CN1843424A - 桂枝茯苓泡腾片及制备方法和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种桂枝茯苓泡腾片及制备方法和质量控制方法，它是由桂枝240g、茯苓240g、牡丹皮240g、白芍240g、桃仁240g和适当辅料制备而成的；与现有技术相比，本发明泡腾片具有溶解快，生物利用度高，稳定性好的优点，而且携带和服用方便，尤其适用于儿童、老年人和不易吞服固体制剂的人群使用；本制剂服用安全，无毒副作用与不良反应，疗效显著，还能更好的提高患者依从性，方便患者用药。

Description

桂枝茯苓泡腾片及制备方法和质量控制方法

技术领域：本发明涉及一种桂枝茯苓泡腾片及制备方法和质量控制方法，属于中药的技术领域。

背景技术：市场上现有的桂枝茯苓制剂(丸、胶囊等)，用于治疗妇女慢性***、子宫肌瘤、***、慢性肾炎、***及***症等，效果较好，但尚未有泡腾片供应。而泡腾片具有其明显的剂型优势，在使用方法、人体吸收以及治疗效果等方面都优于普通剂型：一方面，利用泡腾剂中的酸、碱成分遇水后发生中和反应，产生大量的二氧化碳气泡起到崩解作用，使片剂中的成份及时分解，使主药与人体器官充分接触，提高药物疗效和作用时间；另一方面，产生的碳酸可以起到屏蔽药物苦味的效果，药片完全溶解后即成了一杯可口、略带苏打味的药液，使消费者在用药时不会产生厌药情绪，提高用药依从性。因此，将现有桂枝茯苓制剂改剂为泡腾片，能显著提高其生物利用度，更好的提高患者依从性，方便患者用药。另外，为全面考察和控制本发明制剂的质量，保证其临床疗效，需要制定合理而稳定的质量控制方法。

发明内容：

本发明的目的在于：提供一种桂枝茯苓泡腾片及制备方法和质量控制方法，本发明在现有技术的基础上，提供了一种溶解快、生物利用度高、稳定性好，且服用方便的新型制剂—泡腾片，还研究制定了科学合理的工艺以及质量控制方法，以有效地控制和提高产品质量。

本发明是这样构成的：它是由桂枝240g、茯苓240g、牡丹皮240g、白芍240g、桃仁240g和微晶纤维素272g、低取代羟丙基纤维素96g、微粉硅胶96g、交联聚乙烯吡咯烷酮125g、阿司帕坦10g、碳酸氢钠304g、枸橼酸243g、富马酸134g制备而成。

桂枝茯苓泡腾片的制备方法为：取茯苓192g，粉碎成细粉；牡丹皮用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液，分取挥发性成分，备用；药渣与桂枝、白芍、桃仁、及剩余的茯苓用90％乙醇提取二次，合并提取液，回收乙醇至无醇味，减压浓缩至25℃时相对密度1.10～1.20；药渣再加水煎煮二次，滤过，合并滤液，减压浓缩至25℃时相对密度1.10～1.20，与上述浓缩液合并，再与茯苓细粉混匀，干燥，粉碎，过80目筛，然后与微晶纤维素、低取代羟丙纤维素、微粉硅胶、交联聚乙烯吡咯烷酮、阿司帕坦、碳酸氢钠、枸橼酸、富马酸及牡丹皮挥发性成分混合均匀，压制成片，包装即得。

桂枝茯苓泡腾片的质量控制方法：所述质量控制方法主要包括性状、检查、鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别是对桂枝的气相色谱鉴别；含量测定为对制剂中丹皮酚的含量测定。

桂枝的鉴别方法是以桂皮醛对照品为对照的气相色谱法。

具体的鉴别方法为：

取本制剂10片，精密称定，研细，取1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液400ml，用三氯甲烷振摇提取4次，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷，至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，即得供试品溶液；取桂皮醛对照品适量，加三氯甲烷制成每1ml含5靏的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIE气相色谱法试验，分别吸取对照品溶液和供试品溶液适量，注入气相色谱仪，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

丹皮酚的含量测定方法是以丹皮酚对照品为对照的气相色谱法。

具体的含量测定方法为：

照中国药典2005版一部附录VIE气相色谱法测定：

色谱条件与***适用性试验  HP-1弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)；柱温：120℃；载气流速：每分钟1.5ml；理论板数按丹皮酚峰计算，应不低于10000；丹皮酚峰与内标物质峰的分离度应大于2；

校正因子测定  取正十五烷适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.3mg的溶液，作为内标溶液；取丹皮酚对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；精密量取对照品溶液及内标溶液各2ml，置5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl，注入气相色谱仪，计算校正因子；

测定法  取本制剂10片，精密称定，研细，取1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液400ml，用三氯甲烷振摇提取4次，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷，至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，精密量取2ml，置5ml量瓶中，加入内标溶液2ml，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl注入气相色谱仪，测定，即得；

本制剂每片含牡丹皮以丹皮酚C₉H₁₀O₃计，不得少于1.2mg。

本发明所述质量控制方法包括：

性状：药物为浅棕色至棕色片；气微香，味微甜；

鉴别：取本制剂10片，精密称定，研细，取1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液400ml，用三氯甲烷振摇提取4次，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷，至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，即得供试品溶液；取桂皮醛对照品适量，加三氯甲烷制成每1ml含5靏的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIE气相色谱法试验，分别吸取对照品溶液和供试品溶液适量，注入气相色谱仪，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

检查：应符合中国药典2005年版一部附录ID片剂项下有关的各项规定；

含量测定：照中国药典2005版一部附录VIE气相色谱法测定：

色谱条件与***适用性试验HP-1弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)；柱温：120℃；载气流速：每分钟1.5ml；理论板数按丹皮酚峰计算，应不低于10000；丹皮酚峰与内标物质峰的分离度应大于2；

校正因子测定  取正十五烷适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.3mg的溶液，作为内标溶液；取丹皮酚对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；精密量取对照品溶液及内标溶液各2ml，置5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl，注入气相色谱仪，计算校正因子；

测定法  取本制剂10片，精密称定，研细，取1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液400ml，用三氯甲烷振摇提取4次，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷，至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，精密量取2ml，置5ml量瓶中，加入内标溶液2ml，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl注入气相色谱仪，测定，即得；

本制剂每片含牡丹皮以丹皮酚C₉H₁₀O₃计，不得少于1.2mg。

本方中桂枝温通阳气，以行气滞；白芍和营理血，缓急止痛；牡丹皮、桃仁活血化瘀，而通瘀阻；茯苓渗湿利水，和中健脾。五味合用，共奏行气活血、化瘀散结之功，正对“痛经”、“癥瘕”之病机，用于治疗妇女慢性***、子宫肌瘤、***、慢性肾炎、***及***症等，效果较好。

与现有技术相比，本发明泡腾片具有溶解快，生物利用度高，稳定性好的优点，而且携带和服用方便，尤其适用于儿童、老年人和不易吞服固体制剂的人群使用；本制剂服用安全，无毒副作用与不良反应，疗效显著，还能更好的提高患者依从性，方便患者用药。此外，本发明质量控制方法精密度高，重现性好，测量结果准确，可有效保证该制剂的临床疗效。

本申请人进行了一系列实验来选择本发明制剂的制备工艺和质量控制方法，以保证其科学、合理、可行，并具有良好的疗效。

一、制备工艺研究

1.提取加醇量及加水量的确定

试验方法：取一个处方量的药材，分别加12倍、10倍、8倍、6倍量的90％乙醇及水提取，以出膏量(干膏)作评价指标，确定最佳提取加醇量及加水量，试验结果如下：

提取加醇量(倍)	出膏量(g)	提取加水量(倍)	出膏量(g)
				12	55	12	78
10	53	10	75
				8	46	8	62
6	41	6	57

试验果表明，采用加10倍量90％乙醇及10倍量水提取时较为适宜，其出膏量明显高于加8倍量及6倍量时的出膏量，与加12倍量提取时出膏量无明显差别，因此确定提取加乙醇量及加水量分别为10倍量。

2.制剂处方工艺筛选

组成		处方1	处方2	处方3	处方4
						桂枝茯苓干浸膏粉(g)		一个处方量	一个处方量	一个处方量	一个处方量
牡丹皮挥发性成分(g)		2	2	2	2
						微晶纤维素(g)		300	272	272	272
低取代羟丙纤维素(g)		96	125	96	76
						微粉硅胶(g)		96	96	96	116
碳酸氢纳(g)		320	304	304	304
						阿司帕坦(g)		10	10	10	10
交联聚乙烯吡咯烷酮(g)		125	96	125	125
						枸橼酸(g)		243	134	243	134
富马酸(g)		146	243	134	243
						质量评价	片面	片面粗糙	较均匀	色泽均匀	较均匀
硬度	较难压片	4-5kg	4-5kg	4-5kg
					崩解时间		大于5分钟	大于6分钟	3.5分钟以内	5分钟左右
口味	较差	较差	适宜	适宜

结果：最终确定处方3为桂枝茯苓泡腾片的处方，处方及制备工艺如下：

处方：干浸膏粉(一个处方药材所提)

微晶纤维素                    272g

交联聚乙烯吡咯烷酮            125g

低取代羟丙纤维素              96g

微粉硅胶                      96g

碳酸氢钠                      304g

枸橼酸                        243g

富马酸                        134g

阿司帕坦                      10g

共制成1000片，每片重1.60g。

制备工艺为：

处方中五味，取茯苓192g，粉碎成细粉；牡丹皮用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液，分取挥发性成分，备用；药渣与桂枝、白芍、桃仁及剩余的茯苓用90％乙醇提取二次，合并提取液，回收乙醇至无醇味，减压浓缩至适量；药渣再加水煎煮二次，滤过，合并滤液，减压浓缩至适量，与上述浓缩液合并，再与茯苓细粉混匀，干燥，粉碎，过80目筛，然后与处方量的微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、交联聚乙烯吡咯烷酮、阿司帕坦、碳酸氢钠、枸橼酸、富马酸及牡丹皮挥发性成分混合均匀，压制成1000片，包装即得。

3.采用上述工艺进行三批中试产品的试验结果：

批号	050501	050502	050503
				生药材投料总量(kg)	12.0	12.0	12.0
浸膏量(kg)	3.18	3.23	3.21
				出膏率(％)	26.5	26.9	26.75
茯苓生药细粉投料量(kg)	1.92	1.92	1.92
				碳酸氢钠(kg)	3.04	3.04	3.04
微晶纤维素(kg)	2.72	2.72	2.72
				低取代羟丙纤维素(kg)	0.96	0.96	0.96
交联聚乙烯吡咯烷酮(kg)	1.25	1.25	1.25
				阿司帕坦(kg)	0.1	0.1	0.1
微粉硅胶(kg)	0.96	0.96	0.96
				枸橼酸(kg)	2.43	2.43	2.43
富马酸(kg)	1.34	1.34	1.34

理论产量(片)	10000	10000	10000
				实际产量(片)	9105	9210	9195
成品率(％)	91.05	92.10	91.95

结论：本制剂三批中试产品试制结果表明，其工艺合理、稳定，成品收得率较高，所得成品经质量检验，结果表明均符合规定。

二、药效学研究

1、桂枝茯苓制剂对子宫内膜异位症(EM)模型大鼠血管生成因子(VEGF)和异位内膜微血管密度(MVD)的影响

SD大鼠建模，3周后将建模成功的大鼠随机分为不用药组(U)、桂枝茯苓制剂组(GFW)、丹那唑组(D)和联合用药组(S)，设假手术组(C)为对照，予相应处理4周后，观察各组异位子宫内膜体积和形态学的变化，计数腹腔液巨噬细胞，放射免疫法测定各组大鼠外周血、腹腔液及巨噬细胞培养液白细胞介素-8(III-8)、肿瘤坏死因子(TNF-a)，免疫组化法测定血管内皮生长因子(VEGF)在异位内膜中的表达，并通过CDM标记异位子宫内膜血管，测定其微血管密度(MVD)。结果：GFW组、D组和S组异位内膜呈现不同程度萎缩，腺体明显减少，腹腔液巨噬细胞计数减少，GFW组、D组及S组大鼠外周血、腹腔液及巨噬细胞培养液III-8、TNF-a降低，异位内膜VEGF表达减弱，MVD也明显减少，其中以S组最为明显。结论：桂枝茯苓制剂和丹那唑可以抑制EM模型大鼠异位内膜的血管生成，使异位内膜萎缩，当二者联合用药时，作用更强。

2、血液学研究

桂枝茯苓制剂有明显的抗凝血作用；日本学者织田真智子研究了该方对末梢循环的作用，提出对血凝及血小板***抑制强而对纤溶***作用较弱；吉川敏一的实验提出该方的抗IC作用为全方5味药共同产生的；其次樱川信男进一步指出：长期服用该方以促进微循环的作用是红细胞凝集改善和全血粘度降低的结果。

3、免疫***功能影响方面的研究

本方能促进巨噬细胞活性，对***反应性炎症有一定抑制作用。而国内学者谢氏等也对本方的抗炎作用做了有关研究，结果表明桂枝茯苓制剂对大鼠急性、亚急性、慢性炎症均有明显抑制作用，对肾上腺的刺激不大，其抗炎作用的主要途径不是通过垂体—肾上腺***的调节，而是对炎症过程的许多环节起直接对抗作用，即对体内炎性介质的释放，毛细血管通透性增加，渗出，水肿，以及肉芽增生等环节起直接对抗作用有关。

4、内分泌方面的研究

本方对垂体一肾上腺皮质有一定保护作用，妇科病临床取效与***样活性有关。

5、其他

本方具有镇静、镇痛和一定的抗肿瘤作用。

三、质量控制方法研究

(一)样品及对照品来源

样品：本公司自制，批号为：050501、050502、050503。

对照品来源：桂皮醛对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号110710-200212；丹皮酚对照品：由中国药品生物制品检定所提供，批号0708-9704。

(二)性状

本制剂为泡腾片剂，是中药浸膏粉(含生药粉)加适量辅料，混合压片而成，经多批样品试制，确定本制剂性状为：药物为浅棕色至棕色片；气微香，味微甜。

(三)鉴别

参考中国药典2005年版桂枝茯芩胶囊鉴别项下的内容，用薄层的方法对本方主药牡丹皮、白芍进行鉴别，用气相的方法对桂枝进行鉴别。

1、牡丹皮的薄层鉴别

(1)取本制剂7片，研细，置索氏提取器中，加***适量，加热回流提取2小时，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取牡丹皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照《中国药典》2005版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸(5∶6∶6∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液，在105℃加热约5分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(2)点样量的选择

经实验选择供试品溶液与对照品溶液各点样2μl、5μl、10μl，结果发现供试品溶液与对照品溶液点样5μl、10μl时斑点较好，较为清晰。故本标准对照品溶液与供试品溶液选用5μl作为点样量。

(3)专属性实验

取缺牡丹皮的阴性样品，同供试品法操作制成阴性供试品溶液，展开后在对照品处出现相应斑点，说明阴性样品对本实验有干扰。故此鉴别未列入本发明内容。

2、白芍的薄层鉴别

(1)提取溶剂的选择

a、取本制剂7片，研细，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流提取2小时，放冷，滤过，滤液回收甲醇至约2ml使溶解，作为供试品溶液。另取白芍对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照《中国药典》2005版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF₂₅₄薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(26∶14∶5)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茴香醛试液，在105℃加热约10分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，没有对应斑点。

b、取本制剂7片，研细，加***50ml，低温加热回流1小时，滤过，药渣加乙醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，用以水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次10ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次10ml，弃去水洗液，将正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照《中国药典》2005版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。

(2)点样量的选择

经实验选择供试品溶液点样10μl与对照品溶液点样5μl，供试品溶液与对照品溶液各点样5μl，结果发现供试品溶液点样10μl与对照品溶液点样5μl时斑点较好，较为清晰。故本标准供试品溶液点样10μl，对照品溶液点样5μl。

(3)专属性实验

取缺白芍的阴性样品，同供试品b法操作制成阴性供试品溶液，展开后在对照品处出现相应斑点，说明阴性样品对本实验有干扰。故此鉴别未列入本发明内容。

3、桂枝的气相鉴别

鉴别本制剂处方中，桂枝药材含有桂皮醛，中国药典2005年版桂枝茯苓胶囊鉴别项下有对该成分的气相色谱保留时间鉴别测定，故采用气相色谱法进行桂皮醛的鉴别。

对照品溶液的制备：精密称取桂皮醛对照品适量，加三氯甲烷制成每1ml中约含5μg的溶液，作为对照品溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本制剂10片，精密称定，研细，取1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液400ml，用三氯甲烷振摇提取4次(60ml，40ml，40ml，30ml)，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷，至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，即得。

专属性：照处方量制备不含桂枝的阴性制剂，照上述供试品溶液的制备方法操作，即得。吸取上述溶液2μl，注入色谱仪，记录色谱图。实验显示，阴性制剂在桂皮醛对照品相应位置无色谱峰出现。

检出限：逐级稀释桂皮醛对照品溶液，分别进样，测定，结果确定1μg/ml为其检出限(分流比1∶20)。

耐用性：改用柱温为130℃时，样品中桂皮醛峰没有被其它杂峰干扰。

三批样品测定：三批样品均在桂皮醛对照品溶液保留时间位置有色谱峰。

(四)检查

1、崩解时限

(1)选择依据

本制剂为泡腾片剂，根据中国药典2005年版一部附录XIIA项下关于泡腾片剂的相关描述进行崩解时限检测。

(2)检测方法

取本制剂1片，置盛有200ml 15～25℃水的250ml烧杯中，有许多气泡放出，当气泡停止逸出时，片剂应完全溶解或分散在水中，无聚集的颗粒剩留。取本制剂6片，同法测定，各片均应在5分钟内崩解完毕。

(3)检测结果

   表1  泡腾片崩解时限检查结果

批号	050501	050502	050503
				崩解时限	4分	4分	4分

2、砷盐按中国药典2005年版一部附录IXB砷盐检查法第一法进行检查，结果符合规定。

        表2  砷盐测定结果

批号	050501	050502	050503
				砷盐	＜5ppm	＜5ppm	＜5ppm

3、重金属按中国药典2005年版一部附录IXE重金属检查法第二法进行检查，结果符合规定。

       表3  重金属测定结果

批号	050501	050502	050503
				重金属	＜10ppm	＜10ppm	＜10ppm

4、片重差异

本制剂片重大于0.3g，按中国药典2005年版一部规定片重差异应在±5％以内，取本制剂三批样品20片检查，结果见下表4。

                 表4  片重差异检查结果

本制剂三批样品测定结果表明，片重差异均在规定范围之内。

5、微生物限度

照微生物限度检查法(中国药典2005年版一部附录XIII)检查，三批样品的检查结果见下表。

               表5  微生物限度检查结果

批号	050501	050502	050503
				细菌数(个/g)	符合规定	符合规定	符合规定
霉菌数(个/g)	符合规定	符合规定	符合规定
				大肠杆菌(个/g)	未检出	未检出	未检出
活螨(个/g)	未检出	未检出	未检出

(五)含量测定

照气相色谱法(中国药典2005版一部附录VIE)测定。

1、仪器与试药

仪器：HP6890气相色谱仪

对照品：丹皮酚：由中国药品生物制品检定所提供(批号0708-9704)，试剂均为分析纯。

2、参照中国药典2005年版一部桂枝茯苓胶囊中含量测定样品制备方法，采用水蒸气蒸馏提取丹皮酚，因试制样品剂型为片剂，与药典标准中的剂型不同，为保证本标准方法的耐用性，进行了水蒸气蒸馏液体积的考查，结果见表6。

          表6  蒸馏液体积考查

蒸馏液体积(ml)	样品中丹皮酚含量(mg/g)
		100	0.72
200	1.05
		300	1.22
400	1.24

结果显示采用水蒸气蒸馏方法对样品中丹皮酚提取时，当收集蒸馏液大于300ml，含量趋于稳定，根据试验结果，参考药典里的方法，同样确定水蒸气蒸馏液为400ml，作为收集蒸馏液的体积。

3、因本次试验采用毛细管色谱柱，而药典方法采用填充柱测定丹皮酚，故选用了相似极性的毛细管色谱柱，进行了内标物的选择和柱温的考查，试验时选用了正十四烷、正十五烷及正十六烷做为内标物，结果发现正十四烷和丹皮酚在HP-1(30m×0.53mm×0.32μm)毛细管柱上，只有柱温小于或等于110℃时才能较好分离，载气流速亦不能超过1.5ml/min；正十五烷和丹皮酚则在120℃～130℃之间，流速为2.0-2.5ml/min之间，均有良好的分离度；当采用正十六烷时，发现正十六烷在130℃条件下，出峰太晚，不适合做为丹皮酚的内标，试验中发现丹皮酚在该毛细管柱下，柱温在120℃下所显理论板数大于130℃下的理论板数。因此选用了正十五烷为内标物，柱温在120℃，载气流速为每分钟2.0ml，为本试验的色谱条件。

4、色谱条件及***适用性试验：HP-1弹性石英毛细管柱(30m×0.53mm×0.32μm)；柱温：120℃，载气流速：每分钟2.0ml；分流进样，分流比：20∶1。理论板数按丹皮酚峰计算，应不低于10000，丹皮酚峰与内标物质峰的分离度应大于2。

在此色谱条件下丹皮酚峰与内标物质峰的分离度符合要求。

5、内标溶液、对照品溶液及供试品溶液制备见后述丹皮酚含量测定方法。

6、线性关系考察：精密称取丹皮酚对照品10.60mg置25ml量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，分别精密量取该溶液0.5、1.0、2.0、2.5、3.0ml置5ml量瓶中，分别加内标溶液2.0ml，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀。分别取2μl注入气相色谱仪，以丹皮酚面积与内标峰面积的比值为纵坐标，丹皮酚浓度(mg/ml)为横坐标(见表7)，得回归方程：Y＝3.7308X+0.1976，r＝0.9994；丹皮酚浓度在0.0424mg/ml～0.2544mg/ml范围内有良好的线性关系。

                     表7  丹皮酚线性关系考察结果

编号	1	2	3	4	5
						丹皮酚浓度(mg/ml)	0.0424	0.0848	0.1696	0.212	0.2544
丹皮酚峰面积与内标峰面积比	0.3565	0.5194	0.8165	0.9906	1.1522

7、专属性试验：取缺牡丹皮阴性试验样品，按含量测定方法进样，结果在与丹皮酚对照品相同位置无色谱峰出现，表明阴性对照无干扰。

8、精密度：取同一份对照品溶液，按含量测定下的色谱条件，连续进样6次，测定内标与丹皮酚峰面积，计算丹皮酚峰面积之和与内标峰面积的比值，结果RSD为0.31％，见表8。

                                   表8  精密度试验结果

编号	1	2	3	4	5	6	平均值	RSD％
									丹皮酚峰面积与内标峰面积比	0.76879	0.76679	0.76673	0.76244	0.76767	0.77534	0.76648	0.31

9、稳定性：取同一份对照品溶液，按含量测定色谱条件，间隔一定时间进样，测定内标与丹皮酚峰面积，计算丹皮酚峰面积之和与内标峰面积的比值，结果显示供试品溶液在8小时内稳定，见表9。

                             表9  稳定性试验结果

时间(小时)	0	2	4	6	8	平均值	RSD(％)
								丹皮酚峰面积与内标峰面积比	0.7864	0.7812	0.7795	0.7831	0.7950	0.7851	0.78

10、重复性：取同一批号(批号：050501)样品6份，按含量测定方法测定并计算丹皮酚含量，结果丹皮酚平均含量为2.04mg/片，RSD为2.14％(n＝6)，见表10。

                     表10  重复性性试验结果

编号	1	2	3	4	5	6	平均值	RSD％
									丹皮酚含量(mg/片)	2.02	1.99	2.12	2.03	2.07	2.05	2.04	2.14

11、回收率：分别精密称取已知丹皮酚含量的样品(批号：050501)适量(共六份)，并分别精密加入丹皮酚对照品溶液2.5ml(0.4240mg/ml)，用水蒸气蒸馏，并按含量测定方法测定丹皮酚含量并计算，结果显示平均回收率为100.4％、RSD为1.41％(见表11)。

                             表11  回收率试验结果

样品里已知丹皮酚量(mg)	加入量(mg)	测得量(mg)	回收率(％)	平均回收率	RSD(％)
						0.8173	1.0600	1.8676	99.1％	100.4％	1.41
0.9740	1.0600	2.0499	101.5％
				0.8223	1.0600	1.8687	98.7％
1.1315	1.0600	2.1883	99.7％
				1.3780	1.0600	2.4690	102.0％
1.1545	1.0600	2.2305	101.5％

12、耐用性试验，因本方法改用了毛细管柱，故进行了必要的耐用性试验，在上面内标物的考查及柱温及载气流量流速的试验中，以正十五烷为内标物，柱温为120℃～130℃之间，流速在每分钟2.0～2.5ml之间丹皮酚与内标均分离良好，理论板数亦符合要求。

13、样品中丹皮酚含量测定：照气相色谱法(中国药典2005版一部附录VIE)测定。

色谱条件与***适用性试验  HP-1弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)；柱温：120℃，载气流速：每分钟1.5ml；理论板数按丹皮酚峰计算，应不低于10000。丹皮酚与内标物质峰的分离度应大于2。

校正因子测定  取正十五烷适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.3mg的溶液，作为内标溶液。取丹皮酚对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液，精密量取对照品溶液及内标溶液2ml，置5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl注入气相色谱仪，计算校正因子。

测定法取本制剂10片，精密称定，研细，取约1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液约400ml，用三氯甲烷振摇提取4次(60ml，40ml，40ml，30ml)，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷，至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，精密量取2ml，置5ml量瓶中，加入内标溶液2ml，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl注入气相色谱仪，测定，即得。

本制剂每片含牡丹皮以丹皮酚(C₉H₁₀O₃)计，不得少于1.2mg。

按上述方法测定三批批品，结果见表12。

     表12  样品测定结果

编号	批号	含量(mg/片)
			1	050501	2.04
2	050502	2.00
			3	050503	2.00
4	小试1	2.02
			5	小试2	1.95
6	小试3	2.00
			7	小试4	2.01

根据测定结果和本制剂处方，参考中国药典2005版一部桂枝茯苓胶囊中丹皮酚含量限度，暂将限度定为本制剂每片含牡丹皮以丹皮酚(C₉H₁₀O₃)计，不得少于1.2mg。

具体实施方式：

本发明的实施例1：桂枝240g、茯苓240g、牡丹皮240g、白芍240g、桃仁240g、微晶纤维素272g、低取代羟丙基纤维素96g、微粉硅胶96g、交联聚乙烯吡咯烷酮125g、阿司帕坦10g、碳酸氢钠304g、枸橼酸243g、富马酸134g

取茯苓192g，粉碎成细粉；牡丹皮用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液，分取挥发性成分，备用；药渣与桂枝、白芍、桃仁、及剩余的茯苓用90％乙醇提取二次，合并提取液，回收乙醇至无醇味，减压浓缩至相对密度1.17(25℃)；药渣再加水煎煮二次，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.17(25℃)，与上述浓缩液合并，再与茯苓细粉混匀，干燥，粉碎，过80目筛，然后与微晶纤维素、低取代羟丙纤维素、微粉硅胶、交联聚乙烯吡咯烷酮、阿司帕坦、碳酸氢钠、枸橼酸、富马酸及牡丹皮挥发性成分混合均匀，压制成1000片，包装即得。本产品溶于适量水后口服，一次3片，一日3次。

本发明的实施例2：所述质量控制方法包括以下内容：

性状：药物为浅棕色至棕色片；气微香，味微甜；

鉴别：取本制剂10片，精密称定，研细，取1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液400ml，用三氯甲烷振摇提取4次(60ml，40ml，40ml，30ml)，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷，至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，即得供试品溶液；取桂皮醛对照品适量，加三氯甲烷制成每1ml含5靏的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIE气相色谱法试验，分别吸取对照品溶液和供试品溶液适量，注入气相色谱仪，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

检查：应符合中国药典2005年版一部附录ID片剂项下有关的各项规定；

含量测定：照中国药典2005版一部附录VIE气相色谱法测定：

色谱条件与***适用性试验  HP-1弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)；柱温：120℃；载气流速：每分钟1.5ml；理论板数按丹皮酚峰计算，应不低于10000；丹皮酚峰与内标物质峰的分离度应大于2；

校正因子测定  取正十五烷适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.3mg的溶液，作为内标溶液；取丹皮酚对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；精密量取对照品溶液及内标溶液各2ml，置5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl，注入气相色谱仪，计算校正因子；

测定法  取本制剂10片，精密称定，研细，取1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液400ml，用三氯甲烷振摇提取4次(60ml，40ml，40ml，30ml)，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷，至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，精密量取2ml，置5ml量瓶中，加入内标溶液2ml，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl注入气相色谱仪，测定，即得；

本制剂每片含牡丹皮以丹皮酚C₉H₁₀O₃计，不得少于1.2mg。

本发明的实施例3：质量控制方法可包括以下内容：

性状：药物为浅棕色至棕色片；气微香，味微甜；

检查：应符合中国药典2005年版一部附录ID片剂项下有关的各项规定；

含量测定：照中国药典2005版一部附录VIE气相色谱法测定：

色谱条件与***适用性试验HP-1弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)；柱温：120℃；载气流速：每分钟1.5ml；理论板数按丹皮酚峰计算，应不低于10000；丹皮酚峰与内标物质峰的分离度应大于2；

校正因子测定取正十五烷适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.3mg的溶液，作为内标溶液；取丹皮酚对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；精密量取对照品溶液及内标溶液各2ml，置5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl，注入气相色谱仪，计算校正因子；

测定法取本制剂10片，精密称定，研细，取1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液400ml，用三氯甲烷振摇提取4次(60ml，40ml，40ml，30ml)，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，精密量取2ml，置5ml量瓶中，加入内标溶液2ml，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl注入气相色谱仪，测定，即得；

本制剂每片含牡丹皮以丹皮酚C₉H₁₀O₃计，不得少于1.2mg。

本发明的实施例4：质量控制方法可包括以下内容：

性状：药物为浅棕色至棕色片；气微香，味微甜；

鉴别：取本制剂10片，精密称定，研细，取1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液400ml，用三氯甲烷振摇提取4次(60ml，40ml，40ml，30ml)，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷，至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，即得供试品溶液；取桂皮醛对照品适量，加三氯甲烷制成每1ml含5靏的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIE气相色谱法试验，分别吸取对照品溶液和供试品溶液适量，注入气相色谱仪，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

检查：应符合中国药典2005年版一部附录ID片剂项下有关的各项规定。

本发明的实施例5：质量控制方法可包括以下内容：

性状：药物为浅棕色至棕色片；气微香，味微甜；

鉴别：取本制剂10片，精密称定，研细，取1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液400ml，用三氯甲烷振摇提取4次(60ml，40ml，40ml，30ml)，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷，至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，即得供试品溶液；取桂皮醛对照品适量，加三氯甲烷制成每1ml含5靏的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIE气相色谱法试验，分别吸取对照品溶液和供试品溶液适量，注入气相色谱仪，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

含量测定：照中国药典2005版一部附录VIE气相色谱法测定：

色谱条件与***适用性试验  HP-1弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)；柱温：120℃；载气流速：每分钟1.5ml；理论板数按丹皮酚峰计算，应不低于10000；丹皮酚峰与内标物质峰的分离度应大于2；

校正因子测定  取正十五烷适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.3mg的溶液，作为内标溶液；取丹皮酚对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；精密量取对照品溶液及内标溶液各2ml，置5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl，注入气相色谱仪，计算校正因子；

测定法取本制剂10片，精密称定，研细，取1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液400ml，用三氯甲烷振摇提取4次(60ml，40ml，40ml，30ml)，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷，至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，精密量取2ml，置5ml量瓶中，加入内标溶液2ml，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl注入气相色谱仪，测定，即得；

本制剂每片含牡丹皮以丹皮酚C₉H₁₀O₃计，不得少于1.2mg。

Claims (8)

1.一种桂枝茯苓泡腾片，其特征在于：它是由桂枝240g、茯苓240g、牡丹皮240g、白芍240g、桃仁240g和微晶纤维素272g、低取代羟丙基纤维素96g、微粉硅胶96g、交联聚乙烯吡咯烷酮125g、阿司帕坦10g、碳酸氢钠304g、枸橼酸243g、富马酸134g制备而成的。

2.如权利要求1所述的桂枝茯苓泡腾片的制备方法，其特征在于：取茯苓192g，粉碎成细粉；牡丹皮用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液，分取挥发性成分，备用；药渣与桂枝、白芍、桃仁、及剩余的茯苓用90％乙醇提取二次，合并提取液，回收乙醇至无醇味，减压浓缩至25℃时相对密度1.10～1.20；药渣再加水煎煮二次，滤过，合并滤液，减压浓缩至25℃时相对密度1.10～1.20，与上述浓缩液合并，再与茯苓细粉混匀，干燥，粉碎，过80目筛，然后与微晶纤维素、低取代羟丙纤维素、微粉硅胶、交联聚乙烯吡咯烷酮、阿司帕坦、碳酸氢钠、枸橼酸、富马酸及牡丹皮挥发性成分混合均匀，压制成片，包装即得。

3.如权利要求1或2所述桂枝茯苓泡腾片的质量控制方法，其特征在于：所述质量控制方法主要包括性状、检查、鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别是对桂枝的气相色谱鉴别；含量测定为对制剂中丹皮酚的含量测定。

4.按照权利要求3所述桂枝茯苓泡腾片的质量控制方法，其特征在于：桂枝的鉴别方法是以桂皮醛对照品为对照的气相色谱法。

5.按照权利要求3或4所述桂枝茯苓泡腾片的质量控制方法，其特征在于：具体的鉴别方法为：

取本制剂10片，精密称定，研细，取1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液400ml，用三氯甲烷振摇提取4次，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷，至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，即得供试品溶液；取桂皮醛对照品适量，加三氯甲烷制成每1ml含5μg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VIE气相色谱法试验，分别吸取对照品溶液和供试品溶液适量，注入气相色谱仪，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

6.按照权利要求3所述桂枝茯苓泡腾片的质量控制方法，其特征在于：丹皮酚的含量测定方法是以丹皮酚对照品为对照的气相色谱法。

7.按照权利要求3或6所述桂枝茯苓泡腾片的质量控制方法，其特征在于：具体的含量测定方法为：

照中国药典2005版一部附录VIE气相色谱法测定：

色谱条件与***适用性试验  30m×0.25mm×0.25μm的HP-1弹性石英毛细管柱；柱温：120℃；载气流速：每分钟1.5ml；理论板数按丹皮酚峰计算，应不低于10000；丹皮酚峰与内标物质峰的分离度应大于2；

校正因子测定  取正十五烷适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.3mg的溶液，作为内标溶液；取丹皮酚对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；精密量取对照品溶液及内标溶液各2ml，置5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl，注入气相色谱仪，计算校正因子；

测定法  取本制剂10片，精密称定，研细，取1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液400ml，用三氯甲烷振摇提取4次，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷，至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，精密量取2ml，置5ml量瓶中，加入内标溶液2ml，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl注入气相色谱仪，测定，即得；

本制剂每片含牡丹皮以丹皮酚C9H10O3计，不得少于1.2mg。

8.按照权利要求3所述桂枝茯苓泡腾片的质量控制方法，其特征在于：所述质量控制方法包括：

性状：药物为浅棕色至棕色片；气微香，味微甜；

鉴别：取本制剂10片，精密称定，研细，取1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液400ml，用三氯甲烷振摇提取4次，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷，至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，即得供试品溶液；取桂皮醛对照品适量，加三氯甲烷制成每1ml含5μg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI E气相色谱法试验，分别吸取对照品溶液和供试品溶液适量，注入气相色谱仪，供试品色谱中应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰；

检查：应符合中国药典2005年版一部附录ID片剂项下有关的各项规定；

含量测定：照中国药典2005版一部附录VI E气相色谱法测定：

色谱条件与***适用性试验  30m×0.25mm×0.25μm的HP-1弹性石英毛细管柱；柱温：120℃；载气流速：每分钟1.5ml；理论板数按丹皮酚峰计算，应不低于10000；丹皮酚峰与内标物质峰的分离度应大于2；

校正因子测定  取正十五烷适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.3mg的溶液，作为内标溶液；取丹皮酚对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；精密量取对照品溶液及内标溶液各2ml，置5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl，注入气相色谱仪，计算校正因子；

测定法取本制剂10片，精密称定，研细，取1.6g，精密称定，用水蒸气蒸馏，收集蒸馏液400ml，用三氯甲烷振摇提取4次，合并三氯甲烷液，加无水硫酸钠2.0g使脱水，滤过，取滤液，用三氯甲烷液10ml分次洗涤无水硫酸钠及容器，滤过，合并三氯甲烷液，在70℃水浴上回收三氯甲烷，至适量，转移至5ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，精密量取2ml，置5ml量瓶中，加入内标溶液2ml，加三氯甲烷至刻度，摇匀，吸取2μl注入气相色谱仪，测定，即得；

本制剂每片含牡丹皮以丹皮酚C9H10O3计，不得少于1.2mg。