CZ2002192A3

CZ2002192A3 - Androgeny

Info

Publication number: CZ2002192A3
Application number: CZ2002192A
Authority: CZ
Inventors: Hubert Jan Jozef Loozen; Dirk Leysen; Der Louw Jaap Van
Original assignee: Akzo Nobel N. V.
Priority date: 1999-07-16
Filing date: 2000-07-10
Publication date: 2002-06-12
Also published as: MXPA02000601A; NO20020222L; DE60007530D1; EP1203011A1; EP1203011B1; CN1360589A; NO20020222D0; PE20010330A1; AU6562900A; KR20020092890A; US20020022609A1; US6780854B2; US20030087886A1; BR0012489A; US6541465B2; HUP0201952A2; ES2213596T3; HK1043797A1; IL147332A0; JP2003505394A

Description

Oblast techniky

Vynález se týká nové skupiny perorálně účinných androgenů, jde o A¹⁴-deriváty 19-nortestosteronů.

Dosavadní stav techniky

Testosteronové deriváty jsou známé látky. Při použití testosteronu jako léčiva ve formě přírodního mužského hormonu se projeví řada známých nevýhod. Jde o to, že hormon má krátkou dobu účinku, je nerozpustný ve většině běžně užívaných farmakologických nosných prostředí a má poměrně nízkou účinnost. Při použití účinnějšího derivátu dihydrotestosteronu (5a-redukovaná forma testosteronu) dochází k riziku, zvláště vzhledem k vlivu této látky na prostatu.

Účinnějším androgenem je 7a-methyl-19-nortestosteron (MENT), popsaný v dokumentu FR 4 521 M a v US 5342834. Důležitou nevýhodou této látky je nepříznivá kinetika, která omezuje použití této látky v případě perorálního podání.

V oblasti farmaceutických prostředků je obecně výhodné připravovat prostředky s perorálním účinkem.

Lékové formy pro perorální podání, například pevné lékové formy, jako tablety a kapsle, jsou nejpřijatelnější pro aplikaci nemocným. V případě androgenů by bylo zvláště výhodné mít k dispozici prostředky pro perorální podání, zejména v souvislosti s použitím těchto látek pro mužskou antikoncepci. Zatímco v oblasti antikoncepce u žen se • · ···· ·· · • · ♦ · · • · · · · · • · · · · • · · · · stal název „pilulka téměř synonymem pro přijatelný způsob antikoncepce, je zřejmé, že by bylo zapotřebí mít k dispozici i v případě mužské antikoncepce obdobu této perorálně účinné lékové formy tak, aby vznikla mužská „pilulka.

Androgenem, který má v tomto oboru zvláštní postavení je tak zvaný „Segaloffův steroid, jde o derivát 19-nortestosteronu, který má stejně jako MENT, 7a-methylovou skupinu a mimo to obsahuje dvojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy v polohách 14 a 15 (Δ¹⁴) . Toto specifické postavení spočívá v tom, že uvedená látka byla dlouho uznávána za nejúčinnšjší androgen, vhodný pro perorální podání podle publikace Avery a další Steroids, 55, 59, 1990. Uvedená látka je spolu se svým 7cc-H-analogem známa také z dokumentu GB 1341601.

Navzdory ke svému zvláštnímu postavení v oboru nebyl uvedený steroid nikdy prakticky použit. Příčinou této skutečnosti je pravděpodobně řada nevýhod pro klinické využití. Stejně jako v případě 19-nortestosteronu není možno dosáhnout metabolické stability této látky. Z GB 1341601 je například známo, že uvedená látka podléhá metabolické inaktivaci působením dehydrogenázy 17p-hydroxysteroidů v játrech. Při klasickém pokusu o řešení tohoto problému, který spočívá v zavedení alkylové skupiny do polohy 17cc dochází rovněž k neuspokojivým výsledkům, například k omezené účinnosti.

Je možno uvést několik, většinou velmi starých publikací, které informují o dalších nevýhodách steroidních sloučenin včetně derivátů 19-nortestosteronu.

• ·

V žádné z těchto publikací se neuvádějí androgeny, účinné při perorálním podání.

V patentovém spisu FR 1432561, zveřejněném v roce 1966, jsou užívány 19-nortestoterony, například MENT s alkylovým substituentem v poloze C-7 jako výchozí látky pro hormonálně účinné sloučeniny s dvojnou vazbou mezi atomy uhlíku v polohách 5 a 6. Patentový spis neuvádí jiné alkylové skupiny než methylové skupiny.

BE 861 224 popisuje různé estery široké škály 17-hydřoxysteriodůJde o dokument z roku 1976, který se specificky týká určitých esterů, které by mohly být žádoucí pro prodloužení účinnosti steroidů. Z široké skupiny popsaných steroidů je možno uvést estrogeny, antíestrogeny, androgeny a anabolícké hormony. Uvádí se velké množství možných substituentů v různých polohách včetně methylové a ethylové skupiny na atomu uhlíku v poloze 7.

Publikace Chemical Abstract 110: 95601y, 1989 popisuje 17-hydroxyacetát 7-allyl-l9-nortestosteronu jako meziprodukt pro syntézu 7-allylestradiolu.

V dokumentu EP 159739 se popisují imunomodulační látky ze skupiny estranu, které zahrnují zvláště Δ⁴- a Δ^{5 (10>}-estrenové deriváty s alkylovými substituenty v poloze 6 nebo 7. Typickým alkylovým substituentem je methyl.

Dokument DE 2043404 se týká 7p-steroidů s antihormonální účinností. Alkylovým substituentem je v tomto případě většinou methyl, avšak popsán je také ethyl • · · · a propyl. Při syntéze 7p-ethyl-19-nortestosteronu, který spadá do rozsahu uvedeného patentového spisu, se rovněž vytváří 7a-isomer. Neuvádí se však žádná možnost použití tohoto isomerů a dokument také nerozlišuje výhodnost použití ethylového nebo propylového substituentu ve srovnání s methylovou skupinou.

V publikaci Solo a další Steroids, 40, 603-614, 1990 se popisují různé 7ct-alkylové deriváty testosteronu.

Vynález si klade za úkol nelézt androgeny s perorální účinností, které by znamenaly zlepšení ve srovnání se Segaloffovým steroidem v tom smyslu, že by bylo vhodnější pro klinické použití a zvláště by měly dostatečnou účinnost při perorálním podání spolu s metabolickou stabilitou.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří androgeny obecného vzorce I

R

kde

Ri znamená O, (Η,Η), (H, OR) , NOR, kde R znamená atom vodíku, Cl-C6alkyl nebo Cl-C6acyl, • · « · «

R₂ znamená C2-C4alkyl, C2-C4alkenyl nebo C2-C4alkinyl, popřípadě substituované atomem halogenu nebo cyklopropyl nebo cyklopropenyl, popřípadě substituované

Cl-C2-alkylovým zbytkem nebo halogenem,

R3 znamená atom vodíku, Cl-C2alkyl nebo ethenyl,

R₄ znamená C1-C2 alkyl,

R₅ znamená atom vodíku nebo Cl-C15acyl, přerušované čáry označují případné vazby.

Vynález zahrnuje také farmaceuticky přijatelné soli nebo estery a prekursory uvedených steroidů.

Pod pojmem Cl-C6alkyl se v průběhu přihlášky rozumí alkylová skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem, obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, například methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, terč.butyl, pentyl a hexyl. Obdobně pojem C2-C4alkyl znamená alkylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem o 2 až 4 atomech uhlíku a pojem Cl-C2alkyl znamená alkylovou skupinu o 1 až 2 atomech uhlíku. ·.

Pojem C2-C4alkenyl znamená alkenylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem, obsahující nejméně jednu dvojnou vazbu a 2 až 4 atomy uhlíku. Výhodné alkenylovou skupiny obsahují 2 až 3 atomy uhlíku a jde například o vinyl a propenyl.

Pojem C2-C4alkinyl znamená alkinylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem, obsahující nejméně jednu trojnou vazbu a 2 až 4 atomy uhlíku. Výhodné alkinylové skupiny obsahují 2 až 3 atomy uhlíku, jde například o ethinyl a propinyl.

Pod pojmem Cl-C6acyl se rozumí acylové skupiny, odvozené od karboxylových kyselin s délkou řetězce 1 až 6 atomů uhlíku, jako formyl, acetyl, propanoyl, butyryl, 2-methylpropanoyl, pentanoyl, pivaloyl a hexanoyl.

Obdobně pojem C1-C15 acyl znamená acylovou skupinu, odvozenou od karboxylové kyseliny s délkou řetězce 1 až 5 atomů uhlíku. Do významů C1-C6 acyl nebo C1-C15 acyl jsou zahrnuty také acylové skupiny, odvozené od dikarboxylových kyselin, například hemi-maloyl, hemi-sukcinoyl, hemí-glutaroyl a podobně. Výhodným acylovým zbytkem je hemi-sukcinoyl.

Pod pojmem „atom halogenu se rozumí atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu. V případě, že atom halogenu je substituentem na alkylové skupině, jsou výhodné atom chloru a fluoru a nejvýhodnější je atom fluoru.

7a-substituované Á¹⁴-nandrolonové deriváty podle vynálezu mají přírodní konfiguraci 5α, 8β, 9a, 10β, 13β a 17β.

7a-substituované Á¹⁴-nandrolonové deriváty podle vynálezu tedy mají přírodní konfiguraci 5α, 8β, 9a, 10β, 13β a 17β a mohou obsahovat mimo to jeden nebo větší počet dalších chirálních uhlíkových atomů. Uvedené látky tedy mohou být získány jako čisté diastereomery nebo ve formě směsi diastereomerů. Způsoby přípravy čistých diastereomerů jsou v oboru dobře známé, jde například o krystalizací nebo chromatografií.

Sloučeniny podle vynálezu, které se odlišují od svrchu uvedeného známého Segaloffova steroidů délkou • · · · řetězce 7a-substituentu znamenají zcela neočekávaně zlepšení ve srovnání s uvedeným známým steroidem a mají neočekávané výhody v případě klinického použití. Tyto výhody spočívají především v lepší účinnosti při perorálním podání. Výhodné sloučeniny podle vynálezu mají mimo to daleko lepší metabolickou stabilitu než Segaloffův;· steroid.

Ve výhodné skupině sloučenin podle vynálezu se R₂volí ze skupiny ethyl, ethenyl, ethinyl, propyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-propinyl, 1,2-propadienyl a cyklopropyl.

Podle dalšího výhodného provedení Ri znamená oxoskupinu, R₃ zněměná atom vodíku, R₄ znamená methyl a přerušovaná čára znamená Δ⁴ dvojnou vazbu.

V nej výhodnějším provedení se vynález týká sloučenin, v nichž R₂ znamená zbytek uhlovodíku o dvou atomech uhlíku, zvláště -ethyl nebo ethenyl.

Sloučeniny podle vynálezu je možno připravit různými způsoby, jejichž podstata je obecně v organické chemii známa, zvláště v oboru chemie steriodů, tyto postupy jsou popsány například v souhrnné publikaci Fried J. a další, Organic Reactions in Steroid Chemistry, sv. I a II, Van Nostrand Reinhold Company, New York, 1972.

Základním stupněm takových postupů je zavedení nasyceného nebo nenasyceného 7oc-substituentu, popřípadě substituovaného halogenem na steroidní jádro a zavedení

Δ¹⁴ dvojné vazby. Obvykle se jako výchozí látka pro > · · · <

« · ·· ·· přípravu sloučenin obecného vzorce I, v nichž Ri znamená oxoskupinu, R₂, R3 a R₄ mají svrchu uvedený význam, R_sznamená atom vodíku a přerušovaná čára znamená Δ⁴ dvojnou vazbu, užívá například gon-4-en-3-onový derivát obecného

(n) v němž R3 a R₄ mají svrchu uvedený význam a Rs znamená oxoskupinu, skupinu (17cc-H, 17p-OR₇) nebo skupinu (17aC=CH,17p~OR₇) , kde R₇ znamená ochrannou skupinu na hydroxyskupině, například acylovou skupinu, jako acetylovou skupinu, benzoylovou nebo pivaloylovou skupinu, alkoxyalkylovou skupinu, jako ethoxyethylovou skupinu nebo tetrahydropýranylovou skupinu THP nebo také silylovou skupinu, jako trimethylsilylovou nebo terč.butyldimethylsilylovou skupinu, syntéza těchto látek je známa z literatury nebo je možno k přípravě těchto sloučenin použít standardních postupů.

Možná syntéza může probíhat například následujícím způsobem. Gon-4-en-3-onový derivát obecného vzorce II je možno převést na odpovídající gona-4,6-dien-3-onový derivát při použití běžných postupů, například přeměnou na 3-acyloxy- nebo 3-alkoxygona-3,5-dienový derivát s následnou reakcí s 2,3,5,6-tetrachlor-l,4-benzochinonem podle publikace Solyom, S. a další, Steroids, 35, 361, 1980. Pak se zavede 17oc-substituent nebo jeho prekursor • · · · adicí konjugátu (1,6-adice). Pro tuto reakci je známo několik metod, například

1) Adice konjugátu organických reakčních činidel s obsahem mědi podle publikace Lipshutz, Β. H. a další, Org. Reactions 41, s. 135, Wiley, New York, 1992,

2) Reakce organokřemičité sloučeniny, zprostředkovaná působením kovu (TiCl₄, A1C1₃, ZrCl₄ a podobně) , jde o 1,6-adici podle publikace Nickisch, K. a další, Tetrahedron Lett. 29, 1533, 1988.

3) Baží katalyzovaná adice konjugátu dialkylmalonátu,

2,2-dimethyl-l,3-dioxan-4,6-dionu nebo alkylkyanoacetátu podle publikace ’Cruz, R. a další, Austr. J. Chem. 35, 451, 1982.

4) Adice konjugátu vhodného kyanidu (MC^N, kde M znamená Li, Na, K, A1R₂, SiR₃ a podobně.

Všechny tyto postupy obecně vedou k převážné nebo výlučné tvorbě 7cc-isomeru.

Takto získaný 7a-substituovaný gon-4-en-3-on může být aromatizován na 3-hydroxygona-l, 3,5(10)-trien [Yuan, S. S. a další, Steroids, 39, 279, 1982], který je pak možno methylovat na 3-methoxyderivát. Přeměny na 3-methoxygona-l,3,5(10)-trien je také možno dosáhnout přímo, například podle publikace Brito, M. a další, Synth. Commun. 26, 623, 1996. V případě, že Εβ znamená (17α-Η,ΙΙβ-ΟΚγ) , je možno 17-hydroxyskupinu zbavit ochranné skupiny a oxidovat za vzniku 3-methoxygona-1,3,5(10)-trien-17-onového derivátu. Oxidační reakce jsou popsány v publikaci Hudlicky, M. Oxidations in Organic Chemistry, ACS Monograph 186, Washington DC, 1990. V případě, že Rg znamená (17a-C^CH,17β-ΟΗ?), je opět možno zbavit 17-hydroxyskupinu ochranné skupiny a 17a-ethinyl-17p-hydroxyderivát se pak převede na 17-keton například reakcí s uhličitanem stříbrným na celitu podle publikace Rao, P. N. a další, Steroids 59, 621, 1994 nebo jiným známým způsobem. V obou případech je také možno uskutečnit přeměnu na 17-keton před aromatizací.

Takto získaný 3-methoxygona-l, 3, 5(10)-trien-17-onový derivát může být přímo brómován, například reakcí s bromidem měďnatým ve směsi benzenu a methanolu podle publikace Segaloff, A. a další, Steroids, 22, 99, 1973. Tento 3-methoxygona-l,3,5(10)-trien-17-onový derivát je také možno převést na enolacetát a pak zpracovat působením bromu podle publikace Johnson, W. S. a další,

J. Am. Chem. Soc. 79, 2005, 1957, nebo převést na enolsilylether s následnou reakcí například s N-bromsukcinimidem podle publikace Heathcock, C. H. a další, J. Amer. Chem. Soc. 104, 6081, 1982.

Dehydrobromací 16a-bromketonu, například reakcí se směsí LiBr/LÍ2CO3/DMF podle publikace Bull, J. R. a další, J. Chem. Soc., Perkin Trans. I, 241, 1990, se obvykle získá směs (14β)-3-methoxygona-l, 3,5(10), 15-tetraen-17-onu a 3-methoxygona-l,3,5(10),14-tetraen-17-onového derivátu. Tyto látky je možno od sebe oddělit a pak redukovat druhou z uvedených látek na odpovídající (17β)-3methoxygona-1,3,5(10),14-tetraen-17-olový derivát použití hydroborátu sodného, lithiumaluminiumhydridu nebo jiného redukčního činidla.

Uvedený 7a-substítuovaný 3-methoxygona-l,3,5 (10)trien-17-onový derivát je také možno převést na odpovídající cyklický 1,2-ethandiylacetal, který se pak brómuje za získáni cyklického 1,2-ethandiylacetalového derivátu (16a) -16-brom-3-methoxygcna-l, 3,5(10)-trien-17-onu. Bromaci je možno uskutečnit při použití pyridiniumtribromidu, fenyltrimethylamoniumtribromidu nebo jiného známého bromačního činidla podle publikace Rasmusson, G. H. a další, Steroids 22, 107, 1973. Takto získaná 16a-bromovaná sloučenina se pak podrobí dehydrobromaci působením baze, například terč.butoxidu draselného v xylenu nebo v dimethylsulfoxidu za vzniku Δ¹⁵ sloučeniny podle svrchu uvedené Johnsonovy publikace nebo podle publikace Poirier, D. a další, Tetrahedon 47, 7751, 1991. Mírnou hydrolýzou ethylenketalu, například působením kyseliny p-toluensulfonové ve směsi acetonu a vody podle svrchu uvedené Johnsonovy publikace se získá 3-methoxygona-l,3,5(10) , 15-tetraen-17-onový derivát, který se pak převede na 3-methoxygona-l,3,5(10),14,16-pentaen-17-olacetát reakcí s anhydridem kyseliny octové, isopropenylacetátem nebo jiným acetylačním činidlem při katalýze kyselinou podle svrchu uvedených publikací Rasmussona a Bulla. Na acetát se působí hydroborátem sodným nebo jiným redukčním činidlem podle svrchu uvedené Rasmussonovy publikace, čímž se vytvoří (17β)-3-methoxygona-1,3,5(10), 14-tetraen-17-olový derivát. Popřípadě je pak možno 3-methoxygona-l,3,5 (10), 15-tetraen-17-on ve formě cyklického 1,2-ethandiylacetalu převést izomerací, katalyzovanou kyselinou na odpovídající Δ¹⁴ derivát podle publikace Ponsold, K. a další, J. Prakt. Chem. 323, 819, 1981. Odstraněním acetalové skupiny a redukcí 17-oxoskupiny se získá (17p-3-methoxygona-l, 3,5(10) , 14-tetraen-17-olový derivát. Uvedený 3-methoxygona-l, 3,5(10), 15-tetraen-17-on je také možno podrobit izomeraci za vzniku směsi (14β)—3— t · · · · ·

-methoxygona-1,3,5(10),15-tetraen-17-onového a

3-methoxygona-l,3,5(10),14-tetraen-17-onového derivátu, které je možno zpracovávat svrchu uvedeným způsobem.

Další postupy pro zavedení Δ¹⁵ dvojné vazby zahrnují přeměnu 3-methoxygona-l,3,5 (10)-trien-17-onového derivátu na enolacetát s následnou reakcí se solí dvojmocného paladia podle publikace Takahashi, T. a další,

Tetrahedron 41, 5747, 1985 nebo reakcí enolátu s methyl-2-pyridinsulfinátem podle publikace Dionne, P. a další, Steroids 62, 674, 1997.

Birchovou redukcí takto získaného 17asubstituovaného (17β)-3-methoxygona-l,3,5(10)-trien-17olového derivátu podle publikace Caine, D., Org.

Reactions 23, s. 1, Wiley, New York, 1976 a hydrolýzou výsledného (17β)-3-methoxygona-2,5(10),14-trien-17-olového derivátu se pak získá 17a-substituovaný (17β)-17-hydroxygona-4,14-dien-3-onový derivát podle vynálezu. V případech, kdy 7a-substituent je konstruován ze svého prekursorů, to znamená z nenasyceného 7a-substituentu, fragmentu esteru kyseliny malonové nebo kyanoskupiny, jak bylo svrchu popsáno, je nezbytné tento postup, který jinak může být uskutečněn běžnými postupy často uskutečnit současně se zavedením Δ¹⁴ dvojné vazby. Sled reakčních stupňů, jichž je zapotřebí pro konstrukci 17a-substituentu a pro zavedení Δ¹⁴ dvojné vazby včetně Birchovy redukce a přeměny výsledného gona-2,5(10)-dienu na 17a-substituovaný (17β)-17-hydroxygona-4,14-dien-3-onový derivát podle vynálezu, je určován běžnými postupy syntézy, jak budou dále uvedeny v příkladech 4 a 5.

• · · * • · ·;#

Sloučeniny podle vynálezu, v nichž R_x znamená (H,H), (H,OR), NOR, kde R znamená atom vodíku, Cl-C6alkyl nebo Cl-C6acyl je možno připravit známým způsobem ze sloučenin obecného vzorce I, v nichž Ri znamená oxoskupinu.

Sloučeniny podle vynálezu, v nichž R₅ znamená Cl-C15acyl je možno připravit běžným způsobem ze sloučenin obecného vzorce I, v nichž R5 znamená atom vodíku.

Sloučeniny podle vynálezu, v nichž přerušovaná čára znamená Δ^5(10> dvojnou vazbu, je možno připravit z Δ²'⁵'¹⁰¹dienů, získaných po Birchově redukci. Tyto látky je také možno připravit z Δ⁴ derivátů izomerací. Sloučeniny podle vynálezu, redukované v poloze 5a je možno připravit z Δ⁴derivátů.

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1 (7α,17β)-7-ethyl-17-hydroxyestra-4,14-dien-3-on (a) a (17α,17β)-7-ethyl-17-hydroxyestra-5(10),14-dien-3-on (b).

i) 19 ml chlortrimethylsilanu se v průběhu 5 minut přidá k suspenzi 18,0 g (17a)-17-hydroxy-19-norpregna-4,6-dien-20-in-3-onu (Syntex, S. A., GB 935116, 1958) ve směsi

300 ml dichlormethanu a 25 ml pyridinu, zchlazena na

O °C. Směs se 2 hodiny míchá při teplotě 0 °C a pak se vlije do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Produkt se extrahuje dichlormethanem, organické fáze se spojí, promyjí se vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 22,3 g (17a)-17-[(trimethylsilyl)oxy]-19-norpregna-4,6-dien-20-in-3-onu, tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

ii) Směs 5,0 g lithia a 200 ml bezvodého diethyletheru se zchladí na -30 °C. Po kapkách se přidá 26,9 ml bromethanu a pak se výsledný roztok ethyllithia přenese do suspenze

30,6 g jodidu měďného ve 140 ml bezvodého tetrahydrofuranu, zchlazené na -30 °C. Výsledný roztok měďnanu se míchá 45 minut při uvedené teplotě a po kapkách se přidá roztok 20,0 g produktu z předchozího stupně ve 160 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Směs se míchá 45 minut při teplotě -25 °C, pak se přidá 20 ml chlortrimethylsilanu a směs se míchá dalších 30 minut.

Pak se reakční směs vlije do nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu amonného a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 29,5 g (7a,17a)-7-ethyl-3,17-bis[(trimethylsilyl)oxy]-19-norpregna-3,5-dien-20-inu. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

iii) Roztok 29,5 g produktu, získaného v předchozím stupni ve 400 ml acetonu se zpracovává působením 20 ml 2,3 M kyseliny chlorovodíkové. Po 1,5 hodině míchání při * · teplotě místnosti se reakční směs neutralizuje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Aceton se odpaří za sníženého tlaku a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 19,5 g (7a, 17a)-7-ethyl-17-hydroxy-19-norpregn-4-en-20-in-3-onu. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

iv) 240 ml 6 M kyseliny chlorovodíkové se po kapkách přidá k suspenzi 240 g dicalitu ve 1200 ml methanolu.

Směs se míchá 20 minut při teplotě místnosti, pak se dicalit odfiltruje a promývá se vodou až do neutrální reakce. Pak se uvede do suspenze v 960 ml vody. Za energického míchání se přidá 145 g trihydrátu dusičnanu měďnatého a pak ještě opatrně roztok 72,2 g uhličitanu sodného ve 360 ml vody. Směs se ještě 30 minut míchá, pak se produkt oddělí filtrací a promývá se vodou až do neutrální reakce. Pak sé produkt suší za sníženého tlaku při teplotě 80 °C, čímž se získá 310 g uhličitanu měďnatého na dicalitu. Směs 19,5 g produktu ze stupně iii) a 70 g uhličitanu měďnatého na dicalitu ve 330 ml toluentu se vaří 9 hodin pod zpětným chladičem za odvádění vody Dean-Starkovým odlučovačem. Reakční směs se zfiltruje, zbytek po filtraci se důkladně promyje ethylacetátem a filtrát se odpaří za sníženého tlaku. Chromatografií na sloupci se pak získá 9,14 g (7a)-7ethylestr-4-en-3,17-dionu.

v) Roztok 9,14 g produktu z předchozího stupně, 13,6 g bromidu měďnatého a 2,64 g bromidu lithného ve 285 ml acetonitrilu se míchá 4 hodiny při teplotě místnosti.

Reakční směs se vlije do vody a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické extrakty se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu amonného a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Chromatografii na sloupci se získá 6,54 g (7a)-7-ethyl-3-hydroxyestra-l, 3,5(10)-trien-17-onu.

vi) Směs 6,54 g produktu z předchozího stupně, 18,6 g bezvodného uhličitanu draselného, 5,6 ml jodmethanu a ml bezvodého dimethylformamidu se míchá 3,5 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se vlije do vody a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se vodou, nasyceným vodným roztokem chloridu amonného a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá (7a)-7-ethyl-3-methoxyestra-l,3,5(10)-trien-17-on v množství 6,77 g. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

vii) Roztok 6,15 ml diisopropylaminu v 70 ml bezvodého tetrahydrofuranu se zchladí na -30 °C. Pak se po kapkách přidá 27,5 ml 1,6 M roztoku n-buthyllithia, n-BuLi v hexanech a směs se míchá ještě 30 minut. Reakční směs se zchladí na -50 °C a po kapkách se přidá roztok 6,95 g produktu z předchozího stupně ve 100 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Směs se míchá ještě 1 hodinu. Po zchlazení na -60 °C se přidá ještě 11,1 ml chlortrimethylsilanu. Směs se 20 minut míchá a pak se přidá roztok 10,0 g fenyltrimethylamoniumtribromidu ve ml bezvodého pyridinu. Po jedného hodině míchá při teplotě -60 °C se směs vlije do vody a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí • · · · se nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku.

Chromatografii na sloupci se tímto způsobem získá 8,75 g (7α,16a)-16-brom-7-ethyl-3-methoxyestra-l,3,5(10)-trien-17-onu.

viii) Směs 8,75 g produktu z předchozího stupně, 12,7 g bromidu lithného a 10,9 g uhličitanu lithného v 77 ml bezvodého dimethylformamidu se zahřívá 3,25 hodiny na teplotu varu pod zpětným chladičem. Po zchlazení se reakční směs vlije do vody a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Chromatografii na sloupci se získá 4,31 g (7a)-7-ethyl-3-methoxyestra-1,3,5 (10),14-tetraen-17-onu a 1,0 g (7α,14β)-7-ethyl-3-methoxyestra-1,3,5(10),15-tetraen-17-onu.

ix) Roztok 0,21 g hydroborátu sodného a 0,44 g hydroxidu sodného v 50 ml methanolu se po kapkách přidá k roztoku 4,31 g (7a)-7-ethyl-3-methoxyestra-l,3,5(10),14-tetraen-17-onu ve 12 ml dichlormethanu a 20 ml methanolu po zchlazení na 0 °C. Reakční směs se míchá 1,5 hodiny, reakce se zastaví přidáním 4 ml acetonu a směs se vlije do nasyceného vodného roztoku chloridu amonného. Výsledný produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 4,28 g (7a,14P)-7-ethyl-3-methoxyestra-1,3,5(10),14-tetraen-17-olu. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

« · • ·

χ) 1,5 g alkoholu z předchozího stupně ve 24 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá k roztoku 2,12 g lithia v 98 ml kapalného amoniaku za varu pod zpětným chladičem. Po 4,5 hodinách míchání při teplotě -35 °C se v průběhu 30 minut přidá 2-propanol a amoniak se odpaří. Přidá se voda a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 1,65 g (7a,17P)-7-ethyl-3-methoxyestra-2,5(10),14-trien-17-olu. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

xi) Směs 5,2 g oxidu křemičitého, 0,52 ml nasyceného vodného roztoku kyseliny šťavelové a 14 ml dichlormethanu se míchá 10 minut při teplotě místnosti. Pak se přidá roztok 1,6 g produktu z předchozího stupni v 5 ml dichlormethanu a směs se míchá ještě 1,5 hodiny. Pak se přidá pevný hydrogenuhličitan sodný a směs se míchá dalších 10 minut. Pak sé směs zfiltruje a filtrát se odpaří za sníženého tlaku. Chromatografií surového produktu na sloupci se získá 1,03 g (7α,17β)-7-ethyl-3-methoxyestra-5(10),14-dien-3-onu.

^XH NMR (CDC1₃) δ 5,04 (bs, 1H) , 4?03 (t, 1H, J=8,4 Hz), 2,76 (bs, 2H), 0,98 (s, 3H), 0,93 (t, 3H, J = 6,6 Hz).

xii) Analogickým způsobem jako ve stupni iii) se 0,45 g produktu, získaného v předchozím stupni převede na 0,24 g (7α, 17β)-7-ethyl-3-hydroxyestra-4,14-dien-3-onu s teplotou tání 102 až 105 °C.

Příklad 2 * · (7α,17β)-7-ethenyl-17-hydroxyestra-4,14-díen-3-on

i) Roztok 50,0 g (17β)-17-(acetyloxy)estra-4,6-dien-3-onu (Syntex, DE 1143199, 1963), 16 ml 1,0 M roztoku lithiumthiofenoxidu v tetrahydrofuranu, 3,18 g komplexu dimethylsulfinu a bromidu měďného a 1,38 g bromidu lithného ve 167 ml bezvodého tetrahydrofuranu se zchladí na -15 °C. Pak se po kapkách při teplotě nejvýš 15 °C přidá 159 ml 2 M roztoku vinylmagnesiumchloridu v tetrahydrofuranu „a směs se míchá dalších 30 minut. Pak se po kapkách přidá nasycený vodný roztok chloridu amonného a směs se míchá ještě 15 minut. Pak se reakčni směs zfiltruje přes dicalit a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, odpaří se za sníženého tlaku a odparek se rozpustí v 1000 ml acetonu. Přidá se 100 ml 4 M roztoku kyseliny chlorovodíkové a směs se 30 minut míchá při teplotě místnosti. Pak se přidá nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a aceton se odpaří za sníženého tlaku. Produkt se extrahuje ethylacetátem, organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 57,3 g směsi (7α,17β)-17-(acetyloxy)-7-ethenylestr-4-en-3-onu a (7β,17β)-17-(acetyloxy)-7-ethenylestr-4-en-3-onu v poměru 85:15. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

ii) 26,7 g hydroxidu draselného se po částech přidá k roztoku 57,3 g produktu z předchozího stupně. Ve směsi 833 ml tetrahydrofuranu, 738 ml methanolu a 238 ml vody. Reakční směs se míchá 45 minut při teplotě místnosti a pak se neutralizuje 20 ml koncentrované kyseliny

Λ 4 4 · « · • ·

chlorovodíkové. Tetrahydrofuran a methanol s částeně odpaří za sníženého tlaku a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku.

Chromatografií na sloupci se získá 36,7 g (7α,17β)-7ethenyl-17-hydroxyestr-4-en-3-onu.

iii) Směs 66,2 g produktu z předchozího stupně, 80 ml trimethylorthomravenčanu, 65,2 g bromidu měďnatého a 1788 ml methanolu se vaří 50 minut pod zpětným chladičem. Po zchlazení se reakční směs zfiltruje. Filtrát se odpaří za sníženého tlaku a odparek se rozpustí v ethylacetátu. Ethylacetátový roztok se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Chromatografií na sloupci se získá 42,9 g (7α,17β)-7-ethenyl-3-methoxyestra-1,3,5(10)-trien-17-olu.

iv) 2,76 g tetrapropylamoniumperoxyruthenátu se přidá k roztoku 41,1 g produktu z předchozího stupně a 46,2 g 4-methylmorfolin-N-oxidu v 1080 ml acetonu. Směs se hodinu míchá při teplotě místnosti a pak se zfiltruje přes dicalit a oxid křemičitý. Filtrát se odpaří za sníženého tlaku. Chromatografií na sloupci se získá » 38,1 g ( 7oc)-7-ethenyl-3-methoxyestra-l, 3,5 (10)-trien-17-onu.

v) 3,21 g kyseliny p-toluensulfonové se přidá k roztoku

36,05 g produktu z předchozího stupně ve směsi 108 ml ethylenglykolu a 188 ml triethylorthomravenčanu. Reakční směs se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti. Pak se « · · A » A · « « » přidá 1800 ml vody a směs se ještě 1 hodinu míchá.

Produkt se extrahuje ethylacetátem, organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 41,37 g cyklického 1,2ethandiylacetalu (7a)-7-ethenyl-3-methoxyestra-1,3,5(10)-trien-17-onu. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

vi) 22,60 g fenyltrimethylamoniumtribromidu se po částech přidá k roztoku 21,37 g produktu z předchozího stupně ve 114 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Reakční směs se minut míchá, načež se přidají další podíly fenyltrimethylamoniumtribromidu tak dlouho, až je reakce ukončena. Po 30 minutách dalšího míchání se pak směs vlije do 10% vodného roztoku thiosulfátu sodného a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 34,91 g cyklického 1,2-ethandiylacetalu (7a,16a)-16-brom-7-ethenyl-3-methoxyestra-1,3,5(10)-trien-17-onu. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

vii) Roztok 34,91 g produktu z předchozího stupně ve

170 ml bezvodého dimethylsulfoxidu se zpracovává přidáním

13,5 g terč.butoxidu draselného a reakční směs se míchá 3 hodiny při teplotě 40 °C. Další podíly 13,5 g terč.butoxidu draselného se přidají po 30 minutách a po jedné hodině. Směs se vlije do nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a produkt se extrahuje ethylacetátem.

• · · « · « « *

Organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu amonného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Chromatografií na sloupci se získá 17,54 g cyklického 1,2-ethandiylacetalu (7a)-7-ethenyl-3-methoxyestra-1, 3,5(10),15-tetraen-17-onu.

viii) Roztok 31,47 g produktu z předchozího stupně ve směsi 507 ml acetonu a 43 ml vody se zpracovává přidáním 1,48 g kyseliny p-toluensulfonové a reakční směs se míchá 2 hodiny pří teplotě místností. Pak se reakční směs vlije do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Chromatografií na sloupci se získá 23,92 g (7a)-7-ethenyl-3-methoxyestra-l,3,5(10),15-tetraen-17-onu.

ix) Roztok 23,9 g produktu z předchozího stupně v 970 ml bezvodého toluenu se zpracovává přidáním 13,5 g kyseliny p-toluensulfonové a směs se vaří 15 minut pod zpětným chladičem. Po zchlazení se reakční směs vlije do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Chromatografií na sloupci se získá 14,9 g (7a)-7ethenyl-3-methoxyestra-l,3,5(10),14-tetraen-17-onu a 7,32 g (7α,14β)-7-ethenyl-3-methoxyestra-l,3,5(10),15tetraen-17-onu.

,, ,.,. ♦· ·»»* * . · · « · ··«* «· · ·

Λ ··«· · · ·

χ) 1,47 g hydroborátu sodného se přidá k roztoku 1,50 g (7a)-7-ethenyl-3-methoxyestra-l,3,5(10) , 14-tetraen-17-onu z předchozího stupně ve směsi 27,8 ml tetrahydrofuranu, 27,8 ml ethanolu a 4,55 ml vody.

Reakční směs se míchá 50 minut a pak se vlije do vody. Produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří, čímž se získá 1,47 g (7a,17P)-7-ethenyl-3-methoxyestra-1,3,5(10),14-tetraen-17-olu.. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

xi) Roztok 1,47 g produktu z předchozího stupně ve 26 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá ke 105 ml kapalného amoniaku za varu pod zpětným chladičem. Pak se přidá ještě 0,95 g granulátu lithia a reakční směs se míchá ještě 1,25 hodiny. Pak se přidá ještě 9,2 ml bezvodého terč.butanolu a reakční směs se míchá dalších 30 minut. Přidá se pevný chlorid amonný a amoniak se nechá odpařit. Přidá se voda a produkt ^:se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu amonného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 1,48 g (7a,17P)-7-ethenyl3-methoxyestra-2,5 (10),14-trien-17-olu. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

xii) Analogickým postupem jako ve stupni iii) příkladu 1 se 1,48 g produktu z předchozího stupně hydrolyzuje, čímž se po chromatografií ve sloupci a po krystalizací získá 0,419 g (7α,17β)-7-ethenyl-17-hydroxyestra-4,14-dien-3-onu s teplotou tání 129 až 136 °C.

·· »··· • a · ·

Příklad 3 (7α, 17β)-17-hydroxy-7-propylestra-4,14-dien-3-on

Výslednou látku je možno připravit analogickým způsobem jako v příkladu 1.

^XH NMR (CDC1₃) δ 5,86 (bs, ÍH) , 5,08 (m, ÍH) , 4,00 (q,

ÍH, J = 7,2 Hz), 1,00 (s, 3H), 0,89 (t, 3H, J = 6,2 Hz).

Příklad 4 .. ..

(7α, 17β.) -17-hydroxy-7- (2-propeny 1) es tra-4,14-dien-3-on

i) Směs 5,60 g granulátu lithia s obsahem 0,5 % sodíku a 250 ml bezvodého diethyletheru se zchladí na -30 °C. V průběhu 45 minut se přidá 101,2 g 1,l-brom-3-[[(1,1-dimethylethyl)diemthylsilyl]oxylpropanu, přičemž teplota se udržuje na teplotě nižší než 0 °C. Po skončeném přidávání bromidu se reakční směs míchá ještě 45 minut při teplotě 20 °C. Ve druhé nádobě se zchladí suspenze 38,1 g jodidu měďného ve 200 ml bezvodého tetrahydrofuranu na teplotu -30 °C. Pak se v průběhu 5 minut přidá při teplotě v rozmezí -20 až +10 °C roztok organolithné sloučeniny a směs se ještě 5 minut míchá.

Pak se v průběhu 5 minut přidá roztok 5,16 g (7a)-17-[(trimethylsilyl)oxy)-19-norpregna-4, 6-dien-20-in-3-onu ze stupně i) příkladu 1 ve 200 ml bezvodého tetrahydrofuranu, načež se reakční směs ještě 1 hodinu míchá při teplotě -20 °C. Pak se směs vlije do nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a koncentrovaného amoniaku v poměru 9:1 a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a ·· ···· * · ·· «0 ··«>· ··· > *·· nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří. Odparek se rozpustí v 500 ml acetonu. Přidá se 25 ml 6 M roztoku kyseliny chlorovodíkové a reakční směs se míchá 2 hodiny při teplotě místností. Pak se přidá nasycený vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a aceton se odstraní. Produkt se extrahuje ethylacetátem, organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří. Chromatografií na sloupci se získá 39,4 g (7a,17a)-17-hydroxy-7-(3-hydroxypropyl)-19-norpregn-4-en-20-in-3-onu.

ii) Roztok 38,4 g produktu z předchozího stupně ve směsi 215 ml pyridinu a 108 ml anhydridu kyseliny octové se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Reakční směs se vlije do 1000 ml vody a pak se ještě 1 hodinu míchá. Produkt se extrahuje ethylacetátem, organické fáze se spojí, promyjí se vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 40/5 g (7a,17a)-17-hydroxy-7-[3-(acetyloxy)propyl]-19-norpregn-4-en-20-in-3-onu. Tento produkt se použije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

iii) Postupuje se způsobem, uvedeným v odstavci iv) příkladu 1, čímž se 40,5 g produktu z předchozího stupně převede na (7a)-7-[3-(acetyloxy)propyl] estr-4-en-3,17-díon v množství 39,0 g.

iv) Způsobem, analogickým k postupu z odstavce v) z příkladu 1, se 39,0 g produktu z předchozího stupně převede na 36,8 g (7a)-7-[3-(acetyloxy)propyl]-3• · • · · · « · · ·

-hydroxyestra-1,3,5(10)-trien-17-onu.

v) Způsobem, analogickým postupu z odstavce vi) z příkladu 1 se převede 36,8 σ produktu z předchozího stupně na 19,3 g (7a)-7-[3-(acetyloxy) propyl]-3-methoxyestra-1,3,5 (10)-trien-17-onu.

vi) Postupuje se způsobem podle odstavce v) v příkladu 2, čímž se převede 19,3 g produktu z předchozího stupně na

21.8 g 1,2-ethandiylacetalu (7a)-7-[3-(acetyloxy)propyl]-3-methoxyestra-l,3,5(10)-trien-17-onu.

vii) Roztok 21,8 g produktu z předchozího stupně ve

224 ml bezvodého tetrahydrofuranu se po kapkách přidá k suspenzi 6,58 g lithiumaluminiumhydridu ve 448 ml bezvodého tetrahydrofuranu, zchlazené na 0 °C. Směs se 1 hodinu míchá a pak se reakce zastaví přidáním nasyceného vodného roztoku síranu sodného. Přidá se ethylacetát a směs se zfiltruje přes dicalit. Filtrát se odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 18,9 g cyklického 1,2-ethandíylacethalu (7a)-7-[3-hydroxypropyl]-3-methoxyestra-l, 3, 5(10)-trien-17-onu. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

viii) Roztok 18,7 g produktu z předchozího stupně v 80 ml bezvodého dimethoxyethanu se po kapkách přidá k roztoku

35.9 g pyridinium tribromidu ve směsi 80 ml dimethoxyethanu a 28 ml ethylenglykolu, přičemž teplota se udržuje nejvýš na teplotě místnosti. Směs se 1 hodinu míchá a pak se vlije do roztoku 27,1 g thiosíranu sodného ve 159 ml vody a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se vodou a nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nakonec nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 24,3 g cyklického 1,2-ethandiylacetalu (7a,16a)-16-brom-7-[3-hydroxypropyl]-3-methoxyestra-l, 3,5(10) -trien-17-onu. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

ix) Postupuje se analogickým způsobem jako ve stupni vii) v příkladu 2, čímž se 24,3 g produktu z předchozího stupně převede na 13,1 g cyklického 1,2-ethandiylacetalu (7a) -7-[3-hydroxypropyl]-3-methoxyestra-l, 3,5(10),15-tetraen-17-onu.

x) Postupuje se způsobem podle odstavce viii) příkladu 2, čímž se 5,46 g produktu z předchozího stupně převede na 5,01 g (7a)-7-[3-hydroxypropyl]-3-methoxyestra-1,3,5(10),15-tetraen-17-onu.

xi) Roztok 3,19 g ketonů, získaného v předchozím stupni a 0,94 g pyridinium-p-toluensulfonátu v 94 ml isopropenylacetátu se zahřívá 1,5 hodiny na teplotu varu pod zpětným chladičem. Po zchlazení se reakční směs vlije do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Produkt se extrahuje diethyletherem, organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 3,69 g (7a)-7-[3-(acetyloxy)propyl]-3-methoxyestra-l,3,5(10),14,16-pentaen-17-olacetátu. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

xii) Postupuje se způsobem podle odstavce x) příkladu 2, čímž se 3,69 g produktu z předchozího stupně převede na 2,49 g (7α,17β)-7-[3-(acetyloxy)propyl·]-3-methoxyestra-1,3,5(10),14-tetraen-17-olu.

xiii) Roztok 2,49 g alkoholu, získaného v předchozím stupni a 2,20 g imidazolu ve 13 ml bezvodého dichlormethanu se smísí s 1,46 g terč.butyldimethylsilylchloridu. Po 2 hodinách míchání při teplotě místnosti se reakční směs vlije do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Produkt se extrahuje diethyletherem, organické fáze se spojí, promyjí se vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 3,43 g (7α,17β)-7-[3-(acetyloxy)propyl]-17-[[(1,1-dimethylethyl)dimethylsily1]oxy] -3-methoxyestra-1,3,5(10),14-tetraenu. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

xiv) Postupuje se způsobem podle stupně vii), čímž se převede 3,43 g produktu, získaného v předchozím stupni, na 1,96 g (7α, 17β)-17-[[(1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]-7-(3-hydroxypropyl)-3-methoxyestra-1,3,5(10),14-tetraenu.

xv) 0,292 g jodu se přidá k roztoku 0,32 g trifenylfosfinu a 0,082 g imidazolu v 7,5 ml bezvodého dichlormethanu. Po ukončené reakci s jodem se roztok 0,25 g produktu z předchozího stupně ve 3 ml bezvodého dichlormethanu přidá ke vzniklé směsi, která se pak 30 minut míchá při teplotě místnosti. Pak se směs vlije do nasyceného vodného roztoku thiosíranu sodného a produkt se extrahuje diethyletherem. Organické fáze se spojí, • · • · · · • · • · · · promyjí se vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Chromatografií na sloupci se pak získá 0,29 g (7α,17β)-17-[[(1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl]oxy]-7-(3-jodpropyl)-3-methoxyestra-l,3,5(10) , 14-tetraenu.

xvi) Roztok 0,17 g jodidu z předchozího stupně v 5 ml dimethylsulfoxidu se zpracovává působením 1,62 g terč.butoxidu draselného a reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti. Pak se směs vlije do nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a produkt se extrahuje diethyletherem. Organické fáze se spojí, promyjí se vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku.

Chromatografií na sloupci se získá 0,075 g (7α,17β)-3methoxy-7-(2-propenyl)-estra-1, 3,5(10) , 14-tetraen-17-olu.

xvii) 0,15 g alkoholu z-předchozího stupně v 5 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá k roztoku 0,42 g lithia ve 30 ml kapalného amoniaku při teplotě varu pod zpětným chladičem. Směs se 1 hodinu míchá pří teplotě

-40 °C, pak se přidají 4 ml terč.butanolu a směs se míchá ještě 30 minut. Pak se přidá δ ml ethanolu a amoniak se nechá odpařit. Směs se vlije do vody a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 0,144 g směsi (7α, 17β)-3-methoxy-7-(2-propenyl)-estra-2,5(10),14-trien-17-olu a (7α,17β)-3-methoxy-7-propylestra-2,5(10),14-trien-17-olu v poměru 2:3.

• · · · • ♦ xviii) Postupuje se způsobem podle odstavce iii) příkladu 1, čímž se 0,144 g produktu z předchozího stupně hydrolyzuje a pa chromatografii na sloupci a preparativní HPLC v reversní fázi se získá 0,018 g (7α,17β)-17-hydroxy-7- (2-propenyl)-estra-4,14-dien-3-onu, [a] _D ^{ii) * * * * * * * * 20}=+6,2 ⁰ , (c = 0,89 dioxan).

Příklad 5 (7α, 17β) -7-butyl-17-hydroxyes.tra-4,14-dien-3-on (a) a (7α,17β)-7-(3-butenyl)-17-hydroxyestra-4,14-dien-3-on (b)

i) Postupuje se analogickým způsobem jako v odstavci iv) příkladu 2, čímž se převede 0,40 g (7α,17β)-17-[ [ (1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl] oxy] -7-(3-hydroxypropyl)-3-methoxyestra-1,3,5(10),14-tetraenu ze stupně xiv příkladu 4 na 0,40 g 3-[(7α,17β)-17-[[(1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl] oxy] -3-methoxyestra-1,3,5(10),14-tetraen-7_Tyl]propanalu.

ii) Směs 0,94 g methyltrifenylfosfoniumbromidu, 0,26 g terč.butoxídu draselného a 10 ml bezvodého toluenu se vaří 1 hodinu pod zpětným chladičem. Pak se přidá roztok

0,40 g aldehydu, získaného v předchozím stupni v 5 ml bezvodého toluenu a směs se ještě 1 hodinu vaří. Po zchlazení se reakční směs vlije do nasyceného vodného roztoku chloridu amonného. Produkt se extrahuje ethylacetátem, organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku.

chromatografii na sloupci se získá 0,40 g (7α,17β)-7-(3-butenyl) -17 - [ [ (1,1-dimethylethyl) dimethylsilyl] oxy] - 39 9 ···· · · ···· ·« • * · 0 · · · ···· ·· 4 « · • ···· ·«»« • · · · · · · ·

-methoxyestra-1,3,5 (10),14-tetraenu.

iii) Postupuje se analogickým způsobem jako ve stupni iii) příkladu 1, čímž se 0,40 g produktu z předchozího stupně převede na 0,39 g (7a,17p)-7-(3-butenyl)-3-methoxyestra-1,3,5 (10),14-tetraen-17-olu.

iv) Postupuje se analogickým způsobem jako v odstavci xvii) příkladu 4, čímž se 0,39 g produktu zpředchozího stupně převede na 0,37 g směsi (7α,17β)-7-butyl-3-methoxyestra-2,5 (10),14-trien-17-olu a (7α,17β)-7-(3-butenyl)-3-methoxyestra-2,5(10),14-trien-17-olu v poměru 3:1.

v) Postupuje se způsobem podle odstavce iii) z příkladu 1, čímž se hydrolyzuje 0,37 g produktu z předchozího stupně, načež se po chromatografií na sloupci a po preparativní HPLC v revesní fázi získá 0,043 g (7α,17β)-7-butyl-17-hydroxyestra-4,14-dien-3-onu [a] _D ²⁰=+7,6° (c = 0,185, dioxan), a 0,077 g (7α,17β)-7-(3-butenyl)-17hydroxyestra-4,14-dien-3-onu, [aj_D ²⁰=+4,4° (c = 0,475 dioxan).

Příklad 6 (7α,17β)-7,13-diethyl-17-hydroxygona-4 , 14-dien-3-on

i) 5,0 g pyridinium-p-toluensulfonátu se přidá k roztoku 100,0 g 13-ethylgon-4-en-3,17-dionu, [Hoffmann-La Roche a Co., AG, DE 1806410, 1967] ve směsi 600 ml ethanolu,

800 ml dioxanu a 199 ml triethylorthomravenčanu. Směs se míchá 4,5 hodiny při teplotě místnosti, pak se přidá ·· ···· ·· *«*· · · ·* • · ♦ · ♦ · »·· ···· · · » ·· • · « · · ···· · «3 Λ) · ·······«

100 ml pyridinu a reakční směs se vlije do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Produkt se extrahuje ethylacetátem, organické fáze se spojí, promyjí se vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 146,3 g 3-ethoxy-13-ethylgona-3,5-dien-17-onu. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

ii) Postupuje se způsobem podle odstavce vii) příkladu 4, čímž se 73,2 g produktu z předchozího stupně převede na 58,0 g (17β)-3-ethoxy-13-ethylgona-3,5-dien-17-olu.

iii) Roztok 58,0 g produktu z předchozího stupně ve 215 ml tetrahydrofuranu, obsahujícího 2,5 ml pyridinu, se přidá k suspenzi 49,6 g tetrachlor-1, 4-benzochinonu ve směsi 525 ml ethanolu a 60 ml vody. Reakční směs se míchá

4,5 hodiny při teplotě místnosti a pak se přidá roztok

26,7 g hydrogensiřičitanu sodného v 585 ml vody. Směs se ještě 30 minut míchá, pak se přidá nasycený vodný roztok siřičitanu sodného a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se nasyceným vodným roztokem siřičitanu sodného, vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 81,0 g hnědého oleje. Reakce se opakuje s 57,0 g 3,5-dienu, čímž se získá 79,0 g surového produktu. Surové produkty se spojí a podrobí se chromatografii na sloupci, čímž se získá 56,3 g (17β)-13-ethyl-17-hydroxygona-4,6-dien-3-onu.

iv) Postupuje se způsobem podle odstavce xiii) příkladu

4, čímž se 56,3 g produktu z předchozího stupně převede • « na 65,6 g (17β)-17-[[(1,1-dimethylethyl) dimethylsilyl]oxy]-13-ethylgona-4,6-dien-3-onu.

v) Postupuje se analogickým způsobem jako v odstavci i) v příkladu 2, při použití ethylmagnesiumbromidu, čímž se 25,0 g produktu z předchozího stupně převede na 8,13 g (7α, 17β)-7,13-diethyl-17-hydroxygon-4-en-3-onu.

vi) Postupuje se způsobem podle odstavce iii) příkladu 2, čímž se 8,24 g produktu z předchozího stupně převede na 6,28 g (7α,17β)-7,13-diethyl-3-methoxygona.1,3,5(10)-trien-17-olu.

vii) Postupuje se způsobem podle odstavce iv) příkladu 2, čímž se 5,72 g produktu z předchozího stupně převede na 5,61 g (7a)-7,13-diethyl-3-metnoxygona-l,3,5(10)-trien-17-onu.

viii) Postupuje se způsobem podle odstavce v) příkladu 2, čímž se 5,61 g produktu z předchozího stupně převede na 6,99 g cyklického 1,2-ethandiylacetalu (7a)-7,13-diethyl-3-methoxygona-l,3,5(10)-trien-17-onu.

ix) Postupuje se analogickým způsobem jako v odstavci vi) příkladu 2, čímž se 6,27 g produktu z předchozího stupně převede na 8,47 g cyklického 1,2-ethandiylacetalu (7a,16a)-16-brom-7,13-diethyl-3-methoxygona-l,3,5(10)— trien-17-onu.

x) Postupuje se způsobem podle odstavce vii) příkladu 2, čímž se 8,47 g produktu z předchozího stupně převede na 5,21 g cyklického 1,2-ethandiylacetalu (7a)-7,13• · · ·

-diethyl-3-methoxygona-l, 3,5 (10) , 15-tetraen-17-onu.

xi) Roztok 4,61 g produktu z předchozího stupně ve 120 ml bezvodého toluenu se smísí s 3,18 g pyridinium-p-toluensulfonátu a směs se 1 hodinu vaří. Po zchlazení se reakční směs vlije do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 4,44 g cyklického 1,2-ethandiylacetalu (7a)-7,13-diethyl-3-methoxygona-l,3,5(10),14-tetraen-17-onu. Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

xii) K roztoku 4,44 g produktu z předchozího stupně ve 120 ml bezvodého toluenu se přidá 2,29 g kyseliny p-toluensulfonové a směs se 45 minut vaří pod zpětným chladičem. Po zchlazení se reakční směs vlije do nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, promyjí se vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se síranem hořečnatým a odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 3,89 g (7a)-7,13-diethyl-3-methoxygona-l,3,5(10) , 14-tetraen-17-onu . Tento produkt se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

xiii) Způsobem podle odstavce vii) příkladu 4 se 3,89 g produktu z předchozího stupně převede na 2,79 g (7α,17β)-7,13-diethyl-3-methoxygona-l, 3,5(10) , 14-tetraen-17-olu.

xiv) Postupuje se způsobem podle odstavce xvii) příkladu 4, čímž se 2,0 g produktu z předchozího stupně převede na 1,77 g (7α,17β)-7,13-diethyl-3-methoxygona-2,5(10),14trien-17-olu.

xv) Postupuje se způsobem podle odstavce iii) příkladu 1, čímž se 1,77 g produktu z předchozího stupně převede na 0,36 g (7cc, 17β)-7,13-diethyl-17-hydroxygona-4,14-dien-3-onu s teplotou tání 181,5 až 183,5 °C.

Příklad 7 (7α,17β)-7-ethenyl-13-ethyl-17-hydroxygona-4, 14-dien-3-on

i) Postupuje se způsobem podle stupně i) příkladu 2, čímž se 25,0 g (17β)-17-[[(1,1Χίιτιβίύγ1θίύγ1ΜίΓηΘίύγΐ3ί1γ1]oxy]-13-ethylgona-4,6-dien-3-onu ze stupně iv) příkladu 6 převede na 8,20 g (7α,17β)-7-ethenyl-13-ethyl-17-hydroxygon-4-en-3-onu.

ii) Postupuje se analogickým způsobem jako ve stupni iii) příkladu 2, čímž se 7,76 g produktu z předchozího stupně převede na 5,16 g (7α, 17β)-7-ethenyl-13-ethyl-3-methoxygona-1,3,5(10)-trien-17-olu.

iii) Postupuje se způsobem podle odstavce iv) příkladu 2, čímž se převede 5,43 g produktu z předchozího stupně na 5,0 g (7a)-7-ethenyl-13-ethyl-3-methoxygona-l, 3,5(10)trien-17-onu.

iv) Postupuje se analogickým způsobem jako v odstavci v) v příkladu 2, čímž se 4,92 g produktu z předchozího stupně převede na 5,42 g cyklického 1,2-ethandiylacetfilr:

(7a)-7-ethenyl-13-ethyl-3-methoxygona-l,3,5(10)-trien-17-onu.

v) Postupuje se analogickým způsobem jako v odstavci vi) příkladu 2, čímž se 5,08 g produktu z předchozího stupně převede na 7,41 g cyklického 1,2-ethandiylacetalu (7a,16a)-16-brom-7-ethenyl-13-ethyl-3-methoxygona-1,3,5(10)-trien-17-onu.

vi) Postupuje se analogickým způsobem jako v odstavci vii) příkladu 2, čímž se 7,41 g produktu z předchozího stupně převede na 3,87 g cyklického 1,2-ethandiylacetalu (7a)-7-ethenyl-13-ethyl-3-methoxygona-l,3,5(10),15-tetraen-17-onu.

vii) Postupuje se způsobem podle odstavce xi) příkladu 6, čímž se 3,42 g produktu z předchozího stupně převede na 3,30 g cyklického 1,2-ethandiylacetalu (7a)-7-ethenyl-13-ethyl-3-methoxygona-l,3,5(10) , 14-tetraen-17-onu.

viii) Postupuje se způsobem podle odstavce xii) příkladu 6, čímž se 3,30 g produktu z předchozího stupně převede na 3,0 g (7a)-7-ethenyl-13-ethyl-3-methoxygona-1,3,5(10),14-tetraen-17-onu.

ix) Postupuje se analogickým způsobem jako v odstavci vii) příkladu 4, čímž se 3,00 g produktu z předchozího stupně převedena 1,70 g (7α,17β)-7-ethenyl-13-ethyl-3-methoxygona-1,3,5(10),14-tetraen-17-olu.

• · • · · ·

x) Postupuje se analogickým způsobem jako v odstavci xvii) příkladu 4, čímž se 1,49 g produktu z předchozího stupně převede na 1,60 g (7α, 17β)-7-ethenyl-13-ethyl-3-methoxygona-2,5(10),14-trien-17-olu.

xi) Postupuje se způsobem podle odstavce iii) příkladu 1, čímž se 1,60 g produktu z předchozího stupně převede na 0,47 g (7α,17β)-7-ethenyl-13-ethyl-17-hydroxygona-4,14-dien-3-onu s teplotou tání 141 až 145 °C.

Příklad 8 (3β,7α,17 β)-7-ethylestra-4,14-dien-3,17-diol

Postupuje se způsobem podle odstavce vii) příkladu 4, čímž se z (7α, 17β)-7-ethyl-17-hydroxyestra-4,14-dien-3-onu z příkladu la připraví výsledný produkt.

^XH NMR (CDC1₃) δ 5,39 (m, ÍH) , 5,01 (m, ÍH) , 4,21 (m,

ÍH), 3,96 (m, ÍH), 0,98 (s, 3H) , 0,87 (t, 3H, J=7,6 Hz).

Příklad 9 (5α,7a,17β)-7-ethyl-17-hydroxyestr-14-en-3-on

Roztok 0,67 g (7a, 17β)-7-ethyl-17-hydroxyestra-4,14-dien-3-onu z příkladu la) ve 13 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá při teplotě varu pod zpětným chladičem k roztoku 0,31 g lithia ve 44 ml kapalného amoniaku. Po 30 minutách míchání při teplotě -40 °C se přidá pevný chlorid amonný a amoniak se nechá odpařit. Přidá se voda a produkt se extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí a promyjí se nasyceným vodným roztokem chloridu amonného a nasyceným vodným roztokem • · ♦ · • · ·· ·· ···· chloridu sodného, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Chromatografií na sloupci se získá 0,21 g (5α, 7α, 17β)-7-ethyl-17-hydroxyestr-14-en-3-onu. ^αΗ NMR (CDC1₃) δ 5,02 (s, 1H) , 3,98 (t, 1H, J = 8,4 Hz), 0,99 (s, 3H), 0,89 (t, 3H, J = 7,5 Hz).

Příklad 10

Stanovení účinnosti při potlačení LH při perorálním podání

Účinnost některých androgenů podle vynálezu in vivo při perorálním podání byla stanovena na krysím modelu dospělých kastrovaných krysích samců, účinnost byla srovnávána se sloučeninou podle Segaloffa.

V tomto modelu je koncentrace LH v séru vysoká, 50krát vyšší než u intaktních krys vzhledem k nepřítomnosti negativní zpětné vazby testosteronu z varlat. Krysím samcům byla 4 dny každý den podávána zvolená sloučenina podlé vynálezu v suspenzi arašídového oleje. Před podáním této látky a 3 hodiny po poslední perorální dávce byla odebrána z ocasní žíly krev a byla stanovena koncentrace LH v krevním séru. Účinnost androgenů při perorálním podání jako ED₅₀ se vyjadřuje v mg/kg, jde o množství androgenu, které sníží o 50 % ± 10 % koncentraci LH v krevním séru.

Imunofluorometrická zkouška na LH krysy v průběhu času, TR-IFMA byla vyvinuta přímo v laboratoři při použití reakčních činidel, přímo v laboratoři vyrobených, mimo to byla použita monoklonální protilátka proti β-podjednotce lidského choriového gonadotropinu (hCG se zkříženou reakcí proti krysí β-podjednotce) pro zachycení • * a dále byla použita pro detekci biotinem značená protilátka (králičí polyklonální protilátka proti α-podjednotce rekombinantního LH krysy). Rekombinantní LH krysy byl připraven způsobem podle publikace Hakola a dalších 1997. Při této zkoušce IFMA se při konečné inkubaci se straptavidinem-europium stanoví pouze neporušený LH krysy. Detekce IFMA je založena na fluorescenci lanthanidu europia v průběhu poměrně dlouhé doby excitace. Koncentrace krysího standardu LH je v rozmezí 0,001 až 10 ng/ml, pro optimální přesnost měření byly vzorky LH v séru zředěny 8krát pufrem pro provádění zkoušek podle publikace Hakola K., Boogaart P. V.,

Mulders J., de Leeuw R., Schoonen W., Heyst J. V., Swolfs A., Casteren J. V., Huhtaniemi I. a Kloosterboer H. J., Recombinant rat luteinzing hormone, production by Chinese hamster ovary cells, purification and functional characterization, Molecular & Cellular Endocrinology 128, 47, 1997. Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce.

Tabulka: ED₅o při perorálním podání při potlačení LH v séru androgeny podle vynálezu o 50 % ± 10 %.

Příklad	ED₅₀ (mg/kg)
la	0,2
2	0,5
Segaloffova	5
sloučenina*

*(7α,17β)-7-methyl-17-hydroxyestra-4,14-dien-3-on

Příklad 11

Stanovení ti/₂ pro androgeny podle vynálezu po inkubaci s lidskými hepatocyty

Poločas sloučenin při styku s lidskými hepatocyty poskytuje informace o metabolické stabilitě těchto látek. Jak je dobře známo, je vstřebáváni této skupiny steroidů vysoké a zkouška poskytuje model pro perorální účinnost u člověka in vivo. Je zřejmé, že v případě kratšího poločasu bude sloučenina metabolizována rychleji a naopak, čím delší je poločas, tím delší je účinnost zkoumané látky v lidském organismu po perorálním podání.

Hepatocyty byly odebrány od zdravých mužů ve věku 25 až 45 let a byly zmrazený v kapalném dusíku a uchovávány ve zmrazeném stavu až do použití. Pak byly ponechány roztát ve vodní lázni při teplotě 37 °C, okamžitě uloženy do ledu, dvakrát promyty jedním objemem inkubačního prostředí s teplotou 4 °C (šlo o Williamsovo prostředí E bez fenolové červeně s Glutamax I^R, gentamicinem 50 fg/ml, insulinem 1 μΜ, hydrokortisonhemisukcinátem 10 μΜ a fetálním telecím sérem 0 % objemových), pak byl určen počet buněk a jejich životnost byla ověřena pomocí trypanové modři. Buňky byly inkubovány ve formě suspenze ve vyhloubeních nepovlečených ploten s 12 vyhloubeními při nominální hustotě 0,5 χ 10⁶ buněk/vyhloubení v 1,5 ml prostředí při teplotě 37 °C při použití směsi vzduchu, kyslíku a oxidu uhličitého v poměru 55:40:5. Plotny byly uloženy na orbitální třepačce a míchány rychlostí přibližně 10 otáček za minutu.

Hepatocyty byly inkubovány s konečnou koncentrací zkoumané látky 10 nM. Inkubace byla zastavena po 0,5, 1 a 3 hodinách napipetováním celé inkubační směsi do skleněné zkumavky a přidáním jednoho objemu acetonu v ledu. Aceton « « ··* · «· • « · ···· ·· · ·· * • · · · · ·*·· · byl vysušen pod proudem dusíku při teplotě místnosti, objem byl upraven na 1,5 ml a zkumavky byly odstředěny 30 minut při teplotě 4 °C a 10 000 g. Supernatanty, zbavené bílkovin, byly použity pro analýzu LC-MS/MS. Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce.

Tabulka: ti/₂ pro androgeny podle vynálezu po inkubaci s lidskými hepatocyty

Příklad	ti/2 (min)
la	157
2	4 0
Segaloffova	60
sloučenina*

* (7α, 17β)-7-methyl-17-hydroxyestra-4,14-dien-3-on

Zastupuj e:

//2• · ···· ·· ···· · · ·· • * ·· ··« ·>··· ·· » «« • * · · · ··*· ·

Λ Q · · ······<

£. ······· · · ·· · · · · ·

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Androgeny obecného vzorce I kde

Ri znamená 0, (Η,Η), (H, OR) , NOR, kde R znamená atom vodíku, Cl-C6alkyl nebo Cl-C6acyl,

R₂ znamená C2-C4alkyl, C2-C4alkenyl nebo C2-C4alkinyl, popřípadě substituované atomem halogenu nebo cyklopropyl nebo cyklopropenyl, popřípadě substituované

Cl-C2-alkylovým zbytkem nebo halogenem,

R₃ znamená atom vodíku, Cl-C2alkyl nebo ethenyl,

R₄ znamená C1-C2 alkyl, ·.

R₅ znamená atom vodíku nebo Cl-C15acyl, přerušované čáry označují případné vazby.
2. Androgeny podle nároku 1, v nichž se R₂ volí ze skupiny ethyl, ethenyl, ethinyl, propyl, 1-propenyl, 2propenyl, 1-propinyl, 1,2-propadienyl a cyklopropyl.
3. Androgeny podle nároku 2, v nichž R₂ znamená uhlovodíkový zbytek o 2 atomech uhlíku.
4. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se t i m, že obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič a jako účinnou složku androgen strukturního vzorce • · · · kde

Ri znamená O, (Η,Η), (H, OR) , NOR, kde R znamená atom vodíku, Cl-C6alkyl nebo Cl-C6acyl,

R2 znamená C2-C4alkyl, C2-C4alkenyl nebo C2-C4alkinyl, popřípadě substituované atomem halogenu nebo cyklopropyl nebo cyklopropenyl, popřípadě substituované

Cl-C2-alkylovým zbytkem nebo halogenem,

R₃ .znamená atom vodíku, Cl-C2alkyl nebo ethenyl,

R₄ znamená C1-C2 alkyl,

R₅ znamená atom vodíku nebo Cl-C15acyl, přerušované čáry označují případné vazby.
5. Farmaceutický prostředek podle nároku 4, vyznačující se tím, že se v účinné látce R₂ volí ze skupiny ethyl, ethenyl, ethinyl, propyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-propinyl, 1,2-propadienyl a cyklopropyl.
6. Farmaceutický prostředek podle nároku 4, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje (7α,17β)-7-ethyl-17-hydroxyestra-4,14dien-3-on nebo (7α, 17β)-7-ethenyl-17-hydroxyestra-4,14dien-3-on.

• » • » · · · · · * · » «I ·» * • · · « · 6 · • · · · » « · • » » · # · · * · ·
7. Farmaceutický prostředek podle některého z nároků 5 nebo 6, vyznačující se tím, že je upraven pro perorální podání.
8. Použití androgenu obecného vzorce I, podle nároku 1 pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení nedostatku androgenů.
9. Balíček pro antikoncepci u mužů s obsahem prostředku pro podání progestagenů a prostředku pro podání androgenů, vyznačující se tím, že jako prostředek pro podání androgenů obsahuje farmaceutický prostředek podle některého z nároků 4 až 7.

Zastupuj e: