CZ2003940A3 - Deriváty tryptaminu a analogických sloučenin a farmaceutické přípravky, které je obsahují - Google Patents

Description

• · ·· ···· • · · · · • · · ······· tv éiooi -Φ/0

Deriváty tryptaminu a analogických sloučenin a farmaceutické přípravky, které je obsahují

Oblast techniky

Vynález se týká nových sloučenin, které jsou deriváty tryptaminu a jeho analogů, a farmaceutických přípravků, které je obsahují, a užití sloučenin při průmyslové výrobě léků pro léčbu různých onemocnění.

Stav techniky

Melatonin je základním hormonem produkovaným šišinkovými žlázami všech obratlovců. U všech savců, studovaných do současnosti, včetně lidí, noční zvýšení tvorby melatoninu všišinkových žlázách je zjevné; tělní produkce melatoninu je intenzivně potlačena vlivem světla. Melatonin je potřebný pro koordinaci světločasových závislostí a fyziologických procesů. Schopnost živočichů a lidí odpovídat na melatoninové signály může být závislá na melatoninových receptorech. Melatonin působí na centrální nervový systém (CNS) a mnoho výzkumů ukazuje existenci přímých účinků melatoninu na vnitřní orgány cestou periferních melatoninových receptorů. Melatoninové receptory se nacházejí v srdci, plících, prostatě, zárodečných žlázách, bílých krvinkách, sítnici, hypofýze, štítné žláze, ledvinách, střevech a v cévách. Retenční vzorky radioaktivního melatoninu podávané krysám ukázaly akumulaci melatoninu v mozku, hypofýze, střevech, srdci, zárodečných žlázách a souvisejících pohlavních orgánech (Withyachumnarnkul et al., Life Sci. 12:1757 - 65,1986 ).

Syntéza a vylučování melatoninu je vystavena dennímu rytmu, který se mění s roční dobou a věkem, např. při dospívání a stárnutí. Je více než zjevné, že melatonin je významný pro řízení různých nervových a endokrinních funkcí, zvláště těch, které vykazují denní a roční rytmus.

Melatonin má souvislost s mnoha lidskými onemocněními. Některé jsou známy ve spojitosti s chronobiologickými abnormalitami. Melatonin byl podáván k resynchronizaci circadiálního rytmu, který se odchýlil od místního světločasového cyklu. Například, poruchy spánku a bdění s rychlým překračováním časových pásem (jet lag), nebo pacienti se syndromem opožděné fáze spánku (DSPS), posuny u pracujících na směny, nebo totéž u slepých lidí, mohou být léčeny melatoninem nebo analogy melatoninu (viz. U.S. patenty č. 4,600,723 a 4,666,086 Short-a et al., a 5,242,941 Lewy-ho et al.).

Avšak, zdá se, že melatonin má také přímo sedativně/hypnotické vlastnosti na normální lidské jedince (např. Waldhauser et. al., Psychofarmacology, 100: 222-226, 1990; Vollrath et al., Bioscience 29: 327-329, 1981: Dollins et al., Proč. Nati. Acad. Sci., 99: 1824-1828, 1994, U.S. patent č. 5,403,851 DOrlando et al.). Tři podtypy receptorů melatoninu byly identifikovány jako mt-1, MT-1 a Me11c (Barret et al., Biol.Signals Recept., 1999, 8: 6-14). MT-2 se nachází hlavně v centrálním nervovém systému a mt-1 se nachází jak v centrálním nervovém systému (CNS), tak i v periferních orgánech, jako jsou ledviny nebo močopohlavní trakt (Dubocovich et al., IUPHAR media, London, UK, 187-93, 1998 ). Současná znalost podtypů není dostačující k posouzení šíře očekávaných objevů účinků melatoninu a dalších subtypú receptorů.

2 • t · · · • · • · · • · · · · · ► · « ► # · « *· ··

Melatonin jak bylo ukázáno v množství experimentálních paradigmat na hlodavcích musí mít anxiolytické (Golus and King, Pharmacol. Biochem. Behav., 41: 405-408, 1992, Naranjo - Rodriguez et al., Soc. Neurosci. Abst. 18:1167, 1992 ; Golombek et al., Eur. J. Pharmacol., 237: 231 - 236, 1993 ) a antifobické účinky (Brallowsky, Elektroencephalo. Clin. Neurophysiol. 41: 314 - 319, 1976; Farielloet al., Neurology 27: 567 - 570, 1977, Rudeen et al., Epilepsia 21: 149 - 154, 1980; Sugden, J. Pharmacol. Exp. Ther. 227 : 587 - 591, 1983; Golombek et. al., Eur. J., Pharmacol. 210: 253 - 258,1992 ).

Melatonin je účinný v léčbě bodavých bolestí hlavy a migrény (Claustrat et al., Headache: 29 : 241 - 4, 1989 ). Melatonin může hrát roli v dalších psychiatrických potížích , konkrétně u depresí, ale také mánie a schizofrenie (viz Dobocovich “Antidepressant Agents„, U.S. patent č. 5,093,352; Miles and Philbrick, Biol. Psychiatry 23: 405-425, 1988; Sandryk and Kay, Schizophr. Bull. 16: 653 - 662, 1990). V případech, psychiatrická onemocnění mohou mít skrytou chronobiologickou etiologii (např. sezónní poruchy nálad) a jsou jednoznačnými kandidáty pro melatoninovou terapii.

Melatonin je účasten na regulaci změn tělesné teploty v průběhu dne i v průběhu roku (Strassman et al., J. Appl. Physiol, 71: 2178 - 2182, 1991; Cagnacci et. al., J. Clin. Endocrinol. Merab. 75: 447 - 452, 1992). Podávání exogenního melatoninu lidem snižuje tělesnou teplotu vnitřních orgánů (Strassman et al., J. Appl. Physiol., 71:2178-2182, 1991; Cagnacci et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 75:447 -452, 1992 ). Melatonin může také mít analgetické vlastnosti (Sugden, J. Pharmacol. Exp. Ther. 227: 587 - 591,1983).

Tudíž, melatoninu podobné sloučeniny mohou být užitečné jako alternativa nesteroidních protizánětlivých, antipyretických léků jako aspirinu, acetoaminofenu a ibuprofenu.

Je známo, že hladina melatoninu klesá s postupujícím věkem (Sack et al., J.Pineal Res. 4: 379-388,1986; Waldhauser et.al., J.CIin. Endocrinol. Metab. ,66:648-652, 1988; Van Coavorden et al., Am. J.Physiol. 260: E651-661,1991), což může přispívat k některým poruchám. Neurodegenerativní nemoce, které jsou často spojeny se stárnutím, jako Alzheimerova nemoc, Parkinsonova nemoc, mohou být léčeny sloučeninami melatoninu (Maurizi, Med. Hypotheses 31:233-242, 1990; Sandyk, Int. J.Neurosci. 50: 37-53, 1990; Skene et al., Brain Rev. 528:170-174,1990). Zdá se, že za poruchy spánku ve stáří je odpovědná melatoninová kůra (Garfinkel et al., Lancet, 346:541-543, 1995, U.S. patent č. 5,498,423 Zisapel-a). Hypnotické účinky melatoninu (0,3-240 mg/os) byly popsány u lidí při podávání nitrožilně, nosní dutinou a ústy. Nehledě na spánek navozující účinky, exogenní melatonin může ovlivnit spánek přes jeho fázi nulující účinek na biologické hodiny. Aplikací melatoninu urychluje spánek u pacientů se syndromem opožděného spánku a synchronisuje spánek s cyklem den-noc u slepých jedinců. Účinnost melatoninu (0,3-5 mg/os) pro léčení nespavosti byla demonstrována ve studiích provedených hlavně se starými pacienty, pacienty léčenými atenololem a pacienty s chronickým onemocněním srdce; většina těchto pacientů měla nízký nebo narušený rytmus melatoninu. V některých těchto studií byla užita složení, která uvolňují melatonin během noci, aby byl circumventální výplach hormonu rychlý a aby napodobil jeho endogenní profil (Nutrition, 1998, 14:1-2; The Aging Male, 1998,1: 1-8). Dávka 3 mg melatoninu podávaného pacientům s poruchami spánku a demencí během 21 dní, významně zvyšovaly kvalitu spánku a snižovaly počet probuzení, přitom rozčilující chování během noci (zapadání slunce) významně pokleslo (Biol. Signals Recept. 1999, 8(1-2): 126-31).

Ing. Marie 8MB patentový zás

Velílíkova 8, 160 0 3 # · • · ··«· ··· i · · · • · · * * · ·

Nedávno jsme objevili, že melatoninová léčba může být prospěšná nejen pro zlepšení kvality spánku, ale může také vést ke zlepšení celkového stavu diabetických pacientů, jak je indikováno úbytkem hladiny HbA1c po dlouhodobé léčbě.

Denní dávka melatoninu samci Sprague-DawIey-ovy krysy začínající ve středním věku (10 měsíců) a pokračující do stáří (22 měsíců) v pitné vodě v množství 4 pg/ml,navrací (v % tělesné hmotnosti) retroperitoneální a epididymální tuk, stejně jako hladinu plasmového insulinu a leptinu oproti hladině v mládí (4 měsíce)(Rasmussen etal.,Endocrinology, 1999,140 (2):1009-12).

Dokonce osteoporéza může mít složku melatoninem podněcovanou (Sandyk et al., Int.J.Neurosci. 62:215-225,1992). Ve skutečnosti je melatoninu navrhovaný jako hormon proti stárnutí a protistresový hormon (Armstrong and Redman, Med. Hypotheses 34:300-309:1991; Reiter, Bioassays, 14:169-175, 1992). To může být způsobeno jeho působením jako vazačem volných radikálů (Pooggeler et al. .J.Pineal Res. 14:151-168, 1993) nebo jeho interakcí s immunitním systémem (Maestroni and Conti, J. Neuroimmun. 28: 167-176, 1990; Fraschini et al., Acta Oncol. 29: 775-776, 1990; Guerrero and Reiter, Endocr. Res. 18: 91-113, 1992). Melatonin může chránit před ischemickým záchvatem (Cho et al., Brain Research 755:335-338, 1997), snižovat úmrtnost buněk při Alzheimerově nemoci (Pappola et al., J. Neurosci. ,17:1683-90, 1997) a snižovat riziko SIDS u mladých dětí s nízkou endogenní hladinou melatoninu (Izraelský patent č. 115861/2 a U.S. patent č. 5,500.229 Laudon-a a spol).

Vzhledem ke shora uvedenému, jsou i poznatky, že melatonin má onkostatické vlastnosti pro různé druhy rakovin; a byl nejvíce studován jeho vliv na rakovinu plic, pozitivní k receptoru estrogenu (Blasak and Hill, J. Neural. Transm. Suppl. 21:433-449, 1986; Gonzalez et al. Melanoma. Res. 1:237-243, 1991; Lissoni et al. Eur. J.Cancer 29A: 185-189, 1993; Shellard et al. Br.J. Cancer 60:228-290, 1989; Philo and Berkowitz, J. Urol. 139:1099-1102, 1988; viz U.S. patenty č. 5,196,435 Clement-a a spol. a 5,272141 Franchini-ho a spol.). Je také možné, že melatonin účinkuje proti bujení nerakovinových buněk a může být použit k léčbě benigních nádorů a proliferativních nemocí jako je BPH (U.S. patent č. 5,750,557 a Evropský patent č. 0565296B Zisapel-a) a lupénky.

Hlavní část výzkumu melatoninu byla věnována studiu jeho účinku na reprodukci, zejména sezónně se množících druhů (jako jsou křečci a ovce), u nichž je známo, že melatonin reguluje porodnost a pubertu,hibernaci a barvu srsti.Tyto účinky mají velký význam v zootechnice. Reproduktivní endokrinologie používaná u lidí zahrnuje : antikoncepční a porodní prostředky, léčení předčasné puberty, léčení předmenstruačního syndromu a hyperprolaktinemie (Pevre et al. J.CIin. Endocrinol. Metab. 47:1383-1386, 1978; Purry et al., Am. J. Psychiatry 144: 762-766, 1987; Waldhauser et al. Clin. Endocrinol. Metab. 73:793-796, 1991; Bispink et al. Pineal Res. 8: 97-106, 1990; Cagnacci et al., J.CIin. Endocrinol. Metab. 73:210-220, 1991; Voordouw et al. J.CIin Endocrinol.Metab. 74:107-108,1992; viz U.S. patenty č. 4,855,305 a 4,945,103 Cohen-a et al. a 5,272,141 Franchini-ho a spol.). Je pravděpodobné, že sloučeniny melatoninu mohou být také použitelné v jiných endokrinních podmínkách, zvláště těch, které jsou spojeny s růstovým hormonem (Cramer et al. Arzeneim-Forsch., 26:1076-1078,1976; Wright et al., Clin Endocrinol. 24:375-382, 1986; Paccoti et al., Chronobiologica 15:279-288, 1988; Valcavi et al., Clin. Endocrinol. 39:139-199, 1993). Melatonin může sloužit ke zmenšení zvětšené prostaty (viz výše citované US a EP patenty Zisapel-a). Orálně podávaný melatonin kastrovaným nedospělým krysám zpomaluje androgenně závislý růst břišní prostaty semenných váčků (Gilad et al. J.of Urol. 159:1069-73, 1998). Nedávno jsme

4 • · ···♦ • • · • • ♦ · • ·♦· • · « • « • ♦ ♦ ♦ • · • • • · ···· » · • · • # * • · • » • • · • m » Λ • ♦ • · • · • · • • · ·· «·« ·· demonstrovali vysokou afinitu receptorů melaninuv lidských benigních epiteliálních buňkách, které mohou ovlivňovat růst a životaschopnost buněk (Endocrinology, 137:1412-17,1996).

Spolu s šišinkou mozkovou, také oko produkuje melatonin. Nedávno byl melatonin použit pro kontrolu vnitroočního tlaku a může být použit při glaukomu. (Samples et al.,Curr. Eye Res. 7:649-653, 1988; Rhode et al., Ophtalmic Res. 25:10-15,1993).

Ledviny také vykazují receptory melaninu a bylo poukázáno na účinek melatoninu na vylučování vazopresinu a moči (Song et al. FASEB J. 11:93-100,1997;Yasin et al. Brain Res. Bull. 39:1-5,1997).

Je zřejmé, že existuje široký rozsah terapeutického použití melatoninu. Podle toho je trvalý zájem identifikovat nové sloučeniny, které interagují s melatoninergickým systémem jako potenciální terapeutické činidlo. Tyto sloučeniny měly by mít stálost, selektivní lokalizaci a velkou účinnost k melatoninu.

Nové sloučeniny týkající se melatoninu, ale s farmakologickými nebo fakmakokinetickými profily, rozdílnými od melatoninu, se pravděpodobně stanou důležitými novými léčivy. Např. viz U.S. patent č. 5,403,851, který objevuje užití substituovaných tryptaminů, fenylalkylaminů a příbuzných sloučenin, k léčbě mnoha léčebných indikací, včetně poruchy spánku, endokrinní indikace, nemoce imunitního systému atd. Patentová přihláška PCT č. WO 87/00432 popisuje sloučeniny pro léčbu nebi prevenci lupénky, které obsahují melatonin nebo příbuzné sloučeniny. Přihláška Evropského patentu č. 0330625A2 objevuje výrobu melatoninu a jeho analogů pro různé terapeutické účely, včetně podávání melatoninu v kombinaci s azidothymidinem pro léčbu AIDS. Analogy melatoninu založené na biosterických vlastnostech naftalenového a indolového jádra byly objeveny v J. Med. Chem. 1992,35:1484-1485; EP No 662471A2 50712 Depreux-se a spol.; WO 9529173 A1 951102 Ladlowa a spol.; U.S. patentech No 5,151446 Horn-a a spol.;5,194614 Adrieux-e a spol. a 5,276,051 Lesieur-a a spol.

Inhibice uvolňování dopaminu melatoninem z určitých oblastí mozku byla dokázána in vitro na krysách (Zisapel et.al. , Brain Res.1982, 246(1 ):161-3;), ovcích a křečcích (Malpaux et al., Reprod. Nutr. Dev. 1999, 39(3):355-66). Navíc, melatonin byl schopen snížit dráždivost nigrostriatálních neuronů (Escames at al. Neuroreport 1996, 7(2): 597-600) a zvyšovat afinitu receptorů dopaminu D2 v mozkovém striatru krys (Hamdi , Life Sci., 1998, 63:2115-20). Může tedy léčit poruchy spojené se zvýšeným uvolňováním dopaminu nebo přecitlivělosti na dopamin např. při pozvolné dyskinezi. nebo při návyku na kokain.

Antagonisté melatoninu jsou také potenciálně terapeuticky využitelní. Snížení nigostriatální dopaminem podmíněné aktivity způsobené melatoninem mohlo by vést ke zhoršeni parkinsonské stránky účinku a neklidu, což je podporováno poznatky ze zvířecích forem Parkinsonovy nemoci (Willis a Armstrong Brain Res. Rev. 1998, 27(3): 177-242). Antagonisté melatoninu mohou tedy být nápomocni k předcházení účinku endogenního melatoninu při Parkinsonově nemoci. Antagonisté melatoninu mohou být také nápomocni při prevenci únavy a ospalosti u pracujících na směny , způsobované zvýšeným endogenním melatoninem v noci; u slepých osob, které nejsou synchronizovány s okolním cyklem světlo-tma, u pacientů se syndromem opožděné fáze spánku a u desynchronismu cestujících (jet lag).

Je tedy zřejmé, že jak agonisté tak antagonisté melatoninu mohou být potenciálně použiti pro potenciální terapeutické použití pro řadu nemocí a stavů. Cíllem předloženého vynálezu je potřeba najít terapeuticky selektivnější sloučeninu než je melatonin.

Ing, Maric SivlHČkOVÁ patentový r.údupce Velffikova 8, 160 Á) Praha 6

5 « · « ·

Sloučeniny N-(2,4-dinitrofenyl)-5-metoxytryptamin ("ML-23") a N-(2,4-dinitrofenyl)-2-jodo-5-metoxytryptamin jsou známy tím, že mají antagonistický účinek na melatonin (Zisapel et al. 1989, U.S. patent č. 4,880,826; Laudon et al. J.Endocrinol. 1988, 116:43-53; Oaknin-Bendahan et al., Neuroreport 1995, 27, 6:785-8; Nordio et al. Proč. Soc. Exp. Biol. Med. 1989, 191:321-5; Zisapel et al. Eur.J.Pharmacol. 1987, 36:259-60). Podle nejlepších současných znalostí vynálezců nebylo dosud předpokládáno, že jiné než N-(2,4-dinitrofenyl)-5-metoxytryptaminy nebo jejich etherové či thioetherové analogy mohou mít potenciální použití pro interakci s melatoninem podmíněným systémem.

Celkový obsah výše citovaných patentů, patentových přihlášek a literárních článků je zahrnut jako reference.

Podstata vynálezu Z jednoho hlediska předložený vynález poskytuje sloučeniny mající vzorec (I):

a jejich soli přidané kyseliny, přičemž sloučeniny jsou bazické, kde každý Ri ,R2 a Ráje nezávisle vybrán ze souboru obsahujícího vodík, halogen, Ci-4alkyl, Ci^alkoxy, NR'R", N(R')C(:0)R°, nitro, aryl, aryl-Ci^alkyl, neboaryl-Ci-4alkoxy, R°je alkyl nebo aryl, a každý zR'a R" je nezávisle H nebo Ci^alkyl, nebo R'=R” = CICH2CH2, nebo NRŘ" vytváří nasycený heterocyklický kruh obsahující 3-8 členů kruhu; m je 0-4; t je 0-3; X je NH, N-C i^alkyl, O nebo S, přitom X není NH když je současně (Ri)m 5-metoxy, R2 je H nebo I a t=0.

Ve výše uvedené definici je "aryl" jednovazný zbytek nesubstituovaného nebo substituovaného aromatického jádra, především benzenového kruhu, ale může to být také např. jiný jednovazný karbocyklický zbytek, jako je naftyl nebo jednovazný zbytek heterocyklického kruhu jako je furan, thiofen, pyrol,pyridin, benzopyran nebo benzothiofen. Když je substituován aryl, substituentem může být např. jedna nebo více skupin hydroxy, Ci-4-alkoxy, halogen, kyano, nitro, karboxylová kyselina, její ester nebo amid , sulfonová kyselina, její ester nebo amid, sulfon, sulfoxid nebo halogenovaný Ci-4-alkyl jako je chloro- nebo dichloro-metyl nebo CF3, amin, mono(Ci-4-alkyl)amin, di(CM-alkyl) amin nebo CM-alkyl. Z jiného hlediska vynález poskytuje farmaceutický přípravek, který zahrnuje alespoň jedno léčebně přijatelné rozpouštědlo, ochrannou látku, rozpouštěč, emulgátor, ochrannou látku a/nebo nosič a alespoň jeden člen ze skupiny zahrnující sloučeniny podle vynálezu, definované výše a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Podle dalšího hlediska vynález poskytuje použití alespoň jednoho členu ze skupiny sloučenin podle vynálezu, definovaných výše a jejich farmaceuticky přijatelných solí při přípravě léku pro interakci se systémem podmíněným melatoninem např. léku pro užití při chovu zvířat, nebo při prevenci či léčbě stavů prostaty, impotence, kardiovaskulárních nemocí, nemocí centrálního nervového jag, jvttasb * patentový zástupci/ Velíiikova 8, I60 6 6 ·· ···· • · • * • · ·# ♦ ♦ · • · · • ···· • · ·· · systému a psychiatrických nemocí, chronobiologicky podmíněných nemocí endokrinní indikace, novotvarů, imunitního systému, stavů spojených se stárnutím, očních nemocí, bolení hlavy a migrény.

Podle ještě dalšího hlediska vynález poskytuje způsob léčby onemocnění stavů savců (humánní či nehumánní), který je citlivý na zmírnění obtíží léčbou pomocí léku který interaguje s melatoninemergickým systémem, který zahrnuje léčbu takových stavů účinným množstvím alespoň jednoho členu ze skupiny zahrnující sloučeniny definované v nároku 1 a jejich farmaceuticky přijatelných solí. Příklady provedení vynálezu

Bez újmy na obecnosti definice sloučenin předloženého vynálezu v současnosti preferované podskupiny sloučenin mající výše uvedený vzorec jsou následující: - ty, kde m = 0, t =1 , R3 je N(R')C(:0)R° ve třetí poloze neuzavřeného benzenového kruhu a Xje NH, NH-Ci.4alkyl nebo O; - ty, kde m = 1, t = 1, Ri je metyl nebo metoxy v 5-poloze indolového kruhu, R3 je N(R')C(:0)Re ve třetí poloze neuzavřeného benzenového kruhu a Xje NH, NH-Ci-4alkyl nebo O; - ty, kde m = 0, t = 1, R3 je NH2 ve třetí poloze neuzavřeného benzenového kruhu a Xje NH,NH-Ci-4alkyl nebo O; - ty, kde m = 1, t = 1, R1 je metyl nebo metoxy v 5- poloze indolového kruhu, R3 je NH2 ve třetí poloze neuzavřeného benzenového kruhu a Xje NH, NH-C1-4 alkyl nebo O; - ty kde m = 0 nebo 1, t = 0, a když m = 1, R1 je metyl v 5-poloze indolového kruhu. Farmaceutický přípravek podle vynálezu je především charakerizován alespoň jedním z následujících znaků: (i) je přizpůsoben pro podávání orální, rektální, parenterální, ústní, intrapulmonární (např. inhalací) nebo kůží; (ii) je ve formě jednotky dávky, každá dávková jednotka obsahuje určité množství alespoň jednoho členu skupiny,dávka leží v rozsahu 0,0025 - 1000mg; (iii) je to přípravek, umožňující řízené uvolňování, kdy alespoň jeden člen skupiny se uvolňuje určenou řízenou rychlostí.

Ve farmaceutických přípravcích předloženého vynálezu jsou použit farmaceuticky přijatelné rozpouštědla, ochranné látky, rozpouštěče, emulgátory, pomocné látky a nosiče, tytéž jako jsou běžně používány v přípravcích farmaceutických a veterinárních. Předložený farmaceutický přípravek může být přizpůsoben pro podávání lidem a/nebo zvířatům.

Pro orální podávání mohou být farmaceutické přípravky užity jako tablety, kapsle, emulse, roztoky, sirupy nebo suspenze. Pro mimostřevní podávání mohou být přípravky užity jako ampule, nebo emulse ve vodném nebo olejovém nosiči. Požadavek na suspendující, stabilizující a/nebo dispergujících činidla se týká rozpustnosti, nebo jiného, aktivních sloučenin v nosičích, které jsou užity ve zvláštních provedeních. Přípravky mohou navíc obsahovat fysiologicky přípustné ochranné látky a antíoxidanty.

Farmaceutické přípravky mohou být také užity jako čípky s obvyklou čípkovou bází jako je kakaové máslo nebo jiné glyceridy. Alternativně, přípravky mohou být dostupné v zásobníku, který uvolňuje aktivní sloučeninu pomalu v těle po stanovenou dobu.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být dále podávány užitím orálně, intrapulmonárně, nebo transdermálně.

Tna. Mat poicn Velílíkova 7

•··· · ·

Cestou dalšího zpracování nebo výkladu stavů, které jsou právě rozebírány, mohou být přístupné k léčbě podáváním předložených sloučenin takové stavy jako benigní a tumorový růst prostaty a impotence; kardiovaskulární nemoce včetně hypertenze, prevence srážlivosti krve a ochrana před ischemickými záchvaty; nemoce centrálního nervového systému a psychiatrické poruchy, např. poruchy spánku, epilepsie a jiné škubavě nemoci, úzkosti, psychiatrické nemoci, onemocnění nervů, neurodegenerativní onemocnění např. Alzheimerova, Parkinsonova a Huntingtonova choroba, horečky a znecitlivění; chronobiologicky založené nemoci např. desynchronismus cestujících (jet lag), poruchy rytmu denního spánku např. syndrom zadrženého spánku, problémy pracujících na směny a sezónně podmíněné poruchy např. sezónně afektivní porucha (SAD); endokrinní indikace např. antikoncepce a neplodnost, předčasná puberta, premenstruační syndrom, zvětšení mléčné žlázy a nedostatek růstového hormonu; novotvary včetně např. rakoviny a jiných nádorovými onemocnění; poruchy imunitního systému včetně AIDS; stavy spojené se stárnutím; oční nemoce; bolení hlavy, migréna; pozvolná dyskineze, poruchy stabilizace diabetů a váhových přírůstků (leptin, obezita), a jako pomůcka při chovu zvířat, např. při regulaci porodnosti,dospívání, barvy srsti.

Je dále uvažováno, že předložené sloučeniny (a zejména ty ve vzorci (I)) mají antioxidační a radikály vázající aktivitu a vynález tedy zahrnuje ochranné pro kůži a kosmetické přípravky pro lokální použití jako (jen jako ilustrativní příklady) masti, krémy, masti na rány, pleťové vody, které obsahují alespoň jednu sloučeninu podle předloženého vynálezu, spolu s nejméně jedním rozpouštědlem, nosičem a pomocnou látkou.

Vynález bude popsán na následujících příkladech. Příklad 1 N-(2,4-dinitrofenyl)tryptamin (ML-25)

moly hydrogenuhličitanu sodného (NaHC03),. Byl přidán 1,5% roztok 2,4-dinitrofluorobenzenu ve 200 I etanolu a směs byl míchán během hodin při pokojové teplotě. Žádaný produkt se vysrážel, byl vymyt a usušen. Produkt se získal s 90 % výtěžkem a TLC (chloroform, silikagelové desky), ukázal jednu žlutou skvrnu (Rf=0,84), která se dobře rozlišila od výchozích látek za těchže podmínek. 8 ·» « • ·· • * • · · • ···« ·· ··♦· • · · • · ♦ • · · • · · · «· ·· Příklad 2 N-(2,4-dinitrofenyl)-5-metyltryptamin (ML-28)

1 mMol 5-metyltryptaminu byl rozpuštěn v 100 ml vody a pH 8,3 bylo upraveno 2,5 moly hydrogenuhličitanu sodného (NaHCCb). Byl přidán 1,5% roztok 2,4-dinitrofluorobenzenu v 200 ml etanolu a směs míchána během dvou hodin za pokojové teploty. Žádaný produkt se vysrážel, byl omyt a usušen. Produkt se získal s 85 % výtěžkem a TLC (chloroform, silikagelové desky) ukázala jednu žlutou skvrnu (Rf=0,8), která se dobře rozlišila od výchozích látek za těchže podmínek. Příklad 3 2,4-dinitro-5-tryptylaminoacetanilid (MI-26)

1mMol tryptaminu byl rozpuštěn v 100 ml vody a pH bylo upraveno na pH 8,3 přidáním 2,5 molů hydrogenuhličitanu sodného (NaHCOs). Byl přidán 1,5% roztok 2,4-dinitro-5-fluoroacetaniliduv v 200 ml etanolu a směs byla míchána během 2 hodin při pokojové teplotě. Žádaný produkt se vysrážel, byl omyt a sušen. Látka se získá s 80 % výtěžkem, a TLC (chloroform,silikagelové desky) ukázala jednu žlutou skvrnu (Rf=0,76), která se dobře rozlišila od výchozích látek za těchže podmínek . Příklad 4 2,4-dinitro-5-(5'-metyltryptyl)aminoacetanilid (ML-29)

9 »? · • % « * ♦ • ···· • · ··*· 9 1 mMol 5-metyltryptaminu byl rozpuštěn ve 100 ml vody a pH bylo upraveno na 8,3 přídavkem 2,5 molů hydrogenuhličitanu sodného (NaHCCh). Byl přidán 1,5% roztok 2,4-dinitro-5-fluoroacetanilidu ve 200 ml etanolu a směs míchána během 2 hodin při pokojové teplotě. Žádaný produkt se získal s 95% výtěžkem a TLC (chlorofom, silikagelové desky) ukázal jednu žlutou skvrnu (Rf=0,7), která se dobře rozlišila od výchozích látek za těchže podmínek. P ř í k I a d 5 2,4-dinitro-5-(5'-metoxytryptyl)aminoacetanilid (ML-30)

pH 8,3 přídavkem 2,5 molů hydrogenuhličitanu sodného (NaHCCb). Byl přidán 1,5% roztok 2,4- dinitro-5-fluoroajcetanilidu ve 200 ml etanolu a směs míchána během 2 hodin při pokojové teplotě. Žádaný produkt se vysrážel, byl vyprán a vysušen. Látka se získala s 85 % výtěžkem a TLC (chloroform, silikagelové desky) ukázala jednu žlutou skvrnu (Rf=0,57), která se dobře rozlišila od výchozích látek za těchže podmínek. Příklad 6 N-(2,4-dinitro-5-aminofenyl)tryptamin (ML-27)

1 mMol tryptaminu byl rozpuštěn ve 100 ml vody a pH bylo upraveno na 8,3 přídavkem 2,5 molů hydrogenuhličitanu sodného (NaHCOa). Byl přidán 1,5% roztok 2,4-dinitro-5-fluoroanilinu v 200 ml etanolu a směs míchána během 2 hodin při pokojové teplotě. Žádaný produkt se vysrážel, byl vyprán a vysušen. Látka se získala s 90 % výtěžkem a TLC (chloroform, silikagelové desky) ukázal jednu žlutou skvrnu (Rf=0,57), která se dobře rozlišila od výchozích látek za těchže podmínek. 10 »· ····

P ř í k I a d 7 N-(2,4-dinitro-5-aminofenyl)-5'-metyltryptamin (ML-31)

,NH^ NOi> N H 1 mMol 5-metyltryptaminu by! rozpuštěn ve 100 ml vody a pH bylo upraveno na 8,3 přídavkem 2,5 molů hydrogenuhličianu sodného (NaHCOa). Byl přidán 1,5% roztok 2,4-dinitro-5-fluoroanilinu v 200 ml etanolu a směs byla míchána během 2 hodin při pokojové teplotě. Žádaný produkt se vysrážel, byl omyt a vysušen. Látka se získala s 90 % výtěžkem a TLC (chloroform, silikagelové desky) ukázala jednu žlutou skvrnu (Rf=0,59), která se dobře rozlišila od výchozích látek za těchže podmínek. Příklad 8 N-(2,4-dinitro-5-aminofenyl)-5'-metoxytryptamin (ML-32) ,Nl-j>

Νθ2 n H

HjC—o 1 mMol 5-metoxytryptaminu byl rozpuštěn ve 100 ml vody a pH bylo upraveno na 8,3 přídavkem 2,5 molů hydrogenuhličitanu sodného (NaHCOa). Byl přidán 1,5% roztok 2,4-dinitro-5-fluoroanilinu v 200 ml etanolu a směs míchána během 2 hodin při pokojové teplotě . Žádaný produkt se vysrážel, byl vyprán a vysušen. Látka se získala s 95 % výtěžkem a TLC (chloroform, silikagelové desky) ukázala jednu žlutou skvrnu (Rf=0,57), která se dobře rozlišila od výchozích látek za těchže podmínek. pa tento v .v ~ηψ > tpce 11

Příklad 9 0-2,4-dinitrofenyl-5'-metoxytryptofol (ML-33)

N02 H H

HjC-o K roztoku 5-metoxytryptofolu 1 (700mg, 3,7 mmol) ve 3 ml dichlorometanu (DCM) byl po kapkách přidán roztok 2,4-dinitro-5-fluorobenzenu (205 mg, 4,0 mmol) v DCM a směs byla míchána pod argonem. Trietylamin (410 mg, 4,1 mmol) byl pomalu přidán a směs byla míchána přes noc, potom bylo rozpouštědlo odpařeno a TLC (chloroform, silikagelové desky) ukázala jednu žlutou skvrnu (Rf=0,80), která se dobře odlišila od výchozích látek za těchže podmínek. Surový produkt byl rozpuštěn v chloroformu (200 ml) a promyt s 0,1 N HCI (2x200 ml),s 1 N NaOH (2x200ml) a 1x vodou (200 ml). Organická vrstva byla sušena s MgS04 a koncentrována in vacuo. Rychlá chromatografie na silikagelu s chloroformem jako eluentem vedla k čistému 5-metoxytryptofyl 2,4 dinitrofenyl eteru (890 mg, 2,5 mmol, 67 % výtěžek) jako světle žlutému prášku.

Biologické testy sloučenin podle vynálezu Pokus 1

Tab.1 : Účinek sloučenin ML podle vynálezu na olutamátem indukovanou oxidační toxicitu v hipokamoální buněčné výstelce (HT22)

Změny potenciálu mitochondriální membrány byly dokázány s použitím fluorescenčního činidla 5,5',6,6'-terachloro-1,1\3,3' tetraetylbenzimidazolkarbokyanin jodidu (JC-1) podle Nuydens-e et.al., L.of Neuroscience ,1999, 92:153-9. Neusmrcené buňky myšího hipokampalu byly udržovány v Dulbecco-vě minimálním esenciálním mediu (DMEM) doplněném 1% tučného hovězího séra a prošlého trypsinizací. Buňky (3000 na 96 kapkovací desce) byly kultivovány během 24 hod s DMEM obsahujícím 5 mM glutamátu a byly ošetřeny s 10'7 M sloučenin ML. Buňky byly pak vystaveny působení JC-1 změnou prostředí kultury na fosforečnanový pufr (PBS), obsahující 1 g/l glukózy a 10 μΜ JC-1 po dobu 10 minut při 37°C a jednou promyty.

Fluorescence pak byla změřena na deskové čtečce při excitačních/emisních vlnových délkách 480/530 nm a 530/590 nm. Poměr intensit fluorescence při obou vlnových délkách slouží jako indikace potenciálu mitochondriální membrány. Pokles tohoto poměru indikuje depolarizaci mitochondriální membrány způsobenou poškozením vyvolaným nedostatečným okysličováním nebo jinými patologickými situacemi, vedoucímu k apoptoze, zániku rozkladem, buněk. Výsledky (Tab1.) ukazují klesající poměr fluorescence s přídavkem glutamátu, což indikuje poškození potenciálu mitochondriální membrány v hipokampálních buňkách. Melatonin, ML-23 a čtyři sloučeniny podle vynálezu (ML-25,ML-27,ML-26,ML-30) významně chránily proti glutamátem zprostředkovanému poškození mitochondrie, takže ooměr 12 12 ·* · • ♦ · • · · · • · ···· • · · • · · ♦ ♦ # ··· • ♦ • • · • • · • • · • · ·· ·· • ·· ·♦ ♦ • #·· ♦ · · ♦ ♦ · ·♦· ·* fluorescence zůstal vysoký ve srovnání s buňkami ošetřenými glutamátem. Tři z nich (ML-23,ML-25,ML26) nesnížily membránový potenciál v kontrolních buňkách, zatímco jiné (ML-27 a ML-3) jej snížily. Jiné sloučeniny ve skupině v Tab.1 (ML-29,ML-32,ML-31) snížily potenciál mitochondriální mebrány v kontrolních buňkách aniž by poskytovaly ochranu proti glutamátu a jedna (ML-28) zvýšila potenciál v kontrolních buňkách ale nechrání proti glutamátem indukovanému poškození.

Tento experiment ukazuje přímé inhibiční působení sloučenin podle vynálezu na potenciál mitochondriální membrány, která připomíná účinek melatoninu.

Tabulka 1 konntrolní podmínky +glutamát 5mM JC-1 poměr A JC-1 poměr B JC-1 poměr B/A (%) kontrolní 2.46 kontrolní 2.09 85 melatonin 2.48 melatonin 2.44 98 ML-23 2.19 ML-23 1.97 90 ML-25 2.21 ML-25 2.01 91 ML-26 2.16 MI-26 2.11 98 ML-27 1.80 MI-27 1.83 102 ML-28 2.77 ML-28 2.28 82 ML-29 2.28 ML-29 1.79 78 ML-30 1.83 ML-30 2.13 116 ML-31 1.93 ML-31 1.57 81 ML-32 2.15 ML-32 1.76 82

Pokus 2 i2Sl -melatonin v membráně mozku křečka 2 celé křeččí mozky byly homogenizovány v teflonovém homogenizéru v 10vol/g tkáně s ledovým Tris-HCI pufrem (50 mmol/l Tris, 5 mmol/l CaCh, pH =7,4) a odstředěny za 10 000 g během 10 minut. Kal byl odstřeďován dvě hodiny při 100 000 g aby se získala surová příznaková peleta (P2).

Alikvotní část suspendované P2 (20μΙ) bylo v inkubátoru při 37 °C s radioaktivním 125l-melatoninem (250 pM) po dobu 60 min v Tris-HCI pufru za přítomnosti či nepřítomnosti 1ηΜ-100μΜ testovaných látek (ML sloučenin a melatoninu). Spojovací reakce byla ukončena přídavkem 4 ml ledově chladnéhoTris pufru. Membrány byly pak sebrány vakuovou filtrací s použitím GF/C filtru ze skleněných vláken a vymyty 3x4 ml ledového pufru. Filtry, obsahující 125l-melatonin byly zkoušeny na radioaktivitu 125l v y-počítači. Výsledky (Tab.2) ukazují konkurenci sloučenin ML na specifickou vazbu l2fel-melatoninu k membránové části krysího mozku. ML-29,ML-30 a ML-31 inhibuje (>20%) specifickou vazbu 125l-melatoninu. ML-27, ML-28 a ML-23 snižují specifickou vazbu 125l-melatoninu méně výrazně («13%). Melatonin (1 θ'6 M) také snižuje specifickou vazbu 125l-melatoninu podobně (20%).

Marie SMK\ patentový ~ás(l

VelflOcova 8, ltí) 13 <4 · • · * • · · · • · ···· «♦ ···♦ ··

Tabulka 2

Koncentrace konkurenta 0 10^M %vázaného 125,_ melatoninu 10’'M %vázané ho 12SI-melatoni nu Melatonin 424 335 79 377 79 ML-23 463 403 87 435 94 ML-25 429 390 91 396 92 ML-26 417 41Ϊ 99 435 104 ML-27 486 426 87 448 92 ML-28 418 365 87 381 91 ML-29 447 358 80 404 90 ML-30 509 409 80 488 96 ML-31 464 334 72 438 94 ML-32 452 419 93 408 90

Zatímco předložený vynález popisuje určitá provedení, je zřejmé, že osoba zkušená v oboru může provést různé změny a variace. Vynález není proto míněn jako jediná cesta k takovému provedení, ale jeho koncept je v duchu a předmětu nároků. ll t;}„ Márífe patentový easti Velřiikova 8, 160 00

Claims (12)

14 14 fV 100δ-%0 PATENTOVÉ NÁROKY 1. Sloučenina mající vzorec (I)

a její sole přidané kyseliny, kde sloučeniny jsou bazické, vyznačující se tím, že každé Rí a každé R2 a R3 je nezávisle vybráno ze skupiny vodík halogen,Ci^alkyl, C1-4 alkoxy, NR'R", N(R')C(:0)R°, nitro, aryl, aryl-Ci-4-alkyl, nebo aryl-CMalkoxy, R° je C1-4alkyl nebo aryl, a každý R' a R" je nezávisle H, nebo Cm alkyl, nebo R'= R" = CICH2CH2, nebo NR'R" tvoří nasycený heterocyklický kruh obsahující 3-8 členu; m je 0-4; t je 0-3; a X je NH, N-CMalkyl, O nebo S; za předpokladu, že X není NH když současně (Ri)m je 5-metoxy, R2 je H nebo I a t=0, a žeX není S, když současně R2 je H a m=t=0.

2. Sloučenina podle nároku 1, vyznačující se tím, že m = 0, t = 1, R3 je N(R')C(:0)R° ve 3-poloze neuzavřeného benzenového kruhu a X je NH, NH-C1.4 alkyl nebo 0.

3. Sloučenina podle nároku 1, vyznačující se tím, že m = 1 ,t = 1 , R1 je metyl nebo metoxy v 5-poloze indolového kruhu, R3 je N(R')C(:0)R° v 3-poloze neuzavřeného benzenového kruhu a X je NH, NH-C1.4 alkyl nebo O.

4. Sloučenina podle nároku 1, vyznačující se tím, že m = 0, t = 1, Ráje NH2 ve 3-poloze neuzavřeného benzenového kruhu a X je NH, NH-CMalkyl nebo O.

5. Sloučenina podle nároku 1, vyznačující se tím, že m=1,t=1, R1 je metyl nebo metoxy v 5-poloze indolového kruhu, R3 je NH2 ve 3-poloze neuzavřeného benzenového kruhu a X je NH, NH-Cm alkyl nebo O.

6. Sloučenina podle nároku 1, vyznačující se tím, že m = 0 nebo 1, t = 0 a když m = 1, R1 je metyl v 5-poloze indolového kruhu. Maric SM/CivOVÁ, patentovtíjwrfl Velflikova 'i, M00 ÍYatia' 15

• « • · · ·· ♦ · ·+ ···♦

7. Sloučenina podle nároku 1, která je vybrána z následující skupiny N-(2,4-dinitrofenyl)tryptamin, N-(2,4-dinitrofenyl)-5-metyltryptamin, 2.4- dinitro-5-tryptylaminoacetanilid, 2.4- dinitro-5(5'-metyltryptyl)aminoacetanilidl 2l4-dinitro-5-(5'-metoxytryptyl)aminoacetanilid, N-(2,4-dinitro-5-aminofenyl)tryptamin, N-(2,4-dinitro-5-aminofenyl)-5'-metyltryptamin, N-(2,4-dinitro-5-aminofenyl)-5'-metoxytryptamin, 0-2,4-dinitrofenyl-5'-metoxytryptofol.

8.Farmaceutický přípravek, pro alespoň jedno užití vybrané z chovu zvířat, pro prevenci nebo léčbu onemocnění prostaty, impotence, kardiovaskulárních nemocí, nemocí centrálního nervového systému a psychiatrických nemocí, chronobiologicky podmíněných poruch endokrinní indikace, novotvarů,imunitního systému, stavů souvisejících se stárnutím, očních nemocí, bolení hlavy a migrény, který obsahuje alespoň jedno farmaceuticky přijatelné rozpouštědlo, ochrannou látku, rozpouštěč, emulgátor, pomocnou látku, a/nebo nosič, a alespoň jeden člen ze skupiny sestávající ze sloučenin majících vzorec (I) jak popsáno v nároku 1 a jejich farmaceuticky přijatelné soli, vyznačující se tím, že : každý Ri a každý R2 a R3 je nezávisle vybrán mezi vodíkem, halogenem, Cm alkylem, CMalkoxylem, NR'R", N(R')C(:0)R°, nitro, arylem, aryl-CMalkylem, nebo aryl-CMalkoxylem, R° je C1-4alkyl nebo aryl, a každý R'a R” je nezávisle H, nebo Ci^alkyl, nebo R’= R"= CICH2CH2 nebo NR'R" vytváří nasycený heterocyklický kruh, obsahující 3-8 členů kruhu; m je 0 - 4; t je 0 - 3; a X je NH, N-Ci^alkyl, O nebo S; za předpokladu, že X není NH když současně je (Ri)mje 5-metoxy, R2 je H nebo I a t=0.

9. Farmaceutický přípravek podle nároku 8, vyznačující se tím, že je charakterizován nejméně jedním z následujících znaků: (i) je přizpůsoben pro orální, rektální, parenterální, ústní, intrapulmonární nebo transdermální podávání; (ii) je ve formě jednotkové dávky, každá dávka obsahuje určité množství alespoň jednoho členu, které leží mezi 0,0025 -1000 mg; (iii) je to přípravek s řízeným uvolňováním, kde alespoň jeden tento člen je uvolňován určenou řízenou rychlostí.

10. Složení vybrané ze složení pro ochranu kůže a kosmetických složení pro lokální aplikace, které sestává z nejméně jedné sloučeniny vzorce (I) jak je definováno v nároku 8, která má účinky vybrané z antioxidačních účinků a z vázání radikálů, spolu s alespoň jedním rozpustidlem, nosičem nebo pomocnou látkou.

16 »· ·«* • · • · «« ♦ · * • « · • * · * « · · ···· « · · ·« · »· ··♦» * · ♦ · ♦ · ♦ · * ·· ·*

11. Použití alespoň jednoho členu ze skupiny obsahující sloučeniny vzorce (I) jak je definováno v nároku 8 a jejich farmaceuticky přijatelné soli, při přípravě léku pro nejméně jedno užití vybrané z chovu zvířat nebo pro prevenci nebo léčbu stavu prostaty, impotence, kardiovaskulárních poruch, poruch centrálního nervového systému a psychiatrických poruch, chronobiologicky podmíněných poruch endokrinní indikace, novotvarů, imunitního systému, stavů spojených se stářím, očních nemocí, bolení hlavy a migrény.

12. Způsob prevence nebo léčby stavů prostaty, impotence, kardiovaskulárních poruch, poruch centrálního nervového systému a psychiatrických poruch, chronobiologicky podmíněných poruch endokrinní indikace, novotvarů,imunitního systému, stavů spojených se stárnutím, očních nemocí, bolení hlavy a migrény, nebo pro léčbu jiných savců než člověka v souvislosti s chovem zvířat, které zahrnuje léčbu savců účinným množstvím nejméně jednoho členu ze skupiny sloučenin vzorce (I), jak je definováno v nároku 8 a jejich farmaceuticky přijatelných solí. fclg. Marie SMRČKOVÁ pa teti to vý zas mpcé) Veiíiíkova S, i 60 00 Ρτίηα 6