CZ303600B6 - Použití bakteriálního kmene druhu L. casei ke zvýšení imunity - Google Patents
Použití bakteriálního kmene druhu L. casei ke zvýšení imunity Download PDFInfo
- Publication number
- CZ303600B6 CZ303600B6 CZ20024189A CZ20024189A CZ303600B6 CZ 303600 B6 CZ303600 B6 CZ 303600B6 CZ 20024189 A CZ20024189 A CZ 20024189A CZ 20024189 A CZ20024189 A CZ 20024189A CZ 303600 B6 CZ303600 B6 CZ 303600B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- actimel
- day
- group
- placebo
- cells
- Prior art date
Links
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 title claims abstract description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 title description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims abstract description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 6
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 4
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 claims description 3
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 claims description 3
- 235000021262 sour milk Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 claims description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 abstract description 4
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 abstract description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 41
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 41
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 41
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 33
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 33
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 22
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 18
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 14
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000004044 response Effects 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 11
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 9
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 8
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 8
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 8
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 7
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 7
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 7
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 7
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 7
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 6
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 6
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 5
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000000207 lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 4
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 3
- 240000006030 Lactobacillus casei DN 114001 Species 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 235000004050 Lactobacillus casei DN 114001 Nutrition 0.000 description 2
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 2
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 description 2
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 229940099472 immunoglobulin a Drugs 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000004719 natural immunity Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000013179 statistical model Methods 0.000 description 2
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 1
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 description 1
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 244000000022 airborne pathogen Species 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004706 cardiovascular dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008821 health effect Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 1
- 208000037799 influenza C Diseases 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000018191 liver inflammation Diseases 0.000 description 1
- 235000020845 low-calorie diet Nutrition 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000004492 positive regulation of T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012887 quadratic function Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/125—Casei
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/245—Lactobacillus casei
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Immunology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Rešení se týká použití L. casei kmene CNCM I-1518 pro prípravu prostredku pro orální podávání k zesílení specifické systemické imunitní odpovedi proti chripkovému viru.
Description
Použití bakteriálního kmene druhu £. casei ke zvýšení imunity
Oblast techniky
Vynález se týká použití bakterie kyseliny mléčné pro zvýšení specifické imunitní odpovědi vůči infekčnímu agens.
Dosavadní stav techniky
Bakterie kyseliny mléčné (LAB, Lactic acid bacteria) se běžně užívají k výrobě kvašených potravinářských výrobků a zejména zakysaných mléčných výrobků.
is Účinky bakterie kyseliny mléčné na zdravotní stav byly nejprve popsány ve studiích Ilji Mečnikova (The prolongation of life. 1. vydání, New York: GP Putman's Sons, 1908) a od té doby byly předmětem mnoha zkoumání.
Nyní se obecně předpokládá, že různé bakterie kyseliny mléčné mohou hrát přínosnou roli, pokud se týká zdravotního stavu. Tyto bakterie jsou nazývány také „probiotika“ a tento název označuje živé mikroorganismy, které po požití v dostatečném množství vykazují kromě běžného výživového působení í kladný účinek na zdravotní stav. Probiotické bakterie byly zejména popsány u druhů, patřících do rodů Lactobacillus, Bifidobacterium, Streptococcuš a Lactococcus, běžně používaných v mléčném průmyslu.
Probiotika působí zejména na úrovni střevní flóry, kde omezují vývoj patogenních mikroorganismů, a/nebo působí přímo na imunitní systém. Bylo například pozorováno, že požití probiotických bakterií nebo zakysaných potravin, jako jogurtu, s obsahem těchto bakterií, vede ke snížení patogenních bakterií. Pokud se týká imunitního systému, byly popsány různé účinky:
aktivace buněk účastnících se specifické nebo nespecifické imunitní odpovědi jako jsou lymfocyty a makrofágy, zvýšení hladiny imunoglobulinů a zejména imunoglobulinu A (IgA), zvýšení hladiny cytokinů aktivujících imunitní systém a podobně (viz souhrn například Meydani a Ha, Am. J. Clin. Nutr. ZL 861 až 7217, 2000).
Celkově je ze studii, prováděných na různých probiotických bakteriích kyseliny mléčné, možné vyvodit, že některé druhy, nebo alespoň některé kmeny těchto druhů, mají imunostimulaČní vlastnosti, Na druhou stranu však mechanismus či mechanismy provázející tyto vlastnosti a případně i zúčastněné složky imunitního systému zůstávají neznámé. Zdá se tedy být nezbytné vyjasnit tyto aspekty, zejména k navržení lepších cílových uplatnění různých druhů nebo kmenů probio40 tických bakterií.
Několik studií, prováděných u lidí i zvířat, naznačuje, že bakterie kmene L. casei mají přínosný účinek na zdravotní stav a zejména mají kladný účinek na imunitní systém.
U myší bylo prokázáno, že požití zkvašeného, zakysaného mléka, obsahujícího kmen L. casei DN-114 001 zvyšuje odolnost vůči infekci Salmonellou typhimurium (Paubert - Braquet se spoluautory, Int. J. Immunolother. 4, 153, 1995); a dále zvyšuje aktivaci makrofágů; současně bylo pozorováno i zvýšení imunoglobulinů A v krevním oběhu.
Kmen DN-114 001 byl uložen 30. prosince 1994 v CNCM (Collection Nationale de Cultures de
Microorganismes), v Institut Pasteur, 25 rue du Docteur Roux v Paříži pod číslem 1-1518; tento kmen ajeho kombinace s jogurtovými zákvasy k přípravě zakysaných mléčných výrobků jsou popsány v PCT přihlášce WO 96/20 607, podané firmou Compagnie Gervais Danone.
Nedávné studie, prováděné na lidech, rovněž prokázaly, že konzumace zakysáného mléka s obsahem Z. casei kmene DN-114 001 indukuje posílení odolnosti vůči Salmonelle typhimurium. Tento účinek je přičítán působení nespecifické přirozené imunity (Yoon et al., Int. J. ímmunother. 15. 79 až 89, 1989).
Autoři vynálezu zjišťovali, zda Z, casei rovněž působí na získanou imunitu, která na rozdíl od přirozené imunity poskytuje specifickou imunitní odpověď vůči danému patogennímu agens.
Za tímto účelem autoři vynálezu studovali účinek Z. casei, podávaného orálně in vivo, na ex vivo stimulaci proliferace buněk T v odpovědi na antigeny, představující různé typy běžných patogenních agens: bakteriální antigen (tetanus); houbový antigen (kvasinku) a virový antigen (chřipku).
U každého z testovaných antigenů zjistili, že požití Z. casei vede ke zvýšení proliferativní kapacity buněk T a zejména subpopulací CD3+, v odpovědi na aktivaci zmíněným antigenem. Tento účinek se projevuje sám o sobě zvláště v případě antigenu chřipky.
Podstata vynálezu
Podstatu vynálezu tvoří použití L. casei kmene CNCM 1-1518 pro přípravu prostředků pro orální podávání k zesílení specifické systém ické imunitní odpovědi proti chřipkovému viru.
Toto posílení imunitní odpovědi vyplývá ze zvýšení proliferativní kapacity buněk T, specifických pro antigeny uvedeného patogenního mikroorganismu.
Podle upřednostňovaného ztělesnění předkládaného vynálezu je zmíněný mikroorganismus vzduchem se rozšiřující patogen, zejména patogen dýchacích traktů.
Takovými patogeny jsou zvláště bakterie nebo viry, přičemž z virů lze zmínit například rhinoviry, respirační syncytiální virus (RSV), a myxoviiy (orthomyxoviry jako viry chřipky, tj. viry chřipky typu A, B nebo C), nebo paramyxoviry (a zejména para-chřipkový virus).
Pokud se týká použití předkládaného vynálezu, zmíněný kmen Z. casei může být použit samotný nebo v kombinaci s jinými bakteriemi kyseliny mléčné druhu Z. casei nebo jiných druhů. Výhodně může být použit v kombinaci s jogurtovými zákvasy, jmenovitě Lactobacillus bulgaricus a Streptococcus thermophilus.
Může být používán ve formě celých bakterií, které mohou být živé nebo usmrcené a rovněž ve formě bakteriálního lyzátu, nebo ve formě bakteriálních podílů (frakcí).
Prostředek připravený v kontextu použití podle tohoto vynálezu s výhodou obsahuje alespoň 105, s výhodou alespoň 106, obecně pak od 1 x 108 do 1,5 x 109 buněk Z. casei na 1 ml.
Pokud se Z. casei používá v kombinaci s jogurtovými zákvasy, uvedený prostředek rovněž výhodně obsahuje alespoň 107 a výhodněji od 2 x 10’ do 1 x 109 buněk S. thermophilus na 1 ml a alespoň 5 x 105 a lépe od 4 x 106 do 2 x 107 buněk Z. bulgaricus na 1 ml.
Kmenem L. casei, který je nej vhodnější pro použití v předkládaném vynálezu, je CNCM kmen I1518.
Prostředky připravené podle tohoto vynálezu mohou být podávány ve formě potravin nebo potravinových doplňků. Mohou to být například mléčné výrobky a zejména zakysané mléčné výrobky, obsahující alespoň zmíněný kmen Z. casei, volitelně ve spojení s jiným i bakteriemi kyseliny mléčné, například s jogurtovými zákvasy.
. 7 _
Prostředky připravené podle předkládaného vynálezu mohou být použity k prevenci a léčbě patologických stavů infekčního původu a zejména virového původu, zvláště pak způsobených chřipkovými viry. K získání optimálního účinku budou s výhodou podávány po dobu alespoň jednoho týdne a lépe alespoň po dobu 10 dnů v množství, odpovídajícím absorpci alespoň 107, lépe alespoň 108 a obecně od 109 do 1012 buněk L. casei.
Předkládaný vynález bude mnohem lépe srozumitelný za pomoci dalšího popisu, který se týká neomezujících příkladů, dokreslujících vlastnosti kmene Lactobacillus casei, zesilujících specifickou odpověď vůči mikrobiálním agens.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Působení Lactobacillus casei na proliferaci buněk T v odpovědi na antigenní stimulaci.
K testování účinku požití zakysaného mléčného výrobku s obsahem kmene Lactobacillus casei DN-114 001 (CNCM 1-1518) na proliferaci buněk T v odpovědi na antigenní stimulaci byla provedena dvojitě slepá studie vůči placebu.
Podmínky této studie byly následující:
Účastníci studie
Osmdesát osm zdravých jedinců, ve věku od 18 do 50 let, bylo získáno ve Washingtonském léčebném centru, na oddělení infekčních nemocí (Washington Hospital Center, Washington DC, Department of Infectious Diseases). Z této studie byli vyloučeni jedinci, kteří prodělali infekční zánět jater nebo měli ledvinové problémy, kardiovaskulární dysfunkce, imunitní nebo gastroíntestinální choroby, těžké astma nebo diabetes, jedinci, kteří podstoupili léčbu antibiotiky nebo imunosupresivními látkami v době kratší než 3 měsíce před začátkem studie, jedinci, kteří zneužívali alkohol nebo na něm byli závislí, jedinci se známou nesnášenlivostí nebo přecitlivělostí vůči mléčným výrobkům, jedinci s nízkokalorickou dietou, jedinci, kteří byli očkováni vůči chřipce během předcházející sezóny a také těhotné nebo kojící ženy.
Protokol (postup) a podmínky studie byly schváleny výzkumnou radou (Research Committee) WHC a také radou Institutional Review Board, která kontroluje studie prováděné na lidech. Vybraní jedinci byli náhodně rozděleni do dvou skupin:
- skupina o 47 jedincích (26 žen a 21 mužů) dostávala denně 100 ml zakysaného mléčného výrobku s obsahem 2 % tuku, zahrnujícího jogurtové zákvasy (7, bulgaricus a 5. thermophtlus} a kmen Lactobacillus casei DN-114 001, prodávaného firmou Danone pod výrobním názvem Actimel.
- skupina o 41 jednotlivcích (22 žen a 19 mužů) dostávala denně po 28 dnů placebo: 100 ml mléka zředěného vodou (1/5, objem/objem) doplněného cukrem k poskytnutí odpovídající kalorické hodnoty, jakou vykazuje Actimel.
Jedinci zahrnutí do obou skupin byli požádáno, aby se během této studie zdrželi konzumace jogurtu nebo jiných zakysaných mléčných výrobků.
Průměrný věk (směrodatná odchylka je uvedena v závorce) jedinců činil 36 (7,3) roků pro skupinu dostávající Actimel a 32,7 (7,4) roku pro skupinu dostávající placebo.
-3CZ 303600 B6
Před začátkem konzumace Actimelu nebo placeba byl každému jedinci z obou skupin odebrán krevní vzorek (55 ml) ke stanovení základních hodnot. Jedinci přišli na kontrolní návštěvy ve dnech 9, 18 a 28 a vyplnili krátké dotazníky, týkající se jejich zdraví, možných vedlejších účinků a také vývoje jakéhokoliv onemocnění, které by mohlo narušovat interpretaci získaných výsledků. Během každé návštěvy byl odebrán krevní vzorek pro imunologické pokusy.
U každého jednotlivého krevního vzorku bylo provedeno spočítání buněk v celé krvi a chemická analýza krve. Kromě toho bylo průtokovou cytometrií uskutečněna analýza fenotypu leukocytů ajejich podskupin (buněk T ajejich podskupin, buněk B, monocytů a buněk NK, tj. přirozených zabíječů).
Měření proliferace buněk
Proliferativní odpověď buněk T sledovaných jedinců ze skupiny, dostávající Actimel a jedinců dostávající placebo, bylo určována ex vivo s ohledem na tři mikrobiální antigeny: kvasnicový antigen, tetanový antigen a chřipkový antigen, měřením inkorporace 3HTdR (radioaktivně značeného thymidinu), jak je popsáno níže.
Příprava buněk ml heparínizované krve z každého vzorku bylo podrobeno následujícímu postupu: zkumavka byla 10 minut odstřeďována při 1500 otáčkách/minutu. Získaná plazma byla pečlivě převedena do označených kryo-zkumavek a uchovávána při 70 °C. Krev byla převedena do centrifugačních zkumavek o objemu 15 ml a naředěna v poměru 1 : 3 prostřednictvím PBS (fosfátem pufrováného fyziologického roztoku).
Do centrifugační zkumavky o objemu 50 ml bylo přidáno 10 ml prostředku Ficoll-hypaque a převrstveno 30 ml naředěné krve. Zkumavka byla odstřeďována 2 minuty při 2000 otáčkách/minutu při teplotě místnosti. Svrchní vrstva PBS byla odstraněna a mononukleámí buňky byly spojeny a převedeny do centrifugační zkumavky o objemu 15 ml. Poté bylo přidáno 10 ml média HBSS (Hanksův roztok), obsah zkumavky byl promíchán a odstreďován 10 minut při 1500 otáčkách/minutu. Supematant byl odstraněn a pelet byl resuspendován ve 2 až 3 ml média HBSS. Přidáno bylo 8 ml HBSS a zkumavka byla odstřeďována dalších 6 minut při 1500 otáčkách/minutu.
Tento postup byl opakován 2x a získané buňky byly resuspendovány v 1 až 2 ml PBS a promíchány. Následně byly buňky spočítány, pomocí trypanové modře byla zjištěna jejich životnost a jejich koncentrace byla upravena na 2 x l O8 buněk/ml.
Příprava antigenu
Tetanový antigen: příprava byla prováděna v den stanovení. Zásobní roztok byl připraven naředěním tetanového toxoidu (Connaught Laboratory, Willowdale, Canada) v poměru 1 : 1000 v PBS.
Antigeny Candida albicans: zásobní roztok byl připraven naředěním antigenů Candida albicans (Bayer Co, Elkert, IN) v poměru 1 : 1000 PBS.
Chřipkové antigeny: zásobní roztok byl připraven naředěním přípravku antigenu chřipkového viru (NIBSC, od firmy Herts, Anglie) v poměru l : 125 v PBS.
Použity byly mikrotitrační destičky o 96 jamkách. Do každé jamky bylo vloženo 100 μΙ zásobního roztoku antigenu a 100 μΙ roztoku buněk v konečné koncentraci 2 x 105 buněk na jamku.
Do kontrolních jamek bylo místo zásobního roztoku antigenu vloženo 100 μΐ PBS. Destičky byly inkubovány 5 dní při 37 °C a v přítomnosti 5 % CO> 18 hodin před koncem inkubace bylo přidá-4CZ 303600 B6 no 20 μΐ 3HTdR (New England Nuclear, Boston, MA) v koncentraci 50 pCi/ml. Buňky ze všech jamek každé destičky byly shromážděny na filtry a tyto filtry byly přímo odečítány v přístroji Matrix 9600 beta-counter (Packard Instruments) pro stanovení inkorporace 3HTdR, vyjádřené v CPM (impulzy za minutu).
U každého jedince ze skupiny dostávající Actimel a u každého jedince ze skupiny dostávající placebo byla proliferace stanovena určením indexu stimulace (SI) podle následujícího vzorce:
průměr CPM stimulovaných buněk SI= průměr CPM nestimulovaných buněk (kontr. jamky)
Statistická analýza
Popisná statistika (průměr, směrodatná odchylka, medián) byla použita k sumarizaci proliferativní odpovědi buněk T na vystavení každému z uvedených antigenů, a to u každého jedince z obou skupin a v každém čase měření. Vzhledem k systematické chybě rozprostření proliferativní odpovědi byla u údajů, týkajících se proliferace, použita transformace na přirozený logaritmus.
Odchylky proliferativní odpovědi vzhledem k základní hodnotě byly použity pro statistické modelování (Littel se spoluautory, SAS System for Mixed Model. North Carolína: SAS Institute lne., 1996). Modifikace proliferativní odpovědi vzhledem k základní hodnotě jako funkce času byly prezentovány za použití postupu vyrovnání křivky, jak je popsáno Digglem a spoluautory, Analysis of Longitudinal Data;. New York: University Press lne., 1994).
Směsný lineami model byl vyvinut ke studiu trajektorie (dráhy) proliferativní odpovědi. Tento model umožňuje přizpůsobení údajů o proliferaci pro každou skupinu dané studie kvadratické křivce.
Tento model je definován následující rovnicí:
Yij, = + pij τ + β2, T2 + ε„, i = j = 1,2, t = 1,2, 3,4, kde:
Yy, označuje změnu proliferativní odpovědi ve srovnání se základní hodnotou u jedince i ve skupině j dostávající výrobek, v čase t; transformace na přirozený logaritmus byla prováděna pro každou proměnnou,
Yijt = log (proliferace v čase t) - log (základní hodnoty) atJ označuje zachycení jednotlivce i ve skupině j, dostávající výrobek. To odráží náhodný účinek v modelu atJ MVN (0, G), G obsahuje složky změny (variace) v diagonální struktuře (MVN = multinormální variabilní distribuce).
pij a p2j jsou regresní koeficienty T a T2 pro skupinu j, dostávající výrobek;
Tje okamžik měření (den 0, 9, 18 nebo 28) a T2 je kvadratické vyjádření T;
Ey, je koeficient chyby:
c1Jt MVN (0, R) a R = σ2Ιη, kde ln označuje matici identity (jednotkovou matici) n xn.
-5 CZ 303600 B6
Pro následující hypotézu byly provedeny statistické testy:
a) test, zda odhadovaný regresní koeficient je rovný 0.
HO: β 1 j = 0 proti Η1: β 1 j * 0 (pro lineární vyjádření) a HO: Ú2j = 0 proti Hl: p2j * 0 (pro kvadratické vyjádření)
Pokud se pij a p2j neliší od 0, potom neexistuje žádná trajektorie.
i o Pokud je p2j významně odlišný od 0, jedná se o kvadratickou trajektorii.
Pokud je pouze β^ významně odlišný od 0, jedná se o lineární trajektorii,
b) srovnání, zda jsou trajektorie obou skupin identické
Ho: βIj = β 12 vůči Hl: βΐ i β12 (pro lineární vyjádření) a Ho: p2j = β22 vůči Hl: β2ι # β22 (pro kvadratické vyjádření)
Provádění analýz byl použit statistický systém SAS.
Výsledky
Tabulka 1 viz níže poskytuje demografické údaje, týkající se jedinců a stanovení základní hodnoty proliferace.
-6CZ 303600 B6
Tabulka 1
| demograf. údaje a základní hodnoty | placebo | Actimel | srovnání placebo:Actimel | |
| pohlaví | ženské | 22 | 26 | Chi-čtvercový |
| mužské | 19 | 21 | test, P=0,826 | |
| věk | průměr (SD) | 32,7 (7,4) | 36,0 ± 7,3 | T-test |
| medián | 31 | 37 | P=0,038 | |
| etnikum | bílé | 26 | 25 | Chi-čtvercový |
| černé | 12 | 17 | test, přesná | |
| jiné | 3 | 5 | hodnota p=0,826 | |
| leuko- cyty | průměr (SD) | 5 997 (1451) | 5 810 (1399) | T-test |
| medián | 5 992 | 5 990 | P=0,540 | |
| lymfo- | průměr (SD) | 1 932 (567) | 2 009 (554) | T-test |
| cyty | medián | 1 812 | 1 993 | P=0,519 |
| CD3XD4* | průměr (SD) | 865 (327) | 907 (325) | T-test |
| 1 | medián | 740 | 818 | P=0,546 |
| CD3+CD8+ | průměr (SD) | 469 (205) | 431 (181) | T-test |
| medián | 417 | 403 | P=0,360 | |
| CD3*CD25‘ | ' průměr (SD) | 380 (200) | 408 (182) | T-test |
| medián | 349 | 392 | P=0,489 | |
| CD3+CD45 | průměr (SD) | 1 384 (488) | 1 411 (434) | T-test |
| medián | 1 354 | 1 382 | P=0,783 | |
SD = směrodatná odchylka
Prolíferace buněk T v odpovědi na specifické mikrobiální antigeny
Průměry, směrodatné odchylky a mediány prolíferace ex vivo mononukleámích buněk z periferní ío krve (PBMC) pro každou skupinu (dostávající Actimel a dostávající placebo) v různých časech odebrání vzorku jsou uvedeny níže v tabulce 2.
-7CZ 303600 B6
Tabulka 2
| antigen | Placebo | Actimel | ||||||
| den 0 | den 9 | den 18 | den 28 | den 0 | den 9 | den 18 | den 28 | |
| kvasinka | ||||||||
| průměr | 2,3 | 2,7 | 2,9 | 1,9 | 3,0 | 3,2 | 4,3 | 2,3 |
| SD | 2,0 | 3,1 | 4,1 | 1,2 | 3,4 | 3,5 | 5,6 | 2,6 |
| medián | 1,5 | 1,7 | 1,6 | 1,6 | 1,7 | 1,7 | 2,0 | 1,4 |
| tetanus | ||||||||
| průměr | 7,3 | 11,8 | 7,9 | 8,7 | 8,4 | 8,7 | 10,3 | 7,8 |
| SD | 7,8 | 12,3 | 8,0 | 8,1 | 15,8 | 10,4 | 11,8 | 8,2 |
| medián | 5,2 | 6,3 | 5,1 | 6,7 | 3,5 | 5,2 | 5,0 | 5,1 |
| chřipka průměr | 14,2 | 21,7 | 17,0 | 17,3 | 13,0 | 19,7 | 20,3 | 13,9 |
| SD | 11,4 | 19,1 | 19,6 | 15,7 | 12,6 | 17,1 | 16,6 | 12,7 |
| medián | 11,1 | 16,5 | 9,8 | 12,0 | 9,6 | 16,9 | 17,0 | 11,0 |
SD = směrodatná odchylka
Mezi oběma skupinami této studie nejsou patrné významné rozdíly v základních hodnotách (v den 0), pokud se týká proliferativní odpovědi na tři zmíněné mikrobiální antigeny.
io Obr. 1 znázorňuje rozdíly v proliferativní odpovědi v závislosti na čase pro každý antigen podávaný oběma skupinám ve studii: skupina dostávající Actimel je vyznačena souvislou čarou, skupina dostávaj ící placebo je vyznačena přerušovanou čarou.
Výsledky statistického modelování jsou uvedeny níže v tabulce 3.
-8CZ 303600 B6
Tabulka 3
| antigen | proměnná | odhad 1 parametru | smérodat. chyba | Ho test: param.=0 | srovnání 2 křivek |
| kvasinka | placebo T | 0,017 | 0,014 | P=0,232 | Ho: βη=β12 |
| T2 | - 0,0007 | 0,0005 | P=0,208 | P=0,540 | |
| Actimel T | 0,028 | 0,013 | P=0,030 | H„: p2,= p2, | |
| T2 | - 0,0012 | 0,0005 | P=0,013 | P=0,458 | |
| tetanus | placebo T | 0,034 | 0,014 | P=0,022 | H„: P1,= P12 |
| T2 | - 0,0008 | 0,0005 | P=0,141 | P=0,630 | |
| Actimel T | 0,043 | 0,013 | P=0,001 | H„: P2,= P22 | |
| T2 | - 0,0011 | 0,0005 | P=0,020 | P=0,626 | |
| chřipka | placebo T | 0,022 | 0,017 | P=0,181 | H„: P1,= P12 |
| T2 | - 0,0004 | 0,0006 | P=0,475 | P=0,045 | |
| Actimel T | 0,068 | 0,015 | P=0,0001 | H„: p2,= β22 | |
| T2 | - 0,0023 | 0,0006 | P=0,0001 | P=0,027 |
Kvasinka
Ve skupině, dostávající Actimel, se základní odpověď 3,0 ± 3,4 v den 0 zvyšuje na 3,2 ± 3,5 v den 9 a na 4,3 ± 5,6 v den 18 a poté klesá na 2,3 ± 2,6 v den 28 (tabulka 2). Koeficienty odhadlo nutě pro lineární vyjádření T a kvadratické vyjádření T2 jsou 0,028 a 0,0012 (tabulka 3). Obě tyto hodnoty jsou statisticky významně odlišné od 0 (p = 0,030 a 0,013). Tato pozorování naznačují, že zde existuje významný pozitivní sklon ke změně v proliferativní odpovědi vůči kvasinkovému antigenů. Proliferativní odpověď nejprve narůstá a poté klesá, jak je znázorněno na obr. 1 a.
Skupina, dostávající placebo, vykazuje malou změnu po celou dobu studia. Regresní koeficienty, odhadnuté pro T a T2, jsou 0,017 a 0,0007. Tyto hodnoty nejsou významně odlišné od 0 (p 0,232 a 0,208). Uvedená pozorování ukazují, že nedochází k významné změně proliferativní odpovědi kontrolní skupiny v průběhu studie. Jak je znázorněno na obrázku 1 a, křivka skupiny dostávající placebo je plošší než křivka skupiny dostávající Actimel. Ačkoliv skupina, dostávající
Actimel, vykazuje významnou trajektorii oproti skupině placeba, rozdíl mezi oběma křivkami nedosahuje úrovně statistické významnosti (p = 0,540 pro T a p = 0,458 pro T2, tabulka 3).
Tetanus
U skupiny, dostávající Actimel, odpověď postupně vzrůstala ze základní úrovně až do dne 18 a poté klesala. Regresní koeficienty, odhadnuté pro T a T2, jsou 0,043 a 0,0011 (tabulka 3). Tyto dvě hodnoty jsou významně odlišné od 0 (p = 0,001 a 0,020). Stejně jako v případě kvasinky, kladná změna proliferativní odpovědi v průběhu studie je pro skupinu dostávající Actimel významná. U skupiny, dostávající placebo, vzrostla průměrná hodnota z 7,3 v den 0 na 11,8 v den
9, poté poklesla na 7,9 v den 18 a opět vzrostla na 8,7 v den 28 (obr. 1 b). Dokonce i s nevýznam-9CZ 303600 B6 ným koeficientem pro vyjádření 2. stupně, T2 (- 0,0008, p = 0,141, tabulka 3), významný odhadnutý koeficient T (0,034, p = 0,022, tabulka 3) vykazuje účinek trajektorie. Pokud je ovšem skupina, dostávající Actimel, srovnána se skupinou dostávající placebo, nevykazují statistické testy žádné významné rozdíly mezi oběma křivkami (p = 0,630 a 0,626 pro T a T2).
Chřipka
Skupina, dostávající Actimel, vykázala jasnější změnu než skupina, dostávající placebo. Průměrná hodnota vzrostla z 13 ± 12,6 v den 0 na 19,7 ± 17,1 v den 9, zůstala na této hodnotě i v den 18 io a poklesla na 13,9± 12,7 v den 28 (obrázek 1 c). Oba koeficienty odhadnuté pro T a T2, jsou významně odlišné od 0 (p = 0,001). Tyto statistické údaje ukazují, že kladná změna proliferativní odpovědi během prováděné studie je statisticky významná (tabulka 2).
Skupina, dostávající placebo, vykázala rozdíly podobné těm, které byly pozorovány u tetanového antigenu. Průměrné hodnoty vzrůstaly do dne 9, klesaly do dne 18 a opět vzrůstaly do dne 28, jak je znázorněno na obr. 1 c. Dva odhadnuté regresní koeficienty se významně neliší od 0 (p - 0,181 a 0,475 pro T a T2), což ukazuje, že zde není významná trajektorie rozdílů proliferativní odpovědi vůči chřipkovému antigenu.
Při srovnání parametrů, získaných pro skupinu dostávající Actimel a skupinu dostávající placebo, byly pozorovány významné rozdíly jak v lineárních parametrech, tak i v kvadratických parametrech (p = 0,045 pro T a p = 0,027 pro T2, tabulka 3). Tyto závěry ukazují, že změny proliferativní odpovědi jsou u těchto dvou studovaných skupin významně odlišné.
Příklad 2
Účinek Lactobacillus casei na proliferaci podskupin lymfocytů T v odpovědi na stimulaci chřipkovým anti genem.
Přesná povaha podskupiny či podskupinu buněk T, která odpovídá nebo které odpovídají v podmínkách in vitro na mikrobiální antigeny, není známa. Za prvotně odpovídající podskupinu může být považována kterákoliv ze specifických podskupin lymfocytů T jako jsou ty, představované fenotypy CD3TCD4+, CD3+CD8\ CD3+CD25+ a CD3+CD45+, nebo tyto spojené podskupiny mohou přispívat k celkové proliferativní odpovědi na antigeny.
Za předpokladu, že na zesílené antigeny odpovídají zejména specifické podskupiny lymfocytů, byly pro podskupiny T buněk: CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD3+CD25+ a CD3+CD45+ provedeny analýzy, využívající statistického modelu, popsaného v příkladu 1, Cílem bylo stanovit, zda se proliferativní odpověď, získaná pro každou ze 4 podskupin, významně odlišuje u skupiny dostávající Actimel ve srovnání se skupinou dostávající placebo.
V těchto analýzách byly hodnoty proliferativní odpovědi, původně založené na celkových mononukleámích buňkách z periferní krve, PBMC, převedeny u každé podskupiny na nové hodnoty, počítané podle celkového četnosti CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD3+CD25* a CD3+CD45+ buněk T v každém krevním vzorku. Dále byly pro každou podskupinu provedeny statistické analýzy, popsané výše v příkladu 1.
Průměrné hodnoty, směrodatné odchylky a mediány (střední hodnoty) každého jednotlivce ze skupiny, dostávající Actimel i ze skupiny, dostávající placebo, které se týkají 4 podskupin lymfocytů, jsou uvedeny níže v tabulce 4.
- 10CZ 303600 B6
Tabulka 4
| podskupina lymfocytů | Placebo | Actimel | ||||||
| den 0 | den 9 | den 18 | den 28 | den 0 | den 9 | den I 18 | den 28 | |
| CD3+CD4* | ||||||||
| průměr | 101 | 149 | 113 | 125 | 87,4 | 131 | 133 | 107 |
| SD | 84,0 | 130 | 117 | 127 | 104 | 90,2 | 112 | 127 |
| medián | 72,8 | 111 | 74,5 | 91,0 | 63,0 | 103 | 92,0 | 64,5 |
| CD3+CD8* průměr | 192 | 268 | 251 | 251 | 230 | 301 | 365 | 244 |
| SD | 155 | 250 | 289 | 336 | 375 | 286 | 554 | 302 |
| medián | 167 | 218 | 140,5 | 168 | 105 | 180 | 218 | 126 |
| CD3+CD25* | ||||||||
| průměr | 250 | 377 | 260 | 354 | 177 | 267 | 310 | 270 |
| SD | 219 | 374 | 208 | 462 | 139 | 163 | 210 | 305 |
| | medián | 185 | 263 | 228 | 247 | 159 | 262 | 251 | 177 |
| CD3+CD45+ | ||||||||
| průměr | 63,5 | 87,6 | 73,0 | 76,2 | 52,1 | 78,7 | 87,1 | 69,1 |
| SD | 54,1 | 70,9 | 81,3 | 79,7 | 72,2 | 56,3 | 79,2 | 95,2 |
| medián | 47,5 | 66,6 | 43,1 | 51,4 | 34,0 | 64,0 | 67,8 | ] 41,0 |
SD = směrodatná odchylka
Rozdíly v základních hodnotách u obou skupin studie nejsou statisticky významné.
Za použití statistického modelu, popsaného v příkladu 1, byly pro každou ze Čtyř podskupin lymio focytů analyzovány rozdíly oproti základním hodnotám v proliferaci jako odpovědi na chřipkový antigen. Obr. 2 znázorňuje rozdíly v proliferaci, a to v logaritmickém měřítku, pro každou z těchto podskupin a pro každou z obou skupin ve studii.
Výsledky statisticky modelování jsou uvedeny níže v tabulce 5.
- 11 CZ 303600 B6
Tabulka 5
| podskupina lymfocytů | proměnná | odhad parametru (SE) | Ho test; param.=0 | srovnání 2 křivek |
| CD3+CD45+ | placebo T T2 | 0,015 (0,016) - 0,0003 (0,0006) | P=0,352 P=0,597 | Ho: β1,= β12 P=0,015 Ho: β2,= β2, P=0,016 |
| Actimel T T2 | 0,071 (0,015) - 0,0024 (0,0006) | P<0,001 P<0,001 | ||
| CD3+CD25* | placebo T T2 | 0,024 (0,016) - 0,0004 (0,0006) | P=0,144 P=0,463 | H„: β1,= β12 P=0,031 H„: β2,= β22 P=0,030 |
| Actimel T T2 | 0,071 (0,015) - 0,0022 (0,0006) | P<0,001 P<0,001 | ||
| CD3*CD8* | placebo T T2 | 0,014 (0,017) - 0,0003 (0,0006) | P=0,410 P=0,671 | Ho: β1,= β12 P=0,013 Ho: β2,= β2, P=0,012 |
| Actimel T T2 | 0,070 (0,015) - 0,0024 (0,0006) | P<0,001 P<0,001 | ||
| CD3+CD4+ | placebo T T2 | 0,022 (0,017) - 0,0005 (0,0006) | P=0,203 P=0,436 | Ho: β1,= β1, P=0,028 H„: β2,= β2, P=0,024 |
| Actimel T T2 | 0,072 (0,015) - 0,0025 (0,0006) | P<0,001 P<0,001 |
SE = střední chyba průměru
Proliferativní odpověď každé ze 4 podskupin lymfocytů souhlasí s obdobnými údaji, získanými pro celkové PBMC. Během vystavení chřipkovému antigenu byly u skupiny, dostávající Actimel, pozorovány významné změny, týkající se všech 4 podskupin lymfocytů. Tyto změny mohou být io znázorněny jako kvadratická funkce Času.
Malé změny byly pozorovány u všech 4 podskupin i v případě podávání placeba.
Nadto byly změny mezi oběma studovanými skupinami významné u všech podskupin lymfocytů.
Závěr
Tyto výsledky u třech testovaných antigenů ukazují zvýšení proliferativní odpovědi indukované zesílením antigenu, které bylo vyšší u skupiny, dostávající Actimel, než u skupiny, dostávající placebo. V případě chřipkového antigenu je zvýšení u skupiny, dostávající Actimel, statisticky významné ve srovnání se skupinou dostávající placebo, a to jak pro celkové PBMC, tak i pro každou z podskupin T buněk CD3 CD4 , CD3 CD8*, CD3 'CD25+ a CD3+CD45+.
- 12CZ 303600 B6
Zdá se proto zřejmé, že konzumace Actimelu indukovala u zúčastněných jedinců imunologický „priming“, iniciaci in vivo, což vedlo k ex vivo odpovědi jejich buněk T vůči mikrobiálním antigenům a zejména vůči chřipkovým antigenům. Tato odpověď byla lepší než odpověď, pozorovaná u skupiny, jíž bylo podáváno placebo.
Pozorované zvýšení odpovědi odpovídá četnosti a stavu aktivace buněk CD3+ T a jejich podskupin u jedinců ze skupiny, dostávající Actimel.
Kromě toho kladná souvztažnost s přítomností aktivačního markéru CD25 naznačuje zapojení io aktivace in vivo buněk T specifických vůči chřipce, které exprimují (vystavují) receptory CD25
IL-2 a jsou schopné účinněji odpovídat na chřipkové antigeny. Analýza podskupin buněk T rovněž naznačuje, že proliferativní odpověď pravděpodobně zahrnuje jak podskupinu CD4+, tak podskupinu CD8+, odpovídající na chřipkový antigen. Důležitost podskupiny CD3 /CD8 buněk T při analýze proliferace naznačuje možnost „primingu“, iniciace in vivo celého poolu CD81- cytotoxických buněk, specifických vůči chřipce.
Claims (5)
- 20 PATENTOVÉ NÁROKY1. Použití L. casei kmene CNCM 1-1518 pro přípravu prostředků pro orální podávání k zesílení specifické systémické imunitní odpovědi proti chřipkovému viru.
- 2. Použití podle nároku 1, při němž se prostředek podává lidskému jedinci.
- 3. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 a 2, při němž uvedeným patogenním mikroorganismem je virus, který se volí z rhinovirů, respiračních syncytiálních virů a myxovirů.
- 4. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, při němž uvedený prostředek je ve formě potraviny nebo potravinového doplňku.
- 5. Použití podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, při němž uvedený prostředek je ve formě zaky35 sáného mléčného výrobku.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0006679A FR2809312B1 (fr) | 2000-05-25 | 2000-05-25 | Utilisation de l. casei dans des compositions immunostimulantes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20024189A3 CZ20024189A3 (cs) | 2003-05-14 |
| CZ303600B6 true CZ303600B6 (cs) | 2013-01-02 |
Family
ID=8850597
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20024189A CZ303600B6 (cs) | 2000-05-25 | 2001-04-27 | Použití bakteriálního kmene druhu L. casei ke zvýšení imunity |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7604809B2 (cs) |
| EP (1) | EP1283714B1 (cs) |
| JP (1) | JP2003534284A (cs) |
| CN (1) | CN1194707C (cs) |
| AR (1) | AR028626A1 (cs) |
| AT (1) | ATE332143T1 (cs) |
| AU (2) | AU5643501A (cs) |
| BG (1) | BG65884B1 (cs) |
| BR (1) | BR0111135A (cs) |
| CA (1) | CA2410350C (cs) |
| CZ (1) | CZ303600B6 (cs) |
| DE (1) | DE60121327T2 (cs) |
| DK (1) | DK1283714T3 (cs) |
| EA (1) | EA005081B1 (cs) |
| ES (1) | ES2267763T3 (cs) |
| FR (1) | FR2809312B1 (cs) |
| HK (1) | HK1055898A1 (cs) |
| HR (1) | HRP20020935A2 (cs) |
| HU (1) | HUP0302041A3 (cs) |
| IL (1) | IL152980A0 (cs) |
| MA (1) | MA25760A1 (cs) |
| MX (1) | MXPA02011636A (cs) |
| NO (1) | NO332369B1 (cs) |
| PL (1) | PL201801B1 (cs) |
| PT (1) | PT1283714E (cs) |
| SK (1) | SK18272002A3 (cs) |
| WO (1) | WO2001089541A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA200209087B (cs) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6800744B1 (en) * | 1997-07-02 | 2004-10-05 | Genome Therapeutics Corporation | Nucleic acid and amino acid sequences relating to Streptococcus pneumoniae for diagnostics and therapeutics |
| GB0009294D0 (en) | 2000-04-15 | 2000-05-31 | Sec Dep For The Home Departmen | Improvements in and relating to analysis of DNA samples |
| US9610347B2 (en) * | 2001-04-30 | 2017-04-04 | Cortcontrol | Vaccination response for immunodeficiency or high cortisol |
| CN1317385C (zh) * | 2003-05-30 | 2007-05-23 | 上海光明乳业股份有限公司 | 干酪乳杆菌Bd－II菌株及其在降低血脂方面的应用 |
| US8877178B2 (en) | 2003-12-19 | 2014-11-04 | The Iams Company | Methods of use of probiotic bifidobacteria for companion animals |
| US20050158294A1 (en) | 2003-12-19 | 2005-07-21 | The Procter & Gamble Company | Canine probiotic Bifidobacteria pseudolongum |
| ATE361101T1 (de) * | 2004-08-24 | 2007-05-15 | Nutricia Nv | Nahrungszusammensetzung die unverdauliche oligosaccharide enthält |
| ZA200705844B (en) * | 2004-12-15 | 2008-09-25 | Van Der Westhuzen Corne Floris | Detoxifying and immunity-booster composition |
| EP1683425A1 (en) * | 2005-01-21 | 2006-07-26 | Compagnie Gervais Danone | Use of a fermented milk containing L. Casei for the manufacture of a composition for the prevention or treatment of a delayed-type hypersensitivity reaction |
| ES2264368B1 (es) * | 2005-02-11 | 2007-12-01 | Francisco Exposito Mesa | Complemento alimenticio o dietetico compuesto por productos procedentes del lisado de microorganismos. |
| BRPI0611492B1 (pt) | 2005-05-31 | 2021-10-13 | Mars, Incorporated | Bifidobactéria probiótica felina |
| WO2006130187A1 (en) | 2005-05-31 | 2006-12-07 | The Iams Company | Feline probiotic lactobacilli |
| CA2662226C (en) | 2006-09-10 | 2020-08-04 | Glycotope Gmbh | Fully human high yield production system for improved antibodies and proteins |
| FR2912657B1 (fr) * | 2007-02-16 | 2009-04-17 | Gervais Danone Sa | Utilisation de lactobacillus casei pour renforcer la protection induite par la vaccination anti-grippale. |
| WO2009021585A1 (en) * | 2007-08-13 | 2009-02-19 | Dsm Ip Assets B.V. | Probiotic bacteria for rducing the occurence of symptoms of winter infections |
| WO2009067000A1 (en) * | 2007-11-20 | 2009-05-28 | N.V. Nutricia | Composition with synbiotics |
| EP2119365B1 (de) | 2008-05-13 | 2017-08-16 | Glycotope GmbH | Fermentationsprozess |
| CA2722738C (en) * | 2008-05-13 | 2017-04-25 | Glycotope Gmbh | Fermentation process |
| US9771199B2 (en) | 2008-07-07 | 2017-09-26 | Mars, Incorporated | Probiotic supplement, process for making, and packaging |
| EP2153837A1 (en) | 2008-08-14 | 2010-02-17 | Compagnie Gervais Danone | Compositions comprising Lactobacillus casei for improving resistance to common infectious diseases |
| FR2937252B1 (fr) * | 2008-10-17 | 2011-05-20 | Pf Medicament | Association d'un extrait de sureau et d'une souche de l. paracasei. |
| US10104903B2 (en) | 2009-07-31 | 2018-10-23 | Mars, Incorporated | Animal food and its appearance |
| BR112012016894A2 (pt) * | 2010-01-08 | 2015-09-15 | Gervais Danone Sa | lactobacilos com ação antioxidante. |
| EA031179B1 (ru) * | 2010-03-12 | 2018-11-30 | Компани Жервэ Данон | Молочнокислые бактерии, применяемые при чревной болезни |
| CN105288616B (zh) * | 2010-10-15 | 2018-10-19 | 科.汉森有限公司 | 免疫佐剂 |
| EP2455092A1 (en) | 2010-11-11 | 2012-05-23 | Nestec S.A. | Non-replicating probiotic micro-organisms protect against upper respiratory tract infections |
| US9700610B2 (en) | 2011-08-22 | 2017-07-11 | Glycotope Gmbh | Microorganisms carrying a tumor antigen |
| WO2014038929A1 (en) | 2012-09-07 | 2014-03-13 | N.V. Nutricia | Probiotics for producing antiviral factors |
| CA3100608A1 (en) | 2018-05-18 | 2019-11-21 | Daiichi Sankyo Co., Ltd. | Anti-muc1 antibody-drug conjugate |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996020607A1 (fr) * | 1995-01-02 | 1996-07-11 | Compagnie Gervais Danone | Ferment lactique, et son utilisation pour la preparation de produits anti-diarrheiques |
| WO1999010476A1 (en) * | 1997-08-21 | 1999-03-04 | New Zealand Dairy Board | Immunity enhancing lactic acid bacteria |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05236872A (ja) * | 1992-02-27 | 1993-09-17 | Takanashi Nyugyo Kk | 乳酸菌含有食品 |
| JP4112021B2 (ja) * | 1994-02-16 | 2008-07-02 | 明治乳業株式会社 | 乳酸菌を用いた免疫賦活剤 |
| US6699517B2 (en) * | 1997-11-28 | 2004-03-02 | Compagnie Gervais Danone | Method for preparing food products by fermenting soy milk with streptococcus thermophilus |
| IT1298918B1 (it) * | 1998-02-20 | 2000-02-07 | Mendes Srl | Uso di batteri dotati di arginina deiminasi per indurre apoptosi e/o ridurre una reazione infiammatoria e composizioni farmaceutiche |
| KR100324441B1 (ko) * | 1999-02-08 | 2002-02-27 | 이은선 | 위염, 위궤양, 십이지장궤양 예방을 위한 식품 |
-
2000
- 2000-05-25 FR FR0006679A patent/FR2809312B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-04-27 HU HU0302041A patent/HUP0302041A3/hu unknown
- 2001-04-27 SK SK1827-2002A patent/SK18272002A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2001-04-27 AU AU5643501A patent/AU5643501A/xx active Pending
- 2001-04-27 MX MXPA02011636A patent/MXPA02011636A/es active IP Right Grant
- 2001-04-27 JP JP2001585785A patent/JP2003534284A/ja active Pending
- 2001-04-27 BR BR0111135-3A patent/BR0111135A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-04-27 PT PT01929743T patent/PT1283714E/pt unknown
- 2001-04-27 EP EP01929743A patent/EP1283714B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-27 AT AT01929743T patent/ATE332143T1/de active
- 2001-04-27 DK DK01929743T patent/DK1283714T3/da active
- 2001-04-27 CA CA2410350A patent/CA2410350C/fr not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-27 CN CNB018100511A patent/CN1194707C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-27 US US10/276,315 patent/US7604809B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-27 WO PCT/FR2001/001310 patent/WO2001089541A1/fr active IP Right Grant
- 2001-04-27 AU AU2001256435A patent/AU2001256435B2/en not_active Ceased
- 2001-04-27 ES ES01929743T patent/ES2267763T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-27 IL IL15298001A patent/IL152980A0/xx unknown
- 2001-04-27 CZ CZ20024189A patent/CZ303600B6/cs unknown
- 2001-04-27 PL PL358408A patent/PL201801B1/pl unknown
- 2001-04-27 EA EA200201248A patent/EA005081B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-04-27 DE DE60121327T patent/DE60121327T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-24 AR ARP010102498A patent/AR028626A1/es unknown
-
2002
- 2002-11-08 ZA ZA200209087A patent/ZA200209087B/xx unknown
- 2002-11-20 BG BG107299A patent/BG65884B1/bg unknown
- 2002-11-21 NO NO20025595A patent/NO332369B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-11-25 HR HR20020935A patent/HRP20020935A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2002-12-20 MA MA26968A patent/MA25760A1/fr unknown
-
2003
- 2003-11-12 HK HK03108188A patent/HK1055898A1/xx not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996020607A1 (fr) * | 1995-01-02 | 1996-07-11 | Compagnie Gervais Danone | Ferment lactique, et son utilisation pour la preparation de produits anti-diarrheiques |
| WO1999010476A1 (en) * | 1997-08-21 | 1999-03-04 | New Zealand Dairy Board | Immunity enhancing lactic acid bacteria |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Hisako Yasui et al. : "Immunomodulatory function of lactic acid bacteria", Antonie van Leeu1wenhoek, Vol. 76(1-4), 383-389, 1999 * |
| Patidar S.K. and J.B. Prajapati: "Methods for assessing the immunostimulating properties of dietary Lactobacilli", J. Food Sci. Technol., Vol. 34(3), 181-184, 1997 * |
| Perdigon G. et al.: " Influenze of the oral aministration of lactic acid bacteria...", Int. J. Immunopatol. and Pharmacol., Vol. 12(2), 97-102, 1999 * |
| Pouwels P.H. et al.: "The potential of Lactobacillus as a carrier for oral immunization...", Journal of Biotechnology, Vol. 44(1), 183-192, 1996 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ303600B6 (cs) | Použití bakteriálního kmene druhu L. casei ke zvýšení imunity | |
| US9931363B2 (en) | Composition comprising probiotic bacteria for use in the treatment of immune disorders | |
| Perdigon et al. | Interaction of lactic acid bacteria with the gut immune system | |
| Gill et al. | Enhancement of natural and acquired immunity by Lactobacillus rhamnosus (HN001), Lactobacillus acidophilus (HN017) and Bifidobacterium lactis (HN019) | |
| JP3694236B2 (ja) | 免疫増強作用を有する乳酸菌 | |
| Davis et al. | Gut microbiome and breast-feeding: Implications for early immune development | |
| Perdigón et al. | Interaction of bifidobacteria with the gut and their influence in the immune function | |
| EP2627198B1 (en) | Immunoadjuvant | |
| WO2007092451A2 (en) | Zwitterionic polysaccharides for promotion of immune system maturation and health | |
| Molina et al. | A multi-strain probiotic promoted recovery of puppies from gastroenteritis in a randomized, double-blind, placebo-controlled study | |
| Gobbato et al. | Study of some of the mechanisms involved in the prevention against Salmonella enteritidis serovar Typhimurium infection by lactic acid bacteria | |
| Hasegawa et al. | Low-fat yogurt consumption maintains biomarkers of immune function relative to non-dairy control food in women with elevated BMI: a randomized controlled crossover trial | |
| CN114269897A (zh) | 罗伊乳杆菌 | |
| Patel | Immunomodulatory effect of dietary intervention of probiotic Lactobacillus helveticus MTCC 5463 in geriatric volunteers of Gujarat, India | |
| BG2759U1 (bg) | Имуномодулиращ синбиотичен състав |