CS277592B6 - Dividing materials based on hydroxyl groups-containing carriers - Google Patents

Dividing materials based on hydroxyl groups-containing carriers Download PDF

Info

Publication number
CS277592B6
CS277592B6 CS891981A CS198189A CS277592B6 CS 277592 B6 CS277592 B6 CS 277592B6 CS 891981 A CS891981 A CS 891981A CS 198189 A CS198189 A CS 198189A CS 277592 B6 CS277592 B6 CS 277592B6
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
alkyl
groups
mono
radical
sulfonic acid
Prior art date
Application number
CS891981A
Other languages
English (en)
Other versions
CS198189A3 (en
Inventor
Werner Dr Muller
Joachim Dr Kinkel
Original Assignee
Merck Patent Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=6351195&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CS277592(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Merck Patent Gmbh filed Critical Merck Patent Gmbh
Publication of CS198189A3 publication Critical patent/CS198189A3/cs
Publication of CS277592B6 publication Critical patent/CS277592B6/cs

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J39/00—Cation exchange; Use of material as cation exchangers; Treatment of material for improving the cation exchange properties
    • B01J39/08—Use of material as cation exchangers; Treatment of material for improving the cation exchange properties
    • B01J39/16—Organic material
    • B01J39/18—Macromolecular compounds
    • B01J39/20—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving unsaturated carbon-to-carbon bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/3278—Polymers being grafted on the carrier
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J41/00—Anion exchange; Use of material as anion exchangers; Treatment of material for improving the anion exchange properties
    • B01J41/08—Use of material as anion exchangers; Treatment of material for improving the anion exchange properties
    • B01J41/12—Macromolecular compounds
    • B01J41/14—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving unsaturated carbon-to-carbon bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
    • B01D15/361—Ion-exchange
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
    • B01D15/3804—Affinity chromatography

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)

Description

Vynález se týká dělicích materiálů na základě nosičů obsahujících hydroxylové skupiny, jejichž povrch je potažen kovalentně vázanými polymery.
Dělicí materiály podle vynálezu se mohou použít k dělení makromolekul, obzvláště k frakcionování biopolymerů.
Dělení a čištění biologických makromolekul, jako například nukleových kyselin, proteinů, enzymů, subcelulárních jednotek, peptidů, monoklonálních antitělísek nebo celých buněk, má s ohledem na genetickou technologii a biotechnologii velký význam.
V literatuře jsou popsány některé dělicí metody pro biopolymery.
Je například známé, že se směsi nukleové kyseliny a proteinů mohou dělit ve vodném dvoj fázovém systému polyethylenglykol-dextran protiproudovým způsobem. /P.A.Albertson /1971/, 2. vyd., Almquist & Wiksoll, Stockholm/. Dále byl popsán v EP 0154246 fázový nosič pro dělicí chromatografií biopolymerů ve dvoj fázovém systému. Tyto fázové nosiče sestávají z neadsorpčních, ve fázovém systému nerozpustných základních částic, jejichž povrch je potažen pevně přilnavým materiálem /například chemicky vázaným polyakrylamidem/ s afinitou pro jednu z fází fázového systému.
K frakcionování biologických makromolekul je také známé použití ionexů. Obvyklé materiály sestávají z polymerů jako například polymethakrylátu, polystyrenu, agarózy, zesítěného dextranu nebo silikagelu, které nesou příslušné funkční skupiny.
Rozpouštěcí schopnost a vazebná kapacita těchto materiálů je však často velice neuspokojivá. Dále se dělené biomolekuly často denaturují nebo se neúplně eluují.
Úkolem předloženého vynálezu je vyvinout dělicí materiály pro frakcionování biopolymerů univerzálně použitelné v chromagerafii, které jsou zbaveny uvedených nedostatků, tj. umožňují při vyšší kapacitě zcela reverzibilně bez denaturace vázat dělené molekuly.
Neočekávaně bylo zjištěno, že dělicí materiály podle vynálezu splňují shora uvedené předpoklady a jsou vhodné pro frakcionování makromolekul, obzvláště biopolymerů. Přitom jsou tyto dělicí materiály universálně vhodné pro afinitní chromatografií, reverzní fáze nebo hydrofobni chromatografií nebo obzvláště vhodné pro ionexovou chromatografií.
Předmětem vynálezu jsou proto dělicí materiály na základě nosičů obsahujících hydroxylové skupi. , jejichž povrch je potažen kovalentně vázanými polymery, které se vyznačují tím, že základem polymerů jsou monomery vzorce 1'
CH?=CR1-C-X 2 II · (I·) o
kde
R1 znamená vodík nebo CH3,
X znamená -OH nebo -NR2R3,
R2 a R3 znamenají alkylovou, fenylovou, fénylalkylovou nebo alkylfenylovou skupinu až š 10 atomy 1 uhlíku v alkylové skupině, přičemž tyto skupiny mohou být jednou nebo vícenásobně substituovány alkoxyskupinou, kyanoskupinou, aminoskupinou, mono- nebo dialkylaminoskupinou, trialkylamoniovým zbytkem, karboxylovým zbytkem, zbytkem kyseliny sulfonové, acetoxy-zbytkem nebo acetamino-zbytkem, cyklický nebo bicyklický zbytek s 5 až 10 atomy uhlíku, kde jedna nebo více CH- nebo -CH2-skupin jsou nahrazeny N nebo NH, N nebo NH a S, nebo N nebo NH a 0, nebo sulfonsulfid struktury
-/CH2/n-SO2-/CH2/n-S/CH2/n OH S n = 2-6 a jeden ze zbytků R2 a R3 může také znamenat vodík, přičemž R2 a R3 jsou vzájemně tak sladěny, že buď oba zbytky jsou kyselé, nebo zásadité nebo jeden z nich je neutrální.
Dále je předmětem vynálezu způsob přípravy dělicích materiálů na základě nosičů obsahujících hydroxylové skupiny, jejichž povrch je potažen kovalentně vázanými polymery, roubovanou polymerací za přítomnosti ceričitého iontu, při kterém se nosičové částice obsahující hydroxylové skupiny suspendují a polymerují v roztoku monomerů vzorce I'
CH0=CR1-C-X
II ď) o
kde
R1 znamená H nebo CH3,
X znamená -OH nebo -NR2R3,
R2 a R3 znamenají alkylovou, fenylovou, fénylalkylovou nebo alkylfenylovou skupinu až s 10 atomy uhlíku v alkylové skupině, přičemž tyto skupiny mohou být jednou nebo vícenásobně substituovány alkoxyskupinou, kyanoskupinou, aminoskupinou, mono- nebo dialkylaminoskupinou, trialkylamoniovým zbytkem, karboxylovým zbytkem, zbytkem kyseliny sulfonové, acetoxyzbytkem nebo acetaminozbytkem, cyklický nebo bicyklický zbytek s 5 až 10 atomy uhlíku, kde jedna nebo více CH- nebo CH2-skupin jsou nahrazeny N nebo NH, N nebo NH a S, nebo N nebo NH a 0, nebo sulfonsulfid struktury
-CH2/n-SO2-/CH2/n-S/CH2/nOH S n = 2-6 a jeden ze zbytků R1 a R2 může také znamenat vodík, přičemž R2 a R3 jsou tak vzájemně sladěny, že buď oba zbytky jsou kyselé, nebo zásadité nebo jeden z nich je neutrální.
Struktura dělicích materiálů podle vynálezu je podobná jako u fázových nosičů v EP 0154246. Jako protiklad ke zde popsaným materiálům mají u sloučenin podle vynálezů polymery na povrchu nosičových částic však jinou strukturu a vlastnosti. Materiály popsané v EP 015.4246 se především používají jako fázový nosič pro rozdělovači chromatografii ve dvoj fázovém systému a neobsahují žádné chromatografíčky aktivní skupiny. Naopak jsou materiály podle vynálezu chromatograficky aktivní a mohou se použít jako ionexy a také jako nosič pro afinitní chromatografii nebo hydrofobní chromatografii.
Dělicí materiály podle vynálezu sestávají z nosičových částic s hydroxylovými skupinami, na které je naroubován přes α - C-atomy hydroxylových skupin polymerní materiál, odvozený od monomerů vzorce I'.
Jako nosičové částice přicházejí v úvahu všechny obecně známé porézní a neporézní chromatografické nosiče, které mají na povrchu primární nebo sekundární, alifatické hydroxylové funkce.
Výhodné jsou například hydrofilni polymery na bázi akrylátů a methakrylátů, polymery na bázi polyvinylalkoholu, diolem substituované silikagely, polysacharidy na bázi agarózy, celulóza, celulozové deriváty nebo polymery na bázi dextranu. Mohou se však samozřejmě použít také jiné polymery nebo kopolymery na základě monomerů jako vinylových sloučenin, akrylamidu, meth/akrylové kyseliny nebo /meth/akrylnitrilu v hydroxylové formě.
Polymerní materiál, který je vázán přes α-C-Atomy hydroxylových skupin na nosičové částice, je založen na’monomerech vzorce I'. Tyto monomery představuj í /meth/akrylovou kyselinu /Y =-COOH/, derivát /meth/akrylové kyseliny /Y = -C-X/, , , Ó allylamin /Y =-CH2NH2, -CH2NR2RJ/, /meth/akrylnitrii /Y = -CN/, akrolein /Y = -CHO/, vinylkarboxylát /Y = -OCOCHR5R6/.
Všechny tyto monomery představují ve vodném roztoku radikálově polymerovatelné látky s reverzibilně vázanými skupinami, které mohou být neutrální, kyselé nebo zásadité.
Jestliže se použijí jako monomery vinylkarboxylát CR+7_++ =
CR1-OCOXHR5R6 vzorce I’, převede se s výhodou získaný produkt potom na dělicí materiál s hydroxylovými skupinami. Toto převedení na hydroxylovou fázi se dosáhne známým slabě alkalickým nebo kyselým zmýdelněním. Například se může reakce provést methanolickým roztokem K2CO3 při teplotě místnosti, popisuje například Y. Tezuka et. al., v Macromol. Chem. 186, 685-694 /1985/.
Ve vzorcích 1', znamená R1 s výhodou vodík, tzn., že jsou výhodné deriváty kyseliny'akrylové.
X znamená jak ve v jak ve vzorci I' - OH nebo -NR2R3, s výhodou -NR2R3.
Výhodné jsou přitom sloučeniny, ve kterých X znamená -NR2R3 a jeden ze zbytků R2 a R3 je vodík.
Zbytky R a/nebo R znamenají výhodně alkylovou, fenylovou, fenylalkylovou nebo alkylfenylovou skupinu, přičemž alkylová a/nebo fenylová skupina může být jednou nebo vícenásobně, s výhodou jednou nebo dvojnásobně, obzvláště výhodně jednou, substituovaná alkoxy-, kyano-, amino-, mono- nebo dialkylaminoskupinou, trialkylamoniovým zbytkem, karboxylovým zbytkem, zbytkem kyseliny sulfonové, acetoxy- nebo acetamino-zbytkem.
Zbytky R2 a/nebo R3 znamenají výhodně alkyl, alkoxyalkyl, kyanoalkyl, aminoalkyl, mono- nebo dialkylaminoalkyl, trialkyl-amoniumalkyl, karboxyalkyl nebo zbytek kyseliny sulfonové-alkyl až s 10 atomy uhlíku, s výhodou až se 6 atomy uhlíku, obzvláště výhodně až se 4 atomy uhlíku v alkylové skupině, které mohou být přímé nebo rozvětvené. R2 a/nebo R3 znamenají výhodně methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, methoxymethyl, ethoxymethyl,
2-methoxyethyl, 2-,3- nebo 4-oxapenthyl, 2-, 3-, 4- nebo 5-oxahexyl, 2-, 3-, 4-, 5- nebo 6-oxaheptyl, isopropyl, 2-butyl, isobutyl, 2-methylbutyl, isopentyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl,
2-oxa-3-methylbutyl, 3-oxa-4-methylbutyl, 2-methyl-3-oxapentyl,
2-methyl-3-oxahexyl, dále také heptyl, oktyl, nonyl nebo decyl.
Dále jsou výhodné také alkylové skupiny, které jsou substituovány kyanoskupinou, karboxyskupinou nebo skupinou kyseliny sulfonové. Podle toho znamená R2 a/nebo R3 výhodně kyanomethyí, kyanoethyl, kyanopropyl, kyanobutyl, kyanopentyl, kyanohexyl,
2-kyanopropyl, 2-kyanobutyl, karboxylmethyl, karboxylethyl, karboxylpropyl, karboxylisopropyl, karboxylbutyl, karboxylpentyl, karboxylhexyl, karboxyl-2-methylpropyl, karboxyl-2-methylbutyl, sulfonová kyselina - methyl, sulfonová kyselina-ethyl, sulfonová kyselina - propyl, sulfonová kyselina-butyl, sulfonová kyselina-pentyl, sulfonová kyselina-hexyl, sulfonová kyselina-2-methylpropyl, sulfonová kyselina-2-methylbutyl, sulfonová kyselina-3-methylbutyl, sulfonová kyselina-2-methylpentyl, sulfonová kyseselina-3-methylhexyl nebo sulfonová kyselina-2-ethylpentyl.
Dále jsou výhodné alkylové skupiny jednou substituované aminoskupinou, mono- nebo dialkylaminoskupinou nebo trialkylamonnou skupinou. Alkylové skupiny mohou přitom být stejné nebo rozdílné a mají až 10, s výhodou až 6 atomů uhlíku, obzvláště výhodně až 4 atomy uhlíku a znamenají s výhodou dimethylaminoethyl, diethylaminoethyl, methylaminoethyl, methylaminopropyl, dimethyláminopropyl, ethylaminoethyl, propylaminoethyl, propylaminopropyl, dipropylaminoethyl, dipropylaminobutyl, diethylaminoethyl, trimethylamoniumethyl, trimethylamoniumpropyl, trimethyl5 amoniumbutyl, triethylamoniummethyl, triethylamoniumpropyl, triethylamoniumethyl, aminoethyl, aminopropyl, aminobutyl nebo aminopentyl. Všechny tyto alkylové a substituované alkylové skupiny jsou také výhodné jako substituentý na fenylové skupině.
Výhodný pro R2 a/nebo R3 je také sulfonsulfid struktury -/CH2/n-SO2-/CH2/-S-/CH2/n OH s n = 2, 3, 4, 5 nebo 6, s výhodou 2, 3 nebo 4.
S výhodou znamená R2 a/nebo R3 také fenylovou skupinu, která je s výhodou jednou substituovaná kyanoskupinou, kyanoalkylem, aminoskupinou, aminoalkylem, mono- nebo dialkylaminoskupinou, alkylem, alkoxyskupinou, alkoxyalkylem, mono- nebo dialkylaminoalkylem, trialkylamonnou skupinou nebo trialkylamoniumalkylem, karboxyskupinou, karboxyalkylem, zbytkem kyseliny sulfonové nebo sulfonovou kyselinou - alkylem. Výhodné významy těchto substituentů odpovídají dříve uvedeným výhodným alkylovým skupinám a substituovaným alkylovým skupinám. Substituent na fenylové skupině je s výhodou v p-poloze.
Také výhodným významem pro R2 a/nebo R3 je p-acetoxyfenyl, p-aminofenyl nebo p-acetaminofenyl.
Pro R2 a/nebo R3 je dále výhodná alkylfenylová nebo fenylalkylová skupina, přičemž také platí uvedené výhodné významy pro alkylovou, substituovanou alkylovou nebo substituovanou fenylovou skupinu.
Podle toho jsou například jako obzvláště výhodné následující substituované fenylové skupiny: 4-kyanofenyl, 4-alkylfenyl, 4-/N,N-dimethylamino/-fenyl, 4-/N,N-dialkylaminomethyl/-fenyl, 4-ethoxyfenyl, 4-ethoxyethylfenyl, 4-trialkylamoniumfenyl, 4-karboxylfenyl, 4-sulfonová kyselina-fenyl, fenylethyl, 4-/N-ethylamino/fenylpropyl nebo 4-kyanofenylethyl.
Dále jsou výhodné jednotky vzorce I', kde R2 a/nebo R3 znamenají cyklický nebo bicyklický zbytek, který může být aromatický nebo nasycený, s 5 až 10 atomy uhlíku, přičemž jedna nebo více CH- nebo CH2 skupin jsou nahrazeny N nebo NH, N nebo NH a S, nebo N nebo NH a 0.
R2 a/nebo R3 znamenají proto s výhodou také pyridinový zbytek, imidazolylový zbytek, indolylový zbytek, dále s výhodou pyrrolový zbytek, pyrimidinový zbytek, pyrazinový zbytek, chinolinový zbytek, nebo isochinolinový zbytek.
R2 a/nebo R3 mohou například také znamenat thiazolový, thiadiazolový, morfolinový, triazinový, pyperazinový, benzothiazolový, purinový, pyrazolový, triazolový, pyrrolidinový nebo isoxazólový zbytek.
Obzvláště výhodné jsou přitom aromatické, heterocyklické zbytky.
Zbytky R2 a R3 musí, aby se získaly vhodné ionexy, být tak vzájemně sladěny, aby bud oba zbytky obsahovaly kyselou, nebo zásaditou skupinu nebo aby však jeden ze zbytků byl neutrální. Pro odborníka není žádnou obtíží skupiny příslušně sladit a tak sestavit vhodné zbytky pro R2 a R3, podle funkce a zadání žádaného ionexu.
S výhodou je jeden z obou zbytků R2 a R3 neutrální zbytek.
K přípravě materiálu podle vynálezu se nosičové částice obsahující hydroxylové skupiny suspendují v roztoku monomeru, s výhodou ve vodném roztoku. Naroubování polymerního materiálu probíhá jako obvyklá redox-polymerace za vyloučení kyslíku. Jako polymerační katalyzátor se použijí ceričité ionty, protože tento katalyzátor tvoří na povrchu nosičových částic radikálová místa, ze kterých začíná roubovaná polymerace monomerů. Délka a počet vznikajících řetězců se může upravit podle přání odborníkem nastavením koncentrace ceričité soli a monomeru.
Podrobnosti tohoto známého způsobu uvádí E. Mino a S. Kaizerman v J. of Polymer Science, sv. XXXI, č. 182 /1958/, 242-243.
K přípravě dělicích materiálů, které mají na povrchu vázán kopolymer, se jednoduše příslušné, rozdílné monomery vzorce 1' suspendují v roztoku.
K získání ionexů podle vynálezu se musí pro kopolymeraci monomery vzorce 1' zvolit tak, aby oba monomery obsahovaly bud zásaditou, nebo kyselou skupinu nebo jeden monomer byl neutrální.
Kromě toho platí pro výběr monomerů, které jsou vhodné pro kopolymeraci, obecná pravidla a podmínky, které může odborník vyčíst ze stavu techniky.
Velký počet použitelných monomerů vzorce 1' vede k velké paletě slabě zásaditých, slabě kyselých až silně kyselých nebo zásaditých ionexů a také nosičů pro afinitní chromatografií nebo hydrofobní chromatografií.
Materiály podle vynálezu jsou obzvláště vhodné pro frakcionování biopolymerů, jako například peptidů, proteinů, a nukleových kyselin.
Dále se mohou tyto materiály použít k dělení a čištění virů, buněčnatých částic, pro-karyontických nebo eukaryontických buněk a také proteinových komplexů.
Pro každý problém dělení se může při velkém počtu monomerů připravit optimální dělicí materiál, takže se mohou kombinovat účinky afinity s iontovými vazbami.
Jako ionexy jsou obzvláště vhodné dělicí materiály, které obsahují ve vzorci I-C-X, -CH2NH2 nebo -CH2-NR2R3.
Materiály se skupinou-CHO ve vzorci I jsou obzvláště vhodné pro afinitní chromatografií.
Ukázalo se, že jsou připravitelné materiály podle vynálezu s daleko vyšší vazebnou kapacitou než obvyklé ionexy nebo obvyklé nosiče pro afinitní chromatografií.
Kromě toho je u těchto materiálů například zcela referzibilně vázána desoxyribononukleová kyselina a podle její velikosti se mohou oddělit restrikční fragmenty.
Velká přednost těchto nových ionexů spočívá v tom, že pohyblivostí naroubovaných řetězců polymeru má každá naplněná makromolekula příslušné protiskupiny v optimální vzdálenosti k matrici.
Kromě toho nevznikají žádné strukturální změny vázané makromolekuly, protože ionex se svými například zásaditými skupinami je v souladu s uspořádáním kyselých skupin makromolekul a ne naopak .
S materiálem podle vynálezu je možné získat různé dělicí materiály, které vzhledem ke struktuře a funkci jsou nové a jsou k dispozici k dělení makromolekul, obzvláště biopolymerů.
Následující příklady slouží k dalšímu objasnění vynálezu. V příkladech jsou použity jako výchozí materiály následující nosiče obsahující hydroxylovou skupinu:
Fractogel(S) TSK HW 65 /S/ - 5S/S/ - porézní směsný polymer na bázi vinylu, 1 m ekv. OH/g./Fy.E.Merck/
LiCHrospher^S)- Diol: diolem substituovaný silikagel /Fy. E. Marek/.
Příklad 1
Příprava slabě kyselého katexu^-x ml odsátého Fractogelu65 /s/ se suspenduje v roztoku 19 g kyseliny akrylové ve 150 ml vody, propláchne se argonem a za vyloučení kyslíku se přidá při 25 ’C 15 ml 0,4 M roztoku dusičnanu ceričitoamonného v 0,1 M kyseliny dusičné a míchá se 3 hodiny při stejné teplotě. Reakční produkt se odsaje, promyje vodou, potom 500 ml siřičitanu sodného v 10% kyselině octové, potom 500 ml 0,2 M roztoku NaOAc a nakonec opět vodou.
Produkt obsahuje 0,8 mvalu kyselých skupin na ml a váže 99 mg lysozymu na ml naplněného gelu z 20 mM fosforečnanu sodného jako pufru, pH 7,0, který se v 0,5 molu/1 NaCl ve fosforečnanu zcela opět x/olní.
Příklad 2
Příprava slabě zásaditého ionexu. x-x 0
100 ml sedimentovaného LiChrospherkS/- Diol /1 000 A šíře pórů, 10 μπι velikost částic/ se promyje důkladně destilovanou vodou, 0,2 M roztokem NaOAc a opět vodou a suspenduje se v roztoku
104 g Ν,Ν-dimethylaminoethylakrylamidu /A/ v 700 ml vody /kyselíCS 277592 B6 nou dusičnou upraveno na pH 5,0/ v 1 000 ml. reakční nádobě s termostatovým pláštěm a temperuje se na 25 °C a vzdušný kyslík se vytěsní ze suspenze argonem. Přidá se 100 ml 0,4 M roztoku dusičnanu ceričitoamonného v 1 M HNO3 za vyloučení vzduchu a suspenze se míchá při cca 200 UpM 3 hodiny lopatkovým míchadlem. Reakce se zastaví přístupem vzduchu, reakční produkt se odfiltruje, promyje se 500 ml vody, 500 ml 0,2 M Na2SO3 v 10% AcOH, potom se propláchne 500 ml 0,2 M NaOAC a promyje se vodou do neutrální reakce .
N-obsah: 1,1 %; vazebná kapacita pro albumin z hovězího séra:
mg/ml gelu /0,05 M Tris-pufr, pH 8,3/.
Příklad 3
Příprava zásaditého ionexu 0
Roubovaná polymerace na LiChrospher^/- Diol /1 000 A šíře pórů, 10 μπι velikost částic/
Příprava se provádí analogicky podle příkladu 2; místo /A/ se však použije 123 g Ν,Ν-diethylaminoethyl-akrylamidu /B/. N-obsah: 0,5 %; vazebná kapacita pro albumin z hovězího séra:
mg/ml /0,05 M Tris-pufr, pH 8,3/.
Příklad 4
Příprava silně zásaditého ionexu zs\ Q
Výchozí materiál: LiChrospher- Diol /1 000 A šíře pórů, μϊΐι velikost částic/
Příprava se provádí analogicky podle příkladu 2; místo /A/ se použije 113 g trimethylamoniumethyl-akrylamidu /C/.
N-obsah: 0,5 %; vazebná kapacita pro albumin z hovězího séra:
76,3 mg/ml gelu /0,05 M Tris-pufr, pH 8,3/.
Příklad 5
Příprava silně kyselého ionexu . x-\ o
Výchozí materiál: LiChrospherDiol /1 000 A síře pórů, μιη velikost částic/
Příprava se provádí analogicky podle příkladu 2; místo /A/ se použije 150 g 2-akrylamido-2-methylpropansulfonové kyseliny /D/. N:0,2 %; S: 0,2 %; vazebná kapacita pro lysozym:
mg/ml gelu /20 mM PO4, pH 7,0/
Příklad 6
Příprava slabě zásaditého ionexu/->
Výchozí materiál: Fractogel\5/TSK HW 55/S/
Příprava se provádí analogicky podle příkladu 2; místo
LiChrospher (£)- Diol se použije 100 ml Fractogelu®a 60 g Ν,N-dimethylaminoethyl-akrylamidu /Á/.
N: 5,31 %; vazebná kapacita pro albumin z hovězího séra:
mg/ml gelu /0,05 M Tris, pH 8,3/.
Příklad 7
Příprava zásaditého ionexu /~\
Výchozí materiál: FractogelTSK HW 65 /M/
Příprava se provádí analogicky podle příkladu 2;
místo /A/ se použije 123 g Ν,Ν-diethylaminoethyl-akrylamidu.
N: 2,5 %; vazebná kapacita pro albumin z hovězího séra:
mg/ml gelu /0,05 M Tris-pufr, pH 8,3/.
Příklad 8
Příprava silně zásaditého ionexu^
Výchozí materiál: Fractogel TSK HW 65/M/ 100 ml
113 g trimethylamoniumethylakrylamidu
Příprava se provádí podle příkladu 2.
N: 3,80 %; vazebná kapacita pro albumin z hovězího séra:
154 mg/ml gelu /0,05 M Tris-pufr, pH 8,3/.
Příklad 9
Analogicky podle příkladu 2 se připraví z 100 ml Fractogelu TSK HW 65/S/ a 150 g 2-akrylamido-2-methylpropansulfonové kyseliny silně kyselý ionex.
N: 0,5 %; S: 0,7 %; vazebná kapacita pro lysozym:
mg/ml gelu /20 mM PO4, pH 7,0/.
V předchozích příkladech znamená
Tris: Tris /hydroxymethyl/aminomethan.HC1 a PO4: fosforečnan sodný - pufr.
Příklad 10
Analogicky podle příkladu 1 se připraví Cyano-Fractogel, •vhodný pro chromatografií s reverzní fází, reakcí 100 ml
Fractogelu®TSK HW 65/S/ a 60 g akrylnitrilu.
Obsah N: 8,9 %.
Příklad 11
Analogicky podle příkladu 2 se připraví ze 100 ml LiChrospheru ®- Diolu /1 000 A šíře pórů a 10 μιη velikost částic/,
39,2 g akroleinu a 50 g N-methylakrylamidu smíšenou roubovanou polymerací aldehydová fáze pro chromatografií primárních aminů nebo pro fixaci primárních aminů a proteinů pro afinitní chromatograf ii.
Příklad 12 •T\ Analogicky podle příkladu 1 se připraví ze 100 ml Fractogelu dx TSK HW 65/s/ a 160 mg allylaminu aminová fáze.
Obsah N: 0,55 %.
Příklad 13
Analogicky podle příkladu 2 se připraví ze 100 ml sedimentovaného LiChrospherCS)- Diolu /1 000 A šíře pórů a 10 pm velikost částic/ a 36 g vinyl-acetátu acetoxy-fáze, která se může převést methanolickým roztokem K2CO3 - při teplotě místnosti na hydroxylovou fázi /srov. Y. Tezuka et al., Macromol. Chem. 186, 685-694 /1985//.
Příklad 14
Analogicky podle příkladu 2 se připraví ze 100 ml sedimentovaného LiChrospher(5) - Diolu /1 000 A šíře pórů, 10 μπι velikost částic/ a 140 g'vinylenkarbonátu fáze, která se může převést mírně alkalickým nebo kyselým zmýdelněním snadno na žádanou hydroxylovou fázi.
Následující příklady se týkají příkladů použití.
Příklad A
Frakcionace DNA-restrikčních fragmentů
Zásaditý ionex připravený podle příkladu 2 se naplní do kolony Superformance(R)/50 x 10 mm, výrobce: E.Merck/ ve 20 mM Tris-HCl, pH 6,5, ekvilibruje se stejným pufrem při 2 ml/min, přidají se tři absorpční jednotky /260 nm/ restrikčních fragmentů z pDSl - plasmidu o délce 11, 18, 31, 45, 80, 85, 87, 222, 262,
267, 270, 314, 434, 458, 587 a 657. Při následující eluci NaCl gradientem /0-1 MNaCl/ v ekvilibračním pufru při 1 ml/min. se získá velice dobré oddělení jednotlivých restrikčních fragmentů. Příklad B
Frakcionace kozího séra
Materiál připravený v příkladu 8 se naplní do kolony Superformance®/50 x 10 mm/, ekvilibruje se 20 nM Tris-HCl, pH 8,3, přidá se 50 μΐ séra ve 250 μΐ pufru a eluuje se lineárním gradientem 0 až 500 mM Na2SO4 ve stejném pufru. Získá se dobré oddělení globulinu od albuminu.
Příklad C
Dělení β-laktoglobulinu A a B
Materiál připravený podle
Superformance® /50 x 10 mm/, příkladu 3 se naplní do kolony ekvilibruje se 20 mM Na-P04, pH
6,8, přidá se 0,6 mg prodejné směsi β-laktoglobulinu A a ve 100 μΐ pufru a eluuje se gradientem /50 ml/ 0 až 500 mM Na2SO4 /lineárně/ v daném pufru.
Příklad D
Frakcionace tekutiny z břišní dutiny myší s monoklonálním antitělískem.
Materiál připravený podle příkladu 3 se naplní do kolony
Superformance(R) /50 x 10 mm/, ekvilibruje se 20 mM Tris-HCl, pH
8,3, přidá se 1,5 ml tekutiny z břišní dutiny v 4,5 ml pufru a eluuje se gradientem /100 ml/ 0 až 250 mM Na2SO4 ve výchozím pufru.
Příklad E
Frakcionace imunogl obul inu z lidského séra
1. Materiál připravený v příkladu 5 se naplní do kolony SuperformanceC^) /50 x 10 mm/, ekvilibruje se 10 mM NaOAc/HOAc, pH 5,0, přidá se 3,5 mg IgG a eluuje se NaCl gradientem /100 ml, 0 až 1 M/ ve stejném pufru. Získá se poměrně dobrá frakcionace.
2. Frakcionace podle bodu 1 za použití materiálu připraveného v příkladu 9.
3. Frakcionace IgG podle bodu 1 na obvyklém SP-Fractogelu 650/s/. Získaný eluční profil neukazuje přitom téměř žádnou frakcionaci.
Z těchto pokusů vyplývá, že při použití obvyklého materiálu následuje horší oddělení než při použití ionexů podle vynálezu.
Příklad F
Frakcionace tekutiny z břišní dutiny myší s monoklonálním antitělískem.
Silně kyselý ionex připravený podle příkladu 5 se naplní do kolony Superformancet® /50 x 10 mm/, ekvilibruje se 10 mM NaOAc/AcOH, pH 5,0, přidá se 100 μΐ tekutiny z břišní dutiny a eluuje se NaCl gradientem /50 ml 0 až 500 mM NaCl/. Získá se dobré oddělení imunoglobulinu s monoklonálním antitělískem.
Ze shora uvedených příkladů je zřejmé, že s ionexy podle vynálezu se dosáhne velice dobrých výsledků dělení a tyto materiály jsou obzvláště vhodné pro dělení biopolymerů.

Claims (12)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    CR'R -CR1
    I γ
    /1/
    1. Dělicí materiály na základě nosičů obsahujících hydroxylové skupiny, jejichž povrch je potažen kovalentně vázanými polymery, vyznačující se tím, že polymery mají stejné nebo rozdílné opakující se jednotky vzorce 1' kde
    R1 je vodík nebo CH3
    Y je -C-X-, -CN, -CHO, li
    O
    -OH, -CH2-NH2 nebo -CH2NR2R3,
    R'a R znamenají vodík nebo CH3 a jestliže Y = -OH, může jeden ze zbytků R' a R také být -OH,
    X znamená OR4,
    R2 a R3 znamenají alkylovu, fenylovou, fenylaikylovou nebo alkylfenylovou skupinu až s 10 .atomy uhlíku v alkylové skupině, přičemž tyto skupiny mohou být jednou nebo vícenásobně substituovány alkoxyskupinou, kyanoskupinou, aminoskupinou, mononebo dialkylaminoskupinou, trialkylamoniovým zbytkem, karboxylovým zbytkem, zbytkem kyseliny sulfonové, acetoxy-zbytkem nebo acetamino -zbytkem,
    - cyklický nebo bicyklický zbytek s 5 až 10 atomy uhlíku, kde jedna nebo více CH- nebo CH2-skupin jsou nahrazeny N nebo NH, N nebo NH a S, nebo N nebo NH a O, nebo sulfonsulfid struktury -/CH2/n-SO2-/CH2/n-S/CH2/n OH s n = -2-6 a jeden ze zbytků R2 a R3 může také znamenat vodík, přičemž R2 a R3 jsou vzájemně tak sladěny, že bud oba zbytky jsou kyselé, nebo zásadité nebo jeden nebo oba zbytky jsou neutrální, n je 2 až 100 a R4 znamená alkylovou, fenylovu, fenylaikylovou nebo alkylfenylovou skupinu až s 10 atomy uhlíku v alkylové skupině, přičemž tyto skupiny mohou být jednou nebo vícenásobně substituovány alkoxyskupinou, kyanoskupinou, karboxylovým zbytkem, zbytkem.kyseliny sulfonové nebo acetoxy - zbytkem.
  2. 2. Dělicí materiály podle bodu 1, vyznačující se tím, že Y ve vzorci I je - CH2NH2 nebo -CH2NR2R3, přičemž R2 a R3 mají význam uvedený v bodu 1.
  3. 3. Dělicí materiály podle bodu 1, vyznačující se tím, že Y ve vzorci I je -CN, -CHO nebo -OH.
  4. 4. Způsob přípravy dělicích materiálů na základě nosičů obsahujících hydroxylové skupiny, jejichž povrch je potažen kovalentně vázanými polymery podle bodu 1, roubovanou polymeraci za přítomnosti ceričitých iontů, vyznačující se tím, že se nosičové částice obsahující hydroxylové skupiny suspendují a polymerují v roztoku monomerů vzorce II
    CR+R++ = CR1-Y /11/ kde R1, R+ a R++ znamenají H nebo CH3,
    Y znamená -C-X, -CN, -CHO, -OCOCHR5R6,
    II o
    -CH2NH2 nebo -CH2NR2R3,
    X znamená OR4,
    R a R znamenají alkylovou, fenylovou, fenylalkylovou nebo alkylfenylovou skupinu až s 10 atomy uhlíku v alkylové skupině, přičemž tyto skupiny mohou být jednou nebo vícenásobně substituovány alkoxyskupinou, kyanoskupinou, aminoskupinou, mono- nebo dialkylaminoskupinou, trialkylamoniovým zbytkem, karboxylovým zbytkem, zbytkem kyseliny sulfonové, acetoxyzbytkem nebo acetaminozbytkem, cyklický nebo bicyklický zbytek s 5 až 10 atomy uhlíku, kde jedna nebo více CH- nebo CH2~skupin jsou nahrazeny N nebo NH, N nebo NH a S, nebo N nebo NH a 0, nebo sulfonsulfid struktury -/CH2/n-SO2-/CH2/n-S/CH2/n OH s n = 2-6 a jeden ze zbytků R1 a R2 může také znamenat vodík, přičemž R2 a R3 jsou tak vzájemně sladěny, že buď oba zbytky jsou kyselé, nebo zásadité nebo jeden nebo oba zbytky jsou neutrální.
    R4 znamená alkylovou, fenylovou, fenylalkylovou nebo alkylfenylovou skupinu s až 10 atomy uhlíku v alkylové skupině, přičemž tyto skupiny mohou být jednou nebo vícenásobně substituovány alkoxyskupinou, kyanoskupinou, karboxylovou skupinou, zbytkem kyseliny sulfonové nebo acetoxy-zbytkem, a
    R5 a R6 znamenají vodík nebo alkylovou skupinu až s 5 atomy uhlíku a/nebo vzorce III
    R+ R1 \ / /111/
    C - C ' /
    o. ,0 kde R+ a Rf znamenají H nebo CH3 a popřípadě se takto získaný produkt převede na dělicí mate riál s hydroxylovými skupinami.
  5. 5. Způsob přípravy dělicích materiálů podle bodu 4, vyznačující se tím, že se kopolymerují rozdílné monomery vzorce II a/nebo
    III.
  6. 6. Dělicí materiály na základě nosičů obsahujících hydroxylové skupiny, jejichž povrch je potažen kovalentně vázanými polymery, podle bodu 1, vyznačující se tím, že základem polymerů jsou monomery vzorce 1' ch2=cr1-c-x /1'/ kde
    R1 znamená vodík nebo CH3,
    X znamená -OH nebo -NR2R3,
    R2 a R3 znamenají alkylovou, fenylovou, fenylaikylovou nebo alkylfenylovou skupinu až s 10 atomy 1 uhlíku v alkylové skupině, přičemž tyto skupiny mohou být jednou nebo vícenásobně substituovány alkoxyskupinou, kyanoskupinou, aminoskupinou, mono- nebo dialkylaminoskupinou, trialkylamoniovým zbytkem, karboxylovým zbytkem, zbytkem kyseliny sulfonové, acetoxy-zbytkem nebo acetamino-zbytkem, cyklický nebo bicyklický zbytek s 5 až 10 atomy uhlíku, kde jedna nebo více CH- nebo -CH2-skupin jsou nahrazeny
    N nebo NH, N nebo NH a S, nebo N nebo NH a O, nebo sulfonsulfid struktury -/CH2/n-SO2-/CH2/n-S/CH2/n OH s n = 2-6 a jeden ze zbytků R2 a R3 může také znamenat vodík, přičemž R2 a R3 jsou vzájemně tak sladěny, že bud oba zbytky jsou kyselé, nebo zásadité nebo jeden z nich je neutrální.
    vyznačující se tím, že X ve
    Dělicí materiály podle bodu 6, vyznačující se tím, že X ve vzorci 1' je NR2, přičemž R2 a R3 znamenají alkyl, alkoxyalkyl, kyanoalkyl, aminoalkyl, mono- nebo dialkylaminoalkyl, trialkylamoniumalkyl, karboxyalkyl, sulfonová kyselina-alkyl až s 10 atomy uhlíku v alkylové skupině, nesubstituovaný fenyl nebo substituovaný alespoň jednou alkylovou skupinou, alkoxyskupinou, alkoxyalkylovou skupinou, kyanoskupinou, kyanoalky8 lovou skupinou, aminoalkylovou skupinou, aminoskupinou, mononebo dialkylamino skupinou, mono- nebo dialkylaminoalkylovou skupinou, trialkylamoniovou skupinou, trialkylamoniumalkylovou skupinou, karboxyskupinou, karboxyalkylovou skupinou, skupinou sulfonové kyseliny, sulfonová kyselina - alkylovou skupinou, acetoxyskupinou nebo acetaminoskupinou až s 10 atomy uhlíku v alkylové skupině, cyklický nebo bicyklický zbytek s 5 až 10 atomy uhlíku, přičemž jedna nebo více OH- nebo CH2 skupin jsou nahrazeny N nebo NH, N. nebo NH a S, nebo N nebo NH a O, nebo sulfonsulfid struktury -/CH2/n-SO2-/CH2/n-S-/CH2/n OH s n =
    2-6 a jeden . ze zbytků R2 a R3 může také znamenat vodík, přičemž R2 a R3 jsou vzájemně tak sladěny, že buď oba zbytky jsou kyselé nebo zásadité, nebo jeden z nich je neutrální.
  7. 9. Dělicí materiály podle bodů 6 až 8, vyznačující se tím, že polymer je kopolymer založený na monomeru vzorce I.
  8. 10. Způsob přípravy dělicích materiálů na základě nosičů obsahujících hydroxylové skupiny, jejichž povrch je potažen kovalentně vázanými polymery podle bodu 6, roubovanou polymerací za přítomnosti ceričitých iontů, vyznačující se tím, že se nosičové částice obsahující hydroxylové skupiny suspendují a polymerují v roztoku monomerů vzorce I'
    CH-^CR^C-X /1’/
    II o
    η kde R znamena H nebo CH3,
    X znamená -OH nebo -NR2R3, o o x
    R a R znamenají alkylovou, fenylovou, fenylalkylovou nebo alkylfenylovou skupinu až s 10 atomy uhlíku v alkylové skupině, přičemž tyto skupiny mohou být jednou nebo vícenásobně substituovány alkoxyskupinou, kyanoskupinou, aminoskupinou, mono- nebo dialkylaminoskupinou, trialkylamoniovým zbytkem, karboxylovým zbytkem, zbytkem kyseliny sulfonové, acetoxyzbytkem nebo acetaminozbytkem, cyklický nebo bicyklický zbytek s 5 až 10 atomy uhlíku, kde jedna nebo více CH- nebo CH2-skupin jsou nahrazeny N nebo NH, N nebo NH a S, nebo N nebo NH a O, nebo sulfonsulfid struktury -(CH2)n-SO2-(CH2)n-S(CH2)nOH s n = 2-6 a jeden ze zbytků R1 a R2 může také znamenat vodík, přičemž R2 a R3 jsou tak vzájemně sladěny, že buď oba zbytky jsou kyselé, nebo zásadité nebo jeden z nich je neutrální.
  9. 11.Použití dělicích materiálů podle kteréhokoliv z bodů 1 pro frakcionaci biopolymerů.
    až 3
  10. 12.Použití dělicích materiálů podle kteréhokoliv z bodů 1 pro afinitní nebo ionexovou chromatografii.
    až 3
  11. 13.Použití dělicích materiálů podle kteréhokoliv z bodů 6 pro frakcionaci biopolymerů.
    až 9
  12. 14.Použití dělicích materiálů podle kteréhokoliv z bodů 6 pro afinitní nebo ionexovou chromatografii.
CS891981A 1988-03-31 1989-03-30 Dividing materials based on hydroxyl groups-containing carriers CS277592B6 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3811042A DE3811042A1 (de) 1988-03-31 1988-03-31 Ionenaustauscher

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS198189A3 CS198189A3 (en) 1992-02-19
CS277592B6 true CS277592B6 (en) 1993-03-17

Family

ID=6351195

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS891981A CS277592B6 (en) 1988-03-31 1989-03-30 Dividing materials based on hydroxyl groups-containing carriers

Country Status (9)

Country Link
US (1) US5453186A (cs)
EP (1) EP0337144B1 (cs)
JP (1) JP3059443B2 (cs)
CN (1) CN1023298C (cs)
AU (1) AU618332B2 (cs)
CA (1) CA1330074C (cs)
CS (1) CS277592B6 (cs)
DD (1) DD283568A5 (cs)
DE (2) DE3811042A1 (cs)

Families Citing this family (86)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992000805A1 (de) * 1990-07-10 1992-01-23 Sartorius Ag Poröse, nichtpartikuläre und konvektiv permeable matrix
FR2682609B1 (fr) * 1991-10-18 1994-01-07 Centre Nal Recherc Scientifique Support pour la preparation de colonnes chromatographiques et procede pour sa preparation.
DE4204694C3 (de) * 1992-02-01 1995-10-12 Octapharma Ag Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem Faktor VIII mittels Anionenaustauscher-Chromatographie
EP0561507A1 (en) * 1992-03-16 1993-09-22 Mizu Systems, Inc. Method for grafting preformed hydrophilic polymers onto hydrophobic polymer substrates
EP0565978B1 (de) * 1992-04-16 1997-06-18 MERCK PATENT GmbH Aktivierte Trägermaterialien, ihre Herstellung und Verwendung
JP3386498B2 (ja) * 1992-11-06 2003-03-17 森永製菓株式会社 ヒトＴＧＦ−βの精製法
JPH075161A (ja) * 1992-11-10 1995-01-10 Chuichi Hirayama 高性能液体クロマトグラフィー用充填剤
JP2643823B2 (ja) * 1993-03-25 1997-08-20 有限会社 エンゼル総合研究所 吸着材料及びその製造方法
DE4316136A1 (de) * 1993-05-13 1994-11-17 Merck Patent Gmbh Verfahren und Träger für die Gelpermeationschromatographie
US5641403A (en) * 1993-07-16 1997-06-24 Merck Patent Gesellschaft Mit Beschrankter Haftung Separating materials for hydrophobic chromatography
DE4333674A1 (de) * 1993-10-02 1995-04-06 Merck Patent Gmbh Nukleotidhaltiges Sorbens für die Affinitätschromatographie
DE4333821A1 (de) * 1993-10-04 1995-04-06 Merck Patent Gmbh Ionenaustauscher
DE4334353A1 (de) * 1993-10-08 1995-04-13 Merck Patent Gmbh Verfahren und Träger für die Gelpermeationschromatographie
EP0722361B1 (de) * 1993-10-08 1998-05-06 MERCK PATENT GmbH Epoxy-derivate von polyacrylamiden
DE4407837C1 (de) * 1994-03-09 1995-08-17 Octapharma Ag Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem alpha¶1¶-Antitrypsin mittels Anionenaustauscher-Chromatographie
US5652348A (en) * 1994-09-23 1997-07-29 Massey University Chromatographic resins and methods for using same
DE19501726A1 (de) * 1995-01-20 1996-07-25 Merck Patent Gmbh Polymerisationsfähige Derivate von Polyamiden
DE19528029B4 (de) 1995-07-31 2008-01-10 Chemagen Biopolymer-Technologie Aktiengesellschaft Magnetische Polymerpartikel auf der Basis von Polyvinylalkohol, Verfahren für ihre Herstellung und Verwendung
US5605616A (en) * 1995-11-06 1997-02-25 Versicor, Inc. Reversible charge-based sequestration on solid support
CA2202424A1 (en) * 1997-04-11 1998-10-11 Donald E. Brooks A tethered polymer macromolecule-excluding surface, its mode of synthesis and use
JP4179653B2 (ja) * 1997-12-16 2008-11-12 三菱化学株式会社 リポ蛋白質の分離方法および定量方法
DE19837020C1 (de) * 1998-08-14 1999-09-23 Merck Patent Gmbh Verfahren zur Entfernung von Initiatoren aus Pfropfprodukten
AU1626401A (en) * 1999-11-24 2001-06-04 Pierce Chemical Company Pelletized chromatography media
US6451978B2 (en) * 2000-01-21 2002-09-17 Biovitrum Ab Purification of antithrombin-III-α and β
SE0000178D0 (sv) 2000-01-21 2000-01-21 Pharmacia & Upjohn Ab Protein purification I
DE60237251D1 (de) * 2001-01-29 2010-09-23 Tosoh Corp Kationenaustauscher, Verfahren zu dessen Herstellung und dessen Verwendung
DE10149256A1 (de) * 2001-10-05 2003-04-17 Merck Patent Gmbh Alkalistabile hydrophile Sorbentien für die Ionenaustauschchromatographie
US7048858B2 (en) * 2001-11-26 2006-05-23 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab Post-modification of a porous support
US7060187B2 (en) * 2001-11-26 2006-06-13 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab Post-modification of a porous support
US6645378B1 (en) * 2002-03-05 2003-11-11 Dionex Corporation Polar silanes and their use on silica supports
DE10224352A1 (de) * 2002-06-01 2003-12-11 Mueller Schulte Detlef Thermosensitive Polymerträger mit veränderbarer physikalischer Struktur für die biochemische Analytik, Diagnostik und Therapie
US8142844B2 (en) * 2003-09-17 2012-03-27 Gambro Lundia Ab Separating material
SE0303532D0 (sv) * 2003-12-23 2003-12-23 Amersham Biosciences Ab Purification of immunoglobulins
SE0401665D0 (sv) * 2004-06-24 2004-06-24 Amersham Biosciences Ab Purification of immunoglobulins
US9028683B2 (en) * 2005-06-09 2015-05-12 Tosoh Corporation Packing material with excellent hydrophilicity and process for producing the same
US8383954B2 (en) * 2005-06-24 2013-02-26 Taiwan Semiconductor Manufacturing Company, Ltd. Warpage preventing substrates
KR101289911B1 (ko) * 2005-08-03 2013-07-26 메르크 파텐트 게엠베하 친수성 가교 중합체
EP1754534A1 (de) 2005-08-03 2007-02-21 MERCK PATENT GmbH Hydrophiles vernetztes Polymer
US8088833B2 (en) 2006-04-25 2012-01-03 Tosoh Corporation Method for purifying an IgG monomer
EP1878791A1 (en) 2006-07-11 2008-01-16 Bia Separations D.O.O. Method for influenza virus purification
CA2687930C (en) * 2007-05-25 2016-05-17 Merck Patent Gesellschaft Mit Beschraenkter Haftung Graft copolymers for cation exchange chromatography
DE102008015365A1 (de) 2008-03-20 2009-09-24 Merck Patent Gmbh Magnetische Nanopartikel und Verfahren zu deren Herstellung
EP2285485B1 (de) 2008-05-30 2014-04-23 Merck Patent GmbH Ce(iv) initiierte pfropfpolymerisation auf nicht hydroxylgruppenhaltigen polymeren
US20090294362A1 (en) * 2008-05-30 2009-12-03 Persson Jonas Par Stationary phase for hydrophilic interaction chromatography
DE102008028638A1 (de) 2008-06-18 2009-12-24 Henkel Ag & Co. Kgaa Kleb- und Dichtstoff oder Strukturschaum auf Epoxidbasis enthaltend anorganische Nanopartikel mit Acrylsäureester-haltiger Hülle
BRPI0914610B1 (pt) 2008-06-26 2018-03-06 3M Innovative Properties Company Suporte sólido com uma cadeia enxertada
DE102008031555A1 (de) 2008-07-07 2010-01-14 Henkel Ag & Co. Kgaa Polymerisierbare Zusammensetzung enthaltend anorganische Partikel mit organischer Hülle
EP2153877A1 (de) 2008-07-30 2010-02-17 MERCK PATENT GmbH Mischpfropfpolymere für die Ionenaustauschchromatographie
DE102008053520A1 (de) 2008-10-28 2010-05-06 Henkel Ag & Co. Kgaa Strukturschaum auf Epoxidbasis mit thermoplastischen Polyurethanen
DE102008053518A1 (de) 2008-10-28 2010-06-02 Henkel Ag & Co. Kgaa Epoxid-basierter Strukturschaum mit verbesserter Zähigkeit
KR20100070994A (ko) 2008-12-18 2010-06-28 토소가부시키가이샤 액체 크로마토그래피용 충전 재료 및 해당 충전 재료에 의한 생체고분자의 분리·정제 방법
WO2010117598A2 (en) * 2009-03-31 2010-10-14 3M Innovative Properties Company Hydrophobic monomers, hydrophobically-derivatized supports, and methods of making and using the same
DE102009026548A1 (de) 2009-05-28 2011-03-24 Henkel Ag & Co. Kgaa Klebefolie oder Klebeband auf Basis von Epoxiden
DE102009057993A1 (de) 2009-06-13 2011-01-20 Sartorius Stedim Biotech Gmbh Polysaccharidmatrix mit aufgepfropftem Polymer, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verwendung
WO2011046494A1 (en) * 2009-10-12 2011-04-21 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab Separation matrices
DE102009046157A1 (de) 2009-10-29 2011-05-05 Henkel Ag & Co. Kgaa Vormischung und Verfahren zur Herstellung einer thermisch expandierbaren und härtbaren Epoxid-basierten Masse
WO2011108624A1 (ja) * 2010-03-03 2011-09-09 独立行政法人国立循環器病研究センター 含窒素化合物重合体及びその製造方法、並びに遺伝子導入剤
JP5474881B2 (ja) 2010-07-28 2014-04-16 ローム アンド ハース カンパニー 向上したクロマトグラフィー媒体の製造方法および使用方法
JP5631271B2 (ja) 2010-07-28 2014-11-26 ローム アンド ハース カンパニーＲｏｈｍ Ａｎｄ Ｈａａｓ Ｃｏｍｐａｎｙ 改良されたクロマトグラフィー媒体の製造方法および使用方法
JP2013532829A (ja) 2010-07-29 2013-08-19 イー・エム・デイー・ミリポア・コーポレイシヨン クロマトグラフィーの媒介性能を改善するためのグラフト法
EP2607392A1 (en) * 2010-08-20 2013-06-26 Daicel Corporation Fine particles for chromatography and chromatography using same
DE102010044116A1 (de) 2010-10-05 2011-04-07 Henkel Ag & Co. Kgaa Verfahren zur Herstellung von Bauteilen
DE102010044115A1 (de) 2010-11-18 2012-05-24 Henkel Ag & Co. Kgaa Verfahren zur Herstellung von Rollstühlen
DE102011007893B4 (de) 2011-04-12 2015-11-12 Henkel Ag & Co. Kgaa Thermobondingverfahren, Klebefilm, Verfahren zur Herstellung eines Klebefilms sowie dessen Verwendung
US20140263011A1 (en) * 2011-05-03 2014-09-18 Avantor Performance Materials, Inc. Novel chromatographic media based on allylamine and its derivative for protein purification
DE102012205057A1 (de) 2012-03-29 2013-10-02 Henkel Ag & Co. Kgaa Thermisch expandierbare Zubereitungen
IN2014DN08671A (cs) 2012-04-25 2015-05-22 Ge Healthcare Bio Sciences Ab
KR102196230B1 (ko) 2012-09-17 2020-12-29 더블유.알. 그레이스 앤드 캄파니-콘. 크로마토그래피 매질 및 장치
MY195756A (en) 2012-09-17 2023-02-09 Grace W R & Co Functionalized Particulate Support Material and Methods of Making and Using the Same
US10610159B2 (en) 2012-10-07 2020-04-07 Rhythm Diagnostic Systems, Inc. Health monitoring systems and methods
US20150266919A1 (en) 2012-10-18 2015-09-24 Jnc Corporation Cation exchange chromatography carrier for refining of antibodies, and method for separation of antibody monomers from polymers thereof produced in antibody drug manufacturing process
CN104736236B (zh) * 2012-11-01 2017-06-13 默克专利股份公司 多孔基体支持物的表面修饰
LT3395423T (lt) 2013-03-14 2023-12-11 Amgen Inc. Pratekančių giminingumo gryninimo ligandų pašalinimas
CN105190305A (zh) 2013-03-29 2015-12-23 东曹株式会社 液相色谱用阳离子交换体、其制造方法及其用途
EP3021114B1 (en) * 2013-07-08 2021-03-03 National University Corporation Kyoto Institute of Technology Separating agent
ES2887110T3 (es) 2014-01-16 2021-12-21 Grace W R & Co Medios para cromatografía de afinidad y dispositivos para cromatografía
PL3137209T3 (pl) * 2014-05-02 2023-01-02 W.R. Grace & Co. - Conn. Funkcjonalizowany materiał nośnikowy i sposoby wytwarzania oraz stosowania funkcjonalizowanego materiału nośnikowego
JP2016006410A (ja) * 2014-05-27 2016-01-14 Jnc株式会社 クロマトグラフィー担体およびそれを用いたタンパク質精製方法
EP2985076B1 (en) 2014-08-15 2022-03-30 Merck Patent GmbH Purification of immunoglobulins from plasma
WO2016188606A1 (de) 2015-05-22 2016-12-01 Merck Patent Gmbh Vorrichtung für die stofftrennung
ES2896897T3 (es) 2015-06-05 2022-02-28 Grace W R & Co Agentes de clarificación para el bioprocesamiento de adsorbentes y métodos para producir y usar los mismos
US11045773B2 (en) 2018-08-31 2021-06-29 Pall Corporation Salt tolerant porous medium
US20220380406A1 (en) 2019-07-03 2022-12-01 Merck Patent Gmbh Glycoform purification
JP2022539240A (ja) * 2019-07-03 2022-09-07 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 抗体薬物コンジュゲートの精製
JP2022554165A (ja) 2019-10-24 2022-12-28 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ハロゲン結合に基づく分離を実施するための材料および方法
CN118510599A (zh) 2021-11-08 2024-08-16 默克专利股份公司 基于硼团簇进行分离的材料和方法

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3663263A (en) * 1969-04-03 1972-05-16 Monsanto Co Method of preparing chromatographic columns
JPS5247355B2 (cs) * 1974-10-15 1977-12-01
US4029583A (en) * 1975-02-28 1977-06-14 Purdue Research Foundation Chromatographic supports and methods and apparatus for preparing the same
US4140653A (en) * 1975-09-30 1979-02-20 Toyo Soda Manufacturing Co., Ltd. Solid support for liquid chromatography
DE2552510C3 (de) * 1975-11-22 1981-02-19 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Biologisch aktive Verbindungen und Verfahren zu ihrer Herstellung
DE2746275C2 (de) * 1976-10-28 1984-06-28 Asahi Kasei Kogyo K.K., Osaka Adsorptionsmittel für Proteine
SE7712058L (sv) * 1976-11-12 1978-05-13 Ceskoslovenska Akademie Ved Tredimensionell berare av oorganiskt, porost material och en reaktiv polymer och ett forfarande for framstellning derav
US4330440A (en) * 1977-02-08 1982-05-18 Development Finance Corporation Of New Zealand Activated matrix and method of activation
DE2709094C2 (de) * 1977-03-02 1984-11-22 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Adsorbens für die affinitätsspezifische Trennung von Nukleinsäuren, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung
DE2827109C2 (de) * 1977-06-24 1986-10-30 Asahi Kasei Kogyo K.K., Osaka Verfahren und Vorrichtung zur Abtrennung von organischen Verbindungen von Plasmaproteinen des Blutes
US4406870A (en) * 1979-12-27 1983-09-27 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Method for the separation of carbon isotopes by chemical exchange method
US4324689A (en) * 1980-02-26 1982-04-13 Shah Ramesh M High carbon content chromatographic packing and method for making same
DE3172131D1 (en) * 1980-06-27 1985-10-10 Akzo Nv Porous inorganic support material coated with an organic stationary phase, for use in chromatography, and process for its preparation
DE3116995A1 (de) * 1981-04-29 1982-11-25 Röhm GmbH, 6100 Darmstadt Latex zur immobilisierung von biologisch wirksamen substanzen
US4724207A (en) * 1984-02-02 1988-02-09 Cuno Incorporated Modified siliceous chromatographic supports
DE3407814A1 (de) * 1984-03-02 1985-09-12 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V., 3400 Göttingen Phasentraeger fuer die verteilungschromatographie von makromolekuelen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
US4551245A (en) * 1985-04-22 1985-11-05 J. T. Baker Chemical Co. Acylated polyethylenimine bound chromatographic packing
FR2601026B1 (fr) * 1986-04-15 1988-09-16 Rhone Poulenc Chimie Matiere seche hydratable en un gel aqueux contenant des particules de polymeres dispersees, procede pour sa preparation et son application en biologie
DE3617805A1 (de) * 1986-05-27 1987-12-03 Merck Patent Gmbh Nitro-modifizierte chromatographische traegermaterialien, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
DE3619303A1 (de) * 1986-06-07 1987-12-10 Merck Patent Gmbh Optisch aktive adsorbentien
US4882226A (en) * 1986-09-23 1989-11-21 Akzo N.V. Carrier material for use in chromatography or carrying out enzymatic reactions

Also Published As

Publication number Publication date
AU3233189A (en) 1989-10-05
DE3811042A1 (de) 1989-10-19
CN1036516A (zh) 1989-10-25
US5453186A (en) 1995-09-26
JP3059443B2 (ja) 2000-07-04
AU618332B2 (en) 1991-12-19
CN1023298C (zh) 1993-12-29
DD283568A5 (de) 1990-10-17
CA1330074C (en) 1994-06-07
EP0337144A1 (de) 1989-10-18
EP0337144B1 (de) 1992-05-13
DE58901366D1 (de) 1992-06-17
JPH01310744A (ja) 1989-12-14
CS198189A3 (en) 1992-02-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS277592B6 (en) Dividing materials based on hydroxyl groups-containing carriers
ES2397795T5 (es) Copolímeros de injerto para la cromatografía de intercambio catiónico
KR101289911B1 (ko) 친수성 가교 중합체
US4954399A (en) Porous polymer particles and preparation method thereof
EP3570974B1 (en) Multimodal chromatographic media for protein separation
US6852818B1 (en) Molecularly imprinted polymers produced by template polymerization
JP4532736B2 (ja) 新規な特性を有するクロマトグラフィー用充填剤およびそれを用いた物質の分離方法
EP2414321B1 (en) Hydrophobic monomers, hydrophobically-derivatized supports, and methods of making and using the same
JP5234727B2 (ja) 温度応答性クロマトグラフィー担体製造方法、それより得られるクロマトグラフィー担体及びその利用方法
WO1998033064A1 (fr) Procede de separation d'amino-acides pth
CA2726015C (en) Ce(iv)-initiated graft polymerisation on polymers containing no hydroxyl groups
JP3970319B2 (ja) 分離用材料およびそれらの製造方法
Baek et al. Immobilized metal ion affinity gel electrophoresis: Quantification of protein affinity to transition metal chelates
CN114555202A (zh) 基于卤素键合进行分离的材料和方法
Postnikov et al. Linear copolymerization of unsaturated albumin derivatives with acrylamide
JPS6396553A (ja) 充填剤
CS195160B1 (cs) Způsob přípravy amfoterních ionexů

Legal Events

Date Code Title Description
IF00 In force as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20040330