CN1927245A - 一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(aids)病毒的药物中的应用 - Google Patents

一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(aids)病毒的药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用，从天然植物一枝黄花中提取的中药原液，经药效学研究证明其具有明显的抗艾滋病(AIDS)病毒活性，将具有该活性的植物提取液，根据不同要求加入赋形剂、辅剂或载体，配制成不同剂型的原料。可在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)的药物中应用。

Description

一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用
技术领域
本发明涉及一种纯植物中药制剂的新用途，具体地说，本发明涉及一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用。
背景技术
艾滋病从发现至今还不到20年，但它在全球所引起的广泛流行，已使3860多万人受到感染，2500万人失去了生命。目前，世界上每天有万余人新感染上艾滋病病毒。不但医学界在竭尽全力研究预防治疗艾滋病，各国政府，社会各阶层也都纷纷投入了对抗艾滋病的运动。但到目前为止，我们人类还没有找到一种治疗此病的有效药物。艾滋病专家们在第16届世界艾滋病大会上的共同看法是，艾滋病科研领域缺少能扭转乾坤的实质性突破，令人焦虑。因而研究治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的有效药物变得十分迫切。
发明内容
本发明为了治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒，有效杀灭和抑制艾滋病(AIDS)病毒，运用祖国中药学的基本原理，提出了一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用。
一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用，所述的药物是由包含下述重量百分比的原料制成：一枝黄花50～100％。
所述的药物是由所述单一原料制成：将所述单一原料一枝黄花与水按重量比为1∶50～100的比例放入浸提器中沸煮10～30分钟，按常规方法过滤纯化得到所述的中药原液。
所述的中药原液经过常规纯化制成口服液、或冲剂。
所述的药物是由下述重量百分比的原料制成：一枝黄花50～90％，甘草10～50％。
所述的药物是由下述重量百分比的原料制成：一枝黄花50～90％，金银花5～25％，板蓝根5～25％。
一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用，所述的药物是由含有一枝黄花的原料经超微粉碎制成冲剂、胶囊或中药饮片，一枝黄花的重量百分比含量为50～100％。
所述的药物是由下述重量百分比的原料制成：一枝黄花50～90％，甘草10～50％。
所述的药物是由下述重量百分比的原料制成：一枝黄花50～90％，金银花25％，板蓝根25％。
一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用，是由含有一枝黄花的原料经超临界CO2流体萃取技术进行提取分离纯化制成针剂、冲剂、喷剂、胶囊或滴丸，一枝黄花的重量百分比含量为50～100％。
所述的药物是由下述重量百分比的原料制成：一枝黄花50～90％，甘草10～50％。
所述的药物是由下述重量百分比的原料制成：一枝黄花50～90％，金银花5～25％，板蓝根5～25％。
所述的原料一枝黄花选用全草一枝黄花。
常规的纯化方法大致为：
(1)浸提液纯化技术常用的设备：是沉降罐或离心机及超滤器、超滤膜等。
(2)工艺过程：沉降分离工艺是根据固体微粒本身重力在液体介质中自然下沉使之与液体分离的原理，将水提液置沉降罐内静置一定时间，用虹吸法吸取上层澄清液，必要时还可采用降温和加沉降剂—电解质(如明矾)的方法以达到高效、优质的目的。
现有的超微粉碎破壁技术：
是由上海交大昂立天然药物工程技术有限公司开发制造的“气流粉碎机”纳米级粉碎、破壁—气合成设备完成。其原理：当原料进入气流粉碎机粉碎室后，在粉碎室内有数个粉碎喷咀，喷咀超音速气流使粉碎物料受到气流高速冲击以及粉料互相碰撞，由于气流速度快、撞击力大粉碎效果达到0.5～10微米粒子(500纳米～10000纳米)同时达到物理破壁的目的，使人体能够完全吸收有效物质。
超临界CO2流体萃取新技术：
是由沈阳东宇集团开发制造的“1000L自动化大型超临界机组”萃取能力强，提取率高、质量可控制。其原理：CO2的临界温度和临界压力分别为31.05℃和7.38MPa，当处于这个临界点以上时，此时的CO2同时具有气体和液体双重特性。它既近似于气体，粘度与气体相近；又近似于液体，密度与液体相近，但其扩散系数却比液体大得多。是一个优良的溶剂，能通过分子间的相互作用和扩散作用将许多物质溶解。同时，在稍高于临界点的区域内，压力稍有变化，即引起其密度的很大变化，从而引起溶解度的较大变化。因此，超临界CO2可以从基体中将物质溶解出来，形成超临界CO2负载相，然后降低载气的压力或升高温度，超临界CO2的溶解度降低，这些物质就沉淀出来(解析)与CO2分离，从而达到提取分离的目的。
本发明的药品的使用方法和有效量为：
所述的中药原液，饮用剂量为，成人每日二～四次，每次100～300ml。所述的口服液，成人每日二～四次，每次10～20ml。
所述的冲剂、胶囊或饮片，成人每日三～四次，每次2～6克。
所述的针剂，成人每日二次，每次5～10ml。
所述的滴丸，成人每日三次，每次8丸。
所述的喷剂，喷于口腔，每日数次。
《中药大辞典》(上册)(江苏新医学院编)的第8-9页记载：所述的一枝黄花为菊科植物，一般利用其全草或带根全草。性味辛苦、凉。全草一枝黄花含酚性成分、鞣质、挥发油、皂甙、黄酮类等。功用主治疏风清热，消肿解毒，感冒头痛，咽喉肿痛，黄疸，百日咳，小儿惊风，跌打损伤，痈肿发背，鹅掌风。对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌等均有明显的杀灭和抑制作用。
一枝黄花药效疏风清热，消炎解毒；药理入肝、胆经；药性凉。
甘草泻火解毒、润肺止咳；药理通行十二经络；药性平和、调和诸药。
金银花药效清热解毒，消炎止痛；药理入肺、胃、大肠经；药性寒。
板蓝根药效凉血清火，消炎解毒；药理入心、肺经；药性寒。
一枝黄花和甘草配伍，能调和一枝黄花药性，增强了药物的适应性。
一枝黄花和金银花、板蓝根配伍，能提高主治功效，增加药物的广普性。
经本发明人多年研究及广州中医药大学热带医学研究所艾滋病研究中心实验室验证所述的中药原液具有明显的抗艾滋病病毒作用。
本发明中药是按双盲的要求将植物一枝黄花加水1∶120比例再按煎煮提取浓度时间，制作成HH2A(煎煮10分钟)和HH2B(煎煮30分钟)两份微量浓度的标本送交广州中医药大学热带医学研究所艾滋病研究中心做艾滋病毒株SIV病毒的药效学研究。
抗艾滋病毒株SIV体外试验报告如下：
送检日期；2006年03月24日
报告日期：2006年05月25日
送检单位：浙江省杭州市采荷东区17-3-1-601
送检标本：药液HH2A、HH2B。
送检目的：用SIVmac-CEM×174***检测送检药液样品抗SIVmac试管的活性。
一、材料
1、细胞系：CEM×174来源于美国Aarond Diamond艾滋病研究中心，北京医科院实验动物所转赠。
2、毒株：SIVmac来源于美国Aarond Diamond艾滋病研究中心，北京医科院实验动物所转赠。
3、细胞培养液：含10％小牛血清RPMI1640培养液。
4、待测样品：药液HH2A、HH2B。
5、阳性对照药：AZT由CALBIOCHEM出品，专供试验用。
6、抗猴IgG荧光：E.Y.出品。
7、抗SIV猴阳性血清：SIV感染猴恢复期血清。
8、其他：96孔细胞培养板，24孔培养板。
二、实验方法
1、待测样品对CEM×174细胞系的毒性实验：
(1)待测样品的稀释：以待测样品原浓度为基础，实验前用10％小牛血清RPMI1640培养液将药物稀释10倍。
(2)对CEM×174细胞毒性的测定，药物以为10倍稀释液作系列2倍稀释，即1∶10，1∶20，1∶40，1∶80，1∶160，1∶320，1∶640，1∶1280。稀释好的各待测样品加入96孔细胞培养板，100ul/孔。加3.0×105/ml的CEM×174细胞，100ul/孔。置37℃，5％co2饱和湿度培养箱培养，4天观察结果。
(3)毒性试验结果判定。见表1
毒性判定依据：以细胞死亡和细胞生长情况为依据判定，表内“++++”、“+++”、“++”、“+”和“-”分别代表：
“++++”：种入的细胞全部死亡；
“+++”：种入的细胞大部分死亡，少数细胞有暂时性***：
“++”：增殖的细胞少于细胞对照孔约50％，死亡细胞较多；
“+”：增殖的细胞少于细胞对照孔约25％；
“-”：细胞生长良好，与细胞对照孔比较无明显差异。
                         表1 HH2A、HH2B毒性试验结果
  1∶10   1∶20   1∶40   1∶80   1∶160   1∶320   1∶640   1∶1280   1∶5120   1∶10240
  HH2A++   +   -   -   -   -   -   -   -   -
  HH2B+   -   -   -   -   -   -   -   -   -
  细胞对照   -   -   -   -   -   -   -   -   -
2、正式试验：用24孔板进行，每项均用复孔。试验重复2次。
(1)药物以无毒浓度系列稀释，病毒按试验要求稀释，细胞配制成3×105/ml单细胞悬液，各孔按表2所列顺序加入各试剂(药物、病毒、细胞、培养液)，另设AZT阳性药及SIV对照孔。置37℃，5％CO2，饱和湿度培养箱，3天换一次原稀释度药液，6-7天待SIV对照孔CPE出现+++～++++时测定结果。
(2)试验板先观察病变(C PE)，培养上清作2倍系列稀释来滴定病毒滴度，计算病毒产量下降数，余下细胞用PBS洗两遍，涂片，用间接免疫荧光法计算荧光阳性细胞数，即病毒抗原阳性细胞数。
            表2正式试验各孔加样情况
  药物孔   AZT阳性对照孔   SIV对照孔
  待测药物   0.8ml   -   -
  AZT(2μM)   -   0.8ml   -
  SIV(10TCID50)   0.4ml   0.4ml   0.4ml
  CEM×174(3×105)   0.4ml   0.4ml   0.4ml
  培养液   -   -   0.8ml
(3)结果判定指标：
Figure A20061012715000061
2)病毒产量下降以log10计算，试验孔与病毒对照孔相比较。如试验孔病毒滴度下降1个稀释度，即病毒产量下降0.3log10，如病毒滴度下降2个稀释毒，即病毒产量下降0.6log10，余以类推。例如：试验孔病毒滴度为1∶320，病毒对照孔为1∶2560，则判定试验孔病毒产量下降0.9log10。
3)细胞病变(CPE)，融合细胞，每视野≤25％，为+；每视野≤50％，为++；每视野≤75％，为+++；每视野＞75％，为++++。
4)结果判定
以荧光阳性细胞抑制率，病毒产量下降互相参考判定，细胞病变程度仅作参考。无抑制：荧光阳性细胞抑制率＜30％，病毒产量下降＜0.6log10
轻度抑制：荧光阳性细胞抑制率≥30％，病毒产量下降≥0.6log10；
中度抑制：荧光阳性细胞抑制率≥50％，病毒产量下降≥1.2log10；
高度抑制：荧光阳性细胞抑制率≥60％，病毒产量下降≥2.1log10；
三、试验结果：
见表3
                 表3.HH2A、HH2B体外抗SIV病毒试验结果
药物 稀释度   实际浓度(μg)   病毒抗原细胞抑制率％   病毒滴度下降(log10)   细胞病变 结果
HH2A   1∶401∶160   --   51.827.8   0.60.6   ++、+++++++   轻度抑制无抑制
HH2B   1∶101∶40   --   49.917.4   1.210.6   +++++++   中度抑制无抑制
  AZT   2μM   89.3   2.71   +   高度抑制
从表上结果看，检测样品HH2A在经过40倍稀释后有轻度的体外抑制SIV的作用，但往下再稀释4倍到1∶160时则失去了抗SIV的作用；HH2B在1∶10浓度是对CEM×174细胞有轻微的毒性作用，此浓度也表现出接近中度抗SIV的作用，但此药液不耐稀释，在1∶40浓度时则失去了抗SIV的作用。
研究结论：根据上述实验，只要将一枝黄花和水的配比从1∶120往下递减，或改变提取方式如采用目前最先进的超临界CO2流体萃取新技术，就能获得高浓度的提取液，取得符合实际理想的抗艾滋病(AIDS)病毒的效果。从而达到治疗和预防艾滋病(AIDS)的目的。
具体实施方式
下面用实施例进一步说明本发明。
实例1
将100克一枝黄花和5000ml水放入浸提器中沸煮10分钟，即可得到所述中药原液4800ml。按常规方法过滤浓缩配制成口服液或制成冲剂。
实例2
将100克一枝黄花和10000ml水放入浸提器中沸煮25分钟，得到所述的中药原液9500ml。按常规方法过滤浓缩配制成口服液或制成冲剂。
实例3
将90克一枝黄花和10克甘草和5000ml水放入浸提器中沸煮30分钟，过滤即可得到所述中药4400ml。
实例4
将50克一枝黄花和25克金银花25克板蓝根和5000ml水放入浸提器中沸煮30分钟，过滤即可得到所述中药4400ml。
实例5
将100克一枝黄花按常规方法经超微粉碎后制成本发明的冲剂、胶囊或饮。
实例6
将90克一枝黄花和10克甘草按常规方法经超微粉碎后制成本发明的冲剂、胶囊或饮片。
实例7
将50克一枝黄花、25克金银花、25克板蓝根按常规方法经超微粉碎后制成本发明的冲剂、胶囊或饮片。
实例8
将100克一枝黄花经按常规方法经超临界CO2流体萃取后制成本发明针剂、冲剂、喷剂、胶囊或滴丸。
实例9
将90克一枝黄花和10克甘草按常规方法经超临界CO2流体萃取后制成本发明针剂、冲剂、喷剂、胶囊或滴丸。
实例10
将50克一枝黄花、25克金银花、25克板蓝根按常规方法经超临界CO2流体萃取后制成本发明针剂、冲剂、喷剂、胶囊或滴丸。

Claims (10)

1.一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用，所述的药物是由包含下述重量百分比的原料制成：一枝黄花50～100％。
2.根据权利要求1所述的一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用，其特征在于所述的药物是由所述单一原料制成：将所述单一原料一枝黄花与水按重量比为1∶50-100的比例放入浸提器中沸煮10～30分钟，按常规方法过滤纯化得到所述的中药原液。
3.根据权利要求2所述的一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用，其特征在于所述的中药原液经过常规纯化浓缩制成口服液或冲剂。
4.根据权利要求1所述的一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用，所述的原料一枝黄花选用全草一枝黄花。
5.根据权利要求1所述的一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用，其特征在于所述的药物是由下述重量百分比的原料制成：一枝黄花50～90％，甘草10～50％。
6.根据权利要求1所述的一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用，其特征在于所述的药物是由下述重量百分比的原料制成；一枝黄花50～90％，金银花5～25％，板蓝根5～25％。
7.根据权利要求1所述的一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用，其特征在于所述的药物是由含有一枝黄花的原料经超微粉碎后制成冲剂、胶囊或中药饮片，一枝黄花的重量百分比含量为50～100％。
8.根据权利要求7所述的一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用，其特征在于所述的药物是由下述重量百分比的原料制成，一枝黄花50～90％，甘草10～50％。
9.根据权利要求7所述的一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用，其特征在于所述的药物是由下述重量百分比的原料制成：一枝黄花50～90％，金银花5～25％，板蓝根5～25％。。
10.一枝黄花在制备治疗和预防艾滋病(AIDS)病毒的药物中的应用，其特征在于所述的药物是由含有一枝黄花的原料经超临界CO2流体萃取后制成针剂、冲剂、喷剂、胶囊或滴丸，一枝黄花的重量百分比含量为50～100％。
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