CN212989383U - 一种冠状病毒抗体联检试纸条、试剂卡 - Google Patents
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Abstract
本实用新型涉及一种冠状病毒抗体联检试纸条、试剂卡，由PVC底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫粘贴构成；本实用新型的胶体金层析法检测新型冠状病毒抗体的试剂，能够在10分钟内判断结果，从而及早预防疫情扩散。
Description
技术领域
本实用新型是涉及生物应用技术领域，特别是涉及一种冠状病毒抗体联检试纸条。
背景技术
新型冠状病毒SARS-CoV-2是一种引起COVID-19的密切相关的冠状病毒，COVID-19患者以发热、干咳、乏力为主要表现，少数患者伴有鼻塞、流涕、咽痛、肌痛和腹泻等症状，重症患者多在发病一周后出现呼吸困难和/或低氧血症，严重者可快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍及多器官衰竭等。
新型冠状病毒隐蔽性强，有症状不明显轻症患者，甚至有无症状感染者。新型冠状病毒正对全球医疗健康***和医疗机构造成严峻挑战，新型冠状病毒目前已在全球200多个国家出现指数级蔓延。
发明内容
本实用新型的目的是提供一种冠状病毒抗体联检试纸条，具有操作简便、反应快速、敏感度高、特异性强、适合现场检测等优点。对发热病人进行快速初筛，可提高疑似病例确诊率，如针对无症状人群大规模筛查，通过同时检测人体中IgM抗体和IgG抗体，有利于快速检出冠状病毒潜在感染者。
一种冠状病毒抗体联检试纸条，包括PVC底板，在PVC底板的一面顺次相互搭接地粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于：所述结合垫为涂覆有重组新型冠状病毒抗原-胶体金复合物及鸡IgY抗体-胶体金复合物的玻璃纤维素膜，所述硝酸纤维素膜分别包被有鼠抗人IgM抗体的检测线、鼠抗人IgG抗体的检测线、羊抗鸡IgY抗体的质控线。
所述一种冠状病毒抗体联检试纸条，其特征在于：重组新型冠状病毒抗原-胶体金复合物及鸡IgY抗体-胶体金复合物混合溶液喷至结合垫上，在37℃烘箱里干燥12-24h。
所述一种冠状病毒抗体联检试纸条，其特征在于：所述鼠抗人IgG抗体、鼠抗人IgM抗体、羊抗鸡IgY抗体用抗体稀释液稀释后划到硝酸纤维素膜上包被并干燥而得，干燥条件为 37℃干燥4小时。
所述一种冠状病毒抗体联检试纸条，其特征在于：所述抗原选自重组新型冠状病毒S蛋白、重组新型冠状病毒N蛋白中的一种或两种。
所述一种冠状病毒抗体联检试纸条，其特征在于：所述抗体稀释液由pH7.4磷酸盐缓冲液溶解蔗糖制备而成。
一种冠状病毒抗体联检试剂卡，其特征在于：所述试剂卡包括上述的检测试纸条和试剂卡壳。
一种冠状病毒抗体联检试剂卡盒，包括样本稀释液和上述的检测试剂卡。
所述一种冠状病毒抗体联检试剂卡盒，其特征在于：所述的样本稀释液为pH7.0±0.2的磷酸盐缓冲液。
一种冠状病毒抗体联检试纸条的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
1)标记溶液制备：于1000ml沸水中加入10％氯金酸溶液1.0ml，边加边搅拌，充分沸腾 10秒钟，加入10％柠檬酸钠溶液1.8ml，维持加热，反应30分钟后停止加热，继续搅拌至室温；
2)标记重组新型冠状病毒抗原溶液制备：取100ml标记溶液中逐滴加入0.05MK2CO3 5.0ml(pH约为8.0)，充分混匀，逐滴加入0.1mg/ml的重组新型冠状病毒抗原水溶液，充分混匀30min，逐滴加入10％牛血清蛋白溶液13ml，缓慢搅拌30min，低温高速离心30min，弃上清，沉淀用胶体金稀释液溶解即得；
3)标记抗体溶液制备：100ml标记溶液中逐滴加入0.05M K2CO35.0ml(pH约为8.0)，充分混匀，逐滴加入0.1mg/ml的鸡IgY抗体水溶液，充分混匀30min，逐滴加入10％牛血清蛋白溶液13ml，缓慢搅拌30min，低温高速离心30min，弃上清，沉淀用胶体金稀释液溶解即得；
4)抗体包被液配制：于100ml的0.2M pH7.4磷酸盐缓冲液溶解蔗糖2g，以0.22μm孔径的微孔滤膜滤过，2～8℃保存；
5)C、T线包被溶液的配制：用抗体包被液分别稀释羊抗鸡IgY抗体、鼠抗人IgM抗体、鼠抗人IgG至0.3-0.5mg/ml、0.5-0.8mg/ml、0.5-0.8mg/ml；
6)玻璃纤维素膜标记：将标记重组新型冠状病毒抗原溶液与标记抗体溶液按照3:1-4:1 的比例混合喷至裁剪好的结合垫上，喷液量4-5μl/cm，在37℃烘箱里干燥12-24h；
7)硝酸纤维素膜划线处理：用喷金划膜仪在硝酸纤维素膜上均按1μl/cm将C、T线包被溶液划线，划线完成后将NC膜在37℃烘箱里干燥12-24h；
8)试纸条制备：在干燥室内，温度18～28℃，湿度小于30％的环境下，取PVC底板，在PVC底板的一面顺次相互搭接地粘附样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；用裁剪机将贴好的PVC底板切成宽度≥2.5mm的试纸条。
一种冠状病毒抗体联检试剂卡的制备：取试纸条装入检测卡卡底的卡位处，卡盖的加样孔对准样品垫，观察窗对准检测线及质控线，组装成试剂卡，即可。
本实用新型与现有技术相比具有如下优点：
1、诊断快速，10分钟内可完成检测；2、仅需加样一次，即可同时分别检测人体中IgM 抗体和IgG抗体；3、操作简便，不需由专业人员操作；4、血清学检测的血液标本更易获取且标本质量有保证、很大程度上降低了医护人员在标本采集和检测过程中被感染的风险。
附图说明
以上所述是对本实用新型技术方案的概述，为进一步解释本实用新型，以下结合附图与实施方式对本实用新型做进一步的详细说明。
附图1:本实用新型一种冠状病毒抗体联检试纸条的结构示意图。
附图2:本实用新型一种冠状病毒抗体联检试剂卡卡盖的结构示意图
附图3:本实用新型一种冠状病毒抗体联检试剂卡卡底的结构示意图
附图符号说明：1-IgM检测线，2-IgG检测线，3-质控线，4-样品垫，5-结合垫，6-硝酸纤维素膜，7-PVC底板，8-吸水垫，9-加样孔，10-观察窗，11-检测试纸条卡位一端、12-检测试纸条卡位另一端。
具体实施方式
实施例1：一种冠状病毒抗体联检试纸条、试剂卡制备及检测方法
标记溶液制备：于1000ml沸水中加入10％氯金酸溶液1.0ml，边加边搅拌，充分沸腾10 秒钟，加入10％柠檬酸钠溶液1.8ml，维持加热，反应30分钟后停止加热，继续搅拌至室温。
标记重组新型冠状病毒抗原溶液制备：取100ml标记溶液中逐滴加入0.05MK2CO35.0ml (pH约为8.0)，充分混匀，逐滴加入0.1mg/ml的重组新型冠状病毒抗原水溶液，充分混匀 30min，逐滴加入10％牛血清蛋白溶液13ml，缓慢搅拌30min，低温高速离心30min，弃上清，沉淀用胶体金稀释液溶解即得。
标记抗体溶液制备：100ml标记溶液中逐滴加入0.05M K2CO35.0ml(pH约为8.0)，充分混匀，逐滴加入0.1mg/ml的鸡IgY抗体水溶液，充分混匀30min，逐滴加入10％牛血清蛋白溶液13ml，缓慢搅拌30min，低温高速离心30min，弃上清，沉淀用胶体金稀释液溶解即得。
抗体包被液配制：于100ml的0.2MpH7.4磷酸盐缓冲液溶解蔗糖2g，以0.22μm孔径的微孔滤膜过滤，2～8℃保存。
C、T线包被溶液的配制：用抗体包被液分别稀释羊抗鸡IgY抗体、鼠抗人IgM抗体、鼠抗人IgG至0.3mg/ml、0.5mg/ml、0.5mg/ml。
玻璃纤维素膜标记：将标记重组新型冠状病毒抗原溶液与标记抗体溶液按照3:1的比例混合喷至裁剪好的结合垫上，喷液量5μl/cm，在37℃烘箱里干燥12h。
硝酸纤维素膜划线处理：用喷金划膜仪在硝酸纤维素膜上均按1μl/cm将C、T线包被溶液划线，划线完成后将NC膜在37℃烘箱里干燥12h。
试剂卡组装：在干燥室内，温度18～28℃，湿度小于30％的环境下，取PVC底板，在PVC底板的一面顺次相互搭接地粘附样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；用裁剪机将贴好的PVC底板切成2.5mm宽的试纸条；再装入检测卡卡底的卡位处，将检测卡卡盖和卡底组装成试剂卡，其中卡盖的加样孔对准样品垫，观察窗对准检测线及质控线。
检测方法：
1.将待测样本及所需试剂从储存条件下取出，平放；
2.在测试前将样本充分混匀，取待测样本(血清、血浆或全血样本)10μl加到检测卡上的样本孔内，立即在样本孔内滴加2滴样本稀释液。
检测结果：对55份临床确诊新型冠状病毒肺炎患者血清及55份排除新型冠状病毒肺炎患者血清进行检测，结果灵敏度96.4％，特异性98.2％。检测结果表明制备的检测试剂性能良好，有利于快速检出新型冠状病毒感染者。
实施例2：一种冠状病毒抗体联检试纸条、试剂卡制备
标记溶液制备：于1000ml沸水中加入10％氯金酸溶液1.0mL，边加边搅拌，充分沸腾10 秒钟，加入10％柠檬酸钠溶液1.8mL，维持加热，反应30分钟后停止加热，继续搅拌至室温。
标记重组新型冠状病毒抗原溶液制备：取100ml标记溶液中逐滴加入0.05MK2CO35.0ml (pH约为8.0)，充分混匀，逐滴加入0.1mg/ml的重组新型冠状病毒抗原水溶液，充分混匀 30min，逐滴加入10％牛血清蛋白溶液13ml，缓慢搅拌30min，低温高速离心30min，弃上清，沉淀用胶体金稀释液溶解即得。
标记抗体溶液制备：100ml标记溶液中逐滴加入0.05M K2CO35.0ml(pH约为8.0)，充分混匀，逐滴加入0.1mg/ml的鸡IgY抗体水溶液，充分混匀30min，逐滴加入10％牛血清蛋白溶液13ml，缓慢搅拌30min，低温高速离心30min，弃上清，沉淀用胶体金稀释液溶解即得。
抗体包被液配制：于100ml的0.2MpH7.4磷酸盐缓冲液溶解蔗糖2g，以0.22μm孔径的微孔滤膜过滤，2～8℃保存。
C、T线包被溶液的配制：用抗体包被液分别稀释羊抗鸡IgY抗体、鼠抗人IgM抗体、鼠抗人IgG至0.5mg/ml、0.8mg/ml、0.8mg/ml。
玻璃纤维素膜标记：将标记重组新型冠状病毒抗原溶液与标记抗体溶液按照4:1的比例混合喷至裁剪好的结合垫上，喷液量4μL/cm，在37℃烘箱里干燥24h。
硝酸纤维素膜划线处理：用喷金划膜仪在硝酸纤维素膜上均按1μL/cm将C、T线包被溶液划线，划线完成后将NC膜在37℃烘箱里干燥24h。
试剂卡组装：在干燥室内，温度18～28℃，湿度小于30％的环境下，取PVC底板，在PVC底板的一面顺次相互搭接地粘附样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；用裁剪机将贴好的PVC底板切成3mm宽的试纸条；再装入检测卡卡底的卡位处，将检测卡卡盖和卡底组装成试剂卡，其中卡盖的加样孔对准样品孔，观察窗对准检测线及质控线。
以上实施例仅用以说明本实用新型的技术方案，而非对本实用新型保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本实用新型作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本实用新型的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本实用新型技术方案的实质和范围。
Claims (4)
1.一种冠状病毒抗体联检试纸条，包括PVC底板，在PVC底板的一面顺次相互搭接地粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于：所述结合垫为涂覆有重组新型冠状病毒抗原-胶体金复合物及鸡IgY抗体-胶体金复合物的玻璃纤维素膜，所述硝酸纤维素膜分别包被有鼠抗人IgM抗体的检测线、鼠抗人IgG抗体的检测线、羊抗鸡IgY抗体的质控线。
2.根据权利要求1所述一种冠状病毒抗体联检试纸条，其特征在于：所述抗原选自重组新型冠状病毒S蛋白、重组新型冠状病毒N蛋白中的一种或两种。
3.一种冠状病毒抗体试剂卡，其特征在于：所述试剂卡包括试剂卡壳和权利要求1所述的联检试纸条。
4.根据权利要求3所述一种冠状病毒抗体试剂卡，其特征在于：所述试纸条位于试剂卡卡底卡位处，卡盖的加样孔对准样品垫，观察窗对准检测线及质控线。
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