DE2336401A1

DE2336401A1 - Enzymatisches salz, verfahren zu dessen herstellung und therapeutische mittel, die es enthalten

Info

Publication number: DE2336401A1
Application number: DE19732336401
Authority: DE
Inventors: Alberto Fiecchi
Original assignee: Biores S A S Del Dott Livio Ca; Bioresearch Sas del Dott livio Camozzi Ec
Current assignee: Bioresearch Netherland Bv Rotterdam Nl
Priority date: 1972-08-02
Filing date: 1973-07-17
Publication date: 1974-02-14
Also published as: DE2336401C3; DK131868C; JPS4992215A; NO137941B; NL7310706A; AU5868073A; SU646915A3; IE37913L; YU36037B; IL42764A; MX4544E; NL152864B; FI52466B; PL87381B1; AU474015B2; AT341684B; RO63451A; ES417377A1; SE400085B; JPS5235726B2

Description

PATENTANWÄLTE

PROF. DR. DR. J. REITSTÖTTER 233GZiOT

DR.-ING. WOLFRAM BUNTE ^C ^{H U} '

DR. KARL GEORG LÖSCH

D-8OOO MÜNCHEN 13. BAUERSTRASSE 22. POSTFACH 7βΟ · FERNRUF COSlI). 37 68 83 * TEi-EX 52152OS ISAR d

Hünchen, den ' ?· JULI M/12 664

ERREKAPPA EUROTERAPICI S.a. S.

Enzymatisches Salz, Verfahren zu dessen Herstellung und therapeutische Mittel,-die es enthalten

Die vorliegende Erfindung betrifft ein neues enzymatisches Salz, das Verfahren zu dessen Herstellung und die therapeutischen Mittel, die es enthalten. Die vorliegende Erfindung betrifft insbesondere ein neues extrem stabiles Salz von S-Adenosyl-L-Methionin (SAM), ein· Verfahren, gemäß dem es einfach und wirtschaftlich in industriellem Maß. stab hergestellt werden kann, sowie neue pharmazeutische Mittel, die es als aktiven Bestandteil enthalten und zur Anwendung in zahlreichen Gebieten der Humanmedizin dienen.

SAM ist eigentlich ein Produkt natürlichen Ursprungs, das in allen lebenden Organismen von Bakterien bis Pflanzen, von einzelligen Organismen bis zu höheren Säugetieren und

409807/1120

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beim Menschen vorkommt, dessen Struktur seit einiger Zeit bekannt ist und das durch folgende Formel gekennzeichnet ist:

CH,

NH

CH-CH-CH-CH-CH₂ -S- CH₂-CH₂-CH - COOH

/OH OEf

:—ο—

J ' worin X ein generisches Anion bedeutet.

I Bei lebenden Organismen wird SAM durch Einwirken von Enzymen 1 (S-Adenosylmethioninsynthetase oder S-Adenosy!transferase) im cytoplasmatisehen Bereich ausgehend von Methionin, das mit den Nahrungsmitteln aufgenommen wird, oder von ATP, das.

als Energiereserve in jeder lebenden Zelle vorhanden ist,

gebildet.

j Seit einiger Zeit ist auch bekannt, daß SAM bei einer großen

ί Anzahl biologischer Reaktionen zur enzymatisehen Trans-

\ methylierung von fundamentaler Bedeutung ist, weswegen es

; in der Biochemie immer als ein sehr wichtiges Reagens

; betrachtet worden ist.

; Das große Problem bei dieser Substanz war jedoch ihre extreme

' Unbeständigkeit~ bei Umgebungstemperatur oder Temperaturen,

! die oberhalb Umgebungstemperatur liegen.

4Q9807/M2Ö

In den letzten Jahren versuchte die Forschung SAM in einem j Ausmaß zu stabilisieren, daß es in der biologischen Forschung ' verwendet werden kann, und man versuchte, Salze herzustellen, die unter normalen Temperatur- und Feuchtigkeitsbedingungen stabil sind: ' ■ . . /<

Auf diese Weise wurde SAM-chlorid und --sulfat hergestellt, die jedoch als Reagentien in der Biochemie nur für kurze ; Zeiträume brauchbar sind, da ihre Stabilität sogar in trockenem Zustand begrenzt'ist und die Verfahren zu ihrer Herstellung ■ ; nur zur Herstellung kleiner Mengen und bestimmt nicht zur Produktion in industriellem Maßstab verwendet werden können.'

Es wurde nun völlig -unerwartet ein neues- Salz von SAM gefunden,! das bei Umgebungstemperatur unabhängig von der Zeit stabil ist, das industriell mit hohen Ausbeuten und wirtschaftlich hergestellt werden kann und von dem sich gezeigt hat, daß , es überraschenderweise eine starke Heilkraft in vielen Bereiche'n.der Humantherapie, die oft ohne Zusammenhang unter- J einander ~sind, hat. . ;

Das erfindungsgemäße neue Salz ist ein Salz von SAM mit ; p-Toluolsulfonsäure der Formel SAM⁺CH₃CgH₄SO₃"" -2CH₃Q₆H₄SO₃H, das zum Zwecke der Beschreibung der vorliegenden Erfindung der Einfachheit halber SAM.C2^H2₃S-z0g genannt wird. !

Die Höhe des technischen Fortschritts· ist aus der nachstehenden Tabelle zu entnehmen, worin die zeitliche Stabilität bei 25°C jLn trockenen Zustand der beiden bisher bekannten stabilsten SAM-Salze, nämlich des Chlorids und des Sulfats, und des neuen Tri-p-toluolsulfonats verglichen werden. Die Zahlen geben den Prozentsatz an verbleibendem SAM nach den angegebenen Zeitspannen an;

— 3 —
07/Π20

TABELLEI

Anion 30 Tage 180 Tage 360 Tage 54θ Tage

Chlorid 65 — — '

Sulfat 91,7 61,0

Tri-p-toluol-

sulfonat 98,5 ■ 92,2 84,2 80,1

Das Verfahren zur Herstellung des neuen Salzes umfaßt erfindungsgemäß im wesentlichen die folgenden Stufen:

! (a) Behandeln von Hefe (Saccharomyces Cerevisiae, Torulopsis

; utilis, Candida utilis etc.) angereichert an SAM durch Zugabe
von Methionin unter geeigneten Bedingungen (Schlenk, ^:

\ Enzymologia 29, 283 (1965)) mit Äthyl- oder Methylacetat ; bei Umgebungstemperatur, um die Lysis der Zellen zu verursachen und 100 % des anwesenden SAM in Lösung zu überführen.

v, (b) Absorption der filtrierten wässrigen Lösung in einer

Kolonne schwachen kationischen Harzes in saurer Form. ; ι .

(c) Entfernung·der. Verunreinigungen durch Waschen mit Wasser
und dann mit 25 mMol Essigsäure.

(d) Selektives Eluieren von SAM mit einer wässrigen Lösung

von p-Toluolsulfonsäure. ;

(e) Neutralisation der überschüssigen p-Toluolsulfonsäure durch Behandeln mit einem starken oder schwachen anionischen ;

Harz (OH" Form), bis sich ein Molverhältnis p-Toluolsulfonsäure: SAM zwischen 3 und 10, bevorzugt etwa 6, ergibt. ■

^HA2664· ^! · . f . . · 2335401

(f) Konzentration unter Vakuum bei Umgebungstemperatur oder
Lyophilisation der Lösung bis ein endgültiges Volumen

zwischen 2-ynd 4-zwanzigstel des Aursgangsvolumens erreicht
ist, bevorzugt etwa 3/20. t

(g) Zugabe eines organischen mit Wasser mischbaren Lösungs-

mittels {[beispielsweise Äthyli Propyli Isbpropylalkohol,

[ Aceton, Meth^läthylketon, etc.) zu dem Konzentrat, das die

! Ausfällung §fs SAM. C^Hg^S-xOg-Salzes in praktisch reinem

: Zustand bewirkt.' · - j

Die Stufe (aj des erfindungsgemäßen Verfahrens wird unter 1

; Verwendung iiner Menge Acetat zwischen 1/20 und 1/5» bevorzugt j

1/10 des Ge%iichts der feuchten Zellen während einer Zeitdauer ι

j von zwischen 30 Minuten und 2 Stunden, bevorzugt .1 Stunde» ■ ΐ

! durchgeführt*

■ ί

t ■ · _ i

;, Die Lysis d§r Hefezellen, die mit organischen Lösungsmitteln _:

: durchgeführt wird, ist in dem erfindungsgemäßen Verfahren \

viel angenehmer als die üblicherweise mit Perchlorsäure, { Ameisensäure oder Essigsäure bei 60⁰G und dergleichen durch«
geführte, da sie keine hohen Temperaturen erfordert, die ; eine negativ© Wirkung auf die Stabilität von SAM haben, j insbesondere unter den pK-Bedingungen, die durch die Anwesenheit der lysierenden Säuren geschaffen werden. Darüber ·^: hinaus kann wegen des E'ehlens starker Säuren bei der Lösung \ ein schwaches kationisches Harz in der nachfolgenden Stufe ; in kleinen Mengen verwendet werden, so.daß normale Aus- j

rüstung ohne Korrosionsgefahr benutzt werden kann. ί

ι - " ί

^! Schließlich können durch die durch das organische Lösungsmittel durchgeführte Denaturierung der Proteine die ZeIl-■ rückstände leicht abfiltriert werden.

409807/1120 QRlGiNAt INSPECTED

Ei·« i

■ ν;

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Stufe (b) des erfindungsgemäßen Verfahrens wird bevorzugt

ν· ;

unter Verwendung einer Kolonne schwachen kationischen

Harzes, wie IRC-50, H⁺ Form, durchgeführt. , ι

Stufe (d) kann unter Verwendung von Lösungen bis zu !-»molarer ί Itottzentration von p-Toluolsulfonsäure in Wasser durchgeführt ι werden.

Dies ist in der nachfolgenden Stufe, gemäß der die Lösung · !konzentriert wird, von großem Vorteil. ι

feei der Neutralisierung Überschüssiger p-Toluolsulfoneäure \ $Ά Stufe (b) haben sich Amberlite I)FlA 900 oder Amberlite JR 45 Harze als besonders wirksam erwiesen.

, JSs wurde gefunden, daß das endgültige Verhältnis p-Toluol- !. Wlfonsäure i SAM kritisch ist hinsichtlich der Schaffung : 4er besten Bedingungen, da in der nachfolgenden Stufe, in der dag SAM-p-toluolsulfonat ausgefällt wird, alle anorganischen Xationsalze zusammen mit kleinen Mengen Verunreinigungen, die _; anwesend sein können, in Lösung bleiben, während eine quantitative Ausfällung des Salzes stattfindet.

Das Bisherige ist eine Beschreibung der bevorzugten Ausftibrungaform des Verfahrens zur erfindungsgemäßen Herstellung < von SAMtCgnH23S3OQ, welche die besten industriellen Ergebnisse "brachte, !

.Einige Modifikationen, die von uns mit guten Ergebnissen ! durchgeführt wurden, sind nachstehend aufgeführt, während | weitere für den Fachmann auf der Hand liegen. j

Ss ist erstem klar, daß das SAM-tri-p-toluolsulfonat aus wässrigen Lösung, die SAM enthält, ausgefällt werden kann.

- 6 4ÖT8Ö77T12Ö

ORIGINAL IRSPECTED

Dies, kann beispielsweise eine Lösung sein, die sich aus der '

ehzymati sehen Synthese oder chemischen Synthese von SAM ' ergibt, oder eine wässrige Lösung eines seiner löslichen

Salze. Jedoch wird in jedem Fall ein weniger reines Produkt ;

.in einer geringeren Ausbeute erhalten. ;

Eine weitere Modifikation des Verfahrens, besteht darin, daß
man das auf dem schwachen kationischen Harz adsorbierte SAM i mit einer wässrigen Lösung von Chlorwasserstoffsäure oder ; Schwefelsäure eluiert und nicht direkt mit p-Toluolsulfonsäure.

Die Chlorid- und Sulfatanionen können aus dem Eluat, beispielsweise mit einem anionischen Harz, geeignet entfernt werden, i eine berechnete Menge p-Tdluolsulfonsäure wird in einem Ver- ' hältnis zugegeben, das mit dem für die direkte Ausfällung
beschriebenen identisch ist und damit wird das Tri-p-toluol- \ sulfonat ausgefällt. Alternativ kann ein Chlorid oder Sulfat ; von verunreinigtem SAM aus den Eluaten ausgefällt werden,
nachdem man den Überschuss an Säure teilweise durch Ein-

dampfen öder Behandeln mit einer geeigneten Base entfernt
hat. Das so ausgefällte Sulfat oder Chlorid wird in Wasser
erneut gelöst und nach Eliminieren des Anions und Zugabe
von p-Toluolsulfonsäure in dem vorstehend beschriebenen Verhältnis wird das SAM-tri-p-toluolsulfonat ausgefällt.

Andere starke Säuren können auf ähnliche Weise zur Eluierung i von SAM verwendet werden, ohne daß sich jedoch besondere
Vorteile ergeben.

Die nachfolgenden Beispiele veranschaulichen das erfindungs- ■ gemäße Verfahren zur Herstellung des neuen Salzes unter Verwendung des bevorzugten Verfahrens und einiger Modifikationen,
schränken die vorliegende Erfindung jedoch in keiner Weise ' ein.

— 7 —
098 0Ύ/ΊΎ2

Beispiel

! Zu 90 kg Hefe, die gemäß Schlenk (Enzymologie 29, 283 (1965)) ^: mit 5,5 g/kg SAM angereichert ist, gibt man bei Umgebungs- [ j temperatur 9 1 Äthylacetat.

j :

, Nachdem man 1 Stunde kräftig gerührt hat, verdünnt man die Masse mit 40 kg Wasser. Man filtriert und wäscht und erhält 140

■ Liter Lösung, die' 3,55 g/l SAM enthält, was 99,5 % des im Ausgangsmaterial anwesenden entspricht. 14 Liter dieser Lösung absorbiert man auf 1 Liter Amberlite IRC 50 Harz, H⁺- Form und eluiert darin nacheinander a) mit Wasser, b) mit 0,025 η Essigsäure, c) mit einer 1-molaren Lösung von p-Toluolsulfonsäure. Die Fraktionen, die reich an praktisch reinem

■ SAM sind (Bestimmung durch DünnschichtChromatographie gemäß Anal. Biochim. 4, 16-28 (1971)) sind insgesamt 1,8 Liter und enthalten 85 % des in die Kolonne eingespeisten Produkts. Diese Lösung behandelt man mit 1,7 Liter Amberlite IRA 900 Harz 0H~ Form. Nach Filtrieren und Waschen des Harzes mit

^! Wasser erhält man eine Lösung, die 2,2 % p-Toluolsulfonsäure und 0,85 % SAM enthält. Man konzentriert die Lösung bei Um-

' gebungstemperatur unter Vakuum auf 600 ml und gibt dann Aceton zu. Es wird eines weißes, pulvriges, mikrokristallines Salz ausgefällt, das geruchlos, hygroskopisch und sehr wasserlöslich (mehr als 25 %) ist, wobei sich eine farblose _: Lösung bildet. Das Salz ist in Methanol oder Äthanol nicht sehr löslich und ist in Aceton, Methyläthy!keton, Chloroform, höheren Alkoholen und Benzol unlöslich.

Die Analysenergebnisse sind wie folgt:

- 8 TÖ'9807/1 120

M/12 664

j Analyse

berechnet: gefunden:

Außerdem:

■berechnet:

(Molekulargewicht 915,1)

C	,20	H	15	. N	18	S	,00
47	,9	5,	3	9,	2	14	,8
46	5,	9,	13

p-Toluolsulfonsäure 55,8 %

SAM , . ■ 42,5 %

p-Toluolsulfonsäure 56,4 %

SAM · , , 43,6 %

ι Gewichtsverlust durch Trocknen während 12 Stunden bei Um-,·· gebungstemperatur im Vakuum über P₂Oc : 1,5 bis 2 %.

i Feuchtigkeit, bestimmt nach Karl Fischer: 1,5 bis 2 %.

! Das UV^Spektrum der neuen Verbindung zeigt ein Absorptionsmaximum bei 256 nm. E 15 600 (in 6 η Schwefelsäure). Bei 260 nm, E = 16 300 (bei pH 7). Alle diese Daten stehen in

^: Einklang mit einer Verbindung der Formel

NH₂

CH,

NH.

CH-CH-CH-CH-CH₂ - S- CH₂-CH₂-CH - COOH^CH₃-C₆H₄-SO₃H

t I

'OH OH"
Q —

409807/1120

Die neue Verbindung wurde ferner identifiziert durch die ehzymatische Methode, die auf der enzymatisehen Methylierung von Nicotinamid oder Guanidinessigsäure mit SAM beruht (G.L, Cantoni, J. Biol. Chem. 189, 745 (1951), ibid. 204, 403 (1953), G. De La Hoba, G.A. Jamieson, S.H. Mudd, H.H. Richards, J.A.C.S. 81, 3975 (1959)).

Beispie 1

9 kg Hefe werden wie in Beispiel 1 beschrieben behandelt und nach Lysis der Zellen erhält man 13,8 Liter einer Lösung, die 3,60 g/Liter SAM enthält, was 99 % des in dem behandelten Material anwesenden entspricht. Diese Lösung wird auf 1 Liter IRC 50 Harz H⁺ Form absorbiert und mit Wasser, 0,025 η Essigsäure und einer 4 η HCl-Lösung eluiert. Die wie in Beispiel 1 bestimmten, an reinem SAM reichen Fraktionen entsprechen 0,8 Liter und enthalten 87 % des in die Kolonne eingespeisten Produkts. Bei 40°C wird unter Vakuum zur Trockne eingedampft.

Man gibt Wasser zu, bis eine 5 %-ige SAM-Lösung erhalten wird, wobei man die Lösung bei O⁰C hält und man gibt Dowex 50 Harz, OH" Form zu, bis eine Probe der Lösung ergibt, daß keine Chloride, vorhanden sind.

Pas Harz wird abfiltriert, 110 g p-Toluolsulfonsäure werden zugegeben und man konzentriert auf 600 ml. Man gibt Methylalkohol zu, bis die Ausfällung vollständig ist. Nach Abfiltrieren und Trocknen erhält man SAM-Tri-p-toluolsulfonat, das die gleichen Eigenschaften wie das gemäß Beispiel 1 erhaltene aufweist. '■

20

Beispiel 5

\ 13,8 Liter SAM-Lösung, die man nach Lysis der Hefezellen wie ! in Beispiel 2 beschrieben erhält (3,60 g/Liter SAM), absor- '■. biert man auf 1 Liter Amberlite IRC 50 Harz, H⁺ Form, und eluiert nacheinander mit V/asser, 0,025 molarer Essigsäure ' und schließlich mit 1 η Schwefelsäure.

ι Die am'meisten SAM enthaltenden Fraktionen (1,8 Liter, 86 % des in die Kolonne eingespeisten Produkts) behandelt man mit einer Suspension von Ba(OH)₂ bei O⁰C^iS Sulfate völlig eliminiert sind.

Nach Abfiltrieren und Waschen des Bariumsulfats gibt man 108 g p-Toluolsulfonsäure zu und arbeitet wie in Beispiel 2 beschrieben, wobei man ein Tri-p-Toluolsulfonat von SAM , erhält, das die gleichen Eigenschaften besitzt wie das gemäß Beispiel 1 erhaltene Produkt.

Be i'spiel 4

13,8 Liter Lösung, die 43,3 g SAM enthält, absorbiert man auf einer Harzkolonne und eluiert wie in Beispiel 2 mit wässrigem HCl. Die an SAM reichen Fraktionen werden bei im Vakuum zur Trockne eingedampft.

Man gibt Wasser zu, bis man eine 10 %-ige SAM-Chloridlösung erhält, die durch Zugeben von Aceton ausgefällt wird. Das so erhaltene Salz hat die folgenden Analyseneigenschaften:

Chloride 16,86 %
SAM 78,85 %

H₂O 4,2 %

ft

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409807 /Ti 20

10 g.dieses Salzes löst man in 200 ml Wasser und eliminiert die Chloride bei 0° mit Dowex 50 Harz, OH Form. Zu der Lösung gibt man 19,7 g p-Toluolsulfonsäure, konzentriert die Mischung bei 40° im Vakuum auf 80 ml und gibt Aceton zu, um das Tri-p-toluolsulfonat von SAM auszufällen, das die gleichen Eigenschaften wie das gemäß Beispiel 1 hergestellte hat.

Beispiel

13,8 Liter Lösung, die 3,60 g /Liter SAM enthalten und wie in Beispiel 3 beschrieben erhalten worden sind, absorbiert man auf einer Kolonne IRC 50 Amberlite Harz, H⁺ Form. Die an SAM reichen Fraktionen werden mit BaCO, behandelt, bis die molare Konzentration der Sulfate gleich der von SAM ist. Man filtriert die Lösung und konzentriert das Filtrat auf 500 ml. Mit Aceton wird ein Salz ausgefällt, das die folgenden Analyseneigenschaften hat:

Sulfate 28,2 %
SAM 58,9 %
H₂O 5 %

10 g des so erhaltenen Salzes löst man in 120 ml Wasser und behandelt mit Amberlite IRA 900 Harz, OH" Form, bis das Sulfation eliminiert ist. Nach Abfiltrieren des Harzes gibt man 14,7 g p-Toluolsulfonsäure zu, konzentriert die Mischung auf 60 ml und verwendet Aceton zur Ausfällung eines p-Toluolsulfonats von SAM, das die gleichen Eigenschaften wie das gemäß Beispiel 1 erhaltene hat.

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Beispiel 6

1 g SAM-Jodid (600 mg SAM) löst man.in 10 ml Wasser und behandelt mit Dowex 50 Harz OH" Form bei 0°, bis das Jodidion , eliminiert ist. Nach Abfiltrieren des Harzes gibt man 1,5 g p-Toluolsulfonsäure zu, konzentriert die Mischung auf 6 ml und verwendet Aceton, um das Tri-p-toluolsulfonat von SAM auszufällen, dessen Analyseneigenschaf ten mit denen des gemäß Beispiel 1 erhaltenen identisch sind.

Es ist seit einigen Jahren aus der biochemischen Forschung bekannt, daß SAM der einzige spezifische Methylspender in lebenden Organismen für die biochemischen Reaktionen des . Transfers der CH^-Gruppe ist, welches fundamentale Reaktionen im Fett-, Eiweiß- und Zuckerstoff wechsel sind. Beispielsweise werden nachstehend einige der wichtigeren SAM-abhängigen Transmethylierungsreaktionen aufgeführt:

(a) N-Transmethylierung: Adenin, Carnitin, Car-nosin, Creatin, 2,6-Diamonopurin, Adrenalin, Guanin, Hordenin, N'-Nicotinamid, Nicotin, Phosphatid ylcolin, Ricinin,

(b) O-Transmethylierung: N-Acetylserotonin, Dopamin, Epinin, d-Adrenalin, 1-Adrenalin, Cholesterin, Ergosterin, 1-Noradrenalin, Pektin, Ubichinon,

(c) S-Transmethylierung: 2,3-Dimercaptopropanol, HpS, Methionin, Methylmercaptan, S-Mercaptopropionsäure, S-Mercaptoäthanol, Thiopyrimidin, Thiouracil,

(d) C-Transmethylierung: Cytosin, Thymin.

- 13 Τ098077ΤΪ20

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Dies bedeutet unter Bezugnahme auf den menschlichen Organismus, däß SAM in den folgenden Stoffwechselvorgängen mitwirkt:

Biosynthese von Cholin, Biosynthese von Phosphatidylcolin, Aktivität von Enzymen, die SH-Gruppen benötigen, Catecholaminstoffwechsel, Stoffwechsel biogener centralencephaler Amine, Serotoninstoffwechsel, Histaminstoffwechsel, Vitamin B12- und Folsäurestoffwechsel, Keratinstoff wechsel, Myosin- ^j Stoffwechsel, Stoffwechsel von Histonen, Stoffwechsel von RNA, Stoffwechsel von DNA, Stoffwechsel von Proteinsubstanzen, Stoffwechsel einiger Hormone mit Cyclopentanperhydrophenantren-, kern, wovon die hauptsächlichsten die Östrogene sind, Stoffwechsel der Triglyceride.

Es ist auch seit einiger Zeit bekannt, daß SAM, wenn es einmal durch die;Methyltransf erase-Enzyme entmethyliert ist, : in S-Adenosylhomocystein (SAO) umgewandelt wird, das ein ! indirekter Spender von Hydrosulfidgruppen ist und somit eine ; entscheidende Bedeutung im Stoffwechsel aller Verbindungen hat, die "zur Durchführung ihrer biologischen Aktivität SH-Gruppen benötigen. Darunter sind von besonderer Bedeutung , einige Bioenzyme und die sulfurierten Aminosäuren.

SAO wiederum wird im Organismus decarboxyliert und das decarboxylierte Produkt ist die Hauptquelle der Aminopropyl- '-. gruppe, die - gemäß den neuesten biochemischen Erkenntnissen - : für die Biosynthese von Polyamin unerläßlich ist.

Der Vorgang wird durch verschiedene Enzyme katalysiert, J wovon ein besonderes Aminopropyl-transferase ist. ,

Zusammenfassend kann gesagt werden, daß SAM im menschlichen Organismus eng mit allen folgenden biochemischen Reaktionen in Zusammenhang steht:

- 14 Τ098 07/Ϊ120

is

A - Transmetallierung (insbesondere Lieferung' der CH^-Gruppe), B"- Transsulfurierung (insbesondere Lieferung_'der SH-Gruppe),· C - Transaminopropylierung (insbesondere Lieferung der Aminopropylgruppe).

Die Summe dieses Wissens könnte dazu führen, daß man glaubt, daß SAM bei der Behandlung pathologischer Zustände, die \ mit der Knappheit oder anderen Mangelzuständen im Organismus hinsichtlich einiger der oben erwähnten Produkte zusammen- ; hängen,einige therapeutische Wirkung haben könnte.

Die außerordentliche Instabilität von SAM und das bisherige Fehlen irgendeines Verfahrens, es für eine ausreichende Zeitdauer unter normalen Umgebungsbedingungen stabil zu machen, haben es verhindert, daß irgendwelche, pharmakologischen oder klinischen Tests durchgeführt wurden vend haben so auch jede praktische Verwendung, die dafür in der Humantherapie gefunden wurde, verhindert.

Erst nach- der Herstellung des neuen erfindungsgemäßen SAM-Salzes (SAM-tri-p-toluolsulfonat), eines Salzes, -das in der Praxis bei Umgebungstemperatur unbegrenzt stabil ist, war es möglich, systematische pharmakologische und klinische Untersuchungen durchzuführen, die zu der Entdeckung von therapeutischen Eigneschaften des neuen Salzes führten, die bezüglich Qualität und Intensität völlig überraschend sind. · " -

Aus der enormen Anzahl pharmakologischer und klinischer Daten, die für dieses neue Produkt gesammelt wurden, sind nachstehend nur einige aufgeführt, die ausreichen, um dem Fachmann die wesentlichen Eigenschaften des neuen Produkts und seine hauptsächlichen Verwendungen in der Humantherapie klar aufzuzeigen.

- 15 -409807/ii20

Toxizität ί

Das erfindungsgemäße Tri-p-toluolsulfonat von SAM hat sich ' als absolut frei von akuter Toxizität, chronischer Toxizität, lokaler Unverträglichkeit oder Nebenwirkungen erwiesen.

Insbesondere ist der DLcQ-Wert bei Ratten und Mäusen größer als 5 g/kg.

Die Tests hinsichtlicher der Verträglichkeit und der chronischen Toxizität wurden.an Wistar und Sprague-Dowley Ratten durchgeführt, denen 12 Monate lang 2 bis 10 mg/kg Proukt pro Tag verabreicht wurde. Nach dem Ende der Behandlung zeigten die verschiedenen Organe und der-Apparat keine pathologische Veränderung.

Die Teratogenese-Versuche wurden an Kaninchen und Ratten durchgeführt. Sogar bei Verabreichung massiver Dosen SAM-Tri-ptoluolsulfonat , die etwa der 10-fachen maximalen therapeutischen Dosis entsprachen, wurden keine teratogenetisehen Wirkungen festgestellt oder Mißbildungen bei den Embryos o.der endgültigen Feten.

Das Zugeben von Dosen bis zu 0,1 bis 0,2 mg/ml Produkt zu überlebenden Kulturen menschlicher Lymphozyten oder Mäuseleberzellen ergibt- keinerlei Veränderung des Keimindex für die Zellelemente.

Die intravenöse Verabreichung an Kaninchen und Katzen von 40 mg/kg verursacht keinerlei Veränderung des Karοtisdruckes, der Herz- und Atmungsfrequenz oder der EKG-Linie.

Die lokale Verträglichkeit der intramuskulären Injektion, sogar nach 15 bis 20 Tage lang wiederholter Verabreichung, und von intravenöser Injektion in die Marginalvene des AuricularpaviHions ist ausgezeichnet.

4Ö9807/1120

Bei jungen, gesunden Versuchspersonen beiderlei Geschlechts_} denen rasch intravenös oder durch Veneninfusion SAM-Tri-ptoluolsulfonatdosen von 10 bis 500 mg/ (durchschnittliches Gewicht 70 kg) verabreicht wurden, ergaben die gleichzeitige Untersuchung von minimalem und maximalem Druck, der Pulsund Atmungsfrequenz nach 1, 5, 15, 20, 30, 60 Minuten und 2, 3, 6, 8, 10, 12 und 24 Stunden nach Verabreichung keine Abweichung von den normalen Werten. Die EKG-Aufzeichnung zeigt keine Veränderung in der PQ-Strecke, in der ST-Strecke kein. Auftreten von Extrasystolen oder anderen Veränderungen 30 Minuten, 1, 2, 3, 5, 10 und 20 Stunden nach Verabreichung.

Im hämatopoetisehen Apparat und in der Leber- und Nierenfunktion waren keine Veränderungen zu verzeichnen, die statistisch vom Normalen abwichen.

Pharmakologie

Um Indikativ und orientativ festzustellen, wie das SAM-Tri-ptoluolsulfonat in den Geweben verteilt ist, wird etwas Produkt, das mit C (45 iiC/mMol) in der Methylgruppe markiert ist, hergestellt und in Dosen von 1 uC/g an Meerschweinchen mit 200 g verabreicht.

15 Minuten nach Verabreichung wird eine ausgeprägte Radioaktivität beobachtet, die durch histoautoradiographische Techniken im Gehirn, im Rückenmark, in der Leber, in der : Lunge, in den Nieren, in den Nebennieren, in der Schilddrüse und im Gastrointestinaltrakt exakt definierbar ist.

Es wird somit daraus geschlossen, daß das neue Salz die j hämatoencephalische Schranke leicht überschreitet und die ^! CH-2-Gruppe an die Gewebe abgibt, die mit Methyl transferase- j

-i

j Aktivität versehen sind. In anderen Worten, es wurde die \

ι I

; - 17 - ■ j

409807/1120

Fähigkeit des neuen erfindungsgemäßen Produkts bewiesen, sich"selektiv in all den Organen zu lokalisieren, die mit Methyltransferase-system versehen sind.

Dies wird durch spätere pharmakologische Versuche bestätigt. j

Eine ganze Reihe von Versuchen, die an Ratten durchgeführt werden, zeigt, daß die neue Verbindung eine beträchtliche schützende und auflösende Wirkung bei Leberverfettung bei hyperlipoider-hyperproteider Diät nach Handler , bei Verfettung durch akute Alkoholvergiftung und durch andere toxische Mittel, bei einer Verabreichung von nur 10 mg/kg, hat. Sowohl von morphohistochemisehen und analytischen Gesichts-

v
punkten inhibiert S-Adenoaylmethionin die Ansammlung von

Lipiden in Leber und Gallenblase.

Bei experimenteller Hyperlipämie bei der Ratte, beispielsweise durch Triton S, zeigt SAM-Tri-p-toluolsulfonat eine hypolipämisierende Wirkung, die sehr bemerkenswert ist, und im Verhältnis zu der verwendeten Dosis, welche 10 mg/kg beträgt, beträchtlich intensiver als die anderer Substanzen mit hypolipämisierende Wirkung. ;

Bei Hühnchen, die mit an Cholesterin und Fructose reichen Diäten heteroskierotisch gemacht werden, verringert die . parenterale Verabrßichung des neuen Produkts in Dosen von ■ 10 mg/kg die Cholesterinämie und bev/irkt eine günstige Ver- ί änderung der Schädigungen, die bei Abdominal-und Thorakalaorta- J Checks der kleinen Gefäße der Encephalonbasis gefunden werden, j Hinsichtlich des Phospholipidstoff wechseis wurde exerimentell r eine Zunahme der Menge von Phosphatidylcholin im Lebergewebe von Ratten bei unkompensierter Sterose gefunden. Ein deutlicher Zuwachs an Phosphatidylcholin wird auch in den oc-Lipoprotein -Hämatika J gefunden bei experimentellen Veränderungen, die durch die ' ß/a-Lipoprotein-Verhältnisse hervorgerufen werden.

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664

Alle diese Versuche zeigen deutlich eine heilende Wirkung von SAM-Tri-p-toluolsulfonat bei Veränderungen des Lipidstoffwechsels.

Eine weitere Reihe von Versuchen, die an Ratten durchgeführt werden, zeigen, daß die Verabreichung von SAM-Tri-p-toluolsulfonat in Dosen von 2 mg/kg eine Akkumulierung der Glykogenreserven in der Leber und in den Muskeln bewirken, was sowohl durch histochemische Verfahren als auch durch quantitative" Bestimmungen nachweisbar ist. Bei experimenteller Diabetes durch Alloxan, ist die Menge an Insulin, die notwendig ist, um die glykämischen Werte wieder auf normal zu bringen,durch Verabreichungen von SAM-Tri-p-toluolsulfonat in Mengen von 5 mg/kg beträchtlich reduziert.

Diese Versuchsreihe zeigt eine klare positive Wirkung der neuen erfindungsgemäßen Verbindung auf den Zuckerstoff wechsel.

Schließlich werden Ratten mit experimentell hervorgerufener Hypodisproteinämie mit Mengen von 10 mg/kg SAM-Tri-p-toluolsulfonat behandelt. Es wurde gefunden, daß dieses Produkt die Werte der Gesamtproteinämie wieder auf normal bringt, indem es die Albuminquote beträchlich erhöht und folglich eine hohe proteinanabolisierende Wirkung zeigt.

Diese und andere ähnliche Versuche beweisen die heilende Kraft des neuen Produkts bei Disjunktionen des EiweißStoffwechsels.

Klinische Tests

Anhand der Ergebnisse, die sich aus den pharmakologischen Untersuchungen ergeben, werden die klinischen Versuche auf Erkrankungen gerichtet, bei denen die folgenden Vorgänge primär oder sekundär verändert scheinen:

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1 - Pettstoffwechsel

2 - Zuckerstoffwechsel

3 - Eiweisstoffwechsel

4 - Stoffwechsel der Katecholamine und biogenen Amine.

1 - Bei Versuchen, die klinisch an hunderten von Versuchspersonen unter Verwendung von SAM-Tri-p-toluolsulfonat-Dosen, die in
weiten Grenzen variierten, durchgeführt wurden, wurde gefunden, ; daß die neue Verbindung ein rasches Absinken der Hepatolipide ; bei Hepatosteatose höchst unterschiedlicher Pathogenese' be- i wirkt, was durch bioptische Untersuchung, die nach Beendigung j der Behandlung wiederholt wird, sogar nach 60 Tagen nach ■ beendeter Behandlung, gezeigt wird.

Die Verabreichung des Produkts bewirkt auch ein ausgeprägtes ;

Absinken .der hohen Werte von Totalcholesterinämie, von ι

Hypertriglyceridämie und normalisiert die veränderten '■■

Q/a Lipoproteinverhältnisse und prä-ß/ß-Verhältnisse bei ;

Patienten mit Hyperdislipidämie im unkompensierten Stadium. ^!

Diese hypocholesterinämierende und hypolipämisierende Wirkung
zeigt sich sogar bei Dosen von etwa 5 bis 10 mg und ist
proportional zu der Dosis.

Parallelbeobachtungen haben klar gezeigt, daß die hypocholesterinämiesierende und hypolipämisierende Wirkung des neuen Produkts
auch bei Patienten eintritt, die auf Behandlung mit herkömmlichen Medikamenten oder auf Diätbeschränkungen nicht ansprechen.

Bei klarer Arteriosklerose mit klinischer Manifestation des
psycho-affektiven Bereichs, bei Turbomnese und sekundärer ;

- 20 - i

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Centroencephalitis (Schädigung durch arteriosklerotische Ericephalopathie) und Erscheinungen cerebraler Hypoxie, zeigt die Verabreichung von SAM-Tri-p-toluolsulfonat intramuskulär, oder, in schwereren Fällen durch intravenöse Injektion oder langsame νβηβηίηΐμΞίρη in Dosen zwischen 20 und 40 mg eine ^! sehr günstige Veränderung der Symptomatologie. Inbesondere bei klaren Hypoxie-Zuständen ist das Wiedererlangen der Funktionen bezogen auf die Dauer der Relation sehr rasch und statistisch bedeutsam.

Bei·post-apoplektischen Syndromen zeigt sich eine größere Geschwindigkeit der Lösung der klinischen Begleitumstände, .. wharscheinlich verbunden mit der Antithrombosewirkung, die sich sowohl unter Laborato.riums- als auch unter Lebensbe- \ dingen durch das SAM-Tri-p-toluolsulfonat entwickelt. :

insbesondere hinsichtlich Antithrombosewirkung zeigten J Forschungen sowohl unter Laboratoriumsbedingungen als auch am lebenden Objekt an einer großen Menge klinischem Material (plättchehreiches Plasma) die Antiplättchenaggregierungs- ! wirkung, die von verschiedenen Dosen des Produkts entwickelt wird. So sind beispielsweise 0,8 mg Verbindung ausreichend, um . die Plättchenaggregation, die durch 40 uM ADP induziert ist,; zu inhibieren. Die Plättchenaggregierungskurve für 4 uM ADP wird durch Veneninfusion von 2 mg/kg in Richtung auf die Antiaggregierung beträchtlich verändert.

In der Praxis zeigt SAM-Tri-p-toluolsulfonat starke therapeutische Aktivität bei: !

a) der Verhütung und Behandlung von vaskulärer Thrombose j (Koronar- oder Cerebral-), \

b) der Thromboseprophylaxe, insbesondere bei einigen Arten | chirurgischer Eingriffe (insbesondere gynäkologischen und j geburtshilflichen).

- 21 -

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I ^{M/12 664}

j U. I

I ·

! 2 - Klinische Verabreichung an vMe Diabetiker von SAM-Tri-p- j

^! tpluo'lsulfonat zusammen mit kleinen Dosen Insulin, in Dosen j

j von 5 bis 10 mg pro Tag durch intramuskuläre oder intravenöse |

j Injektion bewirkt eine ausgeprägte Erhöhung der Insulinwirkung <

i und so eine Reduzierung der Hyperglykämie-Werte und insbe- J I sondere eine ausgesprochene Ersparnis bei den Insulindosen.

"5 - Hunderte von Patienten wurden klinisch behandelt, die an Hypoproteinämie und Disproteinämie, persistenter oder aggressiver Hepathopathien, präzirrhotisehen oder zirrhotischen Zuständen, Malabsorptionssyndromen, Proteindisperionssyndromen, litten.

i Verabreichung von Dosen zwischen 50 und 200 mg SAM-Tri-ptoluolsulfonat pro Tag durch intramuskuläre oder intravenöse ; Injektion, je nach der Schwere des Falles, verursachten eine \ statistisch bedeutende Zunahme der totalen Protidämie, eine Zunahme der Albuminquote und eine Tendenz zur Normalisierung der veränderten Prozentverhältnisse der elektrophoretischen

^: Fraktionen des Serums. Dieser pro te inanaboli si er enden Wirkung folgt oft eine sehr bedeutende Besserung der subjektiven Symptomologie und der allgemeinen objektiven Bedingungen.

4 - Besonders überraschende Ergebnisse werden bei der klinischen Verwendung des neuen erfindungsgemäßen enzymatisehen Salzes erhalten, wenn krankhafte Zusammenhänge vorliegen, die klar :

., mit Veränderungen im Austausch biogener Amine zusammenhängen, beispielsweise:

'■■ a) pathologische Komplexe neuropsychiatrischer Pertinenz,

b) Parkinson¹sehe Krankheit und Parkinsonismus verschiedener > Ätiopathogenese, ;

c) Störungen des Schlaf -Wach- Rhythmus.'" _m Γ

I Hinsichtlich Punkt a) zeigt eine breite klinische Kasuistik, !

; die durchgeführt wird durch Untersuchung des klinischen Ver- '·, haltens und der Tests von Hamilton und Wittenberg, daß die

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Verabreichung von SAM in Dosen zwischen 20 und 50 mg pro Tag während einer Zeitdauer von 20 bis 40 Tagen unter

Ausschluß jeder anderer Form der Therapie, ein bedeutendes , Nachlassen der hauptsächlichen Parameter, die bei der Dia- [ gnose der depressiven' Formen als kennzeichnend betrachtet werden, verursacht.

Hinsichtlich Punkt b) wurde bezüglich der Behandlung von Parkinson¹scher Krankheit und Parkinsonismus gefunden, daß

1) die Verabreichung von SAM in Dosen von 10 bis 40 mg pro Tag intramuskulär oder intravenös, je nach der Schwere des Falles, in Verbindung mit der üblichen Therapie mit Levodopa, eine statistisch bedeutendere Besserung hinsichtlich Akinesie und Steifheit ergibt als die, die bei· Patienten eintritt, die mit Levodopa allein behandelt werden. Günstige Veränderungen treten auch auf hinsichtlich des Ausmaßes des Parkinson¹sehen Tremors, der durch Levodopa allein nicht verändert werden kann.

2) Die Verabreichung von SAM-Tri-p-toluolsulfonat bessert " deutlich die Levodopa-abhängigen psychischen Störungen, insbesondere hinsichtlich depressiver Zustände und psychischer Manifestationen der irritativen Art.

3) Die Verabreichung von SAM-Tri-p-toluolsulfonat in den vorgenannten Dosen blockiert bedeutend das Nachfolgen

von Levodopa-Nebenwirkungen der verschiedenen Organe und Apparate _x insbesondere hinsichtlich Übelkeit, Erbrechen, Appetitlosigkeit, Hypotension, Asthenie, Cephalaea, Hypersudoration und Insomnie.

Hinsichtlich Punkt c), nämlich Störungen des Schlaf-Wasch-Rhythmusses, insbesondere im Hinblick auf Insomnie, kann das

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erfindungsgemäße neue Produkt in einer Dosis von 5 bis 10 mg die veränderten Schlaf-Wach-Verhältnisse beträchtlich bessern, indem es einen physiologischen Schlaf bewirkt, ohne daß man zu Barbituraten oder anderen Substanzen mit kortikal- und centralencephal-depressiver Wirkung greifen muß.

Aus der vorstehenden Zusammenfassung gehen die zahlreichen unerwarteten Perspektiven, die die neue Medizin auf dem Gebiet der Humantherpie eröffnet, klar hervor. Zusammenfassend kann 'gesagt werden, daß die bereits bewiesenen Anwendungsgebiete sind: Behandlung von Hepatopathien, Hyperdislipidämien, allgemeine oder lokale Arteriosklerose, psychiatrische Erscheinungen der depressiven und neurologischen Art, wohingegen viele andere Anwendungsgebiete noch untersucht und belegt werden müssen.

SAM-Tri-p-toluolsulfonat wird bevorzugt durch intramuskuläre oder intravenöse Injektion verabreicht.

Einige pharmazeutische Mittel, die vielfach bei Versuchen verwendet wurden, sind nachstehend aufgeführt:

Lyophilisierte Ampullen

SAM-tri-p-toluolsulfonat 5 mg

SAM-tri-p-toluolsulfonat 10 mg

SAM-tri-p-toluolsulfonat 20 mg

SAM-tri-p-toluolsulfonat 30 mg

- 24 -

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.M/12 664 QQQc/ m

2336AOf

5	10	20	7	30	mg	•	3
8	16	32		48
-	-	ο,	1,
O	10	20	20

j Losungsmittel-Ampullen zur intramuskulären Verabreichung

Für SAM-tri-p-toluolsulfonat
wasserfreies pinatriumphosphat

wasserfreies Mononatriumphosphat

.Lidocain HCl

bidestilliertes apyrogenes · ,

Wasser soviel wie erforderlich für 2 2 3 3 ml

Lösungsmittel-Ampullen zur intravenösen Verabreichung

Für SAM-tri-p-toluolsulfonat 5 10 20 30 mg I

wasserfreies Dinatriumphosphat 8 16 32 48 :

wasserfreies Mononatriumphosphat 0,13 0_s25 0,9 1,3 :

ap3rrogenes bidestilliertes Wasser . . · I

soviel wie erforderlich für 2 2 3 3 ml^!

Weitere Verabreichungsformen können sein: ^ I

a) Suppositorien !

b) Flüssigkeiten für okulare, intranasale Einträufelung

c) Flüssigkeiten für Aerosolanwendung ί

d) Flüssigkeiten zur topischen Anwendung ,

worin der aktive Bestandteil in den normalen verträglichen j pharmazeutischen Trägern verdünnt ist (Silvano Casadio I '!Tecnologia farmaceutica", Ed.It.Ed.Cisalpino - Milan - I960). _;

Zusammenfassend kann gesagt werden, daß die therapeutischen Dosen SAM-tri-p-toluolsulfonat zwischen 5 und 200 mg pro Tag, entsprechend der besonderen Art und Schwere der behandelten Krankheit liegen.

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Claims

Patentansprüche

1. Das Tri-p-toluolsulfonat von S-Adenosyl-L-methionin(SAM)

der Formel

NH₂

CH, NH₉ CH-CH-CH-CH-CH₀ - S - CH₉-CH₉-CH - COOH·

2. Verfahren zur Herstellung von Tri-p-toluolsulfonat von S-Adenosyl-L-methionin, dadurch gekennzeichnet, daß man zu einer wässrigen Lösung, die SAM enthält, p-Toluolsulfonsäure in einem Molverhältnis zu dem SAM von zwischen 3 und 10, bevorzugt 6, gibt, die wässrige Lösung auf ein kleines Volumen konzentriert und das Salz durch Zugeben eines organischen, .in Wasser löslichen Lösungsmittels ausfällt.

3. Verfahren gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man die wässrige Lösung bei Umgebungstemperatur im Vakuum konzentriert oder lyophilisiert, bis sie ein Volumen Von 2/20 bis 4/20, bevorzugt 3/20 des Ausgangsvolumens erreicht.

4. Verfahren gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, j daß das organische, in Wasser lösliche Lösungsmittel ausgewählt let unter Methylalkohol, Äthylalkohol, Propylalkohol,

. .26-—

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Isopropylalkohol, Aceton, Methyläthylketon.

5. Verfahren gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die wässrige Lösung, die SAM enthält, aus der Lysis von mit SAM angereicherten Hefezellen mit Äthyl oder Methylacetat bei Umgebungstemperatur stammt.

6. ... Verfahren gemäß Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß die wässrige, SAM enthaltende Lösung in einer Kolonne j absorbiert wird, die ein schwaches Kationenharz in Säure- . ; form enthält. ■ !

7. Verfahren gemäß den Ansprüchen 5 und 6, dadurch gekennzeichnet, daß das SAM säLektiv mit einer wässrigen Lösung von p-Toluolsulfonsäure eluiert wird.

8. Verfahren gemäß Anspruch 7»"dadurch gekennzeichnet, daß in einer Kolonne eine Vorwäsche mit Wasser und dann mit 0,025 η Essigsäure durchgeführt wird.

9· Verfahren gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß der Überschuß p-Toluolsulfonsäure mit einem starken oder schwachen Anionenharz'neutralisiert wird, bis man ein Molverhältnis von Säure zu SAM von zwischen 3 und 10, bevorzugt 6, erhält.

10. Verfahren gemäß den Ansprüchen 5 und 6j dadurch gekennzeichnet, daß. das SAM selektiv mit einer wässrigen Lösung von starker Säure, bevorzugt Chlorwasserstoffsäure oder Schwefelsäure, eluiert wird. '

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11. Verfahren gemäß Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, ! daß- das Eluat mit einem Anionenharz in Hydroxydform und mit

einer geeigneten Base neutralisiert, filtriert und dann mit j

einer ausreichenden Menge p-Toluolsulfonsäure behandelt wird, j

daß sich ein Molverhältnis von Säure zu SAM von zwischen 3 ■ und 10, bevorzugt 6, ergibt.

12. Verfahren gemäß Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß das Chlorid oder Sulfat von SAM aus dem Eluat ausgefällt wird, dieses Salz in Wasser gelöst wird und die wässrige Lösung mit p-Toluolsulfonsäure in einer Menge behandelt wird, daß sich ein Molverhältnis von Säure zu SAM von zwischen 3 und 10, bevorzugt 6, ergibt.

13. Therapeutische Mittel, dadurch gekennzeichnet, daß sie als aktiven Bestandteil therapeutisch, wirksame Dosen der Verbindung der Formel

NH₂

CH, NHp CH-CH-CH-CH-CH₀ - S - CHp-CHp-CH - COQH^CH₃-C₆H₄-SO₃H

OH OH — 0 —

CH₃-C₆H₄SO₃^

verdünnt mit normalen, pharmazeutisch verträglichen Trägern enthalten.

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ί . ■ "■«:■■

!

14. Therapeutische Mittel, die bei der Behandlung von ! krankhaften Zuständen brauchbar sind, bei denen der Fettstoff- ; wechsel primär" oder sekundär verändert ist, dadurch gerkennzeichnet, daß sie als aktiven Bestandteil therapeutisch? "wirksame Dosen SAM-tri-p-toluolsulfonat, verdünnt in den normalen, pharmazeutisch verträglichen Trägern, enthalten.

15. Therapeutische Mittel, die bei der Behandlung von krankhaften Zuständen brauchbar sind, bei denen der Zucker- . ^: Stoffwechsel primär oder sekundär verändert ist, dadurch ge- ^; kennzeichnet, daß sie als aktiven Bestandteil therapeutisch ' wirksame Dosen SAM-tri-p-toluolsulfonat, verdünnt in den j normalen, pharmazeutisch verträglichen Trägern, enthalten. ί

16. Therapeutische Mittel, die bei der Behandlung von krankhaften Zuständen brauchbar sind, bei denen der Eiweißstoffwechsel primär oder sekundär verändert ist, dadurch gekennzeichnet, daß sie als aktiven Bestandteil therapeutisch wirksame Dosen SAM-tri-p-toluolsulfonat, verdünnt in den normalen, pharmazeutisch verträglichen Trägern, enthalten.

17. Mittel,die bei der Behandlung von krankhaften Zuständen therapeutisch wirksam sind, bei denen der Stoffwechsel der Katecholamine und der biogenen Amine primär oder sekundär verändert ist, dadurch gekennzeichnet, daß sie als aktiven Bestandteil therapeutisch wirksame Dosen SAM-tri-ptoluolsulfonat, verdünnt in den nomalen pharmazeutisch verträglichen Trägern, enthalten.

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; M/12 664

2336A01

18. Therapeutische Mittel, dadurch gekennzeichnet, daß sie 5 "bis 200 mg SAM-tri-p-toluolsulfonat, verdünnt in den normalen, pharmazeutisch verträglichen Trägern, enthalten.

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