CN1972917B

CN1972917B - 氨基嘧啶类化合物及其盐和其制备方法与药物用途

Info

Publication number: CN1972917B
Application number: CN2005800208831A
Authority: CN
Inventors: 孙飘扬; 吕爱锋; 杨保海; 胡春勇
Original assignee: Individual
Current assignee: Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Group Co Ltd
Priority date: 2004-12-31
Filing date: 2005-12-26
Publication date: 2010-08-25
Anticipated expiration: 2025-12-26
Also published as: CN1972917A

Abstract

本发明涉及通式为(I)的氨基嘧啶类化合物及其盐，式中R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、Q、Z、L、m、n如正文所述；其制备方法，以及含有效剂量的通式(I)化合物的药物组合物。通式为(I)的化合物及其盐可以作为蛋白激酶抑制剂使用。

Description

氨基嘧啶类化合物及其盐和其制备方法与药物用途

技术领域

本发明涉及通式为(I)的氨基嘧啶类化合物及其盐，和其制备方法，和该化合物单独或和其他药物联合使用在治疗细胞增生性疾病(如癌)中的应用。

背景技术

在95％以上的慢性髓性白血病人中，由于染色体易位，产生BCR-ABL融合蛋白，导致高表达ABL酪氨酸激酶活性，因此，这类病人成为伊马替尼(Imatinib)靶向给药的适应症。人慢性髓性白血病K562细胞表达Bcr-Abl蛋白，因此本发明是研究针对BCR-ABL药物的常用细胞模型。

现有技术中，人们采用例如重组干扰素α-2a治疗慢性髓性白血病，该药物具有广谱抗病毒、抗肿瘤及免疫调节功能。干扰素与细胞表面受体结合，诱导细胞产生多种抗病毒蛋白，抑制病毒在细胞内繁殖，提高免疫功能包括增强巨噬细胞的吞噬功能，增强淋巴细胞对靶细胞的细胞毒性和天然杀伤性细胞的功能。

近来，Gleevec又名伊马替尼(imatinib)成为治疗慢性粒细胞白血病的前线药物，但是有些病人用药后产生了抗药性。新的研究说，第二代的Gleevec也许能帮助产生抗药性的病人。这个药物和BCR-ABL结合从而阻碍了其活性，BCR-ABL是一个促进白血病细胞生长的酶。在多数情况下，抗药性的产生是因为BCR-ABL发生了变异，使酶的形状改变了，药物不能与其结合。Neil P.Shah和同事分离出了一个被称为BMS-354825的伊马替尼变异，这个变异对与BCR-ABL酶结合的选择性要低。文章作者用白血病小鼠模式和培养的来自白血病患者的骨髓细胞做的实验显示，BMS-354825比伊马替尼更有效，而且能对付大多数的伊马替尼抗药性，而没有明显的毒性。(约15-20％的伊马替尼抗药性是由另一种变异造成的，新药对这些病例无效。)BMS-354825现已进入一期临床阶段。(Overriding ImatinibResistance With a Novel ABL Kinase Inhibitor，Neil P.Shah，et al.)。

在没有发现伊马替尼前，对费城染色体(Ph)阳性髓样白血病(CML)有活性的药物有IFN-α，阿糖胞苷和高三尖杉酯碱(HHT)，可单独或联合使用。但是这些已经使用的药物还存在不尽人意的效果。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种氨基嘧啶类化合物及其盐；本发明的另一目的在于提供一种制备氨基嘧啶类化合物及其盐的方法；本发明的又一目的在于提供一种该化合物及其盐单独或和其他药物联合使用在治疗细胞增生性疾病(如癌)中的应用。

本发明的目的是由以下技术方案来达到的，本发明涉及一种通式为(I)的氨基嘧啶类化合物及其盐：

式中，

R₁选自被取代或没被取代的芳基、杂环芳基或杂环，取代基选自卤素原子、C1-4直链或支链烷基、氨基、烷氧基、环烷基；

R₂和R₃独立地选自氢、卤素原子、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氰基、硝基、羟基、烷氧基、卤代烷氧基；或被取代或没被取代的烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂环芳基、芳烷基和杂环芳烷基，取代基选自卤素原子、C1-4直链或支链烷基、氨基、烷氧基、硝基；或R₂、R₃与其相连的碳原子形成的4-7元被取代或没被取代的碳环或杂环，取代基选自卤素原子、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氰基、硝基、羟基、烷氧基、卤代烷氧基；

R₄选自氢、卤素原子、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氰基或被取代或没被取代的烷基、环烷基、烯基、炔基，取代基选自卤素原子、氨基、羟基；

R₅选自氢、卤素原子、硝基、氰基、羟基、烷氧基、亚甲二氧基、卤代烷氧基、氨基或被取代或没被取代的烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂环芳基，取代基选自卤素原子、氨基、羟基；

R₆选自氢或被取代或没被取代的烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂环芳基、杂环芳烷基、杂环、杂环烷基，取代基选自卤素原子、氨基、C1-4烷基；

m＝0、1、2或3；

n＝0、1、2或3；

Q选自芳基、杂环芳基或杂环；

Z选自芳基、杂环芳基或杂环；

L选自

(1)-NR₇CO-

(2)-CONR₈-

(3)NR₉SO₂-

(4)-SO₂NR₁₀-

(5)-NR₁₁COO-

(6)-NR₁₂CONR₁₃-

(7)-OCONR₁₄-

其中R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃和R₁₄选自氢、被取代或没被取代的烷基、环烷基，取代基选自卤素原子、氨基、羟基。

本发明的目的是由以下技术方案进一步达到的，上述通式为(I)的化合物及其盐，其特点是R₁选自被取代或没被取代的杂环芳基，优选被取代或没被取代的六元杂环芳基，更优选被取代或没被取代的吡啶环，取代基选自卤素原子、C1-4直链或支链烷基。

本发明的目的是由以下技术方案进一步达到的，上述通式为(I)的化合物及其盐，其特点是R₂和R₃选自氢、卤素原子、氨基、烷基氨基、氰基、硝基、被取代或没被取代的烷基、环烷基，取代基选自卤素原子；优选氢或卤素原子，其中卤素原子指氟、氯、溴、碘原子。

本发明的目的是由以下技术方案进一步达到的，上述通式为(I)的化合物及其盐，其特点是R₄选自被取代或没被取代的烷基、环烷基、烯基、炔基，优选被取代或没被取代的烷基，更优选碳原子为1-4的被取代或没被取代的烷基，取代基选自卤素原子、氨基。

本发明的目的是由以下技术方案进一步达到的，上述通式为(I)的化合物及其盐，其特点是R₅选自氢、卤素原子、硝基或被取代或没被取代的烷基、环烷基、烯基、炔基；优选氢、卤素原子或被取代或没被取代的烷基、环烷基，取代基选自卤素原子或者羟基。

本发明的目的是由以下技术方案进一步达到的，上述通式为(I)的化合物及其盐，其特点是R₆选自杂环芳基、杂环芳烷基、杂环和杂环烷基，以上基团可以被取代或没被取代，优选被取代或没被取代的杂环芳基、杂环烷基，取代基优选C1-4烷基。

本发明的目的是由以下技术方案进一步达到的，上述通式为(I)的化合物及其盐，其特点是m和n独立地选自0、1、2、3。

本发明的目的是由以下技术方案进一步达到的，上述通式为(I)的化合物及其盐，其特点是Q选自芳基、杂环芳基或杂环，优选芳基或杂环芳基；Z选自芳基、杂环芳基或杂环，优选芳基或杂环芳基。

本发明的目的是由以下技术方案进一步达到的，上述通式为(I)的化合物及其盐，其特点是L选自(1)-NR₇CO-、(2)-CONR₈-、(3)-NR₉SO₂-、(4)-SO₂NR₁₀-、(5)-NR₁₁COO-，优选(1)-NR₇CO-或者(2)-CONR₈-；R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₁选自烷基或氢，优选氢。

本发明的目的是由以下技术方案进一步达到的，上述通式为(I)的化合物及其盐，其特点是可以指以(R)、(S)或(RR)、(SS)等单一对映体形式或以富含对映体形式存在的化合物及其盐。

本发明的目的是由以下技术方案进一步达到的，上述通式为(I)的化合物及其盐，其特点是所述的化合物可以和一定物质量的酸(如等物质量)成盐，所用的酸选自有机酸(如乙酸、三氯乙酸、丙酸、丁酸、天门冬氨酸、对甲苯磺酸、马来酸、乳酸)或无机酸(如盐酸、硫酸、磷酸、甲磺酸)，优选盐酸和甲磺酸。

本发明的目的是由以下技术方案进一步达到的，上述通式为(I)的化合物及其盐，其特点是所述的化合物可以和一定物质量的碱(如等物质量)成盐，所成的盐包括和碱金属(如锂、钠、钾等)、碱土金属(如镁、钙等)或季铵(如NY₄，其中Y指碳原子为1-4烷基)所成的盐。

本发明的目的是由以下技术方案进一步达到的，上述通式为(I)的化合物及其盐，其特点是所述的化合物包括：

4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]苯甲酰胺、

4-((4-乙基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]苯甲酰胺、

4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-3-氟-苯甲酰胺、

4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-3-氯-苯甲酰胺、

4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺、

6-甲基-N-[3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基]-5-[4-(3-吡啶基)-2-(嘧啶基)氨基]烟碱、

6-甲基-N-[4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基-3-(三氟甲基)苯基)-5-[4-(3-吡啶基)-2-(嘧啶基)氨基]烟碱、

4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[5-甲基-4-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-2-]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺、

5-甲基-N-[4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基-3-(三氟甲基)苯基)-4-[4-(3-吡啶基)-2-(嘧啶基)氨基]吡啶酰胺、

5-甲基-N-[3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基]-4-[4-(3-吡啶基)-2-(嘧啶基)氨基]吡啶酰胺。

本发明的另一目的是由以下技术方案进一步达到的，本发明提供一种制备通式为(I)的化合物及其盐的方法，其特点是包括如下步骤：

(A)在碱性条件下将通式为(II)的化合物和通式为(III)的化合物反应，得通式为(IV)的化合物：

(B)将通式为(IV)的化合物和通式为(V)的化合物在缩合剂存在下缩合反应得通式为(I)的化合物。

其中R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、Q、L、m、n如前面所定义；L’、M’指相互能发生缩合反应的基团，如氨基、羧酸基、酸酐基、酯基、酰卤基等，优选氨基、羧酸基或酰卤基；也可以指经常规方法能转化成氨基、羧酸基或酰卤基的有机基团，如硝基、酯基；R₁₅指易离去基团，选自卤素原子(如氟、氯、溴、碘)或甲磺酰基、乙磺酰基、对甲苯磺酰基等。

本发明的另一目的是由以下技术方案进一步达到的，本发明提供一种制备通式为(I)的化合物及其盐的方法，其特点是

(A)在制备化合物(IV)时，所用的碱选自有机碱(如正丁基锂、甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钾)或无机碱(如钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氨基钠、钠氢)，优选钠氢。

(B)在制备化合物(I)时，当反应为羧酸基和氨基缩合时，缩合剂为N，N-二环己基碳二亚胺、N，N-二异丙基碳二亚胺、N，N-二乙基碳二亚胺、三苯基磷和偶氮二羧酸二乙酯组成的混合物或三苯基磷和偶氮二羧酸二异丙酯组成的混合物等，优选N，N-二环己基碳二亚胺；当反应为酰卤基和氨基缩合时，缩合剂为无机碱(如碳酸钠、碳酸钾、碳酸钙)或有机碱(如三乙胺、吡啶、4-二甲胺基吡啶、三丙胺、三丁胺)，优选吡啶或三乙胺。

本发明的又一目的是由以下技术方案进一步达到的，本发明提供一种该化合物及其盐单独或和其他药物联合使用在治疗细胞增生性疾病(如癌)中的应用。

在本发明中，“烷基”指支链或直链饱和脂肪族碳氢基；优选碳原子为1-10个的支链或直链饱和脂肪族烷基，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、庚基、辛基等；“环烷基”指含单环的饱和脂肪族碳氢基，优选碳原子为3-10个的环烷基，如环丙基、甲基-环丙基、2，2-二甲基-环丁基、乙基-环戊基、环己基等；在“C1-C6芳烷基”和“C1-C6杂环芳烷基”中，“C1-C6”指烷基部分碳原子数。

在本发明中，“烯基”指碳原子为2-10个、至少含一个碳碳双键的支链、直链或环状非芳香族碳氢基团，如乙烯基、丙烯基、丁烯基、环己烯等。在“C2-C6烯基”中指烯基碳原子为2-6个。

在本发明中，“炔基”指碳原子为2-10个、至少含一个碳碳三键的支链、直链或环状碳氢基团，如乙炔基、丙炔基、丁炔基、3-甲基丁炔基等。在“C2-C6炔基”中指炔基碳原子为2-6个。

在本发明中，“烷氧基”指通过氧连接、碳原子为1-10个的环状或非环状烷基。

在本发明中，“芳基”指任何稳定的单环或双环，其中每个环的碳原子不大于7个并至少一个环为芳香环，如苯基、奈基、四氢奈、二苯基等。若芳基为双环且其中一环为非芳香环，则反应通过芳香环连接。

在本发明中，“卤素原子”指氟、氯、溴和碘。

在本发明中，“杂环芳基”指稳定的单环或双环，其中每个环碳原子不大于7个并至少一个环为芳香环且含有1-4个杂原子，杂原子选自O、N、S。按此定义，“杂环芳基”包括但并非限定以下种类：呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、咪唑基、***基、三嗪基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、苯并***基、喹啉基、喹喔啉基、异喹啉基、四氢喹啉基等。当杂环芳基中含N原子时，“杂环芳基”也包括其N-氧衍生物。若杂环芳基为双环且其中一环为非芳香环或不含杂原子时，则反应通过芳香环或含杂原子的环连接。

在本发明中，“杂环”指4-8个原子的单环、7-12个原子的双环或1-16个原子的三环；环可以是饱和或非饱和的，由碳原子和一个或多个杂原子组成，其中杂原子选自N、O、S，当N和S为杂原子时，可以被氧化；当N为杂原子时可以被季铵化。只要能得到稳定的结构，反应可以通过任何杂原子或碳原子相连接。当杂环有取代基时，取代基可以接在环中任何原子上。它包括苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并吡唑基、苯并***基、苯并噻吩基、咔唑基、咔啉基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、吲唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、奈吡啶基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氢吡喃基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、***基、六氢氮杂基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、硫吗啉基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢吲哚基、二氢异噻唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢喹啉基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢***基、二氢氮杂环丁烷基、亚甲基二氧苯甲酰基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、噻嗪基、二氧噻二嗪基、二氧噻二唑烷基、异二氧噻二唑烷基等；“杂环”还包括以下双环化合物，如咪唑[4，5-b]吡啶基、二氢咪唑[4，5-b]吡啶基、吡唑啉[4，3-c]吡啶基、二氢吡唑啉[4，3-c]吡啶基、四氢吡唑啉[4，3-c]吡啶基、吡咯[1，2-a]吡嗪基、二氢吡咯[1，2-a]吡嗪基、四氢吡咯[1，2-a]吡嗪基、噌啉基、嘌呤基、1，6-萘啶基、1，8-萘啶基、咪唑[1，2-a]嘧啶基、2，3-二氢咪唑[2，1-b][1，3]噻唑基、苯氮杂基、二氢苯氮杂基、苯并二氮杂基、二氢苯并二氮杂基、四氢苯并二氮杂基等；“杂环”还包括以下三环化合物，如吩噻嗪基、咔唑基、β-咔唑基、吩嗪基等。

上述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂环芳基和杂环基也可以被取代，其取代基包括但并非限定以下种类：羟基、烷基、卤代烷基、卤素、氰基、硝基、羰基、酯基、氨基、烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基等。

本发明所得化合物及其盐可通过口服、真皮或非胃肠道(如通过注射、吸入、喷雾、舌下、直肠或***)给药。“注射给药”包括静脉注射、关节注射、肌肉注射、皮下注射、非肠道注射以及输液。真皮给药包括局部或交叉给药。口服用药是按照本领域技术人员所熟知的方法制备的，在此类制剂中还可有一种或多种助剂，如稀释剂、甜味剂、调味剂、色剂和防腐剂。

在片剂中，活性组分和无毒、可药用的赋形剂混合。这些赋形剂包括：惰性稀释剂(如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠)、粒化或崩解剂(如玉米淀粉、藻酸)和粘合剂(如硬脂酸镁、硬脂酸、滑石)。片剂可以不包衣，也可以用已知的方法包衣来延缓在胃肠道中的分解和吸收从而延长药效时间，如可以使用硬脂酸甘油酯或甘油二硬脂酸酯。这些化合物也可以制备成固态、快速释放的模式。

在硬胶囊中，活性组分和惰性固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或陶土混合；在软胶囊中，活性组分和水或油媒介如花生油、石蜡或橄榄油混合。

在水悬浮剂中，活性组分和能适合药用的赋形剂混合。这些赋形剂有悬浮剂(如羟基甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟基丙基-甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶、***胶)、分散剂或湿润剂[包括自然产生的磷脂(如卵磷脂)或烯化氧和脂肪酸的缩合物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)或乙烯化氧和长链脂肪醇的缩合物(如十七碳乙烯氧十六醇)或乙烯氧和由脂肪酸和己糖醇衍生得到的部分酯的缩合物(如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)或乙烯氧和由脂肪酸和己糖酐衍生得到的部分酯的缩合物(如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。所述水悬浮剂也可以含一种或多种防腐剂(如对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯)；一种或多种色剂；一种或多种芳香剂以及一种或多种甜味剂(如蔗糖或糖精)。

适合制备水悬浮剂的可分散粉末和颗粒是通过将水、活性组分和分散剂或湿润剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合而制备的。也可以向其中加入其他赋形剂如甜味剂、色剂、芳香剂。

本发明所得通式(I)的化合物及其盐也可以制备成非-水液体制剂。油悬浮剂可以将活性组分悬浮在植物油(如花生油、橄榄油、芝麻油)或矿物油(如液体石蜡)中；油悬浮剂中可以含有增稠剂(如蜂蜡、硬石蜡或十六醇)；也可以加入甜味剂和芳香剂来增加制剂的口感；为增加制剂的稳定性，可加入抗氧剂(如抗坏血酸)。

本发明所得通式(I)的化合物及其盐也可以制备成油-水乳状液。油相选自植物油(如橄榄油、花生油)或矿物油(如液体石蜡)或上述混合物。乳化剂选自天然树胶(如黄蓍胶、***胶)或天然磷脂(如大豆、卵磷脂)或由脂肪酸和己糖酐衍生得到的部分酯(如山梨糖醇单油酸酯)或上述酯和乙烯氧缩合的产物(如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)。乳状液中也可以含甜味剂和芳香剂。

糖浆和西也剂中甜味剂选自甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖。这类制剂中也可以含有缓和剂、防腐剂、芳香剂和色剂。

本发明所得通式(I)的化合物及其盐也可以制备成直肠或***给药的栓剂。本栓剂通过将活性组分和合适无毒的赋形剂混合来制备，所选用的赋形剂在常温下是固体，但在直肠或***中融化变成液体从而释放出药物，如可可油和聚乙二醇。

本发明所得通式(I)的化合物及其盐也可以用本领域技术人员熟知的方法反真皮给药。例如，在挥发性溶剂中，将所得到的化合物(I)的溶液或悬浮液、渗透增强剂和本领域技术人员熟知的添加剂相混合，无菌处理后，所得混合物按熟知的程序和一定的剂量制备成所需制剂；另外，用乳化剂或水处理后，化合物(I)的溶液或悬浮液可以制备成洗剂或药膏。

经皮传输***所用溶剂是本领域技术人员所熟知的，包括低级醇(如乙醇或异丙醇)、低级酮(如丙酮)、低级羧酸酯(如乙酸乙酯)、极性醚类(如四氢呋喃)、低级碳氢化物(如正己烷、环己烷或苯)或卤代碳氢化物(如二氯甲烷、氯仿、三氯三氟乙烷)；所用溶剂还包括选自低级醇、低级酮、低级羧酸酯、极性醚、低级碳氢化物、卤代低级碳氢化物中的一种或多种混合溶剂。

经皮传输***所用渗透增强剂是本领域技术人员所熟知的，包括单羟基或多羟基醇(如乙醇、丙二醇或苄醇)、饱和或不饱和的C8-C18脂肪醇(如十二醇或十六醇)、饱和或不饱和的C8-C18脂肪酸(如硬脂酸)、碳原子不超过24的饱和或不饱和酯(如乙酸、己酸、月桂酸、十四酸、硬脂酸或软脂酸和甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、异丁醇、叔丁醇或单甘油所生成的酯)或饱和或不饱和的二羧酸所形成的二酯(如己二酸二异丙酯、己二酸二异丁酯、癸二酸二异丙酯、马来酸二异丙酯；渗透增强剂还包括磷脂衍生物(如卵磷脂或脑磷脂)、萜烯、氨、酮、尿素及其衍生物和醚类(如异山梨醇二甲醚、二甘醇单***)；合适的渗透增强剂还包括选自单羟基或多羟基醇、饱和或不饱和C8-C18脂肪醇、饱和或不饱和C8-C18脂肪酸、碳原子不超过24个的饱和或不饱和酯、饱和或不饱和的二羧酸所形成的二酯、磷脂衍生物、萜烯、氨、酮、尿素及其衍生物、醚中的一种或多种物质的混合物。

经皮传输***所用粘合剂是本领域技术人员所熟知的，包括聚丙烯酸酯、硅树脂、聚亚安酯、嵌段共聚物、苯乙烯-丁二烯共聚物、天然或合成橡胶，纤维素、聚乙烯衍生物和硅酸盐也可以用作骨架的组成物。另外，也可以加入添加剂如粘性树脂或油从而增加骨架的粘性。

本发明所得通式(I)的化合物及其盐，其口服给药日用量优选0.01-200mg/kg；其注射给药日用量(如静脉注射、肌肉注射、皮下注射、非肠道注射或输液)优选0.01-200mg/kg；其直肠或***给药日用量优选0.01-200mg/kg；其局部给药日用量优选0.1-200mg，每天给药1-4次；其反真皮给药浓度优选0.01-200mg/kg；其吸入给药日用量优选0.01-10mg/kg，其中“mg”表示药物组合物中活性组分的重量单位，“kg”表示人体的重量单位。

当然，就如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定以下因素：所用特定化合物的活性、病人的年龄、病人的体重、病人的健康状况、病人的性别、病人的饮食、给药的时间、给药的方式、***的速率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、化合物(I)的日用量或药学可接受盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。

另一方面，本发明提供一种该化合物及其盐单独或和其他药物联合使用在治疗细胞增生疾病(如癌)中的应用。能和本发明所提供的化合物及其盐联合使用的抗肿瘤剂包括多聚核苷酸、多肽、生物模拟药物、生物碱、烷基化剂、抗肿瘤抗生素、抗代谢物、激素、铂化合物、和抗肿瘤药物结合的单克隆抗体、毒素和或放射性核、生物学反应修饰剂(如干扰素)、免疫疗法剂、造血增长因子、基因治疗剂、反义治疗剂、核苷、抗肿瘤疫苗等。优选的抗肿瘤剂有诱导或刺激凋亡(apoptosis)剂，诱导凋亡(apoptosis)剂包括但并非限定以下种类：放射物、激酶抑制剂(如表皮增长因子受体激酶抑制剂、血管增长因子受体激酶抑制剂、衍生血小板增长因子受体激酶抑制剂和Bcr-abl激酶抑制剂如STI-157，Gleevec)，还优选反义分子、抗体(如Hercepin和Rituxan)、抗***剂(如raloxifene和tamoxifen)、抗男性荷尔蒙剂(如flutamide、bicalutamide、finasteride、aminoglutethamide、ketoconazole和corticosteroids)、COX-2抑制剂(如Celecoxib、meloxicam、NS-398、非甾族抗发炎药物和癌症化疗药物(如irinotecan)、CPT-11、fludarabine、dacarbazine、dexabethasone、mitoxantrone、Mylotarg、VP-16、顺铂、5-FU、Doxrubicin、TAXOTERE、细胞标记分子、ceramide、cytokine、staurosprine等。

本发明涉及通式为(I)的化合物及其盐的制备方法，其制备方法具体包括：

阶段A：本阶段包括化合物(II)和化合物(III)反应制备化合物(IV)。本反应在碱性环境中进行，所用的碱选自有机碱(如吡啶、三乙胺、六氢吡啶、N-甲基哌嗪、4-二甲氨基吡啶等)或无机碱(如碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、甲醇钠、乙醇钠、氨基钠、钠氢、正丁基锂等)，所用碱量控制在化合物(II)物质量的1-10倍，优选1-3倍；本反应温度从-80℃到100℃，优选0℃到60℃；本反应所用时间取决化合物(II)和(III)类型、所选用的溶剂和反应的温度等，一般控制在1min-72hrs，优选15min-24hrs。

阶段B：本阶段包括化合物(IV)和化合物(V)缩合反应制备化合物(I)。当缩合反应在酸和氨基之间进行时，所用缩合剂选自N，N-二环己基碳二亚胺、N，N-二异丙基碳二亚胺、N，N-二乙基碳二亚胺、三苯基磷和偶氮二羧酸二乙酯组成的混合物或三苯基磷和偶氮二羧酸二异丙酯组成的混合物等，优选N，N-二环己基碳二亚胺；所用溶剂选自甲苯、苯、二氯甲烷、氯仿、四情呋喃或上述溶剂组成的混合物等，优选二氯甲烷；反应温度控制在-80℃到100℃，优选0℃到60℃；反应所用时间取决化合物(IV)和(V)类型、所选用的溶剂和反应的温度等，一般控制在1min-72hrs，优选15min-24hrs。当缩合反应在酰卤和氨基之间进行时，所用缩合剂选自有机碱(如吡啶、三乙胺、六氢吡啶、N-甲基哌嗪、4-二甲氨基吡啶等)或无机碱(如碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、甲醇钠、乙醇钠、氨基钠、钠氢、正丁基锂等)，所用碱量控制在化合物(IV)物质量的1-10倍，优选1-3倍；本反应温度从-80℃到100℃，优选0℃到60℃；本反应所用时间取决化合物(II)和(III)类型、所选用的溶剂和反应的温度等，一般控制在1min-72hrs，优选15min-24hrs。

附图详细说明

图1：氨基嘧啶类化合物药物浓度对早幼粒白血病HL-60细胞增殖抑制率关系图。

图2：氨基嘧啶类化合物药物浓度对人髓性白血病K562细胞增殖抑制率关系图。

图3：氨基嘧啶类化合物对人髓性白血病K562、早幼粒白血病HL-60细胞增殖抑制图。

图3-a：人髓性白血病K562细胞对照图。

图3-b：早幼粒白血病HL-60细胞对照图。

图3-c：HH-GV-E(0.3uM)对人髓性白血病K562细胞增殖抑制图。

图3-d：HH-GV-E(10uM)对早幼粒白血病HL-60细胞增殖抑制图。

图3-e：HH-GV-F(0.03uM)对人髓性白血病K562细胞增殖抑制图。

图3-f：HH-GV-F(10uM)对早幼粒白血病HL-60细胞增殖抑制图。

图3-g：化合物Imatinib(0.3uM)对人髓性白血病K562细胞增殖抑制图。

图3-h：化合物Imatinib(10uM)对早幼粒白血病HL-60细胞增殖抑制图。

图4：HH-GV-E、HH-GV-F、Gleevec对人粒细胞白血病K562裸小鼠移植瘤

图5：HH-GV-E、HH-GV-F、Gleevec对荷瘤裸小鼠体重的影响图。

图6：HH-GV-E、HH-GV-F、Gleevec对人粒细胞白血病K562裸小鼠移植瘤的疗效肿瘤照片。

图7.HH-GV-678、Gleevec对人粒细胞白血病K562裸小鼠移植瘤的疗效

图8.HH-GV-678、Gleevec对荷瘤裸小鼠体重的影响

具体实施方式

为了更详细地说明本发明，给出下述制备实例。但本发明的范围并非限定于此。

实施例1

N-(5-硝基-2-甲基吡啶基-3-)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺的制备

将2-甲磺酰基-4-(3-吡啶基)嘧啶(3.0克)、2-甲基-3-氨基-5-硝基吡啶(5.0克)和DMF(50毫升)投入到反应瓶中，冷却至0-5℃，加入钠氢(60％、2.3克)，自然升至室温反应6小时。向反应液中加入氯仿和水各50毫升，分层，水层用氯仿(2×100毫升)反提，合并有机层，干燥，过滤，浓缩干，柱层析纯化得N-(5-硝基-2-甲基吡啶基-3-)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺：5.2克。

实施例2

N-(5-氨基-2-甲基吡啶基-3-)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺的制备

方法A：将N-(5-硝基-2-甲基吡啶基-3-)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(3.0克)、活性镍(0.3克)和甲醇(100毫升)投入到反应瓶中，常压加氢至无原料。过滤，浓缩干，得N-(5-氨基-2-甲基吡啶基-3-)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺：2.8克。

方法B：将N-(5-硝基-2-甲基吡啶基-3-)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(18克)、乙醇(180毫升)、水合肼(9毫升)和活性镍(0.5克)投入到反应瓶中，回流反应3小时，过滤，滤液减压浓缩至析出固体，0℃放置过夜，过滤，干燥得N-(5-氨基-2-甲基吡啶基-3-)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺：15克。

方法C：将N-(5-硝基-2-甲基吡啶基-3-)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(18克)和四氢呋喃(200毫升)投入到反应瓶中，冷却至0-5℃，分批加入氢化锂铝(共约2.2克)，保温反应2小时，向反应液中加入1N盐酸调PH＝5-6，用二氯甲烷(2×100毫升)提取，合并有机层，干燥，过滤，浓缩干得N-(5-氨基-2-甲基吡啶基-3-)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺：12克。

实施例3

4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-苯甲酰胺的制备

方法D：将4-(4-甲基哌嗪甲基)苯甲酸(3.2克)和氯化亚砜(100毫升)投入到反应瓶中，加热至回流反应4小时，减压浓缩至干，所得固体直接用于下步投料。

将N-(5-氨基-2-甲基吡啶基-3-)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(3.0克)溶于吡啶(80毫升)中，溶清后将此溶液滴加到上述酰氯中，室温搅拌过夜。减压浓缩干，向反应液中加入水和氯仿各100毫升，萃取，干燥，过滤，浓缩干，柱层析纯化得4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-苯甲酰胺：4.2克。

方法E：将4-(4-甲基哌嗪甲基)苯甲酸(3.2克)、N，N-二环己基碳二亚胺(3.0克)、N-(5-氨基-2-甲基吡啶基-3-)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(3.0克)和二氯甲烷(100毫升)投入到反应瓶中，室温搅拌反应过夜。过滤，滤液用水(2×100毫升)洗涤，干燥，过滤，浓缩干柱层析纯化得4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-苯甲酰胺：4.0克。

实施例4

4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-苯甲酰胺甲磺酸盐的制备

方法F：将4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-苯甲酰胺(2.0克)、甲磺酸(0.40克)和纯化水(100毫升)投入到反应瓶中，溶清后过滤，滤液冷冻干燥得4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-苯甲酰胺甲磺酸盐：2.2克。

方法G：将4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-苯甲酰胺(2.0克)、甲磺酸(0.40克)和甲醇(100毫升)投入到反应瓶中，溶清后减压浓缩至约20毫升，加入丙酮析晶，过滤，干燥得4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]-吡啶基]-苯甲酰胺甲磺酸盐：2.0克。

实施例5

4-((4-乙基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基] 吡啶基-3-]-苯甲酰胺的制备

可以按实施例3中D、E两种相同的方法制备，不同之处在于用4-(4-乙基哌嗪甲基)苯甲酸(3.3克)代替4-(4-甲基哌嗪甲基)苯甲酸(3.2克)。

实施例6

4-((4-乙基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-苯甲酰胺甲磺酸盐的制备

可以按实施例4中F、G两种相同的方法制备，不同之处在于用4-((4-乙基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-苯甲酰胺(2.10克)代替4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-苯甲酰胺(2.0克)。

实施例7

4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基] 吡啶基-3-]-3-氟苯甲酰胺的制备

可以按实施例3中D、E两种相同的方法制备，不同之处在于用4-(4-甲基哌嗪甲基)-3-氟-苯甲酸(3.3克)代替4-(4-甲基哌嗪甲基)苯甲酸(3.2克)。

实施例8

4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-3-氟苯甲酰胺甲磺酸盐的制备

可以按实施例4中F、G两种相同的方法制备，不同之处在于用4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-3-氟-苯甲酰胺(2.10克)代替4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-苯甲酰胺(2.0克)。

实施例9

4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基] 吡啶基-3-]-3-氯-苯甲酰胺的制备

可以按实施例3中D、E两种相同的方法制备，不同之处在于用4-(4-甲基哌嗪甲基)-3-氯-苯甲酸(3.4克)代替4-(4-甲基哌嗪甲基)苯甲酸(3.2克)。

实施例10

4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-3-氯-苯甲酰胺甲磺酸盐的制备

可以按实施例4中F、G两种相同的方法制备，不同之处在于用4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-3-氯-苯甲酰胺(2.20克)代替4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-苯甲酰胺(2.0克)。

实施例11

4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基] 吡啶基-3-]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺的制备

可以按实施例3中D、E两种相同的方法制备，不同之处在于用4-(4-甲基哌嗪甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸(3.6克)代替4-(4-甲基哌嗪甲基)苯甲酸(3.2克)。

实施例12

4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺甲磺酸盐的制备

可以按实施例4中F、G两种相同的方法制备，不同之处在于用4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(2.35克)代替4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-苯甲酰胺(2.0克)。

实施例13

6-甲基-N-[3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基]-5-[4-(3- 吡啶基)-2-(嘧啶基)氨基]烟碱的制备

方法I：将6-甲基-5-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基氨基]烟酸(30.7克、0.1mol)、3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(24.1克、0.1mol)、三乙胺(83ml)和DMF(800ml)投入到反应瓶中，冷却至10℃，滴加50％的丙基磷酸酐/DMF的混合液(87.5ml)，滴完后室温反应24小时。向反应液中加入饱和的氯化铵溶液，用乙酸乙酯提取三次，干燥，过滤，浓缩干，柱层析得标题化合物。

方法II：将6-甲基-5-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基氨基]烟酸(30.7克)和氯化亚砜(500ml)投入到反应瓶中，加热至回流反应4小时，减压浓缩至干，所得固体直接用于下步投料。

将3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(24.1克)溶于吡啶(200毫升)中，溶清后将此溶液滴加到上述酰氯中，室温搅拌过夜。减压浓缩干，向反应液中加入水和氯仿各500毫升，萃取，干燥，过滤，浓缩干，柱层析纯化得标题化合物。

中间体3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺的制备

将3-氟-5-(三氟甲基)-苯氰(17克、89mmol)、4-甲基咪唑(22.2克、270mmol)和N，N-二甲基乙酰胺(80毫升)投入到反应瓶中，于145℃反应19小时。减压浓缩除去溶剂，加入乙酸乙酯(200毫升)，依次用盐水(2×200毫升)洗涤，干燥。过滤，浓缩干后用***-石油醚重结晶得中间体：3-(4-甲基-1H-咪唑-1-)-5-(三氟甲基)-苯氰。

将上步中间体(16.7克、66mmol)、二氧六环(300毫升)和1M氢氧化钠水溶液(275毫升)投入到反应瓶中，于95℃反应18小时。浓缩除去溶剂，用1M盐酸调PH至中性，用正丁醇(2×250毫升)提取，干燥，浓缩干得中间体：3-(4-甲基-1H-咪唑-1-)-5-(三氟甲基)-苯甲酸。

将上步中间体(6.8克、25mmol)、叔丁醇(200毫升)投入到反应瓶中，加入三乙胺(5.23毫升、37.5mmol)，再加入二苯基叠氮磷酸(DPPA)(7.6克、27.5mmol)，于80℃反应16小时。减压浓缩除去溶剂，加入水(100毫升)，用乙酸乙酯(2×100毫升)提取。有机层用盐水洗涤，干燥。过滤浓缩，柱层析纯化，用***-石油醚重结晶得中间体：3-(4-甲基-1H-咪唑-1-)-5-(三氟甲基)-N-(叔丁氧羰基)苯胺。

将上步中间体(5mmol)和盐酸/异丙醇(30毫升、4M)投入到反应瓶中，于60℃反应5小时。减压浓缩除去溶剂，加入饱和碳酸氢钠溶液(80毫升)，用乙酸乙酯(3×80毫升)提取，盐水洗涤，干燥。过滤，浓缩干用***-石油醚重结晶得中间体3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺。

实施例14

6-甲基-N-[4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基-3-(三氟甲基)苯基)-5-[4- (3-吡啶基)-2-(嘧啶基)氨基]烟碱的制备

制备方法参考实施例13中方法I、II，不同之处在于将3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(20.7克、0.1mol)改为4-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-(三氟甲基)苯胺(25.9克、0.1mol)。

中间体4-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-(三氟甲基)苯胺的制备

将原料2-溴-4-硝基甲苯(23.2mmol)溶于NMP(200毫升)中，加入三氟乙酸钠(8.5克、62.5mmol)和碘化亚酮(8.75克、46mmol)，于160℃反应4小时。冷却，加入水(300毫升)，过滤，滤饼用***(3×250毫升)充分洗涤，分层，有机层依次用水、盐水洗涤，干燥。过滤浓缩干柱层析纯化得2-(三氟甲基)-4-硝基甲苯：3.12克。

将上步中间体(0.5克、2.44mmol)和乙酸(1.9毫升)投入到反应瓶中，加入NBS(0.651克、3.66mmol)和过氧苯甲酰(6毫克、0.024mmol)，回流反应过夜。冷却，减压浓缩除去溶剂。加入乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液，分层。有机层干燥。过滤，浓缩干得中间体：1-(溴甲基)-4-硝基-2-(三氟甲基)苯。

将上步中间体(400克)和二氯甲烷(2800毫升)投入到反应瓶中，加入三乙胺(197毫升)和N-甲基哌嗪(157毫升、1.41mol)，室温搅拌反应2小时。加入碳酸氢钠饱和溶液，分层，有机层干燥，过滤浓缩柱层析得中间体：1-[4-硝基-2-(三氟甲基)苄基]-4-甲基哌嗪。

将上步中间体(3.0克)、活性镍(0.3克)和甲醇(100毫升)投入到反应瓶中，常压加氢至无原料。过滤，浓缩干，柱层析得4-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-(三氟甲基)苯胺。

实施例15

4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[5-甲基-4-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-2-]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺的制备

将化合物N-(4-氨基-5-甲基吡啶-2-)-4-[(4-甲基哌嗪基-1-)甲基]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺(7.1克)、2-(甲磺酰基)-4-(3-吡啶基)嘧啶(5.0克)和DMF(50ml)投入到反应瓶中，冷却至0℃左右，分次加入60％钠氢(1.5克)，加完后保温反应2小时，然后自然升至室温反应1小时。加入氯仿/甲醇＝30∶1的混合液100毫升，用10％柠檬酸调PH＝7，萃取，水层反提，合并有机层，盐水洗涤，干燥。过滤，浓缩干柱层析提纯得标题化合物。

1.N-(4-氨基-5-甲基吡啶-2-)-4-[(4-甲基哌嗪基-1-)甲基]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺的制备

向2-氯-5-甲基吡啶(10克)的醋酐(50ml)溶液中分次加入30％的双氧水(50ml)，于室温反应24小时，然后在60℃反应30小时。减压浓缩除去过量的乙酸，向残余液中加入浓硫酸(30ml)，将此溶液加入到硝酸(50ml)和浓硫酸(30ml)的混合液中，于100℃反应半小时。将反应液冲入到冰水中，用碳酸铵固体和氨水调PH至碱性，过滤得中间体：2-氯-4-硝基-5-甲基-氮氧吡啶。

将上步中间体(1.0克)和10％的氨/乙醇溶液(20ml)投入到反应瓶中，于高压釜中加热至回流反应4小时。冷却，减压浓缩除去乙醇，加入水，过滤。固体用水重结晶，得中间体：2-氨基-4-硝基-5-甲基-氮氧吡啶。

将上步中间体(13.4克、71mmol)和氯仿(150ml)投入到反应瓶中，冷却至0-5℃。向此溶液中加入三氯化磷(19ml)，加热至70-80℃反应1小时。冷却，加入水，用氢氧化钠溶液调PH至碱性，氯仿提取，合并有机层，盐水洗涤，干燥。过滤，浓缩干用石油醚析晶得中间体：2-氨基-4-硝基-5-甲基吡啶。

将4-[(4-甲基哌嗪基-1-)甲基]-3-(三氟甲基)苯甲酸(3克、10mmol)和氯化亚砜(50ml)投入到反应瓶中，加热至回流反应5小时。减压浓缩除去溶剂，用干燥甲苯带二次除尽残余氯化亚砜。

向得到的酰氯化合物中加入吡啶(50ml)，搅拌下加入2-氨基-4-硝基-5甲基吡啶(1.53克、10mmol)，室温搅拌反应过夜。减压浓缩除去溶剂，向残余液中加入水，用饱和碳酸氢钠调PH＝8，氯仿提取，合并有机层，干燥。过滤，浓缩干，柱层析得中间体：N-(4-硝基-5-甲基吡啶-2-)-4-[(4-甲基哌嗪基-1-)甲基]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺。

将上步中间体(5.0克、10mmol)、水合肼(5.4ml)、甲醇(180ml)和少量兰尼镍投入到反应瓶中，加热至回流反应4小时。过滤，滤液减压浓缩，用甲苯带干，用二氯甲烷处理，过滤，干燥得N-(4-氨基-5-甲基吡啶-2-)-4-[(4-甲基哌嗪基-1-)甲基]-3-(三氟甲基)苯甲酰胺。

实施例16

5-甲基-N-[4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基-3-(三氟甲基)苯基)-4-[4-(3-吡啶基)-2-(嘧啶基)氨基]吡啶酰胺的制备

制备方法参考实施例13中方法I、II，不同之处在于将6-甲基-5-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基氨基]烟酸(30.7克、0.1mol)改为5-甲基-4-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基氨基]Picolinic acid(30.7克、0.1mol)；将3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺(24.1克、0.1mol)改为4-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-(三氟甲基)苯胺(25.9克、0.1mol)。

实施例17

5-甲基-N-[3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)苯基]-4-[4-(3-吡啶基) -2-(嘧啶基)氨基]吡啶酰胺的制备

制备方法参考实施例13中方法I、II，不同之处在于将6-甲基-5-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基氨基]烟酸(30.7克、0.1mol)改为5-甲基-4-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基氨基]吡啶甲酸(Picolinic acid)(30.7克、0.1mol)。

实施例18

化合物F 400g

淀粉 100g

蔗糖 20g

微晶纤维素 10g

0.5％CMC液适量

硬脂酸镁 5g

1000片

常规湿法制粒，压片，包装。

实验例一

HH-GV-E、HH-GV-F、Gleevec体外抗肿瘤活性研究

注明：HH-GV-E指4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-3-氯-苯甲酰胺甲磺酸盐；

HH-GV-F指4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺甲磺酸盐。

1.细胞株：

HL-60：人急性早幼粒白血病细胞，Bcr-Abl酪氨酸激酶表达阴性。

K562：人慢性髓性白血病细胞，表达P²¹⁰ Bcr-Abl酪氨酸激酶

2.试验试剂、药物及仪器：

RPMI-1640，DMEM购自Gibico BRL公司；胎牛血清购自Hyclone公司；酶标仪：POLAR star型号，德国BMG公司产品；MTT，购自Sigma。

3.试验方法：

MTT法主要步骤：

●细胞以含10％的胎牛血清培养，使细胞一直处于对数生长期。

●试验细胞接种于96孔培养板，根据不同细胞，初始接种密度为4×10⁴/ml。37℃，5％CO₂培养箱预培养24小时加药，药物设6-8个浓度，连续作用48小时。

●药物作用结束后，相差显微镜拍照。然后，每孔加入MTT工作液，4小时后，DMSO溶解，用Plarstar酶标仪测定每个小孔的OD值。

试验对照：

空白对照孔加20μl培养液，阳性对照药选择imatinib。

浓度设置：

设5-8个浓度，每个浓度设三个复孔。范围主要在0.001-10μM。

4.疗效评价：

细胞生长抑制率计算：

5.试验结果

伊马替尼(Imatinib)通过抑制Abl酪氨酸激酶的活性而发挥其抑制细胞增殖的作用。在95％以上的慢性髓性白血病病人中，由于染色体易位，产生Bcr-Abl融合蛋白，导致高表达Abl酪氨酸激酶活性。人慢性髓性白血病K562细胞表达Bcr-Abl蛋白，因此，是研究针对Bcr-Abl药物的常用细胞模型。本实验发现本发明所得化合物对K562的增殖均有不同程度的抑制作用，化合物F作用比imatinib约强40倍；化合物E作用比imatinib强4倍。人早幼粒细胞白血病HL-60没有表达Bcr-Abl，因此，作为本实验的模型对照。结果发现本发明所得化合物即使在高浓度时(10μM)对HL-60细胞的增殖也没有明显的影响，说明这类化合物对作用靶点有很好的选择性，其中，对照药物imatinib的选择性约大于30倍；化合物F约为1250倍；化合物E约大于125倍。因此，本发明所得化合物E和化合物F对靶向白血病细胞的增殖显示出很强的抑制作用，他们的作用均优于或相当于对照药物Imatinib。(具体结果见表1、图1、图2、图3)

表1氨基嘧啶类化合物对体外培养的白血病细胞的增殖抑制作用

6.结论

HH-GV-F，HH-GV-E对靶向白血病细胞的增殖显示出很强的抑制作用，他们的作用均优于对照药物Imatinib。

实验例二

HH-GV-E、HH-GV-F、Gleevec对人粒细胞白血病K562裸小鼠移植瘤的疗效

1.实验动物：

BALB/cA-nude裸小鼠购自上海斯莱克实验动物有限责任公司；18-21g，♀，合格证号：SCXK(沪)2004-0005；在恒温、恒湿的SPF环境中伺养。

2.实验步骤：

动物适应1周后，皮下接种人白血病K562细胞，待肿瘤生长到100-300mm3后，将动物随机分组(d0)。裸小鼠灌胃给药。HH-GV-E、Gleevec，给药剂量均为75mg/kg，150mg/kg；HH-GV-F为37.5mg/kg，75mg/kg。每天给药1次，共21天。每周测2-3次瘤体积，称鼠重，记录数据。肿瘤体积(V)计算公式为：V＝1/2×a×b2 其中a、b分别表示长、宽。

3.结果：

小鼠灌胃给药，每天1次，连续21天。

对照组小鼠在实验第18天时，有1/8只小鼠死亡，至实验结束时共有2/8只小鼠死亡，根据肿瘤生长情况及小鼠状态，该死亡应属于肿瘤生长所致。

Gleevec按照目前的给药方案对K562肿瘤生长没有明显作用；150mg/kg组有1/6只小鼠在给药后第18天死亡，应属于肿瘤相关性死亡。

HH-GV-E 150mg/kg给药对K562肿瘤生长有明显的抑制作用。

HH-GV-F 75mg/kg给药后第9天，有1/6只小鼠出现肿瘤消退；第12天有4/6只小鼠出现肿瘤消退；第15天出现5/6只小鼠肿瘤消退。但在试验结束时(即给药后第21天)有1只小鼠肿瘤复发，因此，试验结束时共有4/6只小鼠肿瘤消退。37.5mg/kg给药明显抑制K562肿瘤的生长，但没有引起小鼠肿瘤消退。HH-GV-F的疗效呈现出明显的剂量依赖性。由于肿瘤消退，HH-GV-F给药组的小鼠状态明显比对照组和Gleevec、HH-GV-E组好，显示出HH-GV-F对慢性粒细胞白血病非常好的治疗效果。(具体结果见表2、图4、图5和图6)

表2.口服HH-GV-E、HH-GV-F、Gleevec对人粒细胞白血病K562裸小鼠移植瘤的疗效

d0：分笼给药时间；dn：第1次给药后21天；*P＜0.01vs对照；CR：完全消退.

4.结论：

HH-GV-F、HH-GV-E对人粒细胞白血病K562有非常好的疗效，其疗效明显优于Gleevec。

实验例三

HH-GV-678、Gleevec对人粒细胞白血病K562裸小鼠移植瘤的疗效

注明：HH-GV-678(即HH-GV-F)指4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)-N-[6-甲基-5-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]吡啶基-3-]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺甲磺酸盐。

1.实验动物：

BALB/cA-nude裸小鼠购自上海斯莱克实验动物有限责任公司；5-6周龄，♀，合格证号：SCXK(沪)2004-0005；在恒温、恒湿的SPF环境中伺养。

2.实验步骤

动物适应1周后，皮下接种人白血病K562细胞，待肿瘤生长到100-300mm³后，将动物随机分组(d0)。裸小鼠灌胃HH-GV-678、Gleevec，给药剂量分别为HH-GV-678为75mg/kg，150mg/kg；Gleevec为150mg/kg。HH-GV-678每天给药1次，共21天。Gleevec每天2次，每次150mg/kg，共21天。每周测2-3次瘤体积，称鼠重，记录数据。肿瘤体积(V)计算公式为：V＝1/2×a×b² 其中a、b分别表示长、宽。

3.结果：

HH-GV-678组75mg/kg给药，在第6天，即有3/8只小鼠肿瘤完全消退(CR)；至第9天，有7/8只小鼠肿瘤出现完全消退。第12天时，所有肿瘤(8/8)均消退。

HH-GV-678组150mg/kg给药，在第6天时，即有6/8只小鼠肿瘤出现完全消退(CR)；第9天时，所有肿瘤(8/8)均完全消退。

Gleevec组在给药后第12天时，有1/8只小鼠肿瘤出现完全消退；至实验结束时，有2/8只小鼠肿瘤出现完全消退。

实验证明HH-GV-678起效较快，而Gleevec起效相对较慢；且HH-GV-678的疗效明显优于Gleevec。

荷瘤小鼠对以上2个化合物均能很好地耐受，相对而言，本实验条件下，HH-GV-678的毒性较小。(具体结果见表3、图7和图8)

表3.口服HH-GV-678、Gleevec对人粒细胞白血病K562裸小鼠移植瘤的疗效

4.结论：

HH-GV-678和Gleevec均对人粒细胞白血病K562有显著疗效；HH-GV-678的疗效明显优于Gleevec；相比而言，本实验条件下，HH-GV-678的毒性略小于Gleevec。

Claims

1.一种通式为(I)的氨基嘧啶类化合物及其药学上可接受的盐：

式中，

R₁选自任选被取代的苯基或4-8元单环杂环，取代基选自卤素原子、C_1-4直链或支链烷基、氨基、C_1-10烷氧基；

R₂和R₃独立地选自氢、卤素原子、氨基、C_1-10烷基氨基、二C_1-10烷基氨基、氰基、硝基、羟基、C_1-10烷氧基、卤代C_1-10烷氧基；

R₄选自氢、卤素原子、氨基、C_1-10烷基氨基、二C_1-10烷基氨基、氰基或任选被取代的C_1-10烷基、C_3-10环烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基，取代基选自卤素原子、氨基、羟基；

R₅选自氢、卤素原子、硝基、氰基、羟基、C_1-10烷氧基、亚甲二氧基、卤代C_1-10烷氧基、氨基或任选被取代的C_1-10烷基、C_3-10环烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基，取代基选自卤素原子、氨基、羟基；

R₆选自氢或任选被取代的C_1-10烷基、C_3-10环烷基、苯基、苯基-C_1-10烷基、杂环芳基、杂环芳基-C_1-10烷基、4-8元单环杂环、4-8元单环杂环-C_1-10烷基，取代基选自卤素原子、氨基、C_1-4烷基；

m＝0、1、2或3；

n＝0、1、2或3；

Q选自吡啶基；

Z选自苯基、杂环芳基或4-8元单环杂环；

L选自-NR₇CO-、-CONR₈-、NR₉SO₂-、-SO₂NR₁₀-、-NR₁₁COO-、-NR₁₂CONR₁₃-、-OCONR₁₄-；

其中R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃和R₁₄选自氢、任选被取代的C_1-10烷基、C_3-10环烷基，取代基选自卤素原子、氨基、羟基；

其中，杂环芳基表示稳定的单环或双环，其中每个环碳原子不大于7个并至少一个环为芳香环且含有1-4个选自O、N、S的杂原子。

2.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物中R₁选自任选被取代的吡啶基，取代基选自卤素原子、C_1-4直链或支链烷基。

3.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物中R₂和R₃彼此独立地选自氢、卤素原子、氨基、C_1-10烷基氨基、氰基或硝基。

4.根据权利要求3所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物中R₂和R₃彼此独立地选自氢或卤素原子，其中卤素原子选自氟、氯、溴或碘原子。

5.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物中R₄选自任选被取代的C_1-10烷基、C_2-10烯基或C_2-10炔基，取代基选自卤素原子或氨基。

6.根据权利要求5所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物中R₄选自任选被取代的C_1-10烷基，取代基选自卤素原子或氨基。

7.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物中R₅选自氢、卤素原子、硝基、任选被取代的C_1-10烷基、C_3-10环烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基，取代基选自卤素原子或羟基。

8.根据权利要求7所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物中R₅选自氢、卤素原子或任选被取代的C_1-10烷基、C_3-10环烷基，取代基选自卤素原子或羟基。

9.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物中R₆选自任选被取代的杂环芳基、杂环芳基-C_1-10烷基、4-8元单环杂环和4-8元单环杂环-C_1-10烷基，取代基选自卤素原子或C_1-4烷基；其中，杂环芳基表示稳定的单环或双环，其中每个环碳原子不大于7个并至少一个环为芳香环且含有1-4个选自O、N、S的杂原子。

10.根据权利要求9所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物中R₆选自任选被取代的杂环芳基、4-8元单环杂环-C_1-10烷基，取代基为C_1-4烷基；其中，杂环芳基表示稳定的单环或双环，其中每个环碳原子不大于7个并至少一个环为芳香环且含有1-4个选自O、N、S的杂原子。

11.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物中m和n独立地选自0、1、2。

12.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物中L选自-NR₇CO-、-CONR₈-、-NR₉SO₂-、-SO₂NR₁₀-、-NR₁₁COO-，其中R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₁为氢。

13.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物中L为-NR₇CO-或-CONR₈-，其中R₇、R₈为氢。

14.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述化合物中：

R₁选自任选被取代的苯基、吡啶基，取代基选自卤素原子、C_1-4直链或支链烷基、氨基、C_1-10烷氧基；

R₄选自氢、卤素原子、氨基、C_1-10烷基氨基、二C_1-10烷基氨基、氰基或任选被取代的C_1-10烷基，取代基选自卤素原子、氨基、羟基；

R₅选自氢、卤素原子、硝基、氰基、羟基、C_1-10烷氧基、氨基或任选被取代的C_1-10烷基、C_3-10环烷基，取代基选自卤素原子、氨基、羟基；

R₆选自任选被取代的杂环芳基、杂环芳基-C_1-10烷基、4-8元单环杂环、4-8元单环杂环-C_1-10烷基，取代基选自卤素原子、氨基、C_1-4烷基；

m＝0或1；

n＝0或1；

Q选自吡啶基；

Z选自苯基；

L选自-NR₇CO-、-CONR₈-；

其中R₇、R₈选自氢、任选被取代的C_1-4烷基、C_3-10环烷基，取代基选自卤素原子、氨基、羟基；

15.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物和酸成盐，所用的酸选自有机酸或无机酸。

16.根据权利要求15所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于有机酸选自乙酸、三氯乙酸、丙酸、丁酸、天门冬氨酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、马来酸、乳酸，无机酸包括盐酸、硫酸、磷酸。

17.根据权利要求16所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于酸为盐酸或者甲磺酸。

18.根据权利要求15所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物和等物质量的酸成盐。

19.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物和碱成盐，所成的盐选自和碱金属、碱土金属或季铵所成的盐。

20.根据权利要求19所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的季铵为NY₄，其中Y指碳原子为1-4的烷基。

21.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其特征在于所述的化合物选自以下化合物：

22.一种制备权利要求1所述化合物及其药学上可接受的盐的方法，其特征包括如下步骤：

(A)在碱性条件下将通式为(II)的化合物和通式为(III)的化合物反应得通式为(IV)的化合物；

(B)将通式为(IV)的化合物和通式为(V)的化合物在缩合剂存在下缩合反应得通式为(I)的化合物；

其中R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、Q、L、Z、m、n如权利要求1中所定义；L’、M’指相互能发生缩合反应的基团，该基团选自氨基、羧酸基、酰卤基，或指经常规方法能转化成氨基、羧酸基或酰卤基的有机基团；R₁₅指易离去基团，其选自卤素原子或甲磺酰基、乙磺酰基、对甲苯磺酰基。

23.根据权利要求22所述制备通式为(I)的化合物及其药学上可接受的盐的方法，其特征在于：所述的有机基团选自硝基或者酯基。

24.根据权利要求23所述制备通式为(I)的化合物及其药学上可接受的盐的方法，其特征在于：

(A)在制备化合物(IV)时，使用碱，所述的碱选自有机碱或无机碱，该有机碱选自正丁基锂、甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钾，该无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、氨基钠、钠氢；

(B)在制备化合物(I)时，当反应为羧酸基和氨基缩合时，缩合剂为N，N-二环己基碳二亚胺、N，N-二异丙基碳二亚胺、N，N-二乙基碳二亚胺、三苯基磷和偶氮二羧酸二乙酯组成的混合物或三苯基磷和偶氮二羧酸二异丙酯组成的混合物；当反应为酰卤基和氨基缩合时，缩合剂为无机碱或有机碱。

25.根据权利要求24所述制备通式为(I)的化合物及其药学上可接受的盐的方法，其特征在于：

(A)在制备化合物(IV)时，所述的无机碱为钠氢；

(B)在制备化合物(I)时，当反应为羧酸基和氨基缩合时，所述的缩合剂为N，N-二环己基碳二亚胺；当反应为酰卤基和氨基缩合时，所述的缩合剂为吡啶或三乙胺。

26.根据权利要求24所述制备通式为(I)的化合物及其药学上可接受的盐的方法，其特征在于：在制备化合物(I)时，所述的无机碱选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸钙，有机碱选自三乙胺、吡啶、4-二甲胺基吡啶、三丙胺、三丁胺。

27.权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐在制备蛋白激酶抑制剂中的应用。

28.如权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐在制备治疗细胞增生性疾病药物中的应用。

29.一种含有药物有效剂量的如权利要求1所述的化合物及其盐和药学上可接受的载体的药物组合物。