CN102558103B - 一种分离和纯化奥利司他的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于分离纯化领域，涉及一种通过反相高效制备液相色谱法分离纯化奥利司他的方法。采用本制备工艺制得的奥利司他的纯度大于99.6％，回收率在90％以上，其中最大单杂不超过0.1％。该工艺操作简单，质量易控，适合工业规模上广泛应用。

Description

一种分离和纯化奥利司他的方法

技术领域

本发明属于分离纯化领域，涉及一种化学物质的分离纯化方法，具体地说，涉及一种通过反相高效制备液相色谱法分离纯化奥利司他的方法。

背景技术

奥利司他(Orlistat，Tetrahydolipstat)，化学名为N-甲酰基-L亮氨酸-(S)-1-{[(2S，3S)-3-己基-4-氧代-2-氧杂环丁基]甲基}十二烷基酯((S)-N-formyl leuine(S)-1-[[(2S，3S)-3-hexyl-4-oxo-2oxetanyl]methyl]dodecyl ester)，CAS号为96829-58-2，结构式如下：

奥利司他是一种特异性胃肠道脂肪酶抑制剂，可以降低与肥胖相关的危险因素和与肥胖相关的其它疾病的发病率，包括高胆固醇血症、II型糖尿病、糖耐量减低、高胰岛素血症、高血压，并可减少脏器中的脂肪含量。适用于肥胖和体重超重者包括那些已经出现与肥胖相关的危险因素的患者的长期治疗。

目前奥利司他的生产方法有两种，一种是通过发酵得到脂抑制素lipstatin，后经催化还原得到奥利司他；另一种途径是通过化学方法直接合成奥利司他。两种途径所得奥利司他均需进一步分离提纯才能达到药用标准。目前奥利司他的分离纯化方式中常用的是结晶法，如CN200510094601，CN00101172.3。中国专利CN00101172.3公开了一种通过双流萃取形式的液-液萃取与逆流萃取形式的反萃取结合的方法来提纯奥利司他中间体lipstatin的方法。该法对奥利司他前躯体lipstatin的纯度要求很高，重量含量高达90％，否则根本无法提纯得到可以药用纯度的奥利司他。而且随着医药标准的提高，该法结晶两次后纯度可达97％的含量也已经不符合现行医药标准。

CN200510094601公开了一种奥利司他的提纯方法，该方法先将奥利司他粗品用中等极性的溶媒溶剂溶解，过滤；滤液结晶后，用非极性溶媒进行重结晶。视杂质的具体情况，重复进行第一步或二步，直到奥利司他纯度符合药用标准的纯度。该方法的优点是所适用的奥利司他的纯度范围大，50％-85％，在低纯度范围内，提纯效果明显。但该提纯方法需要使用大量溶剂，不仅增加了纯化成本，而且增加了环境处理成本；另外结晶法中结晶前后均须多次过滤、转移、洗涤等步骤，且母液中定会有奥利司他的存在，更甚者随着杂质的增大，母液回收变得更加困难，这些因素导致产量的损失显著。现实操作中往往需要多次结晶才能达到期望纯度，结晶过程中需要加热和冷却，这都将大大增加工艺的复杂性，使用更多的有机溶剂，产品损失也更大。更遗憾的是在较高纯度时，结晶法的效果并不明显。结晶三次后的奥利司他含量不大于98.6％，最大单杂仅小于0.5％，继续精制下去的效果也并不明显。

Pierre Barbier与Fernand Schneider(J.Org.Chem.1988，53，1218-1221)采用化学合成法合成奥利司他，将最后一步反应液蒸干后，过硅胶柱，用4∶1的甲苯/乙酸乙酯洗脱，所得奥利司他纯度为80％。U.S.Pat.No.4,598089(Eur.Pat.Appl.129748)中先将奥利司他前驱体lipstatin经一次或多次硅胶和色谱柱纯化，然后催化氢化后得奥利司他再进一步经一根硅胶短柱，氯仿淋洗，实现一定程度的提纯。但最终得到的奥利司他为腊状浅黄色固体，而纯度高的奥利司他应为白色或类白色，说明即使用该方法纯化所得奥利司他仍然纯度不高，且产量不高。过柱缺点包括工艺繁琐，自动化程度低，溶解、过柱、接液、检测等操作将使得操作者更多地暴露于有毒的有机溶剂气氛中，并且形成对工程控制和个人保护设备的依赖。这些操作可能是单调和乏味的。还有一条缺点是现有技术中的过硅胶柱或过色谱柱均是先过柱，后检测的，即检测滞后，这不仅使得操作繁琐，不直观，还大大延长了生产周期，降低了生产效率。基于现有技术中过柱法的分离效果有限，在分离奥利司他的应用中，往往需要多次过柱，进一步增大了劳动强度和生产成本，而且对纯度较高(如质量含量大于95％)的奥利司他的纯化效果很不理想。

以上分离方法都存在分离过程使用大量有机溶剂造成污染成本上升，分离过程复杂、不能进行连续生产，杂质含量大且不能用于一定纯度产品的进一步纯化，因此确定一种过程直观、操作简便、安全环保、适于工业规模上的高纯度奥利司他的制备工艺具有十分重要的意义。

发明内容

为了克服现有奥利司他纯化方法存在的工艺复杂、纯化范围小、环境污染大、样品损失率高的缺陷，本发明提供了一种从奥利司他粗品中回收高纯度奥利司他的分离纯化方法，该分离纯化方法工艺简单、有机溶剂使用量小，产品纯度和回收率高。

本发明采用制备型高效液相色谱***对奥利司他粗品进行分离纯化，发明人通过大量的实验确定了合适的色谱条件，采用紫外检测器在线监测，使分离纯化后的奥利司他的纯度可达99.6％以上，最大单杂含量低于0.1％。

具体的，本发明采用如下技术方案：

将奥利司他粗品用流动相解过滤，然后经高效制备液相色谱分离纯化，用紫外检测器在线检测，针对性收集奥利司他的制备组分，得奥利司他溶液，将制得的奥利司他溶液依次经减压蒸馏和冻干法除去有机溶剂和水，即得奥利司他产品。具体包括以下步骤：

(1)溶解、过滤：

按照奥利司他粗品质量∶流动相体积＝(5g-30g)∶1L的比例将奥利司他粗品溶解，溶解后用0.45μm的有机微孔滤膜过滤，滤液作为下一步制备纯化奥利司他的原料。

所述的流动相由有机溶剂和水组成，所述的有机溶剂包括甲醇、乙醇、乙腈、四氢呋喃中的一种或多种，优选甲醇、乙腈，更优选为甲醇，流动相中有机溶剂的体积分数约为70％-90％；

其中，基于保护填料，以保持其性能、延长其使用寿命，故所述奥利司他粗品纯度最好为95％以上；但并不表示本发明的提纯工艺不可以用来提纯含量低于95％的奥利司他粗品。

(2)分离纯化：

将步骤(1)中滤液0.3L-3L，注入反相高效制备液相色谱仪，等度洗脱，紫外检测器在线检测，针对性收集奥利司他的制备组分，得奥利司他溶液。

在高效制备液相色谱分离过程中，色谱条件的选择非常重要，它对样品溶液中各物质的出峰顺序、峰形、分离效果等起着决定性的作用；色谱条件主要包括色谱柱(包括填料、柱长及内径等)、流动相(包括组成和流速等)、柱温、检测波长、检测器等，各色谱条件的选择及其组合至关重要。

发明人通过大量的试验研究及对比分析，确定了适宜的色谱条件，使样品溶液中各物质的出峰时间、峰形、分离效果等最优化，有利于奥利司他单体与各杂质的分离及缩短生产周期。

其中反相高效制备液相色谱法分离奥利司他所用色谱柱为动态轴向压缩柱，直径10mm-800mm，优选直径为200mm-800mm；

动态轴向压缩柱中填料高度25mm-1000mm，优选为100mm-400mm；填料为有机相键合无机基质，其中有机键合相可以是烷基、苯基、氰基、氨基和聚合物基硅烷等，无机基质包括硅胶、二氧化钛、钛、三氧化二铁、铁等，填料形状可以是无定型和球型，填料粒径5μm-50μm，优选8μm-15μm的烷基中的C1、C4、C8、C16、C18基硅烷键合硅胶微球；

高效液相的流速为0.2L/min-15L/min，优选为1.5-2.5L/min；

在室温范围内，柱温对该工艺的分离效果没有明显影响，即柱温可选择室温；

紫外在线检测，检测波长190nm-220nm，优选检测波长为195nm-215nm。

在进行反相高效制备液相分离前，可通过液质联用、对照品定位或其它本技术领域常用的方法确定高效制备液相色谱中奥利司他的出峰时间和峰形。

(3)产品回收

将步骤(2)高效制备液相色谱分离得到的奥利司他洗脱液依次经减压蒸馏和冻干法除去其中的有机溶剂和水，即得奥利司他产品。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1)本发明中所用有机溶剂均可回收再利用，溶剂消耗少；

2)该方法工艺简单，在线检测，产品质量容易控制，效率高；

3)色谱***为密闭***，操作环境污染小；

4)本发明对奥利司他含量在95％以上的粗品的分离提纯效果优于现有技术，分离纯化后产品纯度为99.6％以上，收率在90％以上；

5)经本发明分离纯化后的奥利司他产品，最大单杂小于0.1％(分析色谱条件：色谱柱：C18柱(4.6mm×150mm，5um)；流动相∶乙腈-水体积比为86∶14；流速：1.0ml/min；样品浓度0.5mg/ml；进样量：10μl；检测波长：195nm；柱温：30℃)。

附图说明

图1实施例1中所用奥利司他粗品的高效液相分析图谱

图2按实施例1的条件制备所得奥利司他的高效液相分析图谱

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但本发明保护范围不限于下述实施例。

实施例1

(1)溶解、过滤：

按照奥利司他粗品固体质量∶溶剂体积＝10g∶1L的比例，用流动相将奥利司他粗品固体溶解，溶解后用0.45μm的有机微孔滤膜过滤，滤液作为下一步制备纯化奥利司他的原料。

所用粗品的奥利司他的纯度为96％(HPLC面积归一法)，最大单杂为0.6％(HPLC不加校正因子的主成分自身对照法，中国药典2010版，P附录31)，流动相选择体积比为86∶14的甲醇-水溶液

(2)分离纯化：

将步骤(1)中滤液2L，注入反相高效制备液相色谱仪，等度洗脱，紫外检测器在线检测，针对性收集奥利司他的制备组分，得奥利司他溶液。

其中色谱条件为色谱柱直径300mm，填料高度250mm，填料为粒径10μm的C18基硅烷键合硅胶微球，流速0.8L/min，紫外在线检测，检测波长195nm。

(3)产品回收

将步骤(2)高效制备液相色谱分离得到的奥利司他溶液中甲醇和水依次经减压蒸馏和冻干除去，即得奥利司他产品，其中纯度为99.67％，收率91％，最大单杂0.09％。

实施例2

(1)溶解、过滤：

按照奥利司他粗品固体质量∶溶剂体积＝15g∶1L的比例，用流动相将奥利司他粗品固体溶解，溶解后用0.45μm的有机微孔滤膜过滤，滤液作为下一步制备纯化奥利司他的原料。

所用粗品的奥利司他的纯度为97％(HPLC面积归一法)，最大单杂为0.45％(HPLC不加校正因子的主成分自身对照法，中国药典2010版，P附录31)，

流动相选择体积比为80∶20的乙腈-水溶液。

(2)分离纯化：

将步骤(1)中滤液2.5L，注入反相高效制备液相色谱仪，等度洗脱，紫外检测器在线检测，针对性收集奥利司他的制备组分，得奥利司他溶液。

其中色谱条件为色谱柱直径500mm，填料高度300mm，填料为粒径8μm的C18硅烷键合硅胶微球，流速1.6L/min，紫外在线检测，检测波长200nm。

(3)产品回收

将步骤(2)高效制备液相色谱分离得到的奥利司他溶液中乙腈和水依次经减压蒸馏和冻干除去，即得奥利司他产品。总收率为92.2％，产品经HPLC测定，纯度为99.75％，最大单杂0.07％。

实施例3

(1)溶解、过滤：

按照奥利司他粗品固体质量∶溶剂体积＝20g∶1L的比例，用流动相将奥利司他粗品固体溶解，溶解后用0.45μm的有机微孔滤膜过滤，滤液作为下一步制备纯化奥利司他的原料。

所用粗品的奥利司他的纯度为98％(HPLC面积归一法)，最大单杂为0.44％(HPLC不加校正因子的主成分自身对照法，中国药典2010版，P附录31)，

流动相选择体积比为88∶12的乙醇-水溶液。

(2)分离纯化：

将步骤(1)中滤液2.5L，注入反相高效制备液相色谱仪，等度洗脱，紫外检测器在线检测，针对性收集奥利司他的制备组分，得奥利司他溶液。

其中色谱条件为色谱柱直径600mm，填料高度500mm，填料为粒径10μm的C8硅烷键合硅胶微球，流速2.5L/min，紫外在线检测，检测波长210nm。

(3)产品回收

将步骤(2)高效制备液相色谱分离得到的奥利司他溶液中乙醇和水依次经减压蒸馏和冻干除去，即得奥利司他产品。总收率为93％，产品经HPLC测定，纯度为99.83％，最大单杂为0.05％。

Claims (5)

1.一种奥利司他产品的制备方法，其包括如下步骤：

（1）溶解过滤：用流动相溶解奥利司他粗品，过滤，所述流动相由有机溶剂和水组成，所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、四氢呋喃中的一种或多种；

（2）分离纯化：反相高效制备液相色谱技术分离滤液，用紫外检测器在线检测，收集奥利司他的制备组分；其中所述反相高效制备液相色谱的色谱柱为动态轴向压缩柱；

（3）产品回收：依次用减压蒸馏和冻干法分离干燥奥利司他制备组分；

其中，所述的流动相由有机溶剂和水组成；所述的有机溶剂包括甲醇、乙醇、乙腈、四氢呋喃中的一种或多种；所述动态轴向压缩柱直径为10mm-800mm；C8、C18烷基硅烷键合硅胶微球；填料粒径5μm-50μm；所用填料高度为25mm-1000mm；反相高效制备液相色谱流速为0.2L/min-15L/min；反相高效制备液相色谱的紫外检测的检测波长为190nm-220nm。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述奥利司他粗品中奥利司他的质量分数大于95%。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于溶解时奥利司他粗品的质量与流动相的体积比为（5-30）g：1L。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于流动相中有机溶剂的体积分数为70%-90%。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于反相高效制备液相色谱的色谱条件为：动态轴向压缩柱的直径为200mm-800mm；色谱柱中填料为8μm-15μm的烷基中的C8、C18烷基硅烷键合硅胶微球，填料高度为100mm-400mm；流动相为70%的甲醇和水溶液；流速为1.5-2.5 L/min，紫外检测器检测波长为195nm-215nm。