CN206545019U - 一种新型核酸快速分离富集提取柱 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种基于传统硅胶膜吸附住的新型核酸快速分离富集提取柱，包括：一级过滤柱、二级吸附柱、收集管，其特征是：所述一级过滤柱置于二级吸附柱上方、二级吸附柱置于收集管上方，从而形成一个三级复合管。实现一级过滤柱过滤未溶胶、杂质、吸附色素和气味等，二级吸附柱吸附核酸的目的。其中，一级过滤柱、二级吸附柱也可与收集管两两自由组合。本实用新型将一级过滤柱、二级吸附柱、收集管组合在一起，使得人们在第一步溶胶后，直接过滤未溶胶和杂质，弃去一级过滤柱后直接进行第二步的漂洗及核酸提取，具有结构简单、成本低廉、安全环保、方便实用等特点。

Description

一种新型核酸快速分离富集提取柱

技术领域

本实用新型属于生物技术领域一种核酸快速分离富集提取柱的改良方法,所述核酸提取柱包括一级过滤柱、二级吸附柱和收集管,且可实现过滤柱、吸附柱、收集管三者自由组合。

背景技术

核酸是生物体内广泛存在的一类十分重要的生物大分子，包括核糖核酸和脱氧核糖核酸两大类，几乎所有的核酸检测技术均围绕二者展开。随着精准医疗概念的提出，对于核酸检测领域更提出了新的要求，特别是低丰度核酸的富集分离。目前，为了获得足够量的核酸样本，多种核酸分离富集方法被开发，如磁珠法、硅胶膜法等，其中，以硅胶膜吸附柱应用最为广泛。硅胶膜吸附柱主要以硅胶膜作为吸附材料制备的吸附柱，当核酸样品在外力作用下通过硅胶膜时，会被硅胶膜吸附，借助有机溶剂洗涤以净化核酸，最后洗脱获得核酸样本，从而实现核酸样品快速分离和制备。传统方法中，组织细胞样本或体外扩增核酸片段需要被破裂或溶解后才能通过硅胶膜吸附柱而被提取，而硅胶膜吸附柱本身只是一种核酸吸附柱，由于前期样本制备带入的不必要的色素因子和大量杂质等将严重影响后续核酸的吸附和分离，进而影响后续基于核酸的多种研究，包括核酸的酶切、连接和聚合酶链式反应等。更为严重地，传统溶胶制备核酸时，由于溶胶的时间较长或凝胶不能完全溶解时，将导致硅胶膜吸附柱堵塞，不仅影响核酸提取的效率，而且严重增加实验的成本。

本发明在传统核酸提取柱的基础上增加了一级过滤柱，该过滤柱整合低分子量孔径滤膜和活性炭层，不仅可实现生物样本杂质的有效过滤，而且可实现色素因子等有机分子的有效吸附。同时，二级硅胶吸附柱采用改良的硅胶膜，可大大增加核酸的吸附量。二者可与收集管独立组合或整体组合以实现过滤、吸附和过滤/吸附的目的，具有操作简单、核酸提取效率高、纯度高、成本低及应用范围广等特点。

发明内容

本实用新型的目的是基于传统硅胶膜吸附柱提出一种新型的具有一级过滤、二级吸附功能的核酸提取柱，该核酸提取柱具有核酸样品杂质分离、色素吸附、核酸纯化等功能，可大大提高核酸提取的产量和纯度，并可缩短实验流程，降低实验成本，具体结构分述如下：

1) 一级过滤柱由柱体和过滤膜层组成，过滤膜层置于柱体内层底部。

上述1)中所述过滤柱柱体底部采用具有均匀孔径的平底或尖底以支撑过滤膜层，以平底最佳；

上述1)中所述过滤膜共分三层，包括上层0.45μm的过滤膜层、中间活性炭层和下层0.45μm或0.22μm的过滤膜层，下层的过滤膜层的孔径可根据具体需求选择。

2) 二级吸附柱由柱体和吸附膜层组成，吸附膜层置于柱体内层底部。

上述2)中所述吸附柱柱体底部采用具有均匀孔径的平底或尖底以支撑过滤膜层，以平底最佳；

上述2)中所述吸附膜共一层，采用加厚处理，可增加核酸的吸附量。

上述步骤1)、2)所述柱子与步骤3)所述收集管可自由组合，1)和3)组合可获得过滤柱，具有不同样本杂质和色素吸附功能；2)和3)组合可获得核酸吸附柱，具有核酸吸附提纯功能；1)，2)和3)组合可获得过滤吸附柱，具有样本一级过滤、二级吸附提纯的功能。

本实用新型基于传统吸附柱进行了改良，不仅能够实现核酸样品的一级除杂和色素吸附，而且可实现核酸样品的高产量富集及分离，具有广泛的应用前景。

附图说明

图1. 一级过滤柱示意图。

图2. 二级吸附柱示意图。

图3. 收集管示意图。

图4. 核酸过滤柱示意图。

图5. 核酸吸附柱示意图。

图6. 核酸过滤吸附柱示意图。

图中: 1). 收集管；2). 一级过滤柱；3). 二级吸附柱。

图7. 核酸提取柱对小鼠粪便溶解液的过滤吸附特性检测。

图8. 核酸提取柱对金属盐混合溶液的过滤吸附特性检测。

具体实施方式

通过以下实施例对本实用新型发明作进一步的阐述，但下述实施例仅是一个例子，并不作为本实用新型发明的限制，在不偏离本发明范围的情况下，本发明的主要特征可以用于各种实施方式。

实施例１

小鼠粪便溶解液过滤吸附特性全波段扫描

1. 实验目的：研究本实用新型核酸提取柱对小鼠粪便溶解液的过滤吸附特性；

2. 实验分组：对照组和活性炭组，对照组为未经本实用新型核酸提取柱过滤样品，活性炭组为经本实用新型核酸提取柱过滤样品；

3. 实验步骤：

1) 样品制备：选取新鲜小鼠粪便组织一颗，加入200μl含有5%葡萄糖的10mMTris-HCl(pH=7.5)缓冲液，室温振荡孵育30min，5000rpm离心5min，收集上清；

2) 样品过滤：将上述制备的样品吸取100μl作为对照组，另外100μl加入核酸提取柱，室温孵育15min，12000rpm离心5min，收集过滤液作为活性炭组；

3) 全波段扫描：将上述制备的对照组和活性炭组样品采用酶标仪进行全波段扫描，扫描范围为230nm-760nm。

4. 实验结果：

如图7所示，与对照组相比，经核酸提取柱过滤后可除去小鼠粪便溶解液中的大量杂志及色素等，说明本实用新型核酸提取柱具有明显的杂质过滤和色素吸附特性。

实施例2

混合金属盐溶液过滤吸附特性全波段扫描

1. 实验目的：研究本实用新型核酸提取柱对混合金属盐溶液的过滤吸附特性；

2. 实验分组：对照组和活性炭组，对照组为未经本实用新型核酸提取柱过滤样品，活性炭组为经本实用新型核酸提取柱过滤样品；

3. 实验步骤：

1) 样品制备：分别称取适量氯化钠，氯化钾和氯化镁配置成0.5M金属盐混合液；

2) 样品过滤：将上述制备的样品吸取100μl作为对照组，另外100μl加入核酸提取柱，室温孵育15min，12000rpm离心5min，收集过滤液作为活性炭组；

3) 全波段扫描：将上述制备的对照组和活性炭组样品采用酶标仪进行全波段扫描，扫描范围为230nm-760nm。

4. 实验结果：

如图8所示，与对照组相比，经核酸提取柱过滤后混合金属盐溶液基本没有影响，说明本实用新型核酸提取柱几乎不影响缓冲液特性。

Claims (3)

1.一种新型核酸快速分离富集提取柱，其特征是由一级过滤柱、二级吸附柱和收集管组成，所述一级过滤柱是由柱体和过滤膜层组成，过滤膜层置于柱体内层底部，柱体底部采用具有均匀孔径的平底或尖底以支撑过滤膜层，过滤膜共分三层，包括上层0.45μm的过滤膜、中间活性炭层和下层0.45μm或0.22μm的过滤层。

2.根据权利要求1所述的新型核酸快速分离富集提取柱，其特征是所述二级吸附柱由柱体和吸附膜层组成，吸附膜层置于柱体内层底部，柱体底部采用具有均匀孔径的平底或尖底以支撑过滤膜层，吸附膜共一层，采用加厚处理，从而增加核酸的吸附量。

3.根据权利要求1所述的新型核酸快速分离富集提取柱，其特征是一级过滤柱、二级吸附柱和收集管自由组合。