DE117470T1 - Verfahren zur herstellung von interferon (ifn-gamma) des typs 26k und 21k. - Google Patents
Verfahren zur herstellung von interferon (ifn-gamma) des typs 26k und 21k.Info
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- Israel Bio-Engineering ProjectPatentansprüche (Übersetzung nach Art. 67 (3) EPC)Verfahren zur Herstellung der Subtypen 26K und 21K des menschlichen Imrman-Interferons (IFN-Y) als im wesentlichen homogene Proteine, gekennzeichnet durch folgende Verfahrensschritte:a) Vermischen einer ungereinigten wäßrigen IFN-/-Lösung mit einem Glasmaterial mit bestimmter Porengröße zur Adsorbtion des Interferon an das Adsorbens und anschließende Elution des Interferons vom Adsorbens wobei das Interferon in bestimmten Fraktionen des Eluats in erhöhter Reinheit erhalten wird;b) Konzentration der in Schritt a) ausgewählten Fraktionen durch Ultrafiltration durch eine Membran mit einem Ausschlußmolekulargewicht von etwa 10,000 D; wobei das Interferon als durch diese Membran zurückgehaltene Fraktion in höherer Konzentration und Reinheit erhalten wird;c) Durchleiten der in Schritt b) erhaltenen Fraktion durch eine organische Kationenaustauscher-Matrix, die mit einem Puffer niedrigerer Ionenstärke äquilibriert ist und anschließende Elution des Interferons von dieser Säule durch einen Gradienten mit ansteigender Salzkonzentration, wobei die Interferon-/-Subtypen 26K und 21K als homogene Proteine in mehreren unterscheidbaren Maxima in den gesammelten Fraktionen des Eluats erhalten werden.2. verfahren nach Anspruch 1; wobei die Säuleeine Mono-S-Kationenaustauscher-Säule ist, wobei der Puffer 1OmM Natriumphosphat, pH 7,0, ist und 20%
Vol/Vol Ethylenglycol enthält und wobei der Gradient eine in 60 Min. von 0 auf 40OmM linear ansteigende
NaCl-Konzentration hat.3. Verfahren nach Anspruch 2, wobei die vereinigten aktiven Fraktionen, die den Interferon-y-Subtyp 26K
enthalten,''erneut mit der Mono-S-Säule chromatographiert werden.4. Verfahren nach Anspruch 2, wobei der Subtyp 21K vereinigt wird und an der Mono-S-Säule erneut- chromatographiert wird.5. Verfahren zur Herstellung der Subtypen 26K und 21K des
menschlichen Interferons (IFN-,)') als im wesentlichen reine Proteine durch Chromatographie, Ultrafiltration und Ionenaustauscherchromatographie, im wesentlichen wie vorstehend beschrieben und unter Bezugnahme aufdie Beispiele.. 6. .Subtypen ..21K und 26K des menschlichen Immun-Interferons (IFN-^T) in im wesentlichen reiner Form, wenn es durch ein Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5 erhalten wurde.7. Menschliches Immun-Interferon (Subtyp 26K) als im wesentlichen homogenes Protein mit einer spezifischen Aktivität von etwa 7x10 Einheiten/mg, einer scheinbaren Molekularmasse von etwa 26,000 D und im wesentlichen mit der folgenden Aminosäure-Zusammensetzung:Aminosäure ResteAsx Tnr Ser GIx Pro GIy Ala Cys Ya 1 MetHe Leu TyrPheHisLysArg16. 5±0. 4 7. 4±G. 5 10. 8+1. 0 16. 4+1. .4 8. 0+0. 4 J4. .3+1. Q 11. .3+0-. .7 0. .6+0. ,4 8. .9+0. .9 0. .8±0. .3 6, .0+0. 1.2. .9+0. .1 2 .l±0" .1 5 .210 .8 2 ■.2±0 13 .6+3 .1 8 .4±1 .Q 8. Arzneimittel zur parenteralen Anwendung bei der Behandlung von viralen und neoplastischen Krankheiten, gekennzeichnet durch einen kleinen wirksamen Anteil des Subtyps 26K des menschlichen Immun-Interferons nach Anspruch 7 als homogenes Protein und durch einen großen Anteil eines üblichen pharmazeutischen, parenteral anwendbaren Trägermaterials.9. Menschliches Immun-Interferon (Subtyp 21K) als im wesentlichen homogenes Protein mit einer spezifischen Aktivität von etwa 7x10 Einheiten/mg, einer scheinbaren Molekularmasse von etwa 21,000 D und im wesentlichen mit der folgenden Aminosäure-Zusammensetzung:Aminosäure ResteAsx 14.6+1.3Thr 7.9±0.4Ser 9.1+1.4GIx · 15.6+0.7Pro ■ 9.7il.4GVy .14.4+0.3AIa 12.0±l_.5Cys 0.6±0.5VaI 7.4±0.7Met 2.3±1.0He 5.0+0.3Leu 9.2±0.3Tyr 2.9+0.4Phe 4.9+1.0His . 3.5+0.7Ly a 20.3±0.4Ära 5,7-0.410. Arzneimittel zur parenteralen Anwendung bei der Behandlung von viralen und neoplastischen Krankheiten, gekennzeichnet durch einen kleinen wirksasamen Anteil des Sub typ s 21 K des menschlichen Immun-Interferons nach Anspruch 9 als homogenes Protein und durch einen großen Anteil eines üblichen, pharmazeutischen,parenteral anwendbaren Trägermaterials.11. Arzneimittel zur parenteralen Anwendung bei der Behandlung von viralen und neoplastischen Krankheiten, gekennzeichnet durch einen kleinen wirksamen Anteil der zwei Subtypen 26K und 21K des menschlichen Immun-Interferons, welche durch das Verfahren nach Anspruch 1 als homogene Proteine erhalten wurden und durch einen großen Anteil einesüblichen, pharmazeutischen,parenteral an- )i wendbaren Trägerma te rials. v.
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