PL201801B1 - Zastosowanie bakteryjnego szczepu CNCM I-1518 do wytwarzania kompozycji przeznaczonej do podawania doustnego - Google Patents
Zastosowanie bakteryjnego szczepu CNCM I-1518 do wytwarzania kompozycji przeznaczonej do podawania doustnegoInfo
- Publication number
- PL201801B1 PL201801B1 PL358408A PL35840801A PL201801B1 PL 201801 B1 PL201801 B1 PL 201801B1 PL 358408 A PL358408 A PL 358408A PL 35840801 A PL35840801 A PL 35840801A PL 201801 B1 PL201801 B1 PL 201801B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- day
- actimel
- group
- placebo
- cells
- Prior art date
Links
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 title claims abstract description 18
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 title abstract description 6
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 title abstract description 6
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 title description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 6
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 claims description 5
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 5
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims description 3
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 claims description 2
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 abstract description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 abstract 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 39
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 39
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 39
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 34
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 34
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 19
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 18
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 13
- 230000004044 response Effects 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 9
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 8
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 7
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 7
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 7
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 7
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 7
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 6
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 6
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000000207 lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 5
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 3
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 3
- 240000006030 Lactobacillus casei DN 114001 Species 0.000 description 3
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 description 3
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 2
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 2
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 2
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000013179 statistical model Methods 0.000 description 2
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 description 1
- 235000004050 Lactobacillus casei DN 114001 Nutrition 0.000 description 1
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 235000016127 added sugars Nutrition 0.000 description 1
- 206010001584 alcohol abuse Diseases 0.000 description 1
- 208000025746 alcohol use disease Diseases 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 238000012550 audit Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 235000021236 calorie-restricted diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 235000021001 fermented dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009499 grossing Methods 0.000 description 1
- 230000008821 health effect Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 1
- 208000037799 influenza C Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 230000004492 positive regulation of T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/125—Casei
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/245—Lactobacillus casei
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Immunology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Wynalazek dotyczy zastosowania bakteryjnego szczepu bakterii kwasu mlekowego CNCM I-1518 gatunku L. Ceasei do wytwarzania kompozycji przeznaczonej do podawania doustnego, zwi ek- szaj acej swoist a ogólnoustrojow a odpornosc na wirus grypy. W szczególno sci kompozycja ta mo ze mie c posta c artyku lu spo zywczego lub dodatku do zywno sci. Korzystniej, mo ze ona mie c posta c sfer- mentowanego produktu mlecznego. PL PL PL PL
Description
Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy zastosowania bakteryjnego szczepu bakterii kwasu mlekowego CNCM I-1518 gatunku L. Ceasei do wytwarzania kompozycji przeznaczonej do podawania doustnego, zwiększającej swoistą ogólnoustrojową odporność na wirus grypy.
Bakterie kwasu mlekowego (LAB) tradycyjnie są wykorzystywane do wytwarzania sfermentowanych produktów spożywczych, w szczególności przetworów mlecznych.
Wpływ bakterii kwasu mlekowego na zdrowie, początkowo sugerowany był w badaniach Metchnikoffa (The prolongation of life. Wydanie pierwsze, New York: GP Putman's Sons, 1908), i od tego momentu był przedmiotem wielu badań.
Obecnie ogólnie uznano, że różne bakterie kwasu mlekowego mogą odgrywać rolę korzystną dla zdrowia. Bakterie te nazywane są również „probiotykami”, a nazwa ta oznacza żywe drobnoustroje, które - jeśli są spożyte w wystarczającej ilości - wywierają dodatni wpływ na zdrowie, ponad konwencjonalne skutki odżywcze. Bakterie probiotyczne opisano w szczególności pośród gatunków należących do rodzajów Lactobacillus, Bifidobacterium, Streptococcus i Lactococcus, zwykle stosowanych w przemyś le mleczarskim.
Sądzi się, że probiotyki działają zwłaszcza na poziomie flory jelitowej, przez hamowanie rozwoju drobnoustrojów chorobotwórczych i/lub przez działanie bardziej bezpośrednie na układ odpornościowy. Zaobserwowano na przykład, że spożycie bakterii probiotycznych lub sfermentowanej żywności, takiej jak jogurt, zawierającej te bakterie prowadzi do zmniejszenia ilości bakterii chorobotwórczych. W kategoriach układu odpornościowego doniesiono o różnorodnych efektach: aktywacji komórek biorących udział w swoistej lub nieswoistej reakcji odpornościowej, takich jak limfocyty i makrofagi, wzrostu poziomu immunoglobulin, w szczególności IgA; wzrostu poziomu cytokin aktywujących układ odpornościowy, itd. (porównaj publikację przeglądową, na przykład Meydani i Ha, Am. J. Clin. Nutr.,71, 861-7217, 2000).
Ogólnie, badania przeprowadzone na różnych probiotycznych bakteriach kwasu mlekowego skłaniają do wniosku, że pewne gatunki, albo przynajmniej pewne szczepy tych gatunków, mają właściwości immunostymulacyjne. Z drugiej strony, pozostaje niepewny mechanizm (mechanizmy) leżący u podstaw tych wł a ś ciwoś ci i skł adniki ukł adu odpornościowego potencjalnie biorące w tym udział . Z tego powodu wydaje się konieczne wyjaśnienie tych aspektów, zwłaszcza w celu zaproponowania lepszego ukierunkowania zastosowań różnych gatunków lub szczepów bakterii probiotycznych.
Kilka badań przeprowadzonych na ludziach i zwierzętach sugeruje, że bakterie gatunku L. casei mają dobroczynny wpływ na zdrowie, zwłaszcza pozytywnie wpływają na układ odpornościowy.
Na przykładzie myszy wykazano, że spożywanie sfermentowanego mleka zawierającego szczep DN-114 001 L. casei zwiększa odporność na infekcję Salmonella typhimurium [PAUBERTBRAQUET i inni, Int. J. Immunother, 4:153, (1995)]. Jednocześnie obserwowano aktywację makrofagów i zwiększenie krążenia IgAs.
Szczep DN-114 001 złożono do depozytu 30 grudnia 1994, z CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes) [Narodowa Kolekcja Hodowli Drobnoustrojów] przechowywaną przez Instytut Pasteura, 25 rue du Docteur Roux, w Paryżu, pod numerem I-1518. Szczep ten i jego specjalne mieszaniny z zaczynem jogurtu, stosowane do wytwarzania sfermentowanych produktów mlecznych, opisano w publikacji zgłoszenia PCT WO 96/20607 należącego do COMPAGNIE GERVAIS DANONE.
W przeprowadzonych ostatnio badaniach na ludziach również stwierdzono, że spożywanie sfermentowanego mleka zawierającego szczep DN-114 001 L. casei wywołuje wzmocnienie odporności na Salmonella typhimurium. Efekt ten przypisano oddziaływaniu na odporność nieswoistą wrodzoną [YOON i inni, Int. J. Immunother, 15, 79-89 (1999)].
Autorzy wynalazku badali czy L. casei działa również na odporność adaptywną, rezultatem której jest, w przeciwieństwie do odporności wrodzonej, swoista reakcja odpornościowa w stosunku do określonego czynnika chorobotwórczego.
W tym celu autorzy wynalazku zbadali wpływ L. casei, podawanego doustnie in vivo, na stymulację ex vivo proliferacji komórek T, w odpowiedzi na antygeny reprezentujące różne rodzaje pospolitych środków chorobotwórczych: antygen bakteryjny (tężec); antygen pochodzenia grzybowego (drożdżaki) i antygen wirusowy (grypa).
Zauważyli oni, że dla każdego testowanego antygenu, spożywanie L. casei prowadzi do zwiększenia zdolności do proliferacji komórek T, zwłaszcza podpopulacji CD3+, w odpowiedzi na aktywację tym antygenem. Efekt ten manifestuje się w szczególności w przypadku antygenów grypy.
PL 201 801 B1
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie bakteryjnego szczepu CNCM I-1518 gatunku L. casei do wytwarzania kompozycji przeznaczonych do podawania doustnego, dla wzmocnienia swoistej ogólnoustrojowej reakcji immunologicznej skierowanej przeciwko drobnoustrojowi chorobotwórczemu, takiemu jak wirus grypy. Drobnoustrój ten jest czynnikiem chorobotwórczym rozsiewanym w powietrzu, zwłaszcza czynnikiem chorobotwórczym dróg oddechowych. Odnośnymi czynnikami chorobotwórczymi są w szczególności bakterie lub wirusy. Wśród tych ostatnich można wymienić wirusy nieżytu nosa, wirus oddechowy (RSV) i miksowirusy (ortomiksowirusy, takie jak wirusy grypy (grypy A, B lub C), albo paramiksowirusy, w szczególności grypy rzekomej).
To wzmocnienie reakcji immunologicznej jest skutkiem zwiększenia zdolności do proliferacji komórek T, specyficznych dla antygenów tego drobnoustroju chorobotwórczego.
W kontekście realizacji wynalazku, szczepy L. casei mogą być stosowane oddzielnie lub w połączeniu z innymi bakteriami kwasu mlekowego gatunku L. casei lub innych gatunków. Mogą być stosowane w połączeniu z zaczynami jogurtu, a mianowicie Lactobacillus bulgaricus i Streptococcus thermophilus.
Szczepy te mogą być stosowane w postaci całych bakterii, które mogą być żywe lub nieżywe, albo w postaci bakteryjnego lizatu lub w postaci fragmentów bakterii.
Wytwarzane kompozycje mogą zawierać, co najmniej 105, na ogół pomiędzy 1x108 i 1,5x109 komórek L. casei na ml.
Jeśli L. casei jest stosowana z zaczynami jogurtów, kompozycje te mogą zawierać co najmniej 107, na ogół pomiędzy 2x108 i 1x109 komórek S. thermophilus na ml oraz co najmniej 5x105 na ogół pomiędzy 4x106 i 2x107 komórek L. bulgaricus na ml.
Korzystnie, kompozycje wytworzone zgodnie z wynalazkiem mogą być podawane w postaci artykułu spożywczego lub dodatku do żywności.
Korzystniej, są to na przykład produkty mleczne, w szczególności sfermentowane produkty mleczne. Mogą one zawierać, co najmniej szczep L. casei, ewentualnie w połączeniu z innymi bakteriami kwasu mlekowego, na przykład z zaczynami jogurtów.
Kompozycje te mogą być stosowane do zapobiegania i leczenia stanów chorobowych o podłożu infekcyjnym, w szczególności pochodzenia wirusowego, zwłaszcza grypy. W celu uzyskania optymalnych efektów, mogą być podawane, przez co najmniej tydzień, zazwyczaj, przez co najmniej 10 dni, w ilości odpowiadającej wchłanianiu, co najmniej 107, na ogół pomiędzy 109 i 1012 komórek L. Casei.
Wynalazek jest łatwiejszy do zrozumienia na podstawie dalszej części opisu, która odnosi się do przykładów ilustrujących zdolność szczepu Lactobacillus casei do wzmacniania swoistej reakcji na antygeny drobnoustrojowe.
P r z y k ł a d 1: Wpływ Lactobacillus casei na proliferację komórek T, w reakcji na stymulację antygenową.
W celu sprawdzenia wpł ywu spoż ywania sfermentowanego produktu mlecznego zawierają cego szczep Lactobacillus casei DN-114 001 (CNCM I-1518) na proliferację komórek T, w reakcji na stymulację antygenową, przeprowadzono podwójne badania „na ślepo”, w porównaniu z placebo.
Warunki badań były następujące:
Osobnicy poddani badaniom zdrowych osobników w wieku 18 do 50 lat zwerbowano z Oddziału Chorób Zakaźnych Washington Hospital Center (WHC)(Washington DC). Z badań wykluczono osobników z zapaleniem wątroby lub problemami nerkowymi, zaburzeniami układu krążenia, chorobami immunologicznymi i żołądkowo-jelitowymi, zaawansowaną astmą lub cukrzycą, osobników poddawanych leczeniu antybiotykami lub środkami immunosupresyjnymi w czasie krótszym niż 3 miesiące przed rozpoczęciem badań, osobników w przeszłości nadużywających alkoholu lub uzależnionych, osobników o znanym nietolerowaniu produktów mlecznych lub nadwrażliwości na te produkty, osobników na diecie niskokalorycznej, osobników zaszczepionych w poprzednim sezonie przeciwko grypie, jak również kobiety w ciąży i karmią ce piersią .
Sposób postępowania i warunki badań uzyskały zgodę Komitetu Badań WHC, jak również Instytutowej Komisji Kontrolnej (Institutional Review Board), kontrolującej badania prowadzone na ludziach.
Wybranych osobników podzielono losowo na 2 grupy:
- grupa 47 osobników (26 kobiet i 21 mężczyzn) otrzymywała 100 ml dziennie sfermentowanego produktu mlecznego o zawartości 2% tłuszczu, zawierającego zaczyny jogurtowe (L. bulgaricus i S. thermophilus) oraz szczep DN-114 001 Lactobacillus casei, rozprowadzanego na rynku przez firmę DANONE pod nazwą handlową ACTIMEL.
PL 201 801 B1
- grupa 41 osobników (22 kobiety i 19 mężczyzn) otrzymywał a placebo przez 28 dni: 100 ml na dzień mleka rozcieńczonego wodą (1/5, v/v) z dodatkiem cukru, dla uzyskania wartości kalorycznej równoważnej kaloryczności ACTIMEL.
Podczas trwania badań osobnicy obu grup byli proszeni o powstrzymanie się od spożywania jogurtu lub innych sfermentowanych produktów mlecznych.
Średnia wieku osobników (odchylenie standardowe podano w nawiasach) wynosiła 36 (7,3) i 32,7 (7,4), odpowiednio dla grupy spożywającej ACTIMEL i grupy spożywającej placebo.
Przed rozpoczęciem konsumpcji ACTIMEL-u lub placebo, od każdego osobnika obu grup pobrano próbkę krwi (55 ml), w celu oznaczenia wartości bazowych. W 9, 18 i 28 dniu badania każdy z osobników kontrolnie spotykał się z lekarzem i wypełniał krótki kwestionariusz dotyczący swojego zdrowia, możliwych działań ubocznych oraz rozwoju jakiejś choroby mogącej przeszkadzać interpretacji wyników. Podczas każdej wizyty pobierano próbkę krwi dla potrzeb eksperymentu immunologicznego.
Dla każdej próbki krwi przeprowadzono kompletne liczenie krwinek i analizę chemiczną krwi. Oprócz tego, metodą przepływowego liczenia komórek dokonano fenotypowej analizy leukocytów i ich podgrup (komórek T i ich podgrup, komórek B, monocytów i komórek NK).
Pomiary proliferacji komórek
Proliferacyjną reakcję komórek T u osobników z grupy spożywającej ACTIMEL i osobników spożywających placebo względem trzech drobnoustrojowych antygenów: drożdżaków, tężca i grypy oznaczono ex vivo przez pomiar inkorporacji 3HTdR, tak jak opisano to poniżej.
Preparowanie komórek:
ml heparynizowanej krwi z każdej pobranej próbki poddawano następującej obróbce: probówkę odwirowywano przez 10 minut, przy 1500 obr/min. Osocze krwi starannie przenoszono do oznaczonych krioprobówek i przechowywano je w 70°C [sic]. Krew przenoszono do 15 ml probówki wirówkowej i rozcieńczano ją PBS w stosunku 1:3. 10 ml fikolu (Ficoll-hypaque) dodawano do 50 ml probówki wirówkowej i pokrywano go 30 ml rozcieńczonej krwi. W temperaturze otoczenia probówkę odwirowywano przez 2 minuty przy 2000 obr/min. Odciągano górną warstwę PBS, zbierano komórki jednojądrowe i przenoszono je do 15 ml probówki wirówkowej. Dodawano 10 ml HBSS, wymieszano i odwirowywano przez 10 minut przy 1500 obr/min. Odcią gano supernatant i z pozostał ych grudek ponownie wytwarzano zawiesinę w 2-3 ml HBSS. Dodawano 8 ml HBSS i probówkę odwirowywano przez 6 minut przy 1500 obr/min. Taki sposób postępowania powtarzano dwukrotnie i z uzyskanych komórek ponownie wytwarzano zawiesinę w 1-2 ml PBS i intensywnie ją mieszano. Liczono komórki, badając ich żywotność metodą eliminacji błękitem trypanowym, a następnie korygowano ich stężenie do wartości 2 x 108/ml.
Preparowanie antygenów:
Antygen tężcowy: preparowanie przeprowadzano w dniu wykonywanie testu.
Roztwór wyjściowy wytwarzano przez rozcieńczanie toksoidu tężca (CONNAUGHT LABORATORY, Willowdale, Kanada) w PBS w stosunku 1:1000.
Antygeny Candida albicans: wyjściowy roztwór wytwarzano rozcieńczając antygeny Candida albicans (BAYER CO, Elkert, IN) w PBS w stosunku 1:1000.
Antygeny grypy: wyjściowy roztwór wytwarzano rozcieńczając antygeny preparatu wirusa grypy (NIBSC, Herts, Anglia) w PBS w stosunku 1:125.
Stosowano płytki do mikromiareczkowań (96 studzienkowe). W każdej studzience umieszczano 100 μΐ wyjściowego roztworu antygenów i 100 μl komórek o finalnym stężeniu 2 x 105 komórek na studzienkę. W kontrolnych studzienkach zamiast wyjściowego roztworu antygenów umieszczano 100 μl PBS. Płytki inkubowano przez 5 dni w 37°C, z 5% CO2. 18 godzin przed końcem inkubacji dodawano 20 μl 50 μθί/mi 3HTdR (NEW ENGLAND NUCLEAR, Boston, MA). Komórki ze studzienek każdej płytki zbierano na filtrach i filtry te liczono bezpośrednio w liczniku cząstek beta MATRIX 9600 (PACKARD INSTRUMENTS), w celu zmierzenia stopnia inkorporacji 3HTdR, wyrażonej w CPM (liczba impulsów na minutę).
Dla każdego osobnika z grupy otrzymującej ACTIMEL i dla każdego osobnika z grupy otrzymującej placebo, proliferację oceniano przez oznaczenie wskaźnika stymulacji (SI), zgodnie z poniższym wzorem:
średnie CPM komórek stymulowanych
SI = —————————————————————————————— średnie CPM komórek nie stymulowanych (studzienka kontrolna)
PL 201 801 B1
Analiza statystyczna
Dla podsumowania proliferacyjnej reakcji komórek T na działanie każdego antygenu stosowano statystykę opisową (średnia, odchylenie standardowe, mediana), dla każdej badanej grupy, w każdym momencie pomiaru. Ze względu na dystrybuantę obciążenia reakcji proliferacyjnej, dla danych dotyczących proliferacji stosowano transformację do logarytmów naturalnych.
Zmienność reakcji proliferacyjnej w porównaniu do wartości bazowej wykorzystywano do modelowania statystycznego [LITTELL i inni, SAS System for Mixed Model. North Carolina: SAS Institute Inc, (1996)]. Modyfikacje reakcji proliferacyjnej, w porównaniu do wartości bazowej w funkcji czasu, zaprezentowano stosując metodę wygładzania krzywej, tak jak opisali to DIGGLE i inni, [Analysis of Longitudinal Data. New York: University Press Inc, 1994].
Dla badania trajektorii reakcji proliferacyjnej opracowano mieszany model liniowy. Model ten umożliwia dostosowane danych proliferacyjnych do krzywej drugiego stopnia dla każdej grupy badanej.
Model ten zdefiniowano następującym równaniem:
Yjt = aij + pijT + e2jT2 + Sjt, i = j = 1,2, t = 1,2,3,4 w których:
Yijt = oznacza zmienność reakcji proliferacyjnej w porównaniu do wartości bazowej dla osobnika i, w iloczynie grupy j, w czasie t; transformację do logarytmów naturalnych zastosowano do każdej zmiennej, Yijt = log (proliferacja w czasie t) - log (wartość bazowa).
aj oznacza intercepcję dla osobnika i, w iloczynie grupy j. Odzwierciedla to model losowy, aj ~ MVN (0, G), G zawiera składniki wariancji w strukturze diagonalnej (MVN: multinormalny rozkład wariancji).
P1j i e2j są współczynnikami regresji T i T2 dla iloczynu grupy j;
T jest momentem pomiaru (dzień 0, 9, 18 lub 28), a T2 jest kwadratowym składnikiem T. ejjt jest współczynnikiem błędu:
ejjt ~ MVN (0, R) i R = σ2^, gdzie In oznacza macierz jednostkową n x n.
Przeprowadzono testy statystyczne dla następujących hipotez:
a) Test sprawdzający czy oszacowany współczynnik regresji wynosi 0.
H0: p1j = 0 vs. H1: p1j ϊ 0 (dla składnika liniowego) oraz H0: e2j = 0 vs. H1: e2j ϊ 0 (dla składnika kwadratowego)
Jeśli p1j i e2j nie są różne od 0, to nie ma trajektorii.
Jeśli e2j jest znacząco różne od 0, to jest trajektoria drugiego stopnia.
Jeśli tylko p1j jest znacząco różne od 0, to jest trajektoria liniowa.
b) Porównanie czy trajektorie dwóch grup są identyczne.
H0: p1j = e12.vs. H1: β11 ϊ β12 (dla składnika liniowego) i H0: β21 = β22 vs. H1: β21 ϊ β22 (dla składnika kwadratowego)
Dla przeprowadzenia analizy stosowano pakiet statystyczny SAS.
Wyniki
W poniższej tabeli 1 podano dane demograficzne dotyczące osobników i oszacowanie wartości bazowej dla proliferacji.
T a b e l a 1
Dane demograficzne i wartości | Placebo | ACTIMEL | Porównanie placebo vs. ACTIMEL | |
bazowe | ||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Płeć | Kobiety | 22 | 26 | Test chi-kwadrat |
Mężczyźni | 19 | 21 | p=0,826 | |
Wiek | Średnia (SD) | 32,7 (7,4) | 36,0 7,3 | Test T |
Mediana | 31 | 37 | p=0,038 | |
Etniczność | Biali | 26 | 25 | Test chi-kwadrat |
Czarni | 12 | 17 | dokładna wartość | |
Inni | 3 | 5 | p=0,652 | |
Leukocyty | Średnia (SD) | 5997 | 5810 | TestT |
(1451) | (1399) | |||
Mediana | 5992 | 5990 | P=0,540 |
PL 201 801 B1 cd. tabeli 1
1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
Limfocyty | Średnia (SD) | 1932 (567) | 2009 (554) | TestT |
Mediana | 1812 | 1993 | p=0,519 | |
CD3+CD4+ | Średnia (SD) | 865(327) | 907(325) | Test T |
Mediana | 740 | 818 | p=0,546 | |
CD3+CD8+ | Średnia (SD) | 469 (205) | 431 (181) | TestT |
Mediana | 417 | 403 | p=0,360 | |
CD3+CD25+ | Średnia (SD) | 380 (200) | 408 (182) | TestT |
Mediana | 349 | 392 | p=0,489 | |
CD3+CD45+ | Średnia (SD) | 1384 (488) | 1411 (434) | TestT |
Mediana | 1354 | 1382 | p=0,783 |
SD = odchylenie standardowe
Proliferacja komórek T w reakcji na swoiste antygeny drobnoustrojowe W poniż szej tabeli 2 zamieszczono ś rednie, odchylenia standardowe i mediany proliferacji ex vivo jednojądrowych krwinek krwi obwodowej (PBMCs), dla każdej grupy (ACTIMEL i placebo) w różnych czasach pobierania próbki.
T a b e l a 2
Antygen | Placebo | ACTIMEL | ||||||
Dzień 0 | Dzień 9 | Dzień 18 | Dzień 28 | Dzień 0 | Dzień 9 | Dzień 18 | Dzień 28 | |
Droż- | ||||||||
dżaki | ||||||||
Średnia | 2,3 | 2,7 | 2,9 | 1,9 | 3,0 | 3,2 | 4,3 | 2,3 |
SD | 2,0 | 3,1 | 4,1 | 1,2 | 3,4 | 3,5 | 5,6 | 2,6 |
Mediana | 1,5 | 1,7 | 1,6 | 1,6 | 1,7 | 1,7 | 2,0 | 1,4 |
Tężec Średnia | 7,3 | 11,8 | 7,9 | 8,7 | 8,4 | 8,7 | 10,3 | 7,8 |
SD | 7,8 | 12,3 | 8,0 | 8,1 | 15,8 | 10,4 | 11,8 | 8,2 |
Mediana | 5,2 | 6,3 | 5.1 | 6,7 | 3,5 | 5,2 | 5,0 | 5,1 |
Grypa Średnia | 14,2 | 21,7 | 17,0 | 17,3 | 13,0 | 19,7 | 20,3 | 13,9 |
SD | 11,4 | 19,1 | 19,6 | 15,7 | 12,6 | 17,1 | 16,6 | 12,7 |
Mediana | 11,1 | 16,5 | 9,8 | 12,0 | 9,6 | 16,9 | 17,0 | 11,0 |
SD = odchylenie standardowe
Nie ma znaczących różnic wartości bazowej (dzień 0) pomiędzy dwiema badanymi grupami dla reakcji proliferacyjnej, w stosunku do trzech antygenów drobnoustrojowych.
Fig. 1 ilustruje zmienność reakcji proliferacyjnej w czasie, dla każdego antygenu i dla dwóch badanych grup: grupa ACTIMEL: linia ciągła; grupa placebo: linia przerywana.
Wyniki modelowania statystycznego przedstawiono w poniższej tabeli 3.
PL 201 801 B1
T a b e l a 3
Antygen | Zmienna | Oszacowanie parametru | Błąd standardowy | Test H0 parametr=0 | Porównanie 2 krzywych | |
Drożdżowce | Placebo T | 0,017 | 0,014 | p = 0,232 | H0: | β11 = β12 |
T2 | -0,0007 | 0,0005 | p = 0,208 | p = | 0,540 | |
ACTIMEL T | 0,028 | 0,013 | p = 0,030 | H0: | β21 = β22 | |
T2 | -0,0012 | 0,005 | p = 0,013 | p = | 0,458 | |
Tężec | Placebo T | 0,034 | 0,014 | p = 0,022 | H0: | β11 = β12 |
T2 | -0,0008 | 0,0005 | p = 0,141 | p = | 0,630 | |
ACTIMEL T | 0,043 | 0,013 | p = 0,001 | H0: | β21 = β22 | |
T2 | -0,0011 | 0,0005 | p = 0,020 | p = | 0,626 | |
Grypa | Placebo T | 0,022 | 0,017 | p = 0,181 | H0: | β11 = β12 |
T2 | -0,0004 | 0,0006 | p = 0,475 | p = | 0,045 | |
ACTIMEL T | 0,068 | 0,015 | p = 0,0001 | H0: | β21 = β22 | |
T2 | -0,0023 | 0,0006 | p = 0,0001 | p = | 0,027 |
Drożdżowce (Candida):
W grupie ACTIMEL reakcja bazowa w dniu 0 wynoszą ca 3,0 ± 3,4 wzrosł a w dniu 9 do 3,2 ± 3,5 i w dniu 18 do 4,3 ± 5,6, następnie w dniu 28 spadła do 2,3 ± 2,6 (tabela 2).
2
Współczynniki oszacowane dla składnika liniowego T i składnika w drugiej potędze T2 wynosiły odpowiednio 0,028 i 0,0012 (tabela 3). Dwie wartości są statystycznie znacząco różne od 0 (odpowiednio p=0,030 i 0,013). Obserwacje te oznaczają, że istnieje znacząca pozytywna tendencja do zmiany reakcji proliferacyjnej w stosunku do antygenu drożdżowca. Reakcja proliferacyjna na początku rośnie, a następnie zmniejsza się, tak jak pokazano to na fig. 1a.
Grupa placebo wykazuje małą zmianę w okresie badania. Współczynniki regresji oszacowane dla T i T2 wynosiły 0,017 i 0,0007. Wartości te nie są znacząco różne od 0 (odpowiednio p = 0,232 i 0,208). Obserwacje te wskazują, że nie ma znaczącej zmiany w reakcji proliferacyjnej w okresie badania grupy kontrolnej. Jak pokazano na fig. 1a, krzywa dla grupy placebo jest bardziej płaska dla grupy placebo niż krzywa dla grupy ACTIMEL. Chociaż, w przeciwieństwie do grupy placebo, grupa ACTIMEL wykazuje znaczącą trajektorię, to różnica pomiędzy dwiema krzywymi nie osiąga poziomu statystycznie znaczącego (p = 0,540 dla T i p = 0,458 dla T2, tabela 3).
Tężec:
Dla grupy ACTIMEL reakcja stopniowo rośnie od poziomu bazowego aż do dnia 18, a następnie spada. Współczynniki regresji oszacowane dla T i T2 wynosiły odpowiednio 0,043 i 0,0011 (tabela 3). Te dwie wartości są statystycznie znacząco różne od 0 (odpowiednio p = 0,001 i 0,020). Tak jak w przypadku Candida, pozytywna zmiana reakcji proliferacyjnej w okresie badania jest znacząca dla grupy ACTIMEL. W grupie placebo średnia wartość wzrosła od 7,3 w dniu 0 do 11,8 w dniu 9, a następnie spadła do 7,9 w dniu 18 i ponownie zwiększyła się do 8,7 w dniu 28 (fig. 1b). Nawet przy nieznaczącym współczynniku dla składnika drugiego stopnia T2 (-0,0008, p = 0,141, tabela 3), znacząco oszacowany współczynnik T (0,034, p = 0,022, tabela 3) pokazuje efekt trajektorii. Jednakże, jeśli grupę ACTIMEL porównuje się z grupą placebo, to statystyczne testy nie wykazują żadnej znaczącej różnicy pomiędzy tymi dwiema krzywymi (odpowiednio p = 0,630 i 0,626 dla T i T2).
Grypa:
Grupa ACTIMEL wykazała klarowniejszą zmianę niż grupa placebo. Średnia wartość zwiększyła się z 13 ± 12,6 w dniu 0 do 19,7 ± 17,1 w dniu 9, pozostając na tym poziomie do dnia 18, a następnie zmniejszając się do 13,9 ± 12,7 w dniu 28 (fig. 1c). Dw współczynniki oszacowane dla T i T2 są znacząco różne od zera (p = 0,001). Statystyka ta wskazuje na to, że pozytywna zmiana w reakcji proliferacyjnej w okresie badania jest znacząca (tabela 2).
Grupa placebo wykazała zmiany podobne do obserwowanych w przypadku tężca. Średnie wartości zwiększały się do dnia 9, spadły do dnia 18 i ponownie wzrosły do dnia 28, tak jak zilustrowano to na fig. 1c. Dwa oszacowane współczynniki regresji nie są znacząco różne od 0 (wartości p wynoszą dla T i T2 odpowiednio 0,181 i 0,475), wskazując na to, że nie ma znaczącej trajektorii zmian dla reakcji proliferacyjnej na antygen grypy.
PL 201 801 B1
Jeśli porówna się parametry oszacowane dla grupy ACTIMEL i grupy placebo, to widoczne są znaczne różnice zarówno dla parametrów liniowych, jak i dla parametrów drugiego stopnia (p = 0,045 dla T i p = 0,027 dla T2) (tabela 3). Wnioski te wskazują na to, że zmiany reakcji proliferacyjnej znacząco różnią się pomiędzy obiema badanymi grupami.
P r z y k ł a d 2: Wpływ Lactobacillus casei na proliferację podzbioru limfocytów T, w reakcji na stymulację antygenem grypy
Nie jest znany dokładny charakter podzbioru T reagującego in vitro na antygeny drobnoustrojowe. Albo każdy z specyficznych podzbiorów limfocytów T, takich jak podzbiory reprezentowane przez fenotypy CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD3+CD25+ i CD3+CD45+, może być uważany za głównego respondenta, albo te połączone podzbiory mogą wnosić wkład do sumarycznej reakcji proliferacyjnej na pobudzające antygeny.
Przy wstępnym założeniu, że specyficzne podzbiory limfocytów są głównymi respondentami na pobudzające antygeny, zastosowano model statystyczny opisany w powyższym przykładzie 1 i przeprowadzono analizy dla podzbioru komórek T CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD3+CD25+ i CD3+CD45+, w celu stwierdzenia czy reakcja proliferacyjna dla każdego z 4 podzbiorów różni się znacząco dla grupy ACTIMEL i grupy placebo.
W analizach tych wartości dla reakcji proliferacyjnej począ tkowo opartych na sumie PBMCs, przekształcono dla każdego podzbioru w nowe wartości, obliczone zgodnie z całkowitą częstością występowania komórek T CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD3+CD25+ i CD3+CD45+ w każdej próbce krwi. Następnie dla każdego podzbioru przeprowadzono analizę statystyczną, tak jak opisano to w powyższym przykładzie 1.
W poniższej tabeli 4 podano średnie, odchylenia standardowe i mediany dla grup placebo i ACTIMEL, dla czterech podzbiorów limfocytów.
T a b e l a 4
Podzbiór limfocytów | Placebo | ACTIMEL | ||||||
Dzień 0 | Dzień 9 | Dzień 18 | Dzień 28 | Dzień 0 | Dzień 9 | Dzień 18 | Dzień 28 | |
CD3+CD4+ | ||||||||
Średnia | 101 | 149 | 113 | 125 | 87,4 | 131 | 133 | 107 |
SD | 84,0 | 130 | 117 | 127 | 104 | 90,2 | 112 | 127 |
Mediana | 72,8 | 111 | 74,5 | 91,0 | 63,0 | 103 | 92,0 | 64,5 |
CD3+CD8+ | ||||||||
Średnia | 192 | 268 | 251 | 251 | 230 | 301 | 365 | 244 |
SD | 155 | 250 | 289 | 336 | 375 | 286 | 554 | 302 |
Mediana | 167 | 218 | 140,5 | 168 | 105 | 180 | 214 | 126 |
CD3+CD25+ | ||||||||
Średnia | 250 | 377 | 260 | 354 | 177 | 267 | 310 | 270 |
SD | 219 | 374 | 208 | 462 | 139 | 163 | 210 | 305 |
Mediana | 185 | 263 | 228 | 247 | 159 | 262 | 251 | 177 |
CD3+CD45+ | ||||||||
Średnia | 63,5 | 87,6 | 73,0 | 76,2 | 52,1 | 78,7 | 87,1 | 69,1 |
SD | 54,1 | 70,9 | 81,3 | 79,7 | 72,2 | 56,3 | 79,2 | 95,2 |
Mediana | 47,5 | 66,6 | 43,1 | 51,4 | 34,4 | 64,0 | 67,8 | 41,0 |
SD = odchylenie standardowe
Różnice w wartościach bazowych pomiędzy dwiema badanymi grupami nie są statystyczne znaczące.
Wykorzystując model statystyczny opisany w powyższym przykładzie 1, zanalizowano zmiany proliferacji względem wartości bazowych, w reakcji na antygen grypy, dla każdego z czterech podzbiorów
PL 201 801 B1 limfocytów. Fig. 2 ilustruje zmiany proliferacji w skali logarytmicznej, dla każdego z tych podzbiorów i dla każ dej z dwóch badanych grup.
Wyniki modelowania statystycznego przedstawiono w poniższej tabeli 5.
T a b e l a 5
Podzbiór limfocytu | Zmienna | Oszacowanie parametru (SE) | Test H0 parametr=0 | Porównanie 2 krzywych |
CD3+CD45+ | Placebo T | 0,015 (0,016) | p=0,352 | H0: β1 = β12 |
T2 | -0,0003 (0,0006) | p=0,597 | p=0,015 | |
ACTIMEL T T2 | 0,071 (0,015) -0,0024 (0,0006) | p<0,001 p<0,001 | H0: β21 = β22 p=0,016 | |
CD3+CD25+ | Placebo T | 0,024 (0,016) | p=0,144 | H0: β11 = β12 |
T2 | -0,0004 (0,0006) | p=0,463 | p=0,031 | |
ACTIMEL T T2 | 0,071 (0,015) -0,0022 (0,0006) | p<0,001 p<0,001 | H0: β21 = β22 p=0,030 | |
CD3+CD8+ | Placebo T | 0,014(0,017) | p=0,410 | H0: β11 = β12 |
T2 | -0,0003 (0,0006) | p=0,671 | p=0,013 | |
ACTIMEL T T2 | 0,070 (0,015) -0,0024 (0,0006) | p<0,001 p<0,001 | H0: β21 = β22 p=0,012 | |
CD3+CD4+ | Placebo T | 0,022 (0,017) | p=0,203 | H0: β11 = β12 |
T2 | -0,0005 (0,0006) | p=0,436 | p=0,028 | |
ACTIMEL T T2 | 0,072 (0,015) -0,0025 (0,0006) | p<0,001 p<0,001 | H0: β21 = β22 p=0,024 |
SE = błąd standardowy
Reakcje proliferacyjne dla każdego z czterech podzbiorów limfocytowych są zgodne z reakcją obserwowaną dla sumy PBMCs. Podczas ekspozycji antygenem grypy, w grupie ACTIMEL zaobserwowano znaczne różnice dla czterech podzbiorów limfocytowych. Różnice te mogą być zaprezentowane jako kwadratowa funkcja czasu.
Niewielkie zmiany obserwowano dla czterech podzbiorów w grupie placebo.
Oprócz tego, różnice między grupami były znaczące dla wszystkich podzbiorów limfocytów.
Wnioski
Wyniki te pokazują, że dla 3 testowanych antygenów obserwuje się zwiększenie reakcji proliferacyjnej wywoływane antygenem, które jest większe w grupie ACTIMEL niż w grupie placebo. W przypadku antygenu grypy to zwiększenie w grupie ACTIMEL jest statystycznie znaczące, w porównaniu do grupy placebo, zarówno dla sumy PBMCs, jak i dla każdego podzbioru komórek T CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD3+CD25+ i CD3+CD45+.
Z tego względu wydaje się, że spożywanie ACTIMEL wywoływało u badanych osobników pobudzenie immunologiczne in vivo, które prowadziło do ex vivo reakcji ich komórek T na antygeny drobnoustrojowe, w szczególności na antygeny grypy, silniejszej od obserwowanego w grupie placebo.
To zwiększenie reakcji korelowało z częstością występowania i stanem aktywacji komórek CD3+ T i ich podzbiorów, u osobników z grupy ACTIMEL.
Oprócz tego, pozytywna korelacja z obecnością markera aktywacji CD25 sugeruje udział w aktywacji in vivo komórek T specyficznych w stosunku do grypy, eksprymujących receptory CD25 IL-2 i zdolnych do skuteczniejszej reakcji na antygeny grypy. Analiza podzbiorów komórek T sugeruje również, że w rekcji proliferacyjnej biorą udział prawdopodobnie zarówno podzbiory CD4+, jak i CD8+, odpowiadające antygenom grypy. Ważne znaczenie podzbioru CD3+/CD8+ w analizie proliferacji sugeruje możliwość pobudzania zbioru cytotoksycznych komórek CD8+, specyficznych; w stosunku do grypy.
Claims (3)
- Zastrzeżenia patentowe1. Zastosowanie bakteryjnego szczepu CNCM I-1518 gatunku L. Casei do wytwarzania kompozycji przeznaczonej do podawania doustnego, zwiększającej swoistą ogólnoustrojową odporność na wirus grypy.
- 2. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że kompozycja ma postać artykułu spożywczego lub dodatku do żywności.
- 3. Zastosowanie według zastrz. 1 lub 2, znamienne tym, że kompozycja ma postać sfermentowanego produktu mlecznego.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR0006679A FR2809312B1 (fr) | 2000-05-25 | 2000-05-25 | Utilisation de l. casei dans des compositions immunostimulantes |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL358408A1 PL358408A1 (pl) | 2004-08-09 |
PL201801B1 true PL201801B1 (pl) | 2009-05-29 |
Family
ID=8850597
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL358408A PL201801B1 (pl) | 2000-05-25 | 2001-04-27 | Zastosowanie bakteryjnego szczepu CNCM I-1518 do wytwarzania kompozycji przeznaczonej do podawania doustnego |
Country Status (28)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7604809B2 (pl) |
EP (1) | EP1283714B1 (pl) |
JP (1) | JP2003534284A (pl) |
CN (1) | CN1194707C (pl) |
AR (1) | AR028626A1 (pl) |
AT (1) | ATE332143T1 (pl) |
AU (2) | AU5643501A (pl) |
BG (1) | BG65884B1 (pl) |
BR (1) | BR0111135A (pl) |
CA (1) | CA2410350C (pl) |
CZ (1) | CZ303600B6 (pl) |
DE (1) | DE60121327T2 (pl) |
DK (1) | DK1283714T3 (pl) |
EA (1) | EA005081B1 (pl) |
ES (1) | ES2267763T3 (pl) |
FR (1) | FR2809312B1 (pl) |
HK (1) | HK1055898A1 (pl) |
HR (1) | HRP20020935A2 (pl) |
HU (1) | HUP0302041A3 (pl) |
IL (1) | IL152980A0 (pl) |
MA (1) | MA25760A1 (pl) |
MX (1) | MXPA02011636A (pl) |
NO (1) | NO332369B1 (pl) |
PL (1) | PL201801B1 (pl) |
PT (1) | PT1283714E (pl) |
SK (1) | SK18272002A3 (pl) |
WO (1) | WO2001089541A1 (pl) |
ZA (1) | ZA200209087B (pl) |
Families Citing this family (29)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6800744B1 (en) * | 1997-07-02 | 2004-10-05 | Genome Therapeutics Corporation | Nucleic acid and amino acid sequences relating to Streptococcus pneumoniae for diagnostics and therapeutics |
GB0009294D0 (en) | 2000-04-15 | 2000-05-31 | Sec Dep For The Home Departmen | Improvements in and relating to analysis of DNA samples |
US9610347B2 (en) * | 2001-04-30 | 2017-04-04 | Cortcontrol | Vaccination response for immunodeficiency or high cortisol |
CN1317385C (zh) * | 2003-05-30 | 2007-05-23 | 上海光明乳业股份有限公司 | 干酪乳杆菌Bd-II菌株及其在降低血脂方面的应用 |
US8877178B2 (en) | 2003-12-19 | 2014-11-04 | The Iams Company | Methods of use of probiotic bifidobacteria for companion animals |
US20050158294A1 (en) | 2003-12-19 | 2005-07-21 | The Procter & Gamble Company | Canine probiotic Bifidobacteria pseudolongum |
ATE361101T1 (de) * | 2004-08-24 | 2007-05-15 | Nutricia Nv | Nahrungszusammensetzung die unverdauliche oligosaccharide enthält |
ZA200705844B (en) * | 2004-12-15 | 2008-09-25 | Van Der Westhuzen Corne Floris | Detoxifying and immunity-booster composition |
EP1683425A1 (en) * | 2005-01-21 | 2006-07-26 | Compagnie Gervais Danone | Use of a fermented milk containing L. Casei for the manufacture of a composition for the prevention or treatment of a delayed-type hypersensitivity reaction |
ES2264368B1 (es) * | 2005-02-11 | 2007-12-01 | Francisco Exposito Mesa | Complemento alimenticio o dietetico compuesto por productos procedentes del lisado de microorganismos. |
BRPI0611492B1 (pt) | 2005-05-31 | 2021-10-13 | Mars, Incorporated | Bifidobactéria probiótica felina |
WO2006130187A1 (en) | 2005-05-31 | 2006-12-07 | The Iams Company | Feline probiotic lactobacilli |
CA2662226C (en) | 2006-09-10 | 2020-08-04 | Glycotope Gmbh | Fully human high yield production system for improved antibodies and proteins |
FR2912657B1 (fr) * | 2007-02-16 | 2009-04-17 | Gervais Danone Sa | Utilisation de lactobacillus casei pour renforcer la protection induite par la vaccination anti-grippale. |
WO2009021585A1 (en) * | 2007-08-13 | 2009-02-19 | Dsm Ip Assets B.V. | Probiotic bacteria for rducing the occurence of symptoms of winter infections |
WO2009067000A1 (en) * | 2007-11-20 | 2009-05-28 | N.V. Nutricia | Composition with synbiotics |
EP2119365B1 (de) | 2008-05-13 | 2017-08-16 | Glycotope GmbH | Fermentationsprozess |
CA2722738C (en) * | 2008-05-13 | 2017-04-25 | Glycotope Gmbh | Fermentation process |
US9771199B2 (en) | 2008-07-07 | 2017-09-26 | Mars, Incorporated | Probiotic supplement, process for making, and packaging |
EP2153837A1 (en) | 2008-08-14 | 2010-02-17 | Compagnie Gervais Danone | Compositions comprising Lactobacillus casei for improving resistance to common infectious diseases |
FR2937252B1 (fr) * | 2008-10-17 | 2011-05-20 | Pf Medicament | Association d'un extrait de sureau et d'une souche de l. paracasei. |
US10104903B2 (en) | 2009-07-31 | 2018-10-23 | Mars, Incorporated | Animal food and its appearance |
BR112012016894A2 (pt) * | 2010-01-08 | 2015-09-15 | Gervais Danone Sa | lactobacilos com ação antioxidante. |
EA031179B1 (ru) * | 2010-03-12 | 2018-11-30 | Компани Жервэ Данон | Молочнокислые бактерии, применяемые при чревной болезни |
CN105288616B (zh) * | 2010-10-15 | 2018-10-19 | 科.汉森有限公司 | 免疫佐剂 |
EP2455092A1 (en) | 2010-11-11 | 2012-05-23 | Nestec S.A. | Non-replicating probiotic micro-organisms protect against upper respiratory tract infections |
US9700610B2 (en) | 2011-08-22 | 2017-07-11 | Glycotope Gmbh | Microorganisms carrying a tumor antigen |
WO2014038929A1 (en) | 2012-09-07 | 2014-03-13 | N.V. Nutricia | Probiotics for producing antiviral factors |
CA3100608A1 (en) | 2018-05-18 | 2019-11-21 | Daiichi Sankyo Co., Ltd. | Anti-muc1 antibody-drug conjugate |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05236872A (ja) * | 1992-02-27 | 1993-09-17 | Takanashi Nyugyo Kk | 乳酸菌含有食品 |
JP4112021B2 (ja) * | 1994-02-16 | 2008-07-02 | 明治乳業株式会社 | 乳酸菌を用いた免疫賦活剤 |
WO1996020607A1 (fr) * | 1995-01-02 | 1996-07-11 | Compagnie Gervais Danone | Ferment lactique, et son utilisation pour la preparation de produits anti-diarrheiques |
CN1150314C (zh) * | 1997-08-21 | 2004-05-19 | 纽西兰乳品局 | 增强免疫的乳酸菌 |
US6699517B2 (en) * | 1997-11-28 | 2004-03-02 | Compagnie Gervais Danone | Method for preparing food products by fermenting soy milk with streptococcus thermophilus |
IT1298918B1 (it) * | 1998-02-20 | 2000-02-07 | Mendes Srl | Uso di batteri dotati di arginina deiminasi per indurre apoptosi e/o ridurre una reazione infiammatoria e composizioni farmaceutiche |
KR100324441B1 (ko) * | 1999-02-08 | 2002-02-27 | 이은선 | 위염, 위궤양, 십이지장궤양 예방을 위한 식품 |
-
2000
- 2000-05-25 FR FR0006679A patent/FR2809312B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-04-27 HU HU0302041A patent/HUP0302041A3/hu unknown
- 2001-04-27 SK SK1827-2002A patent/SK18272002A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2001-04-27 AU AU5643501A patent/AU5643501A/xx active Pending
- 2001-04-27 MX MXPA02011636A patent/MXPA02011636A/es active IP Right Grant
- 2001-04-27 JP JP2001585785A patent/JP2003534284A/ja active Pending
- 2001-04-27 BR BR0111135-3A patent/BR0111135A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-04-27 PT PT01929743T patent/PT1283714E/pt unknown
- 2001-04-27 EP EP01929743A patent/EP1283714B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-27 AT AT01929743T patent/ATE332143T1/de active
- 2001-04-27 DK DK01929743T patent/DK1283714T3/da active
- 2001-04-27 CA CA2410350A patent/CA2410350C/fr not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-27 CN CNB018100511A patent/CN1194707C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-27 US US10/276,315 patent/US7604809B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-27 WO PCT/FR2001/001310 patent/WO2001089541A1/fr active IP Right Grant
- 2001-04-27 AU AU2001256435A patent/AU2001256435B2/en not_active Ceased
- 2001-04-27 ES ES01929743T patent/ES2267763T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-27 IL IL15298001A patent/IL152980A0/xx unknown
- 2001-04-27 CZ CZ20024189A patent/CZ303600B6/cs unknown
- 2001-04-27 PL PL358408A patent/PL201801B1/pl unknown
- 2001-04-27 EA EA200201248A patent/EA005081B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-04-27 DE DE60121327T patent/DE60121327T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-24 AR ARP010102498A patent/AR028626A1/es unknown
-
2002
- 2002-11-08 ZA ZA200209087A patent/ZA200209087B/xx unknown
- 2002-11-20 BG BG107299A patent/BG65884B1/bg unknown
- 2002-11-21 NO NO20025595A patent/NO332369B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-11-25 HR HR20020935A patent/HRP20020935A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2002-12-20 MA MA26968A patent/MA25760A1/fr unknown
-
2003
- 2003-11-12 HK HK03108188A patent/HK1055898A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
PL201801B1 (pl) | Zastosowanie bakteryjnego szczepu CNCM I-1518 do wytwarzania kompozycji przeznaczonej do podawania doustnego | |
Sanders | Probiotics: definition, sources, selection, and uses | |
JP6182628B2 (ja) | 免疫疾患の処置において使用するための、プロバイオティック細菌を含む組成物 | |
Kadooka et al. | Effect of Lactobacillus gasseri SBT2055 in fermented milk on abdominal adiposity in adults in a randomised controlled trial | |
Kojima et al. | Combining prebiotics and probiotics to develop novel synbiotics that suppress oral pathogens | |
PT1824500E (pt) | Estirpes probióticas de lactobacillus para saúde vaginal melhorada | |
SK283008B6 (sk) | Biologicky čistá kultúra Lactobacillus rhamnosus, kompozícia s jej obsahom a jej použitie | |
Damaceno et al. | Isolation and identification of potential probiotic bacteria from human milk | |
US8349315B2 (en) | Use of Lactobacillus casei for increasing the protection provided by the influenza vaccine | |
Singh et al. | Probiotic attributes of Lactobacillus rhamnosus of dairy origin and effectiveness of almond in stimulation of its growth in vitro | |
Karki et al. | Quantitative composition of the human lactoflora and method for its examination | |
Kubota et al. | Diversity of intestinal bifidobacteria in patients with Japanese cedar pollinosis and possible influence of probiotic intervention | |
EP1178730B1 (en) | Use of lactic acid bacteria in the preparation of fermented milks for the treatment of depressed immunity levels | |
TWI779358B (zh) | 加氏乳桿菌菌株及其組合物與用途 | |
Srinivasan et al. | Comparative Antifungal Activity of Commercial Probiotics against Candida albicans–an Invitro Study | |
POPESCU et al. | STUDY ON IMMUNOMODULATORY EFFECTS OF PROBIOTICS IN ASTHMA |