CZ278063B6 - Peptide derivatives, process of their preparation and use - Google Patents

Description

Oblast techniky

Vynález se týká určitých peptidických derivátů substituovaných zbytkem trifluormethylketonu. Tyto látky působí jako inhibitory elastasy leukocytů člověka a jsou tedy užitečné všude tam, kde je takováto inhibice žádána, jako jsou nástroje a zařízení při farmakologických, diagnostických a podobných činnostech, a při léčbě degenerativních chorob tkáně, jako je rozedma plic, atherosklerosa, rheumatoidní arthritida a osteoarthritida u teplokrevných živočichu. Vynález také popisuje způsob výroby shora zmíněných, peptidických derivátů a farmaceutické prostředky obsahující tyto peptidické deriváty jako účinné látky.

Podstata vynálezu

Vynález popisuje substituované peptidické deriváty, které je možno popsat obecnými vzorci la, lb a Ic

CO-NH-CH-COCF,

A ³

^(CH2’n (Ila)

^(CH2>n (lib)

\

Λ

Ν

(líc) v nichž n-L má. hodnotu 1,

R představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

A znamená zbytek -NH.CO-, -O.CO- nebo -CO-,

R* představuje fenylovou skupinu, benzylovou skupinu nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou benzyloxykarbonylovou skupinou, benzyloxykarbonylaminoskupinou, fenylsulfonylaminoskupinou nebo (fenylsulfonylamino)karbonylovou skupinou,

R⁴ a, R⁶ znamenají, atomy vodíku,

R⁵ představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou benzyloxykarbonylovou skupinou nebo benzyloxykarbonylaminoskupinou a

R znamena (1) alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou alkoxykarbonylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, alkoxykarbonylaminoskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, karboxylovou skupinou, 2-(alkoxy)ethoxyskupinou obsahující v alkoxylové části 1 až 4 atomy uhlíku, adamantylovou skupinou, morfolinylovou skupinou, pyridylovou skupinou, thienylovou skupinou, oxopyrrolidinylovou skupinou, fenylovou skupinou, alkoxykarbonylfenylovou skupinou s 1 až atomy uhlíku v alkoxylové části, karboxyfenylovou skupinou, fenoxyskupinou, alkoxykarbonylfenoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, karbamoylfenoxyskupinou, (karbamoylmethyl)fenoxyskupinou, benzylaminokarbonylovou r skupinou, benzensulfonylaminoskupinou, (methansulfonylamino)karbonylovou skupinou, (benzensulfonylamino)karbonylovou skupinou, (naftalensulfonylamino)karbonylovou skupinou, » (adamantansulfonylamino)karbonylovou skupinou nebo (chlorbenzensulfonylaminokarbonyl)fenylovou skupinou, (2) naftylovou skupinu, aminochlorfenylovou skupinu nebo fenylovou skupinu popřípadě substituovanou hydroxylovou skupinou, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxykarbonylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, karboxylovou skupinou, jedním nebo dvěma atomy halogenu, (methansulfonylamino)karbonylovou skupinou, (naftalensulfonylamino)karbonylovou skupinou nebo [N-benzyl-(4-brombenzensulfonyl)amino]karbonylovou skupinou,

I : ;

(3) zbytek vzorce W.SO₂.NH.CO.fenyl-, kde W znamená fenylovou skupinu, popřípadě substituovanou halogenem nebo nitroskupinou, (4) zbytek vzorce Y.CO.NH.(CH₂)_m~, kde m je celé číslo o hodnotě až 5 a Y představuje fenylovou skupinu, difenylmethylovou skupinu, fenoxymethylovou skupinu, benzyloxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, (alkoxykarbonyl)fenylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, 2-pyridylethoxy· skupinu nebo karboxyfenylaminoskupinu, (5) cyklopentylovou skupinu nebo undecylovou skupinu, která je popřípadě substituovaná alkoxykarbonylovou skupinou s 1 až atomy uhlíku v alkoxylové části, nebo karboxylovou skupinou, (6) 2-fenylvinylovou skupinu popřípadě substituovanou na fenylovém kruhu alkoxykarbonylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, karboxylovou skupinou nebo (chlorbenzensulfonylamino)karbonylovou skupinou, nebo (7) 2-(ureidokarbonyl)vinylovou, di(benzyloxymethyl)methylovou skupinu nebo di(2-fenoxyethyl)methylovou skupinu, a jejich farmaceuticky upotřebitelné soli. Výhodné jsou ty sloučeniny podle vynálezu, v nichž R^{1 (II)} představuje alkylovou skupinu se 3 atomy uhlíku.

Mezi zvlášť vhodné sloučeniny podle vynálezu náležejí sloučeniny shora uvedených obecných vzorců, v nichž

R¹ znamená isopropylovou skupinu,

R² představuje zbytek vybraný ze skupiny zahrnující (I) alkylové skupiny se 2 až 3 atomy uhlíku, (II) (q) ethylovou skupinu substituovanou aralkoxykarbonylo- vou skupinou, v níž aralkoxylová část obsahuje 7 atomů uhlíku, (w) butylovou skupinu substituovanou arylsulfonamidoskupinou, kde arylová část obsahuje 6 atomů uhlíku, (x) ethylovou skupinu substituovanou acylsulfonamidoskupinou se 7 atomy uhlíku (například 2-(fenylsulf onylaminokarbonyl) ethylovou skupinu), (z) butylovou skupinu substituovanou aralkyloxykarbonylaminoskupinou, v níž aralkoxylová část obsahuje 7 atomů uhlíku (například benzyloxykarbonylaminoskupinou), (cc) methylovou,,skupinu substituovanou arylovou skupinou se 6 atomy uhlíku a (III) arylovou skupinu obsahující 6 atomů uhlíku, o

R představuje zbytek vybraný ze skupiny zahrnující (I) rozvětvenou alkylovou skupinu se 4 atomy uhlíku, (II) alkylovou skupinu obsahující 5 atomů uhlíku a 2 kyslíky, (III) (k) ethylovou skupinu substituovanou arylkarbonylaminoskupinou obsahující v arylové části 6 atomů uhlíku, (1) ethylovou skupinu substituovanou aralkylkarbonylaminoskupinou obsahující v aralkylové části 13 atomů uhlíku, (n) ethylovou skupinu substituovanou aralkylaminokarbonylovou skupinou, v níž alkylová část obsahuje 7 atomů uhlíku, (o) alkylovou skupinu se 2 až 10 atomy uhlíku substituovanou karboxylovou skupinou, (w) alkylovou skupinu s 5 atomy uhlíku substituovanou arylsulfonamidoskupinou, jejíž arylová část obsahuje 6 atomů uhlíku, (x) ethylovou skupinu substituovanou acylsulfonamidovým zbytkem, vybranou ze skupiny zahrnující 2-(methylsulfonylaminokarbonyl)ethylovou skupinu, 2-(fenylsulfonylaminokarbonyl)ethylovou skupinu,

2-/(1-adamantyl)sulfonylaminokarbonyl/ethylovou skupinu a 2-/(l-naftyl)sulfonylaminokarbonyl/ethylovou skupinu, (y) alkylovou skupinu obsahujíc! 2 až 10 atomů uhlíku a substituovanou methoxykarbonylovou skupinou, (z) alkylovou skupinu obsahující 2 až 5 atomů uhlíku a substituovanou aralkoxykarbonylovým zbytkem se 7 atomy uhlíku v aralkoxylové části, (bb) ethylovou skupinu substituovanou alkoxykarbony1aminoskupinou, v níž alkylová část obsahuje 4 atomy uhlíku, a alkylovou skupinu obsahující 5 atomů uhlíku a substituovanou alkyloxykarbonylaminoskupinou, v níž alkoxylová část obsahuje 2 atomy uhlíku a je na koncovém uhlíkovém atomu navázána přímou vazbou na uhlíkový atom heterocyklického zbytku obsahujícího 5 atomů uhlíku a 1 atom dusíku, (bb)-(3) propylovou skupinu substituovanou aryloxyalkyi· karbonylaminoskupinou, v níž arylová část obsahuje 6 atomů uhlíku a alkylovou částí je methylová skupina, (cc) methylovou nebo butylovou skupinu substituovanou arylovým zbytkem obsahujícím 6 atomů uhlíku, a rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující 5 atomů uhlíku a substituovanou dvěma arylovými skupinami, z nichž každá obsahuje 6 atomů uhlíku, (dd) zbytek vybraný ze skupiny zahrnující alkylové skupiny s 1 nebo 2 atomy uhlíku, substituované arylovým zbytkem obsahujícím 6 atomů uhlíku, přičemž tento arylový zbytek j e substituován karboxylovou skupinou, methylovou skupinu substituovanou arylovým zbytkem se 6 atomy uhlíku, který je substituován methoxykarbonylovou skupinou, ethylovou skupinu substituovanou arylovým zbytkem se 6 atomy uhlíku, který je substituován ethoxykarbonylovou skupinou, a ethylovou skupinu substituovanou arylovým zbytkem se 6 atomy uhlíku, který je substituován acylsulfonamidoskupinou se 7 atomy uhlíku, (ee) ethylovou skupinu substituovanou cykloalkylovým zbytkem s 10 atomy uhlíku (například 1-adamantyl ethylovou skupinu), (ff) ethylovou skupinu substituovanou alifatickým heterocyklickým zbytkem obsahujícím 4 atomy uhlíku, 1 atom dusíku a 1 atom kyslíku /například 2-(4-morfolinyl)ethylovou skupinu/, (gg) alkylovou skupinu obsahující 1 až 2 atomy uhlíku a substituovanou aromatickým heterocyklickým zbytkem obsahujícím 4 atomy uhlíku a 1 atom síry /například (2-thiofenyl)methylovou skupinu nebo 2-(3-thiofenyl)ethylovou skupinu/ a ethylovou skupinu substituovanou aromatickým heterocyklickým zbytkem obsahujícím 5 atomů uhlíku a 1 atom dusíku, (jj)-(l) alkylovou skupinu obsahující 5 atomů uhlíku a substituovanou arylureidoskupinou, kde arylová část obsahuje 6 atomů uhlíku a je dále substituována ethoxykarbonylovou nebo karboxylovou skupinou, (zz) propylovou skupinu substituovanou aryloxylovou skupinou se 6 atomy uhlíku v arylové části, a rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující 5 atomů uhlíku a substituovanou dvěma aryloxyskupinami_} z nichž každá obsahuje 6 atomů uhlíku, (zzz) methylovou nebo propylovou skupinu substituovanou aryloxylovým zbytkem se 6 atomy uhlíku, přičemž tento aryloxylový zbytek je dále substituován aminokarbonylovou skupinou, a methylovou skupinu substituovanou aryloxyskupinou se 6 atomy uhlíku, přičemž tato aryloxyskupina je dále substituována ethoxykarbonylovou skupinou, (IV) fenylovou nebo naftylovou skupinu, (V) arylovou skupinu se 6 atomy uhlíku, substituovanou zbytkem vybraným ze skupiny zahrnující atom fluoru, hydroxylovou skupinu, karboxyskupinu, methoxyskupinu, ethoxyskupinu, methoxykarbonylovou skupinu, ěthoxykarbonylovou skupinu, acylsulfonamidoskupinu obsahující 2 atomy uhlíku /například 4-(methylsulfonaminokarbonyl)fenylovou skupinu/, acylsulfonamidoskupinu se 7 atomy uhlíku /například 4-(fenylsulfonylaminokarbonyl)fenylovou , 4-/(4-chlorfenyl)sulfonylaminokarbonyl/fenylovou nebo /(4-bromfenyl)sulfonylaminokarbonyl/fenylovou skupinu, acylsulfonamidoskupinu s 11 atomy uhlíku /například 4-(1-naftylsulfonylaminokarbonyl)fenylovou skupinu/, acylsulfonamidoskupinu se 14 atomy uhlíku /například 4-(4-bromfenylsulfonylamino(benzyl)karbonyl)fenylovou skupinu/, dále arylovou skupinu obsahující atomů uhlíku a substituovanou 2 atomy chloru nebo arylovou skupinu obsahující 6 atomů uhlíku a substituovanou jedním atomem chloru a jednou aminoskupinou, (VI-Xi) cykloalkylovou skupinu obsahující 5 atomů uhlíku a substituovanou karboxylovou skupinou nebo ethoxykarbonylovou skupinou a (X) alkenylovou skupinu obsahující 2 atomy uhlíku a substituovanou zbytkem vybraným ze skupiny zahrnující karboxylovou skupinu, karboxyfenylovou skupinu (například E-4-karboxyfenylovou skupinu), ethoxykarbonylovou skupinu, ureidokarbonylovou skupinu /například Z-(3-aminokarbonylamino-3-oxo-l-propenylovou skupinu/, acylsulfonamidoskupinu /například 4-/(4-chlorfenyl)sulfonylaminokarbonyl/fenylovou skupinu/ a 4-karboxyfenylovou skupinu /například E-2-(4-karboxyfenyl)ethenylovou skupinu/,

R⁵ je vybrán ze skupiny zahrnující (I) n-butylovou skupinu, (IT)-(q) ethylovou skupinu substituovanou aralkoxykarbonylovou skupinou, kde aralkoxylová část obsahuje 7'atomů uhlíku a (II) -(z) butylovou skupinu substituovanou aralkyloxykarbonylaminoskupinou, v níž aralkylová část obsahuje 7 atomů uhlíku.

Pro sloučeniny podle vynálezu platí následující omezení:

(1) alkylové skupiny mohou mít přímý nebo rozvětvený řetězec.

(2) žádný uhlíkový atom alkylového zbytku nemůže být přímo navázán na dva heteroatomy.

(3) žádný heteroatom nemůže být přímo navázán na atom síry, dusíku nebo kyslíku a (4) alkenylové skupiny v odstavci X ve významu symbolu R³ nesmějí být 1,1-disubstituované a uhlíkový atom, z něhož vychází dvojná vazba, nesmí být přímo navázán na kyslík nebo dusík.

Mezi soli sloučenin obecných vzorců Ia, Ib a Ic náležejí farmaceuticky upotřebitelné adičhí soli s bázemi nebo kyselinami, jako adiční soli s minerálními kyselinami, například s kyselinou chlorovodíkovou nebo s organickými kyselinami, například s kyselinou citrónovou, maleinovou, fumerovou nebo octovou. Adiční soli s bázemi zahrnují soli získané působením hydroxidů alkalických kovů, jako hydroxidu sodného, uhličitanů a hydrogenuhličitanů alkalických kovů, hydroxidů kovů alkalických zemin a soli s organickými aminy. Tyto soli je možno vyrobit rozpuštěním peptidického derivátu ve směsi vody a organického rozpouštědla mísitelného s vodou, přidáním vodného roztoku báze a izolací soli z vodného roztoku.

Výhodné sloučeniny podle vynálezu mají konfiguraci S (tj. konfiguraci, jaká se vyskytuje v přírodních L-aminokyselinách) na chirálních centrech označených v níže uvedených obecných vzorcích Ha, lib a líc hvězdičkou (x). Syntetickými metodami popsanými níže v metodách A a B vzniká směs diastereomerů jako důsledek přítomnosti produktů jak s R, tak s S konfigurací na chirálním centru označeném symbolem Δ . Separačními a syntetickými metodami popsanými níže v metodách C a D se získávají sloučeniny, které jsou v podstatě enantiomerně a diastereomerně čisté. Výhodné jsou sloučeniny s konfigurací S na centru označeném symbolem Δ .

I

R -A CO-NH-CH-COCF, \ / Δ ^J

N “V

(Ha)

Ί

CS 278063 Β6ί

(lib)

ČZT 278063 B6

Je pochopitelné, že jednotlivé isomery nemají stejnou účinnost, a že je tedy výhodné použití účinnějšího isomeru. Vynález zahrnuje jak diastereomerní směs, tak i aktivní S’ a R isomery.

Je zřejmé, že trifluormethylketony mohou existovat jako solváty, zejména hydráty, odpovídající níže uvedeným obecným vzorcům lila, Illb a IIIc. I tyto formy spadají do rozsahu vynálezu.

(IIIc)

Peptidické deriváty obecných vzorců la, lb a Ic se s výhodou připravují z komerčně dostupných α-aminokyselin (tj. z těch, v nichž je skupina NH₂ navázána na uhlíkový atom sousedící se skupinou - COOH). Vzhledem k tomu jsou výhodnými zbytky ve významu symbolů R² a R⁵ ve shora uvedených vzorcích tria tetra- peptidických derivátů zbytky odvozené od některé z následujících aminokyselin: alaninu, valinu, norvalinu, leucinu, isoleucinu, norleucinu, fenylalaninu, tryptofanu, tyrosinu, asparaginu, glutaminu, kyseliny asparagové, kyseliny glutamové, lysinu, threoninu, šeřinu, α-aminomáselné kyseliny a fenylglycinu.

Do výhodné skupiny sloučeniny podle vynálezu náležejí látky · uvedené v hlavních názvech příkladů č. 6, 11, 15 až 18, 20 až 28, 51 až 56, 58, 59, 62, 63, 65, 68, 71, 72, 74, 75, 77 až 79, 84 až 90, 93 až 108, 110, 111, 114, 115, 117, 119, 121 až 126. Z těchto látek potom jsou ještě výhodnější sloučeniny uvedené v názvech příkladů Č. 16, 24, 27, 52, 58, 71, 74, 77 až 79, 85, 89, 93 až 96, 98, 100, 104 až 107, 110, 114, 115, 119 a 123 až 125, a nejvýhodnější jsou sloučeniny uvedené’v názvech příkladů č. 77, 95, 104, 114 a 115.

Vynález také popisuje farmaceutické prostředky obsahující farmaceuticky účinné množství alespoň jednoho peptidického derivátu obecného vzorce la, lb nebo Ic a farmaceuticky upotřebitelné ředidlo nebo nosič.

Sloučeniny obecných vzorců la, lb a Ic lze připravit následovně.

Metoda A

Stupeň 1

Tento reakční stupeň spočívá v přípravě aminoalkoholu obecného vzorce V

R¹ OH h₂n-ch-ch-cf₃ (V)

2 1 který se účelně izoluje jako hydrochlorid.

Henryho kondensací [E. T. McBee a spol., J. Amer. Chem. Soc., 78, 4053 (1956)] příslušného nitroalkanu obecného vzorce r¹ch₂no₂ (připraveného standardními metodami, pokud není dostupný jinak) s ethyl-hemiacetalem trifluoracetaldehydu vzorce cf₃ch(oh)och₂ch₃ se získá nitroalkohol odpovídající obecnému vzorci VI

R¹ OH

I I o₂n-ch-ch-cf₃

2 1(VI) který rezultuje ve formě směsi dvou racemických diastereomerů /[2(RS),3(RS)] a [2(RS),3(SR)]/ (viz například příklad lb). Redukcí nitroskupiny ve sloučenině obecného vzorce VI za použití příslušného redukčního činidla se získá sloučenina obecného vzorce V ve formě směsi dvou racemických diastereomerů /[2(RS),~ 3(RS)] a [2(RS),3(SR)]/ (viz například příklad lc). Tato sůl aminu se přímo používá k další syntéze.

Stupeň 2

Tento reakční stupeň spočívá v konversi sloučeniny obecného vzorce V na klíčové meziprodukty obecných vzorců IVa, IVb a IVc

R¹ OH

(IVa)

CO-HH-CH-CH-C?^

R¹ OH· (IVb) >CZ 278063 B6 •*4

(IVc)

Tato konverse se provádí za použití metod v daném oboru obecně známých, jako jsou například metody popsané v publikacích M. Bodanszky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlín (1984) a The Peptides. Analysis, Synthesis and Biology (ed. E. Gross, J. Meienhofer), sv. 1 až 5 (Academie Press, New York) 1979 až 1983. Při použití cyklických aminokyselin vhodné chráněných na dusíku (jako CBZ-prolinu) se kondenzačními postupy používanými v chemii peptidú a následujícím odstraněním chránící skupiny aminové funkce získají sloučeniny obecného vzorce IVa. Obdobnou kondenzací s na dusíku chráněnými dipeptidickými kyselinami a tripeptidickými kyselinami, a následujícím odstraněním chránících skupin se získají sloučeniny obecného vzorce IVb respektive IVc. Kromě toho je možno sloučeniny obecného vzorce IVa za použití stejných metod známých v chemii peptidů převést na sloučeniny obecného vzorce IVb nebo IVc. Pokud se neprovede příslušná separace, popsaných postupech jako produkty a [2(RS),3(SR)]/.

získávají se při shora směsi isomerů /[2(RS),3(RS)]

Stupeň 3

Tento reakční stupeň spočívá obecných vzorců IVa, IVb nebo IVc Vila, Vllb a Vile v konversi meziproduktů na meziprodukty obecných vzorců

R¹ OH

CO-NH-CH-CH-CF₃

2 1 (Vila)

R¹ OH

C0-i'TH-ČH-CH-CP₃

2 1 (Vllb)

R¹ OH

I I

CO-NH-CH-CH-C?₃

2 1 (Vile)

Tato konverse se provádí reakcí meziproduktů obecných vzorců IVa, IVb a IVc s činidly vhodnými pro přípravu amidů, derivátů· močovin, urethanů a sulfonamidů, jako jsou například chloridy kyselin, anhydridy a smíšené anhydridy, isokyanáty, karbonáty, jako 4-nitrofenylkarbonát [přípravu popsali H. Kunz a spol., Angew. Chem. Int. Ed. (Eng), 22., 783 až 784 (1983)], chlorformiáty, sulfonylchloridy a sulfinylchloridy, a následující oxidací prováděnou metodami známými, z literatury. Pokud se neprovádí separace rezultují výsledné produkty jako směsi isomerů /[2(RS),3(SR)] a [ 2 (RS), 3 (RS^_) ]/.

Je pochopitelné, že pořadí reakčních stupňů 2 a 3 je možno změnit, přičemž je ovšem třeba mít na zřeteli a uvážit všechny okolnosti týkající se metod kondenzace, racemizace, způsobů odštěpování chránících skupin a podobně. Tak za vhodných podmínek lze meziprodukty obecného vzorce Vila také připravit přímo ze sloučenin obecného vzorce V, meziprodukty obecného vzorce Vllb lze také připravit přímo ze sloučenin obecného vzorce V nebo IVa a meziprodukty obecného vzorce Vile lze také připravit přímo ze sloučenin obecného vzorce V, IVa nebo IVb.

Stupeň 4

Tento reakční stupeň spočívá v oxidaci meziproduktů obecného vzorce Vila, Vllb nebo Vile na produkty obecného vzorce la, Ib respektive lc. Mezi vhodné oxidační metody náleží použití oxalylchloridu, dimethylsulfoxidu a terciárního aminu [viz M. Marx a spol., J. Org. Chem., 49, 788 až 793 (1984), přičemž nejlepších výsledku se dosahuje při použití 10 až 20 ekvivalentů oxidačního činidla], použití acetanhydridu a dimethylsulfoxidu, použití komplexu oxid chromový - pyridin v methylenchloridu a použití Dess-Martinova perjodinanu [1,1,l-triacetoxy-2,1-benzoxiodol-3(3H)-onu] [metoda viz D. B. Dess a spol., J. Org. Chem., 48., 4155 až 4156 (1983)]. Výhodné je použití Dess-Martinova perjodinanu. Pokud není do postupu zařazen separační stupeň, získávají se touto metodou produkty obecných vzorců Ia, Ib a Ic jako směs [3(RS)] sestávající v podstatě ze dvou diastereomerů, pokud centra odpovídající centrům označeným v obecných vzorcích Ha, lib a líc hvězdičkou (x) jsou v podstatě enantiomerně čistá.

Stupeň 5

Tento reakční stupeň spočívá v konversi produktů obecného vzorce Ia, Ib nebo Ic na jiné produkty obecného vzorce Ia, Ib a Ic, a zahrnuje zmýdelňovací a kondenzační reakce, a odstraňování chránících skupin. Stereochemie směsi produktů je stejná jako ve stupni 4.

Metoda B

Tato metoda je vzhledem k metodě A výhodná.

Stupeň 1

Tento reakční stupeň sestává ze separace směsi racemických diastereomerů vzorce VI, rezultující jako produkt ve stupni 1 metody A, frakční destilací a krystalizací, při níž se získává nitroalkohol obecného vzorae VI jako prakticky čistý racemický diastereomer [2(RS),3(SR)], v podstatě prostý dalšího racemického diastereomerů [2(RS),3(RS)]. Redukcí nitroskupiny, která se výhodně provádí hydrogenací v přítomnosti 10% paladia na uhlí jako katalyzátoru, se získá sloučenina obecného vzorce V. jako jediný racemický diastereomer [2(RS),3(SR)] prakticky prostý jiného racemického diastereomerů. Je ovšem pochopitelné, že k výrobě sloučenin podle vynálezu je možno také použít alternativně i diastereomer [2(RS),3(RS)].

Stupeň 2

Tento reakční stupeň se provádí stejně jako odpovídající stupeň u metody A, používá se však při něm amin vzorce V, připravený postupem podle stupně 1 metody B. Jako produkty se tímto způsobem získávají v podstatě čisté směsi [2(RS),3(SR)].

Stupeň 3

Tento reakční stupeň odpovídá, stupni 3 u metody A, používá se však při něm produktu připraveného ve stupni 2 metody B. Produkty získanými touto metodou jsou v podstatě čisté směsi [2(RS),3(SR)].

Stejně jako u metody A je možno i v tomto případě za příslušných podmínek pořadí stupňů 2 a 3 obrátit.

Stupeň 4

Tento reakční stupeň odpovídá stupni 4 u metody A. Získává se stejná směs produktů jako ve stupni 4 u metody A.

Stupeň 5

Tento reakční stupeň odpovídá stupni 5 u metody A.

Metoda C

Tato metoda spočívá v přímé syntéze individuálních (rozštěpených) isomerů obecných vzorců Ia, Ib a Ic, které jsou prakticky prosty jiných diastereomerů, například v syntéze produktů, odpovídajících obecným vzorcům Ha, lib a líc, v nichž mají všechna centra označená x a A konfigurace S.

Stupeň 1

Tento reakční stupeň spočívá v rozštěpení racemátu obecného vzorce V, připraveného podle stupně 1 metody B. Po uvolnění volné báze odpovídající obecnému vzorci V se provede rozštěpení tak, že se připraví diastereomerní soli s kyselinou D-vinnou, které se potom rozdělí frakční krystalizací. Z oddělených solí se potom uvolní žádaný amin, čímž se získá například volná báze odpovídající isomeru 2(R)3(S) sloučeniny obecného vzorce V.

Takto získaný produkt je enantiomerně a diastereomerně v podstatě čistý.

Stupně 2 a 3

Tyto reakční stupně v podstatě odpovídají stupňům 2 a 3 u metod A a B, jsou však omezeny pouze na takové metody, při nichž nedochází k racemizaci na centrech označených v obecných vzorcích Ila, lib a líc hvězdičkou x. Takto získané produkty jsou enantiomerně a diastereomerně v podstatě čisté.

Stupeň 4

Tento stupeň je omezen na metody, při nichž nedochází k racemizaci na centrech označených v obecných vzorcích Ila, lib a líc symboly x a A . S výhodou se používá Dess-Martinova perjodinanu. Takto získané produkty obecných vzorců Ia, Ib a Ic jsou enantiomerně a diastereomerně prakticky čisté.

Stupeň 5 to

Tento reakční stupeň je omezen na použití metod, které nevedou k racemizaci na centrech označených v obecných vzorcích Ila, lib a líc symboly x a Δ .

Metoda D

Stupeň 1

Tento reakční stupeň spočívá v separaci sloučenin obecných vzorců Ia, Ib a Ic, připravených metodami A nebo B a rezultují cích ve formě diastereomerních směsí [v důsledku centra 3(RS)J na individuální isomery, které jsou diastereomerně a enantiomerně v podstatě čisté. Výhodná metoda pro uskutečnění této separace spočívá v použití preparativní chromatografie, například kapalinové chromatografie za středně vysokého tlaku a kapalinové chromatografie s vysokou rozlišovací schopností.

Stupeň 2 ·

Tento reakční stupeň odpovídá stupni 5 u metody C.

Měření inhibiční účinnosti

Schopnost sloučenin podle vynálezu působit jako inhibitory elastasy se primárně stanovuje zjišťováním schopnosti sloučeniny podle vynálezu inhibovat působení elastasy lidských leukocytů na peptidický substrát o nízké molekulové hmotnosti. Účinnost inhibitoru se hodnotí kinetickým stanovením disociační konstanty Κ_χ komplexu vzniklého' interakcí inhibitoru s elastasou lidských leukocytů. Jako substrát se používá anilid-methoxysukcinyl-alanyl-alanyl-prolyl-valin-p-nitroanilid, jak popsali K. Nakajima a spol., J. Biol. Chem., 254, 4027 až 4032 (1979) a T. Teshima a spol., J. Biol. Chem., 257, č. 9, 5085 až 5091 (1982). Enzym elastasu lidských leukocytů, používaný při těchto studiích, je možno získat od firmy Elastin Products ze St. Louis, Missouri nebo jej lze vyčistit níže popsaným postupem, který publikovali B. R. Viscarello a spol. v Preparative Biochemistry, sv. 13, str. 57 až 67 (1983). Všechny níže popsané práce se provádějí v chladné komoře při teplotě 4 ’C.

Extrakce solným roztokem a působení DN-asy:

Výchozí materiál, jímž je 193 g hnisavého sputa, se homogenisuje ve 200 ml studené destilované vody a homogenisát se při teplotě 4 ‘C 20 minut odstředuje při 30 000 x g. Supernatant se odloží, a peleta se extrahuje silně koncentrovaným solným roztokem a působí se na ni DN-asou podle metody, kterou popsali D. Y. Twumasi a spol. v J. Biol. Chem., 252, 1917 až 1926 (1977).

Chromatografie na agarose (Elastin):

Sraženina z výluhu DN-asy se vyjme dvakrát vždy 40 ml 50 mM tris-pufru v 1,0 M chloridu sodném (pH 8), suspenze se odstředí a supernatant se přímo nanese na sloupec (2,5 x 20 cm) rozpustné elastin-Sepharosy 4B. Sloupec se vymývá ekvilibračním pufrem (50 mM tris-pufr, 50 mM NaCl, pH 8,0) tak dlouho, až optická hustota eluátu při 280 nm (OD₂₈₀) se vrátí na základní hodnotu. Směsí 50 mM aceuácu a l,0M chloridu sodného (pH 5,0) v množství odpovídajícím dvojnásobku objemu sloupce se vymyje další kontaminující protein. Směsí 50 mM acetátu, l,0M chloridu sodného a 20 % dimethylsulfoxidu (pH 5,0) se nakonec vymyje elastasa a cathepsin G (HLC-G). Sloupec se vymývá rychlostí 6 ml/min, přičemž se odebírají frakce o objemu 10 ml. Aktivní frakce se spojí, dialysují se proti dvěma šestilitrovým dávkám 50 mM acetátu a 0,lM NaCl (pH 5,5) a zahustí se na objem 40 ml na ultrafiltrační jednotce Amicon (membrána YM-10).

Chromatografie:

Zahuštěná aktivní frakce se nanese na sloupec adsorbentu CM-Sophadex C-50 (2,2 x 10 cm), předem ekvilibrovaný směsí 50 mM acetátu a O,1M NaCl (pH 5,5) a sloupec se potom tímto pufrem promyje k odstranění kontaminujícího proteinu. V eluci se potom pokračuje za použití 50 mM acetátu a 0,2M NaCl (pH 5,5), což má za následek posun maxima aktivity oproti Bz-Phe-Val-Arg pNA. Acetátovým pufrem s obsahem 0,45 mol chloridu sodného se potom vymyje elastasa lidských leukocytů (HLE), zatímco k vymytí HLC-G je nutná přítomnost 1,0 mol chloridu sodného v pufru, jak popsali R. Martodam a spol. v Preparative Biochemistry, sv. 9, str. 15 až 31 (1979). Tento sloupec se vymývá rychlostí 30 ml/h, přičemž se odebírají frakce objemu 5,5 ml. Z takto vyčištěné HLE se při teplotě 25 ^eC spektrofotometričky ve viditelném spektru při 410 nm za použití spektrofotometru Cary 210 (Varian Associates) s automatickým uváděním údajů měří standardní rychlost produkce p~nitroanilinu. Reakce se zahájí injekcí 10μ1 roztoku HLE do kyvety o objemu 3 ml, obsahující 2,89 ml pufru (10 mM fosforečnan sodný, 500 mM chlorid sodný, pH 7,6), 50μ1 dimethylsulfoxidového roztoku substrátu a 50μ1 dimethylsulfoxidu. Počáteční ustálené reakční rychlosti tvorby p-nitroanilinu byly vypočítány porovnáním experimentálních údajů s lineární závislostí, na čase, za použití metody nejmenších čtverců. Tato rychlost, zjištěná v nepřítomnosti inhibitoru, se používá jako standard při výpočtu hodnot Kf inhibitoru.

Bylo zjištěno, že všechny peptidické deriváty podle vynálezu jsou inhibitory HLE s pomalou vazbou a přesné stanovení jejich hodnot Kf pro jejich inhibiční účinnost na HLE proto vyžaduje použití speciálních analytických metod. Popis těchto metod je uveden v publikaci J. W. Williams a J. F. Morrison, Meth. Enz. 63, 437 (1979). Podle typického postupu se do kyvety o objemu 3 ml vnese 2,89 ml pufru (10 mM fosforečnan sodný, 500 mM chlorid sodný, pH 7,6), 50μ1 roztoku inhibitoru v dimethylsulfoxidu a 50μ1 roztoku substrátu v dimethylsulfoxidu. Kyveta se uzavře, k promíchání obsahu se několikrát obrátí a potom se při teplotě 25 °C vloží do spektrofotometru. Po pětiminutové tepelné ekvilibraci reakčního roztoku se reakce zahájí přidáním 10μ1 zásobního roztoku enzymu do kyvety. K pokusům se používá nulová koncentrace inhibitoru a nejméně tři nenulové koncentrace inhibitoru, přičemž každý pokus se opakuje dvakrát nebo třikrát. Hodnoty Kj_ se vypočítávají metodami popsanými ve shora citované práci Williamse a Morrisona.

Zjištěné hodnoty pro reprezentativní sloučeniny podle vynálezu jsou shrnuty do následujících tabulek 1 áž 3.

Tabulka 1

Hodnoty pro sloučeniny obecného vzorce Ia, v němž R¹ znamená isopropylovou skupinu a n má hodnotu 1

sloučenina z	A	[mol]
příkl. č.	R3	(B x : B	LO“m) m
7	2-(1-adamantyl)ethyl	O.CO	6	7
8	Ph(CH2)4	CO	8,1	8
9	PhCH2-	O.CO	1,8	6
29	ch3oc.(ch2)11-	O.CO	9	8
30	ho2c.(ch2)11-	O.CO	3,2	7
31	z.nh(ch2)4-	co	1,0	7
32	PhO(CH2)3-	co	5,7	7
33	2-(morpho1ino)ethyl	O.CO	4,6	6
34	2—(2-pyridyl)ethyl	O.CO	2,3	’ 7
35	(PhCH2OCH2)2CH-	O.CO	1,4	7
36	PhOCH2CO.NH(CH2)3-	co	4,4	7
37	ch3oco.(ch2)2-	co	1,5	6
38	t-BuO.CO.NH(CH2)2-	co	8,5	7
39	PhCO.NH(CH2)2“	co	6,0	7
40	Ph2CH.CO.NH(CH2)3-	co	1,7	7
41	ch3o.(ch2)2.o.(ch2)2-	O.CO	4,1	6
42	PhCH2NHCO(CH2)2-	co	2,2	6
43	z.nh(ch2)2-	co	2,1	7
44	z.nh(ch2)3-	co	2,1	7
45	(PhOCH2CH2)2CH- (a)	co	7,6	7
46	(PhOCH2CH2)2CH- (b)	co	2,6	8
47	(p-ethoxykarbonylfenyl)-
	-nhconh(ch2)5-	co	5,7	8
48	z.nh(ch2)5-	co	1,9	7
	(p-karboxyfenyl).NHCONH(CH2)5-	co	3,2	7
50	Ph.SO2.NH(CH2)5-	co	4,7	7

Tabu 1 k. a 2

Hodnoty pro sloučeniny obecného vzorce lb,

	v němž R1 znamená isopropylovou skupinu, R4 je atom vodíku a n má hodnotu 1
sloučenina z				Kj_' [mol]
příkl.	č. R2	R3	A	(B x B	10m m
11	i-Pr	PhCH2-	O.CO	1,6	9
12	i-Pr	2—(2-oxopyrrolidinyl)ethyl	O.CO	1,0	8
13	i-Pr	MeO2C.(CH2)2-	CO	1,3	8
14	i-Pr	ho2c.(ch2)2-	CO	1,5	7
15	i-Pr	4-EtO2C-Ph-	NH.CO	5,0	9
16	i-Pr-	4-HO2C-Ph	NH.CO	1,4	8
17	i-Pr	Ph.(CH2)3-	CO	1,2	9
18	i-Pr	2—(1-adamantyl)ethyl	O.CO	2,0	10
19	i-Pr	MeO.(CH2)2.0(CH2)2-	O.CO	2,0	8
20	i-Pr	4-MeO-Ph-	CO	3,5	9
21	Z.NH(CH2)4	PhCH2-	O.CO	9,0	10
22	PhCH2	PhCH2-	O.CO	3,1	9
51	i-Pr	1-naftyl	co	4,7	9
52	i-Pr	4-(MeSO2NHCO)fenyl	NH.CO	4,2	9
53	i-Pr	2-morfo1inoethy1	O.CO	2,3	9
54	i-Pr	12,4-Cl2-Ph-	CO	3,2	9
55	i-Pr .	Ph-	O.CO	1,5	9
56	i-Pr	2-(2-pyridyl)ethyl	O.CO	1,1	8
57	i-Pr	4-F-Ph-	NH.CO	1,1	8
58	i-Pr	4-(PhSO2NHCO)fenyl	NH.CO	3,7	9
59	i-Pr	2-(3-thienyl)ethyl	O.CO	3,4	9
60	Et	t-butyl	O.CO	1,5	8
61	Et	2-thienylmethyl	CO	1,1	8
62	Et	PhCH2-	O.CO	5,2	9
63	Et	Ph-	O.CO	5,9	9
65	z.nh(ch2)4	t-butyl	O.CO	5,8	9
66	i-Pr	2-CH2N-5-Cl-Ph-	co	3,6	8
67	Et	4-MeO-Ph-	co	1,8	8
68	Et	2-(1-adamantyl)ethyl	O.CO	9,0	10
69 PhSO2NH(CH2)4	t-butyl	O.CO	9,5	9
70	Et	4-EtO2C-Ph-	NH.CO	7,7	9
71	Et	4-HO2C-Ph-	NH.CO	1,6	8
73	Et	MeO(CH2)2O(CH2)2-	O.CO	4,1	8

sloučenina z [mol]

příkl. č. R2	R3	A	(Β x B	10m m
74	i-Pr	(Z)-H2N.CO.NH.COCH=CH-	CO	1,6	8
75	i-Pr	Ph-	NH.CO	2,6	9
76	PhCH2	4-EtO2C-Ph	NH. CO	7,6	9
77	i-Pr	4-(1-naftyl.SO2NHCO)-Ph-	NH.CO	1,0	9
78	z.nh(ch2)4	4-HO2C-Ph-	NH.CO	6,9	9
79	i-Pr	4-HO2C-Ph-	CO	6,5	9
81	Et	l-EtO^C-cyklopentyl	CO	8,4	8
83	Et .	l-HO2C-cyklpentyl	CO	7,6	8
84	i-Pr	4-MeO2C-Ph-	CO	2,2	9
85	PhCH2	4-HO2C-Ph-	NH.CO	1,4	8
86.	i-Pr	4-MeO2C-PhCH2-	O. CO	1,8	9
87	i-Pr	(E)-4-(EtO2C)-Ph.CH=CH-	CO	8	10
88	i-Pr	2-EtO2C-Ph-	NH.CO	3,8	9
89	i-Pr	4-(4-NO2-PhSO2NHCO)-Ph-	CO	1,1	9
90	Z.(CH2)2	PhCH2-	O.CO	3,0	10
92	Ph	4-EtO2C-Ph-	NH.CO	1,7	8
93	PhSO2NH(CH2)4	PhCH2-	O. CO	1,1	9
94	i-Pr	4-(PhSO2NHCO)-Ph-	CO	1,4	9
95	i-Pr	4-(4-Br-PhSO2NHCO)-Ph-	CO	6,0	10
96	i-Pr	1-naftyl.SO2NHCO(CH2)2-	CO	6,1	9
97	i-Pr	4-acetamido-Ph.OCH2-	CO	4,4	9
98	i-Pr	4-HO2C-PhCH2-	O. CO	5,2	9
99	i-Pr	4-(H2NCOCH2)-PhO.(CH2)3-	CO	4,0	9
100	i-Pr	(E)-4-HO2C-Ph.CH=CH—	co	2,0	9
101	i-Pr	4-EtO2C-Ph.OCH2-	co	4,7	9
102	i-Pr	4-EtO2C-Ph.(CH2)2-	co	1,1	9
103	i-Pr	4-HO-Ph-	co	5,5	9
104,	121 i-Pr	4-(4-ClPhSO2NHCO).Ph-	co	5,0	10
105	i-Pr	4-HO2C-Ph.(CH2)2-	co	2,1	9
106	i-Pr	4-(4ClPhSO2NHCO)Ph.(CH2)2-	co	8,0	10
107	i-Pr	(E)-4-(4-Cl-PhSO2NHCO)-
		Ph.CH=CH	co	5,0	10
108	i-Pr	4-(4-Br-PhSO2NCH2Ph.CO)Ph-	co	2,0	10
110	(b) i-Pr	4-(PhSO2NHCO).Ph-	NH.CO	2,6	9

I :

sloučenina z K£ [mol]

příkl. č.	R2	R3	A	(Β x B	io-m m .
111	(c)	Ph	PhCH2-	O.CO	2,4	9
112	(d)	Ph,	PhCH2-	O.CO	0,28	8
113	(e)	i-Pr	4-(4-Br-PhSO2NHCO). PH-	CO	7,0	8
114	(f)	i-Pr	4-(4-Br-PhS02NHC0).PH—	CO	3,3	10
115	(g)·	i-Pr	4—(4-Cl-PhSO2NHCO).Ph	CO	4,0	10
116	(h)	i-Pr	4-(4-Cl-PhSO2NHCO).Ph	CO	1,0	7
117,	6 (i)	i-Pr	PhCH2-	O.CO	6,0	10
118	(j)	PhCH2-	PhCH2-	O.CO	1,2	7
119	(k)	i-Pr	4-HO2C.Ph-	NH.CO	3,6	9
120	(D	i-Pr	4-HO2C.Ph-	NH.CO	1,0	6

Poznámky:

(b) individuální isomer ze směsi připravené v příkladu 58 (c) první isomer ze směsi připravené v příkladu 92 (d) druhý isomer připravený v příkladu 92 (e) první isomer- připravený v příkladu 95 (f) druhý isomer připravený v příkladu 95 (g) první isomer· připravený v příkladu 104 (h) druhý isomer připravený v příkladu 104 (i) první isomer připravený v příkladu 11 (j) druhý isomer. připravený v příkladu 11 (k) první isomer připravený v příkladu 16 (l) druhý isomer-připravený v příkladu 16

Τ' a b u 1 k a 3

Hodnoty pro sloučeniny obecného vzorce Ic, v němž R¹ a R² znamenají isopropylovou skupinu, R⁴ a R⁶ znamenaj í atomy vodíku a n má hodnotu 1 sloučenina z příkl. č. R³

A R⁵

Kj_ [mol] (B x 10^m)

B m

23	ch3o2c.(ch2)2-	CO	butyl	1/1	10
24	ho2c. (ch2)2-	CO	butyl	1/1	8
25	PhCH2-	O.CO	z.(ch2)4	1/0	10
26	ch3o2c.(ch2)2-	CO	z.nh(ch2)4	3,0	10

sloučenina z	A	R5	Kj_ [mol]
příkl. č.	R3	(B x B	io=m-h m
27	ho2c.(ch2)?-	CO	z.nh(ch2	>4	1,0	10
28	PhCH2-	CO	z.nh(ch2	U	1,0	10
122	PhCH2-	O.CO	z.nh(ch2	u	2,0	10
123	PhSO2NHCO.(CH2)2~	CO	butyl		.4,8	9
124	ch3so2nhco:. ( ch2 ) 2-	CO	butyl		3,5	8
125	PhSO2NHCO.(CHž)2-	co	z.nh(ch2	u	1,0	9
126	1-adamantyl.SO2NHCO(ch2)2-	co	butyl		1,1	9

Ve shora uvedených tabulkách mají používané symboly následující významy:

Me - methyl

Et = ethyl i-Pr = isopropyl t-Bu = terč, butyl

Ph = fenyl

Z = PhCH₂O.COPokusv na zvířatech

Zvířecí modely emfysemu (rozedmy) se připravují intratracheální aplikací elastolytické proteasy, která způsobuje pomalu se vyvíjející destruktivní lése plic. Tyto lése se normálně vyhodnocují až po několika týdnech až několika měsících. Shora zmíněné proteasy však způsobují lési, která je evidentní již v prvních několika hodinách. Tato prvotní lése se nejprve projeví hemorrhagií, po 24 hodinách se vyvine do zánětlivé lése a do týdne potom dochází k resoluci. Výhod této prvotní lése se využívá při následujícím pokusu.

Křečci se nejprve mírně anestetisují Brevitalem, potom se jim přímo do trachey aplikuje solný roztok pufrovaný fosfátem (pH 7,4), a to bud samotný, nebo s obsahem 40(^g elastasy lidských leukocytů (HLE). Za 24 hodiny se potom zvířata usmrtí, jejich plíce se vyjmou a pečlivě se zbaví cizí tkáně. Po zjištění hmotnosti vlhkých plic se plíce promyjí shora zmíněným solným roztokem pufrovaným fosfátem a zjistí se celkový počet vymytelných červených a bílých krvinek. Po aplikaci HLE se hodnoty hmotnosti vlhkých plic, celkový počet vymytelných červených krvinek a celkový počet vymytelných bílých krvinek zvyšují v závislosti na výši dávky. Sloučeniny, které jsou účinné jako inhibitory elastasy mohou zcela zabránit nebo zmírnit lése vyvolané enzymem, což vede k snížení hmotnosti vlhkých plic a k snížení počtu celkově vymytelných krvinek, a to jak červených, tak bílých, v porovnání s aplikací samotné HLE. Upotřebitelnost testovaných sloučenin k prevenci lesí způsobených HLE. je možno vyhodnocovat tak, že se tyto sloučeniny aplikují buď společně s HLE, nebo v různých časových intervalech před aplikací HLE. Sloučeniny podle vynálezu způsobují statisticky významné snížení hmotnosti vlhkých plic a celkového počtu vymytelných krvinek, v porovnání se stavem po aplikaci samotné HLE.

Sloučeniny podle vynálezu vykazují účinnost alespoň v jednom, z: testů uvedených shora v odstavcích Měření inhibiční účinnosti a Pokusy na zvířatech. Je třeba poznamenat, že není vždy přímá korelace mezi aktivitami testovaných sloučenin vyjadřovanými pomocí hodnot zjištěných při shora popsaném testu v části Měření inhibiční účinnosti a mezi sníženými hodnotami celkového počtu vymytelných krvinek a hmotnosti vlhkých plic v porovnání se stavem po aplikaci samotné HLE, jak byly zj ištěny při shora popsaných pokusech na zvířatech. Předpokládá se však, že test popsaný v části nazvané pokusy na zvířatech napovídá více o účinnosti těchto sloučenin při léčbě rozedmy.

Farmakokinetika

Samcům: křečků (80 až 120 g) se intravenosní injekcí podá testovaná sloučenina.. Před touto injekcí a v různých časových intervalech po ní se pokusná zvířata mírně anestetisují etherem a srdeční punkcí se jim odeberou vzorky krve o objemu vždy cca 0,2 ml. Krev se vnese do odstředivkových zkumavek o objemu 2 ml a nechá se' 1 hodinu srážet. Vzorek se potom odstředí a sérum se odebere.

Obsah testované látky se potom zjišťuje tak, že se nejprve pětiminutovou inkubací 50μ1 séra se stejným objemem pufru obsahujícího 5 mg/ml trypsinu z hovězí slinivky inaktivují endogenní inhibitory elastasy. Trypsinem inaktivované sérum (10μ1) se vnese do kyvety o objemu 0,52 ml, obsahující pufr s HLE o koncentraci 20 nM. Po další třicetiminutové inkubaci se reakce nastartuje přidáním 350μ1 substrátu (MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA; 1,6 mM) a průběh reakce se sleduje spektrofotometricky při vlnové délce 410 nM. Pro srovnávací účely se níže uvedeným způsobem stanoví persistence testovaných sloučenin v séru.

Podle následujícího vztahu se vypočítá inhibice vzorků séra v procentech:

Vo - Vi inhibice v % = -------- x 100

Vo

Vo = rychlost dosažená v přítomnosti kontrolního séra Vi = rychlost inhibované reakce.

Získané údaje se ve formě logaritmu inhibice v procentech vynesou oproti času po aplikaci inhibitoru a z křivky se zjistí přibližný poločas séra (tl/2).

Sloučeniny podle vynálezu je možno aplikovat teplokrevným živočichům, zejména lidem, pro léčbu rozedmy plic, atherosklerosy, rheumatoidní arthritidy a osteoarthritidy, zejména rozedmy. Aplikaci je možno provádět orálně, parenterálně, včetně subkutánního deponování pro aplikaci typu osmotické pumpy nebo pomocí práškového nebo kapalného aerosolu. Účinné látky je; možno běžným způsobem zpracovávat na orální nebo parenterální lékové formy, a to smísením zhruba 10 až 250 mg (na každou jednotkovou dávku) účinné látky s běžným nosičem, pomocnou látkou, pojidlem, ochrannou přísadou, stabilizátorem, chuíovou přísadou a podobně, jak je ve farmaceutické praxi běžné a jak je například popsáno v americkém patentovém spisu č. 3 755 340. K parenterálnímu podání j sou vhodné intramuskulární, intravenosní nebo subkůtánní injekce o objemu 1 až 10 ml, obsahující účinnou látku v dávce od cca 0,02 do 10 mg/kg tělesné hmotnosti, přičemž tato injekce se aplikuje třikrát nebo čtyřikrát denně. Injekční preparát obecně obsahuje sloučeninu podle vynálezu ve formě sterilního isotonického vodného roztoku nebo suspenze, popřípadě spolu s ochrannou látkou, jako fenolem nebo solubilizačním činidlem, jako ethylendiamintetraoctovou kyselinou. V případě aplikace ve formě práškového aerosolu je možno sloučeniny podle vynálezu podávat stejným způsobem jako cromolyn-natrium za použití inhalačního zařízení Spinhaler turbo-inhaler dodávaného firmou Fisons Corp. (Bedford, Massachusetts), přičemž na průměrného pacienta se počítá s denní dávkou 1 až 8 kapslí, z: nichž každá obsahuje cca 0,1 až 50 mg účinné látky. Kromě účinné látky obsahuje kapsle používaná ve shora zmíněném inhalačním zařízení farmaceuticky upotřebitelný nosič, jako laktosu.

V případě kapalného aerosolu se sloučeniny podle vynálezu aplikují v množství zhruba od 100 do 1 000μg na každé stisknutí dávkovacího ventilu nebo na každé uvolnění standardního objemu propelantu. Kapalný aerosol se podává v množství od 1 do 8 shora uvedených dávek denně, přičemž toto dávkování se mění v závislosti na ošetřovaném stavu, na hmotnosti pacienta a na velikosti částic aerosolu (menší částice pronikají do plic lépe). Propelanty k přípravě aerosolů, například fluorované uhlovodíky nebo isobutan, zásobníky, ventily a jiné ovládací prvky pro kapalné aerosoly popsali L. Lachman a spol. v The Theory and Practice of Industrial Pharmacy, Lea a Febiger, Philadelphia (1976).

Vynález ilustrují následující příklady provedení, jimiž se však rozsah vynálezu v žádném směru neomezuje. V těchto příkladech se teplotou místnosti míní teplota 20 až 23 °C, zkratkou pNA se označuje p-nitroanilid, zkratkou CBZ benzyloxykarbonyl, zkratkou t-BOC terč.butyloxykarbony1, zkratkou φ fenylová skupina. 1,l,l-triacetoxy-2,l-benzoxjodol-3(3H)-on se označuje jako Dess-Martinův perjodinan, relativní pohyblivost při chromatografii na tenké vrstvě (která se provádí na silikagelu, pokud není uvedeno jinak) se označuje symbolem R_f, symbolem t_R se označuje retenční doba při vysokotlaké kapalinové chromatografii a symbolem FR průtok v ml/min při této chromatografii. Zkratkou Col A se označuje analytická kolona Zorbax ODS, 4,6 mm x 25 cm, zkratkou Col B analytická kolona

CZ 2.78063 B6

Phenomenex Zorbax C-8, 4,6 mm x 35 cm a zkratkou Col C analytická a preparativní kolona Altex Ultrasphere/Octyl 10 mm (vnitřní průměr) x 25 cm (5μιη).. Velmi rychlá chromatografie, pokud není uvedeno jinak, se provádí na silikagelu, stejně jako vakuová chromatografie. ^H-NMR spektra se měří při 80 MHz nebo 250 MHz za použití tetřamethylsilanu jako vnitřního standardu a polohy signálů se udávají v hodnotách δ v ppm oproti tetřamethylsilanu. Tvary signálů se označují následujícími zkratkami:

s = singlet d - dublet dd =-· dublet, dubletu m = multiplet.

Z' nomenklaturního hlediska se pro jednotnost a jednoznačnost tam, kde je to možné používají názvy typu sekvencí jednotlivých aminokyselin. Mimoto aminy obecného vzorce V a N-substituenty C-terminálních amidů vzorců I, II, III, IV a VII, které jsou formálně odvozeny od aminů vzorce V, jsou, číslovány následovně:

(V)

R¹ OH

I I

NH-CH-CH-CFn

2 1 (IV, VII) (část)

R

(I, II) (část)

Pokud je zapotřebí většího množství materiálu, mohou se různé příklady opakovat.

Příklad 1

2(RS),3(SR)-3-amino-4-methyl-l,1,1-trifluor-2-pentanol-hydrochlorid

a. 2-methyl-l-nitropropan

- ,, K suspenzi 100,0 g (0,65 mol) dusitanu stříbrného ve 180 ml diethyletheru, předchlazené na 0 °C, se přikape 94,0 g (0,51 mol) l-jod-2-methylpropanu. Reakční směs se za nepřístupu světla přes noc míchá, nechá se ohřát na teplotu místnosti a potom se zfiltruje přes vrstvu křemeliny. Filtrát se zahustí ve vakuu a zbytek se podrobí vakuové destilaci (pozor - produkt je potenciálně explosivní). Získá se 37,7 g (0,366 mol) žádaného produktu o teplotě varu 61 až 65 ’C/6913,6 Pa.

b. 2(RS),3(SR)-4-methyl—3-nitro-l,l,1-trifluor-2-pentanol

37,7 g (0,366 mol) l-nitro-2-methylpropanu z příkladu la se smísí s 58,5 g trifluoracetaldehyd-ethylhemiacetalu o 90% čistotě (0,366 mol) a 3,4 g (0,025 mol) uhličitanu draselného, směs se míchá nejprve 3 hodiny při teplotě 60 C a potom 3 dny při teplotě místnosti. K reakční směsi se přidá 75 ml roztoku chloridu sodného a 50 ml 1N vodné kyseliny chlorovodíkové, spodní organická vrstva se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dvakrát vždy 250 ml diethyletheru. Spojené organické fáze se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití gradientově eluce směsmi dichlormethanu a hexanu (50 : 50) a dichlormethanu a hexanu (75 : : 25), 100% dichlormethanem a směsí methanolu a dichlormethanu (5 : 95). Získá se 44,9 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf ⁼ 0,65 (silikagel; ethylacetát - chloroform 5 : 95).

c. 2(RS),3(SR)-3-amino-4-methyl-l,1,1-trifluor-2-pentanol-hydrochlorid

Roztok 37,0 g (0,184 mol) produktu připraveného v příkladu lb ve 200 ml diethyletheru se přikape k suspenzi 22,0 g (0,58 mol) lithiumaluminiumhydridu v 800 ml diethyletheru. Reakční směs se 45 minut míchá, potom se k ní opatrně přidá 110 ml nasyceného vodného roztoku síranu sodného. Výsledná suspenze se zfiltruje, k filtrátu se přidá etherický chlorovodík a směs se zahustí ve vakuu. Získá se 37,6 g produktu, který se používá bez dalšího čištění.

^H-NMR (250 MHz, perdeuteroaceton): 1,2 (m, 6H), 2,3 (m, 1H), 3,58 (m, 1H), 4,98 (m, 2H), 7,78 (m, NH₂).

Příklad 2

2(RS),3(SR)-N-[ 3- (4-methyl-l,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl]-L· -prolinamid

a. 2(RS),3(SR)-1-[(fenylmethoxy)karbony1]-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 19,21 g (0,077 mol) CBZ-L-prolinu a 8,18 g (0,81 mol) N-methylmorfolinu ve 300 mol tetrahydrofuranu, předchlazenému na -15 °C, se v dusíkové atmosféře během 5 minut přikape roztok 11,01 g (O.;G8 mol) isobutyl-chlorformiátu ve 30 ml suchého tetrahydrofuranu. Reakční směs se 15 minut míchá při teplotě -15 °C, potom se teplota sníží na -40 °C a k směsi se přikape roztok 16,00 g (0,077 mol) produktu z příkladu lc a 8,18 g (0,081 mol) N-methylmorfolinu ve 200 ml tetrahydrofuranu. Výsledná směs se 1 hodinu míchá při teplotě -40 °C, potom se nechá postupně ohřát na teplotu místnosti a míchá se ještě další hodinu. Reakční směs se zfiltruje, zahustí se ve vakuu, sirupovitý odparek se rozpustí v chloroformu, roztok se promyje dvakrát vždy 75 ml 20% vodného roztoku kyseliny citrónové a organická vrstva se zahustí ve vakuu. Získá se surový produkt ve formě bílého kalného sirupu.. Tento surový produkt poskytne po trituraci se směsí etheru a hexanu (1 : 2) tři podíly žádaného produktu ve formě bílého prášku. Výtěžek činí 17,11 g.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf - 0,47 (silikagel; methanoí-chloroform 3 : 97).

Teplota tání 152 až 154 °C.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

^fcR ⁼ 14,06, 16,63, 18,23, 19,00 (Col A; směs vody a acetonitrilu v poměru 70 : 30, průtok ml/min).

b. 2(RS),3(SR)-N-[3-(4-methyl-l,l,l-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

2,00 g (4,97 mol)produktu z příkladu 2a se rozpustí v 50 ml absolutního ethanolu, přidá se 0,5 g 10% paladia na uhlí jako katalyzátoru, a reakční směs se 3 hodiny hydrogenolyžuje při teplotě místnosti za tlaku vodíku 310,127 kPa. Výsledná směs se zfiltruje přes křemelinu a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Získá se 1,36 g produktu, který se používá bez dalšího čištění.

Příklad 3

2(RS),3(SR)-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

a.. Methylester N-[(fenylmethoxy)karbony1]-L-valyl-L-prolinu

K roztoku 151,8 g (0,6 mol) N-benzyl-oxykarbonyl-L-valinu v 1,3 litru dimethylformamidu, předchlazenému na 0 °C, se přidá 163,3 g (1,2: mol) 1-hydroxybenzotriazolu, směs se 15 minut míchá, přidá se k ní nejprve suspenze 100,0 g (0,6 mol) hydrochloridu methylesteru L-prolinu a 64,2 g (0,63 mol) triethylaminu v 0,7 litru dimethylformamidu a potom 137,1 g (0,66 mol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu a výsledná směs se míchá nejprve 3 hodiny při teplotě 0 °C a potom 3 dny při teplotě místnosti. Reakční směs se zfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. Zbytek se rozmíchá s 0,75 litru ethylacetátu a směs se zfiltruje. Filtrát se postupně promyje 0,75 litru 20% vodné kyseliny citrónové, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, organická fáze se vysuší síranem hořečnatým a po filtraci se zahustí ve vakuu. Získá se 271,3 g surového produktu, který se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití gradientově eluce, při níž se začíná s dichlormethanem a končí směsí methanolu a dichlormethanu v poměru 4 : 96. Získá se 218,1 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,48 (silikagel; methanol - chloroform 5 : 95).

b. N—[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-valyl-L-prolin

K roztoku 158,8 g (0,438 mol) produktu z příkladu 3a v 1,6 litru methanolu se přidá 500 ml 1N vodného hydroxidu sodného, roztok se 17 hodin míchá při teplotě místnosti, potom se k němu přidá 100 ml 1N vodného hydroxidu sodného a v míchání se pokračuje ještě 5 hodin. Po přidání dalších 50 ml 1N vodného hydroxidu sodného se reakční směs míchá přes noc a potom se k odstranění methanolu zahustí ve vakuu. K odparku se přidá 1,0 litru vody a vodný roztok se extrahuje diethyletherem. Vodný roztok se potom okyselí 700 ml 1N vodné kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se ethylacetátem. Ethylacetátové extrakty se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Získá se 159,2 g žádaného produktu.

Chromátografie na. tenké vrstvě:

R_f = 0,34 (silikagel; methanol - chloroform - kyselina octová 5 : 94 : 1).

c. 2 (RS), 3 (SR) - [ (fenylmethoxy)karbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methy1-1,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 59,25 g (0,566 mol) N-methylmorfolinu a 197,2 g (0,566 mol) produktu z příkladu 3b ve 2,5 litru suchého tetrahydrofuranu, předchlazenému na -15 ’C, se přidá 77,3 g (0,566 mol) isobutyl-chlorformiátu a směs se 10 minut míchá. Teplota se sníží na -40 °C, k směsi se přidá nejprve 59,25 g (0,566 mol) N-methylmorfolinu a potom se k ní přikape roztok 117,5 g (0,566 mol) produktu z příkladu lc ve 2,5 litru tetrahydrofuranu. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti, 3 dny se míchá, potom se zfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu a roztok se postupně promyje vodou, 1N vodnou kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného, organická vrstva se vysuší síranem sodným a po filtraci se filtrát zahustí. Získá se 267,8 g surového produktu, který po velmi rychlé chromatografii na silikagelu za použití gradientově éluce počínaje směsí tetrahydrofuranu a toluenu v poměru 5 : 95 a konče směsí tetrahydrofuranu a toluenu v poměru 25 : 75 poskytne 138,8 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,4 (silikagel; tetrahydrofuran - toluen 20 : 80).

d. 2(RS),3(SR)-L-valyl-N-[3-(4-methy1-1,1,1-trifluor-2-hydroxypenty-u, ]-L-prolinamid

Směs 36,7 g (0,073 mol) produktu z příkladu 3c a 10% paladia na uhlí (zvlhčeného 50 % vody) jako katalyzátoru v 0,6 litru ethanolu se hydrogenuje v Parrově třepačce za tlaku vodíku 303,924 Pa. Po 1 hodině se reakční nádoba evakuuje a znovu se natlakuje vodíkem. Po další 0,5 hodině se reakční směs zfiltruje přes vrstvu křemeliny a filtrát se zahustí ve vakuu. Získá se 26,0 g produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,16 (silikagel; methanol — chloroform 5 : 95).

Příklad 4

2(RS),3(SR)-3-amino-4-methyl-l,1,1-trifluor-2-pentanol-hydrochlorid

a. 2-methyl-l-nitropropan

V následující části je popsán alternativní způsob, výroby sloučeniny z příkladu la.

Pětilitrová tříhrdlá baňka s kulatým dnem se opatří teploměrem, přikapávací nálevkou baňky se předloží 1 006,8 g (6,54 mol) 2,5 litru diethyletheru a do přikapávací g (5,03 mol) isobutyljodidu.. Jak reakční nálevka se k ochraně reakční směsi před mechanickým míchadlem, a uváděčkou dusíku. Do dusitanu stříbrného ve nálevky se vnese 927,2 baňka, tak přikapávací světlem obalí hliníkovou fólií. Po ochlazení míchané suspenze v reakční baňce zhruba na 5 ^eC (chladicí ledová lázeň) se začne přikapávat isobutyljodid. Během tohoto přikapávání, které trvá 2 hodiny, se teplota reakční směsi udržuje na hodnotě 5 °C nebo na hodnotě nižší. Po skončeném přidávání, se reakční baňka obalí ledem a přes noc se nechá pozvolna ohřát na teplotu místnosti. Po míchání trvajícím 48 hodin svědčí NMR vzorku reakční směsi o spotřebování všeho isobutyljodidu. Reakční směs se zfiltruje přes vrstvu křemeliny, čímž se odstraní soli stříbra, a filtrační koláč se promyje třikrát vždy 500 ml diethyletheru. Spojené filtráty se vysuší síranem hořečnatým a po filtraci se zahustí na rotační odparce při teplotě lázně 35 ’C zhruba na objem 600 ml. Frakční destilací odparku za atmosferického tlaku (pozor - produkt je potenciálně explosivní) se získá 350,4 g (výtěžek 68 %) vyčištěné nitrosloučeniny o teplotě, varu 135 až 142 ^eC.

b. 2(RS),3(SR)-4-methyl-3-nitro-l,1,1-trifluor-2-pentanol

Do třílitrové tříhrdlé baňky s kulatým dnem, opatřené mechanickým míchadlem a uváděčkou dusíku, se předloží 470,0 g (3,4 mol) uhličitanu draselného, 350,0 g (3,4 mol) produktu z příkladu 4 a a nakonec 708,0 g (4,4 mol) ethyl-hemiacetalu trifluoracetaldehydu. Směs se při teplotě místnosti 76 hodin intensivně míchá. Po této době svědčí ^H-NMR spektrum o téměř úplném spotřebování nitroalkanu. Reakční směs se zředí dichlormethanem a zfiltruje se. Filtrát se vodnou kyselinou chlorovodíkovou okyselí na pH 3, vrstvy se oddělí a vodná vrstva se promyje 500 ml dichlormethanu. Spojené dichlormethanové fáze se promyjí 1 litrem vody a 1 litrem roztoku chloridu sodného,^, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí se. Získá se 854,6 g ' surového produktu ve formě žlutého oleje, jehož ¹H-NMR spektrum svědčí o přítomnosti dvou diastereomerních nitroalkoholů (které jsou podle integrace signálů alkoholických protonů přítomny v poměru zhruba 3 : 1), jejichž signály se shodně vyskytují v oblasti hodnot 6,0 až 6,5 (perdeuteroaceton), kontaminovaných rozpouštědly a malými množstvími výchozích látek.

Při destilaci za sníženého tlaku se získají následující frakce:

frakce	hmotnost	teplota varu (0 C)	poznámka
A	191,7 g	42 až 50/atm. tlak	výchozí látky + rozpouštědla
B	34,8 g	35/133 Pa až 45/66,7 Pa
C	213,6 g	45/66,7 Pa až 95/200 Pa
• D E	337,8 g 114,0	95/200 Pa až 105/266,6 Pa izolováno ve vymražováku pro těkavé podíly
K	zjednodušení	čištění produktů v následujících stupních

syntézy bylo v tomto stupni věnováno značné úsilí k získání hlavního diastereomemího páru v prakticky čistém stavu a pouze tento čistý pár se potom podrobuje dalšímu zpracování. Hlavní diastereomemí pár krystaluje ze směsi diastereomerů a ze studeného pentanu ve formě bezbarvých jehličkovítých krystalů. Frakce C ze shora uvedené destilace se tedy nechá přes noc krystalovat v chladničce. Produkt se shromáždí, promyje se studeným pentanem a několik hodin se suší ve vakuové sušárně (pozor - tento materiál je poněkud těkavý a při delší aplikaci vakua může dojít k jeho značným ztrátám). Tímto způsobem se získá 52,0 g prakticky čistého materiálu. Frakce, které podle NMR spektroskopie obsahují významnější množství žádaného isomeru se opakovaně zpracují tímto způsobem-(a opakovaně se destilují k získání nových frakcí dále obohacených žádaným diastereomerem), čímž se získá celkem 197,7 g v podstatě čistého nitroalkoholu. Toto množství odpovídá danému způsobu práce, nepředstavuje však horní hranici možného výtěžku.

c. 2(RS),3(SR)-3-amino-4-methyl-l,l,l-trifluor-2-pentanol-hydrochlorid

K 2,30 g 10% paladia na uhlí jako katalyzátoru (méně účinné katalyzátory, jako například 10% paladium na síranu barnatém nebo vlhké 10% paladium na uhlí nebo nevhodné reakční doby mohou vést k vzniku jednoho nebo několika vedlejších produktů) se v dusíkové atmosféře přidá 232 ml bezvodého ethanolu, potom se přidá 22,93 g (0,144 mol) produktu z příkladu 4b a směs se přes noc hydrogenuje v Parrově přístroji na tlaku vodíku 480 kPa. Katalyzátor se odfiltruje přes vrstvu křemeliny a filtrační koláč se promyje ethanolem. Do spojených filtrátů se uvádí plynný chlorovodík až do pohlcení zhruba 8 g (cca 0,22 mol) chlorovodíku. Výsledný roztok se zahustí na rotační odparce a zbytek se několikrát odpaří s diethyletherem. Získá se bílý pevný produkt, který se promyje diethyletherem a přes noc se suší ve vakuvé sušárně. Výsledný amin-hydrochlorid rezultující ve výtěžku 20,79 g (88 %) při pomalém zahřívání jihne při teplotě 90 °C a taje při 118 až 120 ’C. Pokud se vzorek produktu ponoří do lázně předehřáté na 110 ’C, roztaje okamžitě.

Příklad 5

2(RS),3(SR)-Ii-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-hydroxýpentyl)]-L-prolinamid

a. . Methylester N-[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-valyl-L-prolinu

Do třílitrové tříhrdlé baňky s kulatým dnem, opatřené mechanickým míchadlem, uváděčkou dusíku á teploměrem, se předloží roztok 100,0 g (0,40 mol) CBZ-L-valinu v 1 litru dimethylformamidu vysušeného nad molekulárním sítem, směs se ochladí na 0 ’C a přidá se k ňí 108,1 g (0,80 mol) hydroxybenzotraizol-hydrátu. Zhruba po patnáctiminutovém míchání se přidá suspenze 66,2 g (0,40 mol) a 41,8'g (0,42 mol) triethylaminu v 500 ml dimethylformamidu, přičemž dalších 500 ml dimethylformamidu se použije k spláchnutí všech zbytků suspenze do reakční směsi. Po přidání 30,8 g (0,44 mol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu, který se spláchne 100 ml dimethylformamidu, se reakční směs 3 hodiny míchá při 0 ⁰ C, potom se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 3 dny. Výsledná směs se zfiltruje a filtrát se zahustí za sníženého tlaku. Filtrační koláč se promyje třikrát vždy 1 litrem ethylacetátu a tento filtrát se také zahustí. Odparek se spojí se zbytkem po odpaření dimethylformamidového roztoku, organická fáze o objemu zhruba 2,5 litru se zředí 2 litry diethyletheru a nechá se přes noc stát v chladničce. Vyloučená sraženina se odfiltruje. Po promytí filtrátu 1 litrem 1N kyseliny chlorovodíkové se vytvoří další sraženina, která se odfiltruje. Filtrát se promyje 1 litrem 1N kyseliny chlorovodíkové, 0,5 litru vody, dvakrát vždy 1 litrem nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 0,5 litru roztoku chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí se. Získá se 587,2 g surového produktu, který se podrobí velmi rychlé chromatografii na 3,5 kg silikagelu za použití gradientově eluce od čistého dichlormethanu do směsi methanolu a dichlormethanu v poměru 5 : 95. Směsné frakce se k odstranění nečistot podrobí nové chromatografii. Po spojení frakcí obsahující žádaný produkt se získá 500,7 g (87 %) materiálu kontaminovaného malým množstvím nečistoty o nízké hodnotě R_f.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,37 (silikagel; diethylether - hexan 3:1) R_f = 0,53 (silikagel; methanol - chloroform 5 : 95).

b. N-[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-valyl-L-prolin

Do dvanáctilitrové tříhrdlé baňky s kulatým dnem, opatřené mechanickým míchadlem a uváděčkou dusíku, se předloží roztok 500,7 g (1,38 mol) produktu z příkladu 5a ve 4litrech methanolu. K tomuto roztoku se za míchání přidá 1,4 litru 1N louhu sodného, čímž se hodnota pH upraví zhruba na 13. Po tříhodinovém míchání reakční směsi poklesne pH na hodnotu 11, přidáním dalšího 0,1 litru 1N louhu sodného se pH zvýší na 12 a reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti. Methanol se odpaří na rotační odparce, přičemž během tohoto odpařování se k snížení koncentrace zásady přidá celkem 1 litr vody. Výsledný vodný . roztok se promyje diethyletherem a potom se přidáním 1,5 litru 1N kyseliny chlorovodíkové okyselí zhruba na pH 3,5. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje třikrát vždy 1 litrem ethylacetátu. Spojené organické fáze se promyjí 1 litrem roztoku chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a zahustí se. Získá se 493,0 g (100 %) produktu ve formě bílé pevné látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,51 (siiikagel; methanol - chloroform 5 : 95) s přídavkem kyseliny octové).

σ.. 2(RS),3(SR)-[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-1,l,l-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

V třílitrové tříhrdlé baňce s kulatým dnem, opatřené mechanickým míchadlem, teploměrem, uváděčkou dusíku a přikapávací nálevkou, se v dusíkové atmosféře rozpustí v 1,5 litru suchého tetrachlormethanu 105,3 g (0,302 mol) produktu z příkladu 5b. · Roztok se ochladí na -35 °C a přidá se k němu 1 ekvivalent (34 ml; 0,309 mol) N-methylmorfolinu. Za udržování teploty nejvýše na -35 ’C. se během 20 minut přikape 39 ml (0,307 mol) isobutyl-chlorformiátu, po skončeném přidávání se reakční směs 1 hodinu míchá při teplotě -35 “C, potom se k ní přidá druhý ekvivalent (.34 ml) N-methylmorf o linu a potom se takovou rychlostí, aby teplota nepřestoupila -35 ’C, přidá 62,8 g (0,302 mol) produktu z příkladu 4c ve 300 ml tetrahydrofuranu. Po skončeném přidávání se teplota udržuje na -35 °C nebo níže ještě 1 hodinu, potom se směs za míchání nechá přes noc ohřát na teplotu místnosti. Reakční směs se zfiltruje a filtrační koláč se promyje 1 litrem tetrahydrofuranu. Zahuštěním spojených filtrátů se získá 189 g surového produktu, který se podrobí velmi rychlé chromatografií na silikagelu (5 000 ml) za použiti směsi tetrahydrofuranu a toluenu (1 : 9) jako elučního činidla. Jakmile se začne vymývat produkt, začne se gradientovým způsobem měnit i polarita rozpouštědla, a to od směsi tetrahydrofuran-toluen (15 : 85) přes směs tetrahydrofuran-toluen (20 : 80) až k směsi methanol-tetrahydrofuran-toluen (2,5 : 30 : 70) (methanol se používá proto, aby se omezila na minimum eluce nečistot o nízké hodnotě Rf). Příslušné frakce se odpaří a zbytek se suší ve vakuu přes noc. Získá se 12,0 g (8 %) mírně znečištěného produktu a 131,6 g (87 %) prakticky čistého materiálu, (pozor: při vysoušení roztoků tohoto materiálu ve vakuu vzniká pěna, která při delší aplikaci vakua popřípadě ztuhne. Je třeba dbát na to, aby se tato operace prováděla v dostatečně velké baňce, do níž by se veškerá vzniklá pěna vešla).

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,25 (siiikagel; methanol - chloroform 5 : 95). . R_f = 0,37 (siiikagel; tetrahydrofuran - toluen 20 : 80).

Pokud se produkt nanese na desku jen v malém množství, dojde k. rozštěpení isomerů a k vzniku dvou skvrn o Rf = 0,37 a Rf = =· 0,46 (siiikagel; tetrahydrofuran - toluen 20 : 80).

Poznámka: Udržování shora uvedené teploty uvnitř reakční směsi má pro získání v podstatě čistého produktu zásadní význam.

d. 2(RS),3(SR)-L-valyl-N-[ 3- (4-methyl-l,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

Ve velké Parrově hydrogenačni nádobě se 131,6 g (0,262 mol) produktu z příkladu 5c rozpustí v 750 ml ethanolu a přidá se 13,0 g 10% paladia na uhlí (50 % vody) jako katalyzátoru. Všechny tyto operace se provádějí pod dusíkem. Reakční směs se potom v Parrově aparatuře třepe ve vodíkové atmosféře za·tlaku 480 kPa. Aparatura se neustále natlakovává novým vodíkem až do odeznění jeho spotřeby. Podle chromatografie vzorku reakční směsi na tenké vrstvě neobsahuje směs již žádnou výchozí látku. Reakční směs; se zfiltruje přes vrstvu křemeliny a zahustí se na pěnovitý zbytek. Tento materiál poskytne po trituraci s diethyletherem, filtraci a vysušení 81,4 g (84 %) našedlého pevného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,41 (silikagel; chloroform - methanol 10 : 1).

Příklad 6

3S(nebo R)-fenylmethoxykarbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [sloučenina vzorce Ib, kde r¹ =,ch(ch3)ch3, r² = ch(ch3)ch₃, R³ = 0CH₂, R⁴ = H, A = 0C0, n = 1]

a.. Sůl 2R,3S-3-amino-l,l,1-trifluor-4-methyl-2-pentanolu s kyselinou D-vinnou g amin-hydrochloridu, vyrobeného jako v příkladu 4e, se rozpustí ve vodě a roztok se neutralizuje pevným hydrogenuhličitanem sodným. Vodný roztok se několikrát extrahuje dichlormethanem, spojené extrakty se vysuší síranem sodným a zahustí se. Získá se 14,04 g aminu ve formě volné báze, rezultujícího jako bílá pevná látka. Tento materiál se ve 100 ml vroucího bezvodého ethanolu smísí s 12,31 g D-vinné kyseliny a vzniklý kalný, roztok se za horka zfiltruje přes filtrační papír. Roztok se potom nejprve pomalu chladí přes noc při teplotě místnosti, potom se na několik hodin umístí do chladničky. Vyloučená sraženina se odfiltruje pomocí filtrační nálevky ze slinutého skla, promyje se studeným ethanolem a přes noc se suší ve vakuové sušárně při teplotě 40 °C. Vzorek vysušeného bílého pevného materiálu získaného ve výtěžku 4,56 g taje při 127 až 130 ’C. Větší část tohoto materiálu (4,05 g) se rozpustí ve 20 ml vroucího ethanolu a roztok se pozvolna ochladí na teplotu místnosti. Vyloučený bílý gelovitý produkt se shromáždí na filtrační nálevce ze slinutého skla a několikrát se promyje ethanolem. Po několikahodinovém sušení ve vakuové sušárně při teplotě 40 °C se získá bílý pevný produkt o teplotě tání 132 až 134 °C.

b. 2S,3S“[(fenylmethoxy)karbony1]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [sloučenina vzorce Vllb, kde R.¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = 0CH₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Ve tříhrdlé baňce s kulatým dnem o obsahu 50 ml, opatřené teploměrem, uváděčkou dusíku a magnetickým míchadlem, se v dusíkové atmosféře rozpustí 1,00 g (2,87 mol) kyseliny připravené podle příkladu 5b v 16 ml suchého tetrahydrofuranu. Přidá se 0,34 ml (3,09 mol) N-methylmorfclinu, výsledný roztok se ochladí na -35 C (měřeno uvnitř reakční směsi) a během 2 minut se k němu přidá 0,37 ml. (2,85 mol) isobutyl-chlorformiátu, přičemž se teplota nenechá vystoupit nad -35 °C. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě od -45 °C do -35 “C.

0,92 g (2,86 mol) D-tartrátu z příkladu 6a se rozpustí ve směsi 5 ml tetrahydrofuranu a 2 ml dimethylsulfoxidu, přidá se 0,68 ml N-methylmorfolinu a vzniklý kalný roztok se takovou rychlostí, aby se teplota udržela pod -40 °C, přidá k shora získané reakční směsi. Výsledná směs se 1 hodinu míchá při teplotě od -45 'C do -15 “C, potom se nechá přes noc ohřát na teplotu místnosti, zředí se chloroformem, promyje se vodou a nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se síranem sodným a zahustí se. Získá se 1,15 g (80 % ) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílé pevné látky. ¹H-NMR spektrum tohoto materiálu, měřené v perdeuterodimethylsulfoxidu, obsahuje dublet při δ 6,43, který odpovídá chemickému posunu protonu alkoholové skupiny v materiálu shora uvedenou relativní konfigurací.

c. 3S(nebo R)-fenylmethoxykarbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [sloučenina vzorce Ib, kde R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = 0CH₂, R⁴ = H,

A = OCO, n = 1]

0,25 g (0,5 mmol) alkoholu připraveného v příkladu 6b se rozpustí v dichlormethanu a k roztoku se přidá 0,42 g (0,99 mmol) Dess-Martinova perjodinanu (v jediné dávce). Po přidání 0,08 ml (1,04 mol) trifluoroctové kyseliny se mírně zakalená směs přes noc míchá, přičemž přejde na bílou suspenzi, která podle chromatografie na tenké vrstvě v podstatě neobsahuje výchozí materiál. Reakční směs se rozmíchá s vodným roztokem 0,78 g thiosíranu sodného a 0,42 g hydrogenuhličitanu sodného a organická vrstva, která se popřípadě zbaví suspendovaných bílých pevných částic, se od vodné fáze oddělí. Organická vrstva se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se síranem sodným a zahustí se na olejovitý zbytek, který po novém rozpuštění ve směsi diethyletheru a hexanu a opětném zahuštění poskytne 0,21 g (výtěžek 84 %) bílého pc rého produktu. Po překrystalování tohoto materiálu z horké směsi diethyletheru a hexanu se získá prakticky čistý vzorek sloučeniny uvedené v názvu ve formě v podstatě čistého isomeru dávajícího při vysokotlaké kapalinové chromatografii jediné maximum s retenční dobou identickou s retenční dobou autentického vzorku sloučeniny uvedené v názvu, připravené postupem podle příkladu 117.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R - 5,65 (Col A, voda - methanol 55 : 45]) FR = 2,0.

Příklad 7

1- [ 2—(tricyklo[3,3,1,l³'⁷]dec-l-yl)ethoxykarbonyl]-N-[3(RS)-3-(4-methyl-1., 1,1-trif luor-2-oxopentyl) ] -L-prolinamid a- 4-nitrofeny1-2-[tricyklo(3,3,1,l³·⁷)dec-l-yl]ethyl-karbonát

K roztoku 1,17 g (5,82 mmol) p-nitrofenyl-chlorformiátu ve 25 ml diethyletheru se při teplotě 0 °C přidá 5 ml pyridinu > a potom se k němu během 1 hodiny přikape 1,00 g (5,54 mmol)

2- (l-adamantyl)ethanolu ve 20 ml diethyletheru. Výsledná směs se 12 hodin míchá při teplotě místnosti a potom se roztřepe mezi vodu a diethylether. Etherická vrstva se promyje 5% vodnou kyselinou chlorovodíkovou a fosfátovým pufrem o pH 7,0, vysuší se síranem hořečnatým a po filtraci se rozpouštědlo odpaří ve vakuu.. Surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu (5 : 95) jako elučního; činidla. Získá se 1,10 g produktu ve formě bílého prášku.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,29 (silikagel; ethylacetát - hexan 5 : 95).

b. 1-(2-(tricyklo[3,3,1,l³·⁷]dec-l-yl)ethoxykarbonyl]-N-[2.(RS),3(SR)-3-(4-methy1—1,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

Roztok 731,0 mg (2,98 mmol) produktu z příkladu 7a, 500 mg (1,80 mmol) produktu připraveného za použití postupu podle příkladu 2b a 2,57 g (18,6 mmol) uhličitanu draselného v 50 ml dímethylformamidu se 18 hodin míchá při teplotě místnosti, potom se zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se vyjme ethylacetátem, roztok se promyje třikrát vždy 10% hydroxidem sodným, vysuší se směsí uhličitanu draselného a síranu sodného (10 : 90), zfiltruje se a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. Surový produkt se podrobí chromatografii na silikagelu za použití směsi methanolu a chloroformu (1 : 99) jako elučního činidla. Získaný pevný materiál poskytne po promytí hexanem 340 mg žádaného produktu ve formě bílé pevné látky.

Vysokotlaká kapalinová chromátografie:

t_R = 5,86, 6,38 (Col A; acetonitril - voda - kyselina trifluoroctová 70 : 30 : 0,1) FR = 2.

c. 1—[2—(tricyklo[3,3,1,1³·⁷]dec-l-yl)ethoxykarbonyl]-N-3(RS)-[3-

-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 1,09 g (8,60 mmol) oxalylchloridu v 15 ml suchého dichlormethanu, ochlazenému na -43 ’C, se přidá 1,37 g (17,3 mmol) dimethylsulfoxidu v 10 ml dichlormethanu. Přidávání trvá 15 minut. Výsledný roztok se 10 minut míchá a potom se k němu stejným způsobem přidá během 30 minut 340 mg (0,72 mmol) produktu z příkladu 7b. Reakční roztok se další hodinu míchá při teplotě -43 °C, potom se k němu pomalu přidá 4,80 ml (34,5 mmol) triethylaminu. Roztok se nechá pomalu ohřát na teplotu místnosti, 2 hodiny se míchá, potom se zředí dichlormethanem, promyje se 10% vodnou kyselinou chlorovodíkovou, 5% vodným roztokem chlornanu sodného, vysuší se směsí uhličitanu draselného a síranu sodného (10 : 90),zfiltruje se a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Surový produkt se vyčistí dvěma po sobě následujícími velmi rychlými chromátografiemi na sloupci silikagelu za použití směsi methanolu a chloroformu (0,1 : 99,9) v prvním případě a ethylacetátu a hexanu (1 : 5) ve druhém případě jako elučních činidel. Získá se 130 mg produktu, ve formě bílé pevné látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f » 0,50 (silikagel; methanol - chloroform 5 : 95).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R =· 5,31 (Col. A; acetonitril - voda - trifluoroctová kyselina 70 : 30 í 0,01; průtok 2 ml/min).

Analýza: pro C₂₄ H₃₅N₂F₃O₄.0,25H₂O vypočteno 60,43 % C, 7,50 % H, 5,87 % N; nalezeno· 60,50 % C, 7/⁴⁵ % H, 5,74 % N.

Příklad 8

3(RS)-1-(4-fenylbutylkarbonyl)-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

a. 2(RS),3(SR)-1-(4-fenylbutylkarbonyl)-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

Roztok 0,330 g (1,86 mmol) 5-fenylvalerové kyseliny a 0,280 g (2,79 mmol) N-methylmorfolinu ve 100 ml tetrahydrofuranu se ochladí na -15 °C, přikape se k němu roztok 0,280 g (2,05 mmol) isobutyl-chlorformiátu v 5 ml tetrahydrofuranu, směs se 10 minut míchá při teplotě -15 °C, potom se teplota sníží na -40 ’C a k směsi se přikape roztok 0,500 g (1,86 mmol) produktu vyrobeného za použití postupu popsaného v příkladu 2b ve 25 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá nejprve 1 hodinu při teplotě -40 °C a potom přes noc při teplotě místnosti, zfiltruje se a filtrát se zahustí ve vakuu. Surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu za pomoci směsi methanolu a chloroformu (3 : 97) jako elučního činidla. Získá se 0,60 g žádaného produktu ve formě bílé pevné látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf - 0,40 - 0,51 (silikagel; methanol - chloroform 3 : 97).

b. 3(RS)-l-(4-fenylbutylkarbonyl)-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

K míchanému roztoku 3,43 g (27,0 mrnol) oxalylchloridu v 10 ml dichlormethanu, předchlazenému na -60 °C, se v dusíkové atmosféře během 10 minut přikape roztok 4,22 g (54,0 nmol) dimethylsulfoxidu v 80 ml suchého dichlormethanu. Během tohoto přikapávání nemá teplota přestoupit -55 °C. Směs se 15 minut míchá při teplotě -60 °C a potom se k ní během 10 minut přikape roztok 0,580 g (1,35 mrnol) produktu z příkladu 8a ve 100 ml dichlormethanu. Výsledná směs se 1 hodinu míchá při teplotě -60 ^eC, potom se k ní při teplotě -60 “C přikape během 10 minut 6,98 $ (54,0 mrnol) diisopropylethylaminu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti, přičemž se nechá ohřát na teplotu místnosti, potom se postupně promyje dvakrát 1N vodnou kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného a zahustí se ve vakuu. Získá se 0,85 g surového produktu ve formě oranžově zbarveného sirupu. Tento surový produkt se vyčistí třemi po sobě následujícími velmi rychlými chromatografiemi na silikagelu, za použití následujících rozpouštědlových. soustav:

1) methanol — chloroform (3 :. 97),

2) methanol — chloroform (3 : 97) a

3) diethylether - hexan (90 : 10).

Získá se 319 mg žádaného produktu ve formě bílé pěny. Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,33 až 0,40 (silikagel; diethylether - hexan 90 : 10).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

^ťR 17,93, 18,55 (Col A; voda - acetonitril - 55 : 45; průtok ml/min).

Analýza: pro ^C22^H29^N2°3^F3·¹'^25H2° vypočteno 58,85 % C, 7,07 % H, 6,24 % N; nalezeno 58,91 % C, 6,83 % H, 6,13 % N.

Příklad 9

3(RS)-l-[fenylmethoxy)karbonyl]-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl]-L-prolinamid

K míchanému roztoku 0,75 g (5,9 mrnol) oxalylchloridu v 5 ml suchého methylenchloridu se při teplotě -60 °C pod dusíkem přikape roztok 0,890 g (11,4 mrnol) dimethylsulfoxidu v 5 ml suchého methylenchloridu. Výsledná směs se nechá ohřát na -25 °C a přidá se k ní roztok 0,200 g (0,497 mrnol) produktu vyrobeného postupem popsaným v příkladu 2a v 5 ml suchého methylenchloridu. Směs se 0,5 hodiny míchá při teplotě -25 ^eC, potom se k ní přidá 1,94 g (19,2 mrnol) triethylaminu, reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a zfiltruje se. Filtrát se odpaří a zbytek se rozpustí v chloroformu. Chloroformový roztok se postupně promyje 1N vodnou kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a zfiltruje se. Po odpaření rozpouštědla ve vakuu se získá 0,147 g surového produktu, který se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi chloroformu a methanolu (97 : 3) jako elučního činidla. Získá se 0,11 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

= 0,25 (chloroform - ethylacetát 90 : 10).

Analýza: pro ¢1^23^^2⁰^^^1,5¾⁰ vypočteno 53,39 % C, 6,13 % H, 6,55 % N; nalezeno 53,55 % C, 5,78 % H, 6,56 % N.

Příklad 10

2(RS),3(SR)-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,l-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

a. Methylester N-[(fenylmethoxy)karbony1]-L-valyl-L-prolinu

Sloučenina uvedená v názvu se připraví opakováním postupu popsaného v příkladu 3a.

b. N—[ (fenylmethoxy)karbonyl]-L-valyl-L-prolin

Sloučenina uvedená v názvu se připraví postupem podle příkladu 3b za použití materiálu z příkladu 10a jako výchozí látky.

c. 2-methyl-l-nitropropan

Sloučenina uvedená v názvu se připraví postupem podle příkladu la.

d. 2(RS),3(SR)-4-methyl-3-nitro-l,1,l-trifluor-2-pentanol

Sloučenina uvedená v názvu se připraví postupem podle příkladu lb za použití materiálu z příkladu 10c jako Výchozí látky.

e. 2(RS),3(SR)-3-amino-4-methyl-l,1,l-trifluor-2-pentanol-hydrochlorid

Sloučenina uvedená v názvu se připraví postupem podle příkladu lc za použití materiálu z příkladu lOd jako výchozí látky.

f. 2(RS),3(SR)-[(fenylmethoxy)karbonyl)-L-valyl-N-[3-(4-methyl-1,1,l-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

Sloučenina uvedená v názvu se připraví postupem podle příkladu 3c za použití materiálů z příkladů 10b a lOe jako výchozích látek.

g. 2(RS),3(SR)-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,l-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

Sloučenina uvedená v názvu se připraví postupem podle příkladu 3d za použití sloučeniny z příkladu lOf jako výchozí látky.

Příklad 11

3(RS)-[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-valyl-N-[ 3- (4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

a. — f.

Reakční stupně a. až f. se provádějí postupem popsaným v příkladech 10a až f.

g. 3(RS)-[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

K míchanému roztoku 10,12 g (79,75 mmol) oxalylchloridu ve 160 ml dichlormethanu, předchlazenému na -60 ^eC, se v dusíkové atmosféře během 10 minut přikape roztok 12,46 g (159,50 mmol) dimethylsulfoxidu ve 12. ml suchého dichlormethanu. Během přidávání nemá teplota reakční směsi nikdy přestoupit -50 °C. Během 10 minut se potom při teplotě -60 °C přikape roztok 2,00 g (3,99 mmol) alkoholu- z příkladu llf ve 160 ml dichlormethanu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě -60 °C, potom se k ní při teplotě -60 °C přikape během 10 minut 20,62 g (159,50 mmol) diisopropylethylaminu. Výsledná směs se nechá během jednohodinového míchání ohřát na teplotu místnosti, potom se promyje 1N vodnou kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného a zahustí se ve vakuu. Získá se 2,76 g surového produktu ve formě oranžově zbarveného sirupu. Tento surový produkt se vyčistí třemi po sobě následujícími velmi rychlými chromatografiemi na silikagelu, za použití následujících elučních činidel:

1) ether - hexan (80 : 20)

2) methanol - chloroform (2,5 : 97,5)

3) methanol - chloroform (2,5 : 97,5).

Získá se 0,88 g žádaného produktu ve formě bílé pěnovité látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,45 (silikagel; methanol - chloroform 3 : 97).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R =6,45, 11,10 (Col A; voda - acetonitril (55 : 45) s 0,1 % trifluoroctové kyseliny; průtok 2 ml/min).

CZ 278063 B6 /

Analýza: pro ^C24^H32^N3°5^F3·⁰'^5H2° vypočteno 56,68 % C, 6,54 % H, 8,26 % N; nalezeno 56,58 % C, 6,52 % H, 8,21 % N.

Příklad 12

3(RS)-[2-(2-oxopyrrolidinyl)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[.3-(4-methyl-1,1 ,1-trifluor-2-oxypentyl)]-L-prolinamid

a. 4-nitrofeny1-2-(2-oxopyrrolidinyl)ethylkarbonát

3,00 g (23,2 mmol) N-(2-hydroxyethyl)pyrrolidonu se v dusíkové atmosféře rozpustí ve 20 ml diethyletheru a k roztoku se za míchání při teplotě místnosti přikape během 2 hodin roztok 4,68 g (23,2 mmol) p-nitrofenyl-chlorformiátu ve 25 ml diethyletheru. Směr se ještě 2 hodiny míchá při teplotě místnosti a potom se zahustí ve vakuu. Získá se 7,90 g surového produktu, který po vyčištění velmi rychlou chromatografií na silikagelu, za použití směsi methanolu a chloroformu v poměru 5 : 95 jako elučního činidla, poskytne 4,62 g žádaného produktu ve formě· bílého prášku.

Chromátografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,51 (silikagel; methanol - chloroform 3 : 97).

b. 2(RS),3(SR)—[2-(2-oxopyrrolidinyl)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 1,20 g (4,08 mmol) ethyl-2-pyrrolidon-p-nitrofenylkarbonátu a 1,50 g (4,08 mmol) produktu připraveného postupem podle příkladu 3d ve 100 ml dimethylformamidu se při teplotě místnosti v dusíkové atmosféře přidá 2,820 g (40,80 mmol) uhličitanu draselného. Reakční směs se přes noc míchá, potom se zředí ethylacetátem a nadbytek uhličitanu draselného se odfiltruje. Filtrát se zahustí ve vakuu, zbytek se rozpustí v ethylacetátu a roztok se postupně promyje 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, 5% vodnou kyselinou citrónovou a roztokem chloridu sodného. Organická fáze se vysuší síranem sodným, zfiltruje se a zahustí se ve vakuu. Získaný surový alkohol poskytne po vyčištění velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi methanolu a chloroformu (5 : 95) jako elučního činidla 0,72 g žádaného produktu.

Chromátografie na tenké vrstvě:

= 0,46 (silikagel; methanol - chloroform 7 : 93).

c. 3(RS)-[2-(2-oxopyrrolidinyl)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[3-(4— -methyl-1,1,1-trifluor-2-oxypentyl)]-L-prolinamid

K míchanému roztoku 3,500 g (27,60 mmol) oxalylchloridu v 80 ml dichlormethanu, předchlazenému na -60 °C, se v dusíkové atmosféře přikape během 10 minut roztok 4,310 g (55,20 mmol) dimethylsulfoxidu v 6 ml suchého dichlormethanu, přičemž během tohoto přidávání nemá teplota reakční směsi nikdy přestoupit -50 °C. K směsi se potom při teplotě -60 °C přikape během 10 minut, roztok 0,720 g (1,38 mmol) alkoholu z příkladu 12b v 80 ml dichlormethanu, výsledná směs se 1 hodinu míchá při teplotě -60 °C a potom se k ní při téže teplotě přikape během 10 minut roztok 7,13 g (55,2 mmol) diisopropylethylaminu v 50 ml dichlormethanu. Reakční směs se 1 hodinu míchá, přičemž se nechá ohřát na teplotu místnosti, potom se promyje 1N vodnou kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného a zahustí se ve vakuu.- Získá se surový produkt ve formě oranžově zbarveného sirupu. Tento surový produkt poskytne po vyčištění velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi methanolu a chloroformu (5 : 95) jako elučního činidla 0,43 g žádaného produktu ve formě bílé pěny.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,33 (silikagel; methanol - chloroform 5 : 95).

Vysokotlaká kapalinová chromátografie:

t_R = 3,50, 4,63 (Col A; voda — acetonitril 55 : 45; průtok ml/min)..

Analýza: pro ^C23^H35^N4°6^Í’3 *^H2° vypočteno 51,29 % C, 6,92 % H, 10,40 % N; nalezeno 51,20 % C, 6,86 % H, 10,03 % N.

Příklad 13 (RSj - [2-(methoxykarbony1)ethylkarbonyl]-L-valy1-N-[3-(4-methy1-1,1,1-trifluormethyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

a. Terč.butylester N-benzyloxykarbonyl-L-valyl-L-prolinu

Roztok 56,25 g (0,244 mol) N-benzyloxykarbonyl-L-valinu a 60,67 g (0,45 mol) hydroxybenzotriazolu v 565 ml dimethylformamidu se ochladí na 5 °C a v jediné dávce se k němu přidá 50,89 g (0,247.mol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu. Směs se ještě 15 minut míchá při teplotě 5 °C a potom se k ní přidá 38,36 g (0,224 mol) terč.butylesteru L-prolinu. Výsledná směs se míchá nejprve 2 hodiny při teplotě 5 °C a potom 48 hodin při teplotě místnosti, potom se zfiltruje a zahustí se ve vakuu. Olejovitý zbytek se rozpustí v 1 litru ethylacetátu a roztok se postupně promyje 20% vodnou kyselinou citrónovou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného. Organická fáze se vysuší síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Získá se 92,0 g žádaného produktu ve formě bílé pěnovité látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,9 (silikagel; chloroform - ethylacetát 85 : 15).

b. Terč.butylester L-valyl-L-prolinu

Směs 92,0 g (0,227 mol) produktu z příkladu 13a a 10 g 10% paladia na uhlí' v 1. litru ethanolu se 6 hodin hydrogenuje v Parrově třepacím autoklávu při teplotě místnosti za tlaku 420 kPa. Reakční směs se zfiltruje přes vrstvu křemeliny a zahustí se ve vakuu. Získá se 62 g žádaného produktu ve formě žlutého viskosního oleje.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,3 (silikagel; methanol - chloroform 10 : 90).

c. 1,1-dimethylethylester N-[2-(methoxykarbonyl)ethylkarbonyl]-L-valyl-L-prolinu

K roztoku 2,1 g (7,8 mmol) produktu z příkladu 13b v 60 ml dichlormethanu, předchlazenému na 0 °C, se přidá 8,0 ml 1N vodného roztoku hydroxidu sodného a k směsi se za míchání přidá 0,96 ml (7,8 mmol) 3-methoxykarbonylpropionylchloridu. Reakční směs se 15 minut intensivně míchá při teplotě 0 ’C, výsledný roztok se vyjme z chladicí ledové lázně, zředí se 30 ml vody a okyselí se 1N vodnou kyselinou chlorovodíkovou. Organická vrstva se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dichlormethanem. Organické fáze se spojí, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií na sloupci silikagelu, který se vymývá nejprve diethyletherem a potom ethylacetátem. Získá se 2,68 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,28 (silikagel; diethylether).

d. N—['2-(methoxykarbonyl)ethylkarbonyl]-L-valyl-L-prolin

K roztoku 2,68 g (6,98 mmol) produktu z příkladu 13c v 11 ml dichlormethanu se přidá 11,0 ml (143 mmol) trifluoroctové kyseliny. Směs se 4 hodiny míchá a potom se zahustí ve vakuu. Získá se 2,13 g žádaného produktu, který se používá bez dalšího čištění.

e. 2(RS),3(SR)-[2-(methoxykarbonyl)ethylkarbonyl]-L-valyl-N-

-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 0,71 ml (6,5 mmol) N-methylmorfolinu a 2,13 g (6,5 mmol) produktu z příkladu 13d v 50 ml tetrahydrofuranu, předchlazenému na -15 °C, se přidá 0,85 ml (6,5 mmol) isobutyl-chlorformiátu. Směs se 10 minut míchá, její teplota se sníží na -50 °C a v jediné dávce se k ní přidá suspenze 0,71 ml (6,5 mmol) N-methylmorfolinu a 1,39 g (6,5 mmol) produktu připraveného postupem podle příkladu lc v 50 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, potom se zfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. Odparek se vyjme ethylacetátem a roztok se postupně promyje 1N vodnou kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi methanolu a chloroformu (5 : 95) jako elučního činidla. Získá se 1,92 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,24 (silikagel; methanol - chloroform 5 : 95).

f. 3(RS)-[2-(methoxykarbonyl)ethylkarbony1]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-1,1,1-trifluor-2-oxopentyl)j-L-prolinamid

K roztoku 6,9 ml (0,079 mol) oxalylchloridu ve 160 ml dichlormethanu, předchlazenému na -60 °C, se pomalu přidá roztok 11,2 ml (0,158 mol) dimethylsulfoxidu ve 12 ml dichlormethanu. Po přidání roztoku 1,90 g (3,95 mmol) produktu z příkladu 13e ve 160 ml dichlormethanu se směs 1 hodinu míchá při teplotě -60 ^eC, potom se k ní pomalu přidá 28,0 ml (0,158 mol) diisopropylethylaminu a reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Výsledný roztok se promyje dvakrát vždy 80 ml IN vodné kyseliny chlorovodíkové a roztokem chloridu sodného, organická vrstva se vysuší síranem sodným a po filtraci se zahustí. Získá se 3,5 g surového produktu, který se vyčistí filtrací přes silikagel za použití ethylacetátu jako rozpouštědla a potom velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi methanolu a chloroformu (5 : 95) jako elučního činidla. Získá se 1,49 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,31. (silikagel; methanol -chloroform 5 : 95). Diagnostické ^H-NMR spektrum (CD3SOCD3, 250 MHz): 0,9 (m, 12H), 3,54 (s, 3H), 3,54 až 3,68 (m, 2H), 4,34 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,48 (dd, 1/2 H), 4,58 (dd, 1/2 H), 8,1 (d, 1H), 8,58'(dd, 1H).

Příklad 14

3(RS)(2-karboxyethyl)karbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 0,20 g (0,42 mmol) produktu z příkladu 13f v 10 ml methanolu se přidá 0,92 ml IN vodného roztoku hydroxidu sodného a směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Po přidání 1 ml IN vodné kyseliny chlorovodíkové se reakční směs k odstranění methanolu zahustí ve vakuu a zbylý vodný roztok se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Získá se 0,18 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,2 (silikagel; methanol - chloroform - trifluoroctová kyselina 5 : 94 : 1).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 2,9, 5,86 (Applied Science Absorbosphere C8, 4,6 mm x 10 cm; acetonitril - voda - trifluoroctová kyselina 20 : : 80 : 0,1; průtok 1,6 ml/min)

Příklad 15

3(RS)—[(4—(ethoxykarbonyl)fenyl)aminokarbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-1,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

a. 2(RS),3(SR)-[(4-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonyl)-L-valyl-N- — C 3 —(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 1,65 g (4,5 mmol) produktu vyrobeného postupem podle příkladu 3d ve 20 ml chloroformu se přikape roztok 0,86 g (4,5 mmol) ethyl-4-isokyanatobenzoátu ve 2 ml chloroformu, reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti a potom se zahustí ve vakuu. Získaný surový produkt poskytne po vyčištění velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi methanolu a chloroformu v poměru 2,5 : 97,5 a směsi methanolu a chloroformu v poměru 5 : 95 jako elučních činidel 1,76 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,34 (silikagel; methanol - chloroform 5 : 95).

b. 3(RS)-[(4-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-1,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 2,75 ml (31,5 mmol) oxalylchloridu v 60 ml dichlormethanu, předchlazenému na -60 °C, se pomalu přidá roztok 4,5 ml (63 mmol) dimethylsulfoxidu v 5 ml dichlormethanu. Směs se 15 minut míchá při teplotě -60 °C, potom se k ní přidá roztok 1,76 g (3,15 mmol) produktu z příkladu 15a v 60 ml dichlormethanu a v míchání při teplotě -60 ’C se pokračuje ještě 1 hodinu. Po pomalém přidáni 11 ml (63 mmol) diisopropylethylaminu se reakční směs nechá ohřát na teplotu místnosti. Výsledný roztok se promyje dvakrát vždy 60 ml 1N vodné kyseliny chlorovodíkové a roztokem chloridu sodného, organická vrstva se vysuší síranem sodným, zfiltruje se a zahustí se ve vakuu. Získá se 2,3 g surového produktu, který se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití stupňové gradientově eluce chloroformem, směsí methanolu a chloroformu v poměru 2,5 : 97,5 a směsí methanolu a chloroformu v poměru 5 : 95. Získá se 0,91 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,42 (silikagel; methanol - chloroform 5 : 95).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 6,77, 11,27 (Col A; acetonitril - voda 45 : 55; průtok ?

ml/min). ^r

Příklad 16

3(RS)-[(4-karboxyfenyl)aminokarbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-1,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 0,48 g (0,86 mmol) produktu z příkladu 15b ve směsi 8 ml methanolu a 7 ml vody se přidá 1 ml 1N vodného roztoku hydroxidu sodného. Směs se 3 hodiny míchá, potom se k ní přidá další 1 ml 1N vodného roztoku hydroxidu sodného a reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Po přidání 2,5 ml 1N vodné kyseliny chlorovodíkové se methanoí odpaří ve vakuu, přidá se 10 ml vody a vodná směs se extrahuje dvakrát vždy 50 ml ethylacetátu. Spojené organické vrstvy se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Získá se 0,42 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

= 0,17 (silikagel; methanoí - chloroform - kyselina octová 5 : 94 : 1).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 2,38, 2,78 (Col A; acetonitril - voda 30 : 70; průtok ml/min).

Příklad 17 (RS)-[(4-fenylbutyl)karbonyl]-L-valyl-N-[ 3 — (4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

a. 2(RS),3(SR)-[(4-fenylbutyl)karbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-1,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 0,728 g (4,08 mmol) 5-fenylvalerové kyseliny, 1,5 g (4,08 mmol) produktu vyrobeného postupem podle příkladu 3d a 1,19 g (8,8 mmol) hydroxybenzotriazolu v 75 ml tetrahydrofuranu se při teplotě 0 ’C přidá 0,906 g (4,4 mmol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se nechá za míchání přes noc pozvolna ohřát na teplotu místnosti, potom se zahustí ve vakuu. Zbytek sse vyjme 60 ml chloroformu a roztok se postupně promyje 30 ml 20% vodné kyseliny citrónové, 30 ml vody, 30 ml 5% vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 30 ml roztoku chloridu sodného. Organická fáze se vysuší síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Získá se 2,0 g surového produktu, který po vyčištění velmi rychlou chromatografií na silikagelu, za použití směsi methanolu a chloroformu v poměru 5 : 95 jako elučního činidla, poskytne 1,0 g žádaného produktu ve formě bílé pénovité látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,5 - 0,55 (silikagel; methanoí - chloroform 5 : 95).

b. 3(RS) —[ (4-fenylbutyl)karbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

K míchanému roztoku 2,10 (24 mmol) oxalylchloridu v 50 ml suchého dichlormethanu, ochlazenému na -60 °C, se pod dusíkem přikape roztok 3,4 ml (48 mmol) dimethylsulfoxidu ve 4 ml suchého dichlormethanu. Výsledný roztok se 15 minut míchá při teplotě -60 ’C, potom se k němu za udržování teploty pod -50 °C pomalu přidá roztok 1,00 g (1,89 mmol) produktu z příkladu 17a ve 30 ml suchého dichlormethanu. Směs se 1 hodinu míchá při teplotě -50 °C, potom se k ní přikape 8,48 ml (48 mmol) diisopropyiethylaminu, reakční směs se nechá pozvolna ohřát na teplotu místnosti a postupně se promyje 1N vodnou kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného. Organická fáze se vysuší síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Surový keton se vyčistí třemi po sobě následujícími velmi rychlými chromatografiemi na silikagelu, za použití následujících elučních činidel:

1) methanol - chloroform (5 : 95),

2.) chloroform (100 %) - methanol-chloroform (3 : 97),

3) diethylether (100 %) - methanol-diethylether (10 : 90).

Získá se 0,2 g žádaného finálního produktu ve formě bílé voskovité pevné látky.

Vysokotlaká kapalinová chrómatografie:

t_R — 6,80, 8,90 (Col A; voda — acetonitril - trifluoroctová kyselina 40 : 60 : 0,1; průtok 0,75 ml/min).

Analýza: pro C27H3N4F₃H3g.0,5H₂0 vypočteno 60,65 % C, 7,35 % H, 7,85 % N; nalezeno 60,68 % C, 7,30 % H, 7,67 % N.

Příklad 18

3(RS)-2-[2-(tricyklo[3,3,1,l³'⁷]dec-l-yl)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[3—(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

a. 4-nitrofenyl-2-(tricyklo[3,3,1,l³'⁷]dec-l-yl)ethylkarbonát

Sloučenina uvedená v názvu se připraví postupem podle příkladu 7a.

b. 2(RS),3(SR)-[2-(tricyklo[3,3,1,1³'⁷]dec-l-yl)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

Roztok 0,758 g (2,19 mmol) produktu z příkladu 18a, 0,768 g (2,09 mmol) produktu připraveného postupem podle příkladu 3d a 2,89 g (20,9 mmol) uhličitanu draselného v 75 ml dimethylformamidu se 18 hodin míchá při teplotě místnosti, potom se zfiltruje a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Zbytek se zředí ethylacetátem, roztok se promyje třikrát 10% vodným roztokem hydroxidu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se směsí pevného uhličitanu draselného a síranu sodného (10 : 90), zfiltruje se a rozpouštědla se odpaří za sníženého tlaku. Surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu, za použití směsi methanolu a chloroformu (2 : 98) jako elučního činidla. Získá se 0,965 g žádaného produktu ve formě bílé pěny.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,14 a 0,18 (silikagel; methanol - chloroform 2 : 98).

c. 3(RS)-[2-(tricyklo[3,3,1,1³'⁷]dec-l-yl)ethoxykarbony1J-L-va. lyl-N-[3-(4-methyl-l,l,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 2,14 g (16,8 mmol) oxalylchloridu ve 30 ml suchého dichlormethanu, ochlazenému na -43 °C, se během 1 hodiny přikape 2,66 g (33,6 mmol) dimethylsulfoxidu ve 20 ml dichlormethanu a potom se stejným způsobem během 30 minut přidá 0,965 g (1,68 mmol) produktu z příkladu 18b. Reakční roztok se ještě 1 hodinu míchá při teplotě -43 °C, potom se k němu přidá 8,50 g (84,0 mmol) triethylaminu, roztok se nechá pomalu ohřát na teplotu místnosti, zředí se dichlormethanem, promyje se 5% vodnou kyselinou chlorovodíkovou a 5% vodným chlornanem sodným, vysuší se síranem hořečnatým, zfiltruje se a rozpouštědlo' se odpaří ve vakuu. Surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu. Po předchozím zpracování silikagelu směsí methanolu a chloroformu (1 : 99) se elucí sloupce chloroformem získá 410 mg žádaného produktu ve formě bílé pěnovíté látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,39 (silikagel; methanol - chloroform 2 : 98).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R =8,12 a 10,75 (Čol A; průtok 1,5 ml/min; acetonitril - voda trifluoroctová kyselina 70 : 30 : 0,1).

Analýza: pro ^C29^H44^N3^F3⁰5'⁰'^75IÍ2⁰ vypočteno 59,52 % C, 7,83 % H, 7,18 % N; nalezeno 59,48 % C, 7,70 % H, 7,17 % N.

Příklad 19

3(RS)-[(2-methoxyethoxy)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-1,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

a. 2-(2-methoxyethoxy)ethyl-4-nitrofenylkarbonát

K roztoku 2,00 g (9,92 mmol) p-nitrofenyl-chlorformiátu v 50 ml diethyletheru se při teplotě 0 ’C přidá 8 ml pyridinu a potom se během 1 hodiny přikape 1,14 g (9,45 mmol) 2-(2-methoxyethoxy )ethanolu ve 25 ml diethyletheru. Výsledná směs se 12 hodin míchá při teplotě místnosti, potom se roztřepe mezi vodu a diethylether. Etherická vrstva se promyje 5% vodnou kyselinou chlorovodíkovou, fosfátovým pufrem o pH 7,0, vysuší se síranem hořečnatým, zfiltruje se a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu (30 : 70) jako elučního činidla. Získá se 1,30 g žádaného produktu ve formě čirého bezbarvého oleje.

Chromatografie na tenké vrstvě:

CZ 278.063 B6

Rf = 0,11 (silikagel; ethylacetát - hexan 3Ů : 70).

b. 2(RS),3(SR)-[(2-methoxyethoxy)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-1,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

Roztok 1,11 g (3,90 mmol) produktu z příkladu 19a, 1,37 g (3,72 mmol) produktu připraveného postupem podle příkladu 3d a 5,14 g (37,2 mmol) uhličitanu draselného ve 100 ml dimethylformamidu se 18 hodin míchá při teplotě místnosti, potom se zfiltruje a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Zbytek se vyjme ethylacetátem, roztok se promyje třikrát 10% vodným roztokem hydroxidu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se pevnou směsí uhličitanu draselného a síranu sodného (10 : 90), zfiltruje se a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu. Elucí ethylacetátem po předchozím zpracování silikagelu směsí triethylaminu a hexanu (1 : 9) se získá 1,13 g žádaného produktu ve formě čiré bezbarvé sklovité hmoty.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,43 a 0,48 (silikagel; methanol - chloroform 1:9).

Analýza: pro ^C22^H38^N3°7^F3 vypočteno 51,45 % C, 7,45 % H, 8,18 % N; nalezeno 51,48 % C, 7,35 % H, 8,01 % N.

c. 3(RS)-[(2-methoxyethoxy)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-1,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 3,26 g (2,57 mmol) v 70 ml suchého dichlormethanu, ochlazenému na -43 ^SC, se během 1 hodiny přikape 4,07 g (51,4 mmol) dimethylsulfoxidu ve 20 ml dichlormethanu, a potom se stejným způsobem přidá během 30 minut 1,10 g (2,14 mmol) produktu z příkladu 19b ve 25 ml dichlormethanu. Po dalším hodinovém míchání roztoku při teplotě -43 °C se přidá 10,80 g (107,0 mmol) triethylaminu, výsledný roztok se nechá pomalu ohřát na teplotu místnosti, zředí se dichlormethanem, promyje se 5% vodnou kyselinou chlorovodíkovou a 5% vodným roztokem chlornanu sodného, vysuší se síranem hořečnatým, zfiltruje se a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi methanolu a chloroformu (2 : 98) jako elučního činidla. Získá se 420 mg žádaného produktu ve formě čirého, slabě žlutého sirupu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,32 a 0,37 (silikagel; methanol - chloroform 5 : 95). Vysokotlaká kapalinová chromatografie: tp = 7,38 a 9,55 (Col A; průtok 0,5 ml/min; acetonitril — voda trifluoroctová kyselina 50 : 50 : 0,1).

Analýza: pro ^C22^H36^N3°7^F3^,O'^75H2° vypočteno 50,33 % C, 7,20 % H, 8,00 % N; nalezeno 50,34 % C, 7,21 % H, 7,58 % N.

Příklad 20

3(RS)-[(4-methoxyfenyl)karbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

a. 2(RS),3(SR)-[(4-methoxyfenyl)karbonyl]-L-valy1-N-[3-(4-methyl-1,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 1,50 g (4,08 mmol) produktu připraveného postupem podle příkladu 3d a 2,06 g (20,4 mmol) triethylaminu v 5Ó ml chloroformu, ochlazenému na 0 °C, se během 1 hodiny přikape 0,766 g (4,49 mmol) 4-methoxybenzoylchloridu ve 40 ml chloroformu a reakční roztok se přes noc míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se vyjme ethylacetátem, roztok se promyje 5% vodnou kyselinou chlorovodíkovou a 20% vodným hydroxidem sodným, vysuší se směsí pevného uhličitanu draselného a síranu sodného (10 : 90) a po filtraci se rozpouštědlo odpaří ve vakuu. Surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi methanolu a chloroformu (5 : 95) jako elučního činidla. Získá se 1,84 g žádaného produktu ve formě bílé pěnovité látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R^ = 0,33 (silikagel; methanol - chloroform 5 : 95).

Analýza: pro ^C24^H34^N3°5^F3*^0z3H2° vypočteno 56,86 % C, 6,88 % H, 8,29 % N; nalezeno 56,80 % C, 6,88 % H, 8,07 % N.

b. 3(RS)-[(4-methoxyfenyl)karbonyl]-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 3,79 g (29,9 mmol) oxalylchloridu v 50 ml suchého dichlormethanu, ochlazenému na -43 °C, se během 40 minut přikape 4,73 g (59,8 mmol) dimethylsulfoxidu ve 20 ml dichlormethanu a potom se k němu stejným způsobem přidá během 30 minut 1,50 g (2,99 mmol) produktu z příkladu 20a ve 20 ml dichlormethanu. Výsledný roztok se ještě 1 hodinu míchá při teplotě -43 °C, potom se k němu přidá 15,10 g (149,5 mmol) triethylaminu a reakční směs se nechá pomalu ohřát na teplotu místnosti. Reakční roztok se zředí dichlormethanem, promyje se 5% vodnou kyselinou chlorovodíkovou a 5% vodným chlornanem sodným, vysuší se síranem hořečnatým a po filtraci se rozpouštědla odpaří ve vakuu. Surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromatografii na silikagelu za použití směsi stejných dílů ethylacetátu a hexanu (po předchozím zpracování silikagelu směsí triethylaminu a hexanu v poměru 10 : 90) jako elučního činidla. Získá se 489 mg žádaného produktu ve formě, bílé pěny.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,15 a 0,19 (silikagel; methanol - chloroform 2 : 98).

Vysokotlaká kapalinová chromátografie:

t_R = 6,62 a 9,72 (Col A; průtok 1 ml/min; acetonitril - voda trifluoroctová kyselina 50 : 50 : 0,1).

Analýza: pro C₂4H₃₂O₅N₃F₃ vypočteno 57,71 % C, 6,46 % H, 8,41 % N;b nalezeno 57,39 % C, 6,67 % H, 8,18 % N.

Příklad 21 (RS)-N²,N²~di[(fenylmethoxy)karbonyl)]-L-lysyl-N-[ 3- (4-methyl-1,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

a. 2(RS),3(SR)-N-[3-(4-methyl-l,l,l-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

Sloučenina uvedená v názvu se připraví postupem popsaným v příkladu 2b.

b. 2(RS),3(SR)-N²,N⁶-di[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-lysyl-N-[3-(4-methyl-1,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

K míchanému roztoku 1,54 g (3,72 mmol) (N²,N⁶-dibenzyloxykarbonyl)-L-l.ysinu, 1,0 g (3,72 mmol) produktu z příkladu 21a a-1,01 g (7,44 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu v 70 ml suchého tetrahydrofuranu se při teplotě 0 °C pod dusíkem přidá 0,84 g (4,09 mmol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0 ^CC, potom se nechá přes noc pomalu ohřát na teplotu místnosti, zfiltruje se, rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v chloroformu. Chloroformový roztok se promyje 20% vodnou kyselinou citrónovou, organická vrstva se vysuší síranem sodným a zfiltruje se. Po odpaření rozpouštědla ve vakuu se získá 3,14 g surového produktu, který po vyčištění velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi chloroformu a methanolu v poměru 97 : 3 jako elučního činidla poskytne 1,50 g žádaného finálního produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,33 až 0,45 (silikagel; chloroform - methanol 95 : 5).

c. 3(RS)-N²,N⁶-di[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-lysyl-N-[3-(4-methyl-1,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

K míchanému roztoku 3,04 g (24 mmol) oxalylchloridu v 50 ml suchého dichlormethanu se při teplotě -60 ’C pod dusíkem přidá roztok 3,59 g (46 mmol) dimethylsulfoxidu ve 30 ml suchého dichlormethanu. Reakční směs se 5 minut míchá při teplotě -60 °C, potom se nechá ohřát na -30 C a přikape se k ní roztok 1,32 g (2,0 mmol) produktu z příkladu 21b ve 30 ml suchého dichlormethanu. Výsledná směs se 1 hodinu míchá při teplotě -25 °C, potom se k ní přidá 7,8 g (77,4 mmol) triethylaminu, směs se nechá pomalu ohřát na teplotu místnosti, potom se promyje 1N vodnou kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší síranem sodným, zfiltruje se a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Získá se 2,6 g produktu, který se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi chloroformu a methanolu v poměru 97 : 3 jako elučního činidla. Získá se 0,99 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,4 až 0,52 (chloroform - methanol 95 : 5; silikagel).

Přiklaď 22

3(RS)—[(fenylmethoxy)karbonyl)]-L-fenylalanyl-N-[3-(4-methylí -1, 1,.1-trif luor-2-oxopentyl) ] -L-prolinamid

a. . 2(RS),3(SR)-[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-fenylalanyl-N-[3-(4—

-methyl-1,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

K míchanému roztoku 1,41 g (4,47 mmol) produktu z příkladu 21a, 1,20 g (4,47 mmol) N-(benzyloxykarbonyl)-L-fenylalaninu a 1,.21 g* (8,94 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu v 75 ml suchého tetrahydrofuranu se při teplotě 0 °C pod dusíkem přidá 1,01 g (4,92 mmol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0 ’C, potom se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Výsledná směs se zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Surový zbytek sě rozpustí v chloroformu, chloroformový roztok se promyje 20% vodnou kyselinou citrónovou a roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Chloroformový roztok se zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Získá se 3,57 g surového produktu, který po vyčištění velmi rychlou chromatografii na silikagelu za použití směsi chloroformu a methanolu (97 : 3) jako elučního činidla poskytne 1,45 g žádaného produktu ve formě bílé pěny.,

Chromatografie na tenké vrstvě:

R£ - 0,39 až 0,60 (silikagel; chloroform - methanol 95 : 5).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

^ťR ⁼ 6,47 a 7,63 (Col A; acetonitril - voda 50 : 50; průtok

2,5 ml/min).

b. 3(RS)-[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-fenylalanyl-N-[3-(4-methyl-1,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

K míchanému roztoku 1,89 g (14,9 mmol) oxalylchloridu ve 40 ml suchého dichlormethanu se při teplotě -60 °C pod dusíkem přikape roztok 2,33 g (29,9 mmol) dimethylsulfoxidu ve 40 ml suchého dichlormethanu. Směs se 0,5 hodiny míchá při teplotě -60 ’C, potom se k ní při teplotě -50 C přidá roztok 1,43 g (2,49 mmol) produktu z příkladu 22a ve 40 ml suchého dichlormethanu, výsledná směs se 1 hodinu míchá při teplotě -60 ^eC, potom se k ní přidá 7,70 g (59,7 mmol) diisopropylethylaminu. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti, promyje se dvakrát 1N vodnou kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného, organická vrstva se vysuší síranem sodným a po filtraci se rozpouštědlo odpaří ve vakuu. Získá se 1,87 g surového produktu, který po vyčištění velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi chloroformu a—methanolu (98 : 2) jako elučního činidla poskytne 0,771 g žádaného produktu ve formě bílé pěny.

Chromatografie na tenké.vrstvě:

Rf = 0.62 až 0,69 (silikagel; chloroform - methanol (95 : 5).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 6,11 a 6,21 (Col A; acetonitril - voda 50 : 50; průtok 2,5 ml/min).

Analýza: pro C28^H32^F3^N3°5 vypočteno 61,41 % C, 5,84 % H, 7,67 % N; nalezeno 61,53 % C, 5,82 % H, 7,67 % N.

Příklad 23

3(RS)-[2-(methoxykarbonyl)ethylkarbonyl]-L-norleucyl~L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

a. N—[2-(methoxykarbonyl)ethylkarbonyl]-L-norleucin

K směsi 6,55 g (50 mmol) L-norleucinu a 250 ml methylenchloridu se při teplotě 0 ’C za intensivního míchání pod dusíkem přikape 100 ml IN roztoku hydroxidu sodného (100 mmol) a potom se přikape 7,52 g (50 mmol) 3-methoxykarbonylpropionylchloridu. Reakční směs se 15 minut míchá při teplotě 0 ’C, potom se chladicí lázeň odstraní a k směsi se přidá 100 ml vody. Hodnota pH se 3N vodnou kyselinou chlorovodíkovou upraví na 1, přidá se 200 ml ethylacetátu a organická vrstva se oddělí. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem, organické vrstvy se spojí, promyjí se roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Roztok se zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, čímž se získá 10,73 g surového produktu. Část tohoto surového produktu o hmotnosti 6,47 g (26,4 mmol) se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi chloroformu a methanolu (97 : 3) jako elučního činidla. Získá se 5,31 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,45 (silikagel; chloroform - methanol - kyselina octová 95 : 4,75 : 0,25).

b. 2(RS),3(SR)-[2-(methoxykarbonyl)ethylkarbonyl]-L-norleucyl-L-valyl-N-[3- (4-methyl-l,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 5,60 g (15,3 mmol) produktu připraveného postupem podle příkladu 3d, 3,75 g (15,3 mmol) produktu z příkladu 23a a 4,13 g (30,6 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu v 70 ml tetrahydro furanu, předchlazenému na 0 °C, se přidá 3,46 g (16,8 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu. Výsledný roztok se nechá pomalu ohřát na teplotu místnosti a přes noc se míchá. Reakční směs se zfiltruje a zahustí se ve vakuu. Zbytek se zředí ethylacetátem, roztok se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití gradientově eluce 100% diethyletherem, směsí diethyletheru a ethylacetátu v poměru 90 : 10 a směsi diethyletheru a ethylacetátu v poměru 50 : 50. Získá se 5,6 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,45 (silikagel; methanol - chloroform 1:9).

c. 3(RS)-[2-(methoxykarbonyl)ethylkarbonyl]-L-norleucyl-L-valyl-N- [ 3- (4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 16,5 ml (0,189 mol) oxalylchloridu ve 350 ml dichlormethanu, předchlazenému na -65 ’C, se pomalu přidá roztok 27,0 ml (0,378 mol) dimethylsulfoxidu ve 27 ml dichlormethanu. Výsledný roztok se 15 minut míchá, potom se k němu přidá roztok 5,60 g (0,00943 mol) produktu z příkladu 23b ve 250 ml dichlormethanu. Směs se 1 hodinu míchá při teplotě -65 °C, potom se k ní přikape 67,0 ml (0,378 mol) diisopropylethylaminu. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti, potom se promyje 1N vodnou kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromatografií na sloupci, silikagelu za použití stupňové gradientově eluce 100% diethyletherem, směsí diethyletheru a ethylacetátu v poměru 50 : 50 a 100% ethylacetátem. Získá se částečně vyčištěný produkt, který se dále čistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu. Pomocí stupňové gradientově eluce 100% chloroformem, směsí methanolu a chloroformu v poměru 2,5 : 97,5 a směsí methanolu a chloroformu v poměru 5 : 95 se získá 3,24 g finálního produktu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 6,80 a 12,98 (Col A; voda - acetonitril 65 : 35, průtok ml/min).

Příklad 24

3(RS)-[(2-karboxyethyl)karbonyl1-L-norleucyl-L-valyl-N-[3-(4-methyl-1,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 2,60 g (4,39 mmol) produktu z příkladu 23c v 95 ml methanolu se přidá 9,5 ml 1N vodného roztoku hydroxidu sodného. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, potom se k ní přidá 10,5 ml 1N vodné kyseliny chlorovodíkové. Výsledná směs se zahustí ve vakuu, k odparku se přidá 35 ml vody a vzniklá suspenze se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného, po vysušení síranem sodným se zfiltruje a zahustí se ve vakuu. Získá se 2,1 g žádaného produktu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

tp = 12,63 a 19,05 (Col A; voda - acetonitril 65 : 35, průtok

0,5 ml/min). Příklad 25

Fenylmethylester 3(RS)-[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-a-glutamyl-L-valyl-N-[3—(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamidu

a. Fenylmethylester 2(RS),3(SR)-[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-a-glutamyl-L-valyl-N-[3- (4-methyl-l,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamidu

K roztoku 1,52 g (4,1 mmol) α-benzylesteru N-benzyloxykarbonyl-L-glutamové kyseliny a 0,45 ml (4,1 mmol) N-methylmorfolinu ve 30 ml tetrahydrofuranu, předchlazenému na -15 ’C, se přidá 0,53 ml (4,1 mmol) isobutyl-chlorformiátu. Reakční směs se 10 minut míchá, ochladí se na -40 °C, přikape se k ní roztok 1/5 g (4,1 mmol) produktu z příkladu 3d ve 30 ml tetrahydrofuranu, směs se přes noc míchá a nechá se pomalu ohřát, na teplotu místnosti. Výsledná směs zfiltruje a zahusti se ve vakuu. Zbytek se vyjme ethylacetátem, roztok se promyje 1N vodnou kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným, zfiltruje se a zahustí se. Získaný surový produkt se podrobí čištění velmi rychlou chromatografií na sloupci silikagelu za použití gradientově eluce 100% chloroformem, směsí methanolu a chloroformu v poměru 2,5 : 97,5 a směsí methanolu a chloroformu v poměru 5 : 95, čímž se získá 2,13 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,43 (silikagel; methanol - chloroform 5 : 95).

b. Fenylmethylester 3(RS)-[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-a-glutamyl-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamidu

K roztoku 5,2 ml (0,059 mol) oxalylchloridu ve 100 ml dichlormethanu, předchlazenému na -65 °C, se opatrně přidá roztok 8,40 ml (0,118 mol) dimethylsulfoxidu v 8 ml dichlormethanu. Výsledný roztok se 15 minut míchá, potom se k němu přikape roztok 2,13 g (2,96 mmol) produktu z příkladu 25a ve 100 ml dichlormethanu. Směs se 1 hodinu míchá při teplotě -60 °C, potom se k ní přikape 20,9 ml (0,118 mol) N,N-diisopropylethylaminu, reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti, promyje se 1N vodnou kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí. Získaný surový produkt se částečně vyčistí velmi rychlou chromatografií na sloupci silikagelu za použití stupňové gradientově eluce 100% diethyletherem, směsí diethyletheru a ethvlácetátu v poměru 50 : 50 a 100% ethylacetátem. Nakonec se produkt vyčistí velmi rychlou chromatografií na sloupci silikagelu za použití stupňové gradientově eluce 100% chloroformem, směsí methanolu a chloroformu v poměru 1 :‘ 99, směsí methanolu a chloroformu v poměru 2 : 98, směsí methanolu a chloroformu v poměru 3 : 97 a směsí methanolu a chloroformu v poměru 5 : 95. Získá se 1,35 g žádaného produktu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 7,2 a 11,5 (Col A; voda - acetonitril 50 : 50; průtok ml/min).

Příklad 26

3(RS)-N²-[2-(methoxykarbony1)ethylkarbony1]-N⁶-[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-lysyl-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,l-trifluor-2-oxopenty1)]-L-pro1inamid

a. N^z-[(2-methoxykarbonyl)ethylkarbonyl]-N⁶-fenylmethoxykarbonyllysin

K roztoku 6,06 g (0,0216 mol) N-benzyloxykarbonyl-L-lysinu ve 160 ml dichlormethanu, předchlazenému na 0 °C, se přidá 43 ml 1N vodného hydroxidu sodného a k směsi se potom za intenzivního mícháni přidá 2,66 ml (0,0216 mol) 3-methoxykarbonylpropionylchloridu. Reakční směs se 15 minut energicky míchá při teplotě 0 ’C, potom se k ní postupně přidá 100 ml vody, 25 ml1N vodné kyseliny chlorovodíkové a 500 ml ethylacetátu. Vrstvy se oddělí, organická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí. Získá se 6,78 g žádaného produktu, který se používá bez dalšího čištění.

b. 2(RS),3(SR)-N²-[2-(methoxykarbony!)ethylkarbonyl]-N⁶-fenyImethoxykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,l-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

K směsi 4,63 g (12,6 mmol) produktu připraveného postupem podle příkladu 3d, 5,00 g (12,6 mmol) produktu z příkladu 26a a 3,76 g (27,8 mmol) hydroxybenzotriazolu v 65 ml tetrahydrofuranu, ochlazené na 0 °C, se přidá 2,85 g (13,9 mmol 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0 ’C, potom se zahřeje na teplotu místnosti a přes noc se míchá. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, zbytek se zředí ethylacetátem a roztok se postupně promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného. Organická fáze se vysuší směsí pevného uhličitanu draselného a síranu sodného (10 : 90), zfiltruje se a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi methanolu a chloroformu (1 : 99) jako elučního činidla. Získá se 6,22 g žádaného produktu ve formě bílé pěnovité látky. ’

Chromatografie. na tenké vrstvě:

Rf = 0,40 (silikagel; methanol - chloroform 5 ·: 95).

c. .. 3 (RS) -N²-[ 2- (methoxykarbony 1) ethylkarbonyl]-N⁶-[ (fenylmetho- xy)karbonyl]-L-lysyl-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,l-trifluor-2-oxopenty1)]-L-pro1inamid

K roztoku 8,8 ml (200 mmol) oxalylchloridu ve 150 ml suchého dichlormethanu, ochlazenému na -43 ^C, se za míchání pod dusíkem přikape roztok 15,9 g (100 mmol) dimethylsulfoxidu v 50 ml suchého dichlormethanu. Stejným způsobem se potom přidá roztok 6,22 g (8,37 mmol) produktu z příkladu 26b v 60 ml dichlormethanu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě -20 °C, potom se k ní přikape 70 ml (400 mmol) triethylaminu. Výsledná směs se nechá pomalu ohřát na teplotu místnosti, ještě další hodinu se míchá, potom se zředí dichlormethanem, promyje se 5% vodným roztokem, chlornanu sodného, vysuší se směsí pevného uhličitanu draselného a síranu sodného (10 : 90), zfiltruje se a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Surový produkt poskytne po vyčištění velmi rychlou chromatografií na silikagelu, za použiti směsi methanolu a chloroformu (1 : 99) jako elučního činidla 4,5 g žádaného produktu ve formě slabě žluté pěnovité látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,51 (silikagel; methanol - chloroform 1 : 9).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 6,99 a 12,01. (průtok 1 ml/min; Col A; voda - acetonitril trifluoroctová kyselina 50 :; 50 : 0,1).

Příklad 27

3(RS)-N²-[(2-karboxyethyl)karbony1]-N⁶-[(fenylmethoxy)karbony 1] -L-lysyl-L-valyl-N- [3-(4-methyl-1_f1>1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

Roztok 2,0 g (2,7 mmol) produktu z příkladu 26c v 60 ml methanolu a 5,4 ml 1N louhu sodného (5,4 mmol) se 12 hodin míchá při teplotě místnosti a potom se jeho pH přidáním 6,0 ml 1N vodné kyseliny chlorovodíkové (6,0 mmol) upraví na hodnotu 7. Methanol se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí v ethylacetátu, roztok se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým, zfiltruje se a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu (pH 5,5) za použití chloroformu jako elučního činidla. Získá se 1,7 g žádaného produktu ve formě bílé pěnovité látky.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,06 a 5,56 (průtok 1 ml/min; Col A; voda - acetonitril trifluoroctová kyselina 50 : 50 : 0,1)

Analýza: pro C₃4^H48N5O9F3.1,⁷5H2O vypočteno 53,78 % C, 6,83 % H, 9,22 % N; nalezeno 53,46 % C, 6,39 % H, 9,03 % N.

Příklad 28

3S(nebo R)-N²,N⁶-di[(fenylmethoxy)karbony1]-L-lysyl-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

a. 2(RS),3(SR)-N²,N⁶-di[(fenylmethoxy)karbonyl]-L-lysyl-L-valyl-N-[3-(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-hydroxypentyl)]-L-prolinamid

K roztoku 1,69 g (4,08 mmol) N²,N⁶-benzyloxykarbonyl-L-lysi~ nu, 1,50 g (4,08 mmol) produktu připraveného postupem podle příkladu 3d a 1,10 g (8,16 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu v 75 ml tetrahydrofuranu se při teplotě 0 °C pod dusíkem za míchání přidá 0,93 g (4,49 mmol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0 ’C, potom se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Výsledná směs se zfiltruje a filtrát se odpaří ve vakuu. Odparek se rozpustí v chloroformu, roztok se promyje IN vodnou kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Síran sodný se odfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. Získá se. 3,94 g surového produktu, který po vyčištění velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi chloroformu a methanolu (95 : 5) jako elučního činidla poskytne 2,48 g žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,36 až 0,56 (chloroform - methanol 95 : 5; silikagel). Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 18,33, 14,99 (Col A; průtok 1,5 ml/min; acetonitril - voda 50 : 50).

Analýza: pro ^C33^H41^F3^N4°7 vypočteno 59,01 % C, 6,24 % H, 8,45 % N; nalezeno 58,89 % C, 6,33 % H, 7,89 % N.

b. 3S(nebo R)-N²,N⁶-di[(fenylmethoxy)karabonyl]-L-lysyl-L-valyl-N-[3—(4-methyl-l,1,1-trifluor-2-oxopentyl)]-L-prolinamid

K roztoku oxalylchloridu ve 40 ml suchého dichlormethanu se pod dusíkem při teplotě -60 ’C za míchání přidá roztok 2,8 g (36,13 mmol) dimethylsulfoxidu ve 40 ml suchého dichlormethanu, potom se k směsi při teplotě -50 °C přidá roztok 2,30 g (3,01 mmol) produktu z příkladu 28a ve 40 ml suchého dichlormethanu. Výsledná směs se 1 hodinu míchá při teplotě -60 °C, potom se k ní přidá 7,290 g (72,26 mmol) triethylaminu a reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Směs se dvakrát promyje IN vodnou kyselinou chlorovodíkovou, potom roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Síran sodný se odfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. Získá se 2,67 g surového produktu, který po vyčištění velmi rychlou chromatografií na silikagelu za použití směsi chloroformu a methanolu (97 : 3) jako elučního činidla poskytne 64 mg žádaného produktu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,6 (chloroform — methanol 95 : 5).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 5,29 (acetonitril - voda (60 : 40); průtok 1,5 ml/min).

Analýza: pro .Η₂θ vypočteno 58,53 % C, 6,72 % H, 8,98 % N;

nalezeno 58,95 % C, 6,59 % H, 8,74 % N.

Příklad 29

3(RS)-1-(12-methoxy-12-oxododecyloxy)karbonyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = CH3OCO(C!^).^, A = 0C0, n = 1]

a. Methyl-12-hydroxydodekanoát

Směs 4,0 g (18,5 mmol) 1-hydroxydodekanové kyseliny, 450 ml methanolu, 2,5 ml koncentrované kyseliny sírové a 3 ml molekulárního síta (3 x 10”¹⁰m) se 16 hodin míchá za varu pod zpětným chladičem. Reakční směs se neutralizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, zahustí se ve vakuu a odparek se roztřepe mezi diethylether a vodu. Etherický roztok se promyje vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Získá se 3,94 g žádaného produktu ve formě bílé pevné látky.

NMR (perdeuterodimethylsulfoxid, hodnoty δ):

83,65 (3H, s), 1,7 - 1,0 (22H, m).

b. ll-methoxykarbonylundecyl-4-nitrofenyl-karbonát

Za použití metody popsané v příkladu 7a se produkt z příkladu 29a převede na sloučeninu uvedenou v názvu. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií za použití směsi ethylacetátu a hexanu (1 : 9) jako elučního činidla se získá sloučenina uvedená v názvu ve výtěžku 59 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,20 (ethylacetát - hexan 1:9).

c. 2(RS),3(SR)-1-(12-methoxy-12-oz~ídodecyloxy)karbonyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec vila, R¹ = ch(ch3)ch3, r³ = ch3oco(ch₂)_1;l, a = oco, n = li

Produkt z příkladu 29b se za použití metody podle příkladu 7b nechá reagovat s materiálem připraveným postupem podle příkladu 2b. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií za použití směsi acetonu a hexanu (3 : 7) jako elučního činidla se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 45 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,43 (Col A; acetonitril - voda 35 : 65, FR = 2,0).

d. 3(RS) -rl~(12-methoxy-12-oxododecyloxy)karbonyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid[vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = CH3OCO(CH₂)_1;l, A = OCO, n = 1],

K 1,1 mmol produktu z příkladu 29c se přidá 65 ml dimethylsulfoxidu a 50 mmol acetanhydridu. Výsledný roztok se 18 hodin míchá při teplotě místnosti a potom se zředí diethyletherem. Organický roztok se promyje třikrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi stejných dílů diethyletheru a hexanu jako elučního činidla. Získá se sloučenina uvedená v názvu. Výtěžek činí 100 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R — 12,73 (Col A; acetonitril - voda 60 : 40; FR· — 2,0).

Analýza: pro C₂₂H₂₈F₃N₃O₅.0,4H₂O vypočteno 55,91 % C, 8,00 % H, 5,21 % N; nalezeno 56,05 % C, 8,00 % H, 5,19 % N.

Příklad 30

3(RS)—1—(12-hydroxy-12-oxododecyloxy)karbonyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = ch(ch3)ch3, R ³ = HOCO(CH2)_1χ, A = OCO, n = 1)

Analogickým postupem jako v příkladu 14 se produkt z příkladu 29d převede na sloučeninu uvedenou v názvu. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií za použití směsi stejných dílů ethylacetátu a hexanu jako elučního činidla se získá žádaný produkt ve výtěžku 10 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,55 (Col A, acetonitril - voda 60 : 40, FR = 2,0).

Analýza: pro C₂₄H_3gF₃N₂0₆.0,lH₂0 vypočteno 56,48 % C, 7,74 % H, 5,49 % N; nalezeno 56,48 % C, 7,96 % H, 5,23 % N.

Příklad 31

3(RS)-1-[l-oxo-5-(fenylmethoxykarbonylamino)pentyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0CH2OCONH(CH₂)₄, A = CO, n = 1]

a. 5-(fenylmethoxykarbonylamino)valerová kyselina

K roztoku 5,00 g (42,68 mrnol) 5-aminovalerové kyseliny ve 32,0 ml (32,0 mrnol) 2N louhu sodného, ochlazenému na 0 °C, se za míchání současně přidá 7,65 g (6,40 ml; 44,81 mrnol) benzyl-chlorformiátu a 32,0 ml (32,0 mrnol) 2N louhu sodného. Reakční roztok se 0,5 hodiny míchá při teplotě 0 °C a potom se promyje diethyletherem. Etherová vrstva se 6N kyselinou chlorovodíkovou okyselí na pH 2,0, čímž se produkt z roztoku vysráží. Sloučenina uvedená v názvu se odfiltruje a po promytí vodou se vysuší ve vakuové sušárně. Získá se 8,55 g (80,0 %) čistého produktu ve formě bílé pevné látky o teplotě tání 104 až 105 ^eC.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,48 (methanol - chloroform - kyselina octová 3 : 97 : 0,1)

b. 2(RS),3(SR)-1-[l-oxo-5-(fenylmethoxykarbonylamino)pentyl]-N— -[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpěntyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0CH2OCONH(CH₂)₄, A = CO, n = 1)

K roztoku 0,47 g (1,86 mrnol) produktu z příkladu 31a, 0,50 g (3,72 mrnol) hydroxybenzotriazolu a 0,40 g (1,95 mrnol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu v 50 ml chloroformu, ochlazenému na 0 °C, se za míchání přidá 0,50 g (1,86 mrnol) produktu připraveného za použití metody popsané v příkladu 2b. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, potom se zfiltruje a zahustí se na sirupovitý odparek, který se částečně rozpouští v ethylacetátu. Z ethylacetátového roztoku se odfiltrují nerozpustné podíly a roztok se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 5% vodným roztokem kyseliny citrónové a roztokem chloridu sodného. Po vysušení síranem sodným se organický roztok zahustí a surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromátografií za použití směsi methanolu a chloroformu (4 : 96) jako elučního činidla. Získá se 0,78 g (84 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílé pánovité látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,4 (methanol - chloroform 4 : 94).

c. 3(RS)-1-[l-oxo-5-(fenylmethoxykarbonylamino)pentyl]-N-(3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0CH2OCONH(CH₂)₄, A = CO, n = 1]

-CZ 278063 B6

K1 mmol produktu z příkladu 31b se přidá 85 mmol dimethylsulfoxidu. a 64 mmol acetanhydridu. Výsledný roztok se 18 hodin míchá při teplotě místnosti, potom se vylije do 50 ml vody a směs se 1 až 4 hodiny míchá. Surový produkt se extrahuje ethylacetátem, ethylacetátový roztok se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi chloroformu a methanolu (97 : 3) jako elučního činidla. Získá se žádaný produkt ve výtěžku 58 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 6,56 a 7,79 (Col A; voda - acetonitril 60 : 40; FR = 2,0).

Analýza: pro vypočteno 54,74 % C, 6,69 % H, 7,98 % N; nalezeno 54,87 % C, 6,20 % H, 8,02 % N.

Příklad 32

3(RS)-1-(l-oxo-4-fénoxybutyl)-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ » CH(CH3)CH3, R³ = 0O(CH2)₃, A = CO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-1-(l-oxo-4-fénoxybutyl)-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ = CH(CH3)CH3,. R³ = 0O(CH2)₃, A = CO, n = 1]

K 0,25M roztoku 4-fenoxybutanové kyseliny v tetrahydrofuranu se v jediné dávce přidá ekvimolární množství karbonyldiimidazolu. Směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti, potom se k ní přidá ekvimolární množství produktu připraveného postupem podle příkladu 2b (v jediné dávce). Reakční směs se přes noc míchá, potom se k ní přidá nadbytek nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a směs se extrahuje ethylacetátem. Ethylacetátové extrakty se promyjí 1N kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a po filtraci se zahustí ve vakuu. Získá se sloučenina uvedená v názvu ve výtěžku 88 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,53 a 0,61 (methanol - dichlormethan 1 : 9).

b. 3(RS)-1-(l-oxo-4-fénoxybutyl)-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0O(CH2)₃, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 32a se postupem podle příkladu 31c převede na sloučeninu uvedenou v názvu. Po krystalizací z vody se získá žádaný produkt ve výtěžku 39 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf — 0,68 a 0,64 (dichlormethan - methanol 9 : 1).

Analýza: pro ^C21^H27^F3^N2°4:^1,25H2° vypočteno 55,93 % C, 6,59 % H, 6,21 % N; nalezeno 55,88 % C, 6,67 % H, 6,15 % N.

Příklad 33

3(RS)-1-[2-(4-morfolinyl)ethoxykarbonyl]-N—[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 4-morfolinyl-(Ch2)₂, A = 0C0, n = 1]

a. 2-(4-morfolinyl)ethyl-4-nitrofenylkarbonát-hydrochlorid

Analogickým postupem jako v příkladu 7a (ale bez použití pyridinu a bez promývání kyselinou) se 2-(4-morfolinyl)ethanol nechá reagovat s 4-nitrofenyl-chlorformiátem. Surový produkt se odfiltruje a po promytí diethyletherem se vysuší vé vakuu. Produkt získaný ve výtěžku 91 % se bez další charakterizace používá k následujíc! reakci.

b. 2(RS),3(SR)-1-[2-(4-morfolinyl)ethoxykarbonyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 4-morfolinyl-(CH2)₂, A - 0C0, n « 1]

Za použití postupu podle příkladu 7b se produkt z příkladu 33a nechá reagovat s produktem připraveným metodou podle příkladu 2b.. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií za použití směsi methanolu a chloroformu (1 : 99) se ve výtěžku 68 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromátografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,34 (methanol - chloroform 5 : 95; FR = 2,0).

c. 3(RS)-l-[2—(4-morfolinyl)ethoxykarbonyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 4-morfolinyl-(CK2)₂, A = 0C0, n =1]

K 1,1 mmol produktu z příkladu 33b se přidá 65 mmol dimethylsulfoxidu a 50 mmol acetanhydridu. Výsledný roztok se 18 hodin míchá při teplotě místnosti a potom se zředí dlchlormethanem. Organický roztok se promyje třikrát nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi methanolu a chloroformu (2 : 98) jako elučního činidla. Ve výtěžku 37 % se získá sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 8,44 a 9,88 (Col A; acetonitril - voda 60 : 40; FR = 2,0).

Analýza: pro ^C18^H28^F3^N3°5*^1/0Η2° vypočteno 48,97 % C, 6,85 % H, 9,51 % N;

nalezeno 48,97 % C, 6,61 % H, 9,73 % N.

Příklad 34

3(RS)—1-[l-oxo-6-[2.--(2-pyridyl)ethoxy]karbonylaminohexyl]-N— -[3—(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ =CH(CH3)CH3, R³ = (2-pyridyl)-(CH2)₂OCONH-(CH₂)₅, A = CO, n = 1]

I

a. 4-nitrofenyl-2-(2-pyridyl)ethylkarbonát

K roztoku 2,26 g (11 mmol) p-nitrofenyl-chlorformiátu se při teplotě 0 °C pod dusíkem za míchání přidá roztok 1,38 g (11 mmol) 2-pyridinethanolu ve 20 ml diethyletheru. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0 ’C, potom se vyloučená sraženina pod dusíkem odfiltruje a překrystaluje se z absolutního ethanolu. Získá se 1,53 g (58 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě špinavě bílých krystalů o teplotě tání 125 až 127 ’C.

b. 2(RS),3(SR)-l-[l-oxo-6-[2-(2-pyridyl)ethoxy]karbonylaminohexyl]-N-[3—(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)j-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = (2-pyridyl)-(CH2)₂OCONH(CH₂)₅, A = CO, n = 1)

Roztok 0,75 g (1,8 mmol) aminového derivátu vyrobeného v příkladu 50b, 0,675 g (1,8 mmol) produktu z příkladu 34a a 0,52 ml (3,6 mmol) triethylaminu ve 25 ml acetonitrilu a 25 ml vody se 2 dny míchá při teplotě místnosti, potom se rozpouštědlo odpaří ve vakuu. Surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi methanolu a chloroformu (2,5 : 97,5) jako elučního činidla. Získá se 1,13 mmol (60 %) žádané sloučeniny ve formě světle žluté pevné látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,5 (methanol - chloroform 5 : 95).

c. 3(RS)-1-[l-oxo-6-[2-(2-pyridyl)ethoxy]karbonylaminohexyl]-N-

-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = (2-pyridyl)-(CH2)₂OCONH(CH₂)₅,

A = CO, n = 1]

Sloučenina uvedená v názvu se připraví z produktu připraveného v příkladu 34b postupem podle příkladu 31c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií se za použití směsi methanolu a dichlormethanu (3 : 97) jako elučního činidla získá produkt uvedený v názvu ve výtěžku 10 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

tjj = 1,84 (Col A; voda - acetonitril 60 : 40, FR = 2,0).

Analýza: pro ^C25^H35^F3^N4°5-°'^5H2° vypočteno 55,85 % C, 6,75 % H, 10,40 % N; nalezeno 56,08 % C, 6,82 % H, 10,43 % N.

Příklad 35

3(RS)-1-[2-fenylmethoxy-1-(fenylmethoxymethyl)ethoxykarbonyl]-N-(3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = (0CH2OCH₂)₂CH, A = OCO, n = 1)

a. 4-nitrofenyl-2-fenylmethoxy-1-(fenylmethoxymethyl)ethylkarbonát

K roztoku 1,48 g (7,34 mmol) p-nitrofenyl-chlorformiátu ve 30 ml diethyletheru se za míchání při teplotě 0 až 5 ^eC přikape 0,74 g (7,34 mmol) triethylaminu. K směsi se potom při teplotě mezi 0 “C a 5 °Cpřidá roztok 2,0 g (7,34 mmol) 1,3-dibenzylglycerolu ve 20 ml diethyletheru, reakční směs se 2 hodiny míchá při teplotě 0 až 5 ’C, potom se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se přes noc. Výsledná směs se zfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. Získá se 3,6 g žlutého olejovitého zbytku, který po vyčištění velmi rychlou chromátografií za použití směsi hexanu, a diethyletheru (8 : 2) jako elučního činidla poskytne 2,19 g (68 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě čirého oleje.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,33 (hexan - ether 7:3).

b. 2(RS),3(SR)-l-[2-fenylmethoxy-l-(Fenylmethoxymethyl)ethoxykarbonyl ]-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = (0CH2OCH₂)₂CH, A = OCO, n = 1]

Analogickým postupem jako v příkladu 7b se produkt z příkladu 35a nechá reagovat s produktem připraveným za použití metody popsané v příkladu 2b. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií za použití směsi chloroformu a ethylacetátu jako elučního činidla (95 : 5) se získá ve výtěžku 62 % sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = ⁵ ,81 a 6,29 (Col A; voda - acetonitril 40 : 60; FR = 2,0).

c. 3(RS)-1-[2-fenylmethoxy-1-(fenylmethoxymethyl)ethoxykarbonyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = (0CH2OCH₂)₂CH, A = OCO, n = 1]

Produkt z příkladu 35b se oxiduje za použití metody popsané v příkladu 31c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií za použití směsi chloroformu a ethylacetátu (98 : 2) jako elučního činidla se ve výtěžku 13 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 5,62. (Col A; voda - acetonitril 40 : 60; FR = 2,0).

Analýza: pro ^C29^H35^F3^N2°6*⁰'^25H2° vypočteno 61,20 % C, 6,28 % H, 4,92 % N; nalezeno 61,28: % C, 6,34 % H, 5,15 % N.

Příklad 36

3(RS)-1-[l-oxo-4-(l-oxo-2-fenoxyethylamino)butyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0OCH2CONH(CH₂)₃, A = CO, n = 1]

a. . Ethyl-4-( l-oxo-2-fenoxyethylamino) butanoát

K míchané směsi 3,4 g ethyl-4-aminobutanoát-hydrochloridu a 2,76 ml fenoxyacetylchloridu v 50 ml diethyletheru a 50 ml vody se v jediné dávce přidá 4,2 g hydrogenuhličitanu sodného. Po 2 hodinách se vrstvy oddělí, organická fáze se promyje IN kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a po filtraci se rozpouštědlo odpaří ve vakuu.. Získá se 3,1 g (53 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě oleje.

b. 4-(1-oxo-2-fenoxyethylamino)butanová kyselina

Směs 3,1 g produktu z příkladu 36a a 15 ml IN louhu sodného se 6 hodin míchá při teplotě místnosti. Výsledný roztok se okyselí 2N kyselinou chlorovodíkovou, vyloučená sraženina se odfiltruje a po promytí vodou se vysuší ve vysokém vakuu. Získá se 2,5 g (95 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílé pevné látky o teplotě tání 91 až 94 ^eC.

c. 2(RS),3(SR)-l-[l-oxo-4-(l-oxo-2-fenoxyethylamino)butyl]-N-(3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Víla, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0OCH2CONH(CH₂)₃, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 36b se nechá analogickým postupem jako v příkladu 32a reagovat s produktem připraveným za použití metody popsané v příkladu 2b. Po vyčištění extrakcí kyselinou a bází se ve výtěžku 92 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,43 a 0,48 (methanol - dichlormethan 1:9).

d. 3(RS)-1-[l-oxo-4-(l-oxo-2-fenoxyethylamino)butyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ ch(ch3)ch3, R³ = </>och2conh.(ch₂)₃, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 36c se oxiduje za použití metody popsané v příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií za použití směsi methanolu a dichlormethanu (3 : 97) jako elučního činidla se ve výtěžku 75 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,62 a 6,02 (Col A; acetonitril - voda 65 : 35; FR = 2,0).

Analýza: Pro ^c23^H30^F3^N3°5 vypočteno 56,26 % C, 6,28 % H, 8,56 % N; nalezeno 56,28 % C, 6,40 % H, 8,30 % N.

Příklad 37

3(RS)-1-(4-methoxy-l,4-dioxobutyl)-N-[3-(1,1,l-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = CH3OCO(CH₂)₂, A = CO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)—1—(4-methoxy-l,4-dioxobutyl)-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ =. CH3OCO(CH₂)₂, A = CO, n = 1]

K míchané směsi 1,34 g produktu připraveného postupem popsaným v příkladu 2b, 50 ml dichlormethanu a 6 ml 1N louhu sodného se za chlazení vodou s ledem přikape 0,75 g 3-methoxykarbonylpropionylchloridu. Po 1 hodině se vrstvy oddělí, organická fáze se vysuší síranem sodným a po filtraci se odpaří. Získá se 1,1 g (58 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílého prášku.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f =0,57 (methanoí - dichlormethan 1:9).

b. 3(RS)-1-(4-methoxy-l,4-dioxobutyl)-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = ch(ch3)ch3 r³ = ch3oco(ch₂)₂, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 37a se oxiduje postupem popsaným v příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií za použití směsi methanolu a dichlormethanu (2 : 98) jako elučního činidla se získá sloučenina uvedená v názvu ve výtěžku 71 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf— 0,58 (methanol -dichlormethan 1 : 9).

Analýza: pro ^C16^H23^F3^N2’⁰'^75H2° vypočteno 48,79 % C, 6,27 % H, 7,11 % N; nalezeno 49,04 % C, 6,12 % H, 6,83 % N.

Příklad 38 (RS)-1- [3-( 1,1-dimethylethoxykarbonyl)amino-l-oxopropyl]-N-[ 3-(1.,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, r^x =ch(ch3)ch3, r³ = (ch3)₃coconh(ch₂|₂, A = CO, n = 1] a·. 2(RS),3(SR)-1-[3 -(1,1-dimethylethaxykarbonyl)amino-l-oxo— propyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ - CH(CH3)CH3, R³ = (CH3)₃coconh(ch₂)₂, A = CO, n - i]

Za použití metody popsané v příkladu 32a se 3-(B0C-amino)propanová kyselina nechá reagovat s produktem připraveným postupem podle příkladu 2b. Ve výtěžku 80 % se získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,35 (methanol - dichlormethan 1 : 9).

b. 3(RS)-1-[3-(1,1-dimethylethoxykarbonyl)amino-l-oxopropyl]-N— —[3—(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = (CH3)₃COCONH(CH₂)₂, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 38a se oxiduje za použití metody popsané v příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií za použití směsi methanolu a dichlormethanu (2 : 98) jako elučního činidla se získá sloučenina uvedená v názvu ve výtěžku 61

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,46 (methanol - dichlormethan 1 : 9).

Analýza: pro C-^₉H₃₀F₃N₃0₅.0,75H₂0 vypočteno 50,83 % C, 6,62 % H, 9,39 % N; nalezeno 51,18 % C, 7,00 % H, 9,28 % N.

Příklad 39

3(RS)-1-(3-benzoylamino-l-oxopropyl)-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R = CH(CH₃)CH₃, R = 0CONH(ČH₂)₂, A = CO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-l-(3-benzoylamino-l-oxopropyl)-N-[3-(l,l,l-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0CONH(CH2)₂, A = CO, n = 1]

Za použití postupu podle příkladu 32a se 3-(benzoylamino)propanová kyselina nechá reagovat s produktem připraveným metodou popsanou v příkladu 2b. Ve výtěžku 83 % se získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké- vrstvě:·

Rf =0,39 a 0,42 (methanol - dichlormethan 1 : 9). ·

b. 3(RS)—1—(3-benzoylamino-l-oxopropyl)-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0CONH(CH2)₂, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 39a se oxiduje postupem podle příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol dichlormethan 2 : 98) se ve výtěžku 48 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,54	(methanol - dichlormethyn	1	: 9).
Analýza: pro C21^26^3N3°4
vypočteno	57,14 % C, 5,94	% H,	9,52	%	N;
nalezeno	57,12 % C, 6,59	% H,	9,45	%	N.

Příklad 40

3(RS)-1-[3-(1-oxo-2,2-difenylethyl)amino]-1-oxobuty1-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 02CHCONH(CH₂)₃, A = CO, n = 1]

a. Ethyl-3-(1-oxo-2,2-difenylethyl)aminobutanoát

K míchanému roztoku 2,51 g ethyl-4-aminobutyrát-hydrochloridu a 3,46 g difenylacetylchloridu v 50 ml vody a potom jediné dávce 3,4 g hydrogenuhličitanu sodného. Po 2 hodinách se vrstvy oddělí, organická fáze se vysuší síranem sodným a po filtraci se odpaří. Získá se 3,5 g (72 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílé pevné látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,71 (methanol - dichlormethan 5 : 95).

b. 3-(l-oxo-2,2-difenylethyl)aminobutanová kyselina

3,5 g produktu z příkladu 40a se ve 30 ml 1N louhu sodného a 10 ml ethanolu 10 hodin míchá. Výsledný roztok se extrahuje diethyletheřem, vodná fáze se okyselí 2N kyselinou chlorovodíkovou, vysrážený pevný materiál se shromáždí a po promytí vodou se vysuší ve vysokém vakuu. Získá se 2,9 g (93 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílého prášku.

c. 2(RS),3(SR)-l-[3-(l-Oxo-2,2-difenylethyl)amino-l-oxobutyl]-N-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec· Vila, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 02CHCONH(CH₂>3' ^{A = C0}' n = 1]

Produkt z příkladu 40b se analogickým postupem jako v příkladu 32a nechá reagovat s produktem připraveným za použití metody popsané v příkladu 2b. Získá se sloučenina uvedená v názvu. Výtěžek činí 81 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,13 (methanol - dichlormethan 5 : 95).

d. 3(RS)-1-[3-(1-oxo-2,2-difenylethyl)amino-l-oxobutyl]-N-

-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 02CHCONH(CH₂)₃, A = CO, n = 1] • Produkt z příkladu 40c se oxiduje za použití metody podle příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - dichlormethan 2 : 98) se ve výtěžku 27 % získá sloučenina· uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,24 (methanol - dichlormethan 5 : 95).

Analýza: pro ^C29^H34^F3^N3^O4^,1/0H2° vypočteno 61,31 % C, 6,48 % H, 7,39 % N; nalezeno 61,58 % C, 6,77 % H, 7,43 % N.

Příklad 41

3(RS)-1-[2-(2-methoxyethoxy)ethoxykarbonyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = CH3O(CH₂)₂O(CH₂)₂, A = 0C0, n = 1]

a.

2(RS),3(SR)-1-[2-(2-methoxyethoxy)ethoxykarbonyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxv-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, r¹ = ch(ch3)ch3, r³ = ch^o(ch2)₂o(ch₂)₂, A = 0C0, n = 1]

Za použití metody popsané v příkladu 7b se produkt z příkladu 19a nechá reagovat s produktem připraveným postupem podle příkladu 2b. Za použití velmi rychlé chromatografie na suchém sloupci s gradientovou elucí směsmi acetonu a hexanu od poměru 10 : 90 do poměru 50 : 50 se ve výtěžku 75 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,30 a 0,35 (aceton ~ hexan 40 : 60).

b. 3(RS)-l-[2-(2-methoxyethoxy)ethoxykarbonyl]-N-[3-(1,1,1-

-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec la, R¹ =

CH(CH₃)CH₃, R³ = CH₃O(CH₂)₂O(CH₂)₂, A = OCO, n = 1]

Produkt z příkladu 41a se oxiduje metodou popsanou v příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (aceton - chloroform 1 : 3) se ve výtěžku 42 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

tp = 5,69 (Col A; voda - acetonitr.il 75 : 25; FR = 2,0).

Analýza: pro C₁₇H₂7F₃N₂0g vypočteno 49,39 % C, 6,83 % H, 6,78 % N;

nalezeno 49,27 % C, 6,80 % H, 6,48 % N.

Příklad 42

3(RS)-1-[1,4-dioxo-4-(fenylmethylamino)butyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec la, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0CH2NHCO(CH₂)₂, A = CO, n = 1]

a. 4-OXO-4-(fenylmethylamino)butanová kyselina

Směs 10,7 g benzylaminu a 10 g anhydridu kyseliny jantarové se v 1 litru tetrahydrofuranu 2 dny míchá. Vyloučený pevný materiál se odfiltruje a rozpustí se ve 110 ml IN louhu sodného. Vodná fáze se promyje diethyletherem a za chlazení vodou s ledem se okyselí koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou. Pevný produkt se shromáždí, promyje se vodou a vysuší se ve vysokém ve vakuu. Získá se 10,9 g (53 %) sloučeniny uvedené v názvu, formě bílého prášku o teplotě tání 137,5 až 138 °C.

b. 2(RS),3(SR)-1-[1,4-dioxo-4-(fenylmethylamino)butyl]-N-[3-(1,-1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ = CH(CH₃)CH₃ = 0CH₂NHCO(CH₂)₂, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 42a se za použití metody popsané v příkladu 32a nechá reagovat s produktem připraveným postupem podle pří •'.ladu 2b. Ve výtěžku 74 % se získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,48 (methanol - dichlormethan 1:9).

c. 3(RS)-1-[ 1,4-dioxo-4-(fenylmethylamino)butyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ =

CH(CH₃)CH₃, R³ = 0CH₂NHCO(CH₂)₂/ A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 42b se oxiduje postupem podle příkladu . 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - dichlormethan 2 : 98) se ve výtěžku 40 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,56 (methanol - dichlormethan 1:9).

Analýza: pro ^C22^H28^F3^N3°4 vypočteno 58,10 % C, 6,20 % H, 9,23 % N; nalezeno 57,90 % C, 6,36 % H, 9,27 % N.

Příklad 43

3(RS)-1-[1—oxo—3—(fenylmethoxykarbonylamino)propyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxópentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0CH2GCONH(CH₂)₂, A = CO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-l-[l-oxo-3-(fenylmethoxykarbonylamino)propyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0CH2OCONH(CH₂)₂, A = CO, n = 1]

Za použití postupu podle příkladu 32a se benzyloxykarbonyl-B-alanin nechá reagovat s produktem připraveným podle příkladu 2b. Ve výtěžku 82 % se získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,59 (methanol - dichlormethan 1 : 9).

b. 3(RS)-l-[l-oxo-3-(fenylmethoxykarbonylamino)propyl]-N-

-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0CH2OCONH(CH₂)₂, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 43a se oxiduje za použití postupu podle příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - dichlormethan 2 : 98) se ve výtěžku 35 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,23 (methanol — dichlormethan 5 : 95).

Analýza: pro ^c22^H28^F3^N3°5^,0'^4H2° vypočteno 55,20 % C, 6,06 % H, 8,77 % N;

nalezeno 55,28 % C, 6,25 % H, 8,55 % N.

Příklad 44

3(RS)-1-[l-oxo-4-(fenylmethoxykarbonylamino)butyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = -CH(CH3)CH3, R³ = 0CH2OCONH(CH₂)₃, A = CO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-1-[l-oxo-4-(fenylmethoxykarbonylamino)butyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0CH2OCONH(CH₂)₃, A = CO, n = 1]

Analogickým postupem jako v příkladu 32a se benzyloxykarbonyl-4-aminobutanová kyselina nechá reagovat s produktem připraveným postupem podle příkladu 2b, za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, ve výtěžku 72 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,47 (diethylether - ethylacetát 1:1).

b. 3(RS)-1-[l-oxo-4-(fenylmethoxykarbonylamino)butyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ CH(CH3)CH3, R³ = 0CH2OCONH(CH₂)₃, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 44a se oxiduje za použití metody popsané v příkladu 61c. Po vyčištění preparativní chromatografií na tenké vrstvě (methanol - chloroform 2,5 : 97,5) se ve výtěžku 32 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,65 a 0,68 (methanol - chloroform 1:9).

Příklad 45

3R(nebo S)-1-[l-oxo-4-fenoxy-2-(2-fenoxyethyl)butyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³= [0O(CH2)₂]₂CH, A = CO, n = 1]

a. Diethyl-2,2-di(2-fenoxyethyl)malonát

K míchanému roztoku 2,3 g sodíku v 50 ml absolutního ethanolu se přidá nejprve 15,2 ml diethyl-malonátu a potom 15,7 g 2-fenoxyethylchloridu. Reakční směs se 12 hodin zahřívá k varu pod zpětným chladičem, potom se ethanol odpaří ve vakuu a zbytek se zředí 40 ml vody. Vodná fáze se extrahuje diethylethérem, spojené etherické vrstvy se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a po filtraci se odpaří. Destilací odparku v límcové baňce se získá 12,2 g (27 %) diesteru uvedeného v názvu, ve formě čiré kapaliny o teplotě varu 155 až 175 ’C/ 106 Pa.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,34 (dichlormethan).

b. 4-fenoxy-2-(2-fenoxyethyl)butanová kyselina

Směs 10,0 g produktu z příkladu 45a a 17,7 g hydroxidu draselného se ve 22 ml vody 4 hodiny zahřívá k varu pod zpětným chladičem. Reakční směs se ochladí, okyselí se koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou, vysrážený pevný materiál se shromáždí, a po promytí vodou se vysuší na vzduchu. Získá se 8,44 g pevné látky, která se 2 hodiny zahřívá na 170 °C a potom se ochladí. Po překrystalování z cyklohexanu se získá 4,1 g (93 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě jemných bílých jehliček tajících při 85 až 86 ^eC.

Analýza: pro C₁₈H₂₀O₄ vypočteno 71,98 % C, 6,71 % H; nalezeno 71,92 % C, 6,71 % H.

c. 4-fenoxy-2-(2-fenoxyethyl)butanoylchlorid

Směs 1,5 g produktu z příkladu 45b a 0,73 ml thionylchloridu se 1 hodinu zahřívá na parní lázni, potom se reakční směs odpaří. V kvantitativním výtěžku se získá chlorid kyseliny uvedený v názvu, který se přímo používá k další reakci.

d. 2(RS),3(SR)-1-[l-oxo-4-fenoxy-2-(2-fenoxyethyl)butyl]-N— -[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec vila, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = [0O(CH2)₂]CH, A = CO, n = 1]

Analogickým postupem jako v příkladu 37a se produkt z příkladu 45c nechá reagovat s produktem připraveným za použití metody podle příkladu 2b. Ve výtěžku 95 % se získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,47 a 0,54 (diethylether).

e. 3R(nebo S)-l-[l-oxo-4-fenoxy-2-(2-fenoxyethyl)butyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec la, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = [0O(CH2)₂J₂CH, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 45d se oxiduje za použití metody podle příkladu 61c. Získá se surový produkt ve formě směsi diastereomerů, která se rozdělí velmi rychlou chromatografií za použití gradientově eluce směsmi diethyletheru a hexanu v poměru od 60 : 40 do 75 : 25. Dříve vymytým diastereomerem je sloučenina uvedená v názvu, rezultující ve výtěžku 27,7 %.

Vysokotlaká kapalinové chromatografie:

tp = 6,94 (Col A; acetonitril - voda 65 : 35; FR - 2,0).

CZ 278063· B6

Analýza: pro ^C29^H35^F3^N2°5 vypočteno 63,49 % C, 6,43 % H, 5,11 % N; nalezeno 63,39 % C, 6,47 % H, 5,07 % N.

Příklad 46

S(nebo R)-1-[1-oxo-4-fenoxy-2-(2-fenoxyethy1)buty1]—N—[3 — -(1,1, 1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = ch(ch3)ch3, R³ = [0O(CH2)₂]₂CH, A = CO, n = 1]

Při dělení diastereomerú v surovém produktu, popsaném v příkladu 45e, se jako později vymytý diastereomer získá ve výtěžku 28,3 % sloučenina uvedená v názvu.

J

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 5,04 (Col A; acetonitril voda 65 : 35; FR - 2,0).

Analýza:, pro ^C29^H35^F3^N2°5 vypočteno 63,49 % C, 6,43 % H, 5,11 % N;. nalezeno 63,50 % C, 6,45 % H, 5,26 % N.

Příklad 47

3(RS)-1-[6-[(4-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonylamino]-1-oxo]hexyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 4-(CH3CH₂OXO)0NHCONH(CH₂)₅, A = CO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-1-[6-[4-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonylamino]-1-oxo]hexyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 4-(CH3CH₂OCO)0NHCONH(CH₂)₅, A = CO, n = 1]

K míchanému roztoku 0,6 g (1,5 mmol) produktu z příkladu 50b a 0,15 g (1,5 mmol) triethylaminu ve 20 ml dimethylformamidu se v dusíkové atmosféře při teplotě místnosti přidá 0,288 g (1,5 mmol) ethyl-p-isokyanatobenzoátu. Výsledná směs se přes noc míchá při teplotě místnosti a potom se zahustí ve vakuu. Jantarově zbarvaný zbytek se rozpustí ve vakuu. Jantarově zbarvený zbytek se rozpustí v ethylacetátu, ethylacetátový roztok se zfiltruje (po promytí 1N kyselinou chlorovodíkovou a vysušení síranem hořečnatým) a zahustí se ve vakuu. Olejovitý zbytek o hmotnosti 1,15 g poskytne po vyčištění velmi rychlou chromatografií (chloroform - methanol 97 : 3) 0,62 g (70 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílé pevné látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,28 a 0,35 (chloroform — methanol 95 : 5).

b. 3 (RS)1- [6-[(4-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonylamino]-1-oxo]hexyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 4-(CH3CH₂OCO)0NHCONH(CH₂)₅, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 47a se oxiduje postupem podle příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (chloroform - methanol 97 : 3) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 43 % i

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 12,39 a 15,79 (Col A; voda - acetonitril 65 : 35; FR = 2,0).

Analýza: pro ^C27^H37^F3^N4°6.1,0H₂O vypočteno 55,09 % C, 6,68 % H, 9,51 % N; nalezeno 54,75 %C, 6,63 % H, 9, 29 % N.

Příklad 48

3(RS)-1-[6-(fenylmethoxykarbonylamino)1-oxohexyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0CH2OCONH(CH₂)₅, a = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 50a se oxiduje postupem podle příkladu 31c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (chloroform - methanol 97 : 3) se ve výtěžku 31 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,06 (Col A; acetonitril - voda 1 : 1; FR = 2,0).

Analýza: pro C₂₅H₃₄F₃N₃O₅.0,5H₂0 vypočteno 57,46 % C, 6,75 % H, 8,04 % H;

nalezeno 57,87 % C, 6,24 % H, 7,86 % N.

Příklad 49

3(RS)-1-[6-[(4-hydroxykarbonylfenyl)aminokarbonylamino]-1-oxohexylN-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec

Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 4-(HOCO)0NHCONH(CH2)₅, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 47b se analogickým postupem jako v příkladu 14 převede ve výtěžku 38 % na sloučeninu uvedenou v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 6,24 a 8,0 (Col A; voda - acetonitril 75 : 25; FR = 2,0).

Analýza: pro C₂₅H₃₃F₃N₄O₆.2,5H₂O vypočteno 51,1 % C, 6,50 % H, 9,50 % N; nalezeno 51,34 % C, 5,93 % H, 8,95 % N.

Příklad 50

3(RS)-1-(6-fenylsulfonylamino-l-oxohexyl)-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl -2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0S(O2)NH(CH₂)₅, A = CO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-l-[6-(fenylmethoxykarbonylamino)-1-oxohexyl]-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0CH2OCONH(CH₂)₅, A = CO, n = 1]

K roztoku 6,84 g (25,7 mmol) N-benzyloxykarbonylaminokapronové kyseliny, 6,89 g (25,7 mmol) produktu připraveného postupem podle příkladu 2b a 6,94 g (51,4 mmol) hydroxybenzotriazolu ve 250 ml suchého tetrahydrofuranu se za míchání při teplotě 0 ’C pod dusíkem přidá 6,35 g (30,8 mmol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0 °C, potom se nechá ohřát na teplotu místnosti, přes noc se míchá, potom se zfiltruje. Filtrát se zahustí ve vakuu na hnědě zbarvený zbytek, který se rozpustí v chloroformu. Chloroformový roztok se promyje 20% roztokem kyseliny citrónové, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi chloroformu a methanolu (97 : 3) jako elučního činidla. Získá se 8,0 g (61 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě voskovité pevné látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf s o,35 (chloroform - methanol 95 : 5).

b. 2(RS),3(SR)-1-(6-amino-l-oxohexyl)-N-[3-(1,1,1-trifluor-2— -hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ = ch(ch3)ch3, r³ = h2n(ch₂)₅, A = CO, n = 1]

Směs 2,06 g (3,99 mmol) produktu z příkladu 50a, 100 ml ethanolu a 0,3 g 10% paladia na uhlí se v Parrově třepacím autoklávu 3 hodiny hydrogenuje za tlaku vodíku 315 kPa. Výsledná směs se zfiltruje přes vrstvu křemeliny, filtrační koláč se promyje ethanolem, ethanol z promývání se spojí s výše získaným filtrátem a zahustí se ve vakuu. Získá se 1,36 g (86 %.) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě světle zelené, olejovito-voskovité látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,2 (chloroform - methanol 85 : 15)

c. 2(RS),3(SR)-1-(6-fenylsulfonylamino-1-oxohexyl)-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0S(O2)NH(CH₂)₅, A = CO, n = 1]

K míchanému roztoku 0,26 g (1,5 mmol) produktu z příkladu 50b a 0,3 g (3,0 mmol) triethylaminu ve 20 ml suchého dimethylformamidu se v dusíkové afmosféře při teplotě místnosti přidá 0,6 g (1,5 mmol) benzensulfonylchloridu a výsledná směs se přes noc míchá při teplotě místnosti. Dimethylformamid se odpaří ve vakuu a nahnědlý odparek se rozpustí v ethylacetátu. Ethylacetátový roztok se promyje 1N kyselinou chlorovodíkovou, vysuší se síranem hořečnatým a zfiltruje se. Filtrát se zahustí ve vakuu a zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií za použití směsi chloroformu a methanolu (97 : 3) jako elučního činidla. Získá se 0,48 g (60 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílého prášku.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f. = 0,30 a 0,40 (chloroform - methanol 95 : 5).

d. 3(RS)-1-(6-fenylsulfonylamino-1-oxohexyl)-N-[3-(1,1,l-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0S(O2)NH(CH₂)₅, A =C0, n = 1]

Produkt z příkladu 50c se oxiduje postupem podle příkladu 8b. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (diethylether - hexan 3 : 1) a potom sloupcovou chromatografií (chloroform - methanol 97 : 3) se získá produkt uvedený v názvu, ve výtěžku 36 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

^ťR ⁼ 8,48 a 10,33 (acetohitril - voda 35 : 65; FR = 2,0).

Příklad 51

3(RS)-(1-naftylkarbonyl)-L-valyl-N-[3- (1,1,l-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 1-naftyl, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-(1-naftylkarbonyl)-L-valyl-N-[3-(1,1,l-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 1-naftyl, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Materiál připravený postupem podle příkladu 3d se způsobem popsaným v příkladu 20a nechá reagovat s 1-naftalenkarbonylchloridem. Získá se sloučenina uvedená v názvu, která po vyčištění preparativní chromatografií na tenké vrstvě (hexan - diethylether 4:6) rezultuje ve výtěžku 38 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,46 a 0y41 (methanol - chloroform 5 : 95).

Analýza: pro ^C27^H32^F3^N3°4 vypočteno 60,32 % C, 6,37 % H, 7,81 % N; nalezeno 60,89 % C, 6,21 % H, 7,68 % N.

b. 3(RS)-(1-naftylkarbonyl)-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH₃)CH₃, R² =

CH(CH₃)₂, R³ = 1-naftyl, R⁴ = H, A = CO, η = 1]

K roztoku 24,0 g (190 mmol) chloridu kyseliny šřavelové ve 350 ml dichlormethanu, předem ochlazenému na -43 °C, se pomalu přidá roztok 29,7 g (380 mmol) dimethylsulfoxidu v 81 ml dichlormethanu, výsledný roztok se 15 minut míchá, potom se k němu přidá roztok 9,4 mmol produktu z příkladu 51b v 83 ml dichlormethanu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě -30 C, potom se k ní přikape 48,9 g (380 mmol) diisopropylenthylaminu, výsledná směs se nechá ohřát na teplotu místnosti, promyje se 1N kyselinou chlorovodíkovou, 5% vodným roztokem chlornanu sodného, roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Zbytek poskytne po vyčištění preparativní chromatografií na tenké vrstvě (hexan - diethylether 40 : 60) sloučeninu uvedenou v názvu, ve výtěžku 38 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 5,21 a 7,31 (Col A; acetonitril - voda - trifluoroctová kyselina 50 : 50 : 0,1; FR = 1,5).

Analýza: pro ^C27^H32^F3^N3°4‘0,⁷5H₂O vypočteno 60,32 % C, 6,37 % H, 7,82 % N; nalezeno 60,69 % C, 6,21 % H, 7,68 % N.

Příklad 52

3(RS)-[4-(methylsulfonylaminokarbonyl)fenylaminokarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 4-[CH₃S(O₂)NHCO]0, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

Analogickým postupem jako v příkladu 89 se materiál připravený podle příkladu 16 nechá reagovat s methansulfonamidem.

Po vyčištění velmi rychlou chromatografií na silikagelu (Baker, pH 5,0) za použití gradientově eluce směsmi chloroformu a methanolu v poměru od 97 : 3 do 90 : 10 se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 59 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 2,60 a 3,33 (Col A; voda - acetonitril 60 : 40; FR = 6,0). Analýza: pro C25^H34^F3^N5^O7^S*°'^5H2° vypočteno 48,85 % C, 5,74 % H, 11,39 % N; nalezeno 49,03 % C, 5,74 % H, 10,86 % N.

Příklad 53

3(RS)-[ 2-(4-morfolinyl)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ia, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 4-morfolinyl-CH₂CH₂, R⁴ = H, A = 0C0, n = 1]

a. .. 2 (RS), 3 (SR) - [ 2- (4-morf olinyl) ethoxykarbonyl ] -L-valyl-N- [ 3 - (1,

1,X-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 4-morfolinyl-CH₂CH₂, R⁴ = H, A = 0C0, n = 1]

Analogickým postupem jako v příkladu 7b se materiál připravený postupem podle příkladu 3d nechá reagovat s produktem připraveným postupem podle příkladu 33a za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, která se po vyčištění velmi rychlou chromatografií izoluje ve výtěžku 55 %. Jako eluční činidlo se při této chromatografií používá směs methanolu a chloroformu v poměru 2,5 : 97,5.

Vysokotlaká kapalinová chromátografie:

tp = 4,62: a 5,85 (Col A; acetonitril - voda 1 : 1; FR = 2,0). Analýza: pro ^C23^H39^F3^N4°6^,H2° vypočteno 50,91 % C, 7,61 % H, 10,32 % N; nalezeno 50,95 % C, 7,20 % H, 10,02 % N.

b. 3(RS)-[2-(4-morfolinyl)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 4-morfolinyl-CH₂CH₂, R⁴ = H,

A = OCO, n = 1]

K roztoku 24,0 g (190 mmol) chloridu kyseliny šťavelové ve 350 ml dichlormethanu, ochlazenému na -43 °C, se přidá roztok 29,7 g (380 mmol) dimethylsulfoxidu ve 135 ml dichlormethanu, výsledný roztok se 15 minut míchá, potom se k němu přidá roztok (9,4 mmol) produktu z příkladu 53a ve 125 ml dichlormethanu. Reakční směs se nechá ohřát z -43 °C na -20 °C, 1 hodinu se míchá, přikape se k ní 48,9 g (380 mmol) diisopropylenthylaminu, reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti, zředí se dichlormethanem, promyje se vodným roztokem hydroxidu sodného o pH 10, vysuší se uhličitanem draselným a síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Zbytek poskytne po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - chloroform 2 : 98) sloučeninu uvedenou v názvu, ve výtěžku 18 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 2,00 a 2,60 (Col A; voda - acetonitril 1 : 1; FR = 2,0).

Analýza: pro C₂₃H₃₇F₃N₄Og.l,5H₂O vypočteno 50,26 % C, 7,34 % H, 10,19 % N; nalezeno 50,49 % C, 6,96 % H, 9,96 % N.

Příklad 54

3(RS)-[(2,4-dichlorfenyl)karbony1]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4*1 -methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R = CH(CH₃)CH₃, R² = CH(CH₃)₂, R³ = 2,4-dichlorfenyl, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-[(2,4-dichlorfenyl)karbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 2,4-dichlorfenyl,

R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Analogickým postupem jako v příkladu 20a se materiál připravený postupem podle příkladu 3d nechá reagovat s 2,4-dichlorbenzoylchloridem zá vzniku sloučeniny uvedené v názvu, izolované ve výtěžku 98 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,54 (methanol - chloroform 5 : 95).

b. 3(RS)-[(2,4-dichlorfenyl)karbonyl]-L-valylN-[3-(l,l,l-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib,

R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 2,4-dichlorfenyl, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

K roztoku 24,0 g (190 mrnol) chloridu kyseliny šťavelové ve 350 ml dichlormethanu, ochlazenému na -65 °C, se pomalu přidá roztok 29,7 g (380 mrnol) dimethylsulfoxidu ve 27.ml dichlormethanu. Výsledný roztok se 15 minut míchá, potom se k němu přidá roztok produktu připraveného postupem podle příkladu 54a (9,4 mrnol) ve 250 ml dichlormethanu, směs se 1 hodinu míchá při teplotě -65 °C, potom se k ní přidá 48,9 g (380 mrnol) diisopropylethylaminu. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti, potom se promyje 1N kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Zbytek se vyčistí velmi rychlou chromatografií (methanol - chloroform 3 : 97), čímž se ve výtěžku 15 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R ~ 17,93 a 18,55 (Col A; voda - acetonitril 55 : 45; FR = 2,0). Analýza: pro ^C23^H28^C^3^F3^N2°4^,Η2° vypočteno 49,65 % G, 5,43 % H, 7,55 % N; nalezeno 49,95 % C, 5,31 % H, 7,35 % N

Příklad 55 (RS)-fenoxykarbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = φ, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-fenoxykarbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = ch(ch3)ch3, R² = ch(ch3)₂, R³ = 0, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Za použití postupu podle příkladu 20a se materiál připravený postupem podle příkladu 3d nechá reagovat s fenyl-chlorformiátem. Získá se sloučenina uvedená v názvu, která se po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - chloroform 5 : 95) izoluje ve výtěžku 61 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f - 0,31 a 0,36 (methanol — chloroform 3 : 97).

b. 3(RS)-fenoxykarbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 0, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Produkt z příkladu 55a se oxiduje způsobem popsaným v příkladu 54b. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (hexan - diethylether 15 : 85) se ve výtěžku 37 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

^ťR ⁼ 2,72 a 3,55 (Col. A; voda - acetonitril 1 : 1; FR = 2,0).

Analýza: pro C₂₃H₃₀F₃N₃O₅.0,5H₂O vypočteno 55,86 % C, 6,32 % H, 8,50 % N;

nalezeno 56,07 % C, 6,30 % H, 8,48 % N.

Příklad 56

3(RS)-[2-(2-pyridyl)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1,-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 2-pyridyl-CH₂CH₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-[2-(2-pyridyl)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 2-pyridyl-CH₂CH₂, R⁴ = H, A = 0, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 34b se materiál připravený postupem podle příkladu 3d nechá reagovat s materiálem připraveným postupem podle příkladu 34a. Získá se sloučenina uvedená v názvu, která se po vyčištění velmi rychlou chromátografií (methanol - chloroform 4 : 96) izoluje ve výtěžku 50 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,30 a 0,34 (chloroform - methanol 95 : 5).

b. 3(RS)-[2-(2-pyridyl)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 2-pyrÍdyl-CH₂CH₂, R⁴ = H, A. = OCO, n = 1]

Produkt z příkladu 56a se oxiduje za použití metody popsané v příkladu 54b, pouze s tím rozdílem, že se neprovede promytí roztokem kyseliny. Po vyčištění dvojnásobnou velmi rychlou chromatografií (nejprve hexan - diethylether 1:1a potom methanol - chloroform 5 : 95) se ve výtěžku 19 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromátografie:

t_R = 9,52 a 14,58 (Col A; voda - acetonitril 60 : 40; FR = 1,0).

Analýza: pro C₂₄H₃₃F₃N₄0₅.0,75H₂0 vypočteno 54,59 % C, 6,58 % H, 10,61 % N; nalezeno 54,63 % C, 6,47 % H, 10,55 % N.

Příklad 57

3(RS)-[(4-fluorfenyl)aminokarbonyl)]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 4-fluorfenyl, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-[(4-fluorfenyl)aminokarbonyl)]-L-valyl-N-[3-(l,l,l-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 4-fluorfenyl, R⁴ = H,

A = NHCO, n = 1]

Materiál připravený postupem podle příkladu 3d se nechá za použití metody popsané v příkladu 15a reagovat s 4-fluorfenylisokyanátem. Získá se sloučenina uvedená v názvu, která se po vyčištění velmi rychlou chromatografií za použití gradientově eluce směsi risthanolu a chloroformu v poměru od 2,5 : 97,5 do 5 : 95 izoluje ve výtěžku 84 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,37 (methanol - chloroform 5 : 95).

b. 3(RS)—[(4-fluorfenyl)aminokarbonyl)]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ =' CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 4-fluorfenyl, R⁴ = H, A = NHCO, — =

Produkt z příkladu 57a se oxiduje za použití metody podle příkladu 54b. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - chloroform 3 : 97) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 42 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 8,87 a 12,10 (Col A; voda - acetonitril 60 : 40; FR - 1,0).

Analýza: pro C₂₃H₃₀F₄N₄O₄ vypočteno 54,97 % C/6,02 % H, 11,15 % N;

nalezeno 55,18 % C, 6,15 % H, 11,08 % N.

Příklad 58

3(RS)-[4-(fenylsulfonylaminokarbonyl)fenylaminokarbonyl]-L-valyl-N-[3—(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 4-[0S(O₂)NHCO]0, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

Za použití metody popsané v příkladu 89 se materiál připravený postupem podle příkladu 16 nechá reagovat s benzensulfonamidem. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií na silikagelu (Baker, pH 5,0) (chloroform - methanol 97 : 3) se ve výtěžku 42 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,05 a 5,93 (Col C; voda - acetonitril 60 : 40; FR = 6,0).

Analýza: pro ^c3o^H36^F3^N5°7*⁰'^5H2° vypočteno 53,25 % C, 5,51 % H, 10,34 % N; nalezeno 53,38 % C, 5,61 % H, 10,02 % N.

Příklad 59

3(RS)-[2-(3-triofenyl)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 3-thiofenyl-CH₂CH₂, R⁴ = H,

A = OCO, n = 1]

a. 4-nitrofenyl-2-(3-thiofenyl)ethyl-karbonát

Za použití postupu podle příkladu 7a se na 3-thiofenethanol působí 4-nitrofenyl-chlorformiátem. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (ethylacetát - hexan 1 : 9) se ve výtěžku 56 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,25 (ethylacetát - hexan 1 : 9).

b. 2(RS),3(SR)-[2-(3-triofenyl)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,-

1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 3-thiofenyl-CH₂CH₂, R⁴ = H, A = 0, n = 1]

Za použití postupu podle příkladu 7b se materiál připravený způsobem podle příkladu 3d nechá reagovat s produktem z příkladu 59a. Získá se sloučenina uvedená v názvu, která se po vyčištění velmi rychlou chromatografií (aceton - hexan 3:7) izoluje ve výtěžku 58 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,23 a 0,27 (methanol - chloroform 5 : 95).

Analýza: pro ^C24^H34^F3^N3°5^S vypočteno 52,96 % C, 6,57 % H, 8,06 % N; nalezeno 53,28 % C, 6,46 % H, 7,77 % N.

c. 3(RS)-[2-(3-triofenyl)ethoxykarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec lb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 3-thiofenyl-CH₂CH₂, R⁴ = H,

A = 0C0, n = 1]

K roztoku 24,0 g (190 mmol) chloridu kyseliny šřavelové ve 350 ml dichlormethanu, ochlazenému na -43 °C, se pomalu přidá roztok 29,7 g (380 mmol) dimethylsulfoxidu ve 135 ml dichlormethanu. Výsledný roztok se 15 minut míchá, potom se k němu přidá roztok 9,4 mmol produktu připraveného v příkladu 59b ve 125 ml dichlormethanu, směs se 1 hodinu míchá při teplotě -43 °C, potom se k ní přikape 48,9 g (380 mmol) diisopropylethylaminu, reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti, promyje se IN vodnou kyselinou chlorovodíkovou, 5% vodným roztokem chlornanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Po vyčištění odparku velmi rychlou chromatografií (aceton - hexan 1 : 4) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 23 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 5,09 a 7,61 (Col A; voda - acetonitril 1 : 1; FR = 2,0). Analýza: pro C₂₄H₃₂F₃N₃O₅S vypočteno 53,17 % C, 6,21 % H, 8,09 % N; nalezeno 52,92 % C, 6,26 % H, 8,09 % N.

Příklad 60

3(RS)-(1,1-dimethylethoxykarbonyl)-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = ch(ch3)ch3, r² = ch2ch₃, r³ = ch₃c(ch₃)₂, r⁴ = h, A = oco, Π = 1]

a. 2(RS),3(SRj-(1,1-dimethylethoxykarbonyl)-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec VTIb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH2CH₃, R³ - CH₃C(CH₃)₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

K roztoku 7,76 g (57,4 mmol) hydroxybenzotriazolu, 5,60 g (27,4 mmol) benzyloxykarbonyl-a-aminobutanové kyseliny a 7,00 g (26,1 mmol) materiálu připraveného postupem podle příkladu 2b ve 130 ml suchého tetrahydrofuranu se za míchání při teplotě 0 °C pod dusíkem přidá 5,90 g (28,7 mmol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0 °C, potom se nechá ohřát na teplotu místnosti, přes noc se míchá a potom se zfiltruje. Filtrát se zahustí ve vakuu, odparek se rozpustí v ethylacetátu, roztok se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu.

Zbytek poskytne po vyčištění velmi rychlou chromatografií (ethylacetát - dichlormethan 1 : 3) sloučeninu uvedenou v názvu, ve výtěžku 95 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf - 0,29 (ethylacetát - dichlormethan 3:7).

b. 3(RS)-(1,1-dimethylethoxykarbonyl)-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,-

1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, r¹ = ch(ch3)ch3, r² = ch2ch₃, r³ = ch₃c(ch₃)₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Produkt z příkladu 60a se oxiduje postupem podle příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - chloroform 1,5 : 98,5) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 47 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R - 10,21 a 14,54 (Col A; voda - acetonitril 65 : 35; FR = 2,0).

Analýza: pro ^c20^H32^F3^N3°5 vypočteno 53,21 % C, 7,14 % H, 9,31 % N; nalezeno 53,65 % C, 7,21 % H, 9,51 % N.

Příklad 61

3(RS) -[l-oxo-2-(2-thiofenyl)ethyl]-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1, 1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH2CH₃, R³ = (2-thiofenyl)CH₂, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

a. Sůl 2(RS),3(SR)-L-a-aminobutyryl-N-[3-(l,l,l-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl]-L-prolinamidu s kyselinou trifluoroctovou [vzorec IVb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH2CH₃, R⁴ = H, n = 1]

Roztok 4,0 g (8,84 mmol) materiálu připraveného postupem podle příkladu 60a a 32 ml (415 mmol) trifluoroctové kyseliny ve 32 ml dichlormethanu se 22 hodiny míchá při teplotě místnosti, potom se rozpouštědla odpaří za sníženého tlaku. Získá se 5 g (více než 100 %) surového produktu ve formě bezbarvé sklovité látky, která se používá bez další charakterizace nebo čištění.

b. 2(RS),3(SR)-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH2CH₃, R³ = (2-thiofenyl)CH₂, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

K roztoku 0,413 g (3,06 mmol) hydroxybenzotriazolu, 0,222 g (1,53 mmol) 2-thiofenoctové kyseliny, 0,154 g (1,53 mmol) N-methylmorfolinu a 0,650 g (1,39 mmol) produktu připraveného podle příkladu 61a ve 20 ml suchého tetrahydrofuranu se za míchání při teplotě 0 °C pod dusíkem přidá 0,315 g (1,53 mmol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0 °C, potom se nechá ohřát na teplotu místnosti, přes noc se míchá, potom se zfiltruje a filtrát se zahustí ve vakuu. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu, roztok se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Odparek poskytne po vyčištění velmi rychlou chromatografií (aceton - hexan 1:1) sloučeninu uvedenou v názvu, ve výtěžku 33 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,40 a 0,44 (methanoí - chloroform 1 :9).

Analýza: pro C₂₁H_3QF₃N₃O₄S vypočteno 52,82 % C, 6,33 % H, 8,80 % N; nalezeno 52,43 % C, 6,53 % H, 8,08 % N.

c. 3(RS)-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH2CH₃, R³ = (2-thlOfenyl)CH₂, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

K suspenzi 0,84 g (8,4 mmol) oxidu chromového v 50 ml suchého dichlormethanu se přidá 1,36 ml (17 mmol) suchého pyridinu a směs se 30 minut míchá při teplotě místnosti. K výsledné červenohnědě zbarvené suspenzi se přidá 1 g křemeliny a potom 0,20 g (0,42 mmol) produktu z příkladu 61b v 5 ml dichlormethanu. Směs se míchá tak dlouho, až je podle chromatografie na tenké vrstvě spotřebován všechen výchozí alkohol. Reakční směs se zfiltruje přes vrstvu silikagelu, který se vymyje směsí methanolu a chloroformu (1 : 9). Z filtrátu se ve vakuu odpaří rozpouštědla a surový produkt se vyčistí preparativní chromatografií na tenké vrstvě (methanol - chloroform 5 : 95). Získá se 150 mg žádaného produktu ve formě bílé pevné látky.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R - 4,18 a 5,65 (Col A; voda - acetonitril 60 : 40; FR = 2,0).

Analýza: pro ^c21^h28^F3^N3°4^S,0,5H2° vypočteno 52,06 % C, 6,03 % H, 8,67 % N; nalezeno 52,03 % C, 6,19 % H, 8,38 % N.

Příklad 62

3(RS)-(fenylmethoxykarbonyl)-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,lrtrifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec lb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH2CH₃, R³ = 0CH₂, R⁴ =H, A = OCO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-(fenylmethoxykarbonyl)-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1, 1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl]-L-prolinamid [vzorec Vllb, r¹ = ch(ch3)ch3, r² = ch2ch₃, R³ = 0CH₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Materiál připravený postupem podle příkladu 61a se za použití metody popsané v příkladu 20a nechá reagovat s 1,5 ekvivalentu benzyl-chlorformiátu v chloroformu, který se používá v množství odpovídajícím 1/4 množství používaného v příkladu 20a. Získá se sloučenina uvedená v názvu, která se po vyčištění velmi rychlou chromatografií (aceton - hexan 1:4) izoluje ve výtěžku 51 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf =0,38 a 0,43 (aceton - hexan 40 : 60).

b. 3(RS)-(fenylmethoxykarbonyl)-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec lb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH2CH₃, R³ = 0CH₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Produkt z příkladu 62a se oxiduje za použití metody z příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (aceton - hexan 30 : 70) se ve výtěžku 64 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 5,69 a 7,75 (Col A; voda - acetonitril 55 : 45; FR = 2,0).

Analýza: pro C23H₃₀F₃N₃O₅.0,80H₂O vypočteno 55,26 % c, 6,37 % H, 8,40 % N; nalezeno 55,10 % C, 6,19 % H, 8,77 % N.

Příklad 63

3(RS)-(fenoxykarbonyl)-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,l-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH2CH₃, R³ = Φ, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-(fenoxykarbonyl)-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH2CH₃, R³ = φ, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Analogickým postupem jako v příkladu 20a, ale za použití N-methylmorfolinu namísto triethylaminu se materiál připravený postupem podle příkladu 61a nechá reagovat s 1,5 ekvivalentu fenyl-chlorformiátu. Získá se sloučenina uvedená v názvu, rezultující po vyčištění preparativní chromatografií na tenké vrstvě (aceton - hexan 3 : 7) ve výtěžku 18 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,32 a 0,37 (aceton - hexan 3:7).

b. 3(RS)-(fenoxykarbonyl)-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH2CH₃, R³ = Φ, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Produkt z příkladu 63a se oxiduje metodou popsanou v příkladu 61c. Získá se sloučenina uvedená v názvu, rezultující po vyčištění velmi rychlou chromatografií (ethylacetát - hexan 1 : 9) ve výtěžku 60 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,57 a 6,51 (Col A; voda - acetonitril 55 : 45).

Analýza: pro ^C22^H28^F3^N3°5 vypočteno 56,04 % C, 5,98 % H, 8,90 % N; nalezeno 56,04 % C, 6,18 % H, 8,85 % N.

Příklad 65

3(RS)-Ν²-(1,1-dimethylethoxykarbonyl)-N⁶-fenylmethoxykarbonyl-Llysyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = 0CH2OCONH(CH₂)₄, R³ = (CH₃)₃C, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

1;

a. 2(RS),3(SR)-Ν²-(1,1-dimethylethoxykarbonyl)-N⁶-fenylmethoxykarbonyl-L-lysyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methyl- ______pentyl]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH₃)CH₃, R² =

0CH₂OCONH(CH₂)₄, R³ = (CH₃)₃C, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Za použití metody popsané v příkladu 84b se N²-butyloxykarbonyl-N⁶-benzyloxykarbonyl-L-lysin nechá reagovat s materiálem připraveným podle příkladu 2b. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií za použití gradientově eluce směsmi methanolu a chloroformu v poměru od 2,5 : 97,5 do 5 : 95 se ve výtěžku 73 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,57 (methanol - chloroform 5 : 95).

b. 3(RS)-Ν²-(1,1-dimethylethoxykarbonyl)-N⁶-fenylmethoxykarbonyl-L-lysyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = 0CH2OCONH(CH₂)₄,

R³ = (CH₃)₃C, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Produkt z příkladu 65a se oxiduje za použití metody popsané v příkladu 31c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií za použití gradientově eluce směsmi methanolu a chloroformu v poměrech od 2,5 : 97,5 do 5 : 95 se ve výtěžku 65 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,15 a 5,14 (Col A; voda - acetonitril 45 : 55; FR = 2,0).

Analýza: pro ^C30^H43^F3^N5°7’⁰'^5H2° vypočteno 56,51 % C, 6,95 % H, 8,79 % N; nalezeno 56,45 % C, 6,58 % Η,·8,42 % N.

Příklad 66

3(RS)-[(2-amino-5-chlorfenyl)karbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methy1-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 2-NH₂-5-Cl-0, R⁴ = Η, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-[(2-amino-5-chlorfeny1)karbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,-

1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 2-NH₂-5-Cl-0, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

K roztoku 1 g (2,7 mmol) produktu připraveného podle příkladu 3d v 50 ml dichlormethanu se při teplotě místnosti přidá 0,54 g (2, 7 mmol) anhydridu 5-chlorisotové kyseliny, směs se přes noc míchá, potom se promyje 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Zbytek poskytne po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol — chloroform 3 : 97) 1,4 g (78 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílé pěnovité látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,30 a 0,25 (methanol - chloroform 5 : 95).

b. 3(RS)-[(2-amino-5-chlorfenyl)karbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)₂, R³ = 2-NH₂-5-Cl-0, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 66a se oxiduje metodou podle příkladu 31c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - chloroform 3 : 97) se ve výtěžku 76 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 3,41 a 4,62 (Col A; voda - acetonitril 50 : 50; FR = 2,0). Analýza: pro ^C23^H30^F3^N4°4’^H2° vypočteno 51,45 % C, 6,01 % H, 10,43 % N; nalezeno 51,65 % C, 5,74 % H, 9,68 % N.

Příklad 67

3(RS)-(4-methoxyfenylkarbonyl)-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methy1-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = ch(ch3)ch3, R² = ch2ch₃, R³ = 4-(CH₃O)-0, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-(4-methoxyfenylkarbonyl)-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH3CH₂, R³ = 4-(CH₃O)-0, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Za použití postupu podle příkladu 20a se materiál připravený podle příkladu 61a nechá reagovat s 4-methoxybenzoylchloridem za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, která se po vyčištění velmi rychlou chromatografií (ethylacetát - hexan 60 : 40) získá ve výtěžku 34 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,71 a 0,73 (methanol - chloroform 1:9).

Analýza: pro C₂₃H₃₂F₃N₃O₅.0,3H₂O vypočteno 56,04 % C, 6,67 % H, 8,52 % N; nalezeno 56,06 % c, 6,60 % H, 8,14 % N.

b. 3(RS)-(4-methoxyfenylkarbonyl)-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = ch(ch3)ch3, r² = CH3CH₂, R³ = 4-(CH₃O)-ó, r⁴ = h, a = co, n = 1]

Produkt z příkladu 67a se oxiduje postupem popsaným v příkladu 61c pouze s tím rozdílem, že se alkohol rozpouští v pětinásobném objemu rozpouštědla. Po vyčištění preparativní chromatografií na tenké vrstvě (methanol - chloroform 1:9) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 40 %.

Vysokotlaká kapalinová chromátografie:

t_R = 8 ,89 a 11,75 (Col A; voda - acetonitril 70 : 30; FR = 2,0).

Analýza: pro ^c23^H30^F3^N3°5^,H2° vypočteno 54,86 % C, 6,41 % H, 8,35 % N; nalezeno 54,89 % C, 6,38 % H, 7,48 % N.

Příklad 68

3(RS)-[2-(tricyklo[ 3,3,1,l³'⁷]dec-l-yl)ethoxykarbonyl]-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,l-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH3CH₂, R³ = (1-adamantyl)-CH₂CH₂, R⁴ = H, A = 0C0, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-[2-(tricyklo[3,3,1,1³'⁷]dec-l-yl)ethoxykarbonyl]-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,l-trifluor-2-hydroxy-4-methyl-pentyl]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH3CH₂, R³ = (1-adamantyl)-CH₂CH₂, R⁴ = H, A = 0C0, n = 1]

Za použití metody popsané v příkladu 34b se materiál připravený postupem podle příkladu 61a nechá reagovat s produktem získaným v příkladu 7a, za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, která po vyčištění velmi rychlou chromatografií (ethylacetát

- hexan, nejprve 20 : 80, potom 50 : 50) rezultuje ve výtěžku 42 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,33 a 0,44 (methanol - chloroform 5 : 95).

b. 3(RS)-[2-(tricyklo[3,3,1,1³'⁷]dec-l-yl)ethoxykarbonyl]-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,l-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH3CH₂, R³ = (1-adamantyl)-CH₂CH₂, R⁴ = H, A = 0C0, n = 1]

Produkt z příkladu 68a se oxiduje postupem podle příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (diethylether

- hexan, nejprve 50 : 50, pak 90 : 10) se ve výtěžku 66 % získá sloučenina uvedená v názvu.

91.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,64 a 5,63 (Col A; voda - acetonitril 25 : 75; FR = 2,0).

Analýza: pro ^C28^H42^F3^N3°5* ⁰'^15H2° vypočteno 60,01 % C, 7,60 % H;

nalezeno 59,76 % C, 7,65 % H.

Příklad 69

3(RS)-N²-(1,1-dimethylethoxykarbonyl)-N⁶-fenylsulfonyl-L-lysyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyi)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = 0S(O2)NH(CH₂)₄, R³ = (CH₃)₃C, R⁴ = H, A = 0C0, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-N²-(1,1-dimethylethoxykarbonyl)-L-lysyl-N-[3-(1,-

1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl]-L-prolinamid [vzorec VHb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = H2N(CH₂)₄, R³ = (CH₃)₃C, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

K roztoku 3,0 g (4,8 mmol) materiálu připraveného podle příkladu 65a v 60 ml absolutního ethanolu se přidá 0,6 g 10% paladia na uhlí. Výsledná suspenze se přes noc míchá ve vodíkové atmosféře, potom se k ní přidá dalších 0,3 g 10% paladia na uhlí a v míchání se pokračuje ještě několik hodin. Reakční směs se zfiltruje přes vrstvu křemeliny a filtrát se zahustí ve vakuu. Získá se 2,48 g žádaného produktu, který se přímo používá k další reakci.

b. 2(RS),3(SR)-N²-(1,1-dimethylethoxykarbonyl)-N⁶-fenylsulfonyl-L-lysyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl]-L-prolinamid [vzorec VHb, R^ = CH(CH3)CH3, R² = 0S(O2)NH(CH₂)₄, R³ = (ch₃)₃c, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Analogickým postupem jako v příkladu 72b, pouze s tím rozdílem, že se namísto triethylaminu použije N-methylmorfolin, se produkt z příkladu 69a nechá reagovat s benzensulfonylchloridem. Získá se sloučenina uvedená v názvu, která po vyčištění velmi rychlou chromatografií (chloroform - methanol 95 : 5) rezultuje ve výtěžku 69 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,29 (methanol - chloroform 95 : 5).

c. 3(RS)-N²-(1,1-dimethylethoxykarbonyl)-N⁶-fenylsulfonyl-L-lysyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = 0S(O2)NH(CH₂)₄, R³ = (CH₃)₃C, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Produkt z příkladu 69b se oxiduje za použití postupu podle příkladu 31c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (gradientova eluce směsmi methanolu a chloroformu v poměrech od 0 : 100 do 2,5 : 97,5) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 57 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 7,48 a 9,11 (Col A; acetonitril - voda 1 : 1; FR = 1,0).

Analýza: pro C₂₈H₁₆F₃N₄O₇S.H₂0 vypočteno 51,52 % C, 6,64 % H, 8,58 % N; nalezeno 51,47 % C, 6,46 % H, 7,80 % N.

Příklad 70

3(RS)-(4-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-L-a-aminobutanoyl-N- [3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec lb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH3CH₂, R³ = 4-[CH₃CH₂OC(O)]φ, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-(4-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-L-a-aminobutyroyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH3CH₂, R³ = 4-[CH₃CH₂OC(O)]φ, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 15a se materiál připravený postupem podle příkladu 61a nechá reagovat s ethyl-4-isokyanatobenzoátem za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, izolované ve výtěžku 46 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,53 (methanol - chloroform 5 : 95).

b. 3(RS)-(4-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-L-a-aminobutyryl-N-

-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec lb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH3CH₂, R³ = 4-[CH₃CH₂OC(O)]φ, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

Produkt z příkladu 70a se oxiduje postupem podle příkladu

61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (chloroform methanol 97 : 3) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 68 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 6,35 a 8,70 (Col A; voda - acetonitril 60 : 40; FR = 2,0).

Analýza: pro ^C25^H33^F3^N4°6 * ⁰ >^5H2° vypočteno 54,44 % C, 6,21 % H, 10,15 % N; nalezeno 54,76 % C, 6,13 % H, 10,27 % N.

Příklad 71

3(RS)-(4-hydroxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH3CH₂, R³ = 4-[HOC(O)]0, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 14 se materiál připravený postupem podle přikladu 70b převede na sloučeninu uvedenou v názvu, která se izoluje velmi rychlou chromatografií na silikagelu (Baker, pH 5,0, chloroform - methanol 97 : 3) ve výtěžku 61 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 3,86 a 4,69 (Col A; voda - acetonitril 3 : 1; FR = 2,0).

Analýza: pro C₂₃H₂₉F₃N₄O₆.H₂0 vypočteno 51,88 % C, 5,86 % H, 10,52 % N; nalezeno 51,98 % C, 5,69 % H, 10,19 % N.

Příklad 73

3(RS)-[2-(2-methoxyethoxy)ethoxykarbonyl]-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH3CH₂-, R³ = CH₃O(CH₂)₂O(CH₂)₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-[2-(2-methoxyethoxy)ethoxykarbonyl]-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH3CH₂-, R³ = ch₃o(ch₂)₂o(ch₂)₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Analogickým postupem jako v příkladu 34b se materiál připravený postupem podle příkladu 61a nechá reagovat s produktem z příkladu 19a za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, která se po vyčištění velmi rychlou chromátografií, za použití gradientově eluce směsmi acetonu a hexanu v poměrech 1 : 9 do 7 : 3, izoluje ve výtěžku 75 %.

Chromátografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,30 a 0,35 (aceton - hexan 40 : 60).

Analýza: pro C₁₇H_2gF₃N₂O₆.0,5H₂O vypočteno 48,22 % C, 7,14 % H, 6,61 % N; nalezeno 48,13 % C, 6,90 % H, 6,07 % N.

b. 3(RS)- [ 2-(2-methoxyethoxy)ethoxykarbonyl]-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec ib, r¹ = ch(ch3)ch3, r² = ch3ch₂, r³ = ch₃o('ch₂)₂o(ch₂)₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Produkt z příkladu 73a se oxiduje postupem podle příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií za použití gradientově eluce směsmi ethylacetátu a hexanu v poměru 1 : 1 až směsmi acetonu a ethylacetátu v poměru 1 : 9 se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžků 40 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R - 5,70 a 8,95 (Col A; voda - acetonitril 75 : 25; FR = 2,0).

Analýza: pro ^c2i^H34^F3^N3°7 vypočteno 48,77 % C, 7,14 % H, 6,61 % N; nalezeno 48,13 % C, 6,90 % H, 6, 09 % N.

Příklad 74

3(RS)-[Z—(4-aminokarbonylamino-l,4-dioxo-2-butenyl)]-L-valyl-N- [3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = Z-H₂NC(O)NHC(0)CH=CH-, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

a. 2(RS), 3(SR)-[Z-(4-aminokarbonylamino-l,4-dioxo-2-butenyl)]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH~,

R³ = Z-H₂NC(O)NHC(O)CH=CH-, R⁴ = H, A = CO, n = 1]'

Analogickým způsobem jako v příkladu 21b se materiál připravený postupem podle příkladu 3d nechá reagovat s Z-4-aminokarbonylamino-4-oxo-2-butenovou kyselinou. Získá se sloučenina uvedená v názvu, která se po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - chloroform 5 : 95) izoluje ve výtěžku 26 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,17 a 0,25 (methanol - chloroform 5 : 95).

b. 3(RS)-[Z-(4-aminokarbonylamino-l,4-dioxo-2-buteny1)]-L-valylN-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = Z-H₂NC(O)NHC(0)CH=CH-, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 74a se oxiduje postupem podle příkladu 31c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol chloroform 4 : 96) se získá sloučenina uvedená v názvu, rezultující ve výtěžku 29 %.

95'

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 1,78 a 2,45 (Col A; voda - acetonitril 65 : 35; FR = 2,0).

Analýza: pro ^c2i^H30^F3^N5°6*¹'^5H2° vypočteno 47,37 % C, 6,25 % H, 13,15 % N;

nalezeno 47,29 % C, 5,77 % H, 13,02 % N.

Příklad 75

3(RS)-fenylaminokarbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = φ, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-fenylaminokarbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 0, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

Analogickým postupem jako v příkladu 15a se materiál připravený postupem podle příkladu 3d nechá reagovat s fenylisokyanátem za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, která se po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - chloroform 2 : 98) izoluje ve výtěžku 62 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,24 a 0,32 (methanol - chloroform 2 : 98).

b. 3(RS)-fenylaminokarbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 0, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

Produkt z příkladu 75a se oxiduje způsobem podle příkladu 31c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol chloroform 2 : 98) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 75 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 5,70 a 8,77 (Col A; voda - acetonitril 60 : 40; FR = 2,0).

Analýza: pro ^C23^H31^F3^N4°4’⁰’^75H2° vypočteno 55,47 % C, 6,58 % H, 11,25 % N; nalezeno 55,46 % C 6,50 % H, 10,72 % N.

Příklad 76

3(RS)-(4-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-L-fenylalanyl-N-[3r -(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = 0CH2-, R³ = 4-[CH₃CH₂OC(O)]0, R⁴ = H,

A = NHCO, n = 1]

a. .. 2 (RS) , 3 (SR)-1—fenylmethoxykarbonyl-N- [3-(1,1,1-trif luor-2-

-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vila, R¹ = CH(CH3)CH3, R³ = 0CH2-, A = OCO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 2a se materiál připravený postupem podle příkladu 4 nechá reagovat s benzyloxykarbonyl-L-prolinem, čímž se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 100 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rg 0,37 a 0,45 (methanol - dichlormethan 5 : 95).

b. 2(RS),3(SR)-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec IVa, R¹ = CH(CH₃)CH₃, n = 1]

Produkt z příkladu 76a se způsobem podle příkladu 2b převede na sloučeninu uvedenou v názvu, rezultující ve výtěžku 100 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf - 0,73 a 0,81 (methanol - dichlormethan nasycený hydroxidem amonným 15 : 85).

c. . 2(RS),3(SR)-fenylmethoxykarbonyl-L-fenylalanyl-N-[3-(1,1,1-

-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH20, R³ = 0CH₂-, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

K míchanému roztoku 2,29 g (10,0 mrnol) benzyloxykarbonyl-L-fenylalaninu, 2,70 g (17,6 mrnol) hydroxybenzotriazolu a 2,68 g (10,0 mrnol) materiálu připraveného podle příkladu 76b ve 45 ml suchého tetrahydrofuranu, ochlazenému na -17 °C, se přidá 2,27 g (11,0 mrnol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu a směs se nechá přes noc stát při teplotě místnosti. Reakční směs se zfiltruje, filtrát se zahustí k odstranění tetrahydrofuranu a odparek se vyjme diethyletherem a ethylacetátem. Výsledný roztok se promyje dvakrát vždy nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 1N kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a po filtraci se zahustí. Zbytek se vyjme nejmenším množstvím dichlormethanu, vysrážená N,N'-dicyklohexylmočovina se odfiltruje, roztok se zahustí ve vakuu a zbytek se vysuší ve vakuu. V kvantitativním výtěžku se získá sloučenina uvedená v názvu, ve formě bílé pěny.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,37 a 0,45 (methanol - chloroform 5 : 95).

d. 2(RS),3(SR)-L-fenylalanyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec IVb^¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH20, n = 1]

Směs 501,3 mg (0,989 mrnol) produktu z příkladu 76c a 50 mg 10% paladia na uhlí zvlhčeného 50 % vody se v 17 ml absolutního ethanolu přes noc míchá ve vodíkové atmosféře za tlaku 101 kPa, potom se zfiltruje, filtrát se zahustí a zbytek se vysuší ve vakuu. V kvantitativním výtěžku se získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,14 (methanol - chloroform 5 : 95),

Rf = 0,43 a 0,48 (methanol - dichlormethan nasycený hydroxidem amonným 5:95).

e. 2(RS),3(SR)-(4-ethcxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-L-fenylalanyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = 0CH2“, R³ = 4-[CH₃CH₂OC(0)]φ-, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 15a se materiál připravený postupem podle příkladu 76d nechá reagovat s ethyl-4-isokyanatobenzoátem za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, která se izoluje ve výtěžku 95 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,21 a 0,26 (methanol - dichlormethan 5 : 95).

f. 3(RS)-(4-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-L-fenylalanylN-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = 0CH2-, R³ = 4-[CH₃CH₂OC(0)]φ-, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

Produkt z příkladu 76e se oxiduje postupem podle příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (gradientová eluce od směsi diethyletheru a pentanu v poměru 11 : 1 do čistého etheru) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 94 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 10,26 a 13,52 (Col A; acetonitril - voda 45 : 55; FR = 2,0).

Analýza: pro CoonosWe·¹'²⁴^⁰ vypočteno 57,47 % C, 6,03 % H, 8,94 % N; nalezeno 57,43 % C, 6,02 % H, 8,97 % N.

Příklad 77

3(RS)-[[4-[(1-naftylsulfonyl)aminokarbonyl]fenyl]-aminokarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[l-naftyl-S(O₂)NHC(O)]φ, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

a. 1-naftalensulfonamid

Do míchaného roztoku 5,0 g (22 mmol) 1-naftalensulfonylchloridu ve 400 ml bezvodého diethyletheru se při teplotě -78 ’C po dobu 5 minut uvádí amoniak. Výsledná směs se 1 hodinu míchá při teplotě -78 °C, potom se nechá ohřát na teplotu místnosti a přes noc se míchá. Diethylether se odpaří ve vakuu, bílý práškovitý zbytek se promyje vodou a vysuší se ve vakuu. Získá se 3,2 g (70 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílého prášku tajícího při 152 až 153 ’C.

b. . 3(RS)-[[4—[(1-naftylsulfonyl)aminokarbonyl]fenyl]amino- karbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methy.l-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[l-naftyl-S(0₂)NHC(0)]0, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

K roztoku 1,5 g (2,84 mmol) materiálu připraveného v příkladu 16, 0,38 g (3,1 mmol) 4-dimethylaminopyridinu a 0,59 g (3,08 mmol) ve vodě rozpustného karbodiimidu [l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid-hydrochloridu] ve 40 ml suchého dichlormethanu se za míchání pod dusíkem při teplotě místnosti přidá 0,64 g (3,09 mmol) 1-naftalensulfonamidu připraveného postupem podle příkladu 77a. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, potom se promyje IN kyselinou chlorovodíkovou a po vysušení síranem hořečnatým se zfiltruje. Filtrát se zahustí za sníženého tlaku na pryskyřičnátý zbytek, který se vyčistí velmi rychlou chromatografií (dichlormethan a potom směs dichlormethanu, methanolu a kyseliny octové v poměru 98 : 1,9 : 0,1). Získá se 0,76 g (36 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílého prášku.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 10,08 a 16,38 (Col A; acetonitril - voda 30 : 70; FR = 2,5).

Analýza: pro C₃₄H₃₈F₃N₅O₇S.H₂O vypočteno 54,25 % C, 5,49 % H, 9,30 % H; nalezeno 54,56 % C, 5,68 % H, 8,85 % N.

Příklad 78

A

3(RS)-N -(4-hydroxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-N -fenylmethoxykarbonyl-L-lysyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH2)₄NHC(O)OCH₂0,_i R³ = 4-[HOC(O)]0, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-N²-(4-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-N⁶-fenylmethoxykarbony 1-L-lysyl-N- [3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH2)₄NHC(O)OCH₂0, R³ = 4-[C₂H₅OC(O)]φ, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

CZ 278063 Β6·

Způsobem podle příkladu 15a se materiál připravený postupem podle příkladu 72a nechá reagovat s ethyl-4-isokyanatobenzoátem, čímž se získá sloučenina uvedená v názvu, izolovaná po vyčištění velmi rychlou chromatografií (gradientově eluce nejprve chloroformem a potom směsmi methanolu a chloroformu v poměrech od 2 : 98 do 5 : 95).

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,41 (methanol - chloroform 2,5 : 97,5).

b. 3(RS)-N²-(4-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-N⁶-fenylmethoxykarbony1-L-lysyl-N-[3- (1,1, '1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH2)₄NHC(O)OCH₂0, R³ = 4-[C₂H₅OC(O)]0, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

Produkt z příkladu 78a se oxiduje způsobem podle příkladu 31c. Po vyčištění velmi rychlou chromátografií (gradientová eluce nejprve chloroformem a potom směsmi methanolu a chloroformu v poměrech od 2,5 : 97,5 do 5 : 95) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 77 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,48 (methanol - chloroform 2,5 : 97,5).

c. 3(RS)-N²-(4-hydroxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-N⁶-fenylmethoxykarbonyl-L-lysyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH2)₄NHC(0)OCH₂0, R³ = 4-[HOC(O)]0, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 14 se materiál připravený postupem podle příkladu 78b převede na sloučeninu uvedenou v názvu, která se izoluje ve výtěžku 85 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,71 a 6,76 (Col A; acetonitril - voda 40 : 60; FR = 2,5).

Analýza: pro C₃₃H₄₀F₃N₅O₈.1,5H₂O vypočteno 55,15 % C, 6,03 % H, 9,74 % N; nalezeno 54,90 % C, 5,92 % H, 9,29 % N.

Příklad 79

3(RS)-(4-hydroxykarbonylfenyl)karbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentylj]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[HOC(O)]0, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 14 se materiál připravený postupem podle příkladu 84c převede na sloučeninu uvedenou v názvu, která se izoluje ve výtěžku 72 %.

100

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 3,48 a 5,31 (Col A; voda - acetonitril 3 : 1; FR = 2,0).

Analýza: pro ^c24^H30^F3^N3°6*¹'^0H2° vypočteno 54,23 % C, 6,07 % H, 7,91 % N; nalezeno 54,46 % C, 6,05 % H, 7,69 % N.

Příklad 81

3(RS)-[1- (ethoxykarbonyl)cyklopent-l-yl]karbonyl-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec lb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH3CH₂-, R³ = 1-[CH₃CH₂OC(O)]-cyklopent-Ι-yl-, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

a. l-(ethoxykarbonyl)cyklopentankarboxylová kyselina

K roztoku 2,5 g (11,68 mol) diethyl-1,1-cyklopentandikarboxylátu v 10 ml ethanolu se během 0,5 hodiny přikape roztok 654 mg (11,68mmol) hydroxidu draselného v 10 ml ethanolu. Výsledná směs se 96 hodin míchá při teplotě místnosti, potom se zahustí ve vakuu a zbytek se roztřepe mezi vodu a ethylacetát. Vodná vrstva se okyselí koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje se ethylacetátem. Ethylacetátové extrakty se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Získá se 1,73 g žádaného produktu ve formě čirého oleje.

b. 2(RS),3(SR)—[!—(ethoxykarbonyl)cyklopent-l-yl]karbonyl-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH3CH₂-,

R³ = 1-[CH₃CH₂OC(O)]-cyklopent-l-yl, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Pracuje se způsobem popsaným v příkladu 50a za použití následujících množství reakčních činidel, vztaženo na 1 ekvivalent produktu připraveného postupem podle příkladu 81a: 3,3 ekvivalentu hydroxybenzotriazolu, 1,65 ekvivalentu 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu, 1,5 ekvivalentu triethylaminu a 1,0 ekvivalentu materiálu připraveného postupem podle příkladu 61a, přičemž se neprovede promytí roztokem kyseliny citrónové. Získá se sloučenina uvedená v názvu, která se izoluje vakuovou chromatografií (gradientově eluce od směsi diethyletheru a hexanu v poměru 1 : 1 do samotného diethyletheru) ve výtěžku 46 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,47 (methanol - chloroform 5 : 95).

Analýza: pro ^C24^H38^F3^N3°6 vypočteno 55,27 % C, 7,34 % H, 8,06 % N; nalezeno 54,74 % C, 5,93 % H, 7,88 % N.

101

c. 3(RS)-[1-(ethoxykarbonyl)cyklopent-l-yl]karbony1-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH3CH₂, R³ = 1-[CH₃CH₂0C(0)]-cyklopent-l-yl, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 81b se oxiduje postupem podle příkladu 33c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (aceton - hexan 1 : 4) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 37 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 6,68 a 8,31 (Col A; voda - acetonitril 70 : 30; FR = 2,0).

Analýza: pro C24^H36^F3^N3°6-¹<^1H2° vypočteno 53,44 % C, 7,13 % H, 7,80 % N; nalezeno 53,48 % C, 6,97 % H, 7,60 % N.

Příklad 83

3(RS)-[1-(hydroxykarbonyl)cyklopent-l-yl]karbonyl-L-a-aminobutyryl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec-Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH3CH₂-, R³ = 1-[HOC(O)]cyklopent-l-yl, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Materiál připravený postupem podle příkladu 81c se způsobem podle příkladu 14 převede na sloučeninu uvedenou v názvu, která se izoluje ve výtěžku 79 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 3,74 a 4,92 (Col A; voda — acetonitril 3 : 1; FR = 2,0).

Příklad 84

3(RS)-(4-methoxykarbonylfenyl)karbony1-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[CH₃OC(O)]φ, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

a. 4-methoxykarbonylbenzenkarboxylová kyselina

K roztoku 299,25 g (2,99 mol) oxidu chromového v 925 ml vody se při teplotě 0 ’C za míchání přikape během 0,5 hodiny 277,5 iúl (5,2 mol) koncentrované kysliny sírové. Vzniklý roztok se potom během 1 hodiny přikape při teplotě 0 °c k míchanému roztoku 92,5 g (0,564 mol) methyl-4-(hydroxymethyl)benzoátu. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a přes noc se míchá. Kapalina nad černou dehtovitou usazeninou se oddekantuje a zbytek se extrahuje acetonem. Oddekantovaná kapalina a acetonové extrakty se spojí a zahustí se ve vakuu na tmavohnědý zbytek, který se trituruje se 4 litry chladné vody. Vyloučená sraženina

102 se shromáždí, třikrát se promyje vodou (1 litr) a vysuší se. Získá se 94,6 g (94 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílých krystalů o teplotě tání 218 až 221 °C.

b. 2(RS),3(SR)-(4-methoxykarbonylfenyl)kařbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[CH₃OC(Ο)]φ, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

K míchanému roztoku 17,54 g (47,8 mmol) sloučeniny připravené postupem podle příkladu 3d, 8,6 g (47,8 mmol) produktu z příkladu 84a a 12,86 g (95,3 mmol) hydroxybenzotriazolu ve 400 ml suchého tetrahydrofuranu se pod dusíkem při teplotě 0 °C přidá 10,27 g (53,6 mmol) lrethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid-hydrochloridu. Reakční směs se 1 hodinu míchá p při teplotě 0 C, potom se nechá ohřát na teplotu místnosti a přes noc se míchá. Tetrahydrofuran se odpaří ve vakuu a olejovitý odparek se rozpustí v ethylacetátu. Ethylacetátový roztok se promyje 1N kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a po filtraci se zahustí ve vakuu.. Získá se 24,45 g surového produktu ve formě suché bílé pěnovité látky, z níž se po vyčištění velmi rychlou chromatografií (chloroform - methanol 97 : 3) získá ve výtěžku 79 % sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,62 a 5,80 (Col A; voda - acetonitril 55 : 45; FR = 3,0).

c. 3(RS)-(4-methoxykarbonylfenyl)karbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec lb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[CH₃OC(O)]φ, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 84b se oxiduje způsobem podle příkladu 31c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (chloroform methanol 98 : 2) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 69 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,51 a 6,82 (Col A; voda - acetonitril 55 : 45; FR = 2,0). Analýza: pro C₂₅H₃₂F₃N₃0₆.0,5H₂0 vypočteno 55,96 % C, 6,13 % H, 7,83 % N; nalezeno 55,90 % C, 6,30 % H, 7,93 % N.

d. 3(RS)-(4-methoxykarbonylfenyl)karbony1-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec lb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = 4-(CH₃OCO)0, R⁴ = H, A = co, n = l]b

103

V následující části je popsána výhodná metoda přípravy sloučeniny uvedené v názvu, při níž se používá oxidace, kterou popsali D. B. Dess a J. C. Martin, J. Org. Chem. , 48;, 4155 až 4156 (1983).

Kmíchanému roztoku 6,76 g (15,96 mmol) Dess-Martinova perjodinanu a 6,49 g (12,25 mmol) produktu připraveného postupem podle příkladu 84b v 80 ml suchého dichlormethanu se pod dusíkem přidá 1,82 g (1,23 ml; 15,96 mmol) trifluoroctové kyseliny. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, potom se k ní přidá 30 ml diethyletheru a směs se vylije do vodného roztoku nasyceného hydrogehuhličitanem sodným a thiosíranem sodným (17,36 g; 111,51 mmol). Po patnáctiminutovém míchání se organická vrstva oddělí, promyje se nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí. Získá se 6,42 g (99,4 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílé pěnovíté látky.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf =0,67 a 0,76 (methanol - chloroform 3 : 97).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,64 a 6,84 (Col A; voda - acetonitril 60 : 40; FR = 2,0).

Příklad 85

3(RS)-(4-hydroxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-L-fenylalanylN-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = 0CH2, R³ = 4-[HOC(O)]0, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1] .

Analogickým způsobem jako v příkladu 14 se materiál připravený postupem podle příkladu 76f převede na sloučeninu uvedenou v názvu, která se izoluje velmi rychlou chromatografií (gradientově eluce směsmi methanolu a dichlormethanu v poměrech od 4 : 96 do 10 : 90) ve výtěžku 48 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 5,52 a 8,12 (Col A; acetonitril - voda 35 : 65; FR = 2,0).

Analýza: pro ^C28^H31^F3^N4°6*^H2° vypočteno 56,56 % C, 5,59 % H, 9,42 % N; nalezeno 56,58 % C, 5,59 % H, 9,22 % N.

Příklad 86

3(RS)-(4-methoxykarbonylfenyl)methoxykarbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = ch(ch3)ch3, R² = (ch3)₂ch-, R³ = 4-[CH₃OC(O)]0CH₂-, R⁴ = H,

A = OCO, n = 1]

I

104

a. (4-methoxykarbonylfenyl)methyl-4-nitrofenyl-karbonát • Pracuje se postupem popsaným v příkladu 7a s tím rozdílem, že se neprovádí promývání pufrem o pH 7,0. Tímto způsobem se methyl-4-hydroxymethylbenzoát převede na sloučeninu uvedenou v názvu, která se izoluje triturací s hexanem a po promytí směsí stejných dílů hexanu a ethylacetátu a po vysušení ve vakuu rezultuje ve výtěžku 50 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf... - 0,75 (éthylacetát - hexan 1:1).

b. 2(RS),3(SR)-(4-methoxykarbonylfenyl)methoxykarbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH, R³ = 4-[CH₃OC(O)]0CH₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 7b se materiál připravený postupem podle příkladu 3d nechá reagovat s produktem z příkladu 86a za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, která se po vyčištění velmi rychlou chromatografií (aceton - hexan 2 : 3) izoluje ve výtěžku 48 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,63 a 0,68 (methanol - chloroform 1:9).

Analýza: pro ^C26^H36^F3^N3®7 vypočteno 55,81 % C, 6,48 % H, 7,51 % N; nalezeno 55,54 % C, 6,39 % H, 7,29 % N.

c. 3(RS)-(4-methoxykarbonylfenyl)methoxykarbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[CH₃OC(O)]0CH₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Produkt z příkladu 86b se analogickým způsobem jako v příkladu 33c podrobí oxidaci. Po vyčištění preparativní chromatografií na tenké vrstvě (ethylacetát — diethylether 3 : 2) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 10 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = ⁴ ,32 a 6,44 (voda - acetonitril 1 : 1; FR = 2,0).

Analýza: pro ^C26^H34^F3^N3°7·⁰ >^65H2° vypočteno 54,86 % C, 6,25 % H, 7,38 % N; nalezeno 54,87 % C, 6,25 % H, 7,05 % N.

105

Příklad 87

3(RS)-[E-3-(4-ethoxykarbonylfenyl)-l-oxoprop-2-enyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib,

R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = E-4-[CH₃CH₂OC(O)]0CH=CH,

R⁴ = H, A = CO, n = 1] a; Ethyl-4-formylbenzoát

Směs 25 g 4-formylbenzoové kyseliny, 2 ml koncentrované kyseliny sírové a 19,5 ml ethanolu se ve 100 ml 1,2-dichlorethanu 5 dnů mírně vaří pod zpětným chladičem. Rozpouštědlo se odpaří, k zbytku se přidá diethylether, etherový roztok se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí. Destilací odparku v límcové baňce se získá 20,1 g (68 %) esteru uvedeného v názvu, ve formě čiré kapaliny vroucí při 145 až 150 ’C/2 900 Pa.

b. E-(4-ethoxykarbonyl)benzenpropenová kyselina

Směs 8,9 g produktu z příkladu 87a, 10,4 g malonové kyseliny a 1 ml piperidinu se ve 25 ml pyridinu 3 hodiny zahřívá na parní lázni. Zbytek po odpaření rozpouštědla se rozmíchá ve 200 ml vody a hodnota pH se kyselinou octovou upraví na 6. Vyloučená sraženina se shromáždí a vysuší se na vzduchu. Tento materiál poskytne krystalizací z ethanolu 10,1 g (92 %) kyseliny uvedené v názvu, ve formě zářivě bílých krystalů o teplotě tání 220,5 až 221 °C.

c. 2(RS),3(SR)-[E-3-(4-ethoxykarbonylfenyl)-l-oxoprop-2-enyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-,

R³ = E-[4-CH₃CH₂OC(O)]0CH=CH, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 32a se materiál připravený postupem podle příkladu 3d nechá reagovat s produktem z příkladu 87b. Získá se sloučenina uvedená v názvu, která se izoluje ve výtěžku 88 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,14 a 0,18 (methanol - dichlormethan 5 : 95).

d. 3(RS)-[E-3-(4-ethoxykarbonylfenyl)-l-oxoprop-2-enyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-,

R³ = E-[4-CH₃CH₂OC(O)]0CH-CH, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 87c se oxiduje postupem podle příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - dichlormethan 2 : 98) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 65 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

106

Rf = 0,23 (methanol -dichlormethan 5 : 95).

Analýza: pro C28^H36^F3^N3°6 vypočteno 59,25 % C, 6,39 % H, 7,40 % N; nalezeno 59,14 % C, 6,75 % H, 7,21 % N.

Příklad 88

3(RS)-(2-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec lb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 2-[CH₃CH₂OC(O)]φ, R⁴ = H, A = NHCO, η = 1]

a. 2(RS),3(SR)-(2-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-L-valyl-N—[3—(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 2-[CH₃CH₂OC(O)]0, R⁴ =H, A = NHCO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 15a se materiál připravený postupem podle příkladu 3d nechá reagovat s ethyl-2-isokyanatobenzoátem. Získá se sloučenina uvedená v názvu, která se po vyčištění velmi rychlou chromatografií (ethylacetát - hexan 60 : 40) izoluje ve výtěžku 66 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,48 a 0,57 (methanol — chloroform 5 : 95).

b. 3(RS)-(2-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec lb, R¹ = ch(ch3)ch3, R² = ch(ch3)ch₃, R³ = 2-(CH₃CH₂OCO)0, R⁴ = H,

A = NHCO, n = 1]

Používá se modifikovaný postup popsaný v příkladu 54b. Reakce se provádí za použití 1 ekvivalentu produktu z příkladu 88a, 2 ekvivalentů chloridu kyseliny šťavelové a 4 ekvivalentů dimethylsulfoxidu, přičemž tyto látky se přidávají k reakční směsi ochlazené na -45 °C, potom se k výsledné směsi namísto diisopropylethylaminu přidá při teplotě -20 °C triethylamin. Reakční směs se zpracovává promytím 1N kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 10% vodným roztokem chlornanu sodného a roztokem chloridu sodného). Sloučenina uvedená v názvu se získá po vyčištění velmi rychlou chromatografií (diethylether - hexan 4 : 1) ve výtěžkku 74 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 6,95 a 10,46 (Col A; acetonitril - voda 35 : 65; FR = 2,0). Analýza: pro ^C26^H35^F3^N4^O6-°'^75H2° vypočteno 54,78 % C, 6,45 % H, 9,83 % N; nalezeno 54,73 % C, 6,34 % H, 9,51 % N.

107

Příklad 89

3(RS)-4-[(4-nitrof eny.l)sulfonaminokarbonyl]fenylkarbonyl-L-valylN-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec

Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[(4-NO₂0)S(O₂)NHCO(Ο)]φ, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

K míchanému roztoku 0,5 g (0,97 mmol) produktu z příkladu 79, 0,12 g (0,97 mmol) 4-dimethylaminopyridinu, 0,22 g (0,97 mmol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu a 30 ml suchého dichlormethanu se při teplotě místnosti pod dusíkem přidá 0,196 g (0,97 mmol) 4-nitrobenzensulfonamidu. Výsledná směs se přes noc míchá při teplotě místnosti a potom se zfiltruje. Filtrát se promyje 1N kyselinou chlorovodíkovou, vysuší se síranem hořečnatým a po filtraci se zahustí ve vakuu na žlutě zbarvený zbytek, který po vyčištění velmi rychlou chromatografií (chloroform - methanol - kyselina octová 90 : 9,8 : 0,2) poskytne 0,29 g (43 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílého prášku.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,26 a 8,42 (Col A; voda - acetonitril 4 : 1; FR - 2,0).

Analýza: pro ^C30^H34^F3^N5°9*^H2° vypočteno 50,34 % C, 5,06 % H, 9,78 % N; nalezeno 50,03 % C, 4,92 % H, 9,43 % N.

Příklad 90

Fenylmethylester 3(RS)-fenylmethoxykarbonyl-L-glutamyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = -(CH2)₂C-(O)OCH₂0, R³ = 0CH₂-, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-fenylmethoxykarbonyl-L-glutamyl-N-[3-(l,l,l-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH2)₂C(O)OCH₂0, R³ = 0CH₂-, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 84b se τ-benzylester benzyloxykarbonylglutamové kyseliny nechá reagovat s materiálem připraveným podle příkladu 2b za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, která se po vyčištění velmi rychlou chromatografií (gradientova cluce od směsi hexanu a diethyletheru v poměru 1 : 3 k čistému diethyletheru) izoluje ve výtěžku 64 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,61 (diethylether).

108

b. Fenylmethylester 3(RS)-fenylmethoxykarbonyl-L-glutamyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec

Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH2)₂C(O)OCH₂0, R³ = 0CH₂-, R⁴ = H,

A = OCO, n = 1]

Produkt z příkladu 90a se oxiduje způsobem podle příkladu 54b. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (gradientově eluce směsmi hexanu a diethyleteru v poměrech od 2 : 8 do 1 : 9) se žádaný produkt izoluje ve výtěžku 30 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 6,12 a 8,48 (Col A; acetonitril - voda 1 : 1; FR = 3,0).

Analýza: pro C₃₁H_3gF₃N₃O₇.2H₂O vypočteno 56,78 % C, 6,15 % H, 6,41 % N; nalezeno 56,98 % C, 5,74 % H, 6,12 % N.

Příklad 92

3(RS)-(4-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-L-fenylglycyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = φ, R³ = 4-[CH3CH₂O-C(O)]0, R⁴ = H, A = · NHCO, n = 1]

a. 2(RS),3(SR)-fenylmethoxykarbonyl-L-fenylglycyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = 0, R³ = 0CH2-, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 50a se materiál připravený postupem podle příkladu 76b nechá reagovat s benzyloxykarbonyl-L-fenylglycinem za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, která po vyčištění velmi rychlou chromatografii (methanol - dichlormethan 5 : 95) rezultuje ve výtěžku 95 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,13 a 0,19 (methanol - dichlormethan 5 : 95).

b. 2(RS),3(SR)-L-fenylglycyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec IVb, R¹ = CH(CH₃)CH₃, R² = φ, R⁴ = Η, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 2b se materiál připravený postupem podle příkladu 92a převede ve 100% výtěžku na sloučeninu uvedenou v názvu.

c. 2(RS),3(SR)-(4-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-L-fenylglycyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = 0, R³ = 4-[CH3CH₂OC(O)]0, R⁴ = H, A = NHCO, n =1]

109

Analogickým způsobem jako v příkladu 15a se materiál připravený postupem podle příkladu 92b nechá reagovat s ethyl-4-isokyanatobenzoátem, čímž se ve výtěžku 86 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,24 a 0,27 (methanol - diethylether 1' : 99).

d. 3(RS)-(4-ethoxykarbonylfenyl)aminokarbonyl-L-fenylglycyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = φ, R³ = 4-[CH3CH₂OC(O)]φ, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

Produkt z příkladu 92c se oxiduje postupem podle příkladu 31c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (gradientová eluce od diethyletheru do směsi acetonitrilu a diethyletheru v poměru 1 : 99) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 82 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 8,88 a 10,82 (Col A; acetonitril - voda 45 : 55; FR = 2,0). Analýza: pro C₂₉H₃₃F₃N₄O₆.0,64H₂O vypočteno 56,77 % C, 5,80 % H, 8,75 % N; nalezeno 56,62 % C, 5,78 % H, 8,78 % N.

Příklad 93

3(RS)-fenylmethoxykarbonyl-L-[5-(fenylsulfonylamino)glutamyl]-N— -[3-(l,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = 0S(O2)NHC(O)(CH₂)₂, R³ = 0CH₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

a. 3(RS)-fenylmethoxykarbonyl-L-glutamyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = HOCO(CH2)₂/ ^r3 = 0CH₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Materiál připravený postupem podle příkladu 90b se způsobem podle příkladu 14 převede na sloučeninu uvedenou v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,27 (methanol - chloroform - kyselina octová

2,5 : 95 : 0,1)

b. 3(RS)-fenylmethoxykarbonyl-L-[5-(fenylsulfonylamino)glutamyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = 0S(O2)NHC(O)(CH₂)₂, R³ = 0CH₂-, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

110

Analogickým způsobem jako v příkladu 77b se materiál připravený postupem podle příkladu 93a nechá reagovat s benzensulfonamidem za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, která po vyčištění velmi rychlou chromatografií (gradientově eluce směsmi methanolu a diethyletheru v poměru od 2,5 : 97,5 do 5 : 95) rezultuje ve výtěžku 40 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 7,38 a 10,35 (Col A; voda -acetonitril 65 : 35; FR =2,5).

Analýza: pro ^C30^H35^F3^N4°8^S-¹'^5H2^O vypočteno 51,79 % C, 5,51 % H, 8,19 % N; nalezeno 51,70 % C, 5,24 % H, 7,89 % N.

Příklad 94 (RS)-[4-(fenylsulfonylaminokarbonyl)fenylkarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[0S(Ó₂)NHC(O)]φ, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 89 se materiál připravený postupem podle příkladu 79 nechá reagovat s benzensulfonamidem. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (ethylacetát - diethylether - kyselina octová 25 : 74,9 : 0,1) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 33 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 3,71 a 5,65 (Col A; voda - acetonitril 3 : 1; FR = 2,0).

Analýza: pro C₃₀H₃₅F₃N₄O₇S.l,25H₂0 vypočteno 53,36 % C, 5,59 % H, 8,29 % N; nalezeno 53,75 % C, 5,64 % H, 7,72 % N.

Příklad 95

3(RS)-[4-[(4-bromfenyl)sulfonylaminokarbonyl]fenylkarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[(4-Br0)S(O₂)NHC(O)]0, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

a. 4-brombenzensulfonamid

Analogickým způsobem jako v příkladu 77a se 10,0 g (39,6 mmol) 4-brombenzensulfonylchloridu převede na sloučeninu uvedenou v názvu, která rezultuje ve výtěžku 8,45 g (92 %) ve formě bílých krystalů o teplotě tání 163 až 165 ’C.

111

b. 3(RS)-[4—[(4-bromfenyl)sulfonylaminokarbonyl]fenylkarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[(4-Br-0)S(O₂)NHC(O)]φ, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 89 se materiál“ připravený postupem podle příkladu 79 nechá reagovat s produktem z příkladu 95a za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, která po překrystalování ze směsi hexanu a diethyletheru rezultuje ve výtěžku 50 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 5,25 a 7,84 (Col A; voda - acetonitril 77,5 : 22,5; FR = 2,0).

Analýza: pro C₃₀H₃₄BrF₃N₄O₇S.0,75H₂O vypočteno 48,36 % C, 4,80 % H, 7,52 % N; nalezeno 48,61 % C, 4,89 % H, 7,18 % N.

Příklad 96

3(RS)-4-(1-naftylsulfonylamino)-1,4-dioxobutyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = I-naftyl-S(O₂)NHC(O)(CH₂)₂, R⁴ = H, A = CO, n =1]

Analogickým způsobem jakc v příkladu 89 se materiál připravený postupem podle příkladu 14 nechá reagovat s 1-naftalensulfonamidem za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, která po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol chloroform 5 : 95) rezultuje ve výtěžku 46 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,09 a 6,57 (Col A; voda - acetonitril 60 : 40; FR = 2,0).

Analýza: pro C₃₀H₃₇F₃N₄O₇S.0,5H₂O vypočteno 54,29 % C', 5,77 % H, 8,44 % N; nalezeno 54,33 % C, 6,01 % H, 8,09 % N.

Příklad 97

3(RS)-[2-(4-aminokarbonylfenoxy)-l-oxoethyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[H₂NC(O)]0OCH₂, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

a. Methylester 4-aminokarbonylfenoxyoctové kyseliny

Směs 3,43 g p-hydroxybenzamidu, 2,37 ml methyl-bromacetátu a 3,45 g uhličitanu draselného se ve 25 ml dimethylformamidu

112 hodin^- míchá. Reakční směs se zředí 150 ml vody, pevný materiál se odfiltruje a po promytí vodou se vysuší na vzduchu.

Po krystalizaci z ethanolu se získá 3,3 g (63 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílých krystalů.

b. 4-aminokarbonylfenoxyoctové kyselina

Směs 3,3 g produktu z příkladu 97a a 30 ml 0,5N hydroxidu sodného se 3 hodiny míchá. Reakční roztok se zfiltruje a filtrát se 1N kyselinou chlorovodíkovou okyselí na pH 1. Pevný materiál se odfiltruje a vysuší se na vzduchu. Získá se 3,0 g (97 %) kyseliny uvedené v názvu, ve formě bílého prášku tajícího při 255 až 256 ’C.

c. 2(RS), 3 (SR) —[ 2- (4-aminokarbonylfenoxy)-1-oxoethyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[H₂NC(O)]0OCH₂, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 32a se materiál připravený postupem podle příkladu 5d nechá reagovat s materiálem připraveným podle příkladu 97b. Získá se sloučenina uvedená v názvu, která se izoluje ve výtěžku 33 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f =0,27 a 0,31 (methanol - dichlormethan 1 : 9).

d. 3(RS)—[2-(4-aminokarbonylfenoxy)-1-oxoethyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[H₂NC(O)]0OCH₂, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 97c se oxiduje způsobem popsaným v příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - dichlormethan 4 : 96) se ve výtěžku 35 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,37 (methanol - chloroform 1:9).

Analýza: pro C₂₅H₃₃F₃N₄O₆.1,5H₂O vypočteno 52,72 % C, 6,37 % H, 9,83 % N; nalezeno 52,78 % C, 6,03 % H, 9,65 % N.

Příklad 98

3(RS)-(4-hydroxykarbonylfenyl)methoxykarbonyl-L-valyl-N-[3-(l,l/l“trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[HOC(O)]0CH₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

113

Analogickým způsobem jako v příkladu 14 se materiál připravený postupem podle příkladu 86c převede na sloučeninu uvedenou v názvu, která se izoluje preparativní chromatografií na tenké vrstvě (methanol - chloroform 15 : 85) ve výtěžku 45 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R — 2,37 a 3,02 (Col A; voda - acetonitril 60 : 40; FR = 2,0). Analýza: pro ^25^Η32^Ρ3^Ν3^Ο7*^2H2° vypočteno 51,81 % C, 6,26 % H, 7,25 % N; nalezeno 51,75 % C, 5,63 % H, 7,15 N.

Příklad 99

3(RS)-[4-[4-(2-amino-2-oxoethyl)fenoxy j-1-oxobutyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,l-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, r¹ = ch(ch3)ch3, r² = (ch3)₂ch, R³ = 4-[H₂NC(O)CH₂]0O(CH₂)₃, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

a. Ethylester 4-(4-aminokarbonylfenoxy)butanové kyseliny

Směs 3,8 g p-hydroxyfenylacetamidu, 3,6 ml ethyl-4-brombutyrátu a 3,45 g uhličitanu draselného se ve 30 ml dimethylformamidu 12 hodin michá. Reakční směs se zředí 100 ml vody, pevný materiál se odfiltruje a vysuší se na vzduchu. Krystalizací tohoto materiálu z ethanolu se získají 4 g (60 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílých krystalů o teplotě' tání 144,5 až 145,5 “C.

b. 4-(4-aminokarbonylfenoxy)butanová kyselina

Směs 3,97 g produktu z příkladu 99a a 20 ml 1N hydroxidu sodného se při teplotě místnosti přes noc míchá. Reakční roztok se zfiltruje a okyselí se 1N kyselinou chlorovodíkovou. Pevný produkt se odfiltruje a vysuší se ve vysokém vakuu. Získají se 3 g (82 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílého prášku o teplotě tání 162,5 až 164 °C.

c. 2 (RS),3(SR)-[4-[4-(2-amino-2-oxoethyl)fenoxyl]-1-oxobutyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,l-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L— -prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-,

R³ = 4-[H₂NC(O)CH₂]φθ(CH₂)₃, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 32a se materiál připravený postupem podle příkladu 5d nechá reagovat s produktem z příkladu 99b. Ve výtěžku 71 % se izoluje sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,28 a 0,31 (methanol - chloroform 1:9).

114

d. 3(RS)-[4-[4-(2-amino-2-oxoethyl)fenoxy]-l-oxobutyl]-L-valyl— -N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopeňtyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[H₂NC(O)CH₂]0O(CH₂)₃, R⁴ = H, A = CO, n = U

Produkt z příkladu 99c se oxiduje způsobem popsaným v příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - dichlormethan 4 : 96) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 32 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 2,11 a 3,01 (Col B; voda — acetonitril - tetrahydrofuran trifluoroctová kyselina 55 : 35 : 15 : 0,1; FR - 2,0).

Analýza: pro ^C28^H39^F3^N4°6’^5H2° vypočteno 56,65 % C, 6,79 % H, 9,43 % N;

nalezeno 56,83 % C, 6,98 % H, 9,24 % N.

Příklad 100

3(RS)-[3—(4-hydroxykarbonylfenyl)-l-oxoprop-2-enyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = E-4-[HOC(O)]0CH=CH, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 14 se materiál připravený postupem podle příkladu 87d převede ve výtěžku 88 % na sloučeninu uvedenou v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 2,6 a 3,4 (Col B; voda - acetonitril - tetrahydrofuran trifluoroctová kyselina 55 : 35 : 15 : 0,1, FR = 1,5).

Analýza: pro C₂₆H₃₂F₃N₃O₆.0,35H₂O vypočteno 57,21 % C, 6,03 % H, 7,96 % N;

nalezeno 57,40 % C, 6,40 % H, 7,38 % N.

Příklad 101

3(RS)-[2-(4-ethoxykarbonylfenoxy)-1-oxoethyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[CH₃CH₂OC(O)]0OCH₂, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

a. Ethyl-4-[2-oxo-2(fenylmethoxy)ethoxy]benzoát

115

Směs 4,98 g ethyl-p-hydroxybenzoátu, 4,75 ml benzyl-bromacetátu a 4,14 g uhličitanu draselného se ve 30 ml dimethylformamidu 15 hodin míchá. Reakční směs se zředí 200 ml vody a extrahuje se směsí stejných dílů etheru a hexanu. Spojené organické extrakty se promyjí vodou a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se odpaří. Získá se 9,3 g (99 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě těžkého oleje.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,71 (diethylether - hexan 1:1).

b. Ethyl-4-(2-hydroxy-2-oxoethoxy)benzoát

Roztok 2,0 g produktu z příkladu 101a v 50 ml ethanolu se v přítomnosti 200 mg 10% paladia na uhlí hydrogenuje za tlaku vodíku 170 kPa. Po 20 minutách, kdy je reakce ukončena, se reakční směs zfiltruje přes vrstvu křemeliny a filtrát se ústí ve vakuu. Zbytek poskytne po krystalizaci ze směsi methyl-terc.butyletheru a hexanu 900 mg (63 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě jemných bílých jehličkových krystalů o teplotě tání 129 až 130 °C.

c. 2(RS),3(SR)-[2-(4-ethoxykarbonylfenoxy)-l-oxoethyl]-L-valyl-N-3—(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-,

R³ = 4-[CH₃CH₂OC(O)]0OCH₂, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 32a se materiál připravený postupem podle příkladu 5d nechá reagovat s produktem z příkladu 101b. Ve výtěžku 92 % se izoluje sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf — 0,47 a 0,53 (methanol - dichlormethan 1 : 9).

d. 3(RS)-[2-(4-ethoxykarbonylfenoxy)-l-oxoethyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH, R³ = 4-[CH₃CH₃OC(O)]0OCH₂, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 101c se oxiduje způsobem podle příkladu 61c. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol dichlormethan 2 : 98) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 41 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,37 (methanol - chloroform 1 : 9).

Analýza: pro ^C27^H36^F3^N3°7 vypočteno 56,74 % C, 6,35 % H, 7,35 % N;x nalezeno 56,40 % C, 6,50 % H, 7,12 % N.

116 V': ·. ' I

Příklad 102

3(RS)-[3-(4-ethoxykarbonylfenyl)-1-oxopropyl]-L-valyl-N-[3-(1,1, 1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH, R³ - 4-[CH₃CH₂OC(O)]0(CH₂)₂-, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

a. 4-ethoxykarbonylbenzenpropanová kyselina

Roztok 4,9 g 4-ethoxykarbonylskořicové kyseliny ve 120 ml ethanolu se v přítomnosti 485 mg rhodia na uhlí 21 hodinu hydrogenuje za atmosferického tlaku. Reakční roztok se zfiltruje, rozpouštědlo se odpaří a zbytek se krystaluje z cyklohexanu. Získá se 2,23. g (46 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílých krystalů o teplotě tání 108,5 až 110,5 °C.

b. 2(RS),3(SR)-[3—(4-ethoxykarbonylfenyl)-1-oxopropyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² — (CH3)₂CH~, R³ = 4-[CH₃CH₂OC(O)]0(CH₂)₂-, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 32a se materiál připravený postupem podle příkladu 5d nechá reagovat s produktem z příkladu 102a. Získá se sloučenina uvedená v názvu, která se po vyčištění velmi rychlou chromátografií (methanol - dichlormethan 4 : 96) izoluje vě výtěžku 83 %.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,33 a 0,38 (methanol - dichlormethan 5 : 95).

c. 3(RS)-[3-(4-ethoxykarbonylfenyl)-1-oxopropyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(ČH3)CH3, R² = (CH3)₂CH~, R³ = 4-[CH3CH2OC(O)]φ(^ch2)₂-/ R⁴ = H, A = CO, n » 1]

Produkt z příkladu 102b se oxiduje způsobem podle příkladu 84d. Ve výtěžku 97 % se získá sloučenina uvedená v názvu.

Analýza: pro C₂₈H₃₈F₃N₃Og.0,65H₂O vypočteno 57,85 % C, 6,81 % H, 7,23 % N; nalezeno 57,89 % C, 6,83 % H, 6,98 % N.

Příklad 103

3(RS)-4-hydroxybenzoyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-(HO)]0, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

V\ 117 CZ 278063 B6

a. 2(RS),3(SR)-4-hydroxybenzoyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-(Η0)φ, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 84b se materiál připravený postupem podle příkladu 5d nechá reagovat s 4-hydroxybenzoovou kyselinou. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (ethylacetát - diethylether 15 : 85) se ve výtěžku 65 % izoluje sloučenina uvedená v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,43 (ethylacetát - diethylether 15 : 85).

Analýza: pro ^C23^H32^F3^N3°5* ⁰'^6H2° vypočteno 55,43 % C, 6,71 % H, 8,43 % N; nalezeno 55,76 % C, 6,62 % H, 8,03 % N.

b. 3(RS)-4-hydroxybenzoyl-L-valyl-N-[3-(l,l,l-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH~, R³ = 4-(ΗΟ)φ, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Produkt z příkladu 103a se oxiduje způsobem podle příkladu 33c s následující modifikací zpracování reakční směsi.

Surový zbytek se rozpustí v methanolu a roztok se při teplotě místnosti 16 hodin míchá s 5 ml vodného uhličitanu draselného. Směs se částečně zahustí ve vakuu, okyselí se koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje se ethylacetátem. Ethylacetátový roztok se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí. Zbytek poskytne po vyčištění velmi rychlou chromatografií (ethylacetát - diethylether 1:9) sloučeninu uvedenou v názvu, ve výtěžku 38 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 3,54 a 4,92 (Col A; acetonitril - voda 35 : 65; FR = 2,0). Analýza: pro 023^305^¾⁰ vypočteno 54,47 % C, 6,44 % H, 6,29 % N; nalezeno 54,83 % C, 6, 49 % H, 7,89 % N.

Příklad 104

3(RS)-[4-[(4-chlorfenyl)sulfonylaminokarbonyl]fenylkarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ .= CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH, R³ = 4-[(4-C10)S(O₂)NHC(O)]0-, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 77b se materiál připravený postupem podle příkladu 79 nechá reagovat s 4-chlor

118 benzensulfonamidem za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, která po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - dichlormethan 3 : 97) rezultuje ve výtěžku 66 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R — 4,26 a 6,07 (Col A; voda - acetonitril - tetrahydrofuran trifluoroctová kyselina 55 : 35 : 15 : 0,1)

Analýza: pro C₃₀H₃₄C1F₃N₄0₇S.0,9H₂O vypočteno 51,23 % C, 5,13 % H, 7,60 % N; nalezeno 51,23 % C, 5,11 % H, 7,96 % N.

Příklad 105

3(RS)-(3-(4-hydroxykarbonylfenyl)-1-oxopropyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[HOC(O)]0(CH₂)₂, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 14 se materiál připravený postupem podle příkladu 102c převede ve výtěžku 81 % na sloučeninu uvedenou v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 2,6 a 3,4 (Col B; voda - acetonitril - tetrahydrofuran trifluoroctová kyselina 55.: 35 : 15 : 0,1)

Analýza: pro ^C26^H34^F3^N3°6 vypočteno 57,66 % C, 6,33 % H, 7,76 % N; nalezeno 56,98 % C, 6,49 % H, 7,35 % N.

Příklad 106

3(RS)-[3-[4-[(4-chlorfenyl)sulfonylaminokarbonyl]fenyl]-1-oxopropyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[(4-C10)S(O₂)NHC(O)]0(CH₂)₂, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 77b se materiál připravený postupem podle příkladu 105 nechá reagovat s 4-chlorbenzensulfonamidem. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - dichlormethan 5 : 95) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 90 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 3,96 a 5,73 (Col B; voda - acetonitril - tetrahydrofuran trifluoroctová kyselina 55 : 35 : 15 : 0,1; FR = 3,0).

119

Analýza: pro C₃2H₃₈C1F₃N₄O₇S·7H₂O vypočteno 51,53 % C, 5,59 % H, 7,51 % N; nalezeno 51,72 %_C, 5,40 % H, 7,24 % N.

Příklad 107

3(RS)-E- [3-[4-[(4-chlorfenyl)sulfonylaminokarbonyl]fenyl]-1-oxoprop-2-enyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,Irtrifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec lb, R¹ = CH(C.H3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-4-[(4-C10)S(O₂)NHC(O)]0-CH=CH, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Analogickým způsobem jako v příkladu 77b se materiál připravený postupem podle příkladu 100 nechá reagovat s 4-chlorbenzensulfonamidem. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (methanol - dichlormethan 5 : 95) se získá sloučenina uvedená v názvu, ve výtěžku 97 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,73 a 6,68 (Col B; voda - acetonitril - tetrahydrofuran trifluoroctová kyselina 55 : 35 : 15 : 0,1; FR = 3,0).

Analýza: pro C32H3₆C1F3N4O₇S.1,^7H2O vypočteno 51,67 % C, 5,33 % H, 7,53 % N; nalezeno 51,72 % C, 5,40 % H, 7,24 % N.

Příklad 108

3(RS)-[1-[4-[[(4-bromfenyl)sulfonyl](fenylmethyl)-aminokarbonyl]fenyl]-1-oxomethyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methy1-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec lb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[4(4-Br0)S(O₂)N(CH₂0)C(O)]φ-, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

a. 4-brom-N-(fenylmethyl)benzensulfonamid

K roztoku 5,36 g (50 mmol) benzylaminu a 400 ml pyridinu se za míchání pod dusíkem při teplotě místnosti přidá 14,05 g (55 mmol) 4-brombenzensulfonylchloridu. Reakční směs se 1 hodinu míchá a potom se vylije do 800 ml vody s ledem. Vyloučená žlutá sraženina se odfiltruje a překrystaluje se z vodného ethanolu. Získá se 9,44 g (53 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě špinavě bílých jehličkovitých krystalů o teplotě tání 116 až 117 ’C.

Analýza: pro C₁₃H₁₂BrNO₂S vypočteno 47,87 % C, 3,71 % H, 4,29 % N; nalezeno 48,02 % C, 3,78 % H, 4,25 % N.

120

b. . 1,l-dimethylethyl-[[(4-bromfenyl)sulfonyl]fenylmethyl)amino- karbonyl]benzoát

K roztoku-4,4 (13,49 mmol) produktu z příkladu 108a ve 150 ml dichlormethanu se za míchání při teplotě místnosti přidá 1,81 g (14,84 mmol) 4-dimethylaminopyridinu. K výslednému roztoku se postupně přidá 2,84 g (14,84 mmol) l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid-hydrochloridu a 3,0 g (13,49 mmol) mono-terc.butylesteru tereftalové kyseliny, reakční směs se přes noc míchá při teplotě’ místnosti a potom se zahustí ve vakuu. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu, roztok se promyje 20% vodným roztokem kyseliny citrónové, roztokem chloridu sodného a vodou, vysuší se síranem hořečnatým a po filtraci se zahustí ve vakuu. Olejovitý odparek se rozpustí v teplém ethanolu a roztok se nechá zchladnout. Vyloučené bílé krystaly se odfiltrují a po promytí studeným ethanolem se vysuší ve vysokém vakuu. Získá se 5,72 g (80 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílých krystalů o teplotě tání 120 až 122 °C.

Analýza: pro C₂₅H₂₄BrNO₅ vypočteno 56,61 % C, 4,56 % H, 2,64 % N; nalezeno 56,84 % C, 4,68 % H, 2,60 % N.

c. 4—[[(4-bromfenyl)sulfonyl](fenylmethyl)aminokarbonyl]benzoová kyselina

Do 50 ml trifluoroctové kyseliny se při teplotě 0 ’C přidá 5,30 g (10 mmol) produktu z příkladu 108b, který se okamžitě po přidání rozpustí. Zhruba po 10 minutách se začne vylučovat bílá sraženina. V míchání se pokračuje Ještě 0,5 hodiny, pak se směs zfiltruje, odfiltrovaný pevný materiál se promyje vodou a překrystaluje se z horkého absolutního ethanolu. Získá se 4,0 g (84 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílého prášku o teplotě tání 193 až 194 ’C.

d. 2(RS),3(SR)—[1—[4—[[(4-bromfenyl)sulfonyl](fenylmethyl)aminokarbonyl]fenyl]-1-oxomethyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb,

R¹ = H(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = 4-[[(4-Br0)S(O₂)](0CH₂)“ NCO]0, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

K roztoku 1,0 g (2,1 mmol) produktu z příkladu 108c, 0,85 g (2,3 mmol) materiálu připraveného postupem podle příkladu 5d a 0,28 g hydroxybenzotriazolu v suchém tetrahydrofuranu se za míchání při teplotě 0 ’C pod dusíkem přidá 0,44 g (2,3 mmol) l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid-hydrochioridu. Reakční směs se 15 minut míchá při teplotě 0 ’C, potom se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 4 hodiny. ’

Tetrahydrofuran se odpaří ve vakuu a nahnědlý zbytek se rozpustí v ethylacetátu. Ethylacetátový roztok se promyje 1N kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a po filtraci se zahustí ve vakuu na zbytek o hmotnosti 1,6 g. Část tohoto zbytku, o hmotnosti 1,27 g, poskytne po překrystalování. ze směsi methy1-terc.butyletheru a hexanu 0,64 g (celkový výtěžek 49 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílého prášku.

121

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,59 a 0,64 (chloroform - methanol 95 : 5).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 14,34 a 15,26 (Col B; voda - acetonitril - tetrahydrofuran trifluoroctová kyselina 55 : 35 : 15 : 0,1; FR = 3,0).

e. 3(RS)-[1-[4-[[(4-bromfenyl)sulfonyl](fenylmethyl)aminokarbonyl]fenyl]-1-oxomethyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[[(4-Br0)S(O₂)]N(CH₂0)-C(O)]0, R⁴- = H, A - CO, n = 1]

K míchané směsi 1,54 g (3,63 mmol) Dess-Martinova perjodinanu a 10 ml suchého dichlormethanu se pod dusíkem při teplotě místnosti přidá roztok 300 mg (0,364 mmol) produktu z příkladu 108d ve 2 mi dichlormethanu. K výsledné směsi se přidá 0,41 g (3,63 mmol) trifluoroctové kyseliny, přičemž se směs okamžitě vyčeří a po 10 minutách se potom zakalí. V míchání se pokračuje ještě přes noc, potom se přidá 50 ml ethylacetátu a výsledná směs se vylije do 100 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného obsahujícího 4 g thiosíranu sodného. Dvoufázová směs se 10· minut intenzívně míchá, potom se organická vrstva oddělí, promyje se 100 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 100 ml roztoku chloridu sodného, vysuší . se síranem hořečnatým a po filtraci se zahustí ve vakuu. Po vysušení odparku ve vysokém vakuu se získá 0,24 g (80 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílého prášku.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,62 a 0,75 (chloroform - methanol 95 : 5).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 14,88 a 21,56 (Col B; voda - acetonitril - tetrahydrofuran trifluoroctová kyselina 55 : 35 : 15 : 0,1; FR = 3,0).

Analýza: pro C₃₇H₄₀BrF₃N₄O₇.0,25H₂O vypočteno 53,78 % C, 4,94 % H, 6,78 % N; nalezeno 53,84 % C, 4,98 % H, 6,45 % N.

Příklad 110

3S(nebo R)-[4-(fenylsulfonylaminokarbonyl)fenylaminokarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[0S(O₂)]NHC(0)]φ, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

122

Dva diastereomery z příkladu 58 se rozdělí středotlakou kapalinovoú chromatograf!í na koloně LiChroprep RP-8 (Měrek, Size B 40 až 63 μιη), za použití směsi methanolu a vody (50 : 50) jako elučního činidla. Odebírané frakce se analyzují vysokotlakou kapalinovou chromatografií. Příslušné frakce se spojí a lyofilizací se z nich získá sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,5 (Col. B; voda - acetonitril - tetrahydrofuran trifluoroctová kyselina 55 : 35 : 15 : 0,1;

FR = 2,0).

Příklad 111

3S(nebo R)-fenylmethoxykarbonyl-L-fenylglycyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = 0, R³ = 0CH2-, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Analogickým postupem jako v příkladu’61c se produkt připravený způsobem podle příkladu 92a podrobí oxidaci. Po vyčištění velmi rychlou, chromatografií (methanol - dichlormethan 1,5 : 98,5) se ve výtěžku 80 % získá sloučenina uvedená v názvu jako jediný, v podstatě čistý isomer.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,26 (pentan — methanol - diethylether 25 : 1 : 99).

Analýza: pro ^c27^H30^F3^N3°5 vypočteno 60,78 % C, 5,67 % H, 7,88 % N; nalezeno 60,64 % C, 5,85 % H, 7,96 % N.

Příklad 112

3R(nebo S)fenylmethoxykarbonyl-L-fenylglycyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = 0, R³ = 0CH2-, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Při velmi rychlé chromatografii popsané v příkladu 111 se ve výtěžku 83 % získá sloučenina uvedená v názvu jako druhý v podstatě čistý isomer.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,30 (pentan — methanol - diethylether 25 : 1 : 99).

Analýza: pro ^c27^H30^F3^N3°5 vypočteno 60,78 % C, 5,67 % H, 7,88 % N; nalezeno 59,43 % C, 5,65 % H, 7,48 % N.

123

Příklad 113

3R(nebo S)-[4-[(4-bromfenyl)sulfonylaminokarbonyl]fenylkarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[4-(Br0)S(O₂)]NHC(O)]0, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

0-,5 g (0,7 mmol) produktu z příkladu 95b se podrobí středotlaké kapalinové chromatografii na sloupci LiChroprep RP-8 (Měrek, size B 40 až 63 μιη) za použití směsi methanolu a vody (60 : 40) jako elučního činidla. Odebírané frakce se analyzují vysokotlakou kapalinovou chromatografií. Příslušné frakce se spojí a lyofilizují se, čímž se z nich· získají dva produkty. Sloučenina uvedená v názvu rezultuje ve výtěžku 0,147 g jako v podstatě čistý isomer.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

= .12,38 (Col B; voda - acetonitril - tetrahydrofuran trifluorcctová kyselina 55 : 35 : 15 : 0,1; FR = 3,0).

Příklad 114

3S(nebo R)-[4-[(4-bromfenyl)sulfonylaminokarbonyl]fenylkarbonyl]-L-valyl-N-í 3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[(4-Br0)S(O₂)NHC(O)]0, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Dalším produktem získaným při dělení popsaném v příkladu 113 je sloučenina uvedená v názvu, která rezultuje ve výtěžku 0,65 g, ve formě v podstatě čistého isomeru.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 8 ,44 (Col B; voda - acetonitril - tetrahydrofuran trifluoroctová kyselina 55 : 35 : 15 : 0,1; FR = 3,0).

Příklad 115

3S(nebo R)-[4-[(4-chlorfenyl)sulfonylaminokarbonyl]fenylkarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[(4-C10)S(0₂)NHC(O)]0, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

544,8 mg materiálu připraveného postupem popsaným v příkladu 104 se rozpustí ve směsi vody, acetonitrilu a tetrahydrofuranu (2,2 ml, 3,3 ml a 0,5 ml) a podrobí se dělení středotlakou kapalinovou chromatografií na koloně Lobar size B LiChroprep RP-8, za použití směsi vody, acetonitrilu, tetrahydrofuranu a trifluoroctové kyseliny v poměru 55 : 32,5 : 12,5 : 0,1 jako elučního činidla. Po analýze vysokotlakou kapalinovou chromatografií se příslušné frakce spojí, zahustí se ve vakuu

124 a zbytek se vysuší ve vysokém vykuu při teplotě 43 ’C. Získá se 255 mg sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílé amorfní pevné látky.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 5,76 (Col B; voda - acetonitril - tetrahydrofuran trifluoroctová kyselina 55 : 32,5 : 12,5 : 0,1; FR = 3,0).

Analýza: pro C30^H34^C1F3^N4⁰7^S-^3H2° vypočteno 50,71 % C, 5,19 % H, 7,89 % N; nalezeno 50,88 % C, 4,87 % H, 7,70 % N.

Příklad 116

3R(nebo S)-[4-[(4-chlorfenyl)sulfonylaminokarbonyl]fenylkarbonyl]-L-valyl-N-[ 3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = (CH3)₂CH-, R³ = 4-[(4-C10)S(O₂)NHC(O)]φ, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

573,8 mg materiálu připraveného postupem popsaným v příkladu 104 se rozpustí ve směsi 2 ml vody a 3 ml tetrahydrofuranu a podrobí se dělení středotlakou kapalinovou chromatografií na koloně Lobar size B LiChroprep RP-8, za použití směsi tetrahydrofuranu, vody a trifluoroctové kyseliny (41 : 59 : 0,1) jako elučního činidla. Po analýze vysokotlakou kapalinovou chromatografií se příslušné frakce spojí a lyofilizují. Získá se sloučenina uvedená v názvu, rezultující ve výtěžku 51,8 mg jako prakticky čistý isomer (podle vysokotlaké kapalinové chromatografie 99 : 1).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 8,8 (Col B; voda - acetonitril — tetrahydrofuran trifluoroctová kyselina 55 : 32,5 : 12,5 : 0,1;· FR = 3,0).

Příklad 117

3S(nebo R)-fenylmethoxykarbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = 0CH₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1] g (0,02 mol) materiálu připraveného postupem podle příkladu 11 se velmi rychlou chromatografií na 1 kg silikagelu za použití směsi diethyletheru a hexanu (80 : 20) jako elučního činidla rozdělí na individuální, v podstatě opticky čisté isomery. Příslušné frakce se spojí a získá se z nich 3,17 g sloučeniny uvedené v názvu, ve formě prakticky čistého isomeru.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

-A

125 CZ 278063 B6 t_R — 5,65 (Col A; voda - acetonitril 55 : 45, FR = 2,0).

Analýza: pro ^C24^H32^F3^N3°5-^H2° vypočteno 55,47 % C, 6,46 % H, 8,08 % N; nalezeno 55,50 % C, 6,77 % H, 7,99 % N.

Příklad 118

3R(nebo S)-fenylmethoxykarbonyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = 0CH₂, R⁴ = H, A = OCO, n = 1]

Při separaci popsané v příkladu 117 se po spojení dalších příslušných frakcí získá 3,67 g sloučeniny uvedené v názvu. Jedná se o druhý v podstatě čistý isomer.

Analýza: pro C24^H32^F3^N3°5 vypočteno 57,71 % C, 6,46 % H, 8,41 % N;

nalezeno 57,61 % C, 6,34 % H, 7,96 % N.

Příklad 119

3S(nebo R)-[(4-karboxyfenyl)aminokarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-.methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ =. CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = 4-(HOOC)0, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

500 mg produktu připraveného postupem popsaným v příkladu 16 se podrobí dělení středotlakou kapalinovou chromatografií na koloně Lobar size B LiChroprep RP-8, za použití směsi stejných dílů methanolu a vody jako elučního činidla. Po analýze vysokotlakou kapalinovou chromatografií se příslušné frakce spojí a získá se z nich 150 mg sloučeniny uvedené v názvu, ve formě prakticky čistého isomeru.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 6,58 (Col A; acetonitril - voda 25 : 75; FR = 2,0).

Příklad 120

3R(nebo S)-[(4-karboxyfenyl)aminokarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹>= CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = 4-(HOOC)0, R⁴ = H, A = NHCO, n = 1]

Spojením dalších příslušných frakcí při dělení popsaném v příkladu 119 se získá 220 mg sloučeniny uvedené v názvu, vysoce obohacené žádaným isomerem v poměru 90,4 : 9,5 k isomeru popsanému v příkladu 119.

126

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 11,09 (Col A; acetonitril - voda 25 : 75; FR = 2,0).

Příklad 121

3(RS)-[4- [(4-čhlorfenyl)sulfonylaminokarbonyl]fenylkarbonyl]-L-valyl-N-[3—(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ib, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = 4-[(4-C10)S(O₂)]NHCO}0, R⁴ = H; A = CO, n = 1]

Výhodný způsob konverze materiálu připraveného podle příkladu. 5d na sloučeninu uvedenou v názvu spočívá v následujícím postupu.

a. 1,l-dimethylethyl-4-[(4-chlorfenyl)sulfonylaminokarbonyl]benzoát

Pětilitrová tříhrdlá baňka s kulatým dnem se opatří mechanickým míchadlem a uváděčkou dusíku. Do baňky se předloží 2 litry dichlormethanu, do něhož se v uvedeném pořadí vnese 127,5 g (0,574 mol) mono-terc.butylesteru tereftalové kyseliny, 70,06 g (0,574 mol) 4-dimethylaminopyridinu a 110,04 g (0,574 mol) 4-chlorbenzensulfonamidu, přičemž přidávané pevné látky se spláchnou 400 ml dichlormethanu. K směsi se potom během 10 minut po částech přidá 110,10 g (0,574 mol) l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid-hydrochloridu, který se spláchne 100 ml dichlormethanu. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, potom se zahustí ve vakuu k suchu. Zbytek se roztřepe mezi ethylacetát a vodu, ethylacetátový roztok se promyje 20% vodnou kyselinou citrónovou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Bílý pevný zbytek poskytne po vysušení ve vakuové sušárně při teplotě 50 °C 227 g (100 %) sloučeniny uvedené v názvu, která je v dostatečně čistém stavu pro použití v následujícím reakčním stupni.

Chromatografie na tenké vrstvě:

R_f = 0,43 (methanol - chloroform 15 : 85).

Tento materiál je možno dále čistit překrystalováním ze směsi ethanolu a vody. Produkt taje nad 300 °C.

b. 4-[(4-chlorfenyl)sulfonylaminokarbonylJbenzenkarboxylová kyselina

Třílitrová tříhrdlá baňka s kulatým dnem se opatří mechanickým míchadlem a vysoušeči trubicí naplněnou chloridem vápenatým. Do baňky se předloží 1 300 g trifluoroctové kyseliny, která se ochladí a vnese se do ní 79,5 g (0,20 mol) produktu z příkladu 121a. Zpočátku se pevný materiál rozpustí na čirý roztok, ale po 10 až 15 minutách se vyloučí těžká sraženina, která ztěžuje míchání reakční směsi. K dovedení reakce do konce je nutné intezivní míchání mechanickým míchadlem. Reakční směs

127 se 1 hodinu míchá při teplotě 0 až 5 °C, potom se vylije do 1 500 ml vody s ledem a 2 hodiny se míchá. Vyloučený pevný materiál se odfiltruje a vysuší se. Získá se 61,5 g (91 %) bílé pevné látky, která po překrystalování z 1 600 ml absolutního ethanolu a 1 600 ml vody poskytne 54 g (80 %) sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílých jehličkovitých krystalů o teplotě tání 286 až 288 °C.

c. 2(RS),3(SR)-[4-[(4-chlorfenyl)sulfonylaminokarbonyljfenylkarbonyi]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-2-hydroxy-4-methylpentyl)]-L-prolinamid [vzorec Vllb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = 4-[(4-C1-0)S(0₂)NHCO]0, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

Čtvrtlitrová tříhrdlá baňka s kulatým dnem se opatří magnetickým míchadlem a uváděčkou dusíku, předloží se do ní 125 ml dichlormethanu, k němuž se přidá 5,45 g (16,07 mmol) produktu z příkladu 121b, 1,96 g (16,07 mmol) 4-dimethylaminopyridinu a 6,20 g (16,87 mmol) materiálu připraveného podle příkladu 5d, přičemž přidávané pevné látky se spláchnou 20 ml dichlormethanu. K směsi se potom přidá 3.,24 g (16,87 mmol) l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid-hydrochloridu, který se spláchne 5 ml dichlormethanu. Reakční směs se 5 hodin míchá, potom se promyje 1N kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Získá se 11,0 g (100 %) surového produktu ve formě bílé pevné látky. Část tohoto surového produktu (3,39 g) se rozpustí ve 40 ml methanolu, roztok se zředí 9 ml vody, nasytí se uhličitanem draselným a přes noc se míchá při teplotě místnosti. Většina methanolu se odpaří ve vakuu a zbytek se roztřepe mezi ethylacetát a vodu. Ethylacetátový roztok se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a zahustí se. Získá se 3,13 g (92 %) v podstatě čisté sloučeniny uvedené v názvu.

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,38 a 0,46 (methanol - chloroform - kyselina octová : 95 : 1).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 6,20 a 6,25 (Col A; voda - acetonitril - tetrahydrofuran trifluoroctová kyselina 55 : 35 : 15 : 0,1; FR = 3,0).

d. 3(RS)-[4-[(4-chlorfenyl)sulfonylaminokarbonyl]fenylkarbonyl]-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec lb, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = 4-[(4-C10)S(O₂)NHCO]0, R⁴ = H, A = CO, n = 1]

K míchanému roztoku 636 g (1,50 mol) Dess-Martinova perjodinanu v 5 litrech dichlormethanu se přidá 351 g (0,50 mol)

128 produktu připraveného postupem podle příkladu 121c v 500 ml tetrahydrofuranu, výsledná suspenze se zředí 2 litry dichlormethanu a přidá se k ní 171 g (1,50 mol) trifluoroctové kyseliny. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, potom se dichlormethan odpaří ve vakuu, zbytek se ředí ethylacetátem a rozmíchá se se směsí nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a nasyceného vodného roztoku thiosíranu sodného v poměru 1 : 1. Po rozpuštění všech pevných podílů se vodná vrstva oddělí, ethylacetátová vrstva se promyje směsí stejných dílů nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a nasyceného vodného roztoku siřičitanu sodného, potom nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Odparek se rozpustí v 1,5 litru methanolu, k roztoku se přidá 1,5 litru 1N kyseliny chlorovodíkové a methanol se odpaří ve vakuu. Zbylá- vodná suspenze se extrahuje dichlormethanem, spojené dichlormethanové extrakty se promyjí roztokem chloridu sodného a po vysušení síranem sodným se zahustí ve vakuu. Zbytek poskytne po vyčištění velmi rychlou chromatografií (gradientově eluce od samotného diethyletheru do směsi diethyletheru a methanolu v poměru 95 : 5) sloučeninu uvedenou v názvu, ve výtěžku 37 %.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 6,68 a 9,27 (Col B; voda -acetonitril — tetrahydrofuran — trifluoroctová kyselina 55 : 35 : 15 : 0,X; FR = 2,0). .

Příklad 122

3(RS)-N²,N⁶-di(fenylmethoxykarbonyl)-L-lysyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1 -trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ic, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = 0CH2, R⁴ = H, R⁵ = 0CH2OCONH(CH₂)₄, R⁶ = H, A — OCO, n = 1]

Produkt z příkladu 28a se oxiduje způsobem popsaným v příkladu 54b. Po vyčištění velmi rychlou chromatografií (směs hexan - diethylether 1:1, potom samotný diethylether a nakonec směs diethylether - ethylacetát 3 : 1) se ve výtěžku 56 % získá sloučenina uvedená v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,19 a 6,02 (Col A; acetonitril - voda 60 : 40, FR = 1,5).

Analýza: pro C₃₈H₅₀F₃N5O₈.0,5H₂O vypočteno 59,21 % C, 6,67 % H, 9,03 % N; nalezeno 58,93 % C, 6,62 % H, 8,75 % N.

129

Příklad 123

3(RS)-[1,4-dioxo-4-(fenylsulfonylamino)butyl]-L-leucyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec

Ic, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = 0S(O₂)NHCO(CH₂)₂/ R⁴ =

H, R⁵ = (CH₂)₃CH₃, R⁶ = H, A = CO, n = 1]

Roztok 0,5 g (0,87 mmol) produktu z příkladu 24, 0,14 g (0,87 mmol) benzensulfonamidu, 0,11 g (0,87 mmol) 4-dimethylaminopyridinu a 0,18 g (0,87 mmol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu ve 20 ml dichlormethanu se .4 dny míchá při teplotě místnosti. Reakční směs se zfiltruje a zahustí se ve vakuu surový produkt poskytne po vyčištění velmi rychlou chromatografií na silikagelu (Baker, pH 5,0; gradientově eluce od chloroformu přes směs methanol - chloroform 2 : 98 až ke směsi methanol - chloroform 5 : 95) 0,37 g sloučeniny uvedené v názvu.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 3,84 a 5,03 (Col A; voda - acetonitril 65 : 35; FR = 1,0).

Analýza: pro ^C32^H46^F3^N5°8^S vypočteno 52,23 % C, 6,57 % H, 9,52 % N; nalezeno 51,94 % C, 6,29 % H, 9,37 % N.

Příklad 124

3(RS)-[4-(methylsulfonylamino)-1,4-dioxobutyl]-L-leucyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec ic, r¹ = ch(ch3)ch3, r² = ch(ch3)ch₃, r³ = ch3s(o2)nhco(ch2)2, R⁴ = H, R⁵ = (CH2)₃CH₃, R⁶ = H, A = CO, n = 1]

Roztok 0,5 g (0,87 mmol) produktu z příkladu 24, 0,082 g (0,87 mmol) methansulfonamidu, 0,11 g (0,87 mmol) 4-dimethylaminopyridinu a 0,18 g (0,87 mmol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu ve 20 ml dichlormethanu se 4 dny míchá při teplotě místnosti. Reakční směs se zfiltruje a zahustí se ve vakuu, čímž se získá surový produkt, který se částečně vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu (Baker, pH 5,5; gradientová eluce od chloroformu přes směs methanol - chloroform 1 : 99 až k směsi methanol - chloroform 2,5 : 97,5). Částečně vyčištěný produkt se roztřepe mezi ethylacetát a směs 1N vodné kyseliny chlorovodíkové a roztoku chloridu sodného. Organická fáze se vysuší síranem sodným a po filtraci se zahustí, čímž se získá 0,28 g sloučeniny uvedené v ná~v :.

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 5,99 a 8,95 (Col A; voda - acetonitril 65 : 35; FR = 1,0).

Analýza: pro ^C27^H44^F3^N5°8^S vypočteno 49,46 % C, 6,76 % H, 10,68 % N; nalezeno 49,07 % C, 6,79 % H, 10,43 % N.

130

Příklad 125

3(RS)-N²-[1,4-dioxo-4-(fenylsulfonylamino)butyl]-N⁶-fenylmethoxykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-N-[3-(1,1,l-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ic, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = 0S(O2)NHCO(CH2)2, R⁴ = H, R⁵ = 0CH2OCONH(CH₂)₄, R⁶ = H, a = CO, n = 1]

Roztok 493 mg (0,670 mmol) produktu z příkladu 27, 117 mg (0,745 mmol) benzensulfonamidu, 91 mg (0,745 mmol)4-dimethylaminopyridinu.a 153 mg (0,745 mmol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu ve 20 ml dichlormethanu se 24 hodiny míchá při teplotě místnosti. Reakční roztok se zředí ethylacetátem, promyje se vodou a po vysušení síranem hořečnatým se zfiltruje a zahustí se ve vakuu. Surový produkt se vyčistí velmi rychlou chromatografií na silikagelu (Baker, pH 5,5; methanol - chloroform 2,5 : 97,5). Získá se 243 mg sloučeniny uvedené v názvu, ve formě bílého prášku.

Chromatografie na tenké vrstvě:

wR_f = 0,50 (methanol - chloroform - kyselina octová 5 : 94 : 1).

Analýza: pro ^C40^H53^F3^N6^O10^S-°'^75H2^O vypočteno 54,56 % C, 6,24 % H, 9,54 % N; nalezeno 54,52 % C, 6,23 % H, 9,48 % N.

Příklad 126

3(RS)-[1,4-dioxo-4-[(tricyklo[3,3,1,l³'⁷]dec-l-yl)sulfonylamino]butyl]-L-leucyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methyl-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ic, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = (l-adamantyl)S(O2)NHCO(CH2)2, R⁴ = H, R⁵ = (CH2)₃CH₃, R⁶ = H, A = CO, n = 1]

a. 1-adamantansulf inamid

K 10,0 g (45,7 mmol) produktu z příkladu 82a se pomalu přidá 300 ml koncentrovaného hydroxidu amonného a směs se 3 hodiny zahřívá k varu pod zpětným chladičem. Po oddestilování hydroxidu amonného se zbytek vyjme vodou a extrahuje se diethyletherem. Etherická vrstva se promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a po filtraci se zahustí ve vakuu. Surový produkt se vyčistí vakuovou chromatografií na silikagelu (diethylether až ethylacetát), za vzniku 4,2 g žádaného produktu ve formě bílé pevné látky o teplotě tání 139 až 141 °C (literatura udává 141 až 142 °C).

b. 1-adamantansulfonamid

K roztoku 4,0 g (20,0 mmol) produktu z příkladu 126a ve 150 ml acetonu se za varu pod zpětným chladičem přidává

131 acetonový roztok manganistanu draselného až do trvalého slabě fialového zbarvení. Reakční roztok.se ochladí, zfiltruje se přes křemelinu a filtrát se zahustí ve vakuu. Získá se 3,2 g pevného produktu o teplotě tání 191 až 193 °C (literatura udává 197 až 198 ’C).

Chromatografie na tenké vrstvě:

Rf = 0,80 (ethylacetát).

c. 3(RS)-[1,4-dioxo-4-[(tricyklo[3,3,1,l³'⁷Jdec-l-yl) sulfony1amino]butyl]-L-leucyl-L-valyl-N-[3-(1,1,1-trifluor-4-methy1-2-oxopentyl)]-L-prolinamid [vzorec Ic, R¹ = CH(CH3)CH3, R² = CH(CH3)CH₃, R³ = (l-adamantyl)S(O2)NHCO(CH2)2, R⁴ = H, R⁵ = (CH2)₃CH₃, R⁶ = H, A = CO, n = 1]

Roztok 300 mg (0,51 mmol) produktu z příkladu 24,62 mg (0,51 mmol) 4-dimethylaminopyridinu, 99 mg (0,51 mmol) l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid-hydrochloridu a 110 mg. (0,51 mmol) produktu z příkladu 126b ve 30 ml dichlormethanu se 16 hodin míchá při teplotě místnosti. Dichlormethanový roztok se promyje 1N kyselinou chlorovodíkovou a roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a po filtraci se zahustí ve vakuu. Surový produkt se vyčistí preparativní chromatografií na tenké vrstvě (methanol chloroform 1 : 9), čímž se získá sloučenina uvedená v názvu, ve formě pevné látky).

Vysokotlaká kapalinová chromatografie:

t_R = 4,23 a 7,05 (Col A; voda - acetonitril 1 : 1; FR = 2,0). Analýza: pro C₃₆H₅₆F₃N₅O₈S.1,2H₂O vypočteno 54,22 % C, 7,38 % H, 7,78 % N; nalezeno 54,28 % C, 7,84 % H, 7,71 % N.

Claims (6)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   A

   1. Peptidické deriváty obecných vzorců Ia, Ib a Ic □

   (Ia)

   132 v nichž n má hodnotu 1,

   R¹ představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

   A znamená zbytek -NH.CO-, -O.CO- nebo -CO-,

   R² představuje fenylovou skupinu, benzylovou skupinu nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou benzyloxykarbonylovou skupinou, benzyloxykarbonylaminoskupinou, fenylsulfonylaminoskupinou nebo (fenylsulfonylamino)karbonylovou skupinou,

   R⁴ a R⁶ znamenají atomy vodíku,

   R⁵ představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou benzyloxykarbonylovou skupinou nebo benzyloxykarbonylaminoskupinou a

   R³ znamená (1) alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou alkoxykarbonylovou skupinou s^J. až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, alkoxykarbonylaminoskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, karboxylovou skupinou, 2-(alkoxy)ethoxyskupinou obsahující v alkoxylové části 1 až 4 atomy uhlíku, adamantylovou skupinou, morfolinylovou skupinou, pyridylovou skupinou, thienylovou skupinou, oxopyrrolidinylovou skupinou, fenylovou skupinou, alkoxykarbonylfenylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku

   133 v alkoxylové části, karboxyfenylovou skupinou, fenoxyskupinou, alkoxykarbonylfenoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, karbamoylfenoxyskupinou, (karbamoylmethyl)fenoxyskupinou, benzylaminokarbonylovou skupinou, benzensulfonylaminoskupinou, (methansulfónylamino)karbonylovou skupinou, (benzensulfonylamino)karbonylovou skupinou, (naftalensulfonylamino)karbonylovou skupinou, (adamantansulfonylamino)karbonylovou skupinou nebo (chlorbenzensulfonylaminokarbonyl)fenylovou skupinou, (2) naftylovou skupinu, aminochlorfenylovou skupinu nebo fenylovou skupinu popřípadě substituovanou hydroxylovou skupinou, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxykarbonylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, karboxylovou skupinou, jedním nebo dvěma atomy halogenů, (methansulfónylamino)karbonylovou skupinou, (naftalensulfonylamino)karbonylovou skupinou nebo [N-benzyl-(4-brombenzensulfonyl)amino]karbonylovou skupinou, (3) zbytek vzorce W.SO₂.NH.CO.fenyl-, kde W znamená fenylovou skupinu popřípadě substituovanou halogenem nebo nitroskupinou, (4) zbytek vzorce Y.CQ.NH.(CH₂)_m~, kde m je celé číslo o hodnotě 2 až 5 a Y představuje fenylovou skupinu, difenylmethylovou skupinu, fenoxymethylovou skupinu, benzyloxyskupinu, alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, (alkoxykarbonyl)fenylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, 2-pyridylethoxyskupinu nebo karboxyfenylaminoskupinu, (5) cyklopentylovou skupinu nebo undecylovou skupinu, která je popřípadě substituovaná alkoxykarbonylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části nebo karboxylovou skupinou, (6) 2-fenylvinylovou skupinu popřípadě substituovanou na fenylovém kruhu alkoxykarbonylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku v alkoxylové části, karboxylovou skupinou nebo (chlorbenzensulfonylamino)karbonylovou skupinou, nebo (7) 2-(ureidokarbonyl)vinylovou, di(benzyloxymethy1)methylovou nebo di(2-fenoxyethyl)methylovou skupinu, a jejich farmaceuticky upotřebitelné soli.
2. 2. Peptidické deriváty obecných vzorců Ia, Ib a Ic podle nároku 1, v nichž R¹ a R² znamenají vždy isopropylovou skupinu, A představuje karbonylovou skupinu, zbytek R³ je vybrán ze skupiny zahrnující zbytky vzorce 4-chlorfenyl.SO₂.NH.CO.fenyl-, 4-bromfenyl.SO₂.NH.CO.fenyl- nebo 1-naftyl.SO₂.NH.CO.fenyl.NH-,

   134 a zbývající obecné symboly mají význam jako v nároku 1, a jejich farmaceuticky upotřebitelné soli.
3. 3. Způsob výroby peptidických derivátů obecných vzorců Ia, Ib a Ic, v nichž mají jednotlivé obecné symboly význam jako v nároku 1, a jejich farmaceuticky upotřebitelných solí, vyznačující se tím, že se oxiduje alkohol obecného vzorce Vila, Vllb nebo Vile

   R¹ OH

   -NH-CH-CH-.CF-j (Vila

   R¹ OH co-nh-ch-ch-cf₃ (Vllb)

   R

   R¹· OH v nichž

   R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶ a A mají shora uvedený význam, potom se popřípadě, k získání sloučeniny obecného vzorce Ia, Ib, nebo Ic, v níž

   135 zbytek ve významu symbolu R³ nese karboxylovou skupinu, odpovídající sloučenina obecného vzorce Ia, Ib nebo Ic, nesoucí ve zbytku R³ esterifikovanou karboxylovou skupinu, hydrolýzuje působením hydroxidu alkalického kovu nebo že se k získání sloučeniny obecného vzorce Ia, Ib, nebo Ic, v níž zbytek ve významu symbolu R³ nese sulfonylaminokarbonylovou skupinu, odpovídající sloučenina obecného vzorce Ia, Ib nebo Ic, nesoucí ve zbytku R³ karboxylovou skupinu, kondenzuje se sulfonamidem v přítomnosti karbodiimidupotom se popřípadě výsledný produkt převede na svoji farmaceuticky upotřebitelnou sůl.
4. 4. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že se oxidace provádí za použití činidla vybraného ze skupiny zahrnující (a) dimethylsulfoxid v přítomnosti oxalylchloridu a terciárního aminu, (b) dimethylsulfoxid v přítomnosti acetanhydridu, (c) komplex oxid chromový - pyridin a (d) l,l,l-triacetoxy-2,l-benzodioxol-3(3H)-on, přičemž reakce se provádí v přítomnosti vhodného rozpouštědla nebo ředidla.
5. 5. Způsob podle nároků 3 nebo 4, vyznačující se tím, že se případná dodatečná reakce se sulfonamidem provádí za použití l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid-hydrochloridu nebo 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu, v methylenchloridu jako rozpouštědle.
6. 6. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahuje sloučeninu podle nároku 1 nebo její sůl, v kombinaci s netoxickým, farmaceuticky upotřebitelným ředidlem nebo nosičem.