CN1830462B - 丁公藤提取物、含有该提取物的药物组合物及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种丁公藤提取物，每克提取物中含有东莨菪内酯8.3mg～20.4mg。本发明还提供了含有丁公藤提取物的药物组合物。本发明还提供了该药物组合物的制备方法和用途。本发明药物采用丁公藤为原料提取制备眼用制剂，药理试验证明，与丁公藤中的单一成分丁公藤碱II相比，药效明显优于丁公藤碱II，对青光眼的治疗，效果显著，且毒性小，刺激性小，安全性高，质量稳定，可控性强，为临床提供了一种新的选择。

Description

丁公藤提取物、含有该提取物的药物组合物及制备方法

技术领域

本发明涉及一种丁公藤提取物，具体地说，是以药材丁公藤为原料制备的提取物。

背景技术

青光眼是一种多元性的视神经和视网膜病变，全世界大约有700万病人因青光眼而失明。眼压升高是青光眼发病过程中的主要危险因素。高眼压可造成视神经和视网膜神经节细胞的死亡，视功能损害。降低眼压是用于青光眼治疗的唯一措施，它可减轻青光眼对视野的损害。目前临床使用抗青光眼降眼压的药物有：***素类药、肾上腺素β受体阻断药、肾上腺素α2受体兴奋药、碳酸酐酶抑制药、缩瞳药、肾上腺素类药，此外，中草药提取物中亦有报道治疗青光眼的药物，比如：葛根素(puerarin)是葛根Pueraria lobata中提取的异黄酮类化合物，它是一种选择性的β受体阻断药，包公藤碱A，是包公藤Erycibe obtuse folia茎中的提取物，是一种tropane碱，它不仅仅是缩瞳还是强效的降眼压药，又是乙酰胆碱受体的***。细胞肌纤干扰剂，胞克拉素Cytochalasins、依他尼酸、肌纤分解素、蛋白激酶抑制剂、***类药等，均有治疗青光眼的报道，几乎涵盖了各种不同的药理治疗机制，每类药物都有其自身的特点，但也都有其不良反应。目前大多数的药物无法在各类型青光眼中收到同样满意疗效，因此，寻找有效和不良反应更少的新药是十分必要的。

丁公藤具有祛风除湿、消肿止痛之功，含有东莨菪内酯、东莨菪苷、咖啡酸、氯原酸、包公藤甲素等成分。临床用于治疗急慢性风湿性关节炎、类风湿关节炎、坐骨神经痛、腰肌劳损等症状疗效较好。目前已有报道包公藤甲素I(丁公藤碱II)是我国首先从旋花科丁公藤属植物丁公藤Erycibe obtusifolia中分离得到的具有莨菪烷母核的新缩瞳药，临床上可治疗青光眼。(王丽平，包公藤甲素及其类似物的缩瞳活性，中草药，1992，23(4)，205～208)但是包公藤甲素是一种生物碱，不良反应较大。也有含有原料丁公藤的眼用制剂“抗青膏”治疗青光眼的报道(柏超然，自制三种中药眼膏的组方应用介绍，浙江省中医院)。由于原料较多，除了丁公藤外，尚有槟榔、蜂蜜、盐、猴枣散、冰片、麝香、芦荟等，发挥药效的成分复杂，且由于眼用剂型质量要求高，不便于制剂，也不便于制剂的质量控制，且该剂型为膏剂，使用、贮存易污染。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种降眼压的眼用药物组合物，本发明物的另一技术方案是提供了该药物组合物的制备方法和用途。

本发明提供了丁公藤提取物，每克提取物中含有东莨菪内酯8.3mg～20.4mg。

本发明提供了降眼内压的药物组合物，它是由所述的丁公藤提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的眼用制剂。

所述的眼用制剂：液体制剂、半固体制剂。

所述的固体制剂是：眼膏剂、眼用膜剂、眼用凝胶剂；所述的液体制剂是：滴眼液、缓释滴眼液。

所述的液体制剂中每1ml含丁公藤提取物0.04～0.06g、东莨菪内酯0.3～1.1mg。

所述的缓释滴眼液是含有下述重量配比的丁公藤提取物原料及辅料制备而成：

丁公藤提取物0.02～0.08份、卡波姆0.03～0.08份、玻璃酸钠0.01～0.06份。

进一步地，所述的缓释滴眼液含有下述重量配比的丁公藤提取物原料及辅料制备而成：

丁公藤提取物0.05份、卡波姆0.05份、玻璃酸钠0.025份。

本发明提供了一种制备该药物组合物的方法，它包括如下步骤：

a、将药材丁公藤，加水煎煮，煎煮液过滤、浓缩；

b、浓缩液用乙醇沉淀两次，第一次使乙醇含量60％~80％，静置，取上清液滤过，滤液回收乙醇，第二次使乙醇含量75％~90％，取上清液滤过，滤液回收乙醇，过滤；

c、滤液加活性炭，煮沸脱色，过滤得丁公藤提取物； 

d、将c步骤制备的丁公藤提取物加上药学上可接受的眼用制剂的辅料或辅助性成分制备成常用眼用制剂。

本发明还提供了该药物组合物在制备治疗青光眼的眼用药物中的用途。

本发明还提供了该药物组合物在制备抗病毒、眼用止痛、镇痛的药物中的用途。

本发明药物采用丁公藤为原料提取制备眼用制剂，临床试验证明，与丁公藤中的单一成分丁公藤碱II相比，药效明显优于丁公藤碱II，对青光眼的治疗，效果显著，且毒性小，刺激性小，安全性高，质量稳定，可控性强，为临床提供了一种新的选择。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

实施例1本发明药物原料提取物的制备

a、将8kg丁公藤切片洗净，加水浸渍1h，煎煮2次，第1次3h，第2次2h，合并煎煮液过滤，滤液浓缩至约2000ml；

b、浓缩液用乙醇沉淀2次，第1次加95％乙醇使乙醇含量75％，静置24h，取上清液滤过，滤液回收乙醇，第2次加95％乙醇使乙醇含量85％，静置24h，取上清液滤过，滤液回收乙醇，滤液加注射用水使成4000ml，静置48h，过滤；

c、滤液加活性炭20g，煮沸脱色10～15min，趁热过滤，挥干，即得丁公藤提取物。

实施例2本发明药物原料提取物的制备

a、将8kg丁公藤切片洗净，加水浸渍1h，煎煮2次，第1次3h，第2次2h，合并煎煮液过滤，滤液浓缩至约2000ml；

b、浓缩液用乙醇沉淀2次，第1次加95％乙醇使乙醇含量80％，静置24h，取上清液滤过，滤液回收乙醇，第2次加95％乙醇使乙醇含量90％，静置24h，取上清液滤过，滤液回收乙醇，滤液加注射用水使成4000ml，静置48h，过滤；

c、滤液加活性炭20g，煮沸脱色5min，趁热过滤，挥干。(即得丁公藤提取物)。

实施例3本发明药物原料提取物的制备

a、将8kg丁公藤切片洗净，加水浸渍1h，煎煮2次，第1次3h，第2次2h，合并煎煮液过滤，滤液浓缩至约2000ml；

b、浓缩液用乙醇沉淀2次，第1次加95％乙醇使乙醇含量60％，静置24h，取上清液滤过，滤液回收乙醇，第2次加95％乙醇使乙醇含量75％，静置24h，取上清液滤过，滤液回收乙醇，滤液加注射用水使成4000ml，静置48h，过滤；

c、滤液加活性炭20g，煮沸脱色5min，趁热过滤，挥干。(即得丁公藤提取物)。

实施例4本发明药物缓释滴眼的制备

用硼酸缓冲液调pH6.0～8.0左右，加蒸馏水，使每1ml中含丁公藤提取物0.05g、吐温-80 0.1ml、苯氧乙醇0.005g、卡波姆0.05g、玻璃酸钠0.025g、氯化钠0.005g100℃流通蒸气消毒45min，最后灌封滤液。

实施例5本发明药物缓释滴眼的制备

制备方法同实施例1、4，只是用量有变化：丁公藤提取物0.05g、吐温-80 0.1ml、苯氧乙醇0.005g、卡波姆0.03g、玻璃酸钠0.05g、氯化钠0.006g

实施例6本发明药物缓释滴眼的制备

制备方法同实施例1、4，只是用量有变化：丁公藤提取物0.04g、吐温-80 0.08ml、苯氧乙醇0.007g、卡波姆0.07g、玻璃酸钠0.01g、氯化钠0.008g

实施例7本发明药物缓释滴眼的制备

制备方法同实施例1、4，只是辅料和用量均有变化：丁公藤提取物0.05g、羟丙甲基纤维素0.07ml、聚乙烯吡咯烷酮0.01g、卡波姆0.07g、玻璃酸钠0.01g、杜灭芬0.001g

实施例8本发明药物缓释滴眼的制备

制备方法同实施例1、4，只是辅料和用量均有变化：丁公藤提取物0.05g、吐温-800.09ml、聚乙烯吡咯烷酮0.02g、卡波姆0.04g、羟丙甲基纤维素0.03g、苯乙醇0.0008ml

实施例9本发明药物滴眼液的制备

制备方法同实施例1、4，只是辅料和用量均有变化：丁公藤提取物0.06g、吐温-800.08ml、聚乙烯吡咯烷酮0.02g、卡波姆0.04g、苯乙醇0.001ml

实施例10发明药物滴眼液的制备

丁公藤提取物0.05g、羟丙甲基纤维素0.05ml、聚乙烯吡咯烷酮0.01g、卡波姆0.07g、玻璃酸钠0.01g、杜灭芬0.001g

实施例11本发明药物眼用凝胶的制备

制备方法同实施例1、4，只是辅料和用量均有变化：丁公藤提取物0.05g、羟丙甲基纤维素0.1ml、聚乙烯吡咯烷酮0.05g、卡波姆0.27g、玻璃酸钠0.31g、杜灭芬0.002g

实施例12本发明药物眼用凝胶的制备

制备方法同实施例1、4，只是辅料和用量均有变化：丁公藤提取物0.06g、苯氧乙醇0.015g、卡波姆0.32g、玻璃酸钠0.35g、氯化钠0.006g、聚乙烯吡咯烷酮0.05g

实施例13本发明药物眼用制剂最佳配比筛选试验

取丁公藤提取物10g，用200ml注射用水加热溶解，放冷，在搅拌状态下加入不同量的卡波姆和玻璃酸钠，定容至约250ml，用盐酸或氢氧化钠调pH值于5.0～9.0，用氯化钠调渗透压至等渗高渗。分别取以上药液，做影响因素实验(高温实验：取药液于洁净容器中，密闭，60℃下放置10天；强光实验：将药液置于洁净透明的容器中，于光照仪器中用(4500±500)lx的条件下放置10天；分别于第5、10天取样，观察性状、澄明度，检测含量、pH值)。实验结果发现：加入10g卡波姆以及5g玻璃酸钠的样品，性状、澄明度最好，并且含量以及pH没有较大的变化，可以看出，丁公藤提取物0.05份、卡波姆0.05份、玻璃酸钠0.025份为最佳的配方量。

筛选试验数据如下：

实施例本发明药物的质量控制

一、本发明药物提取物的质量控制

本发明在定性上，以丁公藤对照药材为对照，对丁公藤提取物进行薄层色谱鉴别；在检查上，增加了对重金属不得过百万分之二十的限量检查；在定量上，采用高效液相色谱法以东莨菪内酯为对照品对丁公藤提取进行定量，丁公藤提取物每1g含东莨菪内酯(C10H804)8.3mg～20.4mg。

定性鉴别取丁公藤提取物0.1g，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至约2ml，得供试品溶液。另取丁公藤对照药材2.0g，同法制备对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(17∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。

含量测定色谱条件与***适用性以C18烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以甲醇-水-冰醋酸(32∶68∶0.18)为流动相，检测波长为298nm。理论板数按东莨菪内酯峰计不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取东莨菪内酯对照品适量，加甲醇制成每1ml中含东莨菪内酯50ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取按实施例1方法制备的本发明药物原料提取物0.1g，精密称定，加3mol/l的盐酸溶液30ml，置水浴上加热水解1小时，立即冷却，移入分液漏斗中，用水20ml分次洗涤容器，并入分液漏斗中，加氯化钠2g，用氯仿强力振摇提取5次，每次15ml，合并氯仿液，加无水硫酸钠2g，搅拌，滤过，滤液置70℃水浴上蒸至近干，立即加甲醇使溶解，移至25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取滤液，即得。

测定法精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定即得。

依法测定6批提取物中东莨菪内酯的含量，结果见表1。

表16批提取物中东莨菪内酯的含量

结果表明，本品每克丁公藤提取物中含有东莨菪内酯8.3mg～20.4mg。

二、本发明药物的质量控制

鉴别本品分别以丁公藤对照药材、东莨菪碱内酯对照品为对照对本品进行薄层鉴别。

(1)取实施例4的方法制备的眼用制剂1ml，置具塞试管中，加水10ml、盐酸3ml，混匀，置水浴中水解4小时，取出，放冷，移入分液漏斗中，试管用水洗涤4次，每次3ml，洗涤液并入分液漏斗中，加氯化钠3g，振摇使溶解，用氯仿提取4次(20、20、10、10ml)，合并提取液，加无水硫酸钠2g，摇匀，放置1小时以上，滤过，无水硫酸钠用氯仿洗涤4次，每次5ml，洗涤液与滤液合并，蒸干，残渣加适量丙酮使溶解，移至5ml量瓶中，用少量丙酮洗涤容器，并入同一量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取东莨菪内酯对照品，加丙酮制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VB)试验，吸取对照品溶液及供试品溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-***-冰醋酸(10∶10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)取实施例4的方法制备的眼用制剂作为供试品溶液。另取丁公藤对照药材2.0g，加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(17∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。

含量测定色谱条件与***适用性以C18烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以甲醇-水-冰醋酸(32∶68∶0.18)为流动相，检测波长为298nm。理论板数按东莨菪内酯峰计不低于2000。

对照品溶液的制备  精密称取东莨菪内酯对照品适量，加甲醇制成每1ml中含东莨菪内酯50ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  精密量取实施例4的方法制备的眼用制剂1ml，加3mol/l的盐酸溶液10ml，置水浴上加热水解1小时，立即冷却，移入分液漏斗中，用水20ml分次洗涤容器，并入分液漏斗中，加氯化钠2g，用氯仿强力振摇提取5次，每次15ml，合并氯仿液，加无水硫酸钠2g，搅拌，滤过，滤液置70℃水浴上蒸至近干，立即加甲醇使溶解，移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

测定法精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

依法测定10批中试样品样品中东莨菪内酯的含量。结果见表2。

表210批中试样品样品中东莨菪内酯的含量

结果表明，本发明每1ml含东莨菪内酯0.3～1.1mg。

以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。

试验例1本发明药物缓释滴眼液对家兔眼压和瞳孔的影响

一、实验材料

药品：(1)本发明药物缓释滴眼液(由实施例2制备，用法用量为：滴眼，每日3～5次，每次1～2滴)，(2)复方噻吗洛尔滴眼液(由易舒特药业出品，批号200408)。

二、实验动物

成年健康大白兔24只，雌雄不限，体重2.40±0.1kg(由成都中医药大学动物试验中心提供)。

三、实验方法

1.高眼压家兔兔模型的制备和眼内压测定

高眼压家兔模型的建立：

健康家兔12只，随机分为2组，每组6只。第1组为本发明药物缓释滴眼液组，第2组为复方噻吗洛尔滴眼液组。在试验前使动物适应实验室环境和眼压的测定，以匹罗卡品缩瞳，静注2％戊巴比妥钠(约30mg/kg)全麻后由眼颞侧角膜缘内2mm处刺入前房，抽前房水；再经缩小的瞳孔和虹膜与品体之间进入鼻侧后房，抽后房水，换针管以后向后房水注入1∶200α-糜蛋白酶0.2ml。每天检测眼压，于第三天左眼分别滴入测试药液2滴(约0.1mL)，右眼滴同量的生理盐水作为对照。用压陷式眼压计测量滴药后15，30，60，120及180min的眼压。

2.对瞳孔直径的影响

健康家兔12只，两眼外观正常，随机将兔分为2组，每组6只。第1组家兔左眼滴本发明药物缓释滴眼液，右眼滴生理盐水对照；第2组家兔左眼滴复方噻吗洛尔滴眼液，右眼滴生理盐水对照。将兔置于兔盒，各组分别滴上述药物或生理盐水2滴(约0.1mL)，被动闭眼10s。实验室内采用日光灯照明，光强度恒定，用瞳孔测量仪准确测量滴药后15，30，60，120及180min的瞳孔直径。

统计学处理用药前后用配对t检验，组间比较用t检验。

实验结果：

1.本发明药物缓释滴眼液和复方噻吗洛尔滴眼液滴眼的缩瞳作用

用药组在滴药后15min瞳孔均缩小，与滴药前比较差异都有非常显著意义(P＜0.01)；在滴药后120min，与滴药前比较仍有显著差异(P＜0.05)；至180min时，瞳孔直径基本恢复正常(P＞0.05)。本发明药物缓释滴眼液和复方噻吗洛尔滴眼液的组间比较，经t检验，最大缩瞳作用相接近，差异无显著意义(P＞0.05)。见表3。

  表3本发明药物滴眼液对家兔瞳孔直径的影响(n＝6，            x±s)

注：两组用药前后配对t检验：aP＞0.05，bP＜0.05，cP＜0.01。本发明药物缓释滴眼液与复方噻吗洛尔滴眼液给药组间比较：经t检验：dP＞0.05。给药组与对照组比较，经t检验：gP＞0.05，hP＜0.05，iP＜0.01。

2.本发明药物缓释滴眼液和复方噻吗洛尔滴眼液对眼压的作用比较

高压眼前，各组基础眼压值之间无明显差异，为3.0～3.3kPa。高压眼3天后，对照组眼压即明显升高，30min时，眼压升至4.5kPa(P＜0.01)，之后眼压逐渐下降，2h后基本恢复正常水平。在本发明药物缓释滴眼液和复方噻吗洛尔滴眼液后较对照组眼压明显下降，用药后30～120min各时点，眼压下降与对照组比较，均有非常明显差异(P＜0.01)。本发明药物滴眼液和复方噻吗洛尔滴眼液的眼压变化比较，经t检验，无明显差异(P＞0.05)。见表4。

表4本发明药物滴眼液对高压眼兔眼压的影响(n＝6，            x±s)

注：两组用药前后配对t检验：aP＞0.05，bP＜0.05，cP＜0.01。本发明药物缓释滴眼液与复方噻吗洛尔滴眼液给药组间比较：经t检验：dP＞0.05。给药组与对照组比较，经t检验：gP＞0.05，hP＜0.05，iP＜0.01。

该实施证明本发明药物与化合物类药复方噻吗洛尔滴眼液有相同的药效。

试验例2本发明药物缓释滴眼液对兔实验性急性高眼压模型视网膜谷氨酸的影响

一、药品：本发明药物缓释滴眼液(由实施例2制备，用法用量为：滴眼，每日3～5次，每次1～2滴)。

二、动物：成年健康大白兔(中国家兔)18只，雌雄不限，体重1.4～2.1kg(由成都中医药大学动物试验中心提供)。术前眼压7～22mmHg(1mmHg＝0.133kPa)，平均(12.56±3.37)mmHg(日本Kowa公司Perkins眼压计测量)。

三、方法

1.分组

大白兔18只，共分3组，每组间术前眼压无差异。实验1组：6只兔。采用生理盐水前房内持续灌注法，将每只兔的1只眼眼压升高至60mmHg；另1只眼作为对照，维持灌注眼压20mmHg。实验2组：6只兔。每只兔的1只眼维持灌注眼压30mmHg，对侧眼维持眼压20mmHg作为对照，处理方法同实验1组。正常对照组：6只兔(6只眼)。

2.动物模型制备

动物称重，耳缘静脉注射3％戊巴比妥钠(约1ml/kg)，随机选1只眼作为高眼压灌注眼，用5号静脉输液针头行前房穿刺，输液器接生理盐水，血压计加压维持所需眼压，持续4h。正常对照组作为空白对照，不作前房灌注，也不需麻醉。

3.检测样品制备：

击头处死动物，迅速取出眼球置培养皿中，于放大镜下冰上操作，沿角膜缘切开眼球，去晶状体及玻璃体；无水酒精固定0.5min，轻轻剥取视网膜，滤纸吸干酒精，称重，置匀浆器内，加1ml无水酒精，冰上匀浆，至乳糜状。转入eppendrof管，4℃，15000r/min离心30min。取上清，-20℃保存备用。

4.检测方法：

采用邻苯二甲醛柱前衍生法[1]，高效液相色谱仪与荧光光度检测器测定样品中的氨基酸。通过标准品的测定，采用外算法根据氨基酸的色谱峰面积计算样品中的谷氨酸含量。

四、统计学处理：采用t检验。

结果：实验1组视网膜谷氨酸含量测定(表5)：

60mmHg灌注眼为(65.51±18.45)10-5mmol/g，20mmHg灌注眼为(42.02±22.45)10-5mmol/g，二者差异有显著性(P＜0.05)。

                          表53组兔视网膜谷氨酸含量比较

*组内比较，P＜0.05

实验2组视网膜谷氨酸含量测定

30mmHg灌注眼为(68.67±32.65)10-5mmol/g，20mmHg灌注眼为(38.38±13.42)10-5mmol/g，二者差异亦有显著性(P＜0.05)。

试验结果显示，在灌注眼压为60mmHg和30mmHg时，视网膜的谷氨酸含量明显高于对侧自身对照眼(20mmHg压力灌注)，直接说明兔急性高眼压模型视网膜谷氨酸水平明显增高，证实谷氨酸参与了高眼压对视网膜的损伤。尽管眼压仅30mmHg左右，EAAs水平仍处于上升状态，对视网膜仍有可能造成兴奋性毒素作用，从而导致视网膜神经细胞的死亡。在60mmHg和30mmHg组之间未见显著差异，说明其量效关系不明显。但30mmHg显然是引起视网膜谷氨酸升高的阈上值。

试验例3本发明药物缓释滴眼液对家兔多次给药眼刺激性试验

药物：

(1)本发明药物缓释滴眼液(由实施例2制备，用法用量为：滴眼，每日3～5次，每次1～2滴)，

(2)氯化钠注射液：四川美大康佳乐药业有限公司，批号：04091131。

动物：

家兔，一级，体重2.1～2.5kg，雌雄兼用。由四川省实验动物专委会养殖场提供。

试验方法

(1)分组

选择角膜、虹膜和结膜均正常无病变的家兔6只。采用同体自身对照方法。于家兔右眼滴入本发明药物缓释滴眼液，0.1mL/眼/次，4次/天；以家兔左眼滴入氯化钠注射液0.1mL/眼/次，4次/天作对比观察。将本发明药物缓释滴眼液和氯化钠注射液分别滴入家兔两侧眼结膜囊内，每次滴药后使家兔眼睛被动闭合10s，以便使药物充分接触眼睛各部位(角膜、虹膜、球结膜、睑结膜)，连续给药1周(7天)，逐日观察，并于停药后再观察1周(7天)。

(2)观察检查指标

眼刺激反应程度：每天给药4次，每2小时给药1次，分别于每次给药前按眼刺激评分标准综合评分，即在每天第1次给药前、2小时、4小时、6小时用放大镜检查双眼并分别记录眼刺激反应程度。停药后1周内每日观察双眼并记录眼刺激反应程度。

眼刺激反应程度评分标准及评价标准分别按表6、7进行：

表6眼刺激反应评分标准

         表7眼刺激性评价标准

试验结果：结果见表8

表8本发明药物缓释滴眼液多次用药对家兔眼睛的刺激性程度(            x±s)

从表8可见，以本发明药物缓释滴眼液对家兔右眼每天多次(4次/天)滴眼，连续应用1周及停药观察1周内，分别与家兔左眼滴入氯化钠注射液后比较观察，在用药的第2天至第4天内，某些时段可见本发明药物缓释滴眼液对部分家兔眼睛有极其轻微的刺激性反应，其刺激性强度为0.17～0.83分。按照药物对眼刺激性评分标准判定，其刺激性强度均在0～3.9分之内，属于“无刺激性”。说明本发明药物缓释滴眼液多次应用对眼睛无刺激性。

试验例4本发明药物缓释滴眼液与丁公藤碱II滴眼液药效学试验比较

一、实验材料

药品：(1)本发明药物缓释滴眼液(由成都三明药物研究所研制，批号040803，用法用量为：滴眼，每日3～5次，每次1～2滴)，(2)丁公藤碱II滴眼液(由成都三明药物研究所配置成以下三种浓度：0.25％、0.05％、0.01％[2]用法用量同本发明药物缓释滴眼液)

二、实验动物

成年健康大白兔24只，雌雄不限，体重2.40±0.1kg(由成都中医药大学动物试验中心提供)。

三、实验方法

将角膜结膜均正常的家兔分为4组，平均每组6只，分别为：(1)本发明药物缓释滴眼液组、(2)丁公藤碱II滴眼液高剂量组、(3)丁公藤碱II滴眼液中剂量组、(4)丁公藤碱II滴眼液低剂量组。将家兔固定在兔箱中安静休息1h，分别用0.04％Novesin点眼后局部麻醉，检测眼压和瞳孔，每次测量3次，取平均值。分别在左眼点受试药，右眼点入同剂量的生理盐水，点药后1h，再测量双侧眼压和瞳孔，进行自身对照和组间比较。

四、试验结果见表9

表9本发明药物滴眼液和丁公藤碱II滴眼对家兔瞳孔直径和眼内压的影响(n＝6，            x±s)

注：P1为同组左右眼比较，P2为2、3、4组分别与1组比较；*P＜0.05，有差异，**P＜0.01有显著差异。

由表9可见，上述试验是基于与单一活性成分丁公藤碱II的药效对比，试验证明本发明药物缓释滴眼液和丁公藤碱II滴眼均有显著的缩瞳和降低眼内压的作用，并且本发明药物缓释滴眼液降眼压和缩瞳作用效果大大优于丁公藤碱II滴眼液。且本发明药物提取工艺简单，成本低，临床使用明显优于单一活性成分，为临床提供了一种新的选择。

Claims (1)

1.一种降眼内压的药物组合物，它是以有效量的丁公藤提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料制备而成的缓释滴眼液，其特征在于：它是含有下述重量配比的原料和辅料制备而成：

丁公藤提取物0.05份、卡波姆0.05份、玻璃酸钠0.025份；

其中，所述丁公藤提取物是由如下方法制备：

a、将药材丁公藤，加水煎煮，煎煮液过滤、浓缩；

b、浓缩液用乙醇沉淀两次，第一次使乙醇含量60％～80％，静置，取上清液滤过，滤液回收乙醇，第二次使乙醇含量75％～90％，取上清液滤过，滤液回收乙醇，过滤；

c、滤液加活性炭，煮沸脱色，过滤，干燥得丁公藤提取物。