CZ20032735A3 - HSA - prosté prostředky s obsahem interferonu-beta - Google Patents

HSA - prosté prostředky s obsahem interferonu-beta Download PDF

Info

Publication number
CZ20032735A3
CZ20032735A3 CZ20032735A CZ20032735A CZ20032735A3 CZ 20032735 A3 CZ20032735 A3 CZ 20032735A3 CZ 20032735 A CZ20032735 A CZ 20032735A CZ 20032735 A CZ20032735 A CZ 20032735A CZ 20032735 A3 CZ20032735 A3 CZ 20032735A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
composition
aqueous
ifn
buffer
dried form
Prior art date
Application number
CZ20032735A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ305994B6 (cs
Inventor
Bret A. Shirley
Minna Choe
Melanie Tellers
Susan Babuka
Bao-Lu Chen
Maninder Hora
Original Assignee
Chiron Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27364838&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ20032735(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Chiron Corporation filed Critical Chiron Corporation
Publication of CZ20032735A3 publication Critical patent/CZ20032735A3/cs
Publication of CZ305994B6 publication Critical patent/CZ305994B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/215—IFN-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

HSA prosté prostředky s obsahem interferonu β
Oblast techniky
Tento vynález se obecně týká farmaceutických prostředků, konkrétněji stabilizovaných prostředků interferonu β prostých lidského serumalbuminu jako přidávané farmaceutické pomocné látky.
Dosavadní stav techniky
Interferony jsou skupinou glykoproteinů, jejichž vylučování z buněk se vyvolává řadou signálů včetně virů, RNA s dvojitou šroubovicí, dalších polynukleotidů, antigenů a mitogenů. Interferony vykazují více biologických aktivit včetně protivirové, protiproliferačni a imunomodulační aktivity. Alespoň tři zřetelné typy lidských interferonu α, β a gama se rozlišují na základě řady faktorů včetně protivirových a protiproliferačních aktivit.
Interferon-β (IFN-β) je prvním identifikovaným účinným lékem pro pacienty s mnohočetnou sklerózou (MS) a prokazuje se, že snižuje počet příhod, které pacienti utrpí s relapsem a remisí MS a sekundární progresivní MS. Kompozice IFN-β lze též použít při léčbě infekce hepatitidy B a C.
Podobně jako u všech léků na bázi proteinů je třeba při použití IFN-β jako terapeutického prostředku překonat jednu velkou překážku, kterou je ztráta farmaceutické použitelnosti, která může vyplývat z nestablú-lty 'vefarmaceutických přípravcích. Fyzikální nestabilita, která ohrožuje aktivitu polypeptidů a účinnost ve farmaceutických prostředcích, zahrnuje denaturaci a tvorbu rozpustných a
-2nerozpustných agregátů, zatímco chemická nestabilita zahrnuje hydrolýzu, tvorbu imidu, oxidaci, racemizaci a deamizaci. Některé z těchto změn vedou ke ztrátě či snížení farmaceutické aktivity daného proteinu. V dalších případech jsou přesné účinky těchto změn neznámé, avšak stále je třeba uvažovat, že výsledné produkty degradace jsou farmaceuticky nepřijatelné vzhledem k možnosti nežádoucích vedlejších účinků.
Stabilizace polypeptidů ve farmaceutických prostředcích zůstává oblastí, ve které hraje značnou úlohu pokus a omyl [přehledný referát Wanga, Int. J. Pharm. 185, 129-188 (1999), Wang a Hanson, J. Parenteral Sci. Tech. 42, S3-S26 (1988)]. Pomocné látky, které se přidávají k polypeptidovým farmaceutickým prostředkům pro zvyšování jejich stability, zahrnují pufry, cukry, povrchově aktivní látky, aminokyseliny, polyethylenglykoly a polymery, avšak stabilizační účinky těchto chemických přísad se mění v závislosti na proteinu.
Jednou z hlavních překážek přípravy stabilizovaných IFN-β farmaceutických prostředků je špatná rozpustnost molekuly IFN-β. Současné prostředky používají HSA jako prostředek pro zvýšení rozpustnosti IFN-Β. Avšak použití HSA má své nevýhody. HSA je produkt z lidské krve a musí se tedy získávat od lidí. I když se činí kroky pro snížení rizika, použití produktů z lidské krve, jako je HSA, sebou nese možné zavedení lidských vírů jako jsou HIV a HCV. Zavedení HSA do přípravku též interferuje se. schopností správně stanovit stabilitu IFN-β v přípravku. Je tomu tak proto, že HSA i IFN-β jsou proteiny a HSA interferuje při někt^xýxůx-anaíLýzáoh zjišťujících stabilitu IFN-β.
Navíc je IFN-β protein, který vykazuje tvorbu agregátu ··· * ·
-3·· v « · I • · » při přípravě ve farmaceutických prostředcích, a proto je množství tohoto proteinu v jeho monomerním biologicky aktivním stavu ohroženo v průběhu skladování těchto prostředků. Tvorba agregátu s polypeptidem, jako je IFN-β, může v průběhu skladování farmaceutického prostředku nepříznivě ovlivnit biologickou aktivitu tohoto polypeptidů, což způsobuje ztátu terapeutické účinnosti farmaceutického prostředku. Dále může tvorba agregátu způsobit další problémy, jako je blokování trubiček membrán či čerpadel při podávání farmaceutického prostředku s obsahem IFN-β pomocí infuzního systému. Navíc injekce farmaceutického prostředku obsahujícího agregovanou formu proteinu přináší možnost vzniku imunogenní reakce na tento agregovaný protein.
Proto existuje potřeba dalších IFN-β farmaceutických prostředků obsahujících fyziologicky kompatibilní stabilizační prostředky, které zlepšují rozpustnost tohoto proteinu a stabilizují tento protein proti tvorbě agregátů, čímž zlepšují farmaceutickou použitelnost.
Podstata vynálezu
Poskytují se kompozice obsahující interferon β (IFN-β) jako terapeuticky účinnou složku a způsoby použitelné při jejich přípravě. Tyto kompozice jsou stabilizované farmaceutické kompozice, které jsou prosté lidského serumalbuminu (HSA) jako farmaceutické pomocné látky a které obsahují v podstatě monomerní IFN-β solubilizovaný v přípravku o nízké iontové síle. Tento přípravek o nízké iontové síle je roztok obsahující pufr v množství dostatečném pro udr-ženi-příp-r-a-v-k-u na udané hodnotě pH ±0,5 jednotek, kde udané pH je od zhruba 3,0 do zhruba 5,0 a iontová síla nepřevyšuje zhruba 60 mM. Do farmaceutických prostředků se zahrnuje neiontový prostředek
-4pro úpravu osmotického tlaku tak, aby tyto prostředky byly izotonické a tímto prostředkem pro úpravu osmotického tlaku je některý glycid. Poskytují se též způsoby zvyšování rozpustnosti IFN-β ve farmaceutických prostředcích a zvyšování množství monomerního IFN-β v těchto prostředcích bez použití lidského serumalbuminu.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1 ukazuje rozpustnost IFN-β-lb v roztocích chloridu sodného.
Obrázek 2 ukazuje rozpustnost ΙΡΝ-β-lb v prostředcích o nízké iontové síle.
Obrázek 3 ukazuje účinek pH 3,0 na stav agregace IFN-B-lb.
Obrázek 4 ukazuje účinek pH 4,0 na stav agregace IFN-B-lb.
Obrázek 5 ukazuje účinek pH 5,0 na stav agregace IFN-B-lb.
Obrázek 6 ukazuje účinek iontové síly (0 mM NaCl)
na stav agregace ΙΡΝ-β-lb.
Obrázek 7 ukazuje účinek iontové síly (50 mM NaCl)
na stav agregace ΙΡΝ-β-lb.
Obrázek 8 ukazuje účinek iontové síly (150 mM NaCl) na stav agregace IFN-β-lb.
• · φ • · · φ
-5Obrázek 9 ukazuje stav agregace v prostředku o pH 3,0, který obsahuje pouze glycinový pufr 5 mM.
Obrázek 10 ukazuje účinek neiontového prostředku pro úpravu osmotíckého tlaku (9 % sacharosy) na stav agregace prostředku IFN-S-lb podle obrázku 9.
Obrázek 11 ukazuje účinek neiontového prostředku pro úpravu osmotíckého tlaku (9% trehalosa) na stav agregace IFN-S-lb v prostředku z obrázku 9.
Obrázek 12 znázorňuje procento z počáteční koncentrace IFN-E-lb v lyofilizovaných prostředcích obsahujících 9 % trehalosy nebo 9 % sacharosy po 8 týdnech skladování při teplotě 40 °C. Koncentrace se stanoví absorbcí ultrafialového světla.
Obrázek 13 znázorňuje procento z počáteční koncentrace IFN-E-lb v lyofilizovaných prostředcích obsahujících 9 % trehalosy nebo 9 % sacharosy po 8 týdnech skladování při teplotě 40 °C. Procento hlavního vrcholu se stanoví vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s reverzními fázemi.
Obrázek 14 znázorňuje počáteční koncentraci IFN-β-Ι v lyofilizovaných prostředcích obsahujících 9 % trehalosy po 9 měsících skladování při 5 °C nebo při 30 °C.
Obrázek 15 ukazuje procento hlavního vrcholu IFN-S-lb v lyofilizovaných prostředcích obsahujících 9 % trehalosy po měsících skladování při teplotě 5 °C nebo při 3 0—°thProcento hlavního vrcholu se stanoví vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s reverzními fázemi.
-699 9 * 9 9 β 9 · · ·
999 «9 9
9 9 9
99999 99
Obrázek 16 ukazuje procento počáteční koncentrace
IFN-S-lb v kapalných prostředcích obsahujících 9 % trehalosy nebo 9 % sacharosy po 9 týdnech skladování pří teplotě °C. Koncentrace se stanoví absorbací ultrafialového světla.
Obrázek 17 ukazuje procento hlavního vrcholu IFN-S-lb v kapalných prostředcích obsahujících 9 % trehalosy nebo 9 % sacharosy po 8 týdnech skladování při teplotě 30 °C. Procento hlavního vrcholu se stanoví vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s reverzními fázemi.
Obrázek 18 ukazuje počáteční koncentraci IFN-S-lb v kapalných prostředcích obsahujících 9 % trehalosy nebo 9 % sacharosy po 9 měsících skladování v lahvičkách při teplotě 5 °C. Koncentrace se stanoví spektroskopií v ultrafialovém světle.
Obrázek 19 ukazuje procento hlavního vrcholu IFN-S-lb v kapalných prostředcích obsahujících 9 % trehalosy nebo 9 % sacharosy po 9 měsících skladování v lahvičkách při teplotě 5 °C. Procento hlavního vrcholu se stanoví vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s reverzními fázemi.
Obrázek 20 znázorňuje procento počáteční koncentrace IFN-S-lb v kapalných prostředcích obsahujících 9 % trehalosy nebo 9 % sacharosy po 9 týdnech skladování při teplotě 30 °C. Koncentrace se stanoví spektroskopií v ultrafialovém světle.
Obrázek 21 znázorňuje procento počáteční koncentrace IFN-S-lb v lyofílizovaných prostředcích obsahujících 9 % trehalosy nebo 9 % sacharosy po 8 týdnech skladování při
4» ·
-7teplotě 40 °C. Koncentrace se stanoví spektroskopií v ultrafialovém světle.
• · » · · · · « <t · · · « · · · » • ··· · · · · · · · ···* • ··*· ··* «·· «· ·· ··· ** *
Obrázek 22 znázorňuje procento počáteční koncentrace IFN-β-lb v kapalných prostředcích obsahujících 5 % mannitolu při skladování po dobu 6 měsíců při teplotě 5 °C. Koncentrace se stanoví spektroskopií v ultrafialovém světle.
Obrázek 23 ukazuje procento hlavního vrcholu IFN-β-lb v kapalných prostředcích obsahujících 5 % mannitolu při 6 měsících skladováni při teplotě 5 °C. Procento hlavního vrcholu se stanoví vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s reverzními fázemi.
Následuje podrobný popis vynálezu.
Tento vynález se zaměřuje na stabilizované farmaceutické prostředky obsahující interferon β (IFN-β) a způsoby jejich přípravy. Tyto prostředky se připravují bez přítomnosti lidského serumalbuminu (HSA) a jsou proto prosté této farmaceutické pomocné látky. Tyto přípravky se zde uvádějí jako HSA prosté farmaceutické přípravky IFN-β. Tyto přípravky obsahují v podstatě monomerní IFN-β, který se solubilizuje v přípravku o nízké iontové síle. Pojem přípravek o nízké iontové síle znamená roztok obsahující pufr v množství, které je dostatečné pro udržování pH tohoto farmaceutického prostředku v mezích ±0,5 jednotek udaného pH, který nemá vyšší iontovou sílu než zhruba 60 mM. Iontová síla se vztahuje ke standardní chemické definici, která se používá pro roztoky, kde iontová síla roztoku se rovná, kde c je koncentrace a z je náboj. Pufr je přítomen v prostředku o nízké iontové sile o koncentraci zhruba 1 mM až zhruba 30 mM, přednostně zhruba 2 mM až zhruba 25 mM lépe zhruba 2 mM až zhruba 20 mM, ještě lépe zhruba 2 mM až zhruba 10 mM, a dokonce ještě lépe zhruba 2 mM až zhruba 5 mM. Proto v některých ztělesněních obsahuje prostředek o nízké iontové síle pufr o koncentraci zhruba 2 mM až zhruba 10 mM, zhruba 2 mM až zhruba 7 mM, zhruba 2mM až zhruba 5 mM, zhruba 2 mM, zhruba 3 mM, zhruba 4 mM nebo zhruba 5 mM. Vhodné pufry, které lze pro přípravu prostředku o nízké iontové síle, ve kterých se solubilizuje IFN-β, zahrnují, avšak bez omezení, glycin, kyselinu aspartovou sukcinát sodný, citrát, formiát, acetát, kyselinu glutamovou, histidin, imidazol a fosfát, přednostně glycin, kyselinu aspartovou a sukcinát sodný, přednostněji glycin a kyselinu aspartovou.
Přednostně má přípravek o nízké iontové síle iontovou sílu, která nepřevyšuje zhruba 60 mM, přednostněji která nepřevyšuje zhruba 40 mM a ještě lépe která nepřevyšuje 20 mM. V některých ztělesněních se iontová síla přípravku určuje pouze koncentrací pufru a proto tento přípravek nemá přídavné iontové složky, jako je chlorid sodný, chlorid draselný, chlorid hořečnatý, ammoná sůl a podobně, přispívající k jeho iontové síle.
Použití přípravku o nízké iontové síle, který je roztokem obsahujícím pufr o koncentracích zhruba 1 mM až zhruba 30 mM, přednostně zhruba 2 mM až zhruba 5 mM, poskytuje přípravu stabilizovaných IFN-β farmaceutických prostředků, které mají pH zhruba 3,0 až zhruba 5,0, přednostně 3,0 až zhruba 4,5, přednostněji zhruba 3,0 až zhruba 4,0, ještě lépe zhruba 3,5 až zhruba 4,0, nejlépe zhruba 4,0, v závislosti na konkrétním použitém pufru. Proto, pokud je puřrera— glycin, je pH prostředku zhruba 3,0 až 3,5, přednostněji zhruba 3,0. Pokud je pufrem kyselina aspartová, je pH prostředku zhruba 3,5 až zhruba 4,5, přednostně zhruba 4,0.
• 00 .0 0
-9Pokud je pufrem sukcinát sodný, je pH prostředku zhruba 4,5 až zhruba 5,0, přednostně zhruba 5,0.
Při udržování pH IFN-β farmaceutických prostředků podle tohoto vynálezu v rozmezí od zhruba 3,0 do zhruba 5,0 lze zvýšit rozpustnost IFN-β v těchto prostředcích mimo normálně možné rozmezí bez použití lidského serumalbuminu. Dále zavedením IFN-β do prostředku o nízké iontové síle, jak se zde definuje, lze připravit farmaceutické prostředky obsahující v podstatě monomerní IFN-β. Pojem v podstatě monomerní znamená, že většina IFN-β (na základě hmotnosti) přítomná v roztoku je v monomerní formě spíše než v agregované formě. Pojem agregovaný zde znamená fyzikální interakci mezi molekulami polypeptidu, kerá vede ke tvorbě multimerů (dimerů, trimerů atd), které zůstávají rozpustné, nebo se mohou vysrážet z roztoku. Monomerní forma polypeptidu IFN-β zůstává rozpustná a proto se zde popisuje jako solubilizovaná v prostředku o nízké iontové síle nebo ve farmaceutických prostředcích podle tohoto vynálezu. Procento (hmotnostní) IFN-β, které je v monomerní formě v HSA prostých prostředcích podle tohoto vynálezu, se může měnit od 80 % k vyšším hodnotám. Tento vynález tedy poskytuje HSA prosté IFN-β farmaceutické prostředky, které obsahují alespoň zhruba 80 % IFN-β v monomerní formě oproti agregované formě, přednostně alespoň 85 %, přednostněji alespoň 90 %, dokonce ještě lépe 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, % nebo více IFN-β v monomerní formě.
V některých ztělesněních tohoto vynálezu HSA prosté farmaceutické prostředky IFN-β dále zahrnují neiontový-------prostředek pro úpravu osmotického tlaku v množstvím dostatečném k tomu, aby prostředky byly isotonícké s tělesnými tekutinami. Tyto prostředky lze upravit na isotonícké řadou • « ·
-10neiontových prostředků pro pozměnění osmotického tlaku dobře známých těm, kteří mají zkušenost v oboru. Jsou to obvykle glycidy z různých skupin [viz například Voet a Voet (1990) Biochemistry (John Wiley & Sons, New York)]. Monosacharidy klasifikované jako aldosy, jako je glukosa, mannosa, arabinosa a ribosa, stejně tak jako ty, které se klasifikují jako ketosy, jako je fruktosa, sorbosa a xylulosa lze použít jako neiontové prostředky pro úpravu osmotického tlaku v tomto vynálezu. Disacharidy, jako je sacharosa, maltosa, trehalosa a laktosa lze rovněž použít. Navíc lze též použít alditoly (acyklické polyhydroxyalkoholy), jako je glycerol, mannitol, xylitol a sorbitol, jako neiontové prostředky pro úpravu osmotického tlaku v tomto vynálezu. Nejpreferovanějšími neiontovými prostředky pro úpravu osmotického tlaku jsou trehalosa, sacharosa a mannitol nebo jejich kombinace. Neiontové prostředky pro úpravu osmotického tlaku se přidávají v množství dostatečném k tomu, aby prostředek byl isotonický s tělesnými tekutinami. Při zavádění do HSA prostých farmaceutických prostředků IFN-β je koncentrace prostředku pro úpravu osmotického tlaku zhruba 1 % až zhruba 10 % v závislosti na použitém prostředku. Proto v jednom ztělesnění je neiontovým prostředkem pro úpravu osmotického tlaku trehalosa nebo sacharosa při koncentraci zhruba 8 % až zhruba 10 %, přednostně zhruba 9 % (hmotnost/objem) a přednostně se používá trehalosa o této koncentraci. V dalším ztělesnění je neiontovým prostředkem pro úpravu osmotického tlaku mannitol o koncentraci zhruba 4 % až zhruba 6 %, přednostně zhruba 5 % (hmotnost/objem). V dalších ztělesněních je neiontovým prostředkem pro úpravu osmotického tlaku kombinace trehalosy a mannitolu nebo sacharosy a ---------mannitolu, kde trehalosa a sacharosa jsou přítomny v koncentracích zhruba 1 % (hmotnost/objem) a mannitol je přítomen o koncentraci zhruba 3 % až zhruba 5 % (hmotnost/
* φ φ · ·· · ·
-11objem), přednostně zhruba 4,6 % (hmostnost/objem).
HSA prosté farmaceutické prostředky IFN-β podle tohoto vynálezu zahrnují kapalné prostředky a jejich sušené formy. Pro účely tohoto vynálezu pojem kapalný vzhledem k farmaceutickým kompozicím či prostředkům zahrnuje pojem vodný a zahrnuje kapalné přípravky, které jsou zmrazené. Sušená forma znamená kapalnou farmaceutickou kompozici či prostředek vysušené buď sušením za mrazu [to je lyofiližaci, viz například, Williams a Polli, J. Parenteral Sci. Technol.
38, 48-59 (1984)], sušení ve spreji [viz Masters (1991) v Spray-Drying Handbook (5. vydání, Longman Scientific a Technical, Essez, U. K.), str. 491-676, Broadhead a kol.,
Drug Devel. Ind. Pharm. 18, 1169-1206 (1992) a Mumenthaler a kol., Pharm. Res. 11, 12-2 0 (1994)] nebo sušení na vzduchu [Carpenter and Crowe, Cryobiology 25, 459-470, (1988) a
Roser, Biopharm. 4,47-53 (1991)]. Pojem lyofilizace vzhledem k farmaceutickým prostředkům s obsahem IFN-β znamená rychlé sušení za mrazu, za sníženého tlaku v řadě lahviček, z nichž každá obsahuje jednotkovou dávku interferonového přípravku podle tohoto vynálezu. Lyofilizační zařízení provádějící výše popsanou lyofiližaci jsou komerčně dostupná a snadno je ovládá ten, kdo má zkušenost v oboru. V jednom ztělesnění tohoto vynálezu se kapalný prostředek připravuje jako lyofilizovaná kompozice.
V dalších ztělesněních tohoto vynálezu lze připravit HSA prosté farmaceutické kompozice s obsahem IFN-β podle tohoto vynálezu ve formě, která je vhodná pro dodávání do plic a pro podávání přípravku osobě plicní inhalací. Plicní inhalace znamená, že se farmaceutická kompozice podává přímo do plic dodávkou kompozice ve formě aerosolu nebo jiného vhodného přípravku z dodávacího zařízení do ústní dutiny osoby a osoba inhaluje tento přípravek ústní dutinou. Pojem
-12• 9 9 ·· ♦ · 9 9 ••9 9 9 999 9 99 >99 «9 9 9 999
99999 9 9 99 99999 •99 99 9· 999 9· aerosol znamená suspenzi tuhých či kapalných částic v proudícím vzduchu nebo jiném fyziologickém akceptovatelném proudu plynu. Další vhodné přípravky zahrnují, avšak bez omezení, mlhu, páru nebo sprejové prostředky, pokud jsou částice obsahující proteinovou kompozicí v rozmezí rozměrů konzistentním s rozmezím popisovaným pro formu sušeného prášku farmaceutické kompozice, jak se definuje níže. Plicní inhalaci lze též uskutečnit dalšími vhodnými způsoby známými tomu, kdo má zkušenost v oboru. Ty mohou zahrnovat instilací kapaliny pomocí vhodného zařízení nebo jiných takových způsobů. Plicní inhalace vede k ukládání inhalované proteinové kompozice v alveolech plic osoby. Po vložení se protein může absorbovat, pasivně či aktivně, epithelem alveolů a vrstvami kapilárního epithelu do krevního řečiště s následnou systémovou distribucí.
Podávání do plic polypeptidu či proteinu, jako je IFN-β, vyžaduje dodávku biologicky aktivní látky v zařízení pro dodávání do orální dutiny osoby inhalací. Pro účely tohoto vynálezu se HSA prosté farmaceutické prostředky obsahující IFN-β nebo jejich varianty podávají inhalací aerosolu či jiného vhodného přípravku, který se obdrží z vodného či nevodného roztoku nebo ve formě suspenze nebo jako tuhá látka či forma suchého prášku farmaceutického prostředku, v závislosti na použitém zařízení pro dodávku. Tato zařízení pro dodávku jsou dobře známá v oboru a zahrnují, avšak bez omezení, nebulizštory, inhalátory s odměřováním dávky a inhalátory suchých prášků nebo jakékoliv jiné vhodné mechanismy dodávání, které umožňují dodávku farmaceutického prostředku vodného či nevodného roztoku nebo suspenze nebo ve formě tuhé či ve formě suchého prášku. Při použití v souvislosti s farmaceutickými prostředky vhodnými pro dodávku do plic mají tyto pojmy následující zamýšlený význam. Pojem
-13• * ·· · * 9 · • 9 · · ·9 9 · · • 9 99 9 9 9 9 · •999* 9 9 · 9 99999 • 9 «99 «9 '9 vodný se týká prostředku připraveného s vodou obsahujícího vodu či rozpuštěného ve vodě, včetně směsí, ve kterých je voda převládající látkou této směsi. Převládající látka je přítomná ve větším množství než jiná složka této směsi. Pojem nevodný se týká prostředku připraveného s látkou jinou než je voda obsahující takovou látku nebo rozpuštěnou v takové látce nebo ve směsích, ve kterých voda není převládající složkou této směsi. Pojem roztok se týká homogenní přípravy dvou či více látek, které mohou být tuhé, kapalné, plynné nebo vzájemné kombinace těchto stavů. Pojem suspenze se týká směsi látek takových, že jedna či více nerozpustných látek jsou homogenně dispergované v jiné převládající látce.
Pro účely tohoto vynálezu se pojmy tuhý a suchý prášek používají se vzájemnou záměnou s odkazem na HSA prosté farmaceutické prostředky vhodné pro dodávku do plic. Pojem tuhá forma nebo forma suchého prášku farmaceutického prostředku znamená kompozici, která se vysuší na jemně rozmělněný prášek s obsahem vlhkosti menším než zhruba 10 hmotnostích procent, obvykle menším než zhruba 5 hmotnostních procent a přednostně menším než zhruba 3 hmotnostní procenta. Tato forma suchého prášku kompozice obsahuje částice s obsahem IFN-β nebo variantu této látky. Preferované velikosti částic jsou menší než zhruba 10,0 μτη středního průměru, preferovaněji menší než zhruba 7,0 μτη, lépe než zhruba 6,0 μτη, ještě lépe menší než zhruba 0,1 až 5,0 μτη, nejlépe v rozmezí zhruba 1,0 až zhruba 5,0 μτη středního průměru.
HSA prostý kapalný farmaceutický prostředek s obsahem ΤΡΝ-β nebo jeho varianty zamýšlené pro dodávku do plic lze tedy použít buď jako kapalný roztok či suspenzi v zařízení pro dodávku nebo ve formě nejprve zpracované na suchý prášek s použitím lyofilizace nebo způsobů sušení ve spreji dobře • ♦
-14··· ·
známých v oboru. Tam, kde se kapalný roztok či suspenze používá v dodávacím zařízení, nebulizátoru, inhalátoru s odměřováním dávky nebo v jiných vhodných zařízeních pro dodávku v jednotlivé dávce či ve více částečných dávkách plicní inhalací, je farmaceuticky účinné množství kompozice pro dodávku do plic pacienta ve formě kapiček o stejném rozmezí velikosti částic, jako se popisuje výše pro formu suchého prášku. Pojem farmaceuticky účinné množství znamená množství použitelné při léčení, prevenci či diagnostice choroby nebo stavu vykazujícího odpověď na IFN-β. Podobný roztok či suspenzi kompozice lze použít s fyziologicky vhodnými stabilizačními prostředky, pomocnými látkami, modifikátory viskozity, prostředky pro zvětšení objemu, povrchově aktivními látkami nebo s jejich kombinacemi známými tomu, kdo má zkušenost v oboru, pokud neohrožují význačné charakteristiky kompozicí podle tohoto vynálezu s obsahem IFN-β prostých HSA.
Pokud se kapalný farmaceutický prostředek lyofilizuje před použitím dodávkou do plic, rozmělňuje se lyofilizovaný prostředek pro obdržení jemně rozptýleného suchého prášku složeného z částic s požadovaným rozmezím rozměrů popisovaným výše. Tam, kde se používá sušení ve spreji pro obdržení suchého prášku z kapalného farmaceutického prostředku, provádí se tento způsob za podmínek, které vedou k v podstatě amorfnímu jemně rozmělněnému suchému prášku, který se skládá z částic v rámci požadovaného rozmezí popisovaného výše. Podobně, pokud je výchozí farmaceutický prostředek již v lyofilizované formě, může se rozmělňovat s obdržením suché práškové formy pro následnou přípravu aerosolu či jiného přípravku vhodného pro inhalaci do plic. Pokud je výchozí farmaceutická kompozice ve formě sušené ve spreji, připravuje se v preferovaných případech takovým způsobem, že již je ve • 0 • · · 0 · • ·
-15formě suchého prášku o vhodné velikosti částic pro distribuci vodných či nevodných roztoků či suspenzí suché práškové formy v souladu s plicním podáváním. Ohledně způsobu přípravy
suchých práškových forem farmaceutických prostředků viz například publikace WO 96/32149, WO 97/41833, WO 98/29096 a US patenty č. 5 976 574, 5 985 248 a 6 001 336, které se zde zahrnují formou odkazu.
Výsledná suchá prášková forma kompozice se poté umístí do vhodného zařízení pro dodávku pro následnou přípravu aerosolu či jiného vhodného přípravku, kerý. se dodává pacientovi plicní inhalací. Pokud se používá suchá prášková forma farmaceutické kompozice, je třeba ji připravit a distribuovat ve formě vodného či nevodného roztoku či suspenze, inhalátoru odměřované dávky nebo jiného vhodného zařízení pro dodávku. Farmaceuticky účinné množství suché práškové formy kompozice se podává v aerosolu či jiném přípravku vhodném pro plicní inhalaci. Množství formy suchého prášku kompozice umístěné do zařízení pro dodávku je dostatečné pro umožnění dodávky farmaceuticky účinného množství kompozice subjektu inhalací. Proto bude množství suché práškové formy umístěné do dodávacího zařízeni kompenzovat možné ztráty v zařízení v průběhu skladování a dodávky suché dávkové formy kompozice. Po umístění suché práškové formy do dodávacího zařízení se částice o správné velikosti, jak se popisuje výše, suspendují v hlavním prostředí aerosolu. Tlaková nevodná suspenze se poté uvolňuje z dodávacího zařízení do dýchacích cest subjektu v průběhu inhalace. Dodávací zařízení dodávají ve formě jedné dávky či ve více dílčí-ch dávkách plicní inhalací farmaceuticky účinné množství kompozice do plic pacienta. Hnací plyn aerosolu musí být konvenční látkou používanou pro tyto účely, jako je chlorfluorkarbon, hydrochlorfluorkarbon, hydrofluorkarbon nebo • 9
9999
-169 99 · · 9 · 9 9 9 99
9 9 9 9 9
99999 9 9 · · · ·
999 99 99 999 uhlovodík, včetně trichlorfluormethanu, dichlordifluormethanu, dichlortetrafluormethanu, dichlordifluormethanu, dichlortetrafluorethanolu a 1,1,1,2-tetrafluorethanu nebo jejich kombinace. Do farmaceutického prostředku lze přidávat povrchově aktivní látku pro snížení adhese suchého prášku obsahujícího protein na stěny dodávacího zařízení, ze kterého se aerosol vypouští. Vhodné povrchově aktivní látky pro tento účel zahrnují, avšak bez omezení, sorbitol-trioleát, sojový lecithin a kyselinu olejovou. Zařízení vhodná pro dodávku do plic suché práškové formy proteinové kompozice ve formě nevodné suspenze jsou komerčně dostupná. Příklady takových zařízení zahrnují inhalátor s odměřovanou látkou Ventolin (Glaxo atd.) a inhalátor Intal (Fisons, Corp., Bedford, MA) . Viz též zařízení pro dodávku aerosolu popisovaná v US patentech č. 5 522 378, 5 775 320, 5 934 272 a 5 960 792 a tyto patenty se zde zahrnují formou odkazu.
Pokud se má tuhá látka nebo suchý prášek HSA prosté farmaceutické kompozice s obsahem IFN-β dodávat ve formě suchého prášku, používá se v preferovaných případech inhalátor suchého přášku či jiné příslušné zařízení pro dodávku. Forma suchého prášku farmaceutického prostředku se přednostně připravuje jako aerosol suchého prášku disperzí v proudu vzduchu či jiném fyziologicky akceptovatelném proudu plynu konvenčním způsobem. Příklady komerčně dostupných inhalátorů suchého prášku vhodných pro použití v souladu se způsoby, které se zde popisují, zahrnují inhalátor prášku Spinhaler (Fisons Corp., Bedford, MA) a zařízení Ventolin Rotahaler (Glaxo, lne., Research Triangle Park, NC). Viz též zra-řízzení pro dodávku suchého prášku popisovaná v publikacích WO 93/00951, WO 96/09085, WO 96/32152, a v US patentech č.
458 135, 5 785 049 a 5 993 783, které se zde zahrnují formou odkazu.
9 • · 9 9 9 · 9 9 999 · 99
999 99 9 9999 • 99999 9 9 99 99999
9999 999
99999 99 999 99 9
Forma suchého prášku HSA prostého farmaceutického prostředku s obsahem IFN-β nebo jeho biologicky aktivní varianty se může rekonstituovat na vodný roztok pro následnou dodávku ve vodném aerosolovém roztoku s použitím nebulizátoru, inhalátoru s odměřováním dávky nebo jiného vhodného zařízení pro dodávku. V případě nebulizátoru se vodný roztok udržovaný v nádobce s kapalinou převádí na vodný sprej a pouze jeho malá část opouští nebulizátor pro dodávku pacientovi v jakémkoliv daném čase. Zbývající sprej odtéká zpět do nádobky kapaliny v nebulizátoru, kde se opět mění na aerosol ve vodném spreji. Tento proces se opakuje tak dlouho, až je nádobka zcela vyprázdněná nebo až se ukončí podávání spreje ve formě aerosolu. Takové nebulizátory jsou komerčně dostupné a zahrnují například nebulizátor Ultraven (Mallinckrodt Inc., St. Louis, MO) a nebulizátor Acorn II.(Marguest Medical Products, Englewood, CO). Viz též nebulizátor popsaný v publikaci VO 93/00951 a zařízení pro dodávání vodných prostředků ve formě aerosolu popisovaných v US patentu č.
544 64 6, který se zde zahrnuje formou odkazu.
HSA prosté farmaceutické prostředky s obsahem IFN-β podle tohoto vynálezu jsou stabilizované kompozice. Pojem stabilizované znamená kompozice, které uchovávají polypeptid IFN-β v jeho v podstatě monomerním stavu v průběhu skladování, takže terapeutická účinnost tohoto polypeptidu není ohrožená následkem tvorby agregátů.
Pojem v průběhu skladování uvažuje, že se kapalný farmaceutický prostředek či kompozice po přípravě nepodává ihned.—pacientovi. Spíše se podává po balení přípravku pro skladování buď v kapalné formě nebo ve zmrazeném stavu nebo v sušené formě pro další rekonstituci na kapalnou formu nebo jinou formu vhodnou pro podávání pacientovi. Stabilita se • 9
9
9
-189 99 99
9 9 9
9 9 9
999 999
9 9 9
999 99 ·9 dosahuje bez přítomnosti HSA jako stabilizačního a solubilizačního prostředku. Přednostně se kompozice podle tohoto vynálezu uskladňují přímo v jejich kapalné formě pro plné využití vhodnosti skladovací stability v kapalné formě, pro snadnost podávání bez rekonstituce a možnost dodávat přípravek v předem naplněných injekčních stříkačkách připravených pro použití nebo ve formě vícedávkových preparátů, pokud je formulace kompatibilní s bakteriostatickými prostředky. Stabilizované kompozice s obsahem IFN-β prosté HSA podle tohoto vynálezu mají přednostně dobu použitelnosti alespoň 6 měsíců, 12 měsíců, 18 měsíců, přednostněji alespoň 20 měsíců a ještě lépe alespoň 22 měsíců, nejlépe alespoň 24 měsíců při ukládání při teplotách 2 až 8 °C.
Způsoby sledování stability HSA prostých farmaceutických prostředků s obsahem IFN-β podle tohoto vynálezu jsou dostupné v oboru včetně těch způsobů, které se popisuj i v příkladech níže. Proto lze tvorbu agregátu IFN-β v průběhu skladování kapalného farmaceutického prostředku podle tohoto vynálezu snadno stanovit měřením změny rozpustného IFN-β v roztoku v průběhu času. Množství rozpustného polypeptidu v roztoku lze vyjádřit kvantitativně řadou analytických rozborů přizpůsobených pro detekci IFN-β. Tyto rozbory zahrnují například vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s reverzními fázemi a absorbční spektroskopii v ultrafialovém světle, jak se popisují v příkladech níže. Stanovení rozpustných i nerozpustných agregátů v průběhu skladování v kapalných prostředcích lze provádět například analytickou ultracentrifugací, jak se popisuje v příkladech níže pro ro-ziriš-ení podílu rozpustného polypeptidu přítomného ve formě rozpustných agregátů a podílu, který je přítomný v neagregované biologicky aktivní molekulové formě.
-199 99 99 9 ·9 9
9 9 9 9 99 999
999 99 9 9999
999 999 9999 9999
9999 999
999 99 99 999 99 9
Stabilizované farmaceutické prostředky podle tohoto vynálezu obsahují IFN-β a jejich varianty. Pojem IFN-β, jak se zde používá, se týká IFN-β nebo jeho variant, které se někdy nazývají polypeptidy typu IFN-β. Lidské varianty IFN-β, které se mohou vyskytovat v přírodě (například allelické varianty, které se vyskytují na místě IFN-β) nebo mohou vznikat rekombinací, mají aminokyselinové sekvence, které jsou stejné, podobné nebo v podstatě podobné sekvenci zralého nativního IFN-β. Fragmenty IFN-β nebo zkrácené formy IFN-β uchovávající svou aktivitu se rovněž uvažují. Tyto biologicky aktivní fragmenty či zkrácené formy IFN-β se tvoří odstraněním aminokyselinových zbytků z aminokyselinové sekvence IFN-β pomocí způsobů rekonbinantní DNA dobře známých v oboru. Polypeptidy IFN-β mohou být glykosylované či neglykosylované, jak se uvádí v literatuře, kde glykosylované i neglykosylované IFN-β vykazují kvalitativně podobné specifické aktivity, takže glykosylové zbytky se neúčastní biologické aktivity IFN-β a 'nepřispívají k ní.
Varianty IFN-β, které se zde uvažují, zahrnují muteiny zralé nativní sekrece IFN-β, kde lze jeden či více cysteinových zbytků, které nejsou nezbytné pro biologickou aktivitu, úmyslně vypustit či nahradit jinými aminokyselinami pro eliminaci míst jejich intermolekulárního příčného spojování nebo nesprávné tvorby disulfidických můstků.' Varianty IFN-β tohoto typu zahrnují ty, které obsahují glycin, valin, alanin, leucin, isoleucin, tyrosin, fenylalanin, histidin, tryptofan, serin, threonin nebo methionin místo cysteinu, který je aminokyselinou 17 ve zralé přirozené aminokyselinové sekvencin—Serin a threonin představují preferovanější náhrady vzhledem k jejich chemické analogii s cysteinem. Serinové substituce jsou nejpreferovanější. V jednom ztělesnění se cystein na místě aminokyseliny 17 zralé přirozené sekvence • 4
4
4
-20444 4 4
4
4 4
44 4 4 nahrazuje serinem. Cystein 17 se též může vypustit způsoby známými v oboru (viz například US patent č. 4 588 584, který se zde zahrnuje formou odkazu) s obdržením zralého muteinu IFN-β, který je o jednu aminokyselinu kratší než zralý nativní IFN-β. Viz též jako příklady US patenty č. 4 530 787, 4 572 798 a 4 588 585. Proto tento vynález též uvažuje varianty IFN-β s jednou či více mutacemi, které zlepšují například jejich farmaceutickou použitelnot.
Ten, kdo má zkušenost v oboru, si uvědomí, že lze zavádět další změny mutací do nukleotidových sekvencí kódujících IFN-β, což vede ke změnám aminokyselinové sekvence IFN-β bez pozměňování biologické aktivity interferonu. Proto lze vytvořit izolovanou molekulu nukleové kyseliny kódující variantu IFN-β o sekvenci, která se liší od aminokyselinové sekvence zralé nativní IFN-β, zavedením jedné či více nukleotidových substitucí, adicí nebo delecí do odpovídající nukleotidová sekvence, která se zde popisuje, jako je tomu v případě jedné či více aminokyselinové substituce, adice či delece zaváděné do kódovaného IFN-β. Mutace lze zavádět standardními způsoby, jako je mutagenéza zaměřená na místo a mutagenéza zprostředkovaná v PCR. Tyto varianty IFN-β se rovněž uvažují v tomto vynálezu.
Například lze provést konzervativní aminokyselinové substituce na jednom či více předem určených přednostně neesenciálních, aminokyselinových zbytků. Neesenciální aminokyselinový zbytek je zbytek, který se může pozměnit oproti sekvenci IFN-β přirozeného typu bez změny biologické
'esenciální aminokyselinový zbytek se vyžaduje pro zajištění biologické aktivity. Konzervativní aminokyselinová substituce je taková, při které se aminokyselinový zbytek nahrazuje aminokyselinovým zbytkem s podobným
-2199 99 * • · · · ·· • · · · ·
999 9 9 9 · • · · ·
99 99 999 postranním řetězcem. Skupiny aminokyselinových zbytků s podobnými postranními řetězci se definují v oboru. Tyto skupiny zahrnují aminokyseliny s bazickými postranními řetězci (například lysin, arginin, histidin), s kyselými postranními řetězci (například kyselina aspartová, kyselina glutamová), polárními postranními řetězci bez náboje (glycin, asparagin, glutamin, serin, threonin, tyrosin, cystein), nepolárními postranními řetězci (alanin, valin, lučin, isoleucin, prolin, fenylalanin, methionin, tryptofan), beta-rozvětvenými postranními řetězci (například threolin, valin, isoleucin) a aromatickými postranními řetězci (například tyrosin, fenylalanin, tryptofan, histidin). Tyto substituce by nešlo provést pro zachované aminokyselinové zbytky nebo pro aminokyselinové zbytky zůstávající v rámci konzervovaného motivu.
Aternativně lze provést sekvence varianty IFN-β nukleotidu zavedením mutací náhodně podél celé kódovací sekvence IFN-β nebo podél její části, jako je tomu saturační mutagenézí a lze provést screening výsledných mutantů ohledně biologické aktivity IFN-β pro identifikaci mutantů zachovávající aktivitu. Po mutagenezi lze exprimovat kódovaný protein rekombinantně a aktivitu proteinu lze stanovit standardními způsoby analýzy, které se zde popisují.
Biologicky aktivní varianty IFN-β mají obecně alespoň 80 %, přednostněji zhruba 90 % až zhruba 95 % nebo více a nejlépe zhruba 96 % až zhruba 99 % identity aminokyselinové sekvence s aminokyselinovou sekvencí zralého nativního IFN-β, který sl-onží j-ako-základ srovnání. Sekvenční identita uvažuje stejné aminokyselinové zbytky přítomné ve va-riantě polypeptidu a v polypeptidové molekule sloužící jako referenční složka, jestliže se daný souvislý úsek aminokyse»0 0
0 · 0 • ·« ··
0 • 0 0
-22• ·· ·· ·· · · «00 • · · · · « ··· · · · * · · ·
0*0 00 ·· · línové sekvence varianty přiřadí a srovnává s aminokyselinovou sekvencí referenční molekuly.
Pro účely optimálního přiřazení dvou sekvencí pro stanovení identity sekvence může mít souvislý segment aminokyselinové sekvence varianty přídavné aminokyselinové zbytky nebo vypuštěné aminokyselinové zbytky oproti aminokyselinové sekvenci referencí molekuly. Souvislý segment použitý pro srovnání s referenční aminokyselinovou sekvencí obsahuje alespoň 20 souvislých aminokyselinových zbytků. Korekce na zvýšenou sekvenční identitu související se zařazením mezer do sekvence aminokyselin varianty lze zavést přidělením trestných bodů za mezeru (gap penalty). Způsoby přiřazení sekvence jsou dobře známé v oboru.
Proto lze stanovení procenta identity mezi kterýmikoli dvěma sekvencemi provést pomocí matematického algoritmu. Jeden neomezující případ matematického algoritmu užívaného pro srovnání sekvencí je algoritmus Myersa a Millera, Comput. Appl. Biosci. 4, 11-17 (1988) . Takový algoritmus se používá v programu ALIGN (verze 2.0), který je částí souboru programového vybavení pro přiřazení GCG. Tabulku zbytku hmotnosti PAM120, vody pro délku mezery 12 a vody pro délku mezery 4 lze použít s programem ALIGN při srovnání aminokyselinových sekvencí. Dalším preferovaným neomezeným příkladem matematického algoritmu pro použití při srovnání dvou sekvencí je algoritmus Karlina a Altschula, Proč. Nati. Acad. Sci. USA 90, 5873-5877 (1990) a modifikovaný algoritmus Karlina a Altschula, Proč. Nati, Acad. Sci USA 90, 5873-5877 (1993). Tento- algoritmus—se tnkorporuj e do programu NBLAST a XBLAST Altchula a kol., J. Mol. Biol. 215, 403-410 (1990). Hledání aminokyselinové sekvence BLAST lze provést programem XBLAST, skóre = 50, délka slova = 3 pro obdržení aminokyselinové * · φ • · · · V
9
sekvence podobné danému polypeptidu. Přiřazení s mezerami pro účely srovnávání, BLAST s mezerami, lze použít, jak popisuje Altschul a kol, Nucleic Acids Res. 25, 3389-3402 (1997). Alternativně lze použít PSI-BLAST pro provedení integrovaného vyhledávání, které detekuje vztahy vzdáleností mezi molekulami. Viz Altschul a kol (1997) výše. Při použití programu BLAST,BLAST s mezerami nebo programu PSI-BLAST lze použít parametry standardního nastavení. Viz též program ALIGN [Dayhoff. (1978) v Atlas Protein Sequence a Structure 5, Suppl. 3, National Biomedical Research Foundation, Washington, D. C.] a programy v souboru Wisconsin Sequence Analysis Package, Verse 8 (od Genetics Computer Group, Madison, Wisconsin), například program GAP, kde se používají parametry standartního nastavení programů.
Při úvaze nastavení procenta aminokyselinové frekvenční identity se mohou některé polohy aminokyselinových zbytků lišit následkem konzervativních aminokyselinových substitucí, které neovlivňují vlastnosti proteinové funkce. V těchto příkladech se může procentická sekvenční identita upravit směrem vzhůru, aby se vzala v úvahu podobnost konzervativně substitovaných aminokyselin. Tyto úpravy jsou dobře známy v oboru. Viz například Myers a Miller, Comput. Appl. Biosci. 4, 11-17 (1988) .
Biologicky aktivní varianty IFN-β zahrnuté do tohoto vynálezu též zahrnují polypeptidy IFN-β kovalentně spojené například s polyethylenglykolem (PEG) nebo albuminem. Kovalentní hybridní molekuly IFN-β mají určité žádoucí farmaceutické^vl-crstrro-sti, jako je například prodloužený poločas v krevním séru po podání pacientovi. Způsoby tvorby aduktů PEG-IFN zahrnují chemickou modifikaci monomethoxypolyethylenglykolu pro vytvoření aktivované sloučeniny, která • ·
-24• φ .· ·
bude reagovat s IFN-β. Způsoby tvorby a použití polypeptidů spojených s PEG se popisují například v Delgado a kol, Crit. Rev. Ther. Drug. Carrier Syst. 9_, 249-304 (1992) . Způsoby tvorby albuminových hybridních polypeptidů zahrnují spojení kódovacích sekvencí pro daný polypeptid (IFN-β) a albuminu a popisují se v US patentu 5 876 969, který se zde zahrnuje formou odkazu.
Biologicky aktivní varianty IFN-β uvažované v tomto vynálezu by měly zachovávat aktivity IFN-β, zejména schopnost vazby na receptory IFN-β. V některých ztělesněních varianta IFN-β zachovává alespoň 25 %, alespoň 50 %, alespoň 75 %, alespoň 85 %, alespoň 90 %, alespoň 95 %, alespoň 98 %, alespoň 99 % nebo více biologické aktivity polypeptidů, jejichž aminokyselinové sekvence znázorňuje obrázek 1 nebo 2. Varianty IFN-β, jejichž aktivita se zvyšuje ve srovnání s aktivitou polypeptidů znázorněnou na obrázku 1 nebo 2 se rovněž uvažují. Biologickou aktivitu variant IFN-β lze měřit jakýmkoliv způsobem známým v oboru. Příklady těchto analýz uvádí Fellous a kol., Proč. Nati. Acad. Sci USA 79, 3082-3086 (1982) Czerniecki a kol., J. Virol. 49 (2),490-496, (1984),
Mark a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA 81, 5662-5666 (1984), Branca a kol., Nátuře 277, 221-223 (1981), Williams a kol., Nátuře 282, 582-586 (1979), Herberman a kol., Nátuře 277, 221-223 (1979), Anderson a kol., J. Biol. Chem. 257 (19), 11301-11304 (1982) a rozbor účinnosti IFN-β, který se zde popisuje (viz příklad 2).
IFN-β v prostředku podle tohoto vynálezu může pocházet od
druhu včetně, avšak bez omezení, druhů ptáků, psa, skotu, vepře, koně a člověka. Přednostně pochází IFN-β od savčích druhů, kdy se přípravek používá při léčbě poruchy savčího IFN-β a přednostněji pochází od savce « · • · · • · · · · · · « ·
-25• ·
téhož druhu, jako je savec, který se podrobuje léčbě takové poruchy. Proto tam, kde je savcem, který se podrobuje léčbě, člověk, se subjektu přednostně podává HSA prostý farmaceutický prostředek obsahující v podstatě monomerní lidský IFN-β nebo jeho biologicky aktivní variantu.
Neomezující příklady polypeptidů IFN-β a polypeptidů varianty IFN-β uvažovaných v tomto vynálezu popisuje Nagat a kol., Nátuře 284, 316-320 (1980), Goeddel a kol., Nátuře 287, 411-416 (1980), Yelverton a kol., Nucleic Acids Res. 9, 731-741 (1981), Streuli a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. U. S. A. 78,2848-2852 (1981), EP028033B1 a EP109748B1. Viz též US patenty č. 4 518 584, 4 569 908, 4 588 585, 4 738 844, 4 753 795, 4 769 233, 4 793 995, 4 914 033, 4 959 314, 5 545 723, a 5 814 485. Tyto popisy se zde zahrnují formou odkazu. Tyto citace též poskytují vodítko ohledně zbytků a oblastí polypeptidu IFN-β, které se mohou pozměnit bez ztráty biologické aktivity.
V jednom ztělesnění tohoto vynálezu je IFN-β v rámci stabilizovaných farmaceutických formulací zralým nativním polypeptidem IFN-β. V dalším ztělesnění je IFN-β v těchto formulacích zralým polypeptidem IFN-β, ve kterém se cystein na místě aminokyseliny 17 zralé nativní sekvence nahradí serinem, jak se diskutuje výše. Avšak tento vynález zahrnuje další ztělesnění, ve kterých IFN-β v rámci stabilizované farmaceutické formulace je kterýkoliv biologicky aktivní polypeptid IFN-β nebo jeho varianta, jak se zde jiným způsobem popisuje.
V některých ztělesněních tohoto vynálezu se tvoří
IFN-β rekombinantně. Jako rekombinantně vytvořený IFN-β se uvažuje IFN-β, který má srovnatelnou biologickou aktivitu se
-26» « · · · · • *** ® · « « • · · · · • ·· a« »· »· • · · · • · ···· • · £ ♦ · * zralým nativním IFN-β a který se připraví způsoby rekombinantní DNA. IFN-β lze vytvořit pěstováním hostitelských buněk transformovaných expresním vektorem obsahujícím nukleotidovou sekvenci, která kóduje polypeptid IFN-β. Hostitelská buňka je taková, která přepisuje nukleotidovou sekvenci a poskytuje požadovaný protein a může být prokaryotní (například, E. coli) nebo eukaryotní (například buňka kvasinky, hmyzu nebo savce). Příklady rekombinantní tvorby IFN-β popisují Mantei a kol., Nátuře 297, 128 (1982), Ohno al. a kol., Nucleic Acids Res. 10, 967 (1982), Smith a kol., Mol. Cell. Biol. 3, 2156 (1983) a US patenty č. 4 462 940, 5 702 699 a 5 814 485, které se zde zahrnují formou odkazu. Geny lidského interferonu se klonují s použitím způsobu rekombinantní DNA (rDNA) a exprimují se v E. coli [Nagola et al. Nátuře 284, 316 (1980), Goeddel a kol., Nátuře 287, 411 (1980), Yelverton a kol., Nucl. Acid Res. 9_ 731 (1981), Streuli a kol., Proč Nati. Acad. Sci U. S. A. TQ, 2848 (1981)]. Alternativně lze vytvářet IFN-β transgenním živočichem či rostlinou, u kterých se zajistí způsoby genetického inženýrství exprese daného IFN-β proteinu v souladu se způsoby známými v oboru.
Proteiny či polypeptidy vykazující vlastnosti typu nativního intereronu-β lze též tvořit technologií rDNA extrakcí poly-A-rich 12S messengerové mRNA z virově indukovaných lidských buněk, syntézou cDNA s dvojitou šroubovicí při použití mRNA jako templátu, zavedením cDNA do příslušného klonovacího vektoru, transformací vhodných mikroorganismů vektorem, sbíráním těchto mikroorganismů a expresí interferonu β. Viz například evropská patentová vyhláška č. 28033 (vydaná 6 .- května^-1-9-8-14-,—32134 (vydaná 15. července 1981) a 34307 (vydaná 26. srpna 1981) popisující různé způsoby tvorby ínterferonu β-rDNA.
« · β · · • 0 »♦·
0»
-27• *· ·· «· · · t ♦ * · · 1 · ί··· · · ♦ * * * «·· ·« *»
Alternativně lze IFN-β připravit chemicky kterýmkoliv z několika způsobů známých těm, kteří mají zkušenost v oboru peptidů. Viz například Li a kol., Proč. Nati. Acad.Sci. USA 80, 2216-2220 (1983), Steward a Young (1984) Solid Phase Peptide Synthesis (Pierce Chemical Company, Rockford,
Illionis) a Barany a Merrifield (1980) The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, red. Gross a Meinhofer, díl 2 (Academie Press, New York, 1980), str. 3-254, diskutující způsoby přípravy peptidů v tuhé fázi a Bodansky (1984) Principles of Peptide Synthesis (Springer-Verlag, Berlin) a Gross a Meinhofer, red. (1980) The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, díl 1 (Academie Press, New York), diskutující klasickou přípravu v roztoku. IFN-β lze též chemicky připravit způsobem v současné přípravy více peptidů. Viz například Houghten, Proč. Nati. Acad. Sci. USA 82 , 5131-5135 (1984), a US patent č. 4 631 211.
Rekombinantně získaný IFN-β pro použití pří přípravě stabilizovaných farmaceutických prostředků s obsahem IFN-β prostých HSA podle tohoto vynálezu lze obdržet a purifikovat kterýkoliv způsobem známým tomu, kdo má zkušenost v oboru.
Tyto způsoby zahrnují způsoby popsané v US patentech č 4 462 940 a 5 702 699, které se zde zahrnují formou odkazu. Tyto způsoby získávají interferon v čisté formě IFN-β, která má tendenci k vytváření agregátů za nepřítomnosti SDS, který se používá jako solubilizační prostředek. Dále tyto způsoby vystavují protein vysokému pH, které může nepříznivě ovlivnit biologické vlastnosti proteinu a vést k prostředkům obsahujícím zbytková množství SDS použitého pro solubilizaci proteinu v průběhu purifikace. Pboto, i když lze těmito způsoby obdržet IFN-β, přednostně se získává a purifikuje zlepšeným způsobem popsaným v provizorní přihlášce nazvané Improved Method of Protein Purification and Recovery podané 27. října 2000 • · · 1 • 9 9 • 999 9
9 < · 9 9 9
9 » ♦ · · ·
9*9 9 · · • * · · « ·» • · ·
O · <
9 9 9
9 99999
9_ 9 • · » s číslem US přihlášky 60/243 965, v provizorní přihlášce nazvané Improved Method of Protein Purification and Recovery podané 9. dubna 2001 s číslem US přihlášky 60/282 607 a v provizorní přihlášce podané současně nazvané Method of
Protein Purification and Recovery s číslem US přihlášky _, jejichž obsah se zde zahrnuje jako celek formou odkazu.
V těchto současně projednávaných a současně podaných přihláškách se popisují dva zlepšené způsoby purifikace a získávání IFN-β. První z těchto způsobů purifikace a získávání zahrnuje srážení v podstatě purifikovaného IFN-β alkoholem, jako je některý alifatický alkohol a rozpuštění vysráženého IFN-β do guanidin-hydrochloridu. Výsledný roztok se poté zředí do příslušného pufru pro renaturaci proteinu. Druhý z těchto způsobů purifikace a získávání vynechává krok srážení. Tímto způsobem se vzorek obsahující v podstatě purifikovaný IFN-β smísí s guanidin-hydrochloridem s vytvořením roztoku, který obsahuje solubilizovaný IFN-β, tento roztok se poté zředí do příslušného pufru pro renaturaci proteinu. Při obou způsobech se roztok obsahující renaturovaný IFN-β poté filtruje nebo dialyzuje do pufru užívaného pro farmaceutické účely. Při použití pro přípravu HSA prostého farmaceutického prostředku podle tohoto vynálezu se purifikovaný renaturovaný IFN-β protein díafiltruje nebo dialyzuje do prostředku o nízké iontové síle podle tohoto vynálezu, jak popisuje příklad 8 níže.
Prostředky uvažované v tomto vynálezu mohou mít od nízkých koncentracích zhruba 0,01 mg/ml IFN-β až do zhruba 20,0 mg/ml IFN-β (hmotnost/objemem). V různých ztělesněních jsou knncpnt-.racpí TFN-β od zhruba 0,01 mg/ml do zhruba 20 mg/ml, od zhruba 0,015 mg/ml do zhruba 12,5 mg/ml, od zhruba 0,025 mg/ml do zhruba 10,0 mg/ml, od zhruba 0,05 mg/ml do zhruba 8,0 mg/ml, od zhruba 0,075 mg/ml do zhruba 6,0 mg/ml, • fcfc fcfc · fcfc • fcfc · · fcfcfc * · fc fc • fcfcfc
-29od zhruba 0,1 mg/ml do zhruba 4,0 mg/ml, od zhruba 0,125 mg/ml do zhruba 2,0 mg/ml, od zhruba 0,175 mg/ml do zhruba
1,0 mg/ml, od zhruba 0,2 mg/ml do zhruba 0,5 mg/ml, od zhruba
0,225 mg/ml do zhruba 0,3 mg/ml a zhruba 0,25 mg/ml.
V některých ztělesněních prostředky podle tohoto, vynálezu obsahují farmaceuticky přijatelný nosič. Pojem farmaceuticky přijatelný nosič znamená, že je to nosič, který se konvenčně používá v oboru pro usnadnění skladování, podávání a/nebo zlepšení léčivého účinku terapeutických složek. Nosič může též snižovat vedlejší nežádoucí účinky IFN-β. Vhodný nosič by měl být stabilní, to jest neschopný reakce s dalšími složkami v prostředku. Neměl by vytvářet významné místní či systémové nepříznivé účinky u příjemce při dávkách a koncentracích používaných při léčbě. Tyto nosiče jsou obecně známé v oboru. Vhodné nosiče pro tento vynález jsou ty, které konvenčně používají velké stabilní makromolekuly, jako je želatina, kolagen, polysacharid, monosacharidy, polyvinylpyrrolidon, kyselina polymléčná, kyselina polyglykolová, polymerní aminokyseliny, fixované oleje, ethyl-oleát, liposomy, glukosu, laktosu, mannosu, dextrosu, dextran, celulosu, sorbitol, polyethylenglykol apod. Mohou být též vhodné nosiče pro pomalé uvolňování, jako je kyselina hyaluronová. Viz zejména Přiseli a kol., Int. J. Pharmaceu. 85, 51-56 (1991), a US patent č. 5 166 331.
Farmaceutický prostředek může navíc obsahovat solubilizační prostředek nebo prostředek pro zvýšení rozpustnosti, který přispívá k rozpustnosti proteinu mimo zvýšení rozpustnosti, kter-é—sa_obdrží použitím prostředků o nízké iontové síle, které se zde popisují. Sloučeniny obsahující guanidinovou skupinu, nejlépe arginin, jsou vhodnými prostředky pro zvýšení rozpustnosti IFN-β. Příklady takových
-30φ · · « > * φφφ ♦ · * · · · · * * · • ··♦ ΦΦΦ · • · Φ · * ··· ΦΦ ♦> · · látek zvyšujících rozpustnost zahrnují aminokyselinu arginin, stejně tak jako aminokyselinové analogy argininu, které uchovávají schopnost zvyšovat rozpustnost IFN-β. Tyto analogy zahrnují bez omezení bipeptidy a tripeptidy obsahující arginin. Další vhodné solubilizační prostředky se diskutují v US patentech č. 4 816 440, 4 894 330, 5 004 605, 5 183 746, 5 643 566 a práci Wang a kol., J. Parenteral Drug Assoc. 34, 452-4 62 (198 0) , a tyto publikace se zde zahrnují formou odkazu.
Navíc k prostředkům popisovaným výše lze přidávat další stabilizační prostředky jako je kyselina ethylendiamintetraoctová (EDTA) nebo jedna z jejich solí, jako je dvoj sodná sůl EDTA, pro další zvýšení stability kapalných farmaceutických prostředků. Edta působí zachycování kovových iontů, o kterých je známo, že katalyzují mnohé oxidační reakce, čímž zajišťuje přídavný stabilizační účinek. Jiné vhodné stabilizační prosředky zahrnují neiontové povrchové aktivní látky včetně polyoxyethylensorbitolesterů, jako je polysorbát 80 (Tween 80) a polysorbát 20 (Tween 20) ,polyoxypropylenpolyoxyethylenové estery, jako je Pluronic F68 a Pluronic F127, polyoxyethylenalkoholy, jako je Brij 35, simethikon, polyethylenglykol, jako je PEG400, lysofosfatidylcholin a polyoxyethylenptercoktylphenol, jako je Triton X-100. Klasická stabilizace farmaceutických látek povrchově aktivními látkami se popisuje například v Levine a kol., J. Parenteral Sci. Technol. 45, (3) 160-165 (1991) a tato práce se zde zahrnuje formou odkazu.
Farmaceut icky-úfiÍTOTé^-množství stabi 1 i zovaného kapalného HSA prostého prostředku s obsahem IFN-β podle tohoto vynálezu nebo rekonstituovaný stabilizovaný lyofilizovaný HSA prostý prostředek s obsahem IFN podle · 9 » 9 «
9 9 9
99999
9 9 * 9 *
-319 · · · · • 99 9 9 ·
9 9 «9 • 99999 ·
9 9 9
499 99 · * 9 tohoto vynálezu se podává pacientovi. Pojem farmaceuticky účinné množství znamená množství, které je použitelné při léčení, prevenci, či diagnóze choroby či stavu. Obvyklé cesty podávání zahrnují, avšak bez omezení, perorální podávání, nosní podávání, plicní podávání a parenterální podávání včetně transdermálního, intravenózního, intramuskulárního, subkutáního, intraarteriálního a intraperitoneálního injekčního či infuzního podávání. V jednom takovém ztělesnění se podává injekcí, přednostně subkutánní injekcí. Injekční formy prostředku podle tohoto vynálezu zahrnují, avšak bez omezení, roztoky, suspenze a emulze. Obvykle obsahuje terapeuticky účinné množství IFN-β zhruba 0,01 /zg/kg až zhruba 5 mg/kg prostředku, přednostně zhruba 0,05 /zg/kg až zhruba 1000 /zg/kg, přednostněji 0,1/zg/kg až zhruba 500 ^g/kg, ještě přednostněji zhruba 0,5 Mg/kg až zhruba 3 0 gg/kg.
V jednom ztělesnění se stabilizovaní HSA prostý farmaceutický prostředek obsahující v podstatě monomerní IFN-β formuluje v jednotkové dávce a může být v injekční či infuzní formě ve formě roztoku, suspenze nebo emulze. Dále se může skladovat zmrazený či připravený v suché formě, jako je lyofilizovaný prášek, který se může rekonstituovat do kapalného roztoku, suspenze či emulze před podáním kterýmkoliv z různých způsobů včetně perorálních nebo parenterálních způsobů podávání. Stabilizovaný farmaceutický prostředek se může sterilizovat membránovou filtrací a ukládá se v nádobkách pro jednotkovou dávku či více dávek, jako jsou uzavřené lahvičky či ampule. Další způsoby přípravy farmaceutického prostředku obecně známé v oboru lze použít pro další zvýšení stabiidTtyypřir-skďadování farmaceutických prostředků, které se zde popisují bez nepříznivého ovlivnění prospěšných účinků popisovanými stabilizačními prostředky. Podrobná diskuse formulace a volby farmaceuticky přijatelných • · · ·
-32• ·· ·· · *· ·· 0 · 0 · ·· · · • ♦ · ·· * . * * • 000 0 · · · · » ♦ «· ·» ··· ·* nosičů stabilizačních prostředků atd. se popisuje v Remington* s Pharmaceutical Sciences (1990) (18. vydání, Mack
Publishing Company, Eaton, Pennsylvania) a zde se zahrnuje formou odkazu.
Formulace obsahující účinné množství farmaceutických prostředků podle tohoto vynálezu s obsahem β-interferonu (IFN-β) nebo jeho varianty, jako je mutein lidského IFN-β (hIFN-β), označovaný hIFN-fiserl7, jsou použitelné při diagnostice, prevenci a léčení (lokálním či systémovém) klinických indikací, které reagují na terapii tímto polypeptidem. Tyto klinické indikace zahrnují například poruchy či choroby centrálního nervového systému, mozku a/nebo míchy včetně Alzheimerovy choroby, Parkinsonovy choroby, Lewyho demence, mnohočetné sklerózy, epilepsie, mozečkové ataxie, progresivní supranukleární palsy, amyotrofní laterální sklerózy, afektivních poruch, úzkostných poruch, obsedantně kompulsivních poruch, poruch osobnosti, poruch s nedostatkem pozornosti, poruch s hyperaktivitou a nedostatkem pozornosti, Tourettova syndromu, Tay Sachsovy choroby, Nieman Pickovy choroby a schizofrenie, poškození nervů na základě cerebrovaskulárních poruch a mrtvice v mozku či míše následkem infekcí centrální nervové soustavy včetně meningitidy a HIV, tumoru mozku a míchy a prionového onemocnění, autoimunitních chorob včetně získané nedostatečnosti imunity, revmatické artritidy, psoriázy, Crohnovy choroby, Sjogrenova syndromu, amyotrofní laterální sklerózy a lupusu a karcinomu včetně karcinomu prsu, prostaty, močového měchýře, ledvin a kolonu. Podávání IFN-β nebo jeho muteinu lidem či zvířatům se může provádět ’perorálněv intraperitoneálně, intramuskulárně, subkutánně, intravenózně, intranasálně nebo pulmunálně, podle posouzení lékaře.
-33• · · · » 9 ··· • · Φ · Φ «ΦΦ » Φ Φ
ΦΦΦ ♦ · Φ »Φ·Φ φ ΦΦΦ Φ Φ · φ · φ Φ ΦΦΦΦ φ ΦΦΦΦ ΦΦΦ
ΦΦΦΦΦ Φ* ΦΦΦ ΦΦ Φ
Tento vynález poskytuje způsoby zvyšování rozpustnosti interferonu-β (IFN-β) nebo jeho aktivní varianty ve farmacitickém prostředku za nepřítomnosti lidského serumalbuminu. Tento způsob zahrnuje přípravu prostředku o nízké iontové síle, jak se zde popisuje na jiném místě, takovým způsobem, že se pH prostředku udržuje na zhruba pH 3,0 až zhruba pH 5,0 a zavedení IFN-β nebo jeho biologicky aktivní varianty do tohoto prostředku. V jednom ztělesnění obsahuje prostředek o nízké iontové síle glycin, kyselinu aspartovou nebo sukcinát sodný jako pufr o koncentracích zhruba 1 mM až zhruba 30 mM, přednostně 2 mM až zhruba 5 mM. Kompozice může dále obsahovat neiontový prostředek pro úpravu osmotického tlaku v množství, které je dostatečné k tomu, aby byl prostředek isotonický s tělesnými kapalinami, jak se zde popisuje na jiném místě.
V jednom ztělesnění se neiontový prostředek pro úpravu osmotického tlaku volí ze skupiny zahrnující trehalosu, sacharosu, mannitol a jejich kombinace. Dále udržováním pH kompozice mezi zhruba 3,0 a 5,0 přednostně 4,0 se umožňuje uchovat většinu IFN-β v monomerním stavu. Tento vynález tedy též poskytuje způsoby přípravy stabilizovaného HSA prostého farmaceutického prostředku s obsahem v podstatě monomerního IFN-β.
Příklady provedení vynálezu
Následující příklady se poskytují jako ilustarace a nikoliv jako omezení.
Tento vynález se uskutečňuje díky lepšímu pochopení vlastností rozpustnost-i—e^-stabi-l-i-ty-IFN-S-lb. Preferované charakteristiky HSA prostých prostředků s obsahem IFN-fi-lb představují rozmezí pH od zhruba 3,0 do zhruba 5,0 a velice nízkou iontovou sílu. Použití podmínek velice nízké iontové
4« *
-34síly v tomto rozmezí pH vede k vyššímu obsahu monomerního
IFN-S-lb a nižšímu obsahu agregovaných složek IFN-S-lb. Tyto podmínky zajišťují rozpustnost a stabilitu IFN-S-lb, které byly dříve nedosažitelné bez použití HSA v prostředku. Rovněž umožňují přípravu prostředků s maximálním obsahem IFN-β-lb.
•44 4 4 444 * · 4· · • 444 · · 4 · «44«
444 44 4> 444 • 4 4 » 4 · ·
4 444·
4 ·
4 ·
IFN-β-lb pro použití v těchto experimentech tvoří E. coli v podstatě tak, jak se popisuje v několika pevných, purifikačních krocích v US patentech č 4 462 940 a/nebo 4 816 400. Znamená to, že se transformované bakterie použijí pro tvorbu IFN-β, hostitelské buňky se zkoncentrují a jejich stěny se naruší s obdržením hrubého materiálu IFN-β-lb.
Takto obdržený hrubý materiál IFN-β-lb má koncentrace 50 mM octanu sodného, 1 mM EDTA, 0,1 % natrium-dodecylsulfátu (SDS) při pH 5,5. Po získání výchozí látky pro měření rozpustnosti a stability popisovaná níže se z hrubého materiálu IFN-β-lb odstraní SDS zpracováním sloupcem G-25 (Pharmacia) v rovnováze s 1,5 mM roztokem hydroxidu sodného při pH větším než 11. Po odebrání ze sloupce G-25 se přidá zhruba 1 desetina objemu 1 M glycinu, pH 3 při rychlém míchání s úpravou na pH zhruba 3. Materiál se ukládá při teplotě 4 °C nebo zmrazený pro následné použití pro měření rozpustnosti a stability.
Příklad 1
Stanovení rozpustnosti IFN-β-lb
Počáteční experimenty se prováděj i pro pochopení rozpustnosti IFN-β-lb za řady podmínek pH, typu pufru a iontové síly. Roztok ΙΡΝ-β-lb (zhruba 0,8 mg/ml IFN-B-lb ve 100 mM roztoku glycinu, pH 3,0) se dialyzuje proti pufru z
-35• 9 · · • 9 ·
9 9 ·
9 9
9« · ♦ · • 9 9 9
99999 • 99 • 9 9 tabulky 1. Výsledky ukazuje obrázek 1. Tyto výsledky ukazují, že rozpustnost ΙΡΝ-β-lb závisí na pH a iontové síle. IFN-β-lb při pH 3,0 zůstává rozpustný při všech koncentracích chloridu sodného do 200 mM. Při pH 4,0 se formulace IFN-β-lb stávají méně rozpustnými, když koncentrace chloridu sodného dosahuje 150 mM. Ve formulacích při pH 5,0 se ΙΡΝ-β-lb stává méně rozpustným při dosažení koncentrace chloridu sodného 100 mM. Při úvaze všech těchto údajů se ukazuje, že ΙΡΝ-β-lb je nejrozpustnější v prostředcích při pH 3,0, méně rozpustný v prostředcích pH 4,0 a nejméně rozpustný při pH 5,0. Tyto údaje též ukazují, že rostoucí iontová síla přípravku (zvyšující se koncentrací chloridu sodného) též snižuje rozpustnost IFN-β-lb.
Výše popsaný pokus dokáže určit podmínky příznivé pro rozpustnost IFN-β-lb, avšak nestanoví mez rozpustnosti při jakýchkoliv daných podmínkách. Následný experiment se provádí po stanovení mezí rozpustnosti IFN-β-lb. Pro maximalizaci rozpustnosti IFN-S-lb se používají prostředky o nízké iontové síle (napřkílad 5 mM pufr bez solí, jako je chlorid sodný).
Po dialýze se ΙΡΝ-β-lb zkoncentruje pro stanovení meze rozpustnosti v daném prostředku. Výsledky těchto pokusů ukazuje obrázek 2. Prostředky o pH 3,0 až 4,0 jsou nejrozpustnější a rozpustnost je nejméně 16 mg/ml. Prostředek o pH 5 je rozpustný do zhruba 8 mg/ml. Prostředky o pH převyšujícím 5,0 jsou rozpustné pouze do zhruba 0,2 mg/ml. Tyto výsledky opět ukazují, že pH má značný účinek na rozpustnost IFN-β-lb. Prostředky o nízké iontové síle při pH 3,0 a pH 4,0 jsou rozpustnější než při pH 5,0. Nad pH 5,0 je IFN-fi-lb v podstatě nerozpustný v prostředcích s ní-zkou iontovou silou.
φ » • φ φ··· tabulka 1
Směsi pro zjištění rozpustnosti IFN-S-lb, pH, typ pufru. a koncentrace chloridu sodného
φ ♦ · φ φ φ φ φ φ « * φφφ · · ·
Pufr pH koncentrace chloridu sodného (mM)
5 mM glycin pH 3 0 mM
5 mM glycin pH 3 50 mM
5 mM glycin pH 3 100 mM
5 mM glycin pH 3 150 mM
5 mM citrát pH 4 0 mM
5 mM citrát pH 4 50 mM
5 mM citrát pH 4 100 mM
5 mM citrát pH 4 150 mM
5 mM acetát pH 4 0 mM
5 mM acetát pH 4 50 mM
5 mM acetát pH 4 100 mM
5 mM acetát pH 4 150 mM
5 mM formiát pH 4 0 mM
5 mM formiát pH 4 50 mM
5 mM formiát pH 4 100 mM
5 mM formiát PH 4 150 mM
5 mM acetát pH 5 0 mM
5 mM acetát pH 5 50 mM
c; mM acetát nH 5 100 mM
5 mM acetát pH 5 150 mM
9 ····
Ι·9
5 mM histidin pH 5 0 mM
5 mM histidin pH 5 50 mM
5 mM histidin pH 5 100 mM
5 mM histidin pH 5 150 mM
5 mM sukcinát sodný pH 5 0 mM
5 mM sukcinát sodný pH 5 50 mM
5 mM sukcinát sodný pH 5 100 mM
5 mM sukcinát sodný pH 5 150 mM
Příklad 2
Analytické ultracentrifugační experimenty
Experimenty zaměřené na rozpustnost mohou stanovit, kolik IFN-S-lb je v roztoku, avšak požadují se další způsoby pro stanovení stavu agregace proteinů. Je důležité stanovit, zda je protein monomerní v dané formulaci a kolik proteinu (pokud je vůbec přítomen) existuje ve vyšších formách jako jsou dimery, trimery atd. Analytická ultracentrifugace je jedním z nej účinejších způsobů pro objasnění stavu agregace proteinu [viz Liu a Shire J. Pharm. Sci. 88, 1237-1241 (1999)]. Provádějí se tři experimenty pro charakterizaci monomerního obsahu několika prostředků IFN-β-lb za použití analytické ultracentrifugace. Tyto analytické ultracentrifugační experimenty se provádějí s různými prostředky s IFN-β-lb. Každý experiment zahrnuje společnou formulaci (5 mM glycin, pH 3,0). Avšak každá z těchto obecných formulací se mírně liší v procentickém obsalw^monomexu—(obrázek 3 - 89,8 %, obrázek 6 - 94,2 %, obrázek 9 - 86,3 %). Způsoby získávání a purifikace používané pro přípravu těchto IFN-B-lb poskytují stejnou agregaci molekuly IFN-B-lb, která je svou • 9
9·9·
-38999 9 9
9 povahou kovalentní. Prostředek o koncentraci 5 mM glycinu, pH
3,0 tedy pro každý experiment slouží jako výchozí směs pro množství agregátu na počátku experimentu.
První experiment zjišťuje účinek pH na stav agregace IFN-β-lb. Formulace o pH 3,0 (obsahující pouze 5 mM glycin pro pufrování roztoku), pH 4,0 (obsahující pouze 5 mM kyselinu aspartovou pro pufrování roztoku) a pH 5,0 (obsahující pouze 5 mM sukcinát sodný, pro pufrování roztoku) se analyzují. Výsledky ukazují obrázky 3, 4 a 5. Hlavní vrcholy v těchto profilech odpovídají molekulové hmotnosti zhruba 20 kDa, což je velice blízké molekulové hmotnosti IFN-β-lb (19,878 kDa). Hlavní vrchol tedy odpovídá monomeru IFN-β-lb. Větší složky (dimery, trimery, atd.) odpovídají vyšším sedimentačním koeficientům. Tyto výsledky ukazují, že i když je IFN-β-lb hlavně monomerní při pH 3,0 a pH 4,0 (zhruba 90 %), při pH 5,0 začíná molekula agregovat na vyšší složky a pouze 75 % je v monomerní formě. Tyto výsledky ukazují, že stav agregace IFN-β-lb ovlivňují změny pH a že monomer IFN-β-lb je zvýhodněný při nízkých pH, jako je pH 3,0 a pH 4,0.
Druhý experiment zjišťuje účinek iontové síly na stav agregace IFN-β-lb. Iontová síla prostředku se zvyšuje v prostředcích při pH 3,0 (pufrovaných 5 mM glycinem) s přídavkem 0,50 mM a 150 mM chloridu sodného. Výsledky ukazují obrázky 6, 7 a 8. V prostředku bez přídavku chloridu sodného (obrázek 6), tvoří monomerní forma IFN-β-lb zhruba 94 % z celkového IFN-β-lb (to jest 94 % v hlavním vrcholu). Při přidání chloridu sodného 50 mM do přípravku klesá obsah monomeru na zhruba 76 % (obrázek 7) a při přídavku 150 mM chloridu sodného do přídavku klesá obsah monomeru na méně než 10 % (obrázek 8). Tyto výsledky ukazují, že agregační stav
-39IFN-fi-lb silně závisí na iontové síle a že monomer ΙΡΝ-β-lb je zvýhodněný za podmínek nízké iontové síly.
·* ·
9 9
9*9
99999
Žádanou vlastností injekčního farmaceutického prostředku je, aby byl isotonický s tělesnými tekutinami.
Iontové substance (jako je chlorid sodný) a neiontové substance (jako jsou cukry, sacharosa a trehalosa) lze použít pro přípravu prostředku isotonického s tělesnými tekutinami. Dřívější analytické ultracentrifugační experimenty zkoumaly přípravky, které byly buď neisotonické (obsahující pouze pufr 5 mM) nebo obsahovaly chlorid sodný jako iontový prostředek pro úpravu osmotického tlaku. Třetí experiment zkoumá účinek neiontových prostředků pro úpravu tlaku na agregační stav IFN-β-lb. V tomto experimentu se připravují tři formulace při pH 3,0 (pufrované 5 mM glycinem). Jedna obsahuje pouze glycinový pufr, druhá má upravený osmotický tlak 9 % sacharosy a třetí 9 % trehalosy. Analytické ultracentrifugační výsledky ukazují obrázky 9, 10 a 11. Obsah monomeru prostředku se samotným pufrem (obrázek 9) je zhruba 86 %. Při přidání buď sacharosy (obrázek 10) nebo trehalosy (obrázek 11) jako prostředku pro úpravu osmotického tlaku je obsah monomeru zhruba 89 %. Tyto výsledky ukazují, že neiontové prostředky pro úpravu osmotického tlaku, jako je sacharosa a trehalosa, nepodporují agregaci molekuly ΙΡΝ-β-lb.
Přiklad 3
Stabilita lyofilizovaných prostředků s obsahem IFN-S-lb prostých HSA za zrychlených podmínek působení teploty
HSA prosté formulace ΙΡΝ-β-lb při pH 3,0 (5 mM glycin jako pufr) a pH 4,0 (5 mM aspartová kyselina jako pufr) s obsahem buď 9 % trehalosy (pH 3,0 a pH 4,0) nebo 9 %
-40sacharosy (pH 4,0) se lyofilizují. Lyofilizované formulace se poté uchovávají při teplotě 40 °C a jejich stabilita se měří v průběhu 8 týdnů. Sacharosa a trehalósa jsou obvykle stabilizační prostředky používané v lyofilizovaných směsích. Hladina 9 % těchto látek se používá tak, aby rekonstituovaná formulace byla isotonická s tělesnými tekutinami. Pro minimalizaci iontově síly formulací a tedy množství agregovaného IFN-β-lb se množství pufru udržuje na minimální hladině. Proto mají všechny pufry koncentraci 5 mM.
Obvyklé podmínky uchovávání pro proteinové farmaceutické přípravky jsou často 5 °C. Avšak zrychlené podmínky působení teploty se často používají při studiích prostředků pro zvýšení rychlosti degradace konkrétního prostředku, takže lze relevantní údaje o stabilitě obdržet v kratším časovém období. V tomto experimentu se používá teplota 40 °C pro nucenou degradaci IFN-B-lb ve formulacích prostých HSA. Výsledky koncentračních měření a analýza vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s reverzními fázemi znázorňují obrázky 12 a 13. Tyto výsledky ukazují, že dokonce ani při zvýšených teplotách nevykazují tyto formulace IFN-β-lb žádné detekovatelné změny v průběhu 8 týdenní studie.
Příklad 4
Stabilita lyofilizovaných prostředků s obsahem IFN-fi-lb prostých HSA za přítomnosti trehalosy za podmínek uchovávání v reálném času
I když se proteinová léčiva obvykle skladují při teplotě 5 °C, je vhodné mít produkt stabilní při teplotě místnosti (25 °C až 30 °C). V tomto experimentu se lyofilizují prostředky s obsahem 9 % trehalosy (5 mM glycin pH 3 nebo • tt tt
-41• tt · · · · · · · • · · · · · · · · ····· · · tt· ····· » · · · · » · tt·· ·· tttttt ·· · mM kyselina aspartová pH 4).. Koncentrace trehalosy 9 % se užívá proto, aby byl rekonstituovaný přípravek isotonický s tělesnými tekutinami. Přípravky se uchovávají při teplotě 5 °C a 30 °C a jejich stabilita se měří v průběhu 9 měsíců. Výsledky koncentračních měření a analýza vysokovýkonnou, kapalinovou chromatografií s reverzními fázemi znázorňují obrázky 14 a 15. Tyto výsledky ukazují, že ani při teplotě 30 °C tyto přípravky s obsahem IFN-S-lb nevykazují detekovatelné změny v průběhu 9 měsíců studie.
Příklad 5
Stabilita kapalných přípravků s obsahem IFN-fi-lb prostých HSA za zrychlených podmínek působení teploty
Stabilita přípravků s obsahem IFN-S-lb prostých HSA při pH 3,0 až 4,0 se rovněž zjišťuje v kapalném stavu. Kompozice přípravků jsou stejné jako v příkladu 3 [9 % trehalosy (pH 3,0 a pH 4,0) nebo 9 % sacharosy pH 4,0]. Pro minimalizaci iontové síly přípravků, čímž se též minimalizuje množství agregovaného IFN-S-lb, se množství pufru udržuje na minimální hladině (5 mM). Kapalné prostředky se ukládají při teplotě 30 °C a jejich stabilita se měří v průběhu 9 týdnů. Obvyklé skladovací podmínky kapalných proteinových prostředků odpovídají teplotě 5 °C. Proto teplota 30 °C představuje zrychlené podmínky vlivu teploty pro zvýšení rychlosti degradace IFN-S-lb. Výsledky na obrázku 16 (měření koncentrací) a 17 (analýza vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s reverzními fázemi) nevykazují žádné detekovatelné změny v přípravcích v průběhu 9 týdnů. Tyto výsledky ukazují, že za těchto podmínek je IFN-S-lb stabilní v průběhu celé studie.
• « • · · • ·· · ·
Přiklad 6
Stabilita kapalných přípravků s obsahem IFN-β-lb prostých HSA za podmínek skladování v reálném času
V tomto experimentu se zkoumají kapalné prostředky obsahující 9 % trehalosy (5 mM glycin, pH 3 nebo 5 mM kyselina aspartová, pH 4) nebo 9 % sacharosy (5 mM glycin, pH 3 nebo 5 mM kyselina aspartová, pH 4) za podmínek reálného času skladování při teplotě 5 °C. Prostředky se plní do lahviček a jejich stability se měří v průběhu 9 měsíců. Výsledky měření koncentrací a analýzy vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s reverzními fázemi znázorňují obrázky 18 a 19. Tyto výsledky ukazují, že v těchto prostředcích je IFN-β-lb stabilní v průběhu 9 měsíců této studie.
Příklad 7
Trehalosa je vhodnější než sacharosa jako neiontový prostředek pro úpravu osmotického tlaku v prostředku IFN-fi-lb
V tomto experimentu se připraví prostředky obsahující 9 % trehalosy (5 mM glycin pH 3 nebo 5 mM kyselina aspartová pH 4) a 9 % sacharosy (5 mM glycin pH 3 nebo 5 mM kyselina aspartová pH 4) a plní se do lahviček v kapalné formě a lahvičky se stejným prostředkem se lyofilizují. Jejich stability se měří za zrychlených podmínek teplotního vlivu, které jsou často schopné poskytnout předpověď rozmezí stability formulací daného proteinu. Kapalné přípravky se ukládají při teplotě 30 °C po dobu 9 týdnů a lyofilizované přípravky při teplotě 40 °C po dobu 8 týdnů. Výsledky koncentračních měření ukazuje obrázek 20 (kapalina) a obrázek 21 (lyofilizovaná látka). Tyto výsledky ukazují, že formulace při pH 3 *
obsahující sacharosu vykazují patrný vzrůst koncentrace.
Tento vzrůst koncentrace je následkem hydrolýzy, sacharosy při nízkém pH s tvorbou redukujících cukrů, která vede k neenzymatickému zhnědnutí (to jest Maillardova reakce) prostředků. Trehalosa je mnohem resistentnější vůči hydrolýze a proto se v těchto prostředcích preferuje před sacharosou [viz 0 Brien Science 61, 679-682 (1996)].
Příklad 8
Odstranění SDS a prostředky obsahující ΙΡΝ-β-lb s použitím vysrážení guanidin-hydrochloridem
Purifikovaný IFN-β-lb (1 litr 1,91 mg/ml v 0,4% SDS, mM acetátového pufru, pH 5,5) se uchovává při teplotě 5 °C. Během uchovávání se část SDS vysráží. 250 ml této látky (477,5 mg) se smísí s 229 g guanidin-hydrochloridu (6 M, celkový objem 400 ml) a míchá při teplotě místnosti po dobu 15 min s použitím míchačky s magnetickou tyčkou. 6 M roztok guanidin-hydrochlorid/protein se poté zfiltruje pomocí SartobranR P Capsule (velikost póru 0,45 /zrn) pro odstranění vysráženého SDS. Koncentrace proteinu podle měření v ultrafialovém světle při vlnové délce 280 nm je 1,02 mg/ml. Výtěžek proteinu je 406 mg neboli 85 %.
400 ml kapaliny zpracované guanidin-hydrochloridem se koncentruje s použitím diafiltračního systému Millipore^ LabscaleR TFF (Millipore, lne.) dvěma polysulfonovými membránami PelliconR XL BiomaxR 0,1 cm^ 10 kD (Millipore, lne.). Objem po tomto zkoncentrování—je37 ml s koncentrací proteinu 10,3 mg/ml pro výtěžek po koncentraci 381 mg neboli 93 %.
Pomocí pipety pro přenos se 10 ml (103 mg) koncentrovaného roztoku guanidin-hydrochlorid/protein postupné přidává do 590 ml 5 mM glycinu, pH 3,2. Pufr se rychle míchá pomocí magnetické tyčky a do vířící kapaliny se přímo přidá roztok proteinu. Toto zředění 60 x 6 M roztoku guanidin-hydrochlorid/protein poskytuje 0,1 M roztok guanidin-hydrochorid/protein při koncentraci 0,17/ml. Těchto 600 ml se přenese do diafiltrační jednotky velikosti 500 ml se dvěma polysulfonovými membránami PelliconR II 10 kD, 0,1 m2. Tento roztok se nejprve zkoncentruje zhruba na 400 ml do koncentrace proteinu 0,23/ml a následně podrobí diafiltraci proti 9 výěnám objemu (3,6 litrů) 5 mM glycinu při pH 3,2. Konečný diafiltrát (402 ml) se měří v ultrafialovém světle při vlnové délce 280 nM pro konečnou koncentraci proteinu 0,23 mg/ml s výtěžkem 92,46 mg, 90 % pro diafiltrační krok a s celkovým výtěžkem 72 % rozpustného proteinu pro proces purifikace.
Příklad 9
Stabilita kapalných prostředků s obsahem IFN-β-lb prostých HSA obsahujících mannitol jako prostředek pro úpravu osmotického tlaku
V tomto experimentu se zkoumaj i kapalné prostředky obsahující 5 mM roztok kyseliny aspartové a 5 % mannitolu za podmínek skladování v reálném času při teplotě 5 °C. Připraví se tři oddělené přípravky (označené přípr. A, přípr. B a přípr. C na obrázcích) z jedné dávky IFN-β-lb prosté HAS a naplní se do lahviček. Lahvičky se poté uchovávají při teplotě 5 °C a stabilita prostředků se měří po dobu 6 měsíců. Výsledky koncentračních měření a analýzy vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií s reverzními fázemi ukazují ·· · • · · · · · • 9 · ··9 ·
9 9
-45obrázky 22 a 23. Výsledky prokazují, že v těchto prostředcích s obsahem IFN-β-lb nenastávají žádné detekovatelné změny v průběhu 6 měsíců studie.
Veškeré publikace a patentové přihlášky citované v popisu odpovídají úrovni znalostí těch, kteří mají zkušenost v oboru, kterým je tento vynález určen. Veškeré publikace a patentové přihlášky se zde zahrnují formou odkazu ve stejném rozsahu, jako kdyby byla každá jednotlivá publikace či patentová přihláška specificky a jednotlivě určená pro inkorporaci formou odkazu. Podkapitoly popisu přihlášky se zahrnují pouze pro snadný přehled tototo dokumentu a neuvažují se žádným způsobem jako omezení obsahu tohoto dokumentu.
Vynález se popisuje do určitých podrobností pro ilustraci a s použitím příkladů za účelem jasnosti pochopení, avšak je zřejmé, že v rámci tohoto vynálezu lze provádět určité změny a modifikace.

Claims (9)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Stabilizovaný farmaceutický prostředek prostý HSA, vyznačující se tím, že obsahuje v podstatě monomerni interferon-β (IFN-β) nebo jeho biologicky aktivní variantu solubi1izovaný v prostředku o nízké iontové síle, kde tímto prostředkem o nízké iontové síle je roztok obsahující pufr v množství dostatečném k udržování pH této kompozice v rozmezí + nebo - 0,5 jednotek udaného pH, kde udané pH je zhruba 3,0 až zhruba 5,0 a tento prostředek má iontovou sílu, která nepřevyšuje zhruba 60 mM.
  2. 2. Kompozice podle nároku 1, vyznačuj ící se t í m, že koncentrace pufru je zhruba 1 mM až zhruba 30 mM.
  3. 3. Kompozice podle nároku 2, vyznačuj ící se t í m, že koncentrace pufru je zhruba 1 mM až zhruba 10 mM.
  4. 4. Kompozice podle nároku 3, vyznačuj ící se t í m, že koncentrace pufru je zhruba 2 mM až zhruba 7 mM.
  5. 5. Kompozice podle nároku 4, vyznačuj ící se t í m, že koncentrace pufru je zhruba 2 mM až zhruba 5 mM.
  6. 6. Kompozice podle nároku 5, vyznačuj ící se t í m, že koncentrace pufru je zhruba 5 mM.
  7. 7. Kompozice podle nároku 1, vyznačuj ící se t í m, že udané pH je zhruba 3,0 a pufrem je glycin.
    -4Ί| ·· · · · Φθ ·
    W φ · · · · * Φ > Φ * φφφφφ % · · · ···· • « · « · *9* • · · · Φ · 9 · · ·^ ** *
  8. 8. Kompozice podle nároku 1, vyznačuj ící se t i m, že udané pH je zhruba 4,0 a pufrem je kyselina aspartová.
    1 9. Kompozice podle nároku 1, vyznačuj ící se t i m, že udané pH je zhruba 5,0 a pufrem je sukcinát sodný.
    10. Kompozice podle nároku 6, vyznačuj ící se t i m, že udané pH je zhruba 3,0 a pufrem je glycin.
    11. Kompozice podle nároku 6, vyznačuj ící se t i m, že udané pH je zhruba 4,0 a pufrem je kyselina aspartová.
    12. Kompozice podle nároku 6, vyznačuj ící se t i m, že udané pH je zhruba 5,0 a pufrem je sukcinát sodný.
    13. Kompozice podle nároku 1, vyznačuj ící se tím, že jev kapalné nebo vysušené formě, kde se tato vysušená forma volí z případu lyofilizované formy, formy vysušené na vzduchu a formy získané sušením ve spreji.
    14. Kompozice podle nároku 1, vyznačuj ící se t i m, že představuje vodný nebo nevodný roztok, vodnou nebo nevodnou suspenzi nebo suchou práškovou formu, která je vhodná pro podání pacientovi plicní inhalací.
    15. Komozice podle nároku 1, vyznačuj ící se t i m, že dále obsahuj e určité_množsbví__neiontového prostředku pro úpravu osmotického tlaku, které je dostatečné k tomu, aby byla tato kompozice isotonická, kde tímto neiontovým prostředkem pro úpravu osmotického tlaku je trehalosa.
    »· 9 9 9 β · · · « ··· * ·· » · · · « · * · · · » ··· · · · · · · * ·*·
    16. Kompozice podle nároku 15, vyznačující se t i m, že koncentrace trehalosy je zhruba 9 % (hmotnost/ obj em) .
    17. Kompozice podle nároku 15, vyznačuj ící se tím, žejev kapalné nebo vysušené formě, kde vysušená forma se volí z případů lyofilizované formy, formy sušené na vzduchu a formy sušené ve spreji.
    18. Kompozice podle nároku 15, vyznačuj i cí se t i m, že představuje vodný nebo nevodný roztok, vodnou nebo nevodnou suspenzi nebo suchou práškovou formu, která je vhodná pro podání pacientovi plicní inhalací.
    19. Kompozice podle nároku 10, vyznačuj ící se t i m, že obsahuje určité množství neiontového prostředku pro úpravu osmotického tlaku, které je dostatečné k tomu, aby byla tato kompozice isotonická, kde tímto neiontovým prostředkem k úpravě osmotického tlaku je trehalosa.
    20. Kompozice podle nároku 19, vyznačuj i cí se t i m, že koncentrace trehalosy je zhruba 9 % (hmotnost/objem).
    21. Kompozice podle nároku 19, vyznačuj i cí se tím, žejev kapalné nebo vysušené formě, kde vysušená forma se volí z případů lyofilizované formy, formy sušené na vzduchu a formy sušené ve spreji.
    22. Kompozice podle nároku 19, vyznač u j i c i se t i m, že představuje vodný nebo nevodný roztok, vodnou nebo nevodnou suspenzi nebo suchou práškovou formu, která je vhodná pro podání pacientovi plicní inhalací.
    • 4 · 'Ž 4
    4 · · 4 · 4 4
    4 O 4 4 4
    4 4<9 4 * 4 4
    4 4 4 4
    4 4
    4 4 4
    4 4 4 4
    -4923.Komozice podle nároku 11, vyznačuj íc í se t í m, že obsahuje určité množství neiontového prostředku pro úpravu osmotického tlaku, které je dostatečné k tomu, aby byla tato kompozice isotonická, kde tímto neiontovým prostředkem k úpravě osmotického tlaku je trehalosa.
    24. Kompozice podle nároku 23, vyznačuj i cí se t i m, že koncentrace trehalosy je zhruba 9 % (hmotnost/obj em) .
    25. Kompozice podle nároku 23, vyznačuj i cí se tím, žejev kapalné nebo vysušené formě, kde vysušená forma se volí z případů lyofilizované formy, formy sušené na vzduchu a formy sušené ve spreji.
    26. Kompozice podle nároku 23, vyznačuj i cí se t í m, že představuje vodný nebo nevodný roztok, vodnou nebo nevodnou suspenzi nebo suchou práškovou formu, která je vhodná pro podání pacientovi plicní inhalací.
    27. Kompozice podle nároku 12, vyznačuj ící se t i m, že obsahuje určité množství neiontového prostředku pro úpravu osmotického tlaku, které je dostatečné k tomu, aby byla tato kompozice isotonická, kde tímto neiontovým prostředkem k úpravě osmotického tlaku je trehalosa.
    28. Kompozice podle nároku 27, vyznačující se t i m, že koncentrace trehalosy je zhruba 9 % (hmotnost /objem) . --29. Kompozice podle nároku 27, vyznačuj i cí se tím, žejev kapalné nebo vysušené formě, kde vysušená » ·
    -50* · ··* · forma se volí z případů lyofilizované formy, formy sušené na vzduchu a formy sušené ve spreji.
    30. Kompozice podle nároku 27, vyznačuj í cí se t í m, že představuje vodný nebo nevodný roztok, vodnou nebo nevodnou suspenzi nebo suchou práškovou formu, která je vhodná pro podání pacientovi plicní inhalací.
    31. Kompozice podle nároku 1, vyznačuj ící se t í m, že IFN-β je polypeptid s aminokyselinovou sekvencí zralého nativního IFN-β nebo jeho biologicky aktivní varianta.
    32. Prostředek podle nároku 31,vyznačuj ící se tím, že se IFN-β připravuje rekombinantním způsobem.
    33. Kompozice podle nároku 32, vyznačuj í cí se t í m, že IFN-β je glykosylováný nebo neglykosylováný.
    34. Kompozice podle nároku 33, vyznačuj ící se t í m, že IFN-β je neglykosylovaný lidský IFN-β (hIFN-β) nebo jeho biologicky aktivní mutein.
    35. Kompozice podle nároku 34, vyznačuj ící se t í m, že tímto muteinem je hIFN-fiserl736.Stabilizovaný farmaceutický prostředek prostý HSA vyznačující se tím, že obsahuje v podstatě monomerní interferon-β (IFN-β) nebo jeho biologicky aktivní variantu solubilizovaný v prostředku o nízké iontové síle, kde tímto prostředkem o nízké iontové síle je roztok, který obsahuje pufr zvolený z případů glycin, kyselina aspartová nebo sukcinát sodný o koncentraci zhruba 1 mM až zhruba 10 mM a tato kompozice má pH zhruba 3,0 až zhruba 5,0 a tento
    -51♦ · · 9 9 4 9 9 9
  9. 9 9 9 « · 9 ·· 9 9 9 • 9 · » · · 9 9 9 9
    9 9 9 9 3.' 9 4 9 «9 9 9 9 9
    9 · 9 9 9 999
    999 49 *9 999 99 · prostředek má iontovou sílu, která nepřevyšuje zhruba 60 mM.
    37. Kompozice podle nároku 36, vyznačuj í cí se t í m, že IFN-β je rekombinantní lidský IFN-β (rhIFN-β) nebo jeho biologicky aktivní mutein.
    38. Kompozice podle nároku 37, vyznačují cí se t í m, že rhIFN-β nebo jeho biologicky aktivní mutein je neglykosylováný.
    39. Kompozice podle nároku 38,vyznačuj í cí se t í m, že tento mutein je hIFN-Bserl7.
    40. Kompozice podle nároku 36, vyznačuj i cí se t i m, že koncentrace rhIFN-β je zhruba 0,01 mg/ml až zhruba 20,0 mg/ml.
    41. Kompozice podle nároku 36, vyznačuj i cí se t i m, že pufrem je glycin, koncentrace glycinu je zhruba 5 mM a pH této kompozice je zhruba 3,0
    42. Kompozice podle nároku 41, vyznačuj i cí se t i m, že obsahuje 9 % trehalosy (hmotnost/objem).
    43. Kompozice podle nároku 36, vyznačuj i cí se t i m, že pufrem je kyselina aspartová, koncentrace kyseliny aspartové je zhruba 5 mM a pH této kompozice je zhruba 4,0.
    44. Kompozice podle nároku 43, vyznačuj ící se t i m, že dále obsahuje zhruba 9 % trehalosy (hmotnost/ objem) .
    • «.
    -52«9 9
    9 9
    45. Kompozice podle nároku 36, vyznačující se t £ m, že pufrem je sukcinát sodný, koncentrace tohoto sukcinátu sodného je zhruba 5 mM a pH této kompozice je zhruba 5,0.
    46. Kompozice podle nároku 45, vyznačuj í oí se t í m, že dále obsahuje zhruba 9 % trehalosy (hmotnost/ objem) .
    47. Kompozice podle nároku 36, vyznačuj £ c £ se tím, že je v kapalné nebo vysušené formě, kde se tato vysušená forma volí z případu lyofilizované formy, formy vysušené na vzduchu a formy získané sušením ve spreji.
    48. Kompozice podle nároku 36, vyznačuj i cí se t í m, že představuje vodný nebo nevodný roztok, vodnou nebo nevodnou suspenzi nebo suchou práškovou formu, která je vhodná pro podání pacientovi plicní inhalací.
    49. Kompozice podle nároku 41, vyznačuj £ cí se tím, žejev kapalné nebo vysušené formě, kde se tato vysušená forma volí z případů lyofilizované formy, formy vysušené na vzduchu a formy získané sušením ve spreji.
    50. Kompozice podle nároku 41, vyznačuj í cí se t i m, že představuje vodný nebo nevodný roztok, vodnou nebo nevodnou suspenzi nebo suchou práškovou formu, která je vhodná pro podání pacientovi plicní inhalací.
    51. Kompozice podle nároku 43, vyznačující se tím, žejev kapalné nebo vysušené formě, kde se tato vysušená forma voli z případů lyofilizované“vformy3 formy vysušené na vzduchu a formy získané sušením ve spreji.
    52. Kompozice podle nároku 43, vyznačuj £ cí
    Φ φ φ φφ φ • 9 • 99 9 9 se t ί m, že představuje vodný nebo nevodný roztok, vodnou nebo nevodnou suspenzi nebo suchou práškovou formu, která je vhodná pro podání pacientovi plicní inhalací.
    53. Kompozice podle nároku 45, vyznačuj £ c £ se tím, žejev kapalné nebo vysušené formě, kde se tato vysušená forma volí z případů lyofilizované formy, formy vysušené na vzduchu a formy získané sušením ve spreji.
    54. Kompozice podle nároku 45, vyznačuj £ c £ se t £ m, že představuje vodný nebo nevodný roztok, vodnou nebo nevodnou suspenzi nebo suchou práškovou formu, která je vhodná pro podání pacientovi plicní inhalací.
    55. Kompozice podle nároku 42, vyznačuj i cí se tím, žejev kapalné nebo vysušené formě, kde se tato vysušená forma volí z případů lyofilizované formy, formy vysušené na vzduchu a formy získané sušením ve spreji.
    56. Kompozice podle nároku 42, vyznačuj £ cí se t í m, že představuje vodný nebo nevodný roztok, vodnou nebo nevodnou suspenzi nebo suchou práškovou formu, která je vhodná pro podáni pacientovi plicní inhalací.
    57. Kompozice podle nároku 44, vyznačuj £ cí se tím, žejev kapalné nebo vysušené formě, kde se tato vysušená forma volí z případů lyofilizované formy, formy vysušené na vzduchu a formy získané sušením ve spreji.
    58. Kompozice podle nároku 44, vyznačuj í c í se t i m, že představuje vodný nebo nevodný roztok, vodnou nebo nevodnou suspenzi nebo suchou práškovou formu, která je vhodná pro podáni pacientovi plicní inhalací.
    • · · ·· · 9 9 9(}
    9 999 9 9 · « V * · «99 ·
    9 9 9 9 9 9 9 9
    99999 9 9 999 99 9
    -5459. Kompozice podle nároku 46, vyznačuj i c i se tím, žejev kapalné nebo vysušené formě, kde se tato vysušená forma volí z případu lyofilizované formy, formy vysušené na vzduchu a formy získané sušením ve spreji.
    60. Kompozice podle nároku 46, vyznačuj i cí se t i m, že představuje vodný nebo nevodný roztok, vodnou nebo nevodnou suspenzi nebo suchou práškovou formu, která je vhodná pro podání pacientovi plicní inhalací.
    61. Stabilizovaný farmaceutický prostředek prostý HSA, vyznačující se tím, že obsahuje v podstatě monomerní lidský interferon-β (IFN-β), nebo jeho biologicky aktivní mutein solubilizovaný v prostředku o nízké iontové síle, kde tento prostředek o nízké iontové síle je roztok obsahující glycin jako pufr, kde koncentrace tohoto pufru je zhruba 2 mM až zhruba 5 mM, tato kompozice má pH od zhruba 3,0 do zhruba 4,0 a tento prostředek má iontovou sílu nepřevyšující zhruba 40 mM.
    62. Kompozice podle nároku 61, vyznačující se t i m, že rhIFN-β nebo jeho biologicky aktivní mutein je neglykosylovaný.
    63. Kompozice podle nároku 62, vyznačuj i cí se t i m, že tímto muteinem je hIFN-fiserl7.
    64. Kompozice podle nároku 63, vyznačuj i cí se t i m, že koncentrace tohoto pufru je zhruba 5 mM, pH je zhruba 3,0 a iontová síla nepřevyšuje zhruba 20 mM.
    65. Kompozice podle nároku 61, vyznačuj ící tím, že je v kapalné nebo vysušené formě, kde se tato vysušená forma volí z případů lyofilizované formy, formy vysušené na vzduchu a formy získané sušením ve spreji.
    66. Kompozice podle nároku 61, vyznačuj í cí se t í m, že představuje vodný nebo nevodný roztok, vodnou nebo nevodnou suspenzi nebo suchou práškovou formu, která je vhodná pro podání pacientovi plicní inhalací.
    67. Kompozice podle nároku 61, vyznačuj í cí se t í m, že dále obsahuje zhruba 9 % trehalosy (hmotnost/ objem).
    68 . Stabilizovaný farmaceutický prostředek prostý HSA vyznačující se tím, že obsahuje v podstatě monomerní lidský interferon-β (IFN-β), nebo jeho biologicky aktivní mutein solubilizovaný v prostředku o nízké iontové síle, kde tento prostředek o nízké .iontové síle je roztok obsahující glycin jako pufr, kde koncentrace tohoto pufru je zhruba 2 mM až zhruba 5 mM, tato kompozice má pH od zhruba 3,5 do zhruba 4,5 a tento prostředek má iontovou sílu nepřevyšující zhruba 40 mM.
    69. Kompozice podle nároku 68, vyznačuj í cí se t í m, že rhIFN-β nebo jeho biologicky aktivní mutein je neglykosylováný.
    70. Kompozice podle nároku 69, vyznačuj £ cí se t í m, že tímto muteinem je hIFN-Bgerl7.
    71. Kompozice podle nároku 68, vy Z-.n_a—č~u—j—í—c_£ se t í m, že koncentrace tohoto pufru je zhruba 5 mM, pH je zhruba 3,0 a iontová sila nepřevyšuje zhruba 20 mM.
    -56• · · 4 9 · ·9 9 • 94 · 9 * 9 · 9 *. 9 • « » · · a · · 9 9
    4 ·9··9 9 9 99 99949 • 9994 999 <•9499 49 949 9 9 9
    72. Kompozice podle nároku 68, vyznačující se tím, žejev kapalné nebo vysušené formě, kde se tato vysušená forma volí z případů lyofilizované formy, formy vysušené na vzduchu a formy získané sušením ve spreji.
    73. Kompozice podle nároku 68, vyznačuj ící se t í m, že představuje vodný nebo nevodný roztok, vodnou nebo nevodnou suspenzi nebo suchou práškovou formu, která je vhodná pro podání pacientovi plicní inhalací.
    74. Kompozice podle nároku 68, vyznačuj ící se t í m, že dále obsahuje zhruba 9 % trehalosy (hmotnost/ objem) .
    75.Stabilizovaný farmaceutický prostředek prostý HSA vyznačující se tím, že obsahuje v podstatě monomerní lidský interferon-β (IFN-β), nebo jeho biologicky aktivní mutein solubilizovaný v prostředku o nízké iontové síle, kde tento prostředek o nízké iontové síle je roztok obsahující glycin jako pufr, kde koncentrace tohoto pufru je zhruba 2 mM až zhruba 5 mM, tato kompozice má pH od zhruba 4,5 do zhruba 5,0 a tento prostředek má iontovou sílu nepřevyšující zhruba 40 mM.
    76. Kompozice podle nároku 75, vyznačuj í cí se t í m, že rhIFN-β nebo jeho biologicky aktivní mutein je neglykosylováný.
    77. Kompozice podle nároku 76, vyznačuj í cí se t í m, že tímto muteinem je hIFN-β 17_._
    78. Kompozice podle nároku 75, vyznačuj í cí se t í m, že koncentrace tohoto pufru je zhruba 5 mM, pH • · · · · • · 9 9 9
    9 9 9 » · · · · > « ·
    -57je zhruba 5,0 a iontová síla nepřevyšuje zhruba 20 mM.
    79. Kompozice podle nároku 75, vyznačuj i ci se tím, že jev kapalné nebo vysušené formě, kde se tato vysušená forma volí z případů lyofilizované formy, formy vysušené na vzduchu a formy získané sušením ve spreji.
    80. Kompozice podle nároku 75, vyznačuj i ci se t i m, že představuje vodný nebo nevodný roztok, vodnou nebo nevodnou suspenzi nebo suchou práškovou formu, která je vhodná pro podání pacientovi plicní inhalací.
    81. Kompozice podle nároku 75, vyznačuj i ci se t i m, že dále obsahuje zhruba 9 % trehalosy (hmotnost/ objem) .
    82. Způsob zvyšování rozpustnosti interferonu-β (IFN-β) nebo jeho biologicky aktivní varianty ve farmaceutické kompozici bez přítomnosti lidského serumalbuminu, vyznačující se tím, že se tato kompozice připraví s prostředkem o nízké iontové síle, kde tento prostředek o nízké iontové síle je roztok, který obsahuje pufr v množství dostatečném pro udržování pH této kompozice v mezích ±0,5 jednotek udaného pH, kde toto udané pH je zhruba 3,0 až zhruba 5,0, tento prostředek má iontovou sílu, která nepřevyšuje zhruba 60 mM, a IFN-β nebo jeho biologicky aktivní varianta se uvede do této kompozice.
    83. Způsob podle nároku 82,vyznačující se tím, že koncentrace pufru je zhruba 1 mM až zhruba 30 mM.
    84. Způsob podle nároku 83,vyznačující se tím, že koncentrace pufru je zhruba 2 mM až zhruba 5 mM.
    -58·♦ · · · • ·
    85. Způsob podle nároku 84,vyznačuj ící se tím, že udané pH je zhruba 3,0 a pufr je glycin.
    86. Způsob podle nároku 84,vyznačuj ící se tím, že udané pH je zhruba 4,0 a pufr je kyselina aspartová .
    87. Způsob podle nároku 84,vyznačující se tím, že udané pH je zhruba 5,0 a pufr je sukcinát sodný.
    88. Způsob podle nároku 82,vyznačuj ící se tím, že tato kompozice dále obsahuje neiontový prostředek pro úpravu osmotického tlaku v množství dostatečném k tomu, aby byla tato kompozice isotonická, kde tímto neiontovým prostředkem pro úpravu osmotického tlaku je trehalosa.
    89. Způsob podle nároku 82,vyznačuj ící se tím, že dále obsahuje krok přípravy sušené formy této kompozice, kde tato sušená forma se tvoří ze skupiny zahrnující lyofilizovanou formu, formu sušenou na vzduchu a formu získanou sušením ve spreji.
    90. Způsob podle nároku 82,vyznačuj ící se tím, že touto kompozicí je vodný nebo nevodný roztok, vodná nebo nevodná suspenze nebo suchá prášková forma, která je vhodná pro podávání pacientovi plicní inhalací.
    91. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se t í m, že se připraví podle způsobu nároku 82.
    92. Způsob přípravy farmaceutické kompozice prosté HSA obsahující v podstatě monomerní interferon-β (IFN-β) vyznačující se tím, že zahrnuje přípravu této kompozice s prostředkem o nízké iontové síle, kde tento ···
    -59prostředek o nízké iontové síle je roztok obsahující pufr v množství dostatečném pro udržování pH této kompozice v mezích plus nebo mínus 0,5 jednotek udaného pH, kde toto udané pH je zhruba 3,0 až zhruba 5,0, tento prostředek má iontovou sílu nepřevyšující zhruba 60 mM, a zavedení IFN-β nebo jeho biologicky aktivní varianty do této kompozice.
    λ
    93. Způsob podle nároku 92, vyznačuj íc í se tím, že koncentrace pufru je zhruba 1 mM až zhruba 30 mM.
    94. Způsob podle nároku 93,vyznačuj ící se tím, že koncentrace pufru je zhruba 2 mM až zhruba 5 mM.
    95. Způsob podle nároku 94,vyznačuj ící se tím, že udané pH je zhruba 3,0 a pufrem je glycin.
    96. Způsob podle nároku 94,vyznačuj ící se t í m, že udané pH je zhruba 4,0 a pufrem je kyselina aspartová.
    97. Způsob podle nároku 94,vyznačuj ící se tím, že udané pH je zhruba 5,0 a pufrem je sukcinát sodný.
    98. Způsob podle nároku 92,vyznačuj ící se tím, že tato kompozice dále obsahuje neiontový prostředek pro úpravu osmotického tlaku v množství dostatečném k tomu, aby byla tato kompozice isotonická, kde tímto neiontovým prostředkem pro úpravu osmotického tlaku je trehalosa.
    99. Způsob podle nároku 92,vyznačuj ící se tím, že dále obsahuje krok přípravy sušené formy této kompozice, kde tato sušená forma se tvoří ze skupiny zahrnující lyofilizovanou formu, formu sušenou na vzduchu a formu • · ·
    -60“ získanou sušením ve spreji.
    100. Způsob podle nároku 92, vyznačující se t i m, že touto kompozicí je vodný nebo nevodný roztok, vodná nebo nevodná suspenze nebo suchá prášková forma, která je vhodná pro podávání pacientovi plicní inhalací.
    101. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se t i m, že se připraví podle způsobu nároku 92.
    102. Prostředek pro diagnózu, prevenci nebo léčení nemocí, které vykazují odpověď na léčbu interferonem-β (IFN-β) , vyznačující se tím, že obsahuje farmaceutickou kompozici podle nároků 1, 36, 61, 68 nebo 75.
CZ2003-2735A 2001-04-09 2001-10-26 HSA - prosté prostředky s obsahem interferonu-beta CZ305994B6 (cs)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US28261401P 2001-04-09 2001-04-09
US33040401P 2001-10-18 2001-10-18
US10/035,397 US6887462B2 (en) 2001-04-09 2001-10-25 HSA-free formulations of interferon-beta

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ20032735A3 true CZ20032735A3 (cs) 2005-03-16
CZ305994B6 CZ305994B6 (cs) 2016-06-08

Family

ID=27364838

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2003-2735A CZ305994B6 (cs) 2001-04-09 2001-10-26 HSA - prosté prostředky s obsahem interferonu-beta

Country Status (19)

Country Link
US (5) US6887462B2 (cs)
EP (3) EP2283896B1 (cs)
JP (5) JP2004529917A (cs)
KR (1) KR100900753B1 (cs)
CN (1) CN1313148C (cs)
AT (1) ATE545430T1 (cs)
BG (1) BG66300B1 (cs)
CA (2) CA2442854C (cs)
CY (2) CY1113609T1 (cs)
CZ (1) CZ305994B6 (cs)
DK (1) DK1381432T3 (cs)
ES (3) ES2453623T3 (cs)
HU (1) HU228581B1 (cs)
IL (2) IL157963A0 (cs)
LU (1) LU92060I2 (cs)
NO (1) NO330259B1 (cs)
PL (1) PL213297B1 (cs)
PT (2) PT1381432E (cs)
WO (1) WO2002080976A2 (cs)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2779389C2 (ru) * 2015-09-22 2022-09-06 Пфайзер Инк. Способ получения терапевтического белкового препарата и препарат на основе антител, полученный по такому способу

Families Citing this family (76)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999051272A1 (en) * 1998-04-03 1999-10-14 Chiron Corporation Injectable igf-formulations containing succinate as buffering agent
US7544354B2 (en) * 2000-10-27 2009-06-09 Novartis Vaccines And Diagnostics Methods of protein purification and recovery
CA2428144C (en) * 2000-11-07 2012-01-10 Chiron Corporation Compositions of interferon-beta stabilized with highly purified mannitol
US6887462B2 (en) 2001-04-09 2005-05-03 Chiron Corporation HSA-free formulations of interferon-beta
AR034749A1 (es) * 2001-07-09 2004-03-17 Schering Ag Formulaciones de interferon beta humano
AU2003214019A1 (en) * 2002-03-12 2003-09-22 Maxygen Aps Interferon beta-like molecules for treatment of stroke
US20040037809A1 (en) * 2002-06-28 2004-02-26 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Compositions and methods for enhanced mucosal delivery of interferon beta
DE10240894A1 (de) * 2002-09-04 2004-03-11 Procom Biotechnologische Produktions Gmbh Verstärkung der Resorption von Subtanzen über die Haut und Schleimhaut
US8129330B2 (en) * 2002-09-30 2012-03-06 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof
US9453251B2 (en) 2002-10-08 2016-09-27 Pfenex Inc. Expression of mammalian proteins in Pseudomonas fluorescens
PT1667708E (pt) * 2002-12-26 2012-09-14 Mountain View Pharmaceuticals Conjugados de interferão-beta-1b e polietileno glicol apresentando uma potência biológica in vitro aumentada
EA013535B1 (ru) * 2002-12-26 2010-06-30 Маунтин Вью Фамэсьютикэлс, Инк. Полимерный конъюгат биоактивного компонента (варианты), способ его получения и использования, фармацевтические продукты на его основе
TWI272948B (en) * 2003-05-01 2007-02-11 Ares Trading Sa HSA-free stabilized interferon liquid formulations
US20050208151A1 (en) * 2003-10-30 2005-09-22 Entelos, Inc. Treatment of rheumatoid arthritis with FLIP antagonists
AU2004288854B2 (en) * 2003-11-10 2009-10-01 Arriva-Pharmaceuticals, Inc. Dry recombinant human alpha 1-antitrypsin formulation
EP1532983A1 (en) * 2003-11-18 2005-05-25 ZLB Bioplasma AG Immunoglobulin preparations having increased stability
PT1691825E (pt) * 2003-12-11 2011-10-12 Ares Trading Sa Formulações líquidas de interferão estabilizadas
CN1557479A (zh) * 2004-01-16 2004-12-29 深圳市海王英特龙生物技术股份有限公 干扰素脂质体乳膏
DE102004008168B4 (de) * 2004-02-19 2015-12-10 Voxeljet Ag Verfahren und Vorrichtung zum Auftragen von Fluiden und Verwendung der Vorrichtung
US20090214472A1 (en) * 2004-03-01 2009-08-27 Enzon Pharmaceuticals Inc. Interferon-beta polymer conjugates
US20050220764A1 (en) * 2004-04-01 2005-10-06 Schering Aktiengesellschaft Higher-doses of interferon-beta for treatment of multiple sclerosis
EA012205B1 (ru) * 2004-05-17 2009-08-28 Арес Трейдинг С.А. Гидрогелевые препараты интерферона
KR101191536B1 (ko) * 2004-06-01 2012-10-15 아레스 트레이딩 에스.에이. 안정화된 인터페론 액상 제제
CA2567310A1 (en) * 2004-06-01 2005-12-15 Ares Trading S.A. Stabilized interferon liquid formulations
EA012281B1 (ru) * 2004-06-01 2009-08-28 Арес Трейдинг С.А. Способ стабилизации белков
WO2005120540A2 (en) * 2004-06-09 2005-12-22 Schering Aktiengesellschaft Interferon alpha or beta for treatment of cardiomyopathy and endothelial dysfunction
CA2574953A1 (en) 2004-07-26 2006-02-09 Dow Global Technolgies Inc. Process for improved protein expression by strain engineering
EP1786917A4 (en) 2004-07-26 2008-05-28 Enzon Pharmaceuticals Inc OPTIMIZED INTERFERON BETA-GEN
AU2005272862B2 (en) * 2004-08-12 2011-03-10 Merck Sharp & Dohme Corp. Stable pegylated interferon formulation
US20080076729A1 (en) * 2005-05-19 2008-03-27 Schering Aktiengesellachaft Interferon-beta gene therapy using an improved, regulated expression system
US20060281703A1 (en) * 2005-05-19 2006-12-14 Schering Aktiengesellschaft Treatment of disease using an improved regulated expression system
US20070179113A1 (en) * 2005-05-19 2007-08-02 Schering Aktiengesellachaft GM-CSF gene therapy for Crohn's disease using an improved regulated expression system
TW200716749A (en) * 2005-05-19 2007-05-01 Schering Ag Interferon-beta gene therapy using an improved, regulated expression system
CU23432B6 (es) * 2005-11-02 2009-10-16 Ct Ingenieria Genetica Biotech Formulaciones estabilizadas que contienen a los interferones gamma y alfa en proporciones potenciadoras
US20140113860A1 (en) 2006-02-03 2014-04-24 Prolor Biotech Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8759292B2 (en) 2006-02-03 2014-06-24 Prolor Biotech, Llc Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US20150038413A1 (en) 2006-02-03 2015-02-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8048849B2 (en) * 2006-02-03 2011-11-01 Modigene, Inc. Long-acting polypeptides and methods of producing same
US8304386B2 (en) * 2006-02-03 2012-11-06 Prolor Biotech, Inc. Long-acting growth hormone and methods of producing same
US9249407B2 (en) 2006-02-03 2016-02-02 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8476234B2 (en) * 2006-02-03 2013-07-02 Prolor Biotech Inc. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8946155B2 (en) 2006-02-03 2015-02-03 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US10351615B2 (en) 2006-02-03 2019-07-16 Opko Biologics Ltd. Methods of treatment with long-acting growth hormone
US9458444B2 (en) 2006-02-03 2016-10-04 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8450269B2 (en) 2006-02-03 2013-05-28 Prolor Biotech Ltd. Long-acting growth hormone and methods of producing same
US7553941B2 (en) 2006-02-03 2009-06-30 Modigene Inc Long-acting polypeptides and methods of producing same
US8048848B2 (en) * 2006-02-03 2011-11-01 Prolor Biotech Ltd. Long-acting interferons and derivatives thereof and methods thereof
US10221228B2 (en) 2006-02-03 2019-03-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
AU2007234612B2 (en) 2006-12-14 2013-06-27 Johnson & Johnson Regenerative Therapeutics, Llc Protein stabilization formulations
US9580719B2 (en) 2007-04-27 2017-02-28 Pfenex, Inc. Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins
JP5444553B2 (ja) 2007-04-27 2014-03-19 フェネックス インコーポレイテッド 微生物宿主を迅速にスクリーニングして、異種タンパク質発現の収率および／または質が改善されている特定の株を同定する方法
WO2008137471A2 (en) 2007-05-02 2008-11-13 Ambrx, Inc. Modified interferon beta polypeptides and their uses
CA2698173C (en) * 2007-09-04 2015-02-03 Biosteed Gene Expression Tech. Co., Ltd. Interferon alpha 2b modified by polyethylene glycol, the preparation and use thereof
WO2009030065A1 (zh) 2007-09-04 2009-03-12 Biosteed Gene Expression Tech. Co., Ltd. 聚乙二醇修饰的干扰素α2a及其制备方法和应用
WO2009045553A1 (en) * 2007-10-05 2009-04-09 Barofold, Inc. High pressure treatment of aggregated interferons
US9138403B2 (en) * 2007-12-20 2015-09-22 Merck Serono Sa PEG-interferon-beta formulations
US20100196272A1 (en) * 2009-01-30 2010-08-05 Neoprobe Corporation Compositions for radiolabeling diethylenetriaminepentaacetic acid (dtpa)-dextran
US20100203014A1 (en) * 2009-02-04 2010-08-12 Aegis Therapeutics Llc Zwitterionic buffered acidic peptide and protein formulations
CA2764759A1 (en) 2009-06-09 2010-12-16 Defyrus, Inc. Administration of interferon for prophylaxis against or treatment of pathogenic infection
US9663778B2 (en) 2009-07-09 2017-05-30 OPKO Biologies Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
WO2011095543A1 (en) 2010-02-04 2011-08-11 Csl Behring Ag Immunoglobulin preparation
EP2361636A1 (en) 2010-02-26 2011-08-31 CSL Behring AG Immunoglobulin preparation and storage system for an immunoglobulin preparation
US20120269770A1 (en) * 2010-11-22 2012-10-25 Mark Brader Stable Preserved Compositions of Interferon-Beta
MX342675B (es) * 2011-03-10 2016-10-07 Xeris Pharmaceuticals Inc Formulaciones estables para inyeccion parenteral de farmacos de peptido.
BR112014025951A2 (pt) 2012-04-19 2017-07-11 Opko Biologics Ltd variantes de oxintomodulina de longa ação e métodos de produção do mesmo
AU2013349239B2 (en) 2012-11-20 2018-04-12 Opko Biologics Ltd. Method of increasing the hydrodynamic volume of polypeptides by attaching to gonadotrophin carboxy terminal peptides
US20150158926A1 (en) 2013-10-21 2015-06-11 Opko Biologics, Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
JPWO2016052584A1 (ja) * 2014-09-30 2017-07-13 東レ株式会社 ポリエチレングリコール修飾インターフェロン−βの検出及び定量に使用する試料液の前処理方法、ポリエチレングリコール修飾インターフェロン−βの検出方法及び定量方法
CN104766952B (zh) * 2015-04-21 2017-01-25 武汉凯迪工程技术研究总院有限公司 利用生物质气化炉滤渣制备锂离子电池负极材料的方法
JP7096668B2 (ja) 2015-06-19 2022-07-06 オプコ バイオロジクス リミテッド 長時間作用型凝固因子およびその製造方法
FI126979B (en) * 2016-02-29 2017-09-15 Faron Pharmaceuticals Oy Lyophilized pharmaceutical formulation and use thereof
WO2018011799A1 (en) 2016-07-11 2018-01-18 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factor vii and methods of producing same
CN109843266B (zh) * 2016-08-02 2023-08-11 安巴知识产权有限公司 稳定的布洛芬注射组合物
KR101943160B1 (ko) 2016-10-06 2019-01-30 에이비온 주식회사 인터페론 베타 변이체의 안정화 제제
US11690799B2 (en) 2018-04-19 2023-07-04 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Microneedle system for applying interferon
KR102658659B1 (ko) * 2018-04-19 2024-04-17 에르테에스 로만 테라피-시스테메 아게 인터페론 적용을 위한 마이크로니들 시스템

Family Cites Families (68)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU538665B2 (en) 1979-10-30 1984-08-23 Juridical Foundation, Japanese Foundation For Cancer Research Human interferon dna
AU553400B2 (en) 1980-01-08 1986-07-17 Biogen, Inc. Recombinant dna for producing interferon
DE3005897A1 (de) 1980-02-16 1981-09-03 Hoechst Ag, 6000 Frankfurt Genprodukt eines hoeheren organismus aus einem dieses gen enhtaltenden mikroorganismus
US4439181A (en) 1981-01-26 1984-03-27 Regents Of The University Of Minnesota Polyol-hormone mixture for use in chronic parenteral hormone administration
JPS5821691A (ja) 1981-07-29 1983-02-08 Mochida Pharmaceut Co Ltd α−及びβ−インタ−フェロンの精製方法
DE3273597D1 (en) 1981-11-28 1986-11-06 Sunstar Kk Pharmaceutical composition containing interferon in stable state
WO1983002461A1 (en) 1982-01-19 1983-07-21 Cetus Corp Multiclass hybrid interferons
AU1234383A (en) 1982-03-17 1983-09-22 Inter-Yeda Ltd. Interferon stabilised with polyvinyl-pyrrolidone
US4992271A (en) 1982-09-23 1991-02-12 Cetus Corporation Formulation for lipophilic IL-2 proteins
US5702699A (en) 1982-09-23 1997-12-30 Cetus Corporation Process for the recovery of lipophilic proteins
US4462940A (en) 1982-09-23 1984-07-31 Cetus Corporation Process for the recovery of human β-interferon-like polypeptides
US5643566A (en) 1982-09-23 1997-07-01 Cetus Corporation Formulation processes for lipophilic proteins
US5166331A (en) 1983-10-10 1992-11-24 Fidia, S.P.A. Hyaluronics acid fractions, methods for the preparation thereof, and pharmaceutical compositions containing same
IE56026B1 (en) 1982-10-19 1991-03-27 Cetus Corp Cysteine-depleted muteins of biologically active proteins
US4588585A (en) 1982-10-19 1986-05-13 Cetus Corporation Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins
US4518584A (en) 1983-04-15 1985-05-21 Cetus Corporation Human recombinant interleukin-2 muteins
US4816400A (en) 1983-05-19 1989-03-28 Karl Tryggvason Basement membrane collagen degrading enzyme and method of purifying same
US4588584A (en) 1983-06-01 1986-05-13 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Medium for the isolation of Pseudomonas cepacia biotype from soil and the isolated biotype
GB8317880D0 (en) 1983-07-01 1983-08-03 Searle & Co Structure and synthesis of interferons
DE3484374D1 (de) 1983-08-04 1991-05-08 Green Cross Corp Gamma-interferonzusammensetzung.
JPS6069037A (ja) 1983-09-26 1985-04-19 Sunstar Inc エリテマト−デス治療用外用剤
DE3482657D1 (de) 1983-11-21 1990-08-09 Univ Minnesota Gepuffertes polyol-hormones gemisch zur verwendung bei chronischer parenteraler hormonverabreichung.
US4530787A (en) 1984-03-28 1985-07-23 Cetus Corporation Controlled oxidation of microbially produced cysteine-containing proteins
JPS60243028A (ja) * 1984-04-28 1985-12-03 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd インタ−フエロンの可溶化方法
GB8412564D0 (en) 1984-05-17 1984-06-20 Searle & Co Structure and properties
US4605555A (en) 1984-09-20 1986-08-12 Sun Star Kabushiki Kaisha Composition and method for treating keratosic disorder of skin and mucosa
US4959314A (en) 1984-11-09 1990-09-25 Cetus Corporation Cysteine-depleted muteins of biologically active proteins
US4572798A (en) 1984-12-06 1986-02-25 Cetus Corporation Method for promoting disulfide bond formation in recombinant proteins
US4631211A (en) 1985-03-25 1986-12-23 Scripps Clinic & Research Foundation Means for sequential solid phase organic synthesis and methods using the same
US4816440A (en) 1985-09-26 1989-03-28 Cetus Corporation Stable formulation of biologically active proteins for parenteral injection
US5183746A (en) 1986-10-27 1993-02-02 Schering Aktiengesellschaft Formulation processes for pharmaceutical compositions of recombinant β-
US4894330A (en) 1986-12-23 1990-01-16 Cetus Corporation Purification of recombinant beta-interferon incorporating RP-HPLC
EP0284249A1 (en) 1987-03-13 1988-09-28 Interferon Sciences, Inc. Lyophilized lymphokine composition
US5151265A (en) 1987-11-03 1992-09-29 Genentech, Inc. Gamma interferon formulation
US5004605A (en) 1987-12-10 1991-04-02 Cetus Corporation Low pH pharmaceutical compositions of recombinant β-interferon
US5104651A (en) 1988-12-16 1992-04-14 Amgen Inc. Stabilized hydrophobic protein formulations of g-csf
ES2097120T3 (es) 1989-07-24 1997-04-01 Bayer Ag Estabilizacion de proteinas altamente purificadas.
JPH05963A (ja) 1990-04-13 1993-01-08 Toray Ind Inc ポリペプチド類組成物
US5763566A (en) * 1990-06-11 1998-06-09 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: tissue SELEX
WO1994016758A1 (en) 1991-03-05 1994-08-04 Miris Medical Corporation A medication cassette for an automatic aerosol medication delivery system
KR100246082B1 (ko) 1991-07-02 2000-04-01 인헤일, 인코오포레이티드 에어로졸화된약제를전달하는방법및장치
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US6582728B1 (en) 1992-07-08 2003-06-24 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Spray drying of macromolecules to produce inhaleable dry powders
US5785049A (en) 1994-09-21 1998-07-28 Inhale Therapeutic Systems Method and apparatus for dispersion of dry powder medicaments
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
US5558085A (en) 1993-01-29 1996-09-24 Aradigm Corporation Intrapulmonary delivery of peptide drugs
US5497763A (en) 1993-05-21 1996-03-12 Aradigm Corporation Disposable package for intrapulmonary delivery of aerosolized formulations
TW249202B (cs) 1993-08-13 1995-06-11 Ciba Gerigy Corp
US6051256A (en) 1994-03-07 2000-04-18 Inhale Therapeutic Systems Dispersible macromolecule compositions and methods for their preparation and use
US5545723A (en) 1994-03-15 1996-08-13 Biogen Inc. Muteins of IFN-β
FR2719479B1 (fr) 1994-05-04 1996-07-26 Sanofi Elf Formulation stable lyophilisée comprenant une protéine: kit de dosage.
US5453433A (en) 1994-05-13 1995-09-26 Sterling Winthrop Inc. Thiadiazoles and antipicornaviral compositions
IT1272252B (it) 1994-05-16 1997-06-16 Applied Research Systems Formulazioni liquide di interferone beta
ATE299892T1 (de) 1994-05-18 2005-08-15 Nektar Therapeutics Methoden und zusammensetzungen für die trockenpuderarznei aus interferonen
RU2146153C1 (ru) 1994-09-21 2000-03-10 Инхейл Терапьютик Системз Устройство и способ распыления лекарственных средств в виде сухого порошка (варианты)
JP2758154B2 (ja) 1995-04-06 1998-05-28 エフ・ホフマン−ラ ロシユ アーゲー インターフェロンを含む液体製剤
US5780014A (en) 1995-04-14 1998-07-14 Inhale Therapeutic Systems Method and apparatus for pulmonary administration of dry powder alpha 1-antitrypsin
US5814485A (en) 1995-06-06 1998-09-29 Chiron Corporation Production of interferon-β (IFN-β) in E. coli
CN1733296B (zh) 1996-12-24 2010-05-26 拜奥根Idec马萨诸塞公司 稳定的液体干扰素制剂
JP2001507700A (ja) 1996-12-31 2001-06-12 インヘイル・セラピューティック・システムズ 疎水性エアゾール薬剤
ES2223017T5 (es) * 1997-09-23 2010-10-15 Rentschler Biotechnologie Gmbh Formulaciones liquidas de un interferon beta.
WO1999051272A1 (en) 1998-04-03 1999-10-14 Chiron Corporation Injectable igf-formulations containing succinate as buffering agent
CN1329082C (zh) * 1998-10-16 2007-08-01 拜奥根Idec马萨诸塞公司 干扰素－β－1a的聚合物缀合物及其使用
NZ529856A (en) 1999-10-04 2005-09-30 Chiron Corp Stabilized liquid polypeptide-containing pharmaceutical compositions
US6465425B1 (en) 2000-02-10 2002-10-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Microencapsulation and sustained release of biologically active acid-stable or free sulfhydryl-containing proteins
US7544354B2 (en) 2000-10-27 2009-06-09 Novartis Vaccines And Diagnostics Methods of protein purification and recovery
US6887462B2 (en) * 2001-04-09 2005-05-03 Chiron Corporation HSA-free formulations of interferon-beta
AR034749A1 (es) 2001-07-09 2004-03-17 Schering Ag Formulaciones de interferon beta humano

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2779389C2 (ru) * 2015-09-22 2022-09-06 Пфайзер Инк. Способ получения терапевтического белкового препарата и препарат на основе антител, полученный по такому способу

Also Published As

Publication number Publication date
CN1511053A (zh) 2004-07-07
PL213297B1 (pl) 2013-02-28
JP5701323B2 (ja) 2015-04-15
AU2002241769B2 (en) 2006-06-01
ATE545430T1 (de) 2012-03-15
PT1381432E (pt) 2012-04-03
JP2010018633A (ja) 2010-01-28
US20040191219A1 (en) 2004-09-30
CY1113609T1 (el) 2015-08-05
CY2012023I2 (el) 2015-08-05
EP2283896B1 (en) 2014-09-03
EP2283897A2 (en) 2011-02-16
CA2762966A1 (en) 2002-10-17
US8333958B2 (en) 2012-12-18
DK1381432T3 (da) 2012-03-12
JP2015044882A (ja) 2015-03-12
US7371373B2 (en) 2008-05-13
CY2012023I1 (el) 2015-08-05
WO2002080976A3 (en) 2003-01-09
JP2004529917A (ja) 2004-09-30
EP2283896A2 (en) 2011-02-16
CN1313148C (zh) 2007-05-02
HUP0303732A2 (en) 2007-09-28
ES2367761T1 (es) 2011-11-08
BG66300B1 (bg) 2013-03-29
EP2283897A3 (en) 2011-06-15
KR20030097825A (ko) 2003-12-31
EP1381432B9 (en) 2012-04-25
EP2283897B1 (en) 2014-02-26
PL366790A1 (en) 2005-02-07
ES2367761T3 (es) 2012-05-04
US20020172661A1 (en) 2002-11-21
IL157963A0 (en) 2004-03-28
JP2013064020A (ja) 2013-04-11
JP2008285499A (ja) 2008-11-27
CZ305994B6 (cs) 2016-06-08
IL157963A (en) 2013-08-29
US20080193415A1 (en) 2008-08-14
HU228581B1 (en) 2013-04-29
ES2453623T3 (es) 2014-04-08
US7399463B2 (en) 2008-07-15
NO20034492L (no) 2003-11-25
US7892531B2 (en) 2011-02-22
ES2524322T3 (es) 2014-12-05
WO2002080976A2 (en) 2002-10-17
CA2442854C (en) 2012-03-13
US20050142110A1 (en) 2005-06-30
US20110104116A1 (en) 2011-05-05
CA2442854A1 (en) 2002-10-17
NO20034492D0 (no) 2003-10-07
KR100900753B1 (ko) 2009-06-02
LU92060I9 (cs) 2019-01-02
LU92060I2 (fr) 2012-10-15
PT2283896E (pt) 2014-12-16
US6887462B2 (en) 2005-05-03
NO330259B1 (no) 2011-03-14
JP5580521B2 (ja) 2014-08-27
EP2283896A3 (en) 2011-05-25
EP1381432B1 (en) 2012-02-15
EP1381432A2 (en) 2004-01-21
BG108322A (bg) 2005-08-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ20032735A3 (cs) HSA - prosté prostředky s obsahem interferonu-beta
JP4988562B2 (ja) 安定化したインターフェロン液体製剤
JPH08510242A (ja) ガンマインターフェロンの安定液体組成物
AU2002241769C1 (en) HSA-free formulations of interferon-beta
AU2002241769A1 (en) HSA-free formulations of interferon-beta
AU2021258734A1 (en) Recombinant interferon