CZ285421B6

CZ285421B6 - Nové cyklosporiny

Info

Publication number: CZ285421B6
Application number: CZ93303A
Authority: CZ
Inventors: Johann Jakob Boelsterli; Marcel Karl Eberle; Reto Dr. Naef; Trevor Glyn Dr. Payne
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 1992-03-02
Filing date: 1993-03-01
Publication date: 1999-08-11
Also published as: RU2131883C1; JP3382656B2; ATE146484T1; GB9204466D0; CN1037104C; NO930738L; DE69306670T2; IL104891A0; CA2090634A1; US5643870A; KR100256988B1; NO930738D0; SK14093A3; NO310685B1; TW264472B; AU667072B2; HU214028B; CN1076453A; NZ247031A; JPH07252296A

Abstract

Nové cyklosporiny, u kterých skupina v poloze 1 má obecný vzorec I, ve kterém skupina -x-y znamená skupinu /trans/ -CH-CH nebo skupinu -CH.sub.2.n.-.sub.C.n.H.sub.2.n., X znamená atom kyslíku nebo síry a R znamená atom vodíku, popřípadě znamená atomem nebo hydroxylovou substituovanou alkylovou skupinu či alkoxylovou skupinu nebo alkylthioskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo aminovou skupinu , monoalkylaminovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku nebo dialkylaminovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku v alkylech. Tyto nové sloučeniny jsou pouřitelné jako léčiva, zejména při léčbě astmatu.ŕ

Description

Cyklosporiny, způsob jejich výroby a farmaceutická kompozice, která je obsahuje

Oblast techniky

Vynález se týká nových cyklosporinů, jejich použití jako léčiv a farmaceutických kompozic, které je obsahují, jakož i způsobů jejich výroby.

Dosavadní stav techniky

Cyklosporiny zahrnují třídu strukturálně odlišných cyklických, poly-N-methylovaných undekapeptidů, které mají farmakologickou, zejména imunosupresivní, protizánětlivou nebo antiparazitámí účinnost, která pozměňuje nebo zvyšuje rezistenci, například tumoru, při terapii 15 jinými léčivy, zejména při rezistanci proti většině léčiv. První z cyklosporinů, který byl izolován, byl v případě se vyskytující metabolit hub Ciclosporin nebo Cyclosporine, známý rovněž jako cyklosporin A, který je komerčně dostupný pod ochrannou známkou SANDIMMUN^R nebo SANDIMMUNE^r. Ciclosporin je cyklosporin vzorce A:

-MeBnt-alfaAbu-Sar-ileLeu-Val-tíeLeu.-Ala-/D/Ala-MeLeu-ltaLeu-JíeVal~

234567 8 9 10 11 /A/.

V tomto vzorci skupina -MeBmt- znamená skupinu N-methyl-/4R/-4-but-2E-en-l-yl-4methyl-/L/-threoninu obecného vzorce B ch₅

— N-----CH-COI /s/

CH₃ /B/, ve kterém skupina -x-y- znamená skupinu /trans/-CH=CH-.

Od doby prvního objevu Ciclosporinu bylo izolováno a identifikováno mnoho druhů v přírodě se vyskytujících cyklosporinů a mnoho dalších, v případě se nevyskytujících cyklosporinů, bylo připraveno totálně synteticky nebo polosynteticky nebo pomocí modifikovaných kultivačních technik. Třída, která zahrnuje cyklosporiny, je tedy nyní rozsáhlá a například obsahuje v přírodě se vyskytující cyklosporiny A až Z [Traber se sp., 1, Helv. Chim. Acta, 60, 1247-1255 /1977/; Traber se sp., 2, Helv. Chim. Acta, 65, 1655-1667 /1982/; Kobel se sp., Europ. J. Applied Microbiology and Biotechnologcy, 14, 273-240, 1982; dále Wartburt se sp., Progress in Allergy, 38, 28—45, 1986], jakož i různé v přírodě se nevyskytující deriváty cyklosporinů a umělé nebo syntetické cyklosporiny včetně dihydrocyklosporin [ve kterých skupina -x-y- ve skupině -MeBmt- /v obecném vzorci výše/ je nasycená a tvoří skupinu -CHr-CHr-]; derivatizované cyklosporiny /například takové, u kterých atom kyslíku v poloze 3' skupiny -MeBmt- je acylován nebo u kterých je zaveden další substituent na atom alfa-uhlíku v sarkosylové skupině v poloze 3/; a takové cyklosporiny, u kterých jsou inkorporovány různé aminokyseliny do specifických poloh peptidového řetězce, například s použitím totálně syntetických metod pro přípravu cyklosporinů, které vyvinul R. Wenger /Traber se sp. 1, Traber se sp. 2 a Kobel se sp., již citováno výše; USA pat. spisy č. 4,108,985, 4,220,641, 4,288,431, 4,554,351, 4,396,542 a 4,798,823; Evropské pat. spisy č. 34,567A, 56,782A, 300,784A a 300,785A; Mezinárodní pat. spis č. WO 86/02080 a britské pat. spisy č. 2,206,119 a 2,207,678; Wenger 1, Transpol. Proč., 15 Suppl. 1:2230 /1983/; Werger 2., Angew. Chem. Int. Ed. 24 77 /1985/ a Wenger 3., Progress in the Chemistry of Organic Natural Products, 50.123 /1986//.

Třída, která zahrnuje cyklosporiny, je tedy nyní velmi rozsáhlá a obsahuje například /Thr/²-, /Val/²-, /Nva/²- a /Nva/²-/Nva/⁵-Ciclosporin, který je rovněž znám jako cyklosporiny C, D, G, a M, /3-O-acetyl-MeBmt/¹-Ciclosporin, známý též jako cyklosporin A-acetát, /dihydroMeBmt/'-Ciclosporin, známý též jako cyklosporin A-acetát, /dihydro-MeBmt/’-/Val/²Ciclosporin, známý též jako dihydrocyklosporin D, /(D)Ser/⁸-Ciclosporin, /Melle/¹¹Ciclosporin, /(D)MeVal/^H-Ciclosporin, které jsou známé též jako cyklosporinH, dále /MeAla/⁶Ciclosporin, /(D)Pro/³-Ciclosporin a pod.

/V souladu s obvyklou nomenklaturou cyklosporinů jsou cyklosporiny v popise tohoto vynálezu a v nárocích definovány s přihlédnutím ke struktuře Ciclosporinu /tj. cyklosporinů A/. To je dáno nejprve označováním takových skupin v molekule, které se liší od skupin přítomných v Ciclosporinu a potom používáním označení „Ciclosporin“ k charakteristice ostatních skupin, které jsou totožné se skupinami přítomnými v Ciclosporinu. Takže /dihydroMeBmt/'-/Val/²Ciclosporin je cyklosporin, který má sekvenci uvedenou ve vzorci A, ve kterém ale skupina -MeBmt— v poloze 1 je nahražena skupinou -dihydroMeBmt- /skupina v obecném vzorce B výše, ve kterém skupina -x-y- znamená skupinu -CHr-CH₂-/ a skupina -alfaAbu v poloze 2 je nahražena skupinou -Val-.

Pro doplnění budiž uvedeno, že zbytky aminoskupin, které jsou zde uváděny zkratkami, jako například -Ala-, -MeVal-, -alfaAbu- atd., mají v souladu s běžnou praxí konfiguraci /L/, pokud není uvedeno jinak, například jako je tomu v případě ,,-/D/Ala~“. Zkratky zbytků, ve kterých je na prvním místě „Me“, jako v případě ,,-MeLeu-“, představují alfa-N-methylované skupiny. Jednotlivé skupiny v molekule cyklosporinů jsou číslovány, jak je to obvyklé, ve směru hodinových ručiček a vychází se od skupiny -MeBmt-, -dihydro-MeBmt- nebo od odpovídající skupiny v poloze 1. Tentýž sled číslování je použit v průběhu popisu a v nárocích tohoto vynálezu./

Podstata vynálezu

Vynález se týká nových cyklosporinů, které jsou použitelné především pro topickou aplikaci, například při léčení chorob nebo stavů plic.

-2CZ 285421 B6

Tento vynález se týká zejména cyklospirinu, který má v poloze 1 skupinu obecného vzorce I

/1/, ve kterém

R znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkoxylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku; atomem halogenu substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkoxylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, nebo alkylthioskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku; hydroxylem substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkoxylovou skupinu se 2 až 3 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu se 2 až 3 atomy uhlíku; nebo aminovou nebo monoalkylaminovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku nebo dialkylaminovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku v alkylovém zbytku,

X znamená atom kyslíku nebo síry a skupina

-x-y- znamená skupinu /trans/-CH=CH- nebo skupinu -CH₂-CHt-.

Výhodné cyklosporiny podle tohoto vynálezu jsou takové, které mají obecný vzorec II — A-B-Sar -iá e Leu-V al -tóeLeu-Ala-Q-isáe Leu-ai eLeu-M e Val —

125 4 5 6 7 tí 9 10 11

I /11/, ve kterém

A znamená skupinu obecného vzorce I, která je definována výše,

B znamená skupiny -alfaAbu-, -Val-, -Thr- nebo -Nva- a

Q znamená skupiny -7D/Ala-, -/D/Ser- nebo -[O-/2-hydroxyethyl//D/Ser]-; nebo [Oacyl/D/Ser]- nebo -[O/2-acyloxyethyl/-/D/Ser]-, kde acylová skupina je fyziologicky hydrolyzovatelná a přijatelná a je definována níže.

Výhodné alkylové skupiny R jsou methylová a ethylová skupina. Výhodné alkoxylové skupiny a alkylthioskupiny R jsou methoxylové, ethoxylové, methylthio- a ethylthioskupiny. Atomem halogenu substituované skupiny znamenají substituci atomem chloru, bromu, fluoru nebo jodu. Atomem halogenu substituované skupiny R mohou být monosubstituované, disubstituované nebo póly substituované. Vhodná halogenem substituovaná alkylová skupina R s 1 až 3 atomy uhlíku je trifluormethylová skupina. Vhodné hydroxylovou skupinou substituované alkylové skupiny R s 1 až 3 atomy uhlíku jsou hydroxymethylové a 1-hydroxyethylové skupiny. Vhodné monoaminové a dialkylaminové skupiny R jsou methylaminová, dimethylaminová a methylethylaminová skupina, přičemž dimethylaminová skupina má přednost.

Při provedení tohoto vynálezu znamená R atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku, alkoxylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku, alkylthioskupinu s 1 až 2 atomy uhlíku, trifluormethylovou skupinu, hydroxylovou skupinou substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku, aminovou skupinu nebo monoalkylaminovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku nebo dialkylaminovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku, obzvláště znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku, alkoxylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku, trifluormethylovou skupinu, hydroxylem substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku nebo dimethylaminovou skupinu. S výhodou znamená R atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku, alkoxylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu s 1 až 2 atomy uhlíku, s výhodou alkylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku nebo alkoxylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku, především methylovou nebo methoxylovou skupinu. Nejvýhodněji pak R znamená alkoxylovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku, zejména methoxylovou skupinu.

X zaznamená s výhodou atom kyslíku.

Skupina -x-y- znamená s výhodou skupinu /trans/-CH=CH—.

B znamená s výhodou skupinu -alfa Abu-.

Termín „fyziologicky hydrolyzovatelný a přijatelný“, který je použit při definici substituentu Q, znamená takové acylové skupiny, které lze odštěpit za fyziologických podmínek za vzniku kyseliny, která sama o sobě je fyziologicky přijatelná v aplikovaných dávkách. Vhodné acylové skupiny jsou benzoyl a salicyl, rovněž tak i skupiny obecného vzorce R'-CX'-, kde R' má význam uvedený výše pro R, vyjímaje ale aminovou a monoalkylaminovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku nebo dialkylaminovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku a kde X' znamená atom kyslíku nebo síry.

Skupina cyklosporinů podle tohoto vynálezu tedy obsahuje takové cyklosporiny obecného vzorce II, který je definován výše a ve kterém substituent Q znamená skupinu -/D/Ala-, -/D/Ser-, -[O/2-hydroxyethyl//D/Ser]- nebo skupinu obecného vzorce III

-4CZ 285421 B6

X'

CH₂-O-/CH₂-CH₂-O/_n-C-R'

I

-NH-CH-CO/D/ /nu, ve kterém n znamená nulu nebo 1 a substituent R' a X' mají význam uvedený výše. Když substituent Q znamená skupinu obecného vzorce III, mají substituenty R' a X' v obecném vzorce III obvykle stejný význam jako substituenty R a X v obecném vzorci I.

Účelně znamená substituent Q skupinu -/D/Ala- nebo skupinu obecného vzorce III, jak je definována výše, zejména skupinu -/D/Ala- nebo skupinu obecného vzorce ΠΙ, jak je definována výše, ve kterém n znamená nulu. S výhodou značí substituent Q skupinu -/D/AlaCyklosporiny podle vynálezu, kde substituenty R a/nebo R' jsou asymetrické, například kde substituent R znamená alfa-hydroxy-ethylovou skupinu, vykazující optickou isomerii. V takových případech lze získávat individuální isomery obvyklým způsobem, například syntézou z opticky aktivních výchozích látek /jako v případě příkladů provedení 10 a 11 uvedených níže/ nebo dělením původně získaných směsí isomerů, například s použitím chirálních chromatografických technik. Pokud se taková isomerie vyskytuje, je třeba tomuto vynálezu rozumět tak, že zahrnuje obě individuální isomemí formy, například S- a R-enantiomery, rovněž i jejich směsi, například směsi racemátů a diastereomerů, pokud není uvedeno jinak. Ovšem obecně, pro farmaceutické použití podle tohoto vynálezu, má přednost aplikace individuálních enantiomerů v čisté formě nebo pokud možno v čisté formě, například s obsahem až 95 % hmotn. nebo více individuálního čistého enantiomerů.

Vynález se rovněž týká způsobu výroby cyklosporinu, jak je definován výše tento způsob se vyznačuje tím, že se

a) při výrobě cyklosporinu, kde skupina v poloze 1 znamená skupinu obecného vzorce I, jak je definována výše a tento cyklosporin má volnou hydroxylovou skupinu, například cyklosporin obecného vzorce Π, jak je definován výše, ve kterém substituent A znamená skupinu obecného vzorce I, jak je definován výše, ve kterém substituent R znamená hydroxylovou skupinou substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkoxylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku a/nebo ve kterém substituent Q znamená skupinu -/D/Ser-, -[O-/2-hydroxyethyl//D/Ser]nebo skupinu obecného vzorce III, jak je definován výše, ve kterém substituent R' znamená hydroxylovou skupinou substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkoxylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, odstraňuje chránící skupina z hydroxylové skupiny;

b) při výrobě cyklosporinu, kde skupina v poloze 1 znamená skupinu obecného vzorce I, jak je definována výše, například cyklosporin obecného vzorce II, jak je definován výše, uvádí do reakce cyklosporin, kde skupina v poloze 1 je skupina obecného vzorce IV

-5CZ 285421 B6

/IV/, ve kterém skupina -x-y- má význam uvedený v obecném vzorci I, například cyklosporin obecného vzorce II, jak je definován výše, ve kterém substituent A znamená skupinu obecného vzorce IV, jak je definován výše a substituenty B a Q mají význam, který je uveden v obecném vzorci Π, se sloučeninou obecného vzorce V

X

II

R-C-Z /V/, ve kterém substituent Z znamená odštěpitelný atom nebo skupinu a substituenty R a X mají význam uvedený ve vzorci I, přičemž některá hydroxylovou skupinou substituovaná alkylová skupina s 1 až 3 atomy uhlíku, alkoxylová skupina s až 3 atomy uhlíku nebo alkylthioskupina s 1 až 3 atomy uhlíku, která má význam substituentu R, je ve formě s chráněnou hydroxylovou skupinou, a je-li to žádoucí, provádí se způsob podle stupně /a/;

c) při výrobě cyklosporinu obecného vzorce II, jak je definován výše, kde substituent Q znamená skupinu -[O-acyl/D/-Ser]- nebo -[O-/2-acyloxyethyl//D/Ser]-, ve které acylová skupina je fyziologicky hydrolyzovatelná a přijatelná, acyluje cyklosporin obecného vzorce II, jak je definován výše, ve kterém substituent Q znamená skupinu -/D/Ser- nebo -[O-/2hydroxyethyl//D/Ser]-, vhodným acylačním činidlem, například reakcí se sloučeninou obecného vzorce V

X'

II

R'-C-Z /V'/, ve kterém substituenty R' a X' mají význam uvedený výše v obecném vzorci III, přičemž některá hydroxylovou skupinou substituovaná alkylová skupina s 1 až 3 atomy uhlíku, alkoxylová skupina s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkylthioskupina s 1 až 3 atomy uhlíku, která má význam substituenta R', je ve formě s chráněnou hydroxylovou skupinou a substituent

-6CZ 285421 B6

Z značí odštěpitelný atom nebo skupinu, a je-li to žádoucí, provádí se způsob podle stupně /a/;

a takto získaný cyklosporin se izoluje.

Vhodné chránící skupiny v souvislosti se způsobem podle stupně /a/ zahrnují tercbutylsilylovou skupinu. Odstranění chránící skupiny podle stupně /a/ lze uskutečnit obvyklými postupy, například s použitím tetrabutylamoniumfluoridu podle postupů, které popsal Corey se sp., J. Am. Chem. Soc., 94 6190 /1972/.

Vhodné sloučeniny obecných vzorců V a VI, použitelné při způsobech podle stupně /b/ a /c/, zahrnují acylhalogenidy a thioacylhalogenidy /ve kterých například substituent Z znamená atom chloru nebo bromu/ a acylanhydridy /ve kterých substituent Z znamená skupinu R-CX-O- nebo R'-CX'-O/. Reakce se účelně provádí v přítomnosti činidla poutajícího kyselinu, například 4-dimethylaminopyridinu, při teplotách asi od -20 °C až asi do 60 °C.

U cyklospirinů, které slouží jako výchozí látky pro výše uvedené postupy, jsou 8'-hydroxylové skupiny ve skupině v poloze 1 /obecný vzorec IV/ mnohem reaktivnější než hydroxylové skupiny, které jsou přítomny ve skupině v poloze 8, například když substituent Q značí skupinu -/D/Ser- Postupem podle stupně /B/je obdobně možné zavést skupinu R-CX- přednostně do skupiny v poloze 1, tj. s použitím jednoho ekvivalentu sloučeniny obecného vzorce V. Potom může následovat reakční stupeň /c/, kterým se zavádí odlišná skupina R'-CX- do skupiny v poloze 8. Pokud je to žádoucí, aby se zavedla skupina R'-CX'- do polohy 8, která je totožná se skupinou R-CX v poloze 1, je možné stupně /a/ a /b/ uskutečnit v jedné reakci s použitím dvou ekvivalentů /stejné/ sloučeniny obecných vzorců V/V'.

Výchozí sloučeniny obecných vzorců V a V jsou známé nebo mohou být připraveny analogicky jako známé látky. Hydroxylovými skupinami substituované acylhalogenidy ve formě chráněné O-terc.-butylsilylskupinou, jsou například popsány v Chem. Abstracts, 109-149284 a v J. Org. Chem., 53, 3457 /1988/, /Bischofsberger se sp./.

Cyklosporiny, které jsou potřebné jako výchozí látky pro postup podle stupně /b/, lze připravovat podle následujícího reakčního sledu. /V tomto reakčním sledu je pouze skupina v poloze 1 molekuly cyklosporinu uvedena detailně. Zbývající část molekuly je označena jako ,,/rs2-ll/“, což znamená například v souvislosti s výše uvedeným obecným vzorcem II sled skupin /residue sequence/ 2 až 11, jak je uvedeno a definováno v obecném vzorce II. Skupina -x-y- má stejný význam, jak je uvedeno v obecném vzorci I./

OH (-/TS2-11/ - K---CH---CH---CH---CH„ - X - y - CH, /V/ í m I

CO

/c/

-7CZ 285421 B6 /VI/

HCO

I

CH,O | ⁵ /S/ |/5/ —/rs2-ll/ - N---CH---CH---CH----CHg - x - y - CHg-Br /VII/

I /VI

-------------------CO CH₃i /®/

b

CH₂ - x - y - CH₂-O-CH /VIII/ /17

CH, 1 ³ /S/	OH I	/2/	i v
r-/rs-ll/ - N---CH—	— CE—	— CH—	—CH₂ - x - y - CHg-OH
1	/B/

/lila/

CO

Stupeň /c/ až /f/ lze účelně provádět podle obecných postupů, které jsou popsány níže v příkladu 5 1, nebo analogicky podle tohoto příkladu. Když skupina /rs2—11/ v poloze 8 /kde v souvislosti s obecným vzorcem II znamená substituent Q skupinu -/D/Ser- nebo -[O-/2-hydroxyethyl//D/Ser]-/, je volná hydroxylová skupina rovněž ve stupni /c/ formylována a následně deformylována ve stupni /17.

-8CZ 285421 B6

Cyklosporiny obecného vzorce V, které jsou potřebné jako výchozí látky, jsou známé nebo mohou být připraveny analogicky jako známé cyklosporiny. Tedy když /rs2-l 1/ představuje sekvenci 2 až 11 v obecném vzorce II, ve kterém substituent B má význam uvedený v obecném vzorce II a substituent Q znamená skupinu -/D/Ala-, jsou definované cyklosporiny a dihydrocyklosporiny A, C, D a G. Odpovídající cyklosporiny, kde substituent Q znamená skupinu -/D/Ser- nebo -[O-acyl/D/Ser]-, jsou například popsány v Evropském pat. spise č. 56782 A. Odpovídající cyklosporiny, kde substituent Q znamená skupinu -[O-/2-hydroxyethyl//D/-ser]- nebo -[O-/2-acyloxyethyl//D/Ser]-, jsou například popsány v Evropském pat. spise č. 414632 A.

Cyklosporin obecného vzorce Π, jak je uveden výše, ve kterém substituent A znamená skupinu obecného vzorce IV, jak je uveden výše, ve kterém skupina -x-y- znamená /trans/-CH=CH- a substituent B znamená skupinu -alfaAbu- a substituent Q znamená skupinu -/D/Ala-, je rovněž znám jako metabolit cyklosporinu A. Je to metabolit, který je v obdobné literatuře označován jako Ml7.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava [/S-methoxykarbonyloxy/MeBmtp-Ciclosporinu /obecný vzorec II: substituent A znamená skupinu obecného vzorce I, ve kterém substituent R znamená skupinu CH₃CO-, substituent X značí atom kyslíku a skupina -x-y- znamená skupinu /trans/-CH=CH-; substituent B znamená skupinu -alfaAbu-; substituent Q znamená skupinu -/D/Ala-/

Stupeň přípravy /a/

0,33 ml chlormethylformiátu se přidá k roztoku 4,9 g [/S-hydroxy/MeBmt^-Ciclosporinu a 1,9 g 4-dimethylaminopyridinu v 50 ml dimethylformamidu za bezvodých podmínek. Reakční směs se míchá po dobu 18 h při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Odparek se vyjme do ethylacetátu, promyje vodným roztokem kyseliny vinné a vodným roztokem uhličitanu sodného, rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a odparek se chromatografiije na silikagelu s použitím ethylacetátu nasyceného vodou; získá se titulní produkt:

/a/_D ²⁰ = -151,8° /c = 2 v chloroformu/, r_F = 0,57 /ethylacetát nasycený H₂O : SiO₂/.

Výchozí produkt se připraví takto:

Stupeň přípravy /c/

Příprava [/3'-O-formyl/MeBmt] ’-Ciclosporinu /obecný vzorec VI/ ml acetylformiátu se přidá k roztoku 9,6 g Ciclosporinu /cyklosporinu A/ a 3,9 g 4dimethylaminopyridinu ve 100 ml acetonu, v průběhu 30 min při teplotě místnosti. Reakční směs se míchá po dobu 20 h při teplotě místnosti a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Odparek se vyjme do ethylacetátu, promyje vodným roztokem síranu sodného a organické

-9CZ 285421 B6 rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Odparek se překrystaluje z vroucího hexanu a získá se titulní produkt s teplotou tání 195 až 197 °C.

Stupeň přípravy lál

Příprava [8'-brom-3 '-O-formy 1/MeBmt] ’-C ic losporinu /obecný vzorec VII/

Suspenze 75 g produktu ze stupně /c/, 11,7 g N-bromsukcinimidu a 1 g azoisobutyronitrilu v 750 ml chloridu uhličitého se vaří pod zpětným chladičem po dobu 2 h. Reakční směs se zfiltruje, promyje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodným roztokem kyseliny vinné a chloridu sodného a organická vrstva se vysuší nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a získá se titulní sloučenina, která se bez jakéhokoliv čištění podrobí další reakci.

Stupeň přípravy /e/

Příprava [/3'-0-formyl-8'-formyloxy/MeBmt]'-Ciclosporinu /obecný vzorec VIII/ g produktu ze stupně lál, 1 g jodidu sodného a 27 g tetraethylamoniumformiátu v 750 ml methylethylketonu se vaří pod zpětným chladičem po dobu 4 h. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku, odparek se vyjme do ethylacetátu a promyje vodným roztokem uhličitanu sodného, vodným roztokem kyseliny vinné a chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší nad síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku; získá se titulní produkt, který se bez jakéhokoliv čištění podrobí další reakci.

Stupeň přípravy /f/

Příprava [/8'-hydroxy/MeBmt]’-Ciclosporinu /= M 17/ g produktu ze stupně /e/ se míchá po dobu 18 h při teplotě místnosti v 0,8 M ethanolíckém roztoku methylaminu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a odparek se chromatografuje na silikagelu s použitím ethylacetátu nasyceného vodou. Odstraněním rozpouštědla za sníženého tlaku se získá titulní sloučenina v podobě bílé pěny s r_F = 0,31 /ethylacetát nasycený H₂O : SiO₂/. Následující cyklosporiny obecného vzorce II, jak je uveden výše, ve kterém substituent A znamená skupinu obecného vzorce la

-10CZ 285421 B6

O

R-Š-0-CE_oI x

HO CH /B/ /R/ ^XCH^Z CH₅ — N-----CH-COI /s/ /Ia/, ve kterém substituent R a skupina -x-y- mají význam uvedený níže, substituent B znamená skupinu -alfaAbu- a substituent Q znamená skupinu -/D/Ala-, lze připravovat analogicky

Příklad	R	-x-y-	/a/_D ²⁰
2	H	-CH=CH- /trans/	-183,4°/c = 0,5 v CH3OH/
3	CH₃-	-CH=CH- /trans/	-148° /c = 2 v CH3OH/
4	ch₃-	-CH₂-CH₂-	-235° /c= 1,04vCHC1₃/
5	C₂H₅-	-CH=CH- /trans/	-214,85%= 1,03 v CHCIj/
6	c₂h₅o-	-CH=CH-/trans/	-174,8°/c = 0,5 v CH3OH/
7	CF3-	-CH=CH- /trans/	-177,1% = 0,5 vCH₃OH/
8	/CH₃/₂N-	-CH=CH- /trans/	-168,7% = 0,5 v CH3OH/
9*	ho-ch₂-	-CH=CH- /trans/	-181,5% = 0,5 VCH3OH/
10*	HO-CH- 1 ch₃	-CH=CH- /trans/	-178,9% = 0,5 v CH3OH/
11*	HO-CH- 1 ch₃	-CH=CH- /trans/	175,7% = 0,5 vCH₃OH/

* Způsob přípravy vyžaduje počáteční reakci s /CH3/3C-SÍ-O-CH2COCI/CH3/3C-SÍOCH/CH3/COCI, po které následuje odstranění chránící skupiny tetrabutylamoniumfluoridem postupem, který popsal Corey se sp., J. Am. Chem. Soc. 94, 6190 /1972/.

Následující cyklosporiny obecného vzorce II, jak je uveden výše, ve kterém substituent A znamená skupinu obecného vzorce Ia, jak je uveden výše, ve které substituent R má význam uvedený v tabulce níže a skupina -x-y- značí skupinu /trans/-CH=CH-, substituent B znamená skupinu -alfaAbu- a substituent Q znamená skupinu obecného vzorce lila

O

CH₂-O-C-R'

I -NH-CH-CO/D/ /lila/,

-11CZ 285421 B6 ve kterém substituent R’ má význam uvedený v tabulce níže, lze rovněž připravovat analogicky, ovšem s použitím dvou ekvivalentů potřebného acylačního činidla.

Příklad	R	R'	/a/_D ²⁰
12	ch₃-	ch₃-	-170,9% = 0,5 v CH₃OH/
13	ch₃o-	ch₃o-	-161,5° /c = 0,5 v CH₃OH/

Cyklosporiny podle tohoto vynálezu mají mohutnou imunosupresivní a protizánětlivou účinnost. Zejména inhibují zánětlivou infiltraci buněk, vyvolanou antigenem, například v dýchacích cestách. In vivo je tato účinnost zřejmá po topické aplikaci, například po topické aplikaci do dýchacích cest pulmolámí cestou. U cyklosporinů podle vynálezu bylo naopak nalezeno, že in vivo mají podstatně nižší, nebo že se v podstatě nemají žádnou účinnost, když se aplikují systémově, například po perorální aplikaci.

Imunosupresivní a protizánětlivé vlastnosti cyklosporinů podle vynálezu lze prokázat standardními modelovými testy in vitro a in vivo, jak je patrno například z následujícího.

1. Imunosupresivní účinnost /in vitro/

1.1 Reakce směsí myších lymfocytů

Asi 0,5 x 10⁶ lymfocytů se sleziny myších samic /stáří 8 až 10 týdnů/ kmene Balb/c, se ínkubuje po dobu 5 dní v 0,2 ml buněčného růstového média asi s 0,5 x 10⁶ lymfocytů ze sleziny myších samic /stáří 8 až 10 týdnů/ kmene CBA. Testovaná látka se přidává k médiu v různých koncentracích. Účinnost se zjišťuje schopností potlačovat syntézu DNA provázenou proliferací, jak lze stanovit inkorporací značeného thymidinu.

Cyklosporiny podle tohoto vynálezu inhibují inkorporací thymidinu v koncentracích řadově od 0,005 až do 0,025 pg/ml.

1.2 Mishell-Duttonův test

Asi 10⁷ lymfocytů ze sleziny myších samic kmene OFI se kultivuje společně asi se 3 x 10⁷ovčích erytrocytů po dobu 3 dnů. Testovaná substance se přidává k inkubačnímu médiu v různých koncentracích. Lymfocyty se seberou a naočkují se na agar s čerstvými ovčími erytrocyty jako antigenem. Senzibilizované lymfocyty vylučují protilátku, která pokryje erytrocyty a ty lýzují za vzniku povlaku v přítomnosti komplementu. Aktivita se odhaduje podle snížení počtu buněk, které tvoří povlak, tj. které produkují protilátku. Cyklosporiny podle tohoto vynálezu snižují počet buněk, které tvoří povlaky, v koncentracích řádově od 0,03 až do 0,05 pg/ml.

2. Působení na pulmonámí eosinofílii vyvolanou alergenem /in vivo/

Samci himalájských skvrnitých morčat /hmotnost 300 g, kmen BRL/ se senzibilizují na ovalbumin /OA/ intraperitoneální injekcí 1 ml suspenze ovalbuminu /10 pg/ s hydroxidem hlinitým /100 mg/ a vakcinou B-pertussis /0,25 ml/ v roztoku chloridu sodného /0,9% v/o/. Pro perorální studie se postup opakuje jednou po dvou týdnech a zvířata se použijí o jeden týden později. Pro inhalační studie se postup opakuje dvakrát v třítýdenních intervalech a zvířata se použijí jeden týden po poslední injekci.

Imunologické testování se uskutečňuje s použitím ovalbuminu v roztoku chloridu sodného, rozprášeného do expoziční komůrky. Testovaná zvířata se vystaví působení ovalbuminu inhalací výhradně nosem po dobu 60 min. Pro perorální pokusy se roztok ovalbuminu používá

-12CZ 285421 B6 v koncentraci 0,05 % hmot. Pro inhalační pokusy se roztok ovalbuminu používá v koncentraci

0,01 % hmotn.

Testovaná látka se podává /a/ perorálně a /b/ inhalačně. Pro perorální pokusy se testovaná látky podává perorálně v olivovém oleji jednou denně po dobu tří dnů nebo v práškové formě ve směsi s methylcelulózou pouze jednou před ovalbuminovým imunologickým testováním. Třetího dne dostanou testovaná zvířata testovanou látku 1,5 h před imunologickým testováním a 6 h po něm. Pro inhalační pokusy se testovaná látky mikronizuje před aplikací testovaným zvířatům, která jsou uzavřena v průtočné komůrce pro inhalaci výhradně nosem. Aplikace inhalací se uskutečňuje 15 min před imunologickým testováním s použitím ovalbuminu.

Účinnost aplikované testované látky se stanovuje bronchoalveolámí laváží /BAL/ a počítáním buněk. K tomuto účelu se zvířata usmrtí pomocí pentobarbitonu sodného /100mg/kg intraperitoneálně/ a trachea se obnaží a kanyluje. Potom se 5 dávek po 10 ml Hankova vyváženého roztoku solí /HBSS/, prostého vápenatých a hořečnatých iontů, obsahujícího hovězí sérový albumin /BSA, 0,3%/, ethylendiamintetraoctovou kyselinu /EDTA, lOmM/ a HEPES /10 mM/, uvádí do plic a ihned nechá vdechnout mírným stlačením plicní tkáně. Celkový počet buněk ve spojených eluátech se stanovuje s použitím automatického počítače buněk. Lavážní tekutina se odstraňuje při 200 g po dobu 10 min a pelety buněk se resuspendují v 1 ml doplněného Hankova roztoku. Buněčná suspenze v množství 10 μΐ se přidá ke 190 μΐ Turkova roztoku /ředění 1 : 20/. Získá se různý počet buněk z roztěrů obarvených podle Diff-Quicka. Buňky se identifikují a počítají v olejové imerzi /x 1,000/. Nejméně 500 buněk se napočítá v jednom roztěru a vypočítá se celková populace každého typu buněk.

U kontrolních zvířat vyvolává imunologické testování s použitím ovalbuminu růst u všech typů buněk v bronchoalvoolámí lavážní tekutině 24 h po tomto testování. Předchozí aplikace cyklosporinů podle tohoto vynálezu inhalací, v dávkách řádově od 1,0 do 15,0mg/kg, snižuje počet eosinofilů v lavážní tekutině v závislosti na dávce při srovnání s kontrolními zvířaty. Počty buněk u jiných leukocytů /makrofágů, neutrofilů/ jsou rovněž nižší. Naproti tomu opakovaná perorální aplikace cyklosporinů podle tohoto vynálezu nemá v podstatě vliv na počet buněk při srovnání s kontrolami.

Cyklosporiny podle vynálezu jsou rovněž použitelné pro léčení chorob nebo stavů, které reagují na topickou protizánětlivou, imunosupresivní nebo podobnou terapii nebo které ji vyžadují, například pro topickou aplikaci při léčení takových chorob nebo stavů očí, nosních cest, ústní dutiny, kůže, tlustého střeva, nebo, a to obzvláště, dýchacích cest nebo plic. Cyklosporiny podle vynálezu dovolují především topickou protizánětlivou, imunosupresivní nebo podobnou terapii, při čemž se předchází průvodním vedlejším účinkům nebo se nežádoucí systémové vedlejší účinky zmenšují, jako je například celková systémová imunosuprese.

Cyklosporiny podle vynálezu jsou použitelné zejména při léčení chorob a stavů dýchacích cest a plic, především zánětlivých nebo obstrukčních chorob dýchacích cest. Jsou obzvláště použitelné pro léčení chorob nebo stavů dýchacích cest nebo plic, které jsou provázeny nebo charakterizovány zánětlivou infiltrací buněk nebo jiným zánětlivým stavem, který je doprovázen zmnožením buněk, které zánět vyvolávají, například eosinofilů a/nebo neutrofilů. Mimořádně výhodné jsou při léčení astmatu.

Cyklosporiny podle vynálezu jsou použitelné při léčení astmatu jakéhokoliv typu nebo původu, včetně vrozeného a zejména získaného astmatu. Jsou použitelné při léčení atopického či neatopického astmatu, včetně alergického astmatu, bronchiálního či profesionálního astmatu, astmatu vyvolaného cvičením nebo vzniklého po bakteriální infekci, a jiných typů nealergického astmatu. Léčením astmatu se rovněž rozumí léčení „syndromu sípavých dětí“, což je léčení pacientů, například ve věku nižším než 4 nebo 5 let, kteří vykazují symptomy sípání, především

-13CZ 285421 B6 v noci, a jsou diagnostikováni nebo diagnostikovatelní jako „sípavé děti“, což je uznávaná kategorie pacientů značného medicínského zájmu a nyní mnohem přesněji identifikovaná jako astmatici počáteční nebo astmatici časné fáze. Cyklosporiny podle vynálezu jsou především použitelné pro léčení astmatu u takových osob, u nichž stav astmatu není ani závislý na steroidech a ani není na ně rezistentní.

Cyklosporiny podle vynálezu jsou rovněž použitelné pro léčení bronchitidy nebo pro léčení chronických nebo akutních obstrukcí dýchacích cest, které je doprovázejí. Cyklosporiny podle vynálezu lze používat pro léčení bronchitidy jakéhokoliv typu nebo původu, včetně například akutní bronchitidy, arašídové bronchitidy, katarální bronchitidy, chronické bronchitidy, krupózní bronchitidy, flinoidní bronchitidy apod.

Cyklosporiny podle vynálezu jsou navíc použitelné pro léčení pneumokoniózy /zánětlivé, obvykle profesionální onemocnění plic, často doprovázené obstrukcí dýchacích cest, bud’ chronické, nebo akutní a způsobené opakovaným vdechováním prachu/ jakéhokoliv typu nebo původu, včetně například aluminózy, antrakózy, azbestózy, beryliózy, chalikózy, ptilózy, siderózy, silikózy, tabakózy a především byssinózy.

Cyklosporiny podle vynálezu jsou rovněž použitelné pro léčení dýchacích cest s různými poruchami, které jsou vyvolávány eosinofily /a které například zahrnují morbidní eosinofily infiltraci plicní tkáně/, včetně hypereosinofilie, pokud postihuje dýchací cesty a/nebo plíce, právě tak jako například s eosinofily související poruchy dýchacích cest nebo průvodní jev Lofflerova syndromu, eosinofilní pneumonii, parazitární /zejména metazoální/ zamoření, bronchopulmonámí aspergilózu, polyarteritis nodosa /včetně Churg-Straussova syndromu/, eosinofilní granuloma a s eosinofily související poruchy, které postihují dýchací cesty a jejichž příčinou je reakce na léčivo.

Termín „léčení“ tak, jak je používán výše v souvislosti s léčením chorob dýchacích cest a plic, zejména astmatu, zahrnuje, aby bylo jasno, jak symptomatické tak i profylaktické způsoby, tzn. akutní léčení, například akutního zánětu /symptomatické léčení/ a rovněž léčení předběžné, aby se předešlo dlouhodobé sympatologii nebo aby se zlepšila nebo omezila /profylaktické léčení/. Termín „léčení“, tak jak se používá v tomto vynálezu a v nárocích v souvislosti se jmenovanými chorobami, je třeba v souladu s tím interpretovat tak, že zahrnuje jak symptomatické tak i profylaktické léčení; například v případě astmatu je to symptomatická léčba, která zlepšuje akutní zánětlivý případ, a profylaktická léčba, která brzdí nastupující zánětlivý stav a zlepšují budoucí přidružené bronchiální exacerbace.

Cyklosporiny podle vynálezu mohou být rovněž používány k léčení některých chorob nebo stavů dýchacích cest nebo plic, které vyžadují imunosupresivní terapii, například při léčení autoimunních chorob plic, pokud jsou jimi postiženy/například při léčení sarkoidózy, alveolitidy nebo chronické hypersenzitivní pneumonitidy/ nebo při udržení alogenního transplantátu plic, například po transplantaci plic nebo srdce a plic.

Jak již bylo dříve uvedeno, aplikují se cyklosporiny podle vynálezu kvýše uvedeným účelům topicky do dýchacích cest, například do plic, inhalací. Jak bylo v předchozím rovněž poznamenáno, mají cyklosporiny mohutnou účinnost při topickém podávání, zatímco po perorální aplikaci vykazují relativně nižší systémovou účinnost. Cyklosporiny podle vynálezu tedy představují prostředky pro léčení chorob a stavů dýchacích cest a plic, jak bylo například výše naznačeno, bez výskytu nežádoucích systémových vedlejších účinků, které vyplývají například z nepozorného polknutí substance léčiva v průběhu inhalační terapie. /Bylo zjištěno, že v průběhu úkonů potřebných k uskutečnění aplikace pomocí inhalace, až 90 % nebo i více z celkového množství aplikované substance se obvykle spíše spolkne než inhaluje./

-14CZ 285421 B6

Stou výhradou, že cyklosporiny, které jsou účinné topicky, působí například topicky, ale systémově jsou neúčinné, zpřístupňuje tento vynález pomocí cyklosporinů léčení těm osobám, u kterých by takové léčeni bylo z jiných důvodů vyloučeno, například pro riziko systémových, zejména imunosupresivních vedlejších účinků.

Cyklosporiny podle vynálezu jsou rovněž použitelné při léčení dalších chorob nebo stavů, zejména takových chorob nebo stavů, které jsou doprovázeny autoimunní nebo zánětlivou složkou a u kterých může být použita topická terapie, například při léčení očních onemocnění nebo stavů, jako je konjunktivitida, suchá keratokonjunktivitida a jarní konjunktivitida, dále k udržení transplantátů rohovky, při nosních onemocněních, včetně alergické rhinitidy, při chorobách a stavech kůže, včetně psoriázy, atopické dermatitidy, pemfigu a kontaktní dermatitidy, dále při onemocnění tlustého střeva, například Crohnovy nemoci a ulcerativní kolitidy.

Pro výše uvedené účely lze používat cyklosporiny podle vynálezu v takové dávkovači formě, která je vhodná pro topickou aplikaci na žádaném místě. Takže při léčení onemocnění dýchacích cest nebo plic je možné aplikovat cyklosporiny podle vynálezu do plic inhalací z vhodného dávkovacího zařízení.

K tomuto účelu lze cyklosporiny podle vynálezu používat vjakékoliv jemně dispergované nebo jemně dispergovatelné formě, která umožňuje aplikaci do dýchacích cest nebo do plic, například ve formě jemných suchých částic nebo v podobě disperze nebo roztoku ve vhodném pevném nebo tekutém nosném médiu /tj. takovém, které lze aplikovat do plic/. Pro aplikaci ve formě suchých částic lze cyklosporiny podle vynálezu používat například jako takové, tj. v mikronizované formě, bez přídavku dalších látek či zředěné další vhodným jemně rozptýleným netečným tuhým nosičem nebo zřeďovadlem /například glukózou, laktózou, manitolem, sorbitolem, ribózou, manózou nebo xylózou/, ve formě potahových částic nebo vjakékoliv jiné vhodné formě, jak je odborníkovi známo při aplikaci jemně rozptýlených pevných částic do plic.

Pulmonámí aplikaci lze uskutečňovat pomocí vhodného systému, který je odborníkovi znám pro podávání léčivé substance v suché nebo kapalné formě inhalací, například atomizéru, rozprašovače, inhalátoru suchého prášku nebo pomocí podobného zařízení. S výhodou se používá zařízení s měřitelným dávkováním, tj. takové, které je schopno uvolnit předem stanovené množství cyklosporinů při každém uvedení v činnost. Taková zařízení jsou známa.

Při nasální aplikaci se cyklosporiny podle vynálezu účelně aplikují v tekuté formě z nosního aplikátoru. Vhodné formy pro léčení kožních chorob nebo stavů jsou například krémy, gely, masti, pasty, kataplazmata, náplasti, transdermální náplasti apod. Směsi pro dermální aplikaci mohou účelně obsahovat látky zvyšující penetraci do kůže, jako například známý azone. Formy, které jsou vhodné pro oftalmologické použití, zahrnují lotiony, tisktury, gely, masti a oftalmologické vložky, které jsou rovněž známy. Pro rektální aplikaci, tj. pro topickou terapii tlustého střeva, se mohou cyklosporiny podle vynálezu aplikovat v podobě čípků nebo klyzmatu, zejména v roztoku, například v rostlinném oleji nebo v podobném olejovém systému, který se používá jako klyzma při zácpě.

Tento vynález se dále týká:

A. Způsobu léčení choroby nebo stavu, který vyžaduje protizánětlivou, imunosupresivní nebo obdobnou terapii u pacienta, který ji potřebuje, přičemž tento způsob se vyznačuje topickou aplikací účinného množství některého cyklosporinů podle vynálezu; rovněž se týká

B. cyklosporinů podle vynálezu k použití jako léčivo, například k použití při léčení choroby nebo stavu, který vyžaduje protizánětlivou, imunosupresivní nebo podobnou terapii, například k použití při způsobu uvedeném v bodě A výše.

-15CZ 285421 B6

Způsob, který je definován výše v bodě A, se aplikuje zejména při léčení chorob a stavů nosu, krku, ústní dutiny, kůže, tlustého střeva nebo, a to především, dýchacích cest nebo plic. Může být aplikován u kteréhokoliv stavu nebo choroby, uvedené již výše, zejména u jakékoliv choroby nebo stavu plic, které vyžadují protizánětlivou nebo podobnou terapii, zejména u choroby nebo stavu, které jsou charakterizovány zánětlivou infiltrací buněk; a obzvláště je výhodný pro léčbu astmatu.

Tento vynález se dále týká:

C. Farmaceutické kompozice pro topickou aplikaci, tj. vtopicky aplikovatelné formě, která obsahuje cyklosporin podle vynálezu spolu s farmaceuticky přijatelným zřeďovadlem nebo nosičem, pro cyklosporin podle vynálezu ve formě nebo v pomůcce nebo v zařízení, které umožňuje nebo usnadňuje topickou aplikaci.

Farmaceuticky přijatelná zřeďovadla nebo nosiče, které jsou uvedeny v bodě D výše, jsou zřeďovadla nebo nosiče přijatelné pro topickou aplikaci v zamýšleném místě terapie, například zřeďovadla nebo nosiče přijatelné pro topickou aplikaci pulmonámí, dermální, nasální, oční a rektální. Formy pro topickou aplikaci, které například topickou aplikaci umožňují nebo usnadňují, zahrnují například suché práškové přípravky aktivní složky /tj. cyklosporinu podle vynálezu/ v podstatě v čisté formě, například tak, jak jsou používány v praxi pro dávkování ze zařízení pro inhalaci suchého prášku. Pomůcky nebo zařízení, která umožňují nebo usnadňují topickou aplikaci, zahrnují především inhalační zařízení a zásobníky apod., ze kterých se aktivní složky uvolňuje v takové formě, která je vhodná pro topickou aplikaci. Výhodná provedení, která jsou definována v bodě C, jsou taková, která umožňují topickou aplikaci do dýchacích cest a plic, například inhalací.

Dávkování cyklosporinů podle vynálezu, které se používá při realizaci metody podle tohoto vynálezu, závisí pochopitelně na místě aplikace, na závažnosti stavu, který má být léčen, na jeho zvláštnostech, na pacientovi, který má být léčen /například na hodnotách tělesné hmotnosti, věku apod./ a právě tak na požadovaném účinku. Obecně pro léčení chorob nebo stavů dýchacích cest nebo plic, například pro použití při léčení zánětlivé nebo obstrukční nemoci dýchacích cest, například astmatu, se cyklosporiny podle vynálezu účelně aplikují topicky do dýchacích cest nebo plic, například inhalací, v dávkách řádově od 20 do 400 mg denně, například od 50 nebo 100 do 300 mg, například od 200 do 300 mg denně. Dávky se účelně aplikují z odměřovacího dávkovacího systému v sérii od 1 do 5 střiků při každé aplikaci, přičemž se aplikace uskutečňuje lx až 4x denně. Velikost dávkování při každé aplikaci je tedy obvykle řádově asi od 5 do 100 mg, výhodněji od 12,5 nebo 25 do 100 mg, například aplikace pomocí odměřovacího dávkovacího zařízení, které je například schopno uvolnit například 1 až 25 mg cyklosporinu při jednom stisknutí.

Při léčení očních nebo nosních chorob se cyklosporiny podle vynálezu obecně aplikují v podobě vhodné kompozice, například očních kapek, gelu, kolyria apod. nebo nosních kapek nebo spreje apod., které obsahují asi od 0,05 až asi do 10 % hmotn., zejména asi od 0,05 až asi do 5 % hmotn., vhodněji asi od 0,1 až asi do 2,5 % hmotn. cyklosporinu, ve zřeďovadle nebo nosiči, který lze aplikovat do očí nebo do nosu, na povrch oka nebo nosní dutiny v množství asi od 0,05 až asi do 0,2 ml kompozice, například asi od 0,05 až asi do 0,1 ml kompozice, jednou nebo dvakrát až třikrát denně.

Při léčení chorob nebo stavů tlustého střeva jsou obecně vhodné denní dávky cyklosporinů podle vynálezu řádově asi od 0,5 až asi do 15,0, s výhodou asi od 2,5 až asi do 10,0 mg/kg, účelně aplikované jako klyzma při zácpě, a to jednou nebo v dělených dávkách dvakrát denně. Každá dávka tedy obsahuje účelně asi od 17,5 až asi do 1,000, s výhodou asi od 35 až asi do 700, výhodněji asi od 87,5 až asi do 550 mg cyklosporinu podle vynálezu, spolu s vhodným, rektálně

-16CZ 285421 B6 aplikovatelným zřeďovadlem nebo nosičem. Vhodné koncentrace cyklosporinů pro použití v takovém systému klyzmatu činí řádově asi od 0,5 až asi do 12,0, s výhodou asi od 1,0 až asi do

10,0, výhodněji asi od 2,0 až asi do 7,0 mg/ml.

Pro dermální aplikaci pro léčení kožních chorob nebo stavů se cyklosporiny podle vynálezu obecně aplikují ve vhodných, tj. dermálně aplikovatelných formách, které obsahují asi 1 až 10 % hmotn. cyklosporinů spolu s dermálně přijatelným zřeďovadlem nebo nosičem. Takové kompozice se účelně aplikují na léčené místo v množství asi od 0,005 až asi do 0,05 g/cm², a to lx, 2x nebo 3x denně.

Výhodným cyklosporinem podle tohoto vynálezu je produkt z příkladu 1, jmenovitě [/8methoxykarbonyloxy/MeBmt]’-Ciklosporin. Specifické výsledky získané s tímto cyklosporinem v jedné sérii testů, provedených podle metod popsaných v odstavcích 1.1 až 1.3 a 2 výše, jsou tato:

Test	Výsledky
1.1	IC50 = 0,0015 pg/ml
1.2	IC50 = 0,043 pg/ml
2. inhalačně	ID50 = asi 4 mg/kg
2. perorálně	žádná inhibice hromadění eosinofilů v dávce 100 mg/kg/den, v oleji 3x nebo v dávce 320 mg/kg v methylcelulóze lx

Průmyslová využitelnost

Cyklosporiny připravované způsobem podle tohoto vynálezu jsou použitelné při léčení chorob nebo stavů dýchacích cest nebo plic, zejména astmatu jakéhokoliv druhu, dále při léčení chorob nebo stavů kůže a při mnoha dalších chorobách, které vyžadují protizánětlivou nebo imunosupresivní terapii. Cyklosporiny podle vynálezu se aplikují topicky, a to buď přímo, nebo v podobě vhodné farmaceutické kompozice, spolu s přijatelným zřeďovadlem nebo nosičem.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Cyklosporin, který má v poloze 1 skupinu obecného vzorce I /1/, ve kterém

R znamená atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkoxylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku; atomem halogenu substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkoxylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu s 1 až 3 atomy uhlíku; hydroxylem substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkoxylovou skupinu se 2 až 3 atomy uhlíku nebo alkylthioskupinu se 2 až 3 atomy uhlíku; nebo aminovou nebo monoalkylaminovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku nebo dialkylaminovou skupinu s 1 až 2 atomy uhlíku v alkylovém zbytku,

X znamená atom kyslíku nebo síry a skupina

-x-y znamená skupinu /trans/-CH=CH- nebo skupinu -CHt-CH?-.

-18CZ 285421 B6
2. Cyklosporin podle nároku 1 obecného vzorce II |—A-B-Sar-«eLeu-Val-ííeLeu-Ala-Q-MeLeu-MeLeu-MeVal— /11/, ve kterém

A znamená skupinu obecného vzorce I, jak je uvedena v nároku 1, ve které substituenty R, X a skupina -x-y- mají významy uvedené v nároku 1,

B znamená skupinu -alfaAbu-, -Val-, -Thr— nebo -Nva— a

Q znamená skupinu -(D)Ala-, -<D)Ser- nebo -[O-(2-hydroxyethyl)(D)Ser]-, nebo skupinu -[O-acyl(D)Ser]-, nebo skupinu -[O-(2-acyloxyethyl)(D)Ser]-, ve kterém je acylový zbytek fyziologicky hydrolyzovatelná a přijatelná acylová skupina, kterou je benzoylová nebo salicylová skupina nebo skupina obecného vzorce R'-CX', kde R' má význam definovaný v nároku 1 pro R, vyjímaje však aminoskupinu a mono- a dialkylaminoskupiny s 1 až 2 atomy uhlíku v každé alkylové části a X' znamená atom kyslíku nebo síry.
3. Cyklosporin podle nároku 2, ve kterém R znamená methoxylovou skupinu, X znamená atom kyslíku, skupina -x-y- znamená skupinu /trans/-CH=CH-, B znamená skupinu -alfaAbu- a Q znamená skupinu -/D/Ala-
4. Cyklosporin podle nároku 2, ve kterém X značí atom kyslíku, skupina -x-y- znamená skupinu /trans/-CH=CH-, B znamená skupinu -alfaAbu- a Q znamená skupinu -/D/Ala-; a R znamená atom vodíku, methylovou skupinu, ethylovou skupinu, ethoxylovou nebo trifluormethylovou skupinu, dimethylaminovou skupinu, hydroxymethylovou skupinu, skupinu /S/alfahydroxyethylovou nebo skupinu /R/-alfa-hydroxyethylovou;

nebo kde

X znamená atom kyslíku, skupina -x-y- znamená skupinu -CH2-CH2-, B znamená skupinu -alfaAbu-, Q znamená skupinu -/D/Ala a R znamená methylovou skupinu;

nebo kde

X znamená atom kyslíku, skupina -x-y- znamená skupinu /trans/-CH=CH-, B znamená skupinu -alfaAbu-, Q znamená skupinu obecného vzorce lila

O

II CH2-O-C-R' I

-NH-CH-CO/D/ /lila/, přičemž jak substituent R v obecném vzorci I, tak i substituent R' v obecném vzorci lila znamenají buď oba methylové, nebo oba methoxylové skupiny.

-19CZ 285421 B6
5. Způsob výroby cyklosporinu definovaného v nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že a/ při výrobě cyklosporinu definovaného v nároku 1, který má volnou hydroxylovou skupinu, odstraňuje chránící skupina z jeho hydroxylové skupiny; nebo b/ při výrobě cyklosporinu definovaného v nároku 1, uvádí do reakce cyklosporin, ve kterém skupina v poloze 1 znamená skupinu obecného vzorce IV

H° CH /3/ /R/^CH^

1 ⁵

-N-----CH·-----co| /5/

CH₃ /IV/, ve kterém skupina -x-y- má význam, který je uveden v nároku 1, se sloučeninou obecného vzorce V

X

II

R-C-Z /V/, ve kterém substituent Z znamená odstranitelný atom nebo skupinu a substituenty R a X mají stejný význam, který je uveden v nároku 1, přičemž v případě, že hydroxylovou skupinou substituovaná alkylová skupina s 1 až 3 atomy uhlíku, alkoxylová skupina s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkylthioskupina s 1 až 3 atomy uhlíku ve významu R má chráněnou hydroxylovou skupinu, provádí se návazně postup podle stupně a/; nebo c/ při výrobě cyklosporinu obecného vzorce II, definovaného v nároku 2, ve kterém substituent Q znamená skupinu -[O-acyl/D/Ser]- nebo [O-/2-acyloxyethyl//D/Ser]-, ve které je acylová skupina fyziologicky hydrolyzovatelná a přijatelná, acyluje cyklosporin obecného vzorce II, definovaný v nároku 2, kde substituent Q znamená skupinu -[/D/SerJ- nebo -[O-/2hydroxyethyl//D/Ser]-, vhodným acylačním činidlem a takto získaný cyklosporin se izoluje.
6. Cyklosporin podle některého z nároků 1 až 4, pro použití jako farmaceutikum.
7. Cyklosporin podle některého z nároků 1 až 4, pro použití jako imunosupresivní a protizánětlivě účinné činidlo.

-20CZ 285421 B6
8. Cyklosporin podle nároku 6 pro topické podávání do dýchacích cest nebo do plic při léčení choroby nebo stavu plic, který vyžaduje imunosupresivní nebo protizánětlivou terapii.
9. Cyklospirin podle nároku 6 pro topické podávání do dýchacích cest nebo do plic při léčení 5 astmatu.
10. Farmaceutická kompozice pro topické podávání, vyznačující se tím, že obsahuje cyklosporin podle některého z nároků 1 až 9, popřípadě spolu s farmaceuticky přijatelným zřeďovadlem nebo nosičem.