DE19859115A1 - Verwendung von Tumorzellen zeitversetzt in Kombination mit intakten Antikörpern zur Immunisierung - Google Patents
Verwendung von Tumorzellen zeitversetzt in Kombination mit intakten Antikörpern zur ImmunisierungInfo
- Publication number
- DE19859115A1 DE19859115A1 DE19859115A DE19859115A DE19859115A1 DE 19859115 A1 DE19859115 A1 DE 19859115A1 DE 19859115 A DE19859115 A DE 19859115A DE 19859115 A DE19859115 A DE 19859115A DE 19859115 A1 DE19859115 A1 DE 19859115A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- human
- tumor
- igg3
- hinge
- mouse
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Ceased
Links
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 76
- 230000003053 immunization Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 238000002649 immunization Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 title description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 123
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 88
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 88
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 88
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 80
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 75
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 44
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 39
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 32
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 claims description 28
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 claims description 28
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 28
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 claims description 17
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 claims description 17
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 17
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 12
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 claims description 12
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 9
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 9
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 claims description 9
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 6
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 5
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 claims description 4
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 claims description 4
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 claims description 4
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 4
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 claims description 3
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 claims description 3
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 claims description 3
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 claims description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 3
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 108010084313 CD58 Antigens Proteins 0.000 claims description 2
- -1 CD86 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100034051 Heat shock protein HSP 90-alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 claims description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 2
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 claims description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 2
- 101710113864 Heat shock protein 90 Proteins 0.000 claims 1
- 101000991060 Homo sapiens MHC class I polypeptide-related sequence A Proteins 0.000 claims 1
- 101000991061 Homo sapiens MHC class I polypeptide-related sequence B Proteins 0.000 claims 1
- 102100030301 MHC class I polypeptide-related sequence A Human genes 0.000 claims 1
- 102100030300 MHC class I polypeptide-related sequence B Human genes 0.000 claims 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 20
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 18
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 18
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 9
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 8
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 7
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 102100038222 60 kDa heat shock protein, mitochondrial Human genes 0.000 description 2
- 101710154868 60 kDa heat shock protein, mitochondrial Proteins 0.000 description 2
- 101100507655 Canis lupus familiaris HSPA1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 108010031099 Mannose Receptor Proteins 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 208000007660 Residual Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 206010011968 Decreased immune responsiveness Diseases 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039165 Heat shock protein beta-1 Human genes 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101001016865 Homo sapiens Heat shock protein HSP 90-alpha Proteins 0.000 description 1
- 101001036709 Homo sapiens Heat shock protein beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 1
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 1
- 241001620634 Roger Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000002594 Solanum nigrum Nutrition 0.000 description 1
- 244000061457 Solanum nigrum Species 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 241000011102 Thera Species 0.000 description 1
- 241000906446 Theraps Species 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010420 art technique Methods 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000005851 tumor immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5152—Tumor cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Die Erfindung beschreibt die Verwendung von Tumorzellen zeitversetzt in Kombination mit intakten, bevorzugt heterologen Antikörpern zur Immunisierung von Mensch und Tier.
Description
Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von Tumorzel
len zeitversetzt in Kombination mit intakten, bevorzugt hetero
logen Antikörpern zur Immunisierung von Mensch und Tier.
Die Immuntherapie durch Antikörper, insbesondere durch bispezi
fische oder trispezifische Antikörper, hat in den letzten Jah
ren an Bedeutung stetig zugenommen. Ein wesentliches Problem
bei der Verwendung derartiger Antikörper in der Immuntherapie
ist beispielsweise die Aktivierung der Immunzellen, z. B. der T-
Lymphozyten.
In der DE 196 49 223 und der DE 197 10 495 sind intakte bispe
zifische und trispezifische Antikörper beschrieben, die zur
Immuntherapie eingesetzt werden. Diese bispezfischen und tri
spezifischen Antikörper sind befähigt, an eine T-Zelle, zumin
dest ein Antigen auf einer Zielzelle und durch ihren Fc-Teil
oder durch eine dritte Spezifität an Fc-Rezeptor positive Zellen
(akzessorische Zellen) zu binden.
Es ist eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, eine neue Ver
wendungsart eines Kombinationspräparates bereitzustellen, das
sowohl Tumorzellen enthält, die so behandelt wurden, daß ihr
Überleben nach Reinfusion verhindert wird, als auch intakte
bispezifische und/trispezifische Antikörper, die gegen die Tu
morzellen gerichtet sind.
Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß autologe
Tumorzellen oder allogene Tumorzellen desselben Tumortyps, die
je so behandelt wurden, daß ihr Überleben nach Reinfusion ver
hindert wird, zeitversetzt in Kombination mit intakten bispezi
fischen und/oder trispezifischen Antikörpern, die die nachfol
genden Eigenschaften aufweisen:
- 1. α) Binden an eine T-Zelle;
- 2. β) Binden an zumindest ein Antigen auf einer Tumorzelle;
- 3. γ) Binden durch ihren Fc-Teil (bei bispezifischen Antikör pern) oder durch eine dritte Spezifität (bei trispezifi schen Antikörpern) an Fc-Rezeptor positiven Zellen,
an den zu immunisierenden Menschen oder das zu immunisierende
Tier verabreicht werden.
Die Tumorzellen und die Antikörper bilden erfindungsgemäß eine
funktionelle Einheit und werden in Form einer Kombination ver
abreicht, um zielgerichtet eine Immunisierung zu erreichen,
wobei es für den Erfolg der Verwendung darauf ankommt, daß ihre
Anwendung zeitlich abgestuft voneinander erfolgt. Dabei ist es
grundsätzlich möglich, zunächst die behandelten Tumorzellen zu
verabreichen und, zeitlich abgesetzt hiervon, die Antikörper,
oder zunächst die Antikörper an den Patienten zu verabreichen
und, zeitlich abgestuft hiervon, die Tumorzellen.
Der Zeitraum, der zwischen der Verabreichung der Tumorzellen
und der Antikörper und vice versa liegt, beträgt bevorzugt ca.
1-48 Stunden. Besonders bevorzugt ist ein Zeitraum von 1-24
Stunden, weiterhin bevorzugt 1-12 Stunden. Weiterhin möglich
sind Zeiträume von 1-6 Stunden oder 2-4 Stunden. Entschei
dend für den Erfolg der vorliegenden Erfindung ist die zeitlich
abgestufte Anwendung, wobei der anzuwendende Zeitraum auch von
der Art des zu behandelnden Tumors und vom verwendeten Antikör
per abhängen kann. Die jeweiligen optimalen Zeiträume können
anhand von Versuchen vom Fachmann ermittelt werden.
Die verwendeten Tumorzellen sollen möglichst intakt verabreicht
werden. Es ist jedoch auch notwendig, daß ihr Überleben nach
Reinfusion verhindert wird. Hierzu hat es sich als sinnvoll
herausgestellt, die Tumorzellen entweder zu bestrahlen oder
durch chemische Agentien am Überleben nach Reinfusion zu ver
hindern. Durch diese beiden Behandlungsarten bleibt insbesonde
re die äußere Struktur der Tumorzellen unverändert, d. h. das
Erkennungsmuster für die Antikörper.
Zur Bestrahlung wird bevorzugt eine γ-Bestrahlung eingesetzt,
die vorzugsweise mit einer Dosis von 20-200 Gy erfolgt. Bei
einer chemischen Behandlung hat sich Mitomycin C besonders be
währt. Besonders bevorzugt werden heterologe bispezifische
und/oder trispezifische Antikörper eingesetzt.
Der Immunisierungserfolg kann dadurch weiter verbessert werden,
daß die Antikörper und die Tumorzellen, je zeitlich getrennt
voneinander, mehrfach verabreicht werden. Eine weitere Verbes
serung der Immunogenität der Tumorzellen ist dadurch erreich
bar, daß diese vor Infusion einer Hitzevorbehandlung unterzogen
werden. Der bevorzugte Bereich liegt hier bei 41-42°C, wobei
das Optimum durch Versuche ermittelt werden kann. Bevorzugte
Ergebnisse werden bei einer Temperatur von ca. 41,8°C erzielt.
Der Zeitraum für die Hitzevorbehandlung beträgt im allgemeinen
1 bis 6 Stunden, bevorzugt ca. 3 Stunden. Der Zeitraum als auch
die Temperatur, die optimalerweise eingesetzt werden können,
hängen von der Art des zu behandelnden Tumors ab. Die jeweili
gen Optima können vom Fachmann anhand von Laborversuchen ermit
telt werden.
Wie im syngenen (autologen) murinen Tumormodell gezeigt werden
konnte, spielen für eine besonders erfolgreiche Induktion der
Immunität auch noch weitere Faktoren eine nicht unerhebliche
Rolle. So ist die räumlich korrekte Präsentation des Tumormate
rials wichtig. Die Tumorzellen müssen den für eine Immunisie
rung verantwortlichen Immunzellen im richtigen räumlichen Kon
text präsentiert werden. Eine intravenöse (i. v.), intraperito
neale (i. p.) oder subkutane (s. c.) Applikation hat sich hierbei
als besonders günstig herausgestellt, da hierdurch der optimale
Kontakt in diesen Kompartimenten mit den entsprechenden Immun
zellen unter Anwendung der bispezifischen und/oder trispezifi
schen Antikörper gewährleistet wird.
Zur erfolgreichen Immunisierung ist es weiterhin vorteilhaft,
daß die Menge der verabreichten Tumorzellen in geeigneter Weise
ausgewählt wird. So konnte in den Versuchen im murinen Tumormo
dell gezeigt werden, daß eine zu geringe Anzahl an Tumorzellen
nicht den gewünschten Immunisierungserfolg bringt. Eine zu gro
ße Menge an Tumormaterial wiederum kann sich nachteilig auswir
ken, da beispielsweise Toleranzphänomene auftreten können.
Überträgt man diese Resultate auf die Situation im Patienten,
heißt dies, daß es für den Immunisierungserfolg vorteilhaft
ist, eine definierte Menge an Tumormaterial im korrekten räum
lichen Kontext mit einer ebenfalls definierten Menge an Anti
körpern zu verabreichen. Ein Immunisierungserfolg stellt sich
zwar auch dann ein, wenn einer dieser Parameter nicht optimiert
wurde; besonders gute Ergebnisse werden jedoch erzielt, wenn
sowohl die Mengen des Antikörpers als auch die Menge an Tumor
material als auch der räumliche Kontext aufeinander abgestimmt
und optimiert wurden.
Unter Berücksichtigung der obigen Ausführungen kann bei einer
zu geringen Tumorzellzahl beispielsweise nur ein unzureichender
Immunschutz etabliert werden. Daher ist es für einen vollstän
digen Immunisierungserfolg notwendig, mit einer definierten
Anzahl an aktivierten Tumorzellen und einer definierten Menge
an bispezifischen und/oder trispezifischen Antikörpern zu immu
nisieren. Die jeweiligen Zahlen können vom Fachmann anhand von
Versuchen etabliert werden.
Die erfindungsgemäß eingesetzten bispezifischen und/oder tri
spezifischen Antikörper werden bevorzugt in einer Menge von 5-500 µg,
weiterhin bevorzugt 10-300 µg, 10-100 µg oder 10-50 µg,
je pro Infusion, verabreicht. Die Menge des eingesetzten
Antikörpers hängt von der Art des zu behandelnden Tumors, von
der Reaktion des Patienten und weiteren Faktoren ab. Die opti
malen Mengen können vom Fachmann anhand von Versuchen ermittelt
werden.
Die Tumorzellen werden bevorzugt in einer Menge von 107-109
Zellen pro Infusion verabreicht, wobei sich eine Zellzahl von
ca. 108 als bevorzugt herausgestellt hat. Die Tumorzellen wur
den, wie oben ausgeführt, vor der Reinfusion so behandelt, daß
ihr Überleben nach Reinfusion verhindert wird, wobei sie wahl
weise zusätzlich einer Hitzevorbehandlung unterzogen werden
können. Nähere Ausführungen hierzu sind in der vorliegenden Be
schreibung enthalten.
Unumgänglich ist jedoch die zeitlich versetzte Verabreichung
der Tumorzellen und der Antikörper. Dadurch wird gewährleistet,
daß durch die Injektion des bispezifischen und/oder trispezifi
schen, bevorzugt heterologen Antikörpers in den zu behandeln
den Tieren oder Menschen zunächst aufgrund des Überschusses an
vorhandenen T-Lymphozyten im peripheren Blut diese über den
hochaffinen Bindungsarm gebunden und präaktiviert werden. Zu
sätzlich können auch vorhandene Fc-Rezeptor positive akzessori
sche Immunzellen über den Fc-Anteil des bispezifischen oder
trispezifischen Antikörpers gebunden werden. Wird nun dieser
Zellkomplex aus T-Zelle und Fc-Rezeptor positiver Zelle über
den zweiten hochaffinen Tumorbindungsarm an die vergleichsweise
in geringer Anzahl vorhandenen Tumorzellen herangeführt, werden
diese durch T-Lymphozyten bzw. Fc-Rezeptor positiven Zellen
zerstört und über die in den Zellkomplex eingebundenen Fc-Re
zeptor positiven Zellen, beispielsweise Makrophagen, phagozy
tiert. Dies konnte in einem Versuch mit markierten humanen Mo
nozyten/Makrophagen und Tumorzellen bereits gezeigt werden. In
einem nächsten Schritt wird das aufgenommene Tumormaterial pro
zessiert und über MHC Klasse I und insbesondere Klasse II Mole
küle dem Immunsystem präsentiert, was eine wichtige Vorausset
zung für die beobachtete humorale Immunantwort darstellt.
Wie das erfindungsgemäße Beispiel zeigt, setzt der Nachweis von
tumorreaktiven Antikörpern, die nach einer Therapie gebildet
wurden, die Aktivierung von CD4+ tumorspezifischen T-Lymphozy
ten voraus, die über die T-B-Zell-Kooperation tumorspezifische
B-Zellklone stimulieren können. Durch den Nachweis der humora
len Immunantwort konnte somit indirekt ebenfalls eine zelluläre
CD4-T-Zellantwort nachgewiesen werden und somit das Überleben
der Mäuse als Folge der erfindungsgemäßen zeitlich versetzten
Gabe von Tumorzellen und Antikörpern erklärt werden.
In einem murinen, autologen Tumormodell wurde der Aufbau eines
langanhaltenden Immunschutzes gegen den Tumor mit Hilfe von
bsAk untersucht. Hierzu wurde C57BL/6 Mäusen zunächst eine an
sich letale Dosis an autologen Melanomzellen verabreicht und
zwei Tage später parentale bzw. bispezfische Antikörper nachin
jiziert. Um zu testen, ob in den Mäusen hierbei ein langanhal
tender Immunschutz aufgebaut worden ist, wurden die überleben
den Mäuse nach 100 Tagen einer erneuten Tumorgabe, diesmal je
doch ohne Ak, unterzogen. Um ferner der Frage nachzugehen, in
wieweit für die Entwicklung des Immunschutzes die Anzahl an
verabreichten Tumorzellen eine Rolle spielt, wurden die Versu
che mit einer niedrigen Tumordosis von 1500 Tumorzellen (TZ)
sowie mit einer hohen Dosis von 5000 Tumorzellen durchgeführt.
Neben dem Überleben der Mäuse wurde darüber hinaus eine vorhan
dene humorale Immunantwort gegen den Tumor als Kriterium für
einen vorliegenden Immunschutz herangezogen. Hierzu wurden die
Seren der Mäuse vor und 100 Tage nach der Behandlung (unmittel
bar vor der erneuten Tumorgabe) auf das Vorhandensein von anti-
Tumorantikörpern miteinander verglichen.
Die Abb. 1 zeigt die Überlebenskurven der Mäuse nach der
primären Tumorgabe von 1500 bzw. 5000 Tumorzellen. Während die
Kontrollmäuse ohne Antikörper-Behandlung alle innerhalb von 35
Tagen verstarben, konnten sämtliche mit bsAk behandelten Mäuse
geheilt werden. Im Vergleich hierzu überlebten von den Mäusen,
die mit einer Kombination aus den beiden parentalen Ak behan
delt wurden, nur 84% nach der niedrigen Tumordosis und nur 16%
nach der hohen Tumordosis.
Dieser qualitative Unterschied zwischen den bsAk und den paren
talen Ak machte sich auch bei der Ausbildung einer humoralen
Immunantwort bemerkbar. Die Abb. 2 zeigt die in der Durch
flußzytometrie gemessene humorale Immunantwort gegen die Tumor
zellen. Während die Überlebenden aus der "parentalen Gruppe"
keine humorale Immunantwort aufwiesen, zeigte sich dies bei den
Mäusen aus der "bispezifischen Gruppe". Besonders wichtig hier
für war allerdings die Menge an verabreichtem Tumormaterial. Es
gab einen signifikanten Unterschied zwischen den Gruppen mit
niedrig- und hochdosierter Tumorgabe. Während nach niedriger
verabreichter Tumordosis nur 17% der Mäuse einen starken und
33% einen schwachen Titer aufwiesen, konnte nach der höheren
Tumordosis bei 66% der Mäuse ein starker Titer nachgewiesen
werden.
Des weiteren korrelieren die gewonnenen Daten zur humoralen
Immunantwort eindeutig mit dem Überleben der Mäuse nach erneu
ter Tumorgabe ohne nachfolgende Antikörper-Injektion. Nur die
Mäuse, die einen starken Antikörper-Titer gegen den Tumor auf
gebaut hatten, überlebten die Tumorgabe oder starben stark ver
zögert im Vergleich zur Kontrollgruppe ohne Immunisierung. Hin
gegen starben alle Mäuse ohne nachweisbaren Titer zuerst und
ohne Verzögerung im Vergleich zur Kontrolle. In Abb. 3
sind die Überlebenskurven der Mäuse dargestellt, die einer er
neuten Tumorgabe unterzogen wurden ohne diese Mäuse anschlie
ßend wieder mit Antikörper zu behandeln. Die Mäuse, die eine
hohe Primärgabe von 5000 TZ erhalten hatten, besaßen einen
deutlichen Überlebensvorteil gegenüber den Mäusen mit einer
niedrig dosierten Primärtumorgabe von 1500 TZ.
Nachfolgend werden bevorzugte Ausgestaltungen der Erfindung,
insbesondere in Bezug auf die zu verwendenden bispezifischen
und trispezifischen Antikörper und die Tumorzellen, offenbart.
Die Tumorzellen werden aus einem Patienten entnommen (autologe
Tumorzellen). Um ein Überleben der Tumorzellen nach Reinfusion
zu verhindern, werden sie vor dem Inkontaktbringen mit den An
tikörpern, was ja erfindungsgemäi3 erst im Körper erfolgt, in an
sich bekannter Weise behandelt, beispielsweise durch Bestrah
lung. Erfindungsgemäß sind nicht beliebige Antikörper verwend
bar, sondern diese müssen intakt sein, d. h. sie müssen eine
funktionellen Fc-Teil besitzen. Bevorzugt sind sie heterologer
Natur, d. h. die Antikörper sind aus schweren Immunglobulinket
ten unterschiedlicher Subklassen (-Kombinationen, auch Fragmen
te) und/oder Herkunft (Spezies) zusammengesetzt.
Diese intakten heterologen bispezifischen und/oder trispezifi
schen Antikörper werden so ausgewählt, daß sie weiterhin die
nachfolgenden Eigenschaften aufweisen:
- 1. α) Binden an eine T-Zelle;
- 2. β) Binden an zumindest ein Antigen auf einer Tumorzelle;
- 3. γ) Binden durch ihren Fc-Teil (bei bispezifischen Antikör pern) oder durch eine dritte Spezifität (bei trispezifi schen Antikörpern) an Fc-Rezeptor positive Zellen.
Die erfindungsgemäß verwendbaren Antikörper sind befähigt, die
Fc-Rezeptor positive Zelle zu aktivieren, wodurch die Expres
sion von Zytokinen und/oder kostimulatorischen Antigenen initi
iert oder erhöht wird.
Bei den trispezifischen Antikörpern erfolgt die Bindung an die
Fc-Rezeptor positiven Zellen bevorzugt beispielsweise über den
Fc-Rezeptor von Fc-Rezeptor positiven Zellen oder auch über
andere Antigene auf Fc-Rezeptor positiven Zellen (Antigen-prä
sentierenden Zellen), wie z. B. den Mannose-Rezeptor.
Durch die erfindungsgemäße, zeitlich abgestufte Anwendung der
intakten, bevorzugt heterologen bispezifischen und/oder trispe
zifischen Antikörper wird im Patienten eine Tumorimmunität auf
gebaut, bevorzugt eine Langzeit-Tumorimmunität. Die Verabrei
chung (Reinfusion) erfolgt bevorzugt in einem Patienten nach
der Behandlung des Primärtumors, bevorzugt bei Patienten in
einer minimal residual disease (MRD)-Situation. Bei Patienten
mit wenig verbliebenen Tumorzellen, bei denen allerdings die
Gefahr eines Rezidivs hoch sein kann, ist die erfindungsgemäß
beschriebene zeitlich abgestufte Anwendung besonders erfolg
reich.
Die erfindungsgemäß verwendbaren heterologen bispezifischen
und/oder trispezifischen Antikörper sind zum Teil an sich be
kannt, zum Teil werden sie aber auch in der vorstehenden Anmel
dung zum ersten Mal beschrieben. Ein Beispiel für einen bsAk
ist der Antikörper anti-CD3 X anti-EpCAM (GA-733-2) der bei
epithelialen Tumoren wie dem Mammacarcinom eingesetzt wird.
Auf der Tumorzelle erfolgt eine Hochregulation von MHC 1, sowie
eine Aktivierung der intrazellulären Prozessierungsmaschinerie
(Proteasom-Komplex) aufgrund der Freisetzung von Zytokinen (wie
z. B. INF-γ und TNF-α) in unmittelbarer Nachbarschaft der Tumor
zelle. Die Zytokine werden aufgrund bispezifischer Antikörper
vermittelter Aktivierung von T-Zellen und akzessorischen Zellen
freigesetzt. D. h. durch den intakten bsAk werden nicht nur Tu
morzellen zerstört oder phagozytiert, sondern indirekt auch
deren Tumorimmunogenität erhöht.
Die Aktivierung der Fc-Rezeptor positiven Zelle durch den bsAk
ist von der Subklasse bzw. der Subklassenkombination des bsAk
abhängig. Wie in in vitro-Versuchen nachgewiesen werden konnte,
sind beispielsweise bsAk der Subklassenkombination Maus-IgG2a/-
Ratte-IgG2b in der Lage, an Fc-Rezeptor positive Zellen zu bin
den und diese gleichzeitig zu aktivieren, was zur Hochregula
tion bzw. Neuausbildung (Expression) von kostimulatorischen
Antigenen, wie z. B. CD40, CD80 oder CD86, auf der Zelloberflä
che dieser Zellen führt. Dagegen sind bsAk der Subklassenkom
bination Maus-IgG1/IgG2b zwar in der Lage an Fc-Rezeptor posi
tive Zellen zu binden (1) Haagen et al., J. Immunology, 1995,
154: 1852-1860, können diese aber offenbar nicht in vergleich
barem Maße aktivieren (2) Gast et al., Cancer Immunol. Immun
therap., 1995, 40: 390.
Während der intakte bsAk die T-Zelle mit einem Bindungsarm
(z. B. an CD3 oder CD2) bindet und gleichzeitig aktiviert, kön
nen kostimulatorische Signale von der an den Fc-Teil des bsAk
gebundenen Fc-Rezeptor positiven Zelle an die T-Zelle übermit
telt werden. D. h. erst die Kombination von Aktivierung der T-
Zelle über einen Bindungsarm des bsAk und der gleichzeitigen
Übertragung von kostimulatorischen Signalen von der Fc-Rezeptor
positiven Zelle auf die T-Zelle, führt zu einer effizienten T-
Zellaktivierung (Abb. 4A). Tumorspezifische T-Zellen, die an
der Tumorzelle ungenügend aktiviert wurden und anergisch sind,
können nach der erfindungsgemäßen ex vivo-Vorbehandlung eben
falls reaktiviert werden (Abb. 4B).
Ein weiterer wichtiger Aspekt bei der Induktion einer Tumorim
munität ist die mögliche Phagozytose, Prozessierung und Präsen
tation von Tumorbestandteilen durch die vom bsAk herangeführten
und aktivierten akzessorischen Zellen (Monozyten/Makrophagen,
oder dendritische Zellen). Durch diesen klassischen Mechanismus
der Präsentation von Antigenen können sowohl tumorspezifische
CD4- wie auch CD8-positive Zellen generiert werden. Tumorspezi
fische CD4-Zellen spielen darüberhinaus eine wichtige Rolle für
die Induktion einer humoralen Immunantwort im Zusammenhang mit
der T-B-Zell Kooperation.
Bispezifische und trispezifische Antikörper können mit einem
Bindungsarm an den T-Zellrezeptor-Komplex der T-Zelle, mit dem
zweiten Bindungsarm an tumorassoziierte Antigene auf der Tumor
zelle binden. Sie aktivieren dabei T-Zellen, die durch Freiset
zung von Zytokinen oder Apoptose-vermittelnde Mechanismen die
Tumorzellen zerstören. Darüber hinaus besteht offenbar die Mög
lichkeit, daß T-Zellen im Rahmen der Aktivierung mit bispezifi
schen Antikörpern tumorspezifische Antigene über ihren Rezeptor
erkennen und dadurch eine dauerhafte Immunisierung eingeleitet
wird (Abb. 4B). Von besonderer Bedeutung ist dabei der intakte
Fc-Teil des bispezifischen oder trispezifischen Antikörpers,
der die Bindung an akzessorische Zellen wie z. B. Monozyten/Ma
krophagen und dendritische Zellen vermittelt und diese veran
laßt selbst zytotoxisch zu werden und/oder gleichzeitig wichti
ge kostimulatorische Signale an die T-Zelle weiterzugeben. Auf
diese Weise kann offensichtlich eine T-Zellantwort u. U. auch
gegen bislang unbekannte, tumorspezifische Peptide induziert
werden.
Durch Redirektion von u. U. anergisierten, tumorspezifischen T-
Zellen an Tumorzellen mittels bispezifischer und/oder trispezi
fischer Antikörper bei gleichzeitiger Kostimulation derartiger
T-Zellen durch akzessorische Zellen welche an den Fc-Teil des
bispezifischen oder trispezifische Antikörpers binden, könnte
die Anergie von zytotoxischen T-Zellen (CTLs) aufgehoben wer
den. D. h. eine im Patienten gegen den Tumor existierende T-
Zell-Toleranz kann mittels intakter heterologer bispezifischer
und/oder trispezifischer Antikörper gebrochen und damit eine
dauerhafte Tumorimmunität induziert werden.
Für den letzten Punkt gibt es erste in vivo-Daten aus Mausver
suchen, die auf eine derartige dauerhafte Tumorimmunität nach
Behandlung mit einem syngenen Tumor und intakten bsAk hinwei
sen. In diesen Versuchen überlebten insgesamt 14 von 14 Tieren,
die nach einer ersten Tumorinjektion erfolgreich mit bsAk be
handelt werden konnten, eine weitere Tumorinjektion 144 Tage
nach der ersten Tumorinjektion - ohne eine erneute Gabe von
bsAk.
Die erfindungsgemäß eingesetzten Antikörper sind bevorzugt zur
Reaktivierung von in Anergie befindlichen, tumorspezifischen T-
Zellen befähigt. Weiterhin sind sie zur Induktion von tumorre
aktiven Komplement-bindenden Antikörpern und damit zur Induk
tion einer humoralen Immunantwort in der Lage.
Die Bindung erfolgt bevorzugt über CD3, CD2, CD4, CD5, CD6,
CD8, CD28 und/oder CD44 an die T-Zelle. Die Fc-Rezeptor positi
ven Zellen weisen zumindest einen Fcγ-Rezeptor I, II oder III
auf.
Erfindungsgemäß einsetzbare Antikörper sind zur Bindung an Mo
nozyten, Makrophagen, dendritische Zellen, "Natural Killer"-
Zellen (NK-Zellen) und/oder aktivierte neutrophile Zellen als
Fcγ-Rezeptor 1 und/oder III positive Zellen befähigt.
Die erfindungsgemäß einsetzbaren Antikörper bewirken, daß die
Expression von CD40, CD80, CD86, ICAM-1 und/oder LFA-3 als ko-
stimulatorische Antigene oder/und die Sekretion von Zytokinen
durch die Fc-Rezeptor positive Zelle initiiert oder erhöht
wird. Die Zytokine sind bevorzugt IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8,
IL-12, INF-γ und/oder TNF-α.
Die Bindung an die T-Zelle erfolgt bevorzugt über den T-Zell-
Rezeptor-Komplex der T-Zelle.
Die erfindungsgemäß einsetzbaren bispezifischen Antikörper sind
beispielsweise:
- - ein anti-CD3 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD4 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti- CD5 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD6 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD8 X anti- Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD2 X anti-Tu mor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD28 X anti-Tumor assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD44 X anti-Tumor-as soziiertes Antigen-Antikörper ist.
Die erfindungsgemäß einsetzbaren trispezifischen Antikörper
sind bevorzugt:
- - ein anti-CD3 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD4 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti- CD5 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD6 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD8 X anti- Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD2 X anti-Tu mor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD28 X anti-Tumor- assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD44 X anti-Tumor-as soziiertes Antigen-Antikörper.
Die erfindungsgemäß einsetzbaren trispezfischen Antikörper wei
sen zumindest eine T-Zell-Bindungsarm, einen Tumorzell-Bin
dungsarm und einen an Fc-Rezeptor positive Zellen bindenden
Bindungsarm auf. Dieser zuletzt genannte Bindungsarm kann ein
anti-Fc-Rezeptor-Bindungsarm oder ein Mannose-Rezeptor-Bin
dungsarm sein.
Der bispezifische Antikörper ist bevorzugt ein heterologer in
takter Ratte/Maus bispezifischer Antikörper.
Mit den erfindungsgemäß einsetzbaren bispezifischen und trispe
zifischen Antikörpern werden T-Zellen aktiviert und gegen die
Tumorzellen redirigiert. Bevorzugt einsetzbare heterologe in
takte bispezifische Antikörper werden aus einer oder mehreren
der nachfolgenden Isotyp-Kombinationen ausgewählt:
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2a,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2b,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG3,
Ratte-IgG2b/Human-IgG1,
Ratte-IgG2b/Human-IgG2,
Ratte-IgG2b/Human-IgG3[orientaler Allotyp G3m(st) = Bin dung an Protein A],
Ratte-IgG2b/Human-IgG4,
Ratte-IgG2b/Ratte-IgG2c,
Maus-IgG2a/Human-IgG3[kaukasische Allotypen G3m(b+g) = keine Bindung an Protein A, im folgenden mit * gekenn zeichnet]
Maus-IgG2a/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-IgG2a/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-IgG2a/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG1-[Hinge]-Human-IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human- IgG4-[Hinge]-Human-IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human- IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Hu man-IgG3*[CH3]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge-CH2-CH3]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge-CH2-CH3]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG3-[Hinge-CH2-CH3, orientaler Allotyp]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge-CH2-CH3]
Human-IgG1/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Humän-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*(CH3]
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1; VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG2/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG4/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG4/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Maus-IgG2b/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-IgG2b/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG4-[Hinge]-Human-IgG4-[CH2]-Human-IgG3*-[CH3]
HumanIgG1/Ratte[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1 Hinge]-Human- IgG4-[CH2]-HumanIgG3*[CH3]
HumanIgG1/Maus[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge]-Human-IgG4- [CH2]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG4/Human[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4-[CH2]-HumanIgG3*-[CH3]
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2a,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2b,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG3,
Ratte-IgG2b/Human-IgG1,
Ratte-IgG2b/Human-IgG2,
Ratte-IgG2b/Human-IgG3[orientaler Allotyp G3m(st) = Bin dung an Protein A],
Ratte-IgG2b/Human-IgG4,
Ratte-IgG2b/Ratte-IgG2c,
Maus-IgG2a/Human-IgG3[kaukasische Allotypen G3m(b+g) = keine Bindung an Protein A, im folgenden mit * gekenn zeichnet]
Maus-IgG2a/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-IgG2a/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-IgG2a/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG1-[Hinge]-Human-IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human- IgG4-[Hinge]-Human-IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human- IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Hu man-IgG3*[CH3]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge-CH2-CH3]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge-CH2-CH3]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG3-[Hinge-CH2-CH3, orientaler Allotyp]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge-CH2-CH3]
Human-IgG1/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Humän-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*(CH3]
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1; VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG2/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG4/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG4/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Maus-IgG2b/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-IgG2b/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG4-[Hinge]-Human-IgG4-[CH2]-Human-IgG3*-[CH3]
HumanIgG1/Ratte[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1 Hinge]-Human- IgG4-[CH2]-HumanIgG3*[CH3]
HumanIgG1/Maus[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge]-Human-IgG4- [CH2]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG4/Human[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4-[CH2]-HumanIgG3*-[CH3]
Bei den erfindungsgemäß verwendbaren Antikörpern handelt es
sich vorzugsweise um monoklonale, chimäre, rekombinante, syn
thetische, halbsynthetische oder chemisch modifizierte intakte
Antikörper mit beispielsweise Fv-, Fab-, scFv- oder F(ab)2-
Fragmenten.
Bevorzugt werden Antikörper oder Derivate oder Fragmente vom
Menschen verwendet oder solche, die derart verändert sind, daß
sie sich für die Anwendung beim Menschen eignen (sogenannte
"humanized antibodies") (siehe z. B. Shalaby et al., J. Exp. Med.
175 (1992), 217; Mocikat et al., Transplantation 57
(1994), 405).
Die Herstellung der verschiedenen oben genannten Antikörperty
pen und -fragmente ist dem Fachmann geläufig. Die Herstellung
monoklonaler Antikörper, die ihren Ursprung vorzugsweise in
Säugetieren, z. B. Mensch, Ratte, Maus, Kaninchen oder Ziege,
haben, kann mittels herkömmlicher Methoden erfolgen, wie sie
z. B. in Köhler und Milstein (Nature 256 (1975), 495), in Harlow
und Lane (Antibodies, A Laboratory Manual (1988), Cold Spring
Harbor) oder in Galfre (Meth. Enzymol. 73 (1981), 3) oder der
DE 195 31 346 beschrieben sind.
Ferner ist es möglich, die beschriebenen Antikörper mittels
rekombinanter DNA-Technologie nach dem Fachmann geläufigen
Techniken herzustellen (siehe Kurucz et al., J. Immunol. 154
(1995), 4576; Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sc. USA 90
(1993), 6444).
Die Herstellung von Antikörpern mit zwei verschiedenen Spezi
fitäten, den sogenannten bispezifischen Antikörpern, ist zum
einen durch Anwendung rekombinanter DNA-Technologie möglich,
aber auch durch die sogenannte Hybrid-Hybridoma-Fusionstechnik
(siehe z. B. Milstein et al., Nature 305 (1983), 537). Hierbei
werden Hybridomazellinien, die Antikörper mit jeweils einer der
gewünschten Spezifitäten produzieren, fusioniert und rekombi
nante Zellinien identifiziert und isoliert, die Antikörper mit
beiden Spezifitäten produzieren.
Das der Erfindung zugrunde liegende Problem kann sowohl durch
bispezifische als auch trispezifische Antikörper gelöst werden,
sofern sie die im Anspruch 1 gekennzeichneten Eigenschaften und
Wirkungen aufweisen. Nachfolgend wird die Herstellung von Anti
körpern mit Zwei- und Dreispezifitäten näher beschrieben. Die
Bereitstellung derartiger bispezifischer und trispezifischer
Antikörper gehört zum Stand der Technik, und auf die derartige
Herstellungstechniken beschreibende Literatur wird hier voll
inhaltlich Bezug genommen.
Die Herstellung von Antikörpern mit drei Spezifitäten, soge
nannten trispezifischen Antikörpern, durch die das der Erfin
dung zugrundeliegende Problem ebenfalls lösbar ist, kann bei
spielsweise derart erfolgen, daß an eine der schweren Ig-Ketten
eines bispezifischen Antikörpers eine dritte Antigenbindungs
stelle mit einer weiteren Spezifität, z. B. in Form eines "sing
le chain variable fragments" (scFv), angekoppelt wird. Das scFv
kann beispielsweise über einen
-S-S(G4S)nD-I-Linker
an eine der schweren Ketten gebunden sein (S = Serin, G = Gly
cin, D = Aspartat, I = Isoleucin).
Analog dazu können trispezifische F(ab)2-Konstrukte hergestellt
werden, indem die CH2-CH3-Regionen der schweren Kette einer
Spezifität eines bispezifischen Antikörpers ersetzt werden
durch ein scFv mit einer dritten Spezifität, während die CH2-
CH3-Regionen der schweren Kette der anderen Spezifität bei
spielsweise durch Einbau eines Stopcodons (am Ende der "Hinge"-
Region) in das codierende Gen, z. B. mittels homologer Rekombi
nation, entfernt werden (siehe Abb. 5).
Möglich ist auch die Herstellung trispezifischer scFv-Kon
strukte. Hierbei werden drei VH-VL-Regionen, die drei ver
schiedene Spezifitäten repräsentieren, hintereinander in Reihe
angeordnet (Abb. 6).
Erfindungsgemäß werden z. B. intakte bispezifische Antikörper
verwendet. Intakte bispezifische Antikörper sind aus zwei Anti
körper-Halbmolekülen (je eine H- und L-Immunglobulinkette), die
jeweils eine Spezifität repräsentieren, zusammengesetzt, und
besitzen darüber hinaus, wie normale Antikörper auch, einen Fc-
Teil mit den bekannten Effektorfunktionen. Sie werden bevorzugt
durch die Quadrom-Technologie hergestellt. Dieses Herstellungs
verfahren ist beispielhaft in der DE-A-44 19 399 beschrieben.
Auf diese Druckschrift, auch bzgl. einer Definition der bispe
zifischen Antikörper, wird zur vollständigen Offenbarung voll
inhaltlich Bezug genommen. Selbstverständlich sind auch andere
Herstellungsverfahren einsetzbar, solange sie zu den erfin
dungsgemäß notwendigen intakten bispezifischen Antikörpern der
obigen Definition führen.
Beispielsweise können in einem neu entwickelten Herstellungs
verfahren (6) intakte bispezifische Antikörper in ausreichender
Menge produziert werden. Die Kombination von 2 bispezifischen
Antikörpern gegen 2 unterschiedliche tumorassoziierte Antigene
(z. B. c-erb-B2, ep-cam, beispielsweise GA-733-2 = C215) auf den
Mammakarzinomzellen minimiert die Gefahr, daß Tumorzellen, die
nur ein Antigen exprimieren, unerkannt bleiben.
Es wurde auch versucht, durch Behandlung mit bispezifischen
F(ab')2-Fragmenten mit den Spezifitäten anti-c-erb-B2 x
antiCD64 eine Tumorimmunität zu erreichen. Der Hauptnachteil
von bsF(ab')2-Fragmenten liegt darin, daß aufgrund der verwen
deten Spezifitäten lediglich FcγRI+ Zellen an den Tumor rediri
giert werden. T-Zellen werden durch diesen bispezifischen Anti
körper nicht an den Tumor redirigiert. Die FcγRI+ Zellen können
zwar indirekt durch Präsentation von tumorspezifischen Peptiden
(über MHC I bzw. MHCII) nach z. B. Phagozytose von Tumorzellbe
standteilen tumorspezifische T-Zellen aktivieren, die Effizienz
der Induktion einer Tumorimmunität ist hier aber niedriger, da
T-Zellen durch diesen bsAK nicht gebunden werden und auch nicht
zur Kostimulation der Fc-Rezeptor positiven Zellen beitragen
können.
Weitere Vorteile von intakten bsAk mit der Fähigkeit zur Redi
rektion von T-Zellen gegenüber den o. g. bsF(ab')2 Fragmenten
sind im einzelnen:
- 1. An intakte bsAk können Fc-Rezeptor positive Zellen binden und einerseits über ADCC (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity) direkt zur Tumorzerstörung beitragen sowie andererseits wie oben näher ausgeführt zur T-Zellaktivie rung.
- 2. Durch intakte T-Zell-redirigierende bsAk werden auch aner gisierte tumorspezifische T-Zellen an die Tumorzelle her angeführt, die erfindungsgemäß direkt am Tumor reaktiviert werden können. Dies kann durch ein bsF(ab')2-Fragment mit den Spezifitäten anti-CD64Xanti-tumorassoziiertes Antigen nicht erreicht werden.
- 3. Ein bsF(ab')2-Fragment mit den Spezifitäten anti-CD64Xan ti-tumorassoziiertes Antigen kann lediglich eine Tumorim munität in 30% der Patienten erzielen, während erfindungs gemäß in Mausversuchen mit T-Zell-redirigierenden intakten bsAk ein Schutz in 100% der Tiere erzielt werden konnte.
Die Bindung des bsAk an Fcγ-RI besitzt zwei wesentliche Vortei
le im Hinblick auf eine optimale anti-Tumorwirksamkeit:
- 1. Fcγ-RI positive Zellen besitzen die Fähigkeit mittels ADCC Tumorzellen zu eliminieren und können insofern synergi stisch zur anti-Tumorwirkung der durch den bsAk an die Tumorzelle herangeführten cytotoxischen T-Zellen beitra gen.
- 2. Fcγ-RI positive Zellen (wie z. B. Monozyten/Makrophagen/- Dendriten) sind in der Lage, wichtige kostimulatorische Signale, ähnlich wie bei der Antigen-Präsentation, der T- Zelle zu liefern und damit eine Anergisierung der T-Zelle zu verhindern. Wie in Abb. 4 gezeigt können weiter hin, als erwünschtes Nebenprodukt, aufgrund der durch in takten bsAk vermittelten Interaktion von T-Zelle mit ak zessorischer Zelle und Tumorzelle sogar T-Zellen, deren T- Zellrezeptor tumorspezifische Peptide (über MHC Antigene auf der Tumorzelle präsentiert) erkennt, stimuliert wer den. Die für eine korrekte Aktivierung der T-Zelle notwen digen Kostimuli würden in dieser Konstellation von der akzessorischen Zelle (z. B. Monocyt) geliefert werden. In sofern sollte der erfindungsgemäße Antikörper neben der direkten T-Zellrezeptor-unabhängigen, durch bsAk vermit telten Tumorzerstörung (Abb. 4A) ebenfalls tumorspezifische T-Zellen aktivieren und generieren (Abb. 4B), die nach Ab bau der bsAk weiterhin im Patienten patrouillieren. D. h. mittels intakter bsAk kann ähnlich wie bei gentherapeuti schen Ansätzen (z. B. durch Einbau von kostimulatorischen Antigenen wie B-7 in die Tumorzelle) die Tumortoleranz im Patienten durchbrochen werden.
Günstig in diesem Zusammenhang ist weiterhin, daß die Expres
sion von Fcγ-RI nach G-CSF-Behandlung auf den entsprechenden
Zellen hochreguliert wird.
Die erfindungsgemäß eingesetzten intakten, bevorzugt herterolo
gen spezifischen und/oder trispezifischen Antikörper weisen in
einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung die
nachfolgenden Eigenschaften auf:
- a) Binden an eine T-Zelle;
- b) Binden an zumindest ein Antigen auf einer Zielzelle;
- c) Binden durch ihren Fc-Teil (bei bispezifischen Antikör pern) oder durch eine dritte Spezifität (bei trispezifi schen Antikörpern) an Fc-Rezeptor positive Zellen
und sie induzieren hierdurch eine Immunantwort und/oder zer
störte Zielzellen, wobei der Antikörper so ausgewählt ist, daß
er an ein Oberflächenantigen als Zielantigen auf der Zielzelle
bindet, welches induzierbar ist und im nicht induzierten Zu
stand (Normalzustand) auf der Zielzelle nicht vorkommt oder in
einer derart geringen Zahl, daß die Anzahl für eine Zerstörung
der Zielzelle nicht ausreicht. (
Abb.
7A + B)
Es konnte gezeigt werden, daß nach Induktion bereits eine rela
tiv geringe Anzahl der Zielantigene auf der Zielzelle ausrei
chend ist, um die intakten bispezifischen und trispezifischen
Antikörper zu binden und eine Zerstörung der Zielzelle und/oder
eine Immunantwort einzuleiten. Unter "geringe Anzahl" wird er
findungsgemäß eine Anzahl von Zielantigenen auf der Zielzelle
von mehr als 100 Zielantigenen pro Zielzelle, bevorzugt mehr
als 300 und weiterhin bevorzugt mehr als 1000 Zielantigenen pro
Zelle verstanden. Die induzierbaren Zielantigene können auch in
einer Menge von bis zu 500.000 pro Zielzelle vorliegen, wobei
auch Mengen bis zu 400.000, bis zu 300.000, bis zu 200.000 oder
bis zu 100.000 pro Zielzelle induzierbar sind. Ein weiterer
bevorzugter Mengenbereich, in dem die Zielantigene vorliegen
können, ist von 50.000 bis 100.000 und von 5000 bis 50.000.
Beispiele für induzierbare Oberflächenantigene auf Zielzellen
(Zielantigene), die für eine Immuntherapie durch intakte bispe
zifische und trispezifische Antikörper einsetzbar sind, sind
Hitzeschock-Proteine und "MHC-Klasse I-verwandte" MIC-Moleküle.
Hitzeschock-Proteine (Hsp) werden von der Zelle als Antwort auf
Zellstreß synthetisiert. Unter "Zellstreß" ist erfindungsgemäß
beispielsweise eine Entartung der Zelle, das Einwirken von
Strahlen, chemischen Substanzen und von erhöhter Temperatur auf
die Zelle sowie die Infektion der Zelle durch Mikroorganismen
zu subsumieren. Zur Zeit sind vier Familien von Hitzeschock-
Proteinen bekannt, die aufgrund ihres unterschiedlichen Moleku
largewichts differenziert werden. Diese Familien werden als
Hsp25, Hsp60, Hsp70 und Hsp90 bezeichnet, wobei die Zahl das
ungefähre Molekulargewicht der Streßproteine in Kilo-Dalton
wiedergibt. Die Hitzeschock-Proteine zeichnen sich durch hoch
konservierte Aminosäuresequenzen aus, wobei der Grad der Kon
servierung bei über 35% Aminosäure-Identität, bevorzugt bei 35-55%,
weiterhin bevorzugt 55-75% und am bevorzugtesten zwi
schen 75% bis 85% Aminosäure-Identität liegt.
Auf folgende Übersichtsartikel wird verwiesen: Annu. Rev. Ge
net. 27, 437-496 (1993); Biochimie 76, 737-747 (1994); Cell.
Mol. Life Sci. 53, 80-129, 168-211 (1997); Experientia 48, 621-656
(1992); Kabakov u. Gabai, Heat Shock Proteins and Cytopro
tection, Berlin: Springer 1997.
Hitzeschock-Proteine werden im Normalfall auf gesundem Gewebe
nicht exprimiert. Es gibt jedoch Untersuchungen, die zeigen,
daß Hitzeschock-Proteine beispielsweise auf Tumorzellinien und
auf Tumormaterial aus Patienten exprimiert werden können (Mel
cher et al., Nature Medicine, 4: 581, 1998). Die Expression der
Hitzeschock-Proteine auf den Tumorzellinien ist aber relativ
schwach und deshalb für bisher bekannte immuntherapeutische
Ansätze mit monoklonalen Antikörpern und unvollständigen
(F(ab)2) bispezifischen Antikörpern ungeeignet.
Beispiele für Hitzeschock-Proteine sind Hsp60 und Hsp70/72.
Gleiches gilt für MIC-Moleküle. Auch diese Moleküle sind durch
Zellstreß, wie oben näher definiert, induzierbar. MIC-Moleküle
sind MHC I-verwandte Moleküle, die unter Kontrolle von Hitze
schock-Promoter-Elementen stehen (Groh et al., PNAS 93: 12445,
1996). Beispiele für MIC-Moleküle sind MIC A und MIC B. Auch
für MIC-Moleküle konnte gezeigt werden, daß sie auf Normalge
webe nicht oder nur in so geringer Menge exprimiert werden, daß
sie als Zielstruktur zur Erkennung durch einen Antikörper, um
eine Zerstörung der Zielzelle zu erreichen, nicht geeignet
sind, während sie auf beispielsweise epithelialen Tumoren in
einer solchen Menge exprimiert werden, daß sie durch die erfin
dungsgemäß bereitgestellten bispezifischen und trispezifischen
Antikörper bei einer Immuntherapie als Zielantigene einsetzbar
sind.
Die erfindungsgemäß bereitgestellten intakten bispezifischen
oder trispezifischen Antikörper werden so ausgewählt, daß sie
gegen zumindest ein Zielantigen auf einer Zielzelle gerichtet
sind, welches induzierbar ist und auf der Zielzelle im nicht
induzierten Zustand nicht oder im wesentlichen nicht vorkommt.
Diese Zahl liegt beispielsweise bei ca. 100 Zielantigenen/Zel
le. Dies heißt jedoch nicht, daß derartige Zielantigene auf
anderen Zellen, d. h. Nicht-Zielzellen, nicht vorkommen können.
Beispielsweise kommen auf sich schnell regenerierendem Gewebe,
z. B. den Schleimhautzellen des Magen-Darm-Traktes, auch im phy
siologischen Zustand, konstitutiv exprimiert, Hitzeschockpro
teine vor. Diese Hitzeschockproteine werden jedoch von der vor
liegenden Erfindung nicht mit umfaßt, da sie nicht induzierbar
sind, sondern bereits auf Normalgewebe vorkommen. Bei Verwen
dung der erfindungsgemäßen Antikörper, die gegen Hitzeschock
proteine gerichtet sind, können auch bestimmte Schleimhautzel
len des Magen-Darm-Traktes zerstört werden, da diese, wie oben
ausgeführt, konstitutiv Hitzeschockproteine auf ihrer Zellober
fläche exprimieren. Die mögliche Zerstörung dieser Zellen ist
für einen Patienten zwar mit gewissen Nachteilen verbunden, die
jedoch im Vergleich zur erzielbaren Tumorzerstörung gering an
zusetzen sind.
Das sich schnell regenerierende Gewebe ist somit nicht primäres
Target der erfindungsgemäßen Antikörper, kann jedoch dann von
den Antikörpern "getroffen" werden, wenn der erfindungsgemäße
Antikörper nicht nur die induzierbaren Zielantigene auf der
Zielzelle erkennt, sondern diese Antigene z. B. auch auf sich
schnell regenerierendem Gewebe vorkommen. Da sich dieses Gewebe
jedoch schnell teilt, kann nach Absetzen der Antikörper-Thera
pie der ursprüngliche Zustand dieses Gewebes relativ rasch so
wieder hergestellt werden, daß es seine physiologische Aufgabe
wieder erfüllen kann. Die Erfindung ist also nicht darauf ge
richtet, daß die erfindungsgemäßen bispezifischen und trispezi
fischen Antikörper Antigene auf z. B. sich schnell regenerieren
dem Gewebe erkennen, welche dort unter Umständen konstitutiv
exprimiert werden, sondern die Erfindung umfaßt ausschließlich
solche Antikörper, die gegen Zielantigene gerichtet sind, die
auf der Zielzelle induzierbar sind und nach Induktion, bei
spielsweise auch konstitutiv, exprimierbar sind.
Erfindungsgemäß werden unter "induzierbar" solche Zielantigene
verstanden, die hier operationell tumorspezifisch sind und im
physiologischen Zustand auf der Zelle nicht oder nur in einer
solchen Anzahl vorkommen, daß eine Immunantwort gegen sie nicht
induzierbar ist oder eine Zerstörung der Zielzellen aufgrund
dieser geringen Anzahl nicht oder in einem nicht wesentlichen,
therapeutisch nutzbaren Umfang stattfindet.
Als induzierbare Zielantigene auf einer Zielzelle sind nicht
nur solche auf einer Tumorzelle zu verstehen, sondern auch An
tigene, die induziert werden, wenn die Zielzelle beispielsweise
durch einen Mikrooganismus infiziert wird. Unter "Mikroorganis
mus" wird erfindungsgemäß jeder Organismus verstanden, der die
Zielzelle so beeinflußt, daß auf seiner Oberfläche ein vom Mi
kroorganismus induziertes Zielantigen im oben beschriebenen
Umfang exprimiert wird. Unter Mikroorganismen werden erfin
dungsgemäß beispielsweise Bakterien, Viren, Protozoen und Pilze
verstanden. Zu den Bakterien gehören beispielsweise Gram-posi
tive und und Gram-negative Bakterien, Mycoplasmen und Rickett
sien. Von den Protozoen mitumfaßt werden insbesondere Plasmo
dien. Von den Viren umfaßt werden beispielsweise Retroviren,
Adenoviren, Herpesviren, Hepatitis-Viren, Togaviren, Pockenvi
ren usw. Entscheidend ist, daß in Zellen, die von einem oder
mehreren dieser Mikroorganismen infiziert wurden, auf der Zell
oberfläche Antigene exprimiert werden, die durch die Mikroor
ganismen-Infektion induziert werden. Dabei handelt es sich um
Antigene, die von den Zielzellen als Antwort auf die Mikroorga
nismen-Infektion produziert werden und auf der Zelloberfläche
erscheinen (wirtseigene Antigene), nicht dagegen um Zielantige
ne, die durch die Mikroorganismen selbst produziert werden. Die
Infektion einer Zielzelle durch einen Mikroorganismus führt
ebenfalls zu einer Zellstreß-Situation für die Zelle, die als
Antwort hierauf die Expression bestimmter Proteine induziert,
beispielsweise von Hitzeschock-Proteinen und von MIC-Proteinen.
Die erfindungsgemäß bereitgestellten intakten bispezifischen
und trispezifischen Antikörper führen nicht nur einen Typ von
Immunzellen, sondern T-Zellen und akzessorische Zellen an die
Zielzelle heran, und sie sind aus diesem Grund für die Erken
nung induzierbarer Oberflächenantigene als operationelle Ziel
strukturen besonders geeignet. Es konnte gezeigt werden, daß
bereits wenige Zielantigene in einer Menge von 100 bis 5000 pro
Zelle auf der Zielzelle ausreichend sind, um diese zu zerstö
ren. Die hierzu durchgeführten in vitro-Experimente mit Stamm
zellpräparaten (PBSZ) sind im nachfolgenden Beispiel A be
schrieben. Somit ist die erfindungsgemäße Klasse intakter bi
spezifischer und trispezifischer Antikörper befähigt, auch bei
einer sehr geringen Expression der Zielantigene Tumorzellen
oder Zielzellen zu zerstören oder nach deren Erkennung eine
Immunantwort zu initiieren.
Die erfindungsgemäßen Antikörper können, da sie gegen induzier
bare Antigene gerichtet sind, dazu beitragen, das Problem feh
lender zielzellspezifischer, für eine Immuntherapie notwendige
Zielantigene auf Tumorzellen und auf durch Mikroorganismen in
fizierten Zellen zu lösen. Da derartige induzierbare Antigene
nicht nur auf Tumorzellen vorkommen, sondern generell in Streß-
situationen produziert werden, können auch Erkrankungen immun
therapeutisch angegangen werden, die durch Infektion von bei
spielsweise Viren, Einzellern, Bakterien oder Pilzen ausgelöst
wurden. Hierbei handelt es sich um die oben bereits näher be
schriebenen MIC-Moleküle und Hitzeschock-Proteine.
Nachdem in präklinischen Tiermodellen die herausrangende Wirk
samkeit von intakten bsAk nicht nur in vitro, sondern auch in
vivo belegt werden konnte (Lindhofer et al., Blood, 88: 4651,
1996), wurde die Reinigung von Stammzellpräparaten von kontami
nierenden Tumorzellen als weitere Anwendungsmöglichkeit entwickelt
(Lindhofer et al., Exp. Hematol. 25: 879, 1997).
Auf diesen Versuchen aufbauend, konnte in Folgeversuchen mit
kompletten Stammzellpräparaten (ca. 2 × 10e10 Zellen), insbe
sondere die Wirksamkeit im untergesättigten Bereich der Zielan
tigene nachgewiesen werden. D. h. es wurde, in Titrationsversu
chen, so wenig intakter bsAk verabreicht, daß in einem PBSZ
(Periphere Blut-Stammzellen)-Präparat mit ca. 6,5 × 10e9 T-Zel
len, bei einer Gabe von 5 µg Antiköper/Präparat, lediglich 3000
CD3 Moleküle von ca. 30.000 CD3 Molekülen/T-Zelle mit dem bsAk
gebunden vorlagen (siehe Berechnung). Trotzdem waren die intak
ten bsAk in der Lage, auch unter diesen Bedingungen, die Ziel
zellen (hier Tumorzelle: HCT-8) zu zerstören.
Die Versuche waren so aufgebaut, daß von derartig behandelten
PBSZ-Präparaten Aliquots entnommen und mit einer definierten
Menge von Tumorzellen kontaminiert wurden. Es konnte gezeigt
werden, daß die Tumorzellen selbst bei dieser geringen Konzen
tration von intakten bsAk, bei der nur ein Teil der Zielanti
gene besetzt vorliegen, zerstört werden.
Die Auswertung des oben beschriebenen Experiments führte zu
folgenden Ergebnissen:
Ein intakter bsAk hat ein Molekulargewicht von 150 KDa. D. h. 1 Mol
sind 150 Kg und entsprechen definitionsgemäß 6 × 1023 Molekü
len. Damit entsprechen 5 µg ca. 2 × 1013 Molekülen.
Nachdem in einem Stammzellpräparat 6,5 × 109 T-Zellen bestimmt
wurden und eine T-Zelle ca. 30.000 CD3 Moleküle trägt, kommt
man auf eine Gesamtzahl von 19,5 × 1013 CD3 Molekülen im Stamm
zellpräparat.
Da jeder bsAk einen anti-CD3 Bindungsarm besitzt, kann gefol
gert werden, daß theoretisch, setzt man die beiden oben berech
neten Molekülmengen in Bezug, in diesem konkreten Beispiel
nicht mehr als ca. 3000 CD3 Moleküle von den bsAk besetzt wer
den können.
1. Haagen et al., Interaction of human moncyte Fcy receptors
with rat IgG2b, J. Immunolog., 1995, 154: 1852-1860
2. Gast G. C., Haagen I.-A., von Houten A. A., Klein S., Duits A. J., de Weger R. A., Vroom T. M., Clark M. R., J. Phillips, von Dijk A. J. G., de Lau W. B. M., Bast B. J. E. G. CD5 T-cell activation after intravenous administration of CD3 X CD19 bispecific antibody in patients with non-Hodgkin lymphoma. Cancer Immunol. Immunother. 40: 390, 1995
3. Tenny, C., Jacobs, S., Stoller, R., Earle, M., and Kirk wood, J. Adoptive cellualr immunotherapy with high-dose chemotherapy and autologous bone marrow rescue (ABMR) for recurrent breast cancer (meeting abstract).
Proc. Annu. Meet. Am. Soc. Clin. Oncol; 11: A88, 1992 ISSN: 0736-7589. CO: PMAODO - 7589 CO, 1993.
4. Early Hreast Cancer Trialists' Collaborative Group, Systemic treatment of early breast cancer by hormonal, cytotoxic, or immune therapy - 133 randomised trials in volving 31.000 recurrences and 24.000 deaths among 75.000 women. Part II Lancet 339: 71-85, 1992
5. Guo et al., Effective tumor vaccines generated by in vitro modification ot tumor cells with cytokines and bispecific monoclonal antibodies. Nature Medicine 3: 451, 1997
6. Lindhofer et al., Preferential species-restricted heavy light chain pairing in rat-mouse quadromas: Implications for a single step purification of bispecific antibodies, J. Immunology 1995, 155: 219
2. Gast G. C., Haagen I.-A., von Houten A. A., Klein S., Duits A. J., de Weger R. A., Vroom T. M., Clark M. R., J. Phillips, von Dijk A. J. G., de Lau W. B. M., Bast B. J. E. G. CD5 T-cell activation after intravenous administration of CD3 X CD19 bispecific antibody in patients with non-Hodgkin lymphoma. Cancer Immunol. Immunother. 40: 390, 1995
3. Tenny, C., Jacobs, S., Stoller, R., Earle, M., and Kirk wood, J. Adoptive cellualr immunotherapy with high-dose chemotherapy and autologous bone marrow rescue (ABMR) for recurrent breast cancer (meeting abstract).
Proc. Annu. Meet. Am. Soc. Clin. Oncol; 11: A88, 1992 ISSN: 0736-7589. CO: PMAODO - 7589 CO, 1993.
4. Early Hreast Cancer Trialists' Collaborative Group, Systemic treatment of early breast cancer by hormonal, cytotoxic, or immune therapy - 133 randomised trials in volving 31.000 recurrences and 24.000 deaths among 75.000 women. Part II Lancet 339: 71-85, 1992
5. Guo et al., Effective tumor vaccines generated by in vitro modification ot tumor cells with cytokines and bispecific monoclonal antibodies. Nature Medicine 3: 451, 1997
6. Lindhofer et al., Preferential species-restricted heavy light chain pairing in rat-mouse quadromas: Implications for a single step purification of bispecific antibodies, J. Immunology 1995, 155: 219
Claims (23)
1. Verwendung autologer Tumorzellen oder allogener Tumorzel
len desselben Tumortyps, die je so behandelt wurden, daß
ihr Überleben nach Reinfusion verhindert wird, in zeitlich
abgestufter Anwendung mit intakten bispezifischen und/oder
trispezifischen Antikörpern mit den nachfolgenden Eigen
schaften:
- 1. α) Binden an eine T-Zelle;
- 2. β) Binden an zumindest ein Antigen auf einer Tumorzelle;
- 3. γ) Binden durch ihren Fc-Teil (bei bispezifischen Anti körpern) oder durch eine dritte Spezifität (bei tri spezifischen Antikörpern) an Fc-Rezeptor positiven Zellen,
2. Verwendung nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet,
daß die Tumorzellen vor den Antikörpern oder die Antikör
per vor den Tumorzellen verabreicht werden, wobei der
Zeitraum zwischen der jeweiligen Verabreichung 1-48
Stunden beträgt.
3. Verwendung nach Anspruch 1 oder 2,
dadurch gekennzeichnet,
daß der Zeitraum 1-24 Stunden, bevorzugt 1-12 Stunden,
weiterhin bevorzugt 1-6 Stunden oder 1-4 Stunden oder
2-4 Stunden beträgt.
4. Verwendung nach einem oder mehreren der vorhergehenden
Ansprüche,
dadurch gekennzeichnet,
daß die Antikörper in einer Menge, je bezogen auf eine
Infusion, von 5-500 µg, bevorzugt 10-300 µg, weiterhin
bevorzugt 10-100 µg oder 10-50 µg, und die Tumorzellen
in einer Menge, bezogen auf eine Infusion, von 107-109
Zellen, bevorzugt ca. 108 Zellen, verabreicht werden.
5. Verwendung nach einem oder mehreren der vorhergehenden
Ansprüche,
dadurch gekennzeichnet,
daß die Antikörper so ausgewählt werden, daß sie über ih
ren Fc-Teil bei bispezifischen Antikörpern oder über ihren
spezifischen Bindungsarm bei trispezifischen Antikörpern
zur Bindung Fc-Rezeptor positiver Zellen befähigt sind,
die einen Fcγ-Rezeptor I, II oder III aufweisen.
6. Verwendung nach Anspruch 5,
dadurch gekennzeichnet,
daß die Antikörper zur Bindung an Monozyten, Makrophagen,
dendritische Zellen, "Natural Killer"-Zellen (NK-Zellen)
und/oder aktivierte neutrophile Zellen als Fcγ-Rezeptor I
+ III positive Zellen befähigt sind.
7. Verwendung nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet,
daß die Antikörper zur Induktion von tumorreaktiven Kom
plement-bindenden Antikörpern und damit zur Induktion ei
ner humoralen Immunantwort befähigt sind.
8. Verwendung nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet,
daß die Antikörper so ausgewählt werden, daß sie über CD2,
CD3, CD4, CD5, CD6, CD8, CD28 und/oder CD44 an die T-Zel
len binden.
9. Verwendung nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet,
daß die Antikörper so ausgewählt werden, daß nach ihrer
Bindung an die Fc-Rezeptor positiven Zellen die Expression
von CD40, CD80, CD86, ICAM-1 und/oder LFA-3 als kostimula
torische Antigene und/oder die Sekretion von Zytokinen
durch die Fc-Rezeptor positive Zelle initiiert oder erhöht
wird.
10. Verwendung nach Anspruch 9,
dadurch gekennzeichnet,
daß die Antikörper so ausgewählt werden, daß die Sekretion
von IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-12, INF-γ als Zytoki
ne und/oder von TNF-α erhöht wird.
11. Verwendung nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet,
daß der bispezifische Antikörper so ausgewählt wird, daß
er ein anti-CD3 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder
anti-CD4 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder
anti-CD5 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-
CD6 X anti-Tumor-assoz üertes Antigen- und/oder anti-CD8 X
anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD2 X anti-
Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD28 X anti-Tu
mor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD44 X anti-Tumor
assoziiertes Antigen-Antikörper ist.
12. Verwendung nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet,
daß der bispezifische Antikörper aus einer oder mehreren
der nachfolgenden Isotykombinationen ausgewählt wird:
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2a,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2b,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG3,
Ratte-IgG2b/Human-IgG1,
Ratte-IgG2b/Human-IgG2,
Ratte-IgG2b/Human-IgG3[orientaler Allotyp G3m(st) = Bin dung an Protein A],
Ratte-IgG2b/Human-IgG4,
Ratte-IgG2b/Ratte-IgG2c,
Maus-IgG2a/Human-IgG3[kaukasische Allotypen G3m(b+g) = keine Bindung an Protein A, im folgenden mit * gekenn zeichnet]
Maus-IgG2a/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-IgG2a/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-IgG2a/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG1-[Hinge]-Human-IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human- IgG4-[Hinge]-Human-IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human- IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Hu man-IgG3*[CH3]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge-CH2-CH3]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge-CH2-CH3]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG3-[Hinge-CH2-CH3, orientaler Allotyp]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge-CH2-CH3]
Human-IgG1/Human-(VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Numan-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG2/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG4/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-(Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG4/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Maus-IgG2b/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-IgG2b/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge)-Human- IgG3*-[CH2-CH3)
Maus-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG4-[Hinge]-Human-IgG4-[CH2]-Human-IgG3*-[CH3]
HumanIgG1/Ratte[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1 [Hinge]-Human-
IgG4-[CH2]-HumanIgG3*[CH3] HumanIgG1/Maus[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge]-Human-IgG4- [CH2]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG4/Human[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4-[CH2]-HumanIgG3*-[CH3]
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2a,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2b,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG3,
Ratte-IgG2b/Human-IgG1,
Ratte-IgG2b/Human-IgG2,
Ratte-IgG2b/Human-IgG3[orientaler Allotyp G3m(st) = Bin dung an Protein A],
Ratte-IgG2b/Human-IgG4,
Ratte-IgG2b/Ratte-IgG2c,
Maus-IgG2a/Human-IgG3[kaukasische Allotypen G3m(b+g) = keine Bindung an Protein A, im folgenden mit * gekenn zeichnet]
Maus-IgG2a/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-IgG2a/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-IgG2a/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG1-[Hinge]-Human-IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human- IgG4-[Hinge]-Human-IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human- IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Hu man-IgG3*[CH3]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge-CH2-CH3]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge-CH2-CH3]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG3-[Hinge-CH2-CH3, orientaler Allotyp]
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge-CH2-CH3]
Human-IgG1/Human-(VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Numan-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG2/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG4/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-(Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Human-IgG4/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3]
Maus-IgG2b/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-IgG2b/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge)-Human- IgG3*-[CH2-CH3)
Maus-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3]
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG4-[Hinge]-Human-IgG4-[CH2]-Human-IgG3*-[CH3]
HumanIgG1/Ratte[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1 [Hinge]-Human-
IgG4-[CH2]-HumanIgG3*[CH3] HumanIgG1/Maus[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge]-Human-IgG4- [CH2]-Human-IgG3*[CH3]
Human-IgG4/Human[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4-[CH2]-HumanIgG3*-[CH3]
13. Verwendung nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet,
daß der bispezifische Antikörper aus einem heterologen
bispezifischen oder trispezifischen Antikörper, bevorzugt
einem heterologen Ratte/Maus bispezifischen Antikörper,
ausgewählt wird.
14. Verwendung nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet,
daß der trispezifische Antikörper einen T-Zell-Bindungs
arm, einen Tumorzell-Bindungsarm und eine dritte Spezifi
tät zur Bindung an Fc-Rezeptor positive Zellen besitzt.
15. Verwendung nach Anspruch 14,
dadurch gekennzeichnet,
daß der trispezifische Antikörper so ausgewählt wird, daß
er ein anti-CD3 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder
anti-CD4 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder
anti-CD5 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-
CD6 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD8 X
anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD2 X anti-
Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD28 X anti-Tu
mor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD44 X anti-Tumor-
assoziiertes Antigen-Antikörper ist.
16. Verwendung nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet,
daß Tumorzellen eingesetzt werden, die durch Bestrahlung,
bevorzugt durch γ-Bestrahlung, weiterhin bevorzugt in einer
Dosisstärke von 50 bis 200 Gy, oder durch chemische
Substanzen, bevorzugt Mitomycin C, behandelt wurden.
17. Verwendung nach einem oder mehreren der vorhergehenden
Ansprüche,
dadurch gekennzeichnet,
daß der Antikörper so ausgewählt ist, daß er an ein Ober
flächenantigen als Zielantigen auf der Zielzelle bindet,
welches induzierbar ist und im nicht induzierten Zustand
(Normalzustand) auf der Zielzelle nicht vorkommt oder in
einer derart geringen Zahl, daß die Anzahl für eine Zer
störung der Zielzelle durch den Antikörper nicht aus
reicht.
18. Verwendung nach Anspruch 17,
dadurch gekennzeichnet,
daß zur Steigerung der Immunogenität der Tumorzellen diese
vor Verabreichung einer Hitzevorbehandlung unterzogen wer
den.
19. Verwendung nach Anspruch 17 oder 18,
dadurch gekennzeichnet,
daß als induzierbare Antigene Hitze-Schock-Proteine oder
MHC-Klasse-I verwandte MIC-Moleküle eingesetzt werden.
20. Verwendung nach einem der Ansprüche 17 bis 19,
dadurch gekennzeichnet,
daß als Hitze-Schock-Proteine HSP25-, HSP60- oder HSP70-
(HSP72-) oder HSP90-Proteine und als MIC-Moleküle
MIC-A- und MIC-B-Moleküle eingesetzt werden.
21. Verwendung nach Anspruch 20,
dadurch gekennzeichnet,
daß der Antikörper gegen solche Zielantigene gerichtet
ist, die nach Induktion auf der Zielzelle in einer Anzahl
von mindestens 100 und höchstens 500.000 pro Zielzelle
vorliegen.
22. Verwendung nach Anspruch 21,
dadurch gekennzeichnet,
daß der Antikörper weiterhin so ausgewählt wird, daß er
zur Aktivierung Fc-Rezeptor positiver Zellen befähigt ist,
wodurch die Expression von Cytokinen und/oder co-stimu
latorischen Antigenen initiiert oder erhöht wird.
23. Verwendung nach einem oder mehreren der vorhergehenden
Ansprüche,
dadurch gekennzeichnet,
daß die zeitlich abgestufte Anwendung der intakten bispe
zifischen und/oder trispezifischen Antikörper zur Verbes
serung des Immunisierungserfolges mehrfach erfolgt.
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19859115A DE19859115A1 (de) | 1998-09-25 | 1998-12-21 | Verwendung von Tumorzellen zeitversetzt in Kombination mit intakten Antikörpern zur Immunisierung |
| DE59907958T DE59907958D1 (de) | 1998-09-25 | 1999-09-22 | Verwendung von tumorzellen zeitversetzt in kombination mit intakten antikörpern zur immunisierung |
| US09/787,970 US6994853B1 (en) | 1998-09-25 | 1999-09-22 | Time-staggered utilization of tumor cells in combination with intact antibodies for immunization |
| AT99950545T ATE255420T1 (de) | 1998-09-25 | 1999-09-22 | Verwendung von tumorzellen zeitversetzt in kombination mit intakten antikörpern zur immunisierung |
| ES99950545T ES2212638T3 (es) | 1998-09-25 | 1999-09-22 | Utilizacion de celulas tumorales en tiempo escalonado en combinacion con anticuerpos intactos para la inmunizacion. |
| PCT/EP1999/007094 WO2000018435A1 (de) | 1998-09-25 | 1999-09-22 | Verwendung von tumorzellen zeitversetzt in kombination mit intakten antikörpern zur immunisierung |
| EP99950545A EP1115427B1 (de) | 1998-09-25 | 1999-09-22 | Verwendung von tumorzellen zeitversetzt in kombination mit intakten antikörpern zur immunisierung |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19844157 | 1998-09-25 | ||
| DE19859115A DE19859115A1 (de) | 1998-09-25 | 1998-12-21 | Verwendung von Tumorzellen zeitversetzt in Kombination mit intakten Antikörpern zur Immunisierung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE19859115A1 true DE19859115A1 (de) | 2000-03-30 |
Family
ID=7882314
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19859110A Withdrawn DE19859110A1 (de) | 1998-09-25 | 1998-12-21 | Bispezifische und trispezifische Antikörper, die spezifisch mit induzierbaren Oberflächenantigenen als operationelle Zielstrukturen reagieren |
| DE19859115A Ceased DE19859115A1 (de) | 1998-09-25 | 1998-12-21 | Verwendung von Tumorzellen zeitversetzt in Kombination mit intakten Antikörpern zur Immunisierung |
| DE59907958T Expired - Lifetime DE59907958D1 (de) | 1998-09-25 | 1999-09-22 | Verwendung von tumorzellen zeitversetzt in kombination mit intakten antikörpern zur immunisierung |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19859110A Withdrawn DE19859110A1 (de) | 1998-09-25 | 1998-12-21 | Bispezifische und trispezifische Antikörper, die spezifisch mit induzierbaren Oberflächenantigenen als operationelle Zielstrukturen reagieren |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE59907958T Expired - Lifetime DE59907958D1 (de) | 1998-09-25 | 1999-09-22 | Verwendung von tumorzellen zeitversetzt in kombination mit intakten antikörpern zur immunisierung |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (3) | DE19859110A1 (de) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002020039A2 (de) * | 2000-09-04 | 2002-03-14 | Horst Lindhofer | Verwendung von trifunktionellen bispezifischen und trispezifischen antikörpern zur behandlung von malignem aszites |
| WO2008119353A1 (en) * | 2007-03-29 | 2008-10-09 | Genmab A/S | Bispecific antibodies and methods for production thereof |
| US9150663B2 (en) | 2010-04-20 | 2015-10-06 | Genmab A/S | Heterodimeric antibody Fc-containing proteins and methods for production thereof |
| US10344050B2 (en) | 2011-10-27 | 2019-07-09 | Genmab A/S | Production of heterodimeric proteins |
| US10865253B2 (en) | 2014-12-19 | 2020-12-15 | Genmab A/S | Rodent bispecific heterodimeric proteins |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10261223A1 (de) * | 2002-12-20 | 2004-07-08 | MedInnova Gesellschaft für medizinische Innovationen aus akademischer Forschung mbH | Steigerung der Immunantwort durch Substanzen, welche die Funktion von Natürlichen Killerzellen beeinflussen |
| EP1820513A1 (de) * | 2006-02-15 | 2007-08-22 | Trion Pharma Gmbh | Zerstörung von Tumorzellen, welche tumor-assoziierte Zielantigene mit niedrigem bis mittlerem Niveau exprimieren, mittels trifunktionaler bispezifischer Antikörper |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19710449A1 (de) * | 1997-03-13 | 1998-09-17 | Basf Ag | Verfahren zur Aufreinigung von Natronlauge |
-
1998
- 1998-12-21 DE DE19859110A patent/DE19859110A1/de not_active Withdrawn
- 1998-12-21 DE DE19859115A patent/DE19859115A1/de not_active Ceased
-
1999
- 1999-09-22 DE DE59907958T patent/DE59907958D1/de not_active Expired - Lifetime
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8277806B2 (en) | 2000-09-04 | 2012-10-02 | Trion Pharma Gmbh | Use of trifunctional bispecific and trispecific antibodies for the treatment of malignant ascites |
| DE10043437A1 (de) * | 2000-09-04 | 2002-03-28 | Horst Lindhofer | Verwendung von trifunktionellen bispezifischen und trispezifischen Antikörpern zur Behandlung von malignem Aszites |
| WO2002020039A3 (de) * | 2000-09-04 | 2002-07-25 | Horst Lindhofer | Verwendung von trifunktionellen bispezifischen und trispezifischen antikörpern zur behandlung von malignem aszites |
| WO2002020039A2 (de) * | 2000-09-04 | 2002-03-14 | Horst Lindhofer | Verwendung von trifunktionellen bispezifischen und trispezifischen antikörpern zur behandlung von malignem aszites |
| CN101802015B (zh) * | 2007-03-29 | 2015-05-06 | 根马布股份公司 | 双特异性抗体及其制造方法 |
| US10906991B2 (en) | 2007-03-29 | 2021-02-02 | Genmab A/S | Bispecific antibodies and methods for production thereof |
| AU2008234248B2 (en) * | 2007-03-29 | 2014-07-10 | Genmab A/S | Bispecific antibodies and methods for production thereof |
| AU2008234248C1 (en) * | 2007-03-29 | 2015-01-22 | Genmab A/S | Bispecific antibodies and methods for production thereof |
| WO2008119353A1 (en) * | 2007-03-29 | 2008-10-09 | Genmab A/S | Bispecific antibodies and methods for production thereof |
| US9212230B2 (en) | 2007-03-29 | 2015-12-15 | Genmab A/S | Bispecific antibodies and methods for production thereof |
| EP2626372A1 (de) * | 2007-03-29 | 2013-08-14 | Genmab A/S | Bispezifische Antikörper und Verfahren zu deren Herstellung |
| CN104497143B (zh) * | 2007-03-29 | 2020-08-25 | 健玛保 | 双特异性抗体及其制造方法 |
| US9150663B2 (en) | 2010-04-20 | 2015-10-06 | Genmab A/S | Heterodimeric antibody Fc-containing proteins and methods for production thereof |
| US10597464B2 (en) | 2010-04-20 | 2020-03-24 | Genmab A/S | Heterodimeric antibody Fc-containing proteins and methods for production thereof |
| US11866514B2 (en) | 2010-04-20 | 2024-01-09 | Genmab A/S | Heterodimeric antibody Fc-containing proteins and methods for production thereof |
| US10344050B2 (en) | 2011-10-27 | 2019-07-09 | Genmab A/S | Production of heterodimeric proteins |
| US11492371B2 (en) | 2011-10-27 | 2022-11-08 | Genmab A/S | Production of heterodimeric proteins |
| US10865253B2 (en) | 2014-12-19 | 2020-12-15 | Genmab A/S | Rodent bispecific heterodimeric proteins |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE59907958D1 (de) | 2004-01-15 |
| DE19859110A1 (de) | 2000-04-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1115427B1 (de) | Verwendung von tumorzellen zeitversetzt in kombination mit intakten antikörpern zur immunisierung | |
| DE19725586C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Zellpräparaten zur Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper | |
| EP0826696B1 (de) | Verwendung bi-und trispezifischer Antikörper zur Induktion einer Tumorimmunität | |
| EP1315520B1 (de) | Verwendung von trifunktionellen bispezifischen und trispezifischen antikörpern zur behandlung von malignem aszites | |
| EP1444268B1 (de) | Bispezifisches anti-cd28 antikörper-molekül | |
| DE60222658T2 (de) | Monoklonaler anti-cd-40-antikörper | |
| DE60313859T2 (de) | Induktion der anti-tumor-ctl-immunität durch in-vivo-aktivierung von 4-1bb und/oder cd40 | |
| DE69909459T2 (de) | Cd19xcd3 spezifische polypeptide und deren verwendung | |
| DE69626423T2 (de) | Verfahren und zusammensetzung zum rekonformieren multiepitopischer antigene zum anregen einer immunantwort | |
| EP2033657A1 (de) | Intraoperative trifunktionale Antikörper-Applikation zur Prophylaxe intraperitonealer Tumorzelldissemination | |
| DE19722888A1 (de) | Human-CD28 spezifische monoklonale Antikörper zur antigenunspezifischen Aktivierung von T-Lymphozyten | |
| WO2000018806A1 (de) | Bispezifische und trispezifische antikörper, die spezifisch mit induzierbaren oberflächenantigenen als operationelle zielstrukturen reagieren | |
| EP0845998B1 (de) | Arzneimittel zur immuntherapie, enthaltend antikörper, die spezifisch das mhcii-antigen eines zu behandelnden patienten erkennen | |
| EP1600164A2 (de) | Verwendung einer an CD28 bindenden Wirksubstanz zur Herstellung einer Pharmazeutischen Zusammensetzung mit dosisabhängiger Wirkung | |
| EP0802924A1 (de) | Antikörper gegen t-zellen als therapeutikum | |
| DE19859115A1 (de) | Verwendung von Tumorzellen zeitversetzt in Kombination mit intakten Antikörpern zur Immunisierung | |
| DE19710497C2 (de) | Verwendung Bi- und trispezifische Antikörper zur Induktion einer Tumorimmunität | |
| EP0825256B1 (de) | Hybridzelle und deren Verwendung zur Herstellung eines Arzneimittels zur Induktion einer Tumorimmunität | |
| EP0978559B1 (de) | Induktion einer Tumorimmunität durch Redirektion von Tumorzellen gegen Antigen-präsentierende Zellen | |
| DE10059930A1 (de) | Mittel humanen Ursprungs zur Vakzination gegen GD2-pos. Tumore | |
| DE202011103324U1 (de) | Therapeutische anti-TIRC7 Antikörper für die Verwendung in Immun und anderen Krankheiten |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| OP8 | Request for examination as to paragraph 44 patent law | ||
| 8131 | Rejection |