KR101191536B1 - 안정화된 인터페론 액상 제제 - Google Patents

Abstract

안정화된 HSA-자유 약제학적 조성물이 기술되며, 상기 조성물은 인터페론(IFN)을 포함하며, 상기 제제는 완충액, 아미노산 및 항산화제를 포함하는 용액이다. 바람직하게는 인터페론은 인간 재조합 IFN-베타이다.

인터페론, 다발 경화증, HSA

Description

안정화된 인터페론 액상 제제{Stabilized interferon liquid formulations}

본 발명은 인터페론을 포함하는 HSA-자유 약제학적 조성물, 특히 완충액, 아미노산 및 항산화제를 포함하는 인터페론-베타의 제제에 관한 것이다.

인터페론은 사이토킨, 즉 세포들 사이에서 메세지를 전달하고 감염을 일으키는 미생물을 파괴하는 것을 돕고 발생된 상처를 치유함으로서 면역계에서 중요한 역할을 하는 용해성 단백질이다. 인터페론은 감염된 세포들에 의해 자연적으로 분비되며 1957년에 처음 발견되었다. 그들의 이름은 그들이 바이러스 복제와 생성에 "관여(interfere)"한다는 사실에서 유래한다.

인터페론은 항바이러스(antiviral) 및 항증식성(antiproliferative) 활성을 나타낸다. 생화학적 그리고 면역학적 성질을 기초로, 자연 발생하는 인간 인터페론을 세 가지로 크게 분류하였다: 인터페론-알파(백혈구: leukocyte), 인터페론-베타(섬유모세포: fibroblast) 및 인터페론-감마(면역: immune). 알파-인터페론은 현재 미국 및 다른 나라에서 유모세포백혈병(hairy cell leukemia), 성병성 사마귀(venereal warts), 카포시육종(Kaposi's Sarcoma))(에이즈로 고통받는 환자들을 공통적으로 괴롭히는 암), 만성 비A-, 비B- 간염(chronic non-A, non-B hepatitis)의 치료용으로 승인되었다.

게다가 인터페론(interferons: IFNs)는 바이러스 감염에 반응하는 신체에 의해 생성된 글리코단백질(glycoprotein)이다. 이들은 보호된 세포들에서 바이러스의 증식을 저해한다. 저분자량 단백질로 구성되는 IFNs는 그들의 작용이 매우 비특이적이다. 즉 한 바이러스에 의해 유도된 IFN은 넓은 범위의 다른 바이러스에 대해서도 효과적이다. 그러나 그들은 종-특이적이다. 즉 한 종에 의해 유도된 IFN은 단지 동일 또는 매우 관련된 종의 세포에서만 항바이러스성 활성을 자극한다. IFN은 그들의 잠재적 항-종양 및 항바이러스성 활성에 이용되는 시토카인(cytokine)의 제1 집단이었다.

상기 주요 IFNs는 IFN-α, IFN-β 및 IFN-γ로 나타낸다. 그러한 주요 종류의 IFN은 초기에 그들의 세포 기원에 따라 분류되었었다(백혈구, 섬유모세포 또는 T 세포). 그러나 여러가지 종류들이 한 세포에서 생성될 수 있다는 것이 분명해졌다. 그러므로 백혈구 IFN은 현재 IFN-α, 섬유모세포 IFN은 IFN-β 그리고 T 세포 IFN은 IFN-γ이다. 네번째 타입의 IFN이 존재하는데, 림포블라스토이드(lymphoblastoid) IFN은 "나말와(Namalwa)" 세포주[버킷림프종(Burkitt's lymphoma)에서 유래]에서 생성되며, 백혈구와 섬유모세포 IFN의 혼합물을 생성하는 것으로 보인다.

상기 인터페론용 국제 단위 또는 인터페론 단위(U 또는 IU, 국제 단위)는 바이러스 손상에 대한 세포 50% 보호를 위해 필요한 양으로 규정된 IFN 활성 측정값으로 보고되어 왔다. 대생물작용(bioactivity)을 측정하기 위하여 사용될 수 있는 측정법은 기술된 것처럼 세포병변효과(cytopathic effect) 저해 측정법이 다(Rubinstein, et al. 1981; Familetti, P.C. et al., 1981). 인터페론에 대한 항바이르스성 측정법에서 인터페론 약 1 unit/ml는 50%의 세포병변효과를 주기에 필요한 양이다. 상기 단위는 국립보건기구(National Institutes of Health)(Pestka S. 1986)에 의해 제공된 Hu-IFN-베타에 대한 국제 대조군 기준(international reference standard)에 관하여 결정된다(Pestka S. 1986).

IFN의 모든 류들은 몇 가지 분명한 타입들을 포함한다. IFN-β 및 IFN-γ은 각각 단일 유전자 산물이다.

IFN-α로서 분류된 단백질들은 가장 다양한 집단이며, 약 15가지 타입을 포함한다. 적어도 23개의 구성원들을 포함하며, 그중 15개는 활성적이며 전사되고 염색체 9 상의 IFN-α 유전자들의 군집(cluster)이다. 성숙한 IFN-α는 글리코실화되지 않는다.

IFN-α 및 IFN-β은 모두 유사한 생물학적 활성을 갖는 동일한 길이(165 또는 166 아미노산)이다. IFN-γ는 146 아미노산 길이이며, α 및 β 류에 덜 밀접하게 닮았다. 단지 IFN-γ는 대식세포(macrophage)를 활성화시키거나 또는 살해 T 세포(killer T cell)의 성숙을 유도한다. 이들 새로운 타입의 치료제들은 때때로 생체반응조절물질(biologic response modifiers: BRMs)로 불린다. 왜냐하면 그들은 면역제어(immunomodulation)를 통해 인지(recognition)에 영향을 미쳐, 종양에 대한 유기물의 반응에 영향을 주기 때문이다.

인간 섬유모세포 인터페론(IFN-β)는 항바이러스성 활성을 가지며 또한 종양 세포(neoplastic cell)에 대하여 자연 살해세포를 자극할 수 있다. 이것은 바이러 스에 의해 유도된 약 20,000Da의 폴리펩티드이고 두가닥 RNA(double-stranded RNA)이다. 재조합 DNA 기술(Derynk et al. 1980)에 의해, 클론된 섬유모세포 인터페론용 유전자의 뉴클레오티드 시퀀스로부터 상기 단백질의 아미노산 시퀀스가 유도되었다. 이것은 166 아미노산 길이를 갖는다.

쉐퍼드(Shepard) 등(1981)은 염기 842에 돌연변이(141 위치에서 Cys -> Tyr)하여 항바이러스성 활성을 없앤 돌연변이와, 뉴클레오티드 1119-1121의 결실을 갖는 여러 클론(clone)을 기술하였다.

마크(Mark) 등(1984)은 염기 469(T)를 (A)로 치환하여 17번 위치에서 아미노산을 Cys -> Ser로 바꾸어 인공 돌연변이를 삽입하였다. 얻어진 IFN-β는 '자연 IFN-β' 만큼 활성적인 것으로 보고되었으며, 장기 저장(-70℃) 동안 안정한 것으로 보고되었다.

레비프^®(Rebif^®)(Serono-재조합 인간 인터페론-β)는, 다발경화증(multiple sclerosis:MS) 치료용 인터페론 치료법으로 최근 개발된 것으로 포유류 세포주로부터 생성된 인터페론(IFN)-베타-1a이다. 권장 국제 일반명(International Non-proprietary Name:INN)은 "인터페론-베타-1a"이다.

모든 단백질계 제약에서와 같이, 치료제로서 IFN-베타를 사용하는데 있어서 극복해야하는 큰 장애는 약제학적 유용성의 손실, 즉 약제학적 제제에서의 불안정성으로 인한 손실이다.

약제학적 제제에서 폴리펩티드 활성과 효능을 위협하는 물리적 불안정성은 용해성 및 불용해성 응집체(aggregate)의 변성 및 형성인 반면에, 화학적 불안정성은 가수분해, 이미드(imide) 형성, 산화, 라세미화(racemization), 및 탈아민화(deamidation)이다. 이들 변화의 몇 가지는 중요한 단백질의 약제학적 활성의 손실 또는 감소를 일으키는 것으로 알려져 있다. 다른 경우에서, 이들 변화들의 정확한 효과는 알려진바 없으나, 얻어진 저품질 산물은 여전히 바람직하지 못한 부작용에 대한 잠재성으로 인하여 약제학적으로 허용될 수 없는 것으로 생각된다.

약제학적 조성물에서 폴리펩티드의 안정화는 여전히 시행 착오가 중요한 역활을 하는 분야로 남아있다(reviewed by Wang (1999) Int. J. Pharm. 185: 129-188; Wang and Hanson(1988) J. Parenteral Sci. Tech. 42: S3-S26). 안정성을 증가시키기 위하여 폴리펩티드 약제학적 제제에 첨가되는 부형제는 완충액, 당, 표면활성제, 아미노산, 폴리에틸렌 글리콜, 및 폴리머를 포함하나, 이들 화학적 첨가제들의 안정화 효과는 단백질의 종류에 따라 다양하다.

미국특허공개 제2002/0172661호에서, IFN 베타 제제는 약 3.0-5.0의 pH와 낮은 이온 강도에 의해 특징지어지는 것으로 기술되어 있다.

현재 IFN-베타 제제는 IFN-베타의 용해성 증가제로서 HSA를 사용하고 있다. 그러나 HSA의 사용은 몇 가지 단점이 있다. HSA는 인간 혈액의 산물이므로 인체로부터 배양되어야만 한다. 위험을 줄이는 단계들을 취하지만, HSA와 같이 인간 혈액 산물을 사용하는 것은 HIV 및 HCV와 같은 인간 바이러스의 잠재적 도입을 가져오게 된다.

결과적으로, 이 단백질의 용해성을 개선하고 응집체 형성에 대한 단백질의 안정화를 위한 생리학적으로 허용가능한 안정화제를 포함하여, 그들의 약제학적 유용성을 높일 수 있는 추가적인 IFN-베타 약제학적 조성물이 필요하게 된다.

본 발명은 인터페론(IFN)을 포함하는 안정화된 약제학적 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것이다. 이들 조성물들은 인간 혈청 알부민(human serum albumin:HSA) 없이도 제조된다. 그러한 조성물들은 이하 "HSA-자유(HSA-free)"라 표시한다. IFN HSA-자유 약제학적 조성물은 인터페론(IFN) 또는 아이소폼, 뮤테인(mutein), 융합된 단백질, 기능성 유도체, 활성 분획(active fraction) 또는 그의 염을 포함하며, 여기서 상기 조성물은 완충액, 아미노산 및 항산화제를 포함하는 용액이다.

본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 조성물은 또한 정균제(bacteriostatic agent)를 포함한다.

여기서 사용된 "인터페론" 또는 "IFN"은 문헌에서 정의된 분자를 포함하는 것으로 의도한 것으로, 예를 들어 상기 "본 발명의 배경"에서 언급된 IFNs의 어떠한 종류라도 다 포함하는 것이다. 특히, IFN-α, IFN-β 및 IFN-γ는 상기 정의에 포함된다. 본 발명에 적당한 IFN-β 는 상업적으로 이용가능하며, 예를 들어 레비프^®(Serono), 아보넥스^®(Avonex: Biogen) 또는 베테페론^®(Betaferon: Schering)를 이용할 수 있다. 인간 기원 인터페론의 사용 또한 본 발명에 따라 바람직하다. 여기 사용된 인터페론 용어는 아이소폼, 뮤테인, 융합 단백질, 기능적 유도체, 활성 분획 또는 그의 염을 포함하는 것이다.

여기 사용된 상기 용어 "인터페론-베타(IFN-베타 또는 IFN-β)"는 생물학적 유동액으로부터 분리하여 얻어지거나 진핵 또는 원핵 숙주 세포로부터 DNA 재조합 기술로 얻어진 인간 기원의 섬유모세포 인터페론뿐만 아니라, 그의 염, 기능성 유도체, 변이체(variants), 유사물 및 활성 분획물을 포함하는 것을 의미한다. 바람직한 IFN-베타는 인터페론 베타-1a를 의미하고자 한다.

여기 사용된 용어 "뮤테인"은 자연 IFN의 하나 이상의 아미노산 잔기가 다른 아미노산 잔기로 치환되거나 결실, 또는 하나 이상의 아미노산 잔기가 IFN의 자연 시퀀스에 추가된 것으로, 야생형 IFN에 비하여 얻어진 산물의 활성이 크게 변하지 않은 IFN의 유사물을 의미한다. 이들 뮤테인은 공지의 합성법 및/또는 부위연관 돌연변이(site-directed mutagenesis) 기술, 또는 다른 공지의 적당한 기술에 의해 제조된다. 바람직한 뮤테인은 예를 들어 쉐파드등(1981) 또는 마크등(1984)에 의해 기술된 것들을 포함한다.

그러한 뮤테인은 IFN에 대하여 실질적으로 유사하거나 더 나은 활성을 갖도록 IFN의 시퀀스를 충분히 복사가능한 아미노산 시퀀스를 갖는다. 인터페론의 생물학적 기능은 당업자에게 잘 알려져 있으며 생물학적 기준은 국립생물의약품표준화연구소(National Institute for Biological Standards and Control: http://immunology.org/links/NIBSC)에서 확립하였고 이로부터 이용가능하다.

INF 활성을 결정하기 위한 생물학적 분석법이 기술되어 왔다. IFN 분석법(assay)은 예를 들어 루비스텐(Rubinstein et al.:1981)에 의해 기술되었다. 그러므로 이것은 일반적인 실험방법에 의해 주어진 뮤테인이 실질적으로 IFN의 활성과 유사 또는 더 나은 활성을 갖는지 여부를 결정할 수 있다.

본 발명에 따라 사용될 수 있는, IFN의 뮤테인, 또는 그를 암호화하는 핵산은 과도한 실험없이 여기 제시된 기술과 정보를 기초로, 당업자가 일상적으로 얻을 수 있는 치환 펩티드(substitution peptide) 또는 폴리뉴클레오티드로서 유한 세트(finite set)의 실질적으로 대응하는 시퀀스를 포함한다.

본 발명에 따른 뮤테인의 바람직한 변화는 "보존성" 치환(conservative substitution)으로 알려진 것이다. 본 발명의 폴리펩티드 또는 단백질의 보존성 아미노산 치환은, 집단내 구성원들 사이의 치환이 분자의 생물학적 기능을 보존하는 충분히 유사한 물리화학적 성질을 갖는 집단 내의 동의 아미노산(synonymous amino acid)을 포함한다. 아미노산의 삽입과 결실이 그들의 기능 변경없이, 특히 만약 삽입이나 결실이 단지 몇몇 아미노산, 예를 들어 30 이하, 바람직하게는 10 이하로 이루어지고 기능 형성에 중요한 아미노산(예를 들어 시스테인 잔기)의 제거나 교체가 없다면, 상기-정의된 시퀀스 내에서 이루어질 수 있다는 것이 분명하다. 그러한 결실 및/또는 삽입에 의해 제조된 단백질 및 뮤테인은 본 발명의 범위 내에 속한다.

바람직하게는, 상기 동의 아미노산 집단은 표 1에 정의되어 있다. 더욱 바람직하게는 상기 동의 아미노산 집단은 표 2에 정의되어 있다; 그리고 가장 바람직한 동의 아미노산 집단은 표 3에 정의되어 있다.

바람직한 동의 아미노산 군

아미노산	동의 아미노산
Ser	Ser, Thr, Gly, Asn
Arg	Arg, Gln, Lys, Glu, His
Leu	Ile, Phe, Tyr, Met, Val, Leu
Pro	Gly, Ala, Thr, Pro
Thr	Pro, Ser, Ala, Gly, His, Gln, Thr
Ala	Gly, Thr, Pro, Ala
Val	Met, Tyr, Phe, Ile, Leu, Val
Gly	Ala, Thr, Pro, Ser, Gly
Ile	Met, Tyr, Phe, Val, Leu, Ile
Phe	Trp, Met, Tyr, Ile, Val, Leu, Phe
Tyr	Trp, Met, Phe, Ile, Val, Leu, Tyr
Cys	Ser, Thr, Cys
His	Glu, Lys, Gln, Thr, Arg, His
Gln	Glu, Lys, Asn, His, Thr, Arg, Gln
Asn	Gln, Asp, Ser, Asn
Lys	Glu, Gln, His, Arg, Lys
Asp	Glu, Asn, Asp
Glu	Asp, Lys, Asn, Gln, His, Arg, Glu
Met	Phe, Ile, Val, Leu, Met
Trp	Trp

더욱 바람직한 동의 아미노산 군

아미노산	동의 아미노산
Ser	Ser
Arg	His, Lys, Arg
Leu	Leu, Ile, Phe, Met
Pro	Ala, Pro
Thr	Thr
Ala	Pro, Ala
Val	Val, Met, Ile
Gly	Gly
Ile	Ile, Met, Phe, Val, Leu
Phe	Met, Tyr, Ile, Leu, Phe
Tyr	Phe, Tyr
Cys	Cys, Ser
His	His, Gln, Arg
Gln	Glu, Gln, His
Asn	Asp, Asn
Lys	Lys, Arg
Asp	Asp, Asn
Glu	Glu, Gln
Met	Met, Phe, Ile, Val, Leu
Trp	Trp

가장 바람직한 동의 아미노산 군

아미노산	동의 아미노산
Ser	Ser
Arg	Arg
Leu	Leu, Ile, Met
Pro	Pro
Thr	Thr
Ala	Ala
Val	Val
Gly	Gly
Ile	Ile, Met, Leu
Phe	Phe
Tyr	Tyr
Cys	Cys, Ser
His	His
Gln	Gln
Asn	Asn
Lys	Lys
Asp	Asp
Glu	Glu
Met	Met, Ile, Leu
Trp	Met

본 발명에 사용되는 IFN의 뮤테인을 얻기 위해 사용될 수 있는 단백질 내 아미노산 치환체들의 생성물들의 예로는 마크등의 미국 특허 제4,959,314호, 제4,588,585호 및 제4,737,462호; 코스(Koths et al:)등의 제5,116,943호, 나멘(Namen et al)의 제4,965,195호; 종(Chong et al)의 제4,879,111호; 및 리(Lee et al)의 제5,017,691호; 에 제시된 방법들을 포함하며, 그리고 미국 특허 제4,904,584호(Shaw et al)에 제시된 리신 치환된 단백질을 포함한다. INF-베타의 특정 뮤테인은 예를 들면 마크(1984)등에 의해 기술되었다.

상기 용어 "융합 단백질(fused protein)"은, 다른 단백질, 예를 들어 혈액에서 연장된 잔류시간을 갖는 다른 단백질에 융합된, IFN, 또는 그의 뮤테인을 포함하는 폴리펩티드를 의미한다. IFN은 그러므로 다른 단백질, 폴리펩티드 류, 예를 들어 면역글로블린 또는 그의 단편에 융합될 수 있다.

여기 사용된 "기능적 유도체"는 IFN의 유도체, 그들의 뮤테인 및 융합된 단백질을 포함하며, 이들은 공지 기술로 N- 또는 C-말단기 또는 잔기 상의 곁사슬로서 발생하는 기능기로부터 제조될 수 있으며, 그들이 약제학적으로 허용가능, 즉 그들이 IFN 활성과 실질적으로 유사한 단백질의 활성을 파괴하지 않고 이를 포함하는 조성물에 독성 성질을 부여하지 않는 한 본 발명에 포함된다. 이들 유도체들은 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 곁사슬(side-chain)를 포함하며, 이들은 항원부위(antigenic site)를 가리고 혈액에서 IFN의 잔류를 연장시킨다. 다른 유도체들은 카르복실기의 지방족 에스테르, 암모니아 또는 일차 또는 이차 아민과 반응하는 카르복실기의 아미드, 아실 모이어티(예를 들어 알카노일 도는 카르보시클릭 아로일기(carbocyclic aroyl group))로 형성된 아미노산 잔기의 유리 아미노기의 N-아실 유도체 또는 아실 모이어티로 형성된 유리 히드록실기(예를 들어 세릴 또는 트레오닐 잔기의 것)의 O-아실 유도체를 포함한다.

IFN의 "활성 분획(active fraction)", 또는 뮤테인 및 융합된 단백질로서, 본 발명은 단백질 분자 단독 또는 여기에 연결된 관련 분자 또는 잔기, 예를 들어 당(sugar) 또는 포스페이트 잔기, 또는 그들의 단백질 또는 당 잔기의 응집체, 모두의 폴리펩티드 사슬의 단편 또는 전구체(precursor)의 단편을 포함하며, 이는 상기 분획이 대응하는 IFN에 비하여 큰 활성 감소 없다는 조건을 만족해야 한다.

상기 용어 "염"은 카르복실기의 염 및 상술된 단백질의 아미노기의 산부가염 또는 그의 유사물을 의미한다. 카르복실기의 염은 공지기술로 형성될 수 있으며 무기염, 예를 들어, 소듐, 칼슘, 암모늄, 철 또는 아연염 등의 무기염, 및 예를 들어 트리에탄올아민, 알기닌 또는 리신과 같은 아민, 피페리딘, 프로카인등으로 형성된 것으로서 유기염기의 염을 포함한다. 산부가염은, 예를 들어 염산 또는 황산과 같은 미네랄 산의 염 및 예를 들어 아세트산 또는 옥살산과 같은 유기산염을 포함한다. 물론, 그러한 염은 본 발명과 관련된 단백질(IFN)의 생물학적 활성, 즉 대응하는 수용체에 결합하여 수용체 신호전달을 시작하는 능력을 보유하여야만 한다.

본 발명에 따라서, 발명의 화합물과 재조합 인간 IFN-베타를 사용하는 것이 더욱 바람직하다.

특정 종류의 인터페론 변이체가 최근 기술되어 왔다. 소위 "공통 인터페론(consensus interferon)"은 IFN의 비자연발생적 변이체이다(미국 특허 제6,013,253호). 본 발명의 바람직한 실시예에 따라서, 본 발명의 화합물들은 공통 인터페론과 함께 사용된다.

여기에 사용된 것처럼, 인간 인터페론 공통(human interferon consensus:IFN-con)은 비자연발생적 폴리펩티드로서, 자연발생적 인간 백혈구 인터페론 아형 시퀀스(naturally-ocurring human leukocyte interferon subtype sequence)의 대부분을 대표하는 IFN-알파의 아집단(subset)에 공통적인 아미노산 잔기들을 우세적으로 포함하고, 모든 아형에 공통적인 아미노산이 없는 적어도 하나 이상의 위치에서, 우세적으로 나타나는 아미노산을 포함하며, 그렇지 않은 경우에는 적어도 하나의 자연발생적 아형에서 그러한 위치에 존재하지 않는 아미노산 잔기를 포함하는 비자연발생적 폴리펩티드를 의미한다. IFN-con은 이에 한정되지는 않지만, 미국특허 제4,695,623호, 제4,897,471호 및 제5,541,293호에 개시된 IFN-con1, IFN-con2 및 IFN-con3으로 나타낸 아미노산 시퀀스를 포함한다. IFN-con을 암호화하는 DNA 시퀀스는 상술된 특허에 기술된 바에 따라 또는 다른 표준 방법에 따라 제조될 수 있다.

또 다른 실시예에서, 상기 융합 단백질은 Ig 융합(Ig fusion)을 포함한다. 상기 융합은 직접, 또는 1 내지 3 아미노산 길이 또는 예를 들어 13 아미노산 잔기 길이만큼 짧은 링커 펩티드(short linker peptide)를 통해 이루어질 수 있다. 상기 링커는 시퀀스 E-F-M(Glu-Phe-Met)의 트리펩티드, 예를 들어 IFN 시퀀스와 면역글로블린 시퀀스 사이에 도입된 Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gln-Phe-Met를 포함하는 13-아미노산 링커 시퀀스일 수 있다. 상기 얻어진 융합 단백질은 혈액내에서 잔류시간의 연장(반감기), 특이적 활성 증가, 발현율 증가, 또는 융합 단백질 정제의 용이성과 같은 개선된 성질을 가질 수 있다.

또 다른 바람직한 실시예에서, IFN은 Ig 분자의 불변부위(constant region)에 융합된다. 바람직하게는, 예를 들어 인간 IgG1의 CH2 및 CH3 영역(domain)과 같은 무거운 사슬 부위에 융합된다. Ig 분자의 다른 아이소폼은, 아이소폼 IgG_{2 ,} IgG₃ 또는 IgG₄, 또는 예를 들어 IgM 또는 IgA와 같은 다른 Ig류와 같은, 본 발명에 따른 융합 단백질의 생성에 또한 적당하다. 융합 단백질은 모노머릭(monomeric) 또는 다인자표현(multimeric), 이종(hetero-) 또는 동종다인자표현(homomultimeric)일 수 있다.

또 다른 바람직한 실시예에서, 상기 기능적 유도체는 하나 이상의 기능기에 부착된 적어도 하나의 모이어티를 포함하며, 이는 아미노산 잔기에 하나 이상의 곁사슬로서 발생한다. 바람직하게는, 상기 모이어티는 폴리에틸렌(PEG) 모이어티이다. PEG화는 예를 들어 국제공개공보 제WO99/55377호에 개시된 것과 같이 공지된 기술로서 수행할 수 있다.

싱글 또는 멀티 도즈(multiple doses)로서 환자에게 투여된 복용량은 여러가지 인자들에 따라 달라질 것이며, 이러한 인자로는 약물동력학적 성질(pharmacokinetic property), 투여의 경로, 환자의 상태 및 특성(성별, 나이, 체중, 건강상태, 키), 증세의 정도, 동시치료, 치료의 빈도 및 원하는 효과등이 있다.

본 발명에 따른 재발이장성 다발성 경화증(relapsing-remitting MS) 치료시 IFN-베타의 복용량은 사용된 IFN-베타의 종류에 따라 달라진다.

본 발명에 따라서, IFN이 상표 베타세론^®(Betaseron) 명으로 상업적으로 이용가능한 E.Coli에서 생성된 재조합 IFN-베타 1b인 경우에는 1인당 약 250~300㎍ 또는 8MIU~9.6MIU의 복용량으로 2일마다 피하조직으로 투여될 수 있다.

본 발명에 따라, IFN이, 상표명 아보넥스^®으로 상업적으로 이용할 수 있는, 중국비단털쥐난소세포(Chinese Hamster Ovary Cell: CHO 세포)에서 생성된 재조합 IFN-베타 1a인 경우에는, 환자 1인당 약 30~33㎍ 또는 6MIU~6.6MIU의 복용량으로 일주일에 한번 근육내 주사로 투여하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따라서, IFN이, 상표명 레비프로 상업적으로 이용가능한, 중국 비단털쥐난소세포(CHO 세포)에서 생성된 재조합 IFN-베타 1a인 경우에는, 환자 1인당

당 22~44㎍ 또는 6MIU~12MIU의 복용량으로 일주일에 3번(three times a week: TIW) 피하조직으로 투여되는 것이 바람직하다.

본 발명에 따라 활성 성분의 투여는 정맥(intravenous), 근육내 또는 피하조직 경로로 투여될 수 있다. 바람직한 IFN의 투여 경로는 피하조직 경로이다. 더 바람직한 투여 경로는 근육내 투여이며, 예를 들어 일주일에 한번 투여될 수 있다.

IFN은 또한 매일 또는 이틀마다 또는 덜 자주 투여될 수 있다. 바람직하게는 IFN은 일주일에 한번, 두번 또는 세번 투여될 수 있다.

상기 용어 "안정성"은 본 발명의 인터페론 제제의 물리적, 화학적, 및 입체형태 안정성(conformational stability)(생물학적 효능 유지성 포함)을 의미한다. 단백질 제제의 불안정성은 화학적 분해(degradation) 또는 단백질 분자의 응집에 의해 발생하며, 이로써 더 높은 차수의 폴리머, 탈글리코실화, 글리코실화의 변형, 산화 또는 다른 구조적 변형을 형성하여 본 발명에 포함된 인터페론 폴리펩티드의 적어도 하나의 생물학적 활성을 축소시킨다.

"안정한"용액 또는 제제는, 그 안에 포함된 단백질의 분해, 변성, 응집, 생물학적 활성의 손실의 정도가 허용가능할 정도로 제어되며 시간에 따라 허용불가능하게 증가하지 않는 것이다. 바람직하게는 상기 제제는 12~24 개월에 걸쳐 표지된 인터페론 활성의 적어도 약 60%, 바람직하게는 적어도 약 70%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 80%를 유지하는 것이다. 본 발명의 안정화된 HSA-자유 IFN 조성물은 2~8℃에서 저장될 때 바람직하게는 적어도 6개월, 12개월, 18개월, 더욱 바람직하게는 약 20개월, 더욱 바람직하게는 적어도 약 22개월, 가장 바람직하게는 약 24개월의 저장기간을 갖는다.

본 발명의 HSA-자유 IFN 약제학적 조성물의 안정성을 모니터하는 방법은 여기에 개시된 실시예에 기술된 방법들을 포함하여, 종래 기술로부터 이용할 수 있다. 그러므로 본 발명의 액상 약제학적 조성물의 저장동안 IFN 응집체 형성은 시간에 따른 용액내 용해성 IFN의 변화를 측정함으로써 용이하게 결정할 수 있다. 용액내 용해성 폴리펩티드의 함량은 IFN의 검출에 맞춘 많은 분석적 측정법에 의해 정량될 수 있다. 그러한 측정법은 하기 실시예에 기술된 것처럼, 예를 들어, 역상(RP)-HPLC 및 UV 흡착 스펙트로스코피를 포함한다.

액상 제제에서 저장기간 동안 용해성 및 불용성 응집체는 예를 들어 상기 실시예에 기술된 것처럼 분석적 초원심분리법을 사용하여 결정되어, 용해성 응집체로서 존재하는 용해성 폴리펩티드 부분과 비응집체로 존재하는 부분, 생물학적으로 활성 분자상태의 부분 사이를 구분할 수 있다. 또한, 속도 초원심 분리법(velocity ultracentrifuation)은 정량적 및 정성적으로 비공유적 및 공유적 올리고머를 검출할 수 있다. 마찬가지로, 새로은 크기 배제(size exclusion)(SE)-HPLC 방법(실시예에 기술되어 짐)은, 이하 "NEW SEC"라 함, 정량적 및 정성적으로 공유적 및 비공유적 올리고머를 검출할 수 있다.

상기 표현 "멀티도즈 사용"은 한번 주입 이상, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6 이상의 주사를 위하여 인터페론 제제의 싱글 바이알(vial), 앰플(ampoul) 또는 카트리지를 사용하는 것을 포함한다. 상기 주사는 적어도 약 12시간, 24시간, 48시간, 바람직하게는 약 12일의 기간동안 이루어진다. 상기 주사는 예를 들어 6, 12, 24, 48 또는 72시간 마다 시간별로 나누어져 있다.

상기 용어 "아미노산"은, 아미노산 또는 아미노산들의 조합을 의미하며, 여기서 주어진 아미노산은 그의 유리 염기형태 또는 그의 염 형태로 존재한다. 아미노산 조합들이 사용될 때, 모든 아미노산들은 유리 염기 형태로 존재할 수 있으며, 모든 아미노산들은 그의 염의 형태로 존재할 수 있으며, 어떤 것은 유리 염기 형태로 존재하는 동안 다른 것들은 그의 염형태로 존재할 수 있다. 본 발명의 방법 또는 제제에 사용되기에 바람직한 아미노산은 하전된 곁사슬을 수반하며, 여기서 "하전된 곁사슬 아미노산(charged side chain amino acid)" 라 하며, 아르기닌, 리신, 아스파르트산, 글루탐산등이 있다. 더욱 바람직하게는 상기 아미노산은 리신이다. 특정 아미노산의 스테레오아이소머(즉, L, D 또는 DL 아이소머), 또는 이들 스테레오아이소머들의 조합들은, 특정 아미노산이 그의 유리 염기 형태 또는 그의 염 형태로 존재하는 한 본 발명의 방법 또는 제제에 사용될 수 있다. 바람직하게는, L-스테레오아이소머가 사용된다. 이들 바람직한 아미노산의 유사물들은 또한 본 발명의 제제에 사용될 수 있다. 상기 용어 "아미노산 유사물"은 자연 발생적 아미노산의 유도체를 의미한다. 적당한 아르기닌 유사물은 예를 들어 아미노구아니딘 및 N-모노에틸 L-아르기닌을 포함한다. 바람직한 아미노산에서와 같이, 아미노산 유사물은 그들의 유리 염기 형태 또는 그의 염 형태로서 본 제제에 사용된다. 아미노산은 여기서 또한 안정제로서 간주된다.

본 발명의 제제에서 사용된 아미노산은 여러가지 스트레스에 대하여 치료학적으로 활성인 폴리펩티드를 보호하여 인터페론-베타 제제의 안정성을 증가 또는/및 유지시킨다. 여기서 상기 용어 "스트레스"는 이에 한정되지 않지만, 열, 냉동, pH, 빛, 진동, 산화, 탈수, 외관(surface), 전단(shear), 냉각/해동, 압력, 중금속, 페놀성 화합물, 변성제등을 포함한다. 상기 용어 스트레스는, 인터페론-베타 함유 제제의 안정성을 조절(즉, 감소, 유지 또는 증가)하는 인자라면 다 포함한다. 아미노산 첨가로 인한 증가 및/또는 유지된 안정성은 농도 연관 방식으로 일어난다. 즉, 인터페론-베타를 함유하는 제제가 아미노산이 없을 때에는 정상적으로 응집체 또는 올리고머 형성을 나타낼 때, 아미노산의 농도를 증가시키면 본 발명의 인터페론-베타를 함유하는 제제의 안정성 증가 및/또는 유지된다. 올리고머 또는 응집체의 형성을 감소시켜서 모노머릭 단백질 안정성을 증가시키기 위한, 본 발명의 제제에 사용되는 특정 아미노산의 함량은 당업자에게 일반적으로 알려진 방법을 사용하여 과도한 실험없이 용이하게 결정될 수 있다.

상기 용어 "완충액" 또는 "생리적으로 허용가능한 완충액"은 제제에 약제학적 또는 수의학적 사용에 안정한 것으로 알려진 것으로 제제에 바람직한 pH 범위에 속하도록 제제의 pH를 조절 또는 유지하는 효과를 갖는 화합물의 용액을 의미한다. 중등도 염기성(moderately basic) pH에 대한 중등도 산성 pH에서 pH를 조절하기에 적당한 완충액은 이에 한정되지는 않지만, 포스페이트, 아세테이트, 시트레이트, 아르기닌, TRIS, 및 히스티딘과 같은 화합물을 포함한다. "TRIS"는 2-아미노-2-히드록시메틸-1,3-프로판디올 및 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 의미한다. 바람직한 완충액은 식염수(saline) 또는 그의 염을 갖는 아세테이트 완충액이다.

"등장제(isotonicity agent)"는 생리적으로 견디어지는 화합물이며 제제에 적당한 긴장성(tonicity)을 부여하여 제제와 접촉하는 세포막을 통과하는 물의 순이동을 막는다. 글리세린과 같은 화합물들은 통상 알려진 농도로 그러한 목적으로 사용된다. 다른 적당한 등장제는, 이에 한정되지는 않지만, 만니톨, 아미노산 또는 단백질(예를 들어 글리신 또는 알부민), 염(예를 들어 소듐 클로라이드), 및 당(예를 들어, 덱스트로스, 만니톨, 수크로오스 및 락토오스)를 포함한다.

상기 용어 "항산화제"는 산소 또는 산소 유도 유리 라디칼이 다른 물질과 상호작용하는 것을 방지하는 화합물을 의미한다. 항산화제는 약제학적 시스템에 공통적으로 첨가되어 물리적 및 화학적 안정성을 높이는 수많은 부형제들 중 하나이다. 항 산화제는 산소에 노출되거나 유리 라디칼 존재시에 어떤 약물이나 부형제와 함께 발생하는 산화적 과정을 줄이거나 유보시키기 위해 첨가된다. 이들 과정들은 때때로 빛, 온도, 수소 집중, 금속 흔적의 존재 또는 과산화물의 존재로 인해 촉매될 수 있다. 설파이트(sulfite), 비스설파이트(bisufite), 티오우레아, 메티오닌, 에틸렌디아민테트라아세트산(ethylenediaminetetraacetic acid: EDTA)의 염, 부틸화된 히드록시톨루엔(butylated hydroxytoluene: BHT), 및 부틸화된 히드록시 아니솔(Butylated hydroxy anisole:BHA)는 종종 약물에서 항산화제로 사용된다. 소듐 EDTA는, 킬레이트화하지 않으면 산화반응을 촉매화할 금속 이온을 킬레이트하여 항산화제의 활성을 증가시키는 것으로 밝혀졌다. 가장 바람직한 항산화제는 메티오닌이다. 항산화제는 여기서 또한 안정제로 의미된다.

메티오닌은 그의 유리 염기 형태 또는 그의 염의 형태로 존재할 수 있다. 메티오닌의 스테레오아이소머(즉, L, D, 또는 DL 아이소머)는, 메티오닌이 유리 염기형태 또는 그의 염의 형태로 존재하는 한 본 발명의 방법 또는 제제에 사용될 수 있다. 바람직하게는, 상기 L-스테레오아이소머가 사용된다. 메티오닌 유사물은 본 발명의 제제에 사용될 수 있다. 상기 용어 "메티오닌 유사물"은 자연 발생하는 메티오닌의 유도체를 의미한다. 상기 메티오닌 유사물은 또한 그의 유리 염기형태 또는 그의 염의 형태로 본 제제에 사용될 수 있다.

항산화제(예를 들어 메티오닌)의 첨가로 증가 및/또는 유지된 안정성은 농도 연관적 방법으로 발생한다. 즉, 인터페론-베타를 함유하는 제제가 정상적으로는 항산화제가 존재하지 않을 때에는 정상적으로 산화 또는 응집체/올리고머 형성을 나타낼 때, 항산화제의 농도 증가로 본 발명의 인터페론-베타를 함유하는 제제의 안정성이 증가 및/또는 유지되게 된다. 산화 또는 올리고머/응집체 형성을 줄이기 위한, 본 발명의 제제에서 사용되는 항산화제(예를 들어 메티오닌)의 함량은 당업자에게 일반적으로 알려진 방법을 사용하여 과도한 실험없이 용이하게 결정될 수 있다.

상기 용어 "정균제"는 항균제로서 작용하도록 제제에 첨가되는 화합물 또는 조성물을 의미한다. 정균제로는 예를 들어 페놀, m-크레졸, p-크레졸, o-크레졸, 클로로크레졸, 벤질알콜, 알킬파라벤(메틸, 에틸, 프로필, 부틸 등), 벤즈알코늄(benzalkonium) 클로라이드, 벤즈에토늄(benzethonium) 클로라이드, 소듐 데하이드로아세테이트(sodium dehydroacetate) 및 티메로살(thimerosal)을 포함한다. 바람직하게는 상기 정균제는 벤질알콜이다.

상기 용어 "표면활성제"는 액체의 표면 장력을 감소시키거나 두 개의 액체들 사이, 또는 액체와 고체들 사이의 계면 장력을 감소시키는 용해성 화합물을 의미하며, 상기 표면 장력은 액체의 표면에 작용하는 힘이며 표면적을 최소화하려는 경향이 있다. 표면활성제는, 약물의 흡수도 또는 목적 조직으로의 약물의 전달을 변경하기 위하여, 저분자량 집단 약물 및 폴리펩티드의 전달을 포함하며, 약제학적 제제에 때때로 사용되어 왔다. 잘알려진 표면활성제로는 폴리소르베이트(polysorbate)(폴리옥시에틸렌 유도체: Tween) 뿐 아니라 플루로닉(Pluronic)을 포함한다.

본 발명의 바람직한 실시예에 따라, 플루로닉 F77^®, 플루로닉 F87, 플루로닉 F88 및 플루로닉 F68, 특히 바람직하게는 플루로닉 ^®F68(BASF, 플루로닉 F68이 플록사머 188로 또한 알려져 있다)로부터 선택된 표면활성제로 인터페론을 제제화하여, 안정한 제제가 얻어졌으며, 이는 바이알 및/또는 전달 장치(예를 들어, 주사기, 펌프, 카테테르(catheter) 등)의 표면에 흡수되어 활성 성분이 손실되는 것을 최소화하였다. 플루로닉 F77^®, 플루로닉 F87, 플루로닉 F88 및 플루로닉 F68, 특히 바람직하게는 플루로닉 ^®F68(BASF, 플루로닉 F68이 플록사머 188로 또한 알려져 있다)로부터 선택된 표면활성제로 인터페론을 제제화하여, 안정한 제제가 얻어졌으며, 이는 산화 및 단백질 응집체의 형성에 더욱 저항적이다.

상기 플루로닉 표면활성제는 에틸렌 옥사이드(EO)와 프로필렌 옥사이드(PO)의 블록 코폴리머이다. 상기 프로필렌 옥사이드 블록(PO)는 두개의 에틸렌 옥사이드(EO) 블록들 사이에 끼워져 있다.

플루로닉 표면활성제는 두 단계 과정에 의해 합성된다:

1. 원하는 분자량의 소수성을 프로필렌 글리콜의 두 개의 히드록실기에 프로필렌 옥사이드를 조절하여 첨가함으로써 제조하였다; 그리고'

2. 에틸렌옥사이드를 첨가하여 친수성기들 사이에 끼워넣었다.

플루로닉 ^®F77에서, 폴리옥시에틸렌(친수성)의 퍼센트는 70%, 소수성(폴리옥시프로필렌)의 분자량은 약2,306Da이다.

플루로닉 F87에서, 폴리옥시에틸렌(친수성)의 퍼센트는 70%이며, 소수성(폴리옥시프로필렌)의 분자량은 약 2,644 Da이다.

플루로닉 F88, 폴리옥시에틸렌(친수성)의 퍼센트는 80%이고, 소수성(폴리옥시프로필렌)의 분자량은 약 2,644Da이다.

플루로닉 F68, 폴리옥시에틸렌(친수성)의 퍼센트는 80%이고, 소수성(폴리옥시프로필렌)의 분자량은 약 1,967Da이다.

플루로닉 F77의 전형적인 성질은 다음에 나타내었다.:

평균분자량: 6600;

Melt/pour point: 48^oC　;

물리적형태 @ 20^oC　: 고체;

점도 (Brookfield) cps: 480 [액체 at 25^oC, 페이스트 at 60^oC and 고체 at 77^oC];

표면장력, dynes/cm @ 25^oC;

0.1% Conc.　: 47.0

0.01% Conc.　: 49.3

0.001% Conc.: 52.8

계면장력(Interfacial tension), dynes/cm @ 25^oC vs. Nujol;

0.1% Conc.　: 17.7

0.01% Conc.　: 20.8

0.01% Conc.　: 25.5

드레이브 웨팅(Draves Wetting), Seconds 25^oC

1.0% Conc.: > 360

0.1% Conc.: > 360

기포 높이(Foam Height)

로스마일(Ross Miles), 0.1%, mm @ 50^oC: 100

로스마일, 0.1%, mm @ 26^oC: 47

다이나믹(Dynamic), 0.1%, mm @ 400 ml/min: > 600

수용액에서 구름점(Cloud point in aqueous solution), ⁰C

1% Conc.: >100

10% Conc.: >100

HLB (hydrophile-lipophile balance): 25

플루로닉 F87의 전형적인 성질은 다음과 같다.:

평균분자량: 7700;

Melt/pour point: 49^oC　;

물리적 형태 @ 20^oC　: 고체;

점도 (Brookfield) cps: 700 [액체 at 25^oC, 페이스트 at 60^oC 및 고체 at 77^oC];

표면장력, dynes/cm @ 25^oC;

0.1% Conc.　: 44.0

0.01% Conc.　: 47.0

0.001% Conc.: 50.2

계면장력, dynes/cm @ 25^oC vs Nujol;

0.1% Conc.　: 17.4

0.01% Conc.　: 20.3

0.01% Conc.　: 23.3

드레이브 웨팅, Seconds 25^oC

1.0% Conc.: > 360

0.1% Conc.: > 360

기포 높이

로스마일, 0.1%, mm @ 50^oC: 80

로스마일, 0.1%, mm @ 26^oC: 37

다이나믹, 0.1%, mm @ 400 ml/min: > 600

수용액에서 구름점, ⁰C

1% Conc.: >100

10% Conc.: >100

HLB (hydrophile-lipophile balance): 24

플루로닉 F88의 전형적인 성질은 다음과 같다:

평균분자량: 11400;

Melt/pour point: 54^oC　;

물리적형태 @ 20^oC　: 고체:

점도 (Brookfield) cps: 2300 [액체 at 25^oC, 페이스트 at 60^oC and 고체 at 77^oC];

표면 장력, dynes/cm @ 25^oC;

0.1% Conc.　: 48.5

0.01% Conc.　: 52.6

0.001% Conc.: 55.7

계면 장력, dynes/cm @ 25^oC vs Nujol;

0.1% Conc.　: 20.5

0.01% Conc.　: 23.3

0.01% Conc.　: 27.0

드레이브 웨팅, Seconds 25^oC

1.0% Conc.: > 360

0.1% Conc.: > 360

기포 높이

로스 마일, 0.1%, mm @ 50^oC: 80

로스 마일, 0.1%, mm @ 26^oC: 37

다이나믹, 0.1%, mm @ 400 ml/min: > 600

수용액에서 구름점, ⁰C

1% Conc.: >100

10% Conc.: >100

HLB (hydrophile-lipophile balance): 28

플루로닉 F68의 전형적인 성질은 다음과 같다:

평균 분자량: 8400;

Melt/pour point: 52^oC　;

물리적 형태 @ 20^oC　: 고체;

점도 (Brookfield) cps: 1000 [액체 at 25^oC, 페이스트 at 60^oC and 고체 at 77^oC];

표면 장력, dynes/cm @ 25^oC;

0.1% Conc.　: 50.3

0.01% Conc.　: 51.2

0.001% Conc.: 53.6

계면 장력, dynes/cm @ 25^oC vs Nujol;

0.1% Conc.　: 19.8

0.01% Conc.　: 24.0

0.01% Conc.　: 26.0

드레이브 웨팅, Seconds 25^oC

1.0% Conc.: > 360

0.1% Conc.: > 360

기포 높이

로스마일, 0.1%, mm @ 50^oC: 35

로스마일, 0.1%, mm @ 26^oC: 40

다이나믹, 0.1%, mm @ 400 ml/min: > 600

수용액에서의 구름점, ⁰C

1% Conc.: >100

10% Conc.: >100

HLB (hydrophile-lipophile balance): 29

상기 표시된 것과 유사한 성질을 갖는 다른 폴리머 또한 본 발명의 제제에 사용될 수 있다. 바람직한 표면활성제는 플루로닉 F68이고, 유사한 성질을 갖는 표면활성제이다.

플루로닉, 특히 플루로닉 F68은 원하는 저장기간(예를 들어 12 내지 24 개월) 동안 인터페론 안정성을 유지하기에 충분한 농도, 및 또는 바이알, 앰플 또는 카트리지 또는 주사기와 같이 표면에 흡착으로 인한 단백질 손실을 방지하기에 충분한 농도로 존재하는 것이 바람직하다.

액상 제제에서 플루로닉, 특히 플루로닉 F68의 바람직한 농도는 약 0.01mg/ml ~10mg/ml, 더욱 바람직하게는 0.05mg/ml~5mg/ml, 더욱 더 바람직하게는 0.1~2mg/ml, 가장 바람직하게는 약 0.5mg/ml이다.

제제에서 IFN-베타 1a의 바람직한 농도는 10㎍/ml~800㎍/ml, 더욱 바람직하게는 20㎍/ml~500㎍/ml, 더욱 더 바람직하게는 30㎍/ml~300㎍/ml, 가장 바람직하게는 22, 44, 88, 또는 264㎍/ml이다.

본 발명의 제제는 약 3.4 및 5.5 사이의 pH, 바람직하게는 약 4.7pH를 갖는다. 바람직한 완충액은 바람직한 짝이온인 소듐 또는 포타슘 이온을 갖는 아세테이트이다. 아세테이트 식염수 완충액은 공지기술로 잘 알려져 있다. 총 용액에서 완충액의 농도는 약 5mM, 9.5mM, 10mM, 50mM, 100mM, 150mM, 200mM, 250mM, 및 500mM 사이에서 다양하게 변할 수 있다. 바람직하게는 완충액의 농도는 약 10mM이다. 특히 바람직한 완충액은 pH 4.7±0.2의 아세테이트 이온을 갖는 10mM 완충액이다.

바람직하게, 본 발명의 조성물에서, 항산화제, 예를 들어 메티오닌은 약 0.01 내지 약 5.0mg/ml, 더욱 바람직하게는 0.05 내지 0.3mg/ml, 가장 바람직하게는 약 0.12mg/ml의 농도로 존재한다.

바람직하게는, 본 발명의 조성물에서, 아미노산, 예를 들어 리신은 약 1 내지 100mg/ml, 더욱 바람직하게는 10 내지 약 50mg/ml, 가장 바람직하게는 약 27.3mg/ml의 농도로 존재한다.

본 발명은 액상 제제를 포함한다. 바람직한 용매는 주사제의 경우 물이다.

액상 제제는 모노도즈 또는 멀티도즈일 수 있다. 본 발명의 멀티도즈용 액상 인터페론 제제는 페놀, m-크레졸, p-크레졸, o-크레졸, 클로로크레졸, 벤질알콜, 알킬파라벤(메틸, 에틸, 프로필, 부틸등), 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드, 소듐 데히드로아세테이트 및 티메로살과 같은 정균제를 포함하는 것이 바람직하다. 특히 바람직한 것은 페놀, 벤질알콜 및 m-크레졸, 더욱 바람직하게는 벤질알콜이다. 상기 정균제는 멀티도즈의 주사기간, 약 12 또는 24시간에서 약 12일, 바람직하게는 약 6 내지 12일 동안에 걸쳐 반드시 무균인 제제(주사에 적당한)를 유지시키기에 효과적인 농도를 줄수 있는 함량으로 사용된다. 상기 정균제는 약 0.1% 내지 약 2.0%(정균제의 질량/용매의 질량), 더욱 바람직하게는 0.2%~1.0%의 농도로 존재하는 것이 바람직하다. 벤질알콜의 경우에 0.2~0.3%의 농도가 바람직하다.

그러나, 보존제, 예를 들어 벤질 알콜의 사용은, 멀티도즈 제제에 한정되지 않으며, 모노도즈 제제에 또한 사용될 수 있다. 본 발명의 일 실시예는 벤질알콜을 포함하는 싱글도즈 제제로 이루어진다.

본 발명에 따른 제제의 또 다른 실시예에서, 실온에서 또는 28℃에서, 인터페론 베타는 적어도 약 96% 또는 적어도 약 98%로 그의 모노머 형태(응집체가 4% 이하, 바람직하게는 2% 이하)로 존재하며, 이하 침전속도 분석법(sedimentation velocity analysis)으로 측정되었다.

바람직한 제제는 인터페론-베타 1a, 벤질알콜, 리신, 메티오닌, 플루로닉 F-68 및 수용성 아세테이트 완충액으로 이루어져 바람직하게 pH를 3.7~4.7로 조정한다.

본 발명의 제제에서 인터페론의 범위는, 재구성할 때 나타나는 농도가 약 1.0㎍/ml~약 50mg/ml의 농도가 되는 함량을 포함하나, 더 낮거나 더 높은 농도에서도 작용가능하며, 사용하는 전달 운반체에 따라 달라지며, 예를 들어 용액 제제는, 경피패취(transdermal patch), 호흡기(pulmonary), 점막관통(transmucosal), 또는 삼투압(osmotic) 또는 마이크로 펌프 방법과 다를 것이다. 상기 인터페론 농도는 약 5.0㎍/ml~약 2mg/ml, 더욱 바람직하게는 10㎍/ml~약 1mg/ml, 가장 바람직하게는 약 30㎍/ml~100㎍/ml이다.

본 발명의 제제는 24개월의 기간에 걸친 포장시간 동안에 적어도 약 60%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 70%, 가장 바람직하게는 적어도 약 80%의 인터페론 활성을 보유하는 것이 바람직하다.

또 다른 바람직한 실시예에서, 본 발명은 상술한 것처럼 액상 약제학적 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.

또 다른 바람직한 실시예에서, 본 발명은 상술한 것처럼 활성 성분 및 부형제를 포함하는 용액을 넣는 단계를 포함하는 포장된 약제학적 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.

또 다른 바람직한 실시예에서, 본 발명은 상술한 것처럼 약제학적 조성물을 포함하는 바이알과, 그러한 용액을 첫번째 사용후 24시간 또는 그 이후의 기간 동안 유지될 수 있다고 기재되어 있는 서면 자료(written material)를 포함하는 인간 약제학적 용도를 위한 제품을 제공한다. 바람직하게는 상기 서면 자료는 상기 용액이 약 12일까지 유지될 수 있다고 표시한다.

멀티도즈 제제의 첫번째 사용후, 이것은 적어도 약 24시간, 바람직하게는 적어도 약 4, 5 또는 6일, 더욱 바람직하게는 12일 동안 유지 및 사용될 수 있다. 첫번째 사용후, 상기 제제는 실온 이하(즉 약 25℃ 이하), 더욱 바람직하게는 약 10℃, 더욱 바람직하게는 2-8℃, 가장 바람직하게는 약 4-6℃에서 보관되는 것이 바람직하다.

본 발명의 제제는 완충용액에 계산된 함량의 부형제를 첨가하고 나서 인터페론을 첨가하는 단계를 포함하는 과정에 의해 제조될 수 있다.

이후 얻어진 용액을 바이알, 앰플 또는 카트리지에 넣는다. 이 과정에서 여러가지 변형은 당업자가 잘 알 수 있을 것이다. 예를 들어, 성분들의 첨가 순서, 추가적 첨가제가 사용될지 여부, 제제가 제조되는 온도 및 pH 들은 모두 농도 및 사용된 투여방법의 수단을 최적화하기 위한 모든 인자들이다.

멀티도즈용 제제의 경우에, 정균제는 활성성분(인터페론)을 포함하는 용액에 첨가되거나 선택적으로 별도 바이알 또는 카트리지에 보관된 후 사용시 활성성분을 포함하는 용액에 혼합될 수 있다.

본 발명의 제제는 알려진 장치를 사용하여 투여될 수 있다. 이들 싱글 바이알계를 포함하는 예로는 레비젯^®(Rebiject)와 같이 용액을 전달하기 위한 자동 주사기 또는 펜-주사기를 포함한다.

본 발명에서 청구된 제품은 포장 물질을 포함한다. 상기 포장재료는 관리기관이 요구하는 정보외에 제품이 사용될 수 있는 조건등을 제공한다. 본 발명의 포장 재료는 환자에게 사용법, 만약 필요하다면 최종 용액을 제조하여 그러한 용액을 2개의 바이알, 젖음/건조, 제품에 대하여 24시간 이상의 기간동안 사용하는 사용법을 제공한다. 싱글 바이알, 용액 제품에 대해서는, 라벨이 그러한 용액이 24시간 이상의 기간동안 사용될 수 있다는 것을 나타낸다. 현재 청구된 제품은 인간 약제학적 제품 사용에 유용하다.

안정한 보전된 제제는 맑은 용액으로 환자에게 공급될 수 있다. 상기 용액은 싱글용도일 수 있거나 여러번 재사용될 수 있으며 환자 치료의 싱글 또는 멀티 사이클을 만족시킬 수 있어 현재 이용가능한 것보다 편리한 치료방법을 제공할 수 있다.

여기 기술된 안정하거나 보존된 제제 또는 용액에서 인터페론은 본 발명에 따라, SC 또는 IM 주사; 경피, 호흡기, 점막관통, 이식물(implant), 삼투압 펌프, 카트리지, 마이크로 펌프, 경구, 또는 당업자가 예상할 수 있는 다른 수단을 통해 여러가지 방법으로 환자에게 투여될 수 있다.

상기 용어 "바이알"은 제어된 멸균 상태로 고체 또는 액체 형태로 인터페론을 보유하기에 적당한 광범위한 저장소를 의미한다. 여기 사용된 바이알의 예로는 앰플, 카트리지, 블리스터 팩키지(blister package) 또는 주사, 펌프(삼투압 포함), 카테테르, 경피 패취, 호흡기 또는 점막관통 스프레이를 통해 환자에게 인터페론을 전달하기에 적당한 다른 저장소를 포함한다. 비경구적(parenteral), 폐(pulmonary), 점막관통 또는 경피 투여용 포장 제품에 적당한 바이알은 당업계에 잘 알려져 있다.

본 발명의 범위내의 상기 용어 "치료"는 질병 개시후 병리 발달(pathological development)의 완화, 축소, 감소 또는 쇠약을 포함하는 질병의 진행에 이로운 영향을 주는 어떠한 효과를 의미한다.

IFN 또는 아이소폼, 뮤테인, 융합 단백질, 기능적 유도체, 활성 분획 또는 염을 포함하는 본 발명의 약제학적 조성물은 이 폴리펩티드를 가지고 하는 치료법에 반응하는 임상적 징후(clinical indication)의 진단, 예방 및 치료(국부적 또는 체계적)에 유용하다. 그러한 임상적 징후는, 다발성 경화증을 포함하는 예를 들어 중추신경계(central nervous system:CNS), 뇌, 및/또는 척수(spinal cord)의 질환 또는 질병; 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 건선(psoriasis), 크론병(Crohn's disease)을 포함하는 자가면역질환; 및 가슴, 전립샘(prostate), 방광(bladder), 콩팥 및 결장암(colon cancer)을 포함하는 암을 포함한다.

저널 또는 초록등을 포함하는, 여기 인용된 모든 참조문헌들은, 공개되거나 공개되지 않은 미국 또는 해외특허출원, 등록된 미국 또는 해외특허 또는 다른 참조문헌들은 전체적으로 참고로서 이에 통합되어 있으며, 모든 데이터, 표, 도면 및 인용된 참조문헌에 나타난 모든 내용들이 본 발명에 통합되어 있다. 추가적으로, 여기 인용된 참조 문헌에 인용된 참조문헌들의 전체 내용은 또한 전체적으로 참고로 본 발명에 통합되어 있다.

알려진 방법을 참고로하여, 종래 방법 단계, 알려진 방법 단계 또는 종래 방법들은 본 발명의 양태, 설명 또는 실시예 어느 것도 관련기술에서 개시, 교시 또는 제안된 것으로 알려진 것은 아니다.

특정 실시예의 이전 설명은 본 발명의 일반적인 성질을 너무나 완전히 밝혀서 다른 이들이 관련 업계의 통상적 지식(여기서 인용된 참조 문헌의 내용을 포함)을 사용하여 과도한 실험없이, 본 발명의 일반적인 개념에서 벗어나지 않고도 특정의 실시예와 같이 여러가지 응용하도록 용이하게 변형 또는 적용할 수 있다. 그러므로, 그러한 적용 및 변형은 여기 제시된 가르침 및 지시를 기초로 하여, 개시된 실시예의 등가의 범위 내인 것이다. 여기의 어법(phraseology) 또는 용어법(terminology)는 설명의 목적이며 그러한 용법 및 어법이 당업자에 의해 당업자의 지식과 함께 여기 제시된 가르침과 안내에 따라 해석될 수 있다.

실시예 1-분석방법

크기배제(SE)-HPLC, 여기서 이하 "new SE-HPLC"또는 "NEW SEC"라 함, 및 속도 초원심분리법(AUC)을 사용하여 재조합 인간 인터페론-베타 1a(r-h 1IFN-베타 1a 또는 r-hβIFN-1a)의 응집체 및 올리고버 정도를 측정하였다. 이하 나타낸 SE-HPLC 및 AUC방법은 공유적 및 비공유적 올리고머를 정량적 및 정성적으로 검출할 수 있다.

a. SE- HPLC - 순도 시험

총 응집체 함량의 검출은 TSK G2000SWXL 컬럼(TosoHaas) 또는 BioSuite(Waters)로 수행하고; 용리액은 동용매 모드(isocratic mode)로 0.5mL/min에서 50mM 소듐 아세테이트 완충액, 50mM NaCl pH 3.8로 수행하였으며; 파장을 215nm로 설정하였다. 실행시간은 30분이었다.

88mcg/ml의 샘플을 100㎕을 주사하면서 분석하였다.

b. 침전 속도 분석법- AUC

1. 방법 설명

샘플들을 12mm 광로길이(optical pathlength)를 갖는 2-채널 활성탄-에폰 센트리피스(2-channel charcoal-epon centrepieces)로 세포내로 부하시켰다. 상기 센터피스와 사파이어 윈도우를 세척제로 세정하고 물이 스며들게하여 가능한 가장 깨끗한 표면을 갖도록 하였다. 상기 대응하는 위약(placebo)이 대조 채널(상기 도구는 이중선 분광광도계와 같은 기능을 함: dual-beam spectrophotometer)에 부하시켰다. 이들 약물 투입된 세포들을 AN-50-Ti 분속 로터(rotor)에 넣고, 벡크만 옵티마 XL-1 분석 원심분리기(Beckman Optima XL-1 analytical centrifuge)에 넣고 20℃로 맞추었다. 상기 로터를 3000rpm으로 하고 상기 샘플을 스캐닝(흡광 피크, 280nm에서)하여 적절하게 세포 부하되었는지 확인한다. 상기 로터를 최종 속도 50000rpm으로 맞추었다. 상기 로터 속도로 각 샘플에 대하여 50 스캐닝을 하여 기록하였다.

데이터는 피터 셕크에 의해 N.I.H에서 개발된 c(s) 방법을 사용하여 분석하고 그의 분석 프로그램 SEDFIT(버전 8.7; Schuck, P.(2000). Size-distribution analysis of macromolecules by sedimentation velocity ultracentrifugation and Lamm equation modelling. Biophys . J. 78, 1606-1619)으로 실행하였다.

상기 연구에서, 분해능(resolution)을 증가시키기 위하여, 상기 데이터 상의 확산 영향을 모형화하면서, 많은 새로운 데이터들을 직접적으로 적용하여 침강계수(sedimentation coefficient)의 분포를 유도하였다. 상기 방법은, 모든 종들이 동일한 전체적인 유체역학 형태(hydrodynamic shape)[구에 대한 마찰계수 비(frictional coefficient ration relative to that for a sphere), f/fo에 의해 정의되는 형태]를 갖는다는 가정을 기초로 침강계수의 각 값에 대하여 확산계수를 할당하는 것에 의해 이루어진다. 상기 f/fo 값을 다양하게 변화시켜 각 샘플에 대한 데이터의 가장 최선의 전체 적합도(overall fit)를 찾는다. 상기 분포도는 0.51 최고-엔트로피 스므싱(maximum-entropy smoothing)을 사용하여 계산되었다.

2. 분석 파라미터

- 로터 타입 8-홀 로터

- 로터 속도 50k rpm

- 센터피스 활성탄 에폰

- 채널 길이 12mm

- AUC 동작동안 온도 20℃

- 검출 파장 280nm

- 샘플 부피 432mcl

- 대조군 부피 442mcl

3. 장치 및 소프트웨어

분석 초원심분리기 모델 XL-1(벡크만 컬터:Beckman Coulter)

SEDFIT 버전 8.70b 소프트웨어(Peter Schuck-National Institutes of Health)

Origin 버전 6.03 소프트웨어(베크만 컬터)

Proteome Lab XL-AXL-I 버전 5.0 소프트웨어(벡크만 컬터)

c. RP- HPLC - QUANT - HPLC 에 의한 IFN -β-1a 정량

하기 기술된 역상 방법은 샘플에서 IFN-β-1a 의 정량을 할 수 있게 한다.

상기 단백질의 정량은 C4, Wide-Pore 부틸 5㎛, 4.6x250mm 컬럼(베이커: Baker)로 수행한다; 파장은 214nm로 설정되고 용리액은 다음 이동상 및 기울기를 사용하여 1mL/min에서 수행한다.

A= 물/ 트리플루오로아세트산 0.1%-B = 아세토니트릴 / 트리플루오로아세트산 0.1%-C= 아세토니트릴

샘플 그 자체 50㎕를 주입하면서 샘플을 분석하였다(88mcg/mL 샘플)

시간(분)	% 용리액 A	% 용리액 B	% 용리액 C
0	70	30	0
5.0	70	30	0
6.0	58	42	0
15.0	57	43	0
30.0	46	54	0
35.0	45	55	0
40.0	40	60	0
40.1	20	80	0
45.0	20	80	0
45.1	0	0	100
50.0	0	0	100
50.1	70	30	0
65.0	70	30	0

운전시간 = 65 분

상기 샘플의 정량은 대조 기준 물질에 의해 준비된 0.0125mg/ml-0.2mg/ml의 범위에서 기준 커브와 대비하여 수행된다.

d. 역상 (RP)- HPLC - DEG /OX에 의한 순도

하기 기술된 역상 방법은, 무손상 분자와 다르게 용리하는, IFN-β-1a 산화된 형태를 검출할 수 있게 한다.

산화된 형태의 정량은 C4, 40℃로 온도 조절된 Supelcosil LC-304 컬럼(Supelco)에서 수행되며; 상기 파장이 208nm로 설정되며 상기 용리는 다음 이동상과 구배(gradient)를 사용하여 1mL/분에서 수행된다.

A=물 60%/아세토니트릴 40%/헵타플루오로부티르산 0.14%-B=물 20%/아세토니트릴 80%/헵타플루오로부티르산 0.14%-C=물 20%/아세토니트릴 80%/트리플루오로아세트산 0.1%

구배:

0'	70% A	30% B	0% C
5'	70% A	30% B	0% C
58'	62% A	38% B	0% C	커브 6
63'	0% A	100% B	0% C	커브 1
68'	0% A	0% B	100% C	커브 1
69'	70%A	30% B	0% C	커브 6

운전시간: 96분(70분 +26분 평형)

샘플들을 그대로 200㎕(88mcg/mL 샘플)을 주사하여 분석하였다.

e. 세포병변효과 저해 생물학적 분석( Cytopathic effect inhibition bioassay- CPE )

생물학적 효능( biopotency )(항바이러스 활성:Antiviral activity)

IFN-β-1a의 항바이러스 활성을 생포병변효과(cytopathic effect: CPE) 저해 생물학적 분석법에 의해 측정하였다.

상기 생물학적 활성은 바이러스의 세포병변효과에 대한 세포의 IFN-β 유도성 보호(WISH cell-인간 양수 조직)를 기초로 한 항바이러스 분석법에 의해 측정하였다.

인터페론의 생물학적 분석 원리는 수포성 구내염 바이러스(vesicular stomatitis virus: VSV)와 같은 수많은 바이러스가 세포 사망을 일으켜서 생체염색(vital staining)에 의해 가시화될 수 있다는 사실을 기초로 한 것이다.

상기 세포병변효과는 인터페론에 의한 세포 보호를 정량화하는 데 사용될 수 있다.

상기 분석법은 세포 사망의 직접적인 측정에 의해 수행되며, 이는 살아있는 세포에 의해 수집된 색소 테트라졸륨 염(dye tetrazolium salt) MTT(디메틸티오테트라졸륨)의 함량에 의해 평가된다. 상기 방법은 적정량의 통계적 평가를 위해 3-포인트 평형선 분석(three-point parallel line assay)과 보호된 세포의 퍼센트를 자동 분광광도분석적(spectrophometric) 결정을 이용한다.

절차:

상기 분석법은 마이크로티터(microtiter) 플레이트에서 수행하였다.

a. 50㎕의 세포 배양 배지(MEM/5% FBS)를 각 웰(well)에 첨가한다.

b. 100㎕의 IFN-β-1a 샘플 또는 표준 용액(60-100IU hIFN-β/ml)을 상기 웰에 첨가하고 세번 1:1.5 단계 희석을 플레이트의 모든 열(row)을 수행하였다.

c. WISH 세포(0.78-0.82 x 10⁶ cells/ml) 의 50㎕ 현탁액을 각 웰에 첨가하고 상기 플레이트를 37℃에서 18~20 시간 동안 5%CO₂ 습도조절 인큐베이터(humidified incubator)에서 배양한다.

d. VSV 현탁액을, 세포 대조웰만을 제외하고, MEM/2.5%FBS로 충진된 각 웰에 첨가하였다.

e. 상기 플레이트를 37℃에서 24 시간 동안 5% CO₂ 습도조절 인큐베이터(humidified incubator)에서 배양시킨다.

f. (1) 적어도 80%의 세포 손상이 VSV 대조군 열에서 발생하고

(2) IFN-β 표준액의 존재하에서 보호의 퍼센트 평균값이 비희석된 표준액에서 84%, 1:1.5 희석액에 대하여 45%, 1:3 희석액에 대하여 27%인 것을 도립 현미경(inverted microscope)로 확인한 후,

상기 배양액들을 특정 염료 MTT로 염색한다.

g. 색채의 농도는 592nm에서 자동 분광광도 판독으로 결정한다.

h. IFN-β-1a 활성을 정량하기 위하여, OD 판독은 컴퓨터 프로그램(Colombo Software)로 분석한다.

실시예 2 HSA -자유 베타-1a 제제의 안정화

다음 실험은 여러 온도(2-8℃, 25℃ 및 40℃)에서 r-h IFN-베타 1a 제제의 저장시 항산화제(즉, 메티오닌) 및 아미노산(즉, 리신)을 포함하는 제제에 의해 나타나는 보호효과를 확인하기 위하여 수행하였다. 다음 분석 실험 및 방법은 진행중 사용되었다(실시예 1 참조):

- 생물학적 활성(시험관 내 생물학적 분석)

- 분석법(RP-HPLC 방법)

- 산화 생성물(Deg-ox 방법)

- 다이머/응집체(NEW SEC-HPLC 및 AUC, 두 방법 모두 공유 및 비공유 올리고머를 검출할 수 있다)

- 정량적 RP-HPLC 방법(Quant-HPLC)

-pH (전위차 방법: potentiometric method)

결과를 표 6 내지 8에 나타내었다.

1. 절차

a. 상기 제제를 2-8℃에서 저장/선적된 덩어리를 사용하여 제조하였다. 덩어리내 r-h IFN-베타 1a의 농도는 약 0.5mg/mL이다.

b. 리신(포인트 2에서 나타낸 것처럼)을 포함하는, 상기 제제는 운반체내 약품 물질을 희석하여 제조하여 최종 조성물(r-h IFN-베타 1a 농도 88mg/mL)을 얻는다.

c. 상기 화합물화된 용액은 0.2 마이크로나일론 막을 통해 무균적으로 여과되고 멸균 용기 내로 수집되며, 상기 주사기는 여과장치를 사용하여 0.5mL로 여과된다.

d. 상기 샘플을 2-8℃, 25℃ 및 40℃의 항온 캐비넷에 저장하고 약 2 달간의 저장기간 동안(40℃에서 저장된 샘플들은 1-3주) 여러가지 방법/시험을 사용하여 안정성 계획에 따라 시험하였다.

2. 제제의 조성물

a. 0.088mg/mL r-h 인터페론-베타 1a

b. 27.3mg/mL L-리신 모노히드로클로라이드(코드 1.05701, Merck)

c. 0.12 mg/mL L-메티오닌(1.05707, Merck)

d. 0.5mg/mL 플루로닉 F-68(Pluronic F-68)(Lutrol F 68 DAC, USP/NF, Basf), 5163315

e. 10mM 소듐 아세테이트 pH 4.7

3. 결과:

2-8℃에서 저장

2-8℃
	T=0	4w	6w	8w
Quant-HPLC(mcg/syr)	39.0	38.2	39.8	39.2
Deg-ox HPLC(산화된 %)	1.3	1.5	1.5	1.5
AUC(% 모노머)	98.7	-	98.8	-
New-SEC(% 모노머)	100.0	100.0	100.0	100.0
PH	4.7	4.7	-	4.7
생물학적 분석(MIU/mL)	24.1	24.6	-	-
삼투질농도(osmolarity)(OSM/kg)	0.303	-	-	-

25℃에서 저장

25℃
	T=0	2w	4w	6w	8w
Quant-HPLC(mcg/syr)	39.0	42.8	38.0	39.4	37.8
Deg-ox HPLC(산화된 %)	1.3	1.5	1.4	2.3	2.3
AUC(% 모노머)	98.7	99.0	-	98.2	-
New-SEC(% 모노머)	100.0	100.0	100.0	100.0	100.0
PH	4.7	4.7	4.7	-	4.7
생물학적 분석(MIU/mL)	24.1	-	24.0	-	-

40℃에서 저장

40℃
	T=0	1w	3w
Quant-HPLC(mcg/syr)	39.0	37.8	34.9
Deg-ox HPLC(산화된 %)	1.3	1.9	3.4
AUC(% 모노머)	98.7	99.6	-
New-SEC(% 모노머)	100.0	100.0	100.0
PH	4.7	4.7	4.6

4. 결론

저장성 연구는 리신, 메티오닌 및 플루로긴 F-68을 포함하는 제제 또는 조성물이 2-8℃뿐 아니라 25℃에서조차 8주까지 매우 안정하게 유지되고 있는 것을 보여주었다. 그들은 모노머 퍼센트 수준의 형태로 40℃에서 3주까지 안정하게 유지된다(모노머 퍼센트는 항상 98% 이상이다). 두 개의 다른 방법들은 이들 결과를 확인하였다(AUC 및 NEW-SE-HPLC). 그러므로, 본 발명의 제제는 바람직하게는 아미노산 및 항산화제를 함께 포함한다. 바람직하게는, 표면활성제가 상기 조성물에 더 첨가된다.

바람직하게, 상기 아미노산은 리신이고 상기 항산화제는 메티오닌이다.

바람직하게, 상기 표면활성제는 트윈(예를 들어 트윈 20: tween 20), 플루로닉^® F77, 플루로닉 F87, 플루로닉 F88 및 플루로닉 F68로부터 선택된다. 더욱 바람직하게는 상기 표면활성제는 플루로닉 F68이다.

바람직하게는 상기 제제는 pH 3.5~5.5로 설정된다. 더욱 바람직하게는 상기 제제는 4.7pH로 설정된다.

바람직하게는, 리신은 약 1mg/ml~ 약 100mg/ml의 농도로 존재한다. 더욱 바람직하게는, 리신은 약 27.3mg/ml의 농도로 존재한다. 바람직하게는 상기 표면활성제는 약 0.01mg/ml~10mg/ml의 농도로 존재한다. 더욱 바람직하게는, 상기 표면활성제는 0.5mg/ml의 농도로 존재한다. 바람직하게는 상기 항산화제는 약 0.01~ 약 5.0mg/ml의 농도로 존재한다. 더욱 바람직하게는, 상기 항산화제는 약 0.12mg/ml의 농도로 존재한다. 바람직하게는 상기 인터페론은 약 10㎍/ml~약 800㎍/ml의 농도로 존재한다. 바람직하게는 상기 인터페론은 약 88㎍/ml의 농도로 존재한다.

References

1. Derynk R. et.al., Nature 1980; 285, 542-547

2. "인터페론의 편리하고 빠른 병변효과 저해 분석법(A Convenient and Rapid Cytopathic Effect Inhibition Assay for interferon)"[Familletti, P.C., Rubinstein, S., and Pestka S. 1981, in Methods in Enzymology, Vol. 78(S. Pestka ed.), Academic Press, New York, 387-394;

3. Mark D.F. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81(18) 5662-5666(1984)

4. Pestka S. (1986) "Interferon Standards and General Abbreviations, in Methods in Enzymology(S. Pestka, ed.), Academic Press, New York 119, 14-23

5. Rubinstein, S., Familletti, P.C., and Pestka S. Convenient Assay for Interferons, J. Virol 1981; 37, 755-758

6. Shepard H. M. et al., Nature 1981; 294, 563-565

본 발명은 인터페론을 포함하는 HSA-유리 약제학적 조성물, 특히 완충액, 아미노산 및 항산화제를 포함하는 인터페론-베타의 제제에 관한 것이다.

Claims (31)

1. 다발 경화증의 치료를 위한 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물로서, 상기 조성물이 인터페론(IFN)-베타 1a, 벤질알콜, 리신, 메티오닌, 플루로닉 F-68 및 수용성 아세테이트 완충액을 포함하는 용액인 것을 특징으로 하는 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물.
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 제1항에 있어서, 상기 완충액이 상기 조성물의 pH를 특정 pH의 플러스 또는 마이너스 0.5 내로 유지시키기에 충분한 양으로 존재하며, 상기 특정 pH가 3.5~5.5인 것을 특징으로 하는 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물.
6. 제5항에 있어서, 상기 pH가 4.7±0.2인 것을 특징으로 하는 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물.
7. 제1항에 있어서, 상기 완충액이 5mM~500mM의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물.
8. 제7항에 있어서, 상기 완충액이 10mM의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물.
9. 삭제
10. 삭제
11. 삭제
12. 삭제
13. 제1항에 있어서, 상기 리신이 1mg/ml~ 100mg/ml의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물.
14. 제13항에 있어서, 상기 리신이 27.3mg/ml의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물.
15. 삭제
16. 삭제
17. 제1항에 있어서, 상기 플루로닉 F-68가 0.01mg/ml~10mg/ml의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물.
18. 제17항에 있어서, 상기 플루로닉 F-68가 0.5mg/ml의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물.
19. 삭제
20. 제1항에 있어서, 상기 메티오닌이 0.01~5.0mg/ml의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물.
21. 제20항에 있어서, 상기 메티오닌이 0.12mg/ml의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물.
22. 제1항에 있어서, 상기 인터페론이 10~800㎍/ml의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물.
23. 제22항에 있어서, 상기 인터페론이 22, 44 또는 88㎍/ml의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물.
24. 제23항에 있어서, 상기 인터페론이 88㎍/ml의 농도로 존재하는 것을 특징으로 하는 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물.
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28. 제1항에 있어서, 상기 인터페론이 모노머로서 적어도 96질량% 또는 98질량%인 것을 특징으로 하는 안정화된 HSA-자유 액상 약제학적 조성물.
29. 제1항에 따른 상기 액상 약제학적 조성물을 포함하는 사용전 저장 적당하고 멸균조건에서 밀봉된 용기.
30. 제29항에 있어서, 상기 용기가 사전충진된 주사기, 바이알 또는 자동주사기인 것을 특징으로 하는 용기.
31. 다발 경화증(multiple sclerosis)의 치료용 약제의 제조를 위한 제1항에 따른 IFN 조성물.