wirkung des Adenylgruppen einbauenden Enzyms werden Kanamycin und 3'»4'-Dideoxykanamycin unwirksam ("Journal of Antibiotics" 2± (1971), Seiten 911 - 913). Perner ist gefunden worden, daß eine Klasse von arzneimittelresistenten gramnegativen Bakterien, wie die den R-Faktor aufweisenden Stämme von Escherichia
coli, zum Beispiel Escherichia coli JR66/W677 und 1A29OR55, einen Resistenzmechanismus aufweist, der ein Enzym erzeugt, das die
2"-Hydroxylgruppe des Kanamycins und des 3'»4'-Dideoxykanamycin B- -Moleküls nucleotidylieren kann, so daß durch dieses Enzym Kanamycin und 3'>4^f-Dideoxykanamycin B unwirksam werden ("Journal of Antibiotics" 25 (1972), Seite 492).

Andererseits ist bekannt, daß. Butirosin B, das ein aminoglycosidisches Antibioticum ist, das von einem Mikroorganismus einer
Streptomyces-Species- gebildet wird, wirksam ist gegen einige kanamycin- und ribostamycinresistente Bakterien. Butirosin B ist
als 1-N-((S)-oC-Hydroxy-y'-amino-n-butyryl)-ribostamycin identifiziert worden ("Tetrahedron Letters" £8 (1971), Seiten 2125 und

2617 - 2630, und DT-OS 1 914 527). Beim Vergleich der antibakteriellen Wirksamkeiten von Ribostamycin und Butirosin B ist festgestellt worden, daß der (S)-ot-Hydroxy-^-amino-butyryl-Substituent an der 1-Aminogruppe des Butirosin B-Moleküls eine wichtige

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Rolle spielt, um das Ribostamycin sogar gegen die ribostamycinresistenten und -empfindlichen Stammte zu aktivieren, und daß die Gegenwart des (S)-C*.-Hydroxy-jf-amino-butyryl-öubstituenten an der 1-Aminogruppe des Butirosin B-Moleküls eine solche sterische Hinderung beim Butirosin B-Molekül hervorruft, infolgedessen das -Butirosin B daran gehindert werden kann, durch den Angriff verschiedener inaktivierender Enzyme wirkungslos gemacht zu werden, die von den kanamycin- oder ribostamycinresistenten Stämmen erzeugt werden.

Aufgrund dieser Feststellungen haben H. Umezawa und Mitarbeiter 1-N-((S)-ct-Hydroxy-UJ-aminoacyl)-Derivate des Neamins, 3',4'- -Dideoxyneamins, Ribostamycins oder 3¹,4'-Dideoxyribostamycins hergestellt und gefunden, daß diese Verbindungen eine vorteilhaft hohe antibakterielle Wirksamkeit gegen arzneimittelresistente Bakterien zeigen (US-Patentanmeldung Ser.No. 402 085, britische Patentanmeldung Nr. 4-6 397/13, deutsche Patentanmeldung P 23 50 169.1 und französische Patentanmeldung Nr. 73 36291, sowie "Journal of Antibiotics" 26, (1973), Seiten 304- - 309).

Vorliegender Erfindung lag nun die Aufgabe zugrunde, ein neues wirksames Verfahren ausfindig zu machen, nach dem 1-N-((S)-ot-Hydroxy-U-aminoacyl)-Derivate von 3¹,4'-Dideoxyneamin oder 3',4'- -Dideoxyribostamycin in einfacher Weise und in günstigen Ausbeuten hergestellt werden können.

3¹,4'-Dideoxyneamin und 3'^'-Dideoxyribostamycin können durch die folgende allgemeine Formel veranschaulicht werden:

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(D

in der E ein Wasserstoffatom oder, die ß-D-Eibofuranosyl-Gruppe der Formel '

CH₂OH

OH OH

Bei 3^r,4'-Dideoxyneamin steht für R in der allgemeinen Formel (I) ein Wasserstoffatom und bei 3^f^'-Dideoxyribostamyeln die ß-D- -Eibofuranosyl-Gruppe. ("Journal of Antibiotics" 2£ (1971), Seiten 613 - 616).

Gegenstand der Erfindung ist die Schaffung eines neuen Weges, nach dem ein 1 -N- ((S) -^d- -Hydroxy- W-aminoacyl) -Derivat des 3',4'- -Dideoxyneamins und 3'>4'-DideoXyribostamycins'der allgemeinen Formel (II)

NH

2 (S)

NHCOCH(OH)

(II)

NH

OH

in der R ein Wasserstoffatom oder die ß-D-Ribofuranosjrl-Gruppe

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ist und η eine ganze Zahl von 1 bis 4 bedeutet, in verhältnismäßig einfacher Weise und in einer besseren Ausbeute als bisher bekannt hergestellt wird. Nach diesem Weg wird zuerst durch Verestern der 6-OH-Gruppe des 3¹ ,4'-Dideoxyneamins oder 3¹ »4¹ -Dideoxyribostamycins mit einer (3)-Hydroxy-ui-aminoalkansäure oder deren, reaktionsfähigen Derivaten das entsprechende 6-0-((S)-Ot-Hydroxy-U)-aminoacyl)-Derivat des 3',4' -Dideoxyneamins oder 3'>4'-Dideoxyribostamycins hergestellt. Anschließend wird das Derivat der Wirkung eines alkalischen Mediums ausgesetzt, um auf diese V/eise eine Wanderung des (S) -d -Hydroxy-u/ -aminoacyl)-Restes

(S)

-COGH(OH) (GH₂)^NH₂

von der 6-OH-G-ruppe zur 1-NHp-Gruppe des 3' ,4'~Dideoxyneamins bzw. 3',4'-Dideoxyribostamycins zu veranlassen. Das Symbol (S) in der allgemeinen Formel II drückt eine bestimmte sterische Konfiguration bei organischen Verbindungen aus (R.S. Cahn, CK. Ingold und V. Prelog "Experentia" 12. (1956), Seiten 81 - 94).

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist die Schaffung eines neuen Weges zur Herstellung von 1-N-((S)-öL-Hydroxy- Ϋ-amino- -n-butyryl)-3',4'-dideoxyneamin oder -3'^'-dideoxyribostamycln, der in verhältnismäßig einfacher Weise durchgeführt werden kann und die erwünschte Verbindung in einer verbesserten Ausbeute liefert. Weitere Gegenstände der Erfindung sind aus der nachstehenden Beschreibung zu erkennen.

Demzufolge ist Gegenstand der Erfindung ein Verfahren zur Herstellung von 1-N-((S) - et,-Hydroxy- U)-aminoacyl)-Derivaten von

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3' ,4'-Dideoxyneamin oder 3',4'-Dideoxyribostamyein der allgemeinen Formel (II)

NH,

(S)

NHCOCHOH

(ID

NH

in der R ein Wasserstoffatom oder die ß-D-Ribofuranosyl-Gruppe

CH₂OH

OH OH

ist und η eine ganze Zahl von 1 bis 4 bedeutet, das' dadurch gekennzeichnet ist, daß-man auf ein 6-0-((S)-tf· -Hydroxy-cJ-amirroacyl)-Derivat von 3',4'-Dideoxyneamin oder 3',4'-Dideoxyribostamycin der allgemeinen Formel (III)

CH₂NH₂

I (S)

0-COCH(OH)(CH₂)j

(III)

in der R¹ ein Wasserstoffatom,: eine bekannte Hydroxylgruppenmaskierung oder ein ß-D-Ribofuranosyl-Rest der allgemeinen Formel

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CH₂OY

OY OY

ist, in der die Reste Y gleich oder verschieden sind und Wasserstoffatome oder bekannte Hydroxylgruppenmaskierungen bedeuten,
R. und R₂ gleich oder verschieden sind und Wasserstoffatome oder bekannte Aminogruppenmaskierungen bedeuten, wobei R». und R₀ zu- -sammen auch die Phthaioylgruppe bilden können, und η eine ganze Zahl von 1 bis 4- bedeutet, ein basisches Medium derart einwirken läßt, daß eine Wanderung des Acylrestes unter Bildung einer V.erbindung der allgemeinen Formel (IV)

CH₂NH₂

(S)

NHCOCHOH

(IV)

in der R¹, R₁, Rp und η die vorgenannten Bedeutungen haben, eintritt und daß man, wenn mindestens eine der Aminogruppen- und bzw. oder Hydroxylgruppenmaskierungen an der Verbindung der allgemeinen Formel (IV) verblieben ist, diese Aminogruppen- und/oder Hydroxylgruppenmaskierung unter Bildung einer Verbindung der allgemeinen Formel (II) abspaltet.

Hydroxylgruppenmaskierungen oder Schutzgruppen für Hydroxylgruppen sind Acylreste, wie Alkanoylreste mit 2-6 Kohlenstoffatomen,
zum Beispiel die Acetyl-, Propionyl- oder die Butyryl-Gruppe,
ferner Aminoalk.anoylreste mit 2-6 Kohlenstoffatomen, zum Bei-

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spiel die ß-Hydroxy- V- -amino-n-butyryl-Gruppe, weiterhin die Benzoyl-, Benzyl-, Methoxycyclohexyl- oder die Cyelohexyliden-Gruppe.

Aminogruppenmaskierungen oder Schutζgruppeη für Aminogruppen sind Acylreste, wie Alkanoylreste mit 2-6 Kohlenstoffatomen, zum Beispiel die Acetyl-_r, Propionyl- oder die Butyryl-Gruppe, Alkoxycarbonylreste mit 2 bis 5 Kohlenstoffatomen, zum Beispiel die Methoxycarbonyl-, Äthoxycarbonyl-, Propoxycarbonyl- oder die Butoxycarbonyl-^Gruppe, Aralkoxycarbonylreste, wie ein Phenylalkyloxycarbonylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, zum Beispiel die Benzyloxycarbonyl-Gruppe, oder Aryloxycarbonylreste, zum Beispiel die Phenyloxycarbonyl- oder die Naphthyloxycarbonyl-Gruppe·

Bei der Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens wird die Ausgangsverbindung 6-0-((S)-«£ -Hydroxy-W-aminoacyl)-3',4'-dideoxyneamin oder -3¹ ,4' -dideoxyribostamycin (III) der Einv/irkung eines basischen oder alkalischen Mediums ausgesetzt. Hierbei wird die Ausgangsverbindung in wäßriger Lösung oder in einem organischen lösungsmittel unter basischen oder alkalischen Bedingungen behandelt, die durch die Gegenwart einer solchen Menge

an einer organischen Base, wie einem tertiären Amin, zum Beispiel Triäthylamira/.oder.".Hydrazin", an. einer anorganischen Base, wie einem Alkalimetallhydroxid, zum Beispiel Natrium- oder Kaliumhydroxid, oder einem Alkalimetallcarbonat oder an einem basischem Ionenaustauschharz, geschaffen werden, um der Lösung der Ausgangsverbindung eine Basizität oder Alkalinität zu verleihen. Diese basische Behandlung kann in einfacher V/eise durch Auflösen der

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Aasgangsverbindung in einem dafür geeigneten lösungsmittel erfolgen, das jedoch äine Base in einer solch ausreichenden Menge enthält, daß die Lösung basisch gemacht wird. Ein anderer Weg sieht vor, daß man zu einer lösung der Ausgangsverbindung eine Base in ausreichender Menge zugibt, um die Lösung basisch zu stellen, und dann die basische Lösung der Ausgangsverbindung auf erhöhte Temperaturen, vorzugsweise 50 bis 100⁰G, erhitzt. Beispiele organischer Lösungsmittel, die als Reaktionsmedium für die basische Behandlung beim erfindungsgemäßen Verfahren verwendet werden können, sind niedere Alkanole mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, wie Methanol, Äthanol, Butanol und Propanol, gegebenenfalls zusammen mit Wasser.

Wenn die Ausgangsverbindung der allgemeinen Formel III in dieser Weise der Einwirkung eines basischen Mediums unterworfen v/ird, findet eine Umlagerung statt, wobei die durch eine Esterbindung an die Hydroxylgruppe in 6-Stellung des 3',4'-Dideoxyneamin- oder 3' ,4'-Dideoxyribostamycin-Moleküls der Ausgangsverbindung gebundene Gruppierung

-GOGH(OH) (GH₂)^R₁ R₂

abgespalten und an die Aminogruppe in der benachbarten 1-Stellung dieses Moleküls überführt wird. Dadurch entsteht durch Acyl-Wamderung eine Verbindung der allgemeinen Formel IV.

Eine derartige Umlagerung, d,h. die Reaktion, bei der solch ein durch eine Esterbindung an die Hydroxylgruppe an einem Kohlenstoffatom einer organischen Verbindung gebundener Acylrest zum Übergang von dieser Hydroxylgruppe zu einer solchen Aminogruppe, die an ein zum erstgenannten Kohlenstoffatom in Nachbarschaft

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stehendes. Kohlenstoffatom gebunden ist und in "trans"-Stellung zur Hydroxylgruppe steht, veranlaßt wird, indem das Medium, in dem sie sich befinden, alkalische oder basische .Bedingungen aufweist, ist eine neue Reaktion, die früher von den Erfindern aufgefunden worden ist (USA-Patentanmeldung Ser.No. 590 217, britische Patentanmeldung Nr. 39 735/73» deutsche Patentanmeldung P 23 42 946.1 und französische Patentanmeldung Nr. 73 30875, sowie "Journal of Antibiotics" 26. (1973), Seiten 365 - 367). Diese neue Reaktion, die von den Erfindern aufgefunden worden ist, wird beim Verfahren vorliegender Erfindung angewendet.

Bekanntlich wird ein Acylrest mit großer Wahrscheinlichkeit unter sauren Bedingungen an eine Hydroxylgruppe und unter basischen Bedingungen an eine Aminogruppe gebunden, so daß der Acylrest von der Hydroxylgruppe dann zur Aminogruppe wandert, wenn die Natur des Mediums, das die die vorgenannten unterschiedlichen Gruppen aufweisenden Gruppen enthält, sich vom sauren zum basischen Zustand oder umgekehrt ändert. Dieses Phänomen ist als "Acyl-Wanderung" bekannrt ("Organic Reactions", Band 12, Seite 173» Verlag John Wiley & Sons, 1962). Jedoch ist die Acyl-Wanderung, vor dem Verfahren vorliegender Erfindung noch nicht zu dem Zwecke angewendet worden, den Acylrest bei einer Aminogruppe einzuführen, die in einer besonderen Stellung beim Molekül steht, zumal wenm dieses Molekül mehrere Aminogruppen aufweist.

Bei der Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens findet die Wanderung des (S)-oL-Hydroxy-W-aminoacyl-Restes -COCH(OH)(CH₂) _n-NR.Ho ^{von der} 6-Hydroxyl-Gruppe zur 1-Amino-Gruppe des 3',4'-Dideoxyneamin- oder 3' ,4'.-Dideoxy:Abostamyc.inr-Moleküls der Ausgange-

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verbindung (III) unter basischen Bedingungen statt. Wenn, die Schutzgruppen R. und R₂ für die Arainogruppe und die Schutzgruppe Y für die Hydroxylgruppe, die nach Möglichkeit bei der Ausgangsverbindung (III) vorliegen sollen, unter basischen Bedingungen abspaltbar sind, zum Beispiel ein Acylrest, würden derartige Aminogruppen- oder Hydroxylgruppenmaskierungen teilweise oder vollständig abgespalten werden, wobei gleichzeitig die Wanderung des (S)-dL-Hydroxy-Io-aminoacyl-Substituenten von der 6-Hydroxylgruppe zur 1-Aminogruppe während der Stufe der basischen Behandlung nach vorliegender Erfindung stattfindet. Ein typisches Beispiel für eine Hydroxylgruppenmaskierung Y vom Acyl-Typ, die unter basischen Bedingungen abspaltbar und beim vorliegenden Verfahren zweckmäßig ist, ist ein Aminoalkanoyl-Rest der allgemeinen Formel -COCH(OH)- -(CHp) NR.Rp, bei dem R. und Rp zusammen die Phthaioyl-Gruppe bilden und η eine ganze Zahl von 1 bis 4 bedeutet. Wenn das derart gebildete Acyl-Wanderungsprodukt (IV) noch eine Aminogruppen- und bzw. oder Hydroxylgruppenmaskierung, wie einen Acylrest, enthält, der unter basischen Bedingungen an sich abspaltbar ist, jedoch am Acyl-Wanderungsprodukt (IV) verbleibt, so gewährleistet ein weiteres Erhitzen des Reaktionsgemisches das vollständige Entfernen der restlichen Aminogruppen- und Hydroxylgruppenmaskierungen vom gegenwärtigen Acyl-Wanderungsprodukt (IV), so daß sich . schließlich die erwünschte Verbindung (II) bildet.

Wenn die Ausgangsverbindung (III) als Schutzgruppe Y eine andere Schutzgruppe als einen Acyl- oder Aminoacyl-Rest und als Schutzgruppe R₁ und Rp eine andere Schutzgruppe als einen Acyl-Rest enthält, so können derartige Hydroxylgruppen- oder Amingruppenmaskierungen während der basischen Behandlungsstufe des Verfahrens nicht

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entfernt werden, und man muß das Acyl-Wanderungsprodukt (IV) in bekannter Weise weiter behandeln, um die am Acyl-Wanderungsprodukt (IV) verbliebenen Hydroxylgruppen-maskierungen Y und Aminogruppenmaskierungen Η., und Rp zu entfernen. Unter einem "Entfernen" der Hydroxylgruppen- oder Aminogruppenmaskierungen ist hierbei die Umwandlung der Hydroxylgruppen- bzw.· der Aminogruppenmaskierung in ein Wasserstoffatom gemeint, um die ursprüngliche frei Hydroxyl- oder Aminogruppe wiederherzustellen. Wenn zum Beispiel die Schutzgruppe für die Hydroxylgruppe Y die Benzylgruppe und diejenige für die Aminogruppe JEL und/oder Rp ein Alkyloxycarbonyl-, Aralkyloxycarbonyl- oder ein Aryloxycarbonyl-Rest, insbesondere die Carbobenzoxy-G-ruppe, bei der Ausgangsverbindung (III) ist, weist das erhaltene Acyl-Wanderungsprodukt (IV) noch diese Hydroxyl- und Aminogruppenmaskierungen auf und muß weiter behandelt werden, um die Hydroxylgruppen- und Aminogruppenmaskierungen dieser Art zu entfernen. Verfahren zum Entfernen dieser Hydroxylgruppen- und Aminogruppenmaskierungen sind dem Fachmann bekannt. Wenn daher die Aminogruppenmaskierung ein Alkyloxycarbonylrest, wie die tert.-Butoxycar'bonylgruppe , ein 'Cycloalkyloxycarbonylrest, ein Aryloxycarbonylrest oder ein Arylidenrest, wie die Salicylidengruppe, ist, kann die Aminogruppenmaskierung dadurch entfernt werden, daß man eine milde Hydrolyse mittels einer schwachen Säure, wie wäßriger Trifluoressigsäure, wäßriger Essigsäure oder verdünnter Salzsäure, anwendet. Wenn die Aminogruppenmaskierung ein Aralkyloxycarbonylrest, wie die Benzyloxycarbonylgruppe, ist, kann die Aminogruppenmaskierung dadurch entfernt werden, daß man eine Hydrierung in Gegenwart eines Palladium-auf-Kohle-Katalysators

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oder eine Behandlung mit Bromwasserstoffsäure und Essigsäure anwendet. Die o-Nitrophenoxyacetylgruppe als Aminogruppenmaskierung kann durch eine reduktive Behandlung entfernt werden. Wenn die Aminogruppenmaskierung die Phthaloylgruppe ist, kann das Entfernen der Phthaloylgruppe wirksam durch Behandeln mit Hydrazin in äthanolischer Lösung unter Erwärmen erreicht werden.

Wenn die Hydroxylgruppenmaskierung ein Rest vom Acyl-Typ ist, wie ein Alkanoyl-, Aroyl- oder Alkaroylrest oder die Isopropyliden-, Cyclohexyliden-, Benzyliden-, Tetrahydropyranyl- oder die Methoxycyclohexylgruppe, kann dieser Acyl-Typ von Hydroxylgruppenmaskierung mittels einer milden Hydrolyse unter Verwendung von verdünnter Salzsäure oder wäßriger Essigsäure entfernt werden. Wenn die Hydroxylgruppenmaskierung die Benzylgruppe ist, kann sie durch eine katalytische Hydrierung in Gegenwart von Palladium auf Kohle entfernt werden.

Die als Ausgangsverbindungen beim erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzten 6-0-( (S) -ot- -Hydroxy-lO aminoacyl) -Derivate von 3^f>4'-Dideoxyneamin oder 3',4^f-Dideoxyribostamycin der allgemeinen Formel (III) können aus 3¹ -,V-Dideoxyneamin oder 3¹ ,4'-Dideoxyribostamycin auf verschiedenen Wegen hergestellt werden. Danach wird zuerst 3',4'-Dideoxyneamin oder 3',4'-Dideoxyribostamycim mit einer solchen Verbindung umgesetzt, wie sie gewöhnlich in bekannter Weise bei der Peptid-Synthese verwendet wird, um eine bekannte Schutzgruppe bei den vier Aminogruppen des ursprünglichen 3^!,4'-Dideoxyneamins oder V ,4'-Dideoxyribostamycins einzuführen. Der Schutz oder die Maskierung des Nearains oder Ribostamycins kann zweckmäßigerweise auf bekannte Art erfolgen, entweder durch Umsetzen eines

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Aldehyds, wie Acetaldehyd oder Benzaldehyd, mit der Aminogruppe, um letztere in eine Schiffsche Base zu überführen, oder durch Acylieren, Carboalkoxylieren oder Carbobenzoxylieren der Aminogruppen der Ausgangsverbindungen. Hierzu kann zum Beispiel das 3',4'-Dideoxyneamin oder das 3¹,4^f-Dideoxyribostamycin mit Acetylchlorid, Ä'thylchlorformiat oder Benzylchlorformiat zur Herstellung der Tetra-N-acetyl-, Tetra-N-äthoxycarbonyl- oder Tetra-N-carbobenzoxy-Derivate des Neamins oder Ribostamycins umgesetzt werden.

Die derart hergestellten Tetra-N-acetyl-, Tetra-N-äthoxycarbonyl- oder Tetra-N-carbobenzoxy-Derivate des 3^f,4'-Dideoxyneamins oder 3'_r4'-Dideoxyribostamycins können anschließend in bekannter Weise so behandelt werden, daß die anderen Hydroxylgruppen als in 6-Stellung dieser Derivate mit bekannten Hydroxylgruppenmaskierungsmit- :. teln,.wie Verbindungen zur Einführung von. Acylresten oder der Isopropyliden-, Cyclohexyliden-, Benzyliden- oder der Benzylgruppe, sämtlich oder teilweise blockiert werden. Die Einführung von Hydroxylgruppenmaskierungen bei allen anderen Hydroxylgruppen außer der in 6-Stellung dieser Derivate kanni in der gleichen Weise wie bei der Herstellung von Tetra-N-carbobenzoxy-3¹ »4^fs2^H,3."-di~- cyclohexyliden-5"-0-(i-methoxycyclohexyl)-ribostamycin erreicht werden, wie es in "Journal of Antibiotics" £5, (1972), Seiten 613 bis 616 beschrieben ist. Das derart hergestellte Derivat mit den Schutzgruppen wird dann; durch Umsetzen mit einer (S)-Ct-Hydroxy- _ ui-aminosäure der. allgemeinen Formel (T)

H₁H₂N(CH₂) CH(OH)COOH . (V)

verestert, in der E₁, Rp und η die vorstehend angegebenen Bedeu-

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tungen haben. Man kann auch ein funktionelles Derivat der Aminosäure der allgemeinen Formel (V) in einem wasserfreien Lösungsmittel in Gegenwart eines Dehydratisierungsmittel verwenden, um ein 6-0-((S)-Ot-Hydroxy-U)-aminoacyl)-Derivat von 3' ,4 ' -Dideoxyneamin oder 3¹>4'-Dideoxyribostamycin herzustellen, bei dem die vier Aminogruppen des Neamin- bzw. Bibostamycinmoleküls durch Schutzgruppen und die Hydroxylgruppen ebenfalls durch Schutzgruppen maskiert sind. Wenn dieses derart hergestellte 6-0-((S)-A- -Hydroxy-(J-aminoacyl)-Derivat danrt in bekannter V/eise so behandelt wird, daß alle Aminogruppenmaskierungen und gegebenenfalls alle Hydroxylgruppenmaskierungen entfernt sind, kann das 6-0-((S)- -Ct-Hydroxy-W-aminoacyl)-Derivat vom 3' »4'-Dideoxyneamin oder 3',4'-Dideoxyribostamycin der vorstehenden allgemeinen Formel (III) hergestellt werden, wobei die Reste R₁, R₂ und Y jeweils Wasserstoffatome sind.

Wenn man beabsichtigt, eine organische Verbindung mit sowohl Aminogruppen als auch Hydroxylgruppen in ihrem Molekül vorzugsweise an den Hydroxylgruppen zu acetylie'ren, hat man die Aminogruppen durch Protonieren mittels einer starken organischen Säure, wie Trifluoressigsäure, zu schützen versucht, um so die Aminogruppen zu schützen, und dann die Hydroxylgruppen vorzugsweise unter Verwendung eines üblichen Acetyli<?5*tingsmittels, wie Acetylchlorid, Essigsäureanhydrid oder eines gemischten Anhydrids, acetylieren können.(J. Bello und J.R. Vinograd in "Journal of American Chemical Society" 78 (1956), Seite 1369). Bei Anwendung dieses bekannten Verfahrens zum Protonieren einer Aminogruppe mit einer starken organischen Säure, wie Trifluoressigsäure, zum

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Schutz der Aminogruppe des ursprünglichen 3¹ ,4'-Dideoxyneamins odfcr 3'j4'-Dideoxyribostamycins kann das 6-0-((S)-d -Hydroxy-U> -aminoacyl)-Derivat von 3¹,4'-Dideoxyneamin oder 3',4'-Dideoxyribostamycin der allgemeinen Formel (III) auch auf folgendem Wege hergestellt v/erden: 3¹ ,4*-Dideoxyneamin oder 3¹ ,4^f-Dideoxyribostamycin in der freien basischen Form wird unter Eiskühlung in Trifluoressigsäure gelöst. Die erhaltene lösung wird mit Äthyläther vermischt, um ein solches Srifluoracetat des 3¹j4'-Dideoxyneamins oder 3^f>4' -Dideoxyribostamycins auszufällen, bei dem jede der vier Aminogruppen des 3^! ,4'-Dideoxyneamin- bzw. 3' ,4'-Dideoxyribostamycin-Moleküls durch das Ürifluoressigsäure-Molekül geschützt ist. Dieses derart gebildete 3'}4'-Dideoxyneamin- bzw. 3',4'-Dideoxyribostamycin-trifluoracetat wird danach mit einer (S)-Ot-Hydroxy-W-aminosäure der allgemeinen Formel (T) in Lösung in einem organischen Lösungsmittel, wie Dimethylformamid, Aceton, oder Tetrahydrofuran, unter Eiskühlung und in Gegenwart einer starken Säure oder einem Wässerabspaltungsmittel, wie Dicyclohexylcarbodiimid, verestert oder kondensiert. Die Säure der allgemeinen Formel (V) kann zweckmäßigerweise in Form ihres funktioneilen Derivats, wie dem Säurehalogenid, dem Azid, einem reaktionsfähigen Ester oder gemischten Anhydrid, vorliegen. Bei der Veresterung des 3^! >4' -Dideoxyneamin- oder '3 ' ^'-Dideoxyribostamycin-^rifLuöracetat mit einer Säure der allgemeinen Formel (V) sind alle Hydroxylgruppen, einschließlich der 6-Hydroxylgruppe, des 3^I>4¹- -Dideoxyneamin- bzw. 3¹ ^'-Dideoxyribostaniycin-Moleküls frei und werden zufällig durch die Säure der allgemeinen Formel (V) O-aminoacyliert, so daß sich ein Gemisch von mono- und di-0-aminoacylierten 3'>4'-Dideoxyneaminen oder 3',4'-üideoxyribostamycinen:

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(in Form des Trifluoracetats) oder ein Gemisch von mono- bis tetra- -O-aminoacylierten 3¹ >4' -Dideoxyribostamycinen (in Form des Trifluoracetats) bildet. Wenn man dieses Gemisch der O-aminoacylierten 3'^'-Dideoxyneamin- oder der 3'^'-Dideoxyribostamyciii-tri-fluoracetate mit einer Base neutralisiert, erhält man Gemische von O-aminoacylierten 3',4'-Dideoxyneaminen oder 3'_T4'-Dideoxyribostamycinen, die ein 6-0-( (S)-Ci. -Hydroxy- U)-aminoacyl)-Derivat von 3'|4'-Dideoxyneamin oder 3',4'-Dideoxyribostamycin der allgemeinen Formel (III) enthalten. Aus den vorgenannten Gemischen der O-aminoacylierten 3'»4'-Dideoxyneaminen oder 3¹»4'-Dideoxyribostamycinen kann man die 6-0-((S)-cC-Hydroxy-W-aminoacyl)-Derivate von 3'>4'-Dideoxyneamin oder 3'>4'-Dideoxyribostamycin der allgemeinen Formel (III) mittels eines chromatographischen Verfahrens unter Verwendung von zum Beispiel Gellulose-Pulver, Silikagel oder, eines dreidimensional vernetztenDextrans (das im Handel unter der Bezeichnung "Sephadex G-15" von der Firma Pharmacia Co., Schweden, erhältlich ist) isolieren. Die vorgenannten Gemische der O-aminoacylierten 3',4'-Dideoxyneamine oder 3'>4^f-Dideoxyribostamycine, die das 6-0-((S)-ot -Hydroxy- ί^-aminacyl)-Derivat von 3'»4'-Dideoxyneamin oder 3'>4'-Dideoxyribostamycin enthalten,, können als solche unmittelbar als Ausgangsmaterial beim erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzt werden, bevor oder nachdem die Trifluoressigsäure aus den Verbindungen durch Neutralisieren mit einer Base - wie vorstehend ausgeführt - freigesetzt worden ist. Dies hat seinen Grund darin, weil die (S)-A-Hydroxy-vo -aminoacyl-Substituenten an den anderen Hydroxylgruppen als an der in 6-Stellung in diesen Gemischen der O-aminoacylierten Produkte als Maskierungen yom Acyl-Typ für die.Hydroxylgruppen Y - wie vorstehend aus-

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geführt - angesehen werden können. Wenn' die Gemische der O-aminoacylierten 3¹,4'-Dideoxyneamine oder 3¹,4*-Dideoxyribostamycine der Einwirkung eines basischen Mediums beim erfindungsgemäßen Verfahren ausgesetzt werden, bildet sich das gewünschte 1-N-((S)-ql- -Hydroxy-ι*?-aminoacyl)-Derivat von 3' >4 '-Dideoxyneamin oder 3' >4'- -Dideoxyribostariiycin der allgemeinen. Formel (II) als einziges Acyl-Wanderungsprodukt, da die Wanderung des (S) -Φ -Hydroxy- W- -aminoacyl-Substituenten von einer Hydroxylgruppe zu einer Aminogruppe lediglich von der 6-Hydroxylgruppe zur 1-Aminogruppe stattfindet, vorausgesetzt daß es sich um ein 3'»4'-Dideoxyneamin oder 3',4'-Dideoxyribostamycin der allgemeinen Formel (III) als Ausgangsmaterial handelt. Die N-aminoacylierte Verbindung kann durch Einengen des Reaktionsgemischsausgefällt, dann abfiltriert und schließlich in Wasser gelöst werden, um eine wäßrige Lösung der Verbindung vom pH-Wert um 8 herzustellen. Diese lösung kann dann an einer Säule von vernetztem Dextran (in der Ammoniumsalz-Form) chromatographisch aufgetrennt werden, um das erwünschte 1-N-((S)- - &■-Hydroxy-W-aminoacyl)-Derivat von 3'>4'-Dideoxyneamin oder 3',4'-Dideoxyribostamycin der allgemeinen Formel (II) zu isolieren. Aktive Fraktionen des aus der SHuIe ausfließenden Eluats, die das 1 -N- ((S) -Ck -Hydroxy- W -aminoacyl) -Derivat von 3',4'-Dideoxyneamin oder 3',4'-Dideoxyribostamycin enthalten, können durch den Oxydationstest mit Perjodsäure festgestellt werden, wie das Vorliegen eines 1-N-Acyl-Substituenten nach diesem Test feststellbar ist ("Tetrahedron Letters" 28 (1971), Seiten 2624 bis 2628). .

Wenn ,das 3'»4'-Dideoxyneamin- oder 3'^'-Dideoxyribostamycin-tri- fluor'acetat mit einem (S)-<£-Hydroxy-W -aminosäure-Derivat der allgemeinen Formel (V) verestert wird, bringt man vorzugsweise

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1 MoldesTxjfiiaaracetats mit etwa 3 bis 7 Mol des Aminosäure-Derivats bei einer Temperatur von 50 bis 100⁰G in Berührung. Wenn, eine Verbindung der allgemeinen Formel (III) in Form des Trifluoraeetats unmittelbar der Einwirkung des basischen Mediums, zum Beispiel einer Lösung von Hydrazin in wäßrigem Äthanol, ausgesetzt wird, findet die Wanderung des 6-0-((S)- c*·-Hydroxy- W -aminoacyl)-Substituenten von der 6-Hydroxylgruppe zur 1-N-Aminogruppe gleichzeitig mit oder nach der Freisetzung der Trifluoressigsäure aus der Ausgangsverbindung der allgemeinen Formel (III) in Form des Trifluoracetats statt. Wenn in diesem Fall die Trifluoracetat-Verbindung der allgemeinen Formel (III) unmittelbar der Einwirkung des basischen Mediums ausgesetzt wird, findet tatsächlich die Bildung des Produktes der allgemeinen Formel (IV) aus der Verbindung der allgemeinen Formel (III) in Form des Trifluoraeetats wiederum über die sich im Reaktionsgemisch in situ bildende Verbindung der allgemeinen Formel (III) selbst statt.

Der grundlegende Weg zur Herstellung des Endproduktes der allgemeinen Formel (II) kann, wenn man vom 3¹,4'-Dideoxyneamin oder 3',4^!-Dideoxyribostamycin der allgemeinen Formel (I) nach vorliegender Erfindung ausgeht, nach dem folgenden Reaktionsschema Verlaufen, wenn man beim Reaktionsschema die Reaktionen zur Einführung der Aminogruppen- und Hydroxylgruppenmaskierungen beim ursprünglichen 3'f4'-Dideoxyneamin oder 3'^'-Dideoxyribostamycin, die Anwesenheit der Aminogruppen- und Hydroxylgruppenmaskierungen bei den Reagentien und Zwischenprodukten und die Reaktionen zum Abspalten der Aminogruppen- und Hydroxylgruppenmaskierungen aus dem Produkt wegläßt:

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CH₂NH₂

NH,

OH

(S)

N(CH₂)_nCH(OH)COOH

Veresterung

NH,

O - OCH(OH)(CH₉) NR₁R
κ ά η ι

Acyl-Wanderung

(S)

NHCH(OH)

OH

Freisetzung der R₁ und R₂-Reste

NH,

(S)
NHCOCH(OH)(CH₂)_n

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Unter den beim Verfahren verwendeten Aminosäuren der allgemeinen Formel (V) kann eine (S) -οί,-Hydroxy-W-amino säure der allgemeinen Formel (V), bei der R. und R„ keine Wasserstoffatome sind, zweckmäßigerweise eine (S)-Ot -Hydroxy- W -N-p nt hai imino säure oder eine (S)-<t-Hydroxy-U^-N-carbobenzoxyaminosaure sein. Eine (S)-ot-Hydroxy-uJ -N-pht hai imino säure der allgemeinen Formel

(S)

HOOC-

kann man herstellen, indem man ein Hydrochlorid einer (S)-Ct^-Diaminosäure der allgemeinen Formel

(S)

HOOC-CH(NH₂) (CH₂)_n-NH₂.mHCl

in der m die Zahl 1 oder 2 bedeutet, mit basischem Kupfercarbonat in einer wäßrigen alkalischen Lösung und das erhaltene Kupfercarboxylat mit N-Carboäthoxyphthalimid umsetzt und das erhaltene Kupfersalz der (S)-^-Amino-oO-N-phthaliminosäure der allgemeinen. Formel

(S)

Cu ⁺["OOC-CH(NH₂)(CH₂)_n-N

mit verdünnter Salzsäure in Methanol behandelt und schließlich das entstandene (S)-Φ-Amino-LJ-N-phthaliminosäure-hydrochlorid mit Natriumnitrit in wäßriger Essigsäure zur Herstellung der erwünsch-

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ten (S) -ei. -Hydroxy- W -N-phthaliminosäure umsetzt.

Als Aminosäure der allgemeinen Formel (V) kann natürlich auch eine solche (S) - d. -Hydroxy-u)-aminosäure der allgemeinen Formel (V) verwendet werden, bei der R. und R₂ Wasserstoffatome oder andere bekannte Schutzgruppen als die vorgenannte Phthaioylgruppe sind. Zur Herstellung einer (S)- <L -Hydroxjr- W-aminosäure der allgemeinen Formel (V), bei der R. ein Wasserstoffatom und R₂ unabhängig davon ein Acyl-, Alkoxycarbonyl-, Aralkoxycarbonyl- oder ein Aryloxycarbonylrest ist, kann man in an sich bei der Peptid-Synthese bekannten Weise eine ^-Hydroxy-ω-aminosäure der allgemeinen Formel

(S)

HOOG-CH(OH)-(CH₂)_n-NH₂

in der η eine ganze Zahl von 1 bis 4 bedeutet,

(a) mit einem Acylchlorid der allgemeinen Formel

R,GOG1

in der R, ein solcher Rest ist, daß die Gruppierung R^GO-den Rest R₂ bildet, der ein Acylrest, wie die Acetyl- oder Benzoylgruppe, ist, in einem wasserfreien organischen Lösungsmittel, wie Methanol, oder

(b) mit einem Alkyloxy car bonyl-, Aralkj^loxycar bonyl- oder einem Aryloxycarbonylchlorid der allgemeinen Formel '

R₄O-CO-Cl

in der R. ein solcher Rest ist, daß die Gruppierung. R₄O-GO-den Rest R₂ bildet, der ein Alkyloxycarbonyl-, Aralkyloxycarbonyl- oder ein Aryloxycarbonylrest, wie die Butoxycarbonyl-,

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Benzyloxycarbonyl- oder die Phenoxycarbonylgruppe, ist, in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Äthanol oder Aceton, unter neutralen oder basischen Bedingungen umsetzt.

Die Erfindung wird jetzt anhand der nachstehenden Beispiele näher erläutert, ohne auf diese Beispiele beschränkt zu sein.

Beispiel 1.

(a) In 8,3 ml Trifluoressigsäure werden unter Kühlung mit Wasser 831 mg 3' ,V-Dideoxyneamin in Form der freien Base eingerührt. Etwa 60 Minuten später wird die erhaltene Lösung mit 100 ml Äthyläther vermischt. Der sich bildende Niederschlag (1430 mg) von 3',4'-Dideoxyneamin-trifluoracetat wird abfiltriert. Dann werden 745 mg 3'>4^f-Dideoxyneamin-trifluoracetat mit 807 mg (S)-O^-Hydroxy-/-N-phthalimino-m-buttersäure in pulverförmigem Zustand vermischt. Das erhaltene Gemisch wird in 20 ml eines 10:1-Gemisches von Tetrahydrofuran und Dimethylformamid gelöst, wozu anschließend unter Eiskühlung 5,5 ml einer Lösung von 1530 mg Dicyclohexylcarbodiimid in Tetrahydrofuran gegeben werden. Das erhaltene Gemisch wird 60 Minuten unter Eiskühlung und weitere 120 Minuten bei Raumtemperatur gerührt, um eine Veresterung zu erreichen. Dann werden 0,4 ml Eisessig zum Reaktionsgemisch gegeben, um überschüssiges Dicyclohexylcarbodiimid zu zersetzen. Das Reaktionsgemisch wird danach bei Rauntemperatur über Nacht stehengelassen. Der gebildete Niederschlag von Dicyclohexyl-harnstoff wird abfiltriert.und das Filtrat zur Trockne eingedampft. Man erhält 1530 mg eines festen Produktes, das aus 6-0-((S)-d- -Hydroxy-f -N- -phthalimino-n-butyryl)-3',4'-dideoxyneamin-trifluoracetat und anderen O-((S)-oL-Hydroxy- V-N-phthalimino-n-butyryl)-3',4'-di-

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-de.oxyneaminen in Form ihrer Trifluoracetate besteht.

(b) 1500 mg des das 6-0-((S)-*-Hydroxy- f-N-phthalimino-n-butyryl)-3',4'-dideoxyneamin-trifluoracetat enthaltenden festen Produktes werden in 35 ml eines G-emisches aus wäßrigem 80prozentigen Hydrazin-hydrat und Äthanol im Verhältnis 1:10 gelöst. Die erhaltene lösung wird 90 Minuten auf einem Wasserbad von 83⁰G erwärmt, um die Freisetzung der Trifluoressigsäure, die Acyl-Wanderung und die Abspaltung der Phthaloylgruppe zu bewirken. Man erhält 1-N-((S)- oi. -Hydroxy- ^-amino-n-butyryl)-3^f ,4'-dideoxyneamin zusammen im Gemisch mit anderen N-((S)- 06-Hydroxy- ^-amino-n-butyryl)-3'j4'-dideoxyneaminen. Man dampft das Reaktionsgemisch zur Trockne ein und extrahiert den festen Rückstand mit 50 ml V/asser. Nach dem Abfiltrieren von Unlöslichem wird die wäßrige lösung (das Filtrat) durch Zusatz von verdünnter Schwefelsäure auf pH 8,0 eingestellt. Die Lösung wird durch eine Säule laufen gelassen, die .15 ml eines vernetzten Dextrans in der Ammoniumsalz-Form enthält (ein unter der Bezeichnung "CM-Sephadex G-25" im Handel erhältliches Molekularsieb auf Basis von dreidimensional vernetztem Dextran mit Carboxymethylgruppen als schwachsauren, als Ionenaustauscher funktionierenden Gruppen). Nach dem Waschen der Säule mit 50 ml Wasser und dann mit 200 ml 0,1-n wäßrigem Ammoniak wird die Säule unter Verwendung von 0,2-n wäßrigem Ammoniak eluierto Das Eluat wird in 10 ml-Fraktionen gesammelt. Fraktionen, die nur nicht umgesetzte Ausgangsverbindungen enthalten, werden verworfen. Die aktiven Fraktionen Nr. 18 bis 34 werden vereinigt und zur Trockne eingedampft.ο Man erhält 156,3 mg 1-N-((S)-Oi-Eydroxyjf-amino-n-butyryD-J' ,4'-dideoxyneamin.

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Analyse für

ber. gef.

46,
46,

8,62$ 8,48$

N 17,10?S;

Die Verbindung zeigt eine optische Drehung von /"<£ "/£ = +37° (c = 1,2; in H₃O) und einen Brechungsindex H₃₁ _fV^_ideoxyneamin von 0,47 bei der Papierchromatographie bei Verwendung von n-Butanol/Pyridin/Essigsäure/Wasser im Verhältnis 6:4:1:3 als Ent-Wicklungsmittel. Die Zahl des R₃₅, _>4.__{Dldeoxyneamin} kennzeichnet das Verhältnis des Wanderungsabstandes des Flecks von 1-N-((S)- - (L -Hydroxy- If-amino-n-butyryl) -3' ,4' -dideoxyneamin zu dem des 3',4'-Dideoxyneamins. Die Verbindung besitzt keinen klaren Schmelzpunkt, doch zersetzt sie sich bei 19O⁰G. Die Verbindung besitzt eine Mindesthemmkonzentration gegenüber dem Wachstum verschiedener Mikroorganismen, wie es aus der Tabelle I ersichtlich ist.

TABELLE I

untersuchter Mikroorganismus	209P	Inkiibations- mediunL	Mindesthemm- konzentration (mcg/ml)
Escherichia coli NIHJ	410 R81	Nähragar	3,12
Escherichia coli K-12		Nähragar	3,12
Staphylococcus aureus FDA	12	Nähragar	3,12
Escherichia coli K-12 ML 1	Nähragar	12,5
Pseudomonas aeruginosa A3	Nähragar	12,5
Pseudomonas aeruginosa Nr.	Nähragar	6,25

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Beispiel 2.

(a) In 25 ml Trifluoressigsäure werden unter Kühlung mit Eis 605 mg 3'j4^f-Dideoxyribostamycin in Form der freien Base eingerührt. Zur lösung wird das Gemisch 120 Minuten bei Raumtemperatur stehengelassen. Die erhaltene Lösung wird mit 200 ml Äthyläther vermischt .und gekühlt. 'Dabei scheiden'sic:h 1201 mg 3',4^!- -Dideoxyribostamycin-trifluoracetat ab, die abf;Lltriert werden. 1005 mg dieser Verbindung werden zusammen mit 803 mg (S)-fli-Hydroxyif -N-phthalimino-n- buttersäure in 12,5 ml Tetrahydrofuran gelöst. Die so erhaltene Lösung wird mit Eis gekühlt und dann unter Rühren und Eiskühlung mit einer eiskalten Lösung von 1,8g Dicyclohexylcarbodiimid in 7 ml Tetrahydrofuran vermischt. Das Rühren wird 180 Minuten bei Raumtemperatur fortgesetzt. Danach werden 0,4 ml Eisessig zugegeben, um überschüssiges Dieyclohexylcarbodiimid zu zersetzen* Das Reaktionsgemisch wird dann bei Raumtemperatur über Nacht stehengelassen, währenddessen sich der so gebildete unlösliche Dicyclohexyl-harnstoff abscheidet, der abfiltriert wird. Das Filtrat wird zur Trockne eingedampft. Man erhält 1735 mg eines festen Produktes, das aus 6-0-( (S)-Ot-Hydroxy- -|f-N-phthalimino-n-butyryl)-3'^'-dideoxyribostamycin-trifluoracetat zusammen mit anderen 0-( (S)- d'-Hydroxy- jf-N-phthalimino- -n-butyryl)-3'>4'-dideoxyribostamycinen in Form ihrer Trifluoracetate besteht.

(b) 1700 mg des das 6-0-((S)-C^-Hydroxy-f-N-phthaiimino-n-butyryl)-3'^'-dideoxyribost&mycin-trifluoracetat enthaltenden festen Produktes werden in 40 ml eines Gemisches aus wäßrigem 80prozentigen Hydrazin-hydrat und Äthanol im Verhältnis 1:10 gelöst. Die

erhaltene Lösung wird 90 Minuten auf einem Wasserbad von 83°C er-50981270-973 . . .

wärmt, um die Freisetzung der Trifluoressigsäure, die Acyl-Wanderung und die Abspaltung der Phthaloylgruppe zu bewirken. Man erhält 1-N-((S)-ot--Hydroxy- |f-amino-n-butyryl)-V ,4' -dideoxyribostamycin zusammen im Gemisch mit anderen N-((S)-öL-Hydroxy-^-amino- -n-butyryl)-3'>4^!-dideoxyribostamycinen. Man dampft das Reaktionsgemisch zur Trockne ein und extrahiert den festen Rückstand mit 50 ml Wasser. Nach dem Abfiltrieren von Unlöslichem wird die wäßrige lösung (das Filtrat) durch Zusatz von verdünnter Schwefelsäure auf pH 8,0 eingestellt. Die wäßrige Lösung wird durch eine Säule laufen gelassen, die 15 ml des im Beispiel 1 genannten Dextrans enthält. Nach dem Waschen der Säule mit 50 ml Wasser und· dann mit 200 ml 0,1-n wäßrigem A"mmoniak wird die Säule unter Verwendung von 0,2-n wäßrigem Ammoniak eluiert. Das Eluat wird in. 10 ml-Fraktionen gesammelt. Fraktionen, die nicht umgesetzte Ausgangsverbindungen enthalten, werden verworfen. Die Fraktionen Nr. 14 bis 30 werden vereinigt und zur !Trockne eingedampft. Man erhält 238,2 mg 1-N-( (S)- (^-Hydroxy- Ϋ -amino-n-butyryD-3¹ ,4' -dideoxyribostamycin.

Analyse	für C, C	46	G	8	H	12	N
		46	,57$	7	,00$	12	,93$;
		,01$	,89$	,71$.
>1^H41^N5⁽


^}10^#H2^0:
ber.
gef.

Die Verbindung zeigt eine optische Drehung von /jcL_7j{ = +27° (c = 1,2; in Η_?0) und einen Brechungsindex R₃₁^₄₁__{Dideoxyribosta}.

in ^von 0»46 bei der Papierchromatographie bei Verwendung von n-Butanol/Pyridin/Essigsäure/Wasser im Verhältnis 6:4:1:3 als Ent-Wicklungsmittel. Die Zahl des H3. _>4.__DideoXy_{ribostanQrcln} kennzeichnet das Verhältnis des Wanderungsabstandes des Flecks von 509812/0 973

1-N-((S)- oL -Hydroxy- ^-amino-n-butyryl)-3^r ,4'-dideoxyribostamycin zu dem des 3',4'-Dideoxyribostamycins. Die Verbindung besitzt keinen klaren Schmelzpunkt, zersetzt sich jedoch bei etwa 190⁰C. Die Verbindung besitzt eine Mindesthemmkonzentration gegenüber dem Wachstum verschiedener Mikroorganismen, wie es aus der Tabelle II ersichtlich ist.·

TABEIIE II

untersuchter ' Inkubations- Mindesthemm-

Mikroorganismus mediifm konzentration

(mcg/ml)

Escherichia coli NIHJ Escherichia coli K-12 Staphylococcus aureus PDA 209P Escherichia coli K-12 ML 1410 R81 Pseudomonas aeruginosa A3 Pseudomonas aeruginosa Nr. 12

Die vorstehenden Beispiele können mit gleichem Erfolg wiederholt werden, indem anstelle der in den vorstehendem Beispielen verwendeten Reaktionsteilnehmer und/oder angewendeten Arbeitsbedingungen die in der Erfindung im allgemeinen und im besonderen beschriebenen Reaktionsteilnehraer und/oder Arbeitsbedingungen angewendet werden»

Aus der vorstehenden Beschreibung kann der Fachmann ohne weiteres die wesentlichen Merkmale der Erfindung feststellen und, ohne sich vom Geist und Umfang der Erfindung zu entfernen, verschiedene Änderungen und Modifikationen der Erfindung machen, um sich den verschiedensten üblichen Bedingungen anzupassen»

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Nähragar	1,56
Nähragar	1,56
Nähragar	1,56
Nähragar	3,12
Nähragar	6,25
Nähragar	6,25

Claims

Patentansprüche

Λ)J Verfahren zur Herstellung von 1-N-((S)-cL-Hydroxy-W-aminoacyl)-Derivaten von 3',4'-Dideoxyneamin oder 3',4•-Dideoxyribostamycin der allgemeinen Formel (II)

CH₂NH₂

NH

2 (S)

NHCOCHOH
ι

(II)

in der R ein Wasserstoffatom oder die ß-D-Ribofuranosyl-Gruppe

CH₂OH

ist und η eine ganze Zähl von 1 bis 4 bedeutet, dadurch gekennzeichnet , daß man auf ein 6-0-((S)-Oi-Hydroxy-(V-aminoacyl)-Derivat von 3'»4'-Dideoxyneamin oder 3^!,4·- -Dideoxyribostamycin der allgemeinen Formel (III)

CH₂NH₂

(III)

■ ^(s)

C-COCH (OH) (CH₂-)

in der R' ein Wasserstoffatom, eine bekannte Hydroxylgruppenmas-

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kierung oder ein ß-D-Ribofuranosyl-Rest der allgemeinen Formel

CH₂OY

: OY OY . ·

ist, in der die*Reste.Y gleich oder verschieden sind und Wasserstoffatome oder bekannte Hydroxylgruppenmaskierungen bedeuten, Η., und R₂ gleich oder verschieden sind und Wasserstoffatome oder bekannte Aminogruppenmaskierungen bedeuten, wobei R. und R₂ zusammen auch die Phthaioylgruppe bilden können, und η eine ganze Zahl von 1 bis 4 bedeutet, ein basisches Medium derart einwirken läßt, daß eine Wanderung des Acylrestes unter Bildung einer "Verbindung der allgemeinen Formel (IV).

CH₂NH₂

(S)

NHCOCHOH

(IV)

OH

in der R', R., Rp und .n die vorstehenden Bedeutungen haben, eintritt und daß man, wenn mindestens eine der Aminogruppen- und bzw. oder Hydroxylgruppenmaskierungen an der Verbindung der allgemeinen Formel (IV) verblieben ist, diese Aminogruppen- und/oder Hydroxylgruppenmaskierungen unter Bildung einer·Verbindung der allgemeinen Formel (II) abspaltet.
2) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man ein 6-0-.( (S)-et-Hydroxy-CJ-aminoacyl)-Derivat von j5' ,4^!-Dideoxyneamin der allgemeinen Formel- (III) , wobei R₂. und Rp zusammen die Phtha-

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loylgruppe bilden und R' ein Acylrest der allgemeinen Formel -COCH(OH)(CHg)_nNR₁H₂ ist, wobei wiederum R₁ und R₂ zusammen die Phthaioylgruppe bilden, der Einwirkung eines basischen Mediums unterwirft.
3) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man ein 6-0-((S)- «t-Hydroxy-W-aminoacyl)-Derivat von 3',4'-Dideoxyribostamycin der allgemeinen Formel (III), wobei R₁ und R_? zusammen die Phthaloylgruppe bilden und R' ein ß-D-Ribofuranosylrest der allgemeinen Formel

CH₂OY

OY

ist, wobei mindestens einer der Reste Y ein Aminoalkanoylrest der allgemeinen Formel -COCH(OH)(CH₂) NR₁Rg ist, bei dem wiederum R₁ und R₂ zusammen die Phthaloylgruppe bilden, der Einwirkung eines basischen Mediums unterwirft.
4) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Ausgangsverbindung der allgemeinen Formel (III) der Einwirkung eines basischen Mediums unterwirft, das ein organisches Lösungsmittel für die Ausgangsverbindung und als Base ein Alkalimetallhydroxid oder -carbonat oder ein Amin enthält.
5) Verfahren nach mindestens einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man als basisches Medium ein Gemisch

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aus Hydrazin und wäßrigem Äthanol vervrendet.
6) Verfahren nach mindestens einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man zur Erzeugung von 6-0-((S)-Oi- -Hydroxy- V^/-amino-n-butyryl)-3^l ,4'-dideoxyneamin. das 6-0-((S)- - al-Hydroxy- jf -N-phthalimino-n-butyryl)-3',4'-dideoxyneamin oder dessen Trifluoracetat mit einer wäßrigen Hydrazinlösung behandelt.
7) Verfahren nach mindestens einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man.zur Erzeugung von 6-0-((S)-d- -Hydroxy- ir-amino-n-butyryl)-^¹,4'-dideoxyribostaraycin das 6-0-(Cs)-et-Hydroxy- y-N-phthalimino-n-butyryl)-3^f ,4'-dideox3'- -ribostamycin oder dessen Trifluoracetat mit einer wäßrigen Hydrazinlösung behandelt.

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