CN110551168A - 一种从迷迭香中分离纯化熊果酸的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种从迷迭香中分离纯化熊果酸的方法，包括如下步骤：1)取干燥的迷迭香叶用乙醇‑水溶液回流提取，过滤，得滤液①；将滤液①减压浓缩后加水，放置冷却；过滤，得滤饼①，将滤饼①用酸‑乙醇‑水溶液搅拌；2)过滤，得滤饼②，滤饼②用碱‑乙醇‑水溶液回流提取；过滤，得滤液②，滤液②加入活性炭脱色；3)过滤，得滤液③，滤液③加酸‑水溶液至不再出现析出物为止，抽滤，得滤饼③，滤饼③再用乙醇‑水溶液进行反复结晶即得。本发明在分离纯化过程中利用溶解性的不同添加了酸洗步骤，此步骤可有效除去极性比熊果酸大且和熊果酸相似的杂质，对于后续的酸沉步骤起到了极大的纯化作用，且能减少重结晶的次数，得到高纯度的熊果酸。

Description

一种从迷迭香中分离纯化熊果酸的方法

技术领域

本发明属于植物有效成分分离提取技术领域，具体涉及一种从迷迭香中分离纯化熊果酸的方法。

背景技术

迷迭香一种香科植物，唇形科多年生常绿灌木，原产于欧洲地区和非洲北部地中海沿岸，其花和叶子中能提取天然的抗氧化剂和迷迭香精油。迷迭香中含有的抗氧化成分主要包括熊果酸、迷迭香酸、鼠尾草酸、鼠尾草酚等。

熊果酸(Ursolic Acid)一种以游离形式或与糖结合成苷的五环三萜类化合物，存在于天然植物中。研究表明熊果酸具有抗炎、抗菌、抗癌、镇静、降血糖、抗糖尿病等功能，又因其具有明显的抗氧化功能，故而被广泛地用于医药和化妆品中作原料。

公开号CN103102384A的中国专利中介绍了一种从迷迭香中提取高纯度熊果酸的方法：A、将迷迭香叶粉碎提取鼠尾草酸后的下脚料，加入乙醇进行提取，过滤，得滤液，在滤液中加入活性炭脱色，过滤，浓缩，搅拌中加入2～5倍体积的水析出沉淀，过滤，得熊果酸粗提物；B、向步骤A中的熊果酸粗提物中加入有机溶剂溶解，加二乙胺或三乙胺回流反应成盐，冷却室温，过滤，得胺盐；C、将步骤B中的胺盐加入水中使之溶解，加入异丙醚，用稀酸调节pH值至2～5，维持20～40℃一小时，过滤，滤饼干燥；D、步骤C中干燥完成后的滤饼加入甲醇溶解，加中性氧化铝脱色，过滤，滤液浓缩，降温至-10～20℃结晶，离心，洗涤，干燥即得熊果酸成品。该方法中用到了有强烈腐蚀性的二乙胺和易燃，有刺激性气味的异丙醚，在操作时不安全，且不适合放大生产。

公开号CN103467561A的中国专利中介绍了一种从迷迭香中提取熊果酸的方法：1)对迷迭香进行亚临界提取，提取剂为丙酮加乙醇；2)在提取液中加入迷迭香重量活性炭，回流脱色，过滤，滤液浓缩，静置，析晶，晶体用碱性的90％～95％乙醇溶液溶解成饱和溶液，过滤，滤液调节pH至3～4，静置，析晶，过滤，晶体用25％～35％乙醇溶液洗涤，干燥，得到成品。该方法所用到的亚临界设备成本高，且多用于油脂萃取。

公开号CN105949057A的中国专利中介绍了一种迷迭香提取物制备工艺：将迷迭香植株烘干后粉碎；取迷迭香粉末投入到提取罐中提取迷迭香精油；之后向提取罐中加入65％乙醇溶液继续提取，将提取的料液送入浓缩器进行浓缩，把醇回收完后进行离心分离，分离出来的液体转入树脂柱，用70％乙醇溶液洗脱，收集迷迭香料液后送入浓缩器进行浓缩后干燥得20-40％的迷迭香酸晶体；离心出来的渣用2BV的石油醚洗脱除去脂溶性杂质，萃取得50-95％的熊果酸干粉；再分离萃取，转入树脂柱，得20-60％的鼠尾草酸干粉。该方法利用柱层析分离熊果酸，耗时长且不环保。

发明内容

为了解决现有迷迭香中提取熊果酸工艺存在的缺陷，本发明的目的是在于提高了一种从迷迭香中分离纯化熊果酸的方法，该方法在分离纯化过程中利用溶解性的不同添加了酸洗步骤，此步骤可有效除去极性比熊果酸大且和熊果酸相似的杂质，对于后续的酸沉步骤起到了极大的纯化作用，且能减少重结晶的次数，通过各步骤的协同作用得到高纯度的熊果酸。

为了达到以上目的，本发明采用以下技术方案：

一种从迷迭香中分离纯化熊果酸的方法，包括如下步骤：

1)取干燥的迷迭香叶用乙醇-水溶液回流提取，过滤，得滤液①；将滤液①减压浓缩后加水，放置冷却；过滤，得滤饼①，将滤饼①用酸-乙醇-水溶液搅拌；

2)过滤，得滤饼②，滤饼②用碱-乙醇-水溶液回流提取；过滤，得滤液②，滤液②加入活性炭脱色；

3)过滤，得滤液③，滤液③加酸-水溶液至不再出现析出物为止，抽滤，得滤饼③，滤饼③再用乙醇-水溶液进行重结晶即得。

本发明在分离纯化过程中利用溶解性的不同添加了酸洗步骤，可有效除去极性比熊果酸大且和熊果酸相似的杂质，同时由于熊果酸不溶于水，通过碱溶酸沉工序，在热碱醇溶液中易形成相对应的盐，然后在酸性环境下又被还原成熊果酸而达到分离纯化的目的，得到了高纯度的熊果酸。

优选的，步骤1)中，乙醇-水溶液中乙醇体积分数为70-90％，乙醇-水溶液与迷迭香叶的体积质量比为5-10mL/g，回流提取次数为1-3次，每次提取时间为0.5-2h。

优选的，步骤1)中，减压浓缩至滤液①体积的1/15-1/5，加入的水的体积为所述滤液①体积的2/15-1/3。

优选的，步骤1)中，所述的酸-乙醇-水溶液中的酸为乙酸、磷酸、柠檬酸、盐酸中的一种，酸-乙醇-水溶液中酸体积分数为2-5％，乙醇体积分数为40-80％，酸-乙醇-水溶液与滤饼①的体积质量比为5-12mL/g。

优选的，步骤2)中，所述的碱-乙醇-水溶液中的碱为氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠中的一种，碱-乙醇-水溶液中碱体积分数为2-5％，乙醇体积分数为70-90％，碱-乙醇-水溶液与滤饼②的体积质量比为4-10mL/g，提取时间为0.5-1.5h；所述的活性炭与滤液②的质量体积比为0.002-0.005g/mL，脱色时间为10-40min。

优选的，步骤3)中，所述的酸-水溶液中的酸为乙酸、磷酸、柠檬酸、盐酸中的一种为，酸-水溶液中酸体积分数为2％-4％。

优选的，步骤3)中，所述的结晶条件为：将所述滤饼③用其质量20-30倍的90-95％乙醇-水溶液加热至沸腾后趁热过滤，待滤液中出现析出物后，将滤液放置在0-5℃条件下结晶2-4h，过滤，再将析出物重结晶。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

1、本发明在分离纯化过程中利用溶解性的不同添加了酸洗步骤，此步骤可有效除去极性比熊果酸大且和熊果酸相似的杂质，对于后续的酸沉步骤起到了极大的纯化作用，且能减少重结晶的次数，得到高纯度的熊果酸。

2、本发明在分离纯化过程中利用熊果酸不溶于水的特性，通过碱溶酸沉工艺，在热碱醇溶液中易形成相对应的盐，在酸性环境下又被还原成熊果酸而析出而达到分离纯化的目的。

3、本发明除了用乙醇不用其他的有机溶剂，方法简便安全，成本低，耗时短，适合应用于工业化生产。

附图说明

图1为本发明实施例1分离纯化得到的熊果酸的HPLC图；

图2为本发明对比例1分离纯化得到的熊果酸的HPLC图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。值得说明，这些实施例仅用于说明本发明，而不用于限定本发明的保护范围。在实际应用中技术人员根据本发明做出的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

实验例1

一种从迷迭香中分离纯化熊果酸的方法，其步骤包括：

1)取干燥的迷迭香叶200g用1000ml 85％乙醇-水溶液加热回流提取2次，每次提取1.5h，过滤，得1900ml滤液①；将滤液①减压浓缩至150ml后加600ml水，放置冷却；过滤，得60g滤饼①，将滤饼①用300ml 3％乙酸-50％乙醇-水溶液搅拌1h；

2)过滤，得50g滤饼②，滤饼②用400ml 3％碳酸氢钠-80％乙醇水溶液回流提取1.5h；过滤，得400ml滤液②，滤液②加1.2g活性炭脱色30min；

3)过滤，得400ml滤液③，滤液③加3％磷酸-水溶液至不再出现析出物为止，抽滤，得滤饼③，滤饼③再用乙醇-水溶液进行结晶处理，结晶条件为：将滤饼③用其质量30倍的90％乙醇-水溶液加热至沸腾后趁热过滤，待滤液中出现析出物后，将滤液放置在0-5℃条件下结晶4h，过滤，再将析出物进行上述的结晶工艺1次，得到含量为90.3％的熊果酸。

实验例2

一种从迷迭香中制备熊果酸的方法，其步骤包括：

1)取干燥的迷迭香叶200g用1200ml 90％乙醇-水溶液加热回流提取2次，每次提取1h，过滤，得2200ml滤液①；将滤液①减压浓缩至140ml后加420ml水，放置冷却；过滤，得68g滤饼①，将滤饼①用800ml 2％柠檬酸-80％乙醇-水溶液搅拌50min；

2)过滤，得60g滤饼②，滤饼②用540ml5％碳酸钠-90％乙醇-水溶液回流提取50min；过滤，得540ml滤液②，滤液②加1g活性炭脱色40min；

3)过滤，得540ml滤液③，滤液③加3％乙酸-水溶液至不再出现析出物为止，抽滤，得滤饼③，滤饼③再用乙醇-水溶液进行结晶处理，结晶条件为：将滤饼③用其质量28倍的92％乙醇-水溶液加热至沸腾后趁热过滤，待滤液中出现析出物后，将滤液放置在0-5℃条件下结晶4h，过滤，再将析出物进行上述的结晶工艺1次，得到含量为92.6％的熊果酸。

实验例3

一种从迷迭香中制备熊果酸的方法，其步骤包括：

1)取干燥的迷迭香叶200g用1600ml 80％乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1h，过滤，得4600ml滤液①；将滤液①减压浓缩至320ml后加760ml水，放置冷却；过滤，得50g滤饼①，将滤饼①用500ml 2％乙酸-60％乙醇-水溶液搅拌1h；

2)过滤，得60g滤饼②，滤饼②用600ml 2％氢氧化钠-90％乙醇-水溶液回流提取1h；过滤，得600ml滤液②，滤液②加3g活性炭脱色30min；

3)过滤，得600ml滤液③，滤液③加3％盐酸-水溶液至不再出现析出物为止，抽滤，得滤饼③，滤饼③再用乙醇水溶液进行结晶处理，结晶条件为：将滤饼③用其质量30倍的90％乙醇-水溶液加热至沸腾后趁热过滤，待滤液中出现析出物后，将滤液放置在0-5℃条件下结晶4h，过滤，再将析出物进行上述的结晶工艺1次，得到含量为91.5％的熊果酸。

对比例1

一种从迷迭香中制备熊果酸的方法，其步骤包括：

1)取干燥的迷迭香叶200g用1600ml 80％乙醇水溶液加热回流提取3次，每次提取1h，过滤，得4600ml滤液①；将滤液①减压浓缩至320ml后加760ml水，放置冷却；过滤，得50g滤饼①；

2)滤饼①用600ml 2％氢氧化钠-90％乙醇-水溶液回流提取1h；过滤，得600ml滤液②，滤液②加3g活性炭脱色30min；

3)过滤，得600ml滤液③，滤液③加3％盐酸-水溶液至不再出现析出物为止，抽滤，得滤饼③，滤饼③再用乙醇水溶液进行结晶处理，结晶条件为：将滤饼③用其质量30倍的90％乙醇-水溶液加热至沸腾后趁热过滤，待滤液中出现析出物后，将滤液放置在0-5℃条件下结晶4h，过滤，再将析出物进行上述的结晶工艺1次，得到含量为70.5％的熊果酸。

Claims (7)

1.一种从迷迭香中分离纯化熊果酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)取干燥的迷迭香叶用乙醇-水溶液回流提取，过滤，得滤液①；将滤液①减压浓缩后加水，放置冷却；过滤，得滤饼①，将滤饼①用酸-乙醇-水溶液搅拌；

2)过滤，得滤饼②，滤饼②用碱-乙醇-水溶液回流提取；过滤，得滤液②，滤液②加入活性炭脱色；

3)过滤，得滤液③，滤液③加酸-水溶液至不再出现析出物为止，抽滤，得滤饼③，滤饼③再用乙醇-水溶液进行重结晶即得。

2.根据权利要求1所述的从迷迭香中分离纯化熊果酸的方法，其特征在于：步骤1)中，乙醇-水溶液中乙醇体积分数为70-90％，乙醇-水溶液与迷迭香叶的体积质量比为5-10mL/g，回流提取次数为1-3次，每次提取时间为0.5-2h。

3.根据权利要求1所述的从迷迭香中分离纯化熊果酸的方法，其特征在于：步骤1)中，减压浓缩至滤液①体积的1/15-1/5，加入的水的体积为所述滤液①体积的2/15-1/3。

4.根据权利要求1所述的从迷迭香中分离纯化熊果酸的方法，其特征在于：步骤1)中，所述的酸-乙醇-水溶液中的酸为乙酸、磷酸、柠檬酸、盐酸中的一种，酸-乙醇-水溶液中酸体积分数为2-5％，乙醇体积分数为40-80％，酸-乙醇-水溶液与滤饼①的体积质量比为5-12mL/g。

5.根据权利要求1所述的从迷迭香中分离纯化熊果酸的方法，其特征在于：步骤2)中，所述的碱-乙醇-水溶液中的碱为氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠中的一种，碱-乙醇-水溶液中碱体积分数为2-5％，乙醇体积分数为70-90％，碱-乙醇-水溶液与滤饼②的体积质量比为4-10mL/g，提取时间为0.5-1.5h；所述的活性炭与滤液②的质量体积比为0.002-0.005g/mL，脱色时间为10-40min。

6.根据权利要求1所述的从迷迭香中分离纯化熊果酸的方法，其特征在于：步骤3)中，所述的酸-水溶液中的酸为乙酸、磷酸、柠檬酸、盐酸中的一种为，酸-水溶液中酸体积分数为2％-4％。

7.根据权利要求1所述的从迷迭香中分离纯化熊果酸的方法，其特征在于：步骤3)中，所述的结晶条件为：将所述滤饼③用其质量20-30倍的90-95％乙醇-水溶液加热至沸腾后趁热过滤，待滤液中出现析出物后，将滤液放置在0-5℃条件下结晶2-4h，过滤，再将析出物重结晶。