CN1923844A

CN1923844A - 熊果酸的制备方法

Info

Publication number: CN1923844A
Application number: CN 200610048656
Authority: CN
Inventors: 罗晓东; 蔡详海
Original assignee: Kunming Institute of Botany of CAS
Current assignee: Shaanxi Xinfenghe Pharmaceutical Co., Ltd.; Kunming Institute of Botany of CAS
Priority date: 2006-09-05
Filing date: 2006-09-05
Publication date: 2007-03-07
Anticipated expiration: 2026-09-05
Also published as: CN100526327C

Abstract

提供一种熊果酸的制备方法，包括提取、分离、纯化步骤，选取糖胶树叶为原料，水煮至除去水溶性杂质，然后加入醇，热提取2－4次，合并提取液，回收溶剂得浸膏，再加入酸水溶解，充分搅拌，分离酸水溶液和沉淀，取沉淀部分，加入乙醇溶解，低温中沉淀结晶，重结晶多次，可得到不同纯度的熊果酸产品。用本发明方法生产熊果酸得率高、产品纯，且生产中不用水和乙醇以外的其它有机溶剂，工艺简单，成本低廉，适于工业生产。

Description

熊果酸的制备方法

技术领域：本发明涉及一种熊果酸的制备方法，尤其涉及一种由糖胶树叶(Alstonia scholaris)中分离制备熊果酸的方法。

背景技术：熊果酸(Ursolic acid)又名乌苏酸，系五环三萜类化合物，分子式C30H48O3，分子量456。是存在于天然植物中的一种三萜类化合物，具有抗肝炎、抗肿瘤、抗艾滋病病毒、抗菌消炎、镇静、抗糖尿病、抗溃疡、等多种生物学效应。近年来发现，熊果酸具有抗致癌、抗促癌、诱导F9畸胎瘤细胞分化和抗血管生成作用，极有可能成为低毒高效的新型抗癌和抗肝炎药物。在医药保健、日用化工、功能食品等方面具有重要用途，已成为国内外研究开发的热点。由于其广泛的药理活性，副作用少，毒性低，近年来国内外对其提取、含量测定、药理作用方面进行了大量的研究工作，熊果酸在植物界分布较广，据不完全统计，在自然界已有34科108种植物中分离得到熊果酸，熊果酸在植物中的分布很广，不同种类植物熊果酸含量差异很大，主要分布在女贞子、山楂、白花蛇、舌草、陆英、夏枯草和山茱萸、石楠叶、山香圆叶、锁阳等植物中，以游离形式或结合成糖苷存在。熊果酸在上述植物中的含量分别为0.29％、0.46％、0.38％、0.42％、0.35％和0.21％，0.41％，0.0188％，0.0247％，0.78％.0.78％；济远产狭基线香茶菜中全株、及茎中所含熊果酸分别为0.7112％、1.3634％、0.4296％，连翘壳、连翘叶、连翘心熊果酸含量分别为0.765％、1.302％、0.352％，冬凌草全草及叶中熊果酸含量分别为0.414％和0.573％。现有中国专利申请提供了从植物枇杷叶(见CN200310122716.0)、杜鹃叶(CN1569885公开)、柿叶(CN200410025770.8公开)、女贞叶(CN200310111479.8和CN01138325.9公开)、泡桐叶(CN03108037.5公开)、苦丁茶(CN1508149公开)中提取熊果酸的方法。这些方法选取的原料植物中熊果酸含量低，均低于1％，而且工艺复杂，成本高，产品得率低。

发明内容：针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的是提供一种由糖胶树叶中分离制备熊果酸的方法，该方法所选取的原料中的熊果酸含量高于现有技术中所有作为生产熊果酸的原料的植物药材，且该方法不用水和醇以外的其它溶剂，工艺简单，成本低廉，产品得率高，适于工业生产。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

一种熊果酸的制备方法，包括提取、分离、纯化步骤，选取糖胶树叶为原料，加入醇，热提取2-4次，合并提取液，回收溶剂得浸膏，然后加入酸水溶解，充分搅拌，分离酸水溶液和沉淀，取沉淀部分，加入乙醇溶解，低温中沉淀结晶即可。

上述制备方法中，提取步骤优选将粉碎的糖胶树叶用1∶3-10倍V/V工业乙醇回流提取4次，每次加热回流1-2小时。

分离步骤优选向浸膏中加入0.2-2％盐酸或硫酸或磷酸水溶液浸泡4次，充分搅拌，合并酸水层，分离酸水溶液和沉淀。

纯化步骤优选沉淀部分溶解后的溶液在0-5℃低温中放置，进行沉淀结晶，且可进行多次重结晶。

更优选的步骤是在将糖胶树叶原料进行醇提取前先将原料水煮至除去水溶性杂质。

本发明具体的方法是：提取选取糖胶树叶为原料，将粉碎的糖胶树叶先用水煮，除去水溶性杂质后，用1∶3-10倍V/V工业乙醇回流提取2-4次，每次加热回流1-2小时，合并提取液，回收溶剂得浸膏，分离是向浸膏中加入0.2-2％盐酸水溶液浸泡4次，充分搅拌，合并酸水层，分离酸水溶液和沉淀，纯化是在分离步骤得到的沉淀部分中加入乙醇溶解后的溶液在0-5℃低温中放置，进行多次重结晶。

本发明的技术方案是基于长期对不同种类植物熊果酸含量及生产方法的研究研制出来的。本发明所选用的生产熊果酸的原料糖胶树叶中熊果酸含量高于目前现有技术中所有用作为生产熊果酸的植物原料，糖胶树叶中熊果酸的含量在2.6-3.3％之间。糖胶树(Alstoniascholaris(L.)R.Br.)属于夹竹桃科(Apocynaceae)鸡骨常山属植物，别名灯台树。在云南西双版纳地区傣族作为止咳药而广泛应用。灯台叶曾收载于地方药志如《陆川本草》、《云南中草药选》中，并为《云南省药品标准》(1974)和《中华人民共和国药典》(1977年版一部)所收载。灯台叶“可清热化痰止咳，用于痰热阻肺所致的咳嗽，咯痰，及慢性支气管炎，百日咳见上述证候者”。

与现有技术相比，本发明的优益效果在于：

1.本发明所选取的生产熊果酸的原料为糖胶树叶，糖胶树叶中的熊果酸的含量高于目前所有作为熊果酸生产的植物原料，含量在2.6-3.3％之间。从糖胶树叶中提取分离的熊果酸的纯度在30-98％之间。

2.本发明提供的从糖胶树叶中提取熊果酸的方法中不用水和乙醇以外的其它有机溶剂，为工业生产熊果酸提供了一种工艺简单，成本低廉，熊果酸产品得率高的方法。

附图说明：

图1为纯度为32％的熊果酸HPLC图谱；

图2为纯度为53％的熊果酸HPLC图谱；

图3为纯度为98％的熊果酸HPLC图谱。

具体实施方式：

下面结合附图，用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限制本发明。

实施例1：

取糖胶树叶(Alstonia scholaris)为原料，将粉碎的糖胶树叶1kg用1∶3倍V/V工业乙醇回流提取3次，每次加热回流2小时，合并提取液，回收溶剂得到糖胶树叶浸膏230g。向浸膏中加入0.2％盐酸水溶液进行溶解，充分搅拌，分离酸水溶液和沉淀，共用0.2％盐酸水溶液浸泡4次，合并酸水层，沉淀为熊果酸粗品96g。得到的沉淀中加入乙醇2L进行溶解，溶液放置于0℃低温中进行沉淀结晶，一次结晶可得81g熊果酸，多次重结晶后得纯度达98％的熊果酸。

将得到的熊果酸成品进行检测所用仪器、条件及结果：

仪器：Waters Alliance 2695型高效液相色谱仪，2996型DAD射检测器。

色谱条件：色谱柱：Xtrra C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：CH₃CN-0.5％H₃PO₄水溶液(80∶20)；流速：1.0ml/min；柱温：35℃；

经过HPLC的含量检测，分析熊果酸的含量在30-98％的范围内。一次结晶得纯度为42％的熊果酸，多次重结晶后得纯度达98％的熊果酸。

实施例2：

取糖胶树叶(Alstonia scholaris)为原料，将粉碎的糖胶树叶1kg用1∶4倍(V/V)工业乙醇回流提取4次，每次加热回流1.5小时，合并提取液，回收溶剂得到糖胶树叶浸膏228g。向浸膏中加入2％硫酸水溶液2L进行溶解，充分搅拌，浸膏共用2％硫酸水溶液浸泡4次，分离酸水溶液和沉淀。沉淀为熊果酸粗品90g。沉淀中加入乙醇2L进行溶解，溶液放置于5℃进行沉淀结晶，经过HPLC的含量检测，一次结晶可得41％的熊果酸78g，多次重结晶后得纯度达98％的熊果酸。

实施例3：

取糖胶树叶(Alstonia scholaris)为原料，将粉碎的糖胶树叶1kg粉碎的糖胶树叶水煮3次，每次1小时，除去水溶性杂质后，用1∶10倍(V/V)工业乙醇回流提取3次，每次加热回流1小时，合并提取液，回收溶剂得到糖胶树叶浸膏220g。向浸膏中加入2％盐酸水溶液2L进行溶解，充分搅拌，浸膏共用2％盐酸水溶液浸泡4次，分离酸水溶液和沉淀。沉淀为熊果酸粗品88g。沉淀中加入乙醇2L进行溶解，溶液放置于5℃进行沉淀结晶，经过HPLC的含量检测，一次结晶可得52g熊果酸粗品，多次重结晶可得到纯度＞98％熊果酸。

实施例4：

取糖胶树叶(Alstonia scholaris)为原料，将粉碎的糖胶树叶1kg粉碎的糖胶树叶水煮2次，每次2小时，除去水溶性杂质后，用1∶5倍(V/V)甲醇回流提取4次，每次加热回流2小时，合并提取液，回收溶剂得到糖胶树叶浸膏232g。向浸膏中加入1.5％盐酸水溶液2L进行溶解，充分搅拌，浸膏共用1.5％盐酸水溶液浸泡4次，分离酸水溶液和沉淀。沉淀为熊果酸粗品78g。沉淀中加入乙醇2L进行溶解，溶液放置于3℃进行沉淀结晶，经过HPLC的含量检测，一次结晶可得48g熊果酸粗品，多次重结晶可得到纯度＞98％熊果酸。

实施例5：

取糖胶树叶(Alstonia scholaris)为原料，将粉碎的糖胶树叶1kg粉碎的糖胶树叶水煮3次，每次1小时，除去水溶性杂质后，用1∶8倍(V/V)甲醇回流提取4次，每次加热回流2小时，合并提取液，回收溶剂得到糖胶树叶浸膏236g。向浸膏中加入1％硫酸水溶液2L进行溶解，充分搅拌，浸膏共用1％硫酸水溶液浸泡4次，分离酸水溶液和沉淀。沉淀为熊果酸粗品82g，沉淀中加入乙醇2L进行溶解，溶液放置于5℃进行沉淀结晶，经过HPLC的含量检测，一次结晶可得46g熊果酸，多次重结晶可得到纯度＞98％熊果酸成品。

实施例6：

取糖胶树叶(Alstonia scholaris)为原料，将粉碎的糖胶树叶1kg水煮2次，每次2小时，用1∶5倍(V/V)甲醇回流提取4次，每次加热回流1.5小时，合并提取液，回收溶剂得到糖胶树叶浸膏238g。向浸膏中加入2％磷酸水溶液2L进行溶解，充分搅拌，浸膏共用2％磷酸水溶液浸泡4次，分离酸水溶液和沉淀。沉淀为熊果酸粗品80g，沉淀中加入乙醇2L进行溶解，溶液放置于0℃进行沉淀结晶，经过HPLC的含量检测，一次结晶可得70g熊果酸，多次重结晶可得到纯度＞98％熊果酸成品。

实施例7：

取糖胶树叶(Alstonia scholaris)为原料，将粉碎的糖胶树叶1kg水煮3次，每次1小时，再用1∶4倍(V/V)甲醇回流提取4次，每次加热回流2小时，合并提取液，回收溶剂得到糖胶树叶浸膏236g。向浸膏中加入2％硫酸水溶液2L进行溶解，充分搅拌，浸膏共用2％硫酸水溶液浸泡4次，分离酸水溶液和沉淀。沉淀为熊果酸粗品79g，沉淀中加入乙醇2L进行溶解，溶液放置于1℃进行沉淀结晶，经过HPLC的含量检测，一次结晶可得纯度达53％的熊果酸，多次重结晶可得到纯度＞98％熊果酸。

实施例8：

取糖胶树叶(Alstonia scholaris)为原料，将粉碎的糖胶树叶1kg水煮3次，每次1小时，用1∶9倍(V/V)工业乙醇回流提取2次，每次加热回流2小时，合并提取液，回收溶剂得到糖胶树叶浸膏230g。

向浸膏中加入2％盐酸水溶液2L进行溶解，充分搅拌，浸膏共用2％盐酸水溶液浸泡3次，分离酸水溶液和沉淀。沉淀为熊果酸粗品86g，沉淀中加入乙醇2L进行溶解，溶液放置于4℃进行沉淀结晶，经过HPLC的含量检测，一次结晶可得可得到50％的熊果酸，多次重结晶可得到纯度＞98％熊果酸。

Claims

1、一种熊果酸的制备方法，包括提取、分离、纯化步骤，其特征在于选取糖胶树叶为原料，加入醇，热提取2-4次，合并提取液，回收溶剂得浸膏，然后加入酸水溶解，充分搅拌，分离酸水溶液和沉淀，取沉淀部分，加入乙醇溶解，低温中沉淀结晶即可。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于将粉碎的糖胶树叶用1∶3-10倍V/V工业乙醇加热回流提取4次，每次1-2小时。

3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于向浸膏中加入0.2-2％盐酸、硫酸或磷酸水溶液浸泡4次进行溶解。

4、根据权利要求1所述的方法，其特征在于沉淀部分溶解后的溶液在0-5℃低温中放置，进行沉淀结晶。

5、根据权利要求1所述的方法，其特征在于沉淀结晶可进行多次重结晶。

6、根据权利要求1所述的方法，其特征在于在醇提取前可先将糖胶树叶水煮至除去水溶性杂质。

7、根据权利要求1或2或3或4或5或6所述的熊果酸的制备方法，其特征在于提取选取糖胶树叶为原料，粉碎，水煮，再用1∶3-10倍V/V工业乙醇加热回流提取2-4次，每次1-2小时，合并提取液，回收溶剂得浸膏，分离是向浸膏中加入0.2-2％盐酸、硫酸或磷酸水溶液浸泡4次，充分搅拌，合并酸水层，分离酸水溶液和沉淀，纯化是在分离步骤得到的沉淀部分中加入乙醇溶解后的溶液在0-5℃低温中放置，进行一次或多次重结晶。