CN1730018A - 一种治疗心血管疾病的药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗心血管疾病的药物组合物，它是含有沙棘总黄酮、沙棘油为活性成分制备而成的药剂。本发明还提供了该药物组合物的制备方法。本发明药物原料沙棘总黄酮、沙棘油发挥了协同增效的作用，强化主效应，克服副效应，达到高效、低毒、安全、目标可控，用于治疗冠心病、心绞痛、高脂血症等，药物分散均匀、溶出释放和显效迅速，运输、贮存、携带方便，适于患者服用，为临床提供了一种新的选择。

Description

一种治疗心血管疾病的药物组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种治疗心血管疾病的药物组合物，具体地，是由沙棘为原料提取的有效部位组合制备而成的药物组合物，属药物领域。

背景技术

心血管疾病是全球卫生保健和卫生资源的巨大负担。根据2000年公布的最近的世界卫生报告，全世界每年有1700万人死于心血管疾病，到2020年心血管死亡将比该数字增加50％，高达2500万。目前西药主要为对症治疗，中药虽在标本兼治上有特色，但多为复方制剂，受制剂工艺和质量标准的制约，难以被国际市场所接受。

沙棘是具有中医药特色，中药、藏药、蒙药交叉应用历史悠久的药材，自公元8世纪以来的《月王药珍》、《四部医典》和《晶珠本草》等著名医药典籍中均有用沙棘治疗疾病记载，现收载于《中国药典》2005年版一部。

心达康片(收载于部颁标准中药成方制剂第十四册)由沙棘Hippophae rhamnoidesL.单味中药提取物(沙棘总黄酮)组成，具有化瘀通脉的功效。经5000例临床研究证明，心达康片使心功能改善率达86.9％，缺血性心电图改善总有效率71.8％，治疗缺血性心脏病有效率可达81.4％，单纯缓解15.7％，总有效率达97.1％，优于西药消心痛，被认为是治疗缺血性心脏病标本兼治很有前途的药物。心达康片长期应用于临床，疗效肯定，主要用于冠心病心绞痛的治疗，能改善缺血性心肌的血液循环，增加心肌的血流量，降低心肌的耗氧量，消除氧自由基，提高耐氧能力，并能促进和改善心肌的侧支循环；同时能降低血脂，防止血细胞凝聚，降低毛细血管的通透性和脆性，对治疗和预防多种心血管疾病均安全、有效，无明显毒副反应，值得临床进一步推广应用。但现有心达康片是以沙棘总黄酮单一有效部位组成，其药效物质基础研究较欠缺，定量分析仅采用分光光度法测定总黄酮，质量标准研究水平不高，而且崩解时间较长，起效较慢，服用时间长和次数较多等缺点。

沙棘油是沙棘中的有效成分，其中含有亚油酸、胡萝卜素、类胡萝卜素、维生素E等，久用可降血脂、软化血管、扩张血管，有心肌和血管舒张作用，保障心肌自身营养和周围的冠脉供血、供氧，减少了心绞痛发生的机会。

目前尚无将沙棘总黄酮、沙棘油配伍使用治疗心血管疾病的相关报道。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种治疗心血管疾病的药物组合物，它是由沙棘为原料提取的有效部位组合制备而成的药物组合物，本发明的另一技术方案是提供了该药物组合物的制备方法和用途。

本发明提供了一种治疗心血管疾病的药物组合物，它是含有下述重量配比的原料制备而成的药剂：

沙棘总黄酮1～3份、沙棘油1～99份。

进一步地，它是由下述重量配比的原料制备而成的药剂：

沙棘总黄酮1～3份、沙棘油1～99份。

更进一步地，它是由下述重量配比的原料制备而成的药剂：

沙棘总黄酮1～3份、沙棘油1～9份。

更进一步地，它是由下述重量配比的原料制备而成的药剂：

沙棘总黄酮3份、沙棘油7份。

其中，所述的沙棘总黄酮中含总黄酮以异鼠李素计算的重量百分含量为10％以上，所述的沙棘油中含总脂肪酸以亚油酸计算，重量百分含量为70％以上。

本发明药物组合物是由沙棘总黄酮、沙棘油为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。

其中，所述的药剂是：软胶囊、胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、注射剂。

本发明还提供了制备该药物组合物的方法，它包括如下步骤：

a、取沙棘果实或种籽或果实与种籽的混合物粉碎，用溶剂法回流提取、超临界流体提取或压榨离心法任一种方法提取，收集沙棘油；

沙棘油是由沙棘果油或沙棘籽油或沙棘果油与沙棘籽油按一定比例制成的混合油。

b、取沙棘果实粉碎，用85％以上的乙醇加热回流提取，浓缩至稠膏，用水沉淀，过滤，滤饼用石油醚脱脂，沉淀减压干燥，粉碎，得沙棘总黄酮；或

取沙棘药材正己烷或固相萃取脱脂，加入80％乙醇回流，回收乙醇，加硅藻土拌匀、抽洗后蒸干，再加醋酸乙酯回流提取，回收醋酸乙酯，脱脂，即得沙棘总黄酮；

c、取a、b步骤制备的沙棘总黄酮、沙棘油，按如下重量配比制备成药学上常用的药剂：

沙棘总黄酮1～3份、沙棘油1～99份。

本发明还提供了该药物组合物在制备治疗冠心病心绞痛的药物中的用途。

本发明药物原料按一定比例配比的黄酮和脂肪油二者复合物，其抗心肌缺血药效作用较单独以沙棘总黄酮为原料的“心达康片”更好。并提供了沙棘油和沙棘总黄酮最佳配伍配比，沙棘油、沙棘总黄酮发挥了协同增效的作用，本发明药物强化主效应，克服副效应，融整合调节为一体，达到高效、低毒、安全、可控目标，以明显提高心达康制剂的疗效，同时还可提高该制剂工艺和质量控制水平，提高了沙棘的药理作用和临床疗效，同时降低了杂质含量，可制成各种制剂，用于治疗冠心病、心绞痛、高脂血症等，药物分散均匀、溶出释放和显效迅速，运输、贮存、携带方便，适于患者服用，为临床提供了一种新的选择。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

实施例1本发明药物原料沙棘油的提取

沙棘的提取方法一：取沙棘果实或种籽或果实与种籽的混合物粉碎，溶剂法回流提取，用正庚烷，加热回流提取2次，每次4小时，回收溶剂，收集沙棘油；

沙棘的提取方法二：取沙棘果实或种籽或果实与种籽的混合物粉碎，超临界CO2流体提取，经一级分离器收集沙棘油；其中，萃取压力为40MPa，萃取温度为65℃，萃取流量为18L/h，一级分离压力为6.5MPa，一级分离温度为36℃。

沙棘的提取方法三：压榨离心法提取：

取沙棘果实或种籽或果实与种籽的混合物，压榨离心法提取，采用机械压榨后，得沙棘粗油，离心法分离，收集沙棘油；

实施例2本发明药物原料沙棘总黄酮的制备

制备工艺一：

取沙棘粉碎成粗粉，用85％以上的乙醇分三次加热回流提取，每次2小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩至稠膏，用水沉淀，过滤，滤饼用石油醚脱脂，沉淀减压干燥，粉碎。(沙棘总黄酮含量大于10％)

制备工艺二：

沙棘药材正己烷或固相萃取(SPE)脱脂后，10倍80％乙醇回流提取两次，回收率乙醇，加药材量1/4的硅藻土拌匀，20倍量沸水抽洗后蒸干，8倍量醋酸乙酯回流提取两次，回收醋酸乙酯，少量石油醚脱脂，即得。(沙棘总黄酮含量大于50％)

实施例3本发明药物软胶囊的制备

1、制剂处方

原料：沙棘总黄酮150g  沙棘油350g

辅料：蜂蜡20g

以上共制成1000粒软胶囊(每粒装0.52g)

2、制法

以上两味，加蜂蜡，于胶体磨研磨混匀，压制成1000粒软胶囊，即得。

软胶囊剂具有以下特点，是本品的最适宜的剂型：

1.整洁、美观、容易吞服，携带轻巧，使用方便。

2.相对用药剂量准确，精确度较高。

3.醋柳黄酮难溶于水，制备软胶囊时不需要加粘合剂和压力，基本属于溶解或细微粉分散于内容物中，一旦崩解就一同释放，显效迅速，比片剂明显快并吸收要好。

4.沙棘油中含有容易氧化的成分，制备成添加遮光剂的软胶囊，防护药物受湿和空气中氧、光线的作用，从而提高其稳定性。

5.本品处方中含沙棘油量高，不易制成固体药物，制成软胶囊剂，能弥补其他固体剂型的不足。

综上所述，本品因含有非水溶性的固体药物和液体药物，液体药物用量较高，两相混悬制成的稠厚液体，适宜的剂型为软胶囊。本品制成软胶囊，在利用醋柳黄酮的基础上，同时配伍使用沙棘油，弥补硬胶囊剂、片剂在临床应用中的起效慢，作用较弱等缺点，服用后在胃中囊壳可迅速崩解，且运输、贮存、携带方便，适于患者服用。

实施例4本发明药物固体制剂的制备

①沙棘油的固化：加入其它制剂，将沙棘油制成固体粉末，如：加入淀粉吸收后，制成油脂粉末

加入明胶固化包裹，制成油脂微囊

加入蜂蜡固化，制成油脂化固体，粉碎

加入环状糊精固化吸收，粉碎等

②药物混合：将沙棘油固体粉末与沙棘总黄酮混合均匀，加入适当制剂辅料，制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、混悬剂、散剂、滴丸剂等固体制剂

实施例5本发明药物液体制剂的制备

①解决沙棘黄酮混悬稳定性，如单一或合并使用以下方法：加入油溶性表面活性剂，制成微乳态；加入增稠混悬剂，超微粉碎和可湿性等

②药物混合：加入制剂辅料，制成混悬微乳剂、油溶性液体等。

实施例6本发明药物颗粒的制备

称取实施例1、例2制备的原料：沙棘总黄酮300g  沙棘油700g，混合，加入淀粉，制粒、整粒、得颗粒剂。

实施例7本发明药物片剂的制备

称取实施例1、例2制备的原料：沙棘总黄酮300g  沙棘油700g，混合，加入淀粉，制粒、整粒、加入硬脂酸镁，压片，得片剂。

实施例8本发明药物口服液的制备

称取实施例1、例2制备的原料：沙棘总黄酮300g  沙棘油700g，加入混悬剂、矫味剂，胶体磨混合，得口服液。

实施例9本发明药物颗粒的制备

称取实施例1、例2制备的原料：沙棘总黄酮10g  沙棘油990g，混合，加入淀粉，制粒、整粒、得颗粒剂。

实施例10本发明药物片剂的制备

称取实施例1、例2制备的原料：沙棘总黄酮30g  沙棘油990g，混合，加入淀粉，制粒、整粒、加入硬脂酸镁，压片，得片剂。

实施例11本发明药物口服混悬剂的制备

称取实施例1、例2制备的原料：沙棘总黄酮300g  沙棘油300g，加入混悬剂、矫味剂，胶体磨混合，得口服混悬剂。

实施例12本发明药物口服混悬剂的制备

称取实施例1、例2制备的原料：沙棘总黄酮300g  沙棘油900g，加入混悬剂、矫味剂，胶体磨混合，得口服混悬剂。

上述制备制备均按常规的制剂工艺、选择常规的辅料制备。

通过比较，固体制剂的稳定性优于液体制剂

实施例13本发明药物质量控制

本发明中，沙棘总黄酮应符合国家药品标准-醋柳黄酮(WS-10001-(HD-1311)-2003)项下的有关规定，沙棘油应符合行业标准-沙棘油(HB/QS001-94、HB/QS002-94)及沙棘油原料药品标准项下的有关规定。

沙棘油总脂肪酸含量

沙棘油总脂肪酸含量(国家标准：GB/T17376动植物油脂脂肪酸甲酯制备，GB/T17377动植物油脂脂肪酸甲酯的气相色谱分析，气相色谱法；国家标准：GB/T15688-1995动植物油脂中不溶性杂质含量的测定，重量法)为70％以上，结果见表1。

总脂肪酸相对含量：按GB/T17376、GB/T17377，气相色谱法测定，峰面积归一化法计算相对含量(峰面积归一化法含量以100％计算)。

亚油酸相对含量：按GB/T17376、GB/T17377，气相色谱法测定，亚油酸峰面积在峰面积归一化法中的相对含量。

亚油酸含量：按GB/T17376、GB/T17377，气相色谱法测定，亚油酸在沙棘油中的重量含量。

沙棘总黄酮含量

总黄酮含量(国家药品标准：WS-10001-(HD-1311)-2003，醋柳黄酮原料药，分光光度法，按干燥品计算，含总黄酮苷元以异鼠李素计)为10％以上，结果见表2。

有效部位含量计算方法

有效部位含量(％)＝沙棘总黄酮含量×其比例分数+沙棘油总脂肪酸含量×其比例分数×100

总比例分数

经计算本发明药物的有效部位平均含量为50％以上，结果见表3。

为验证沙棘有效部位组合物的有效性、安全性，对其进行了药效学试验、急性毒性试验：

试验例1本发明药物原料沙棘有效部位的药效学筛选试验：

(一)对冠脉结扎致心肌缺血大鼠心电图的影响

1材料与方法

1.1动物：Wistar大鼠，全雄，由成都中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：川实动管第11号。

1.2药品和实验分组：沙棘总黄酮为黄棕褐色干燥浸膏(批号：030901，总黄酮含量为11.5％)，由四川美大康药业股份有限公司提供；沙棘油为橘红色油状物(批号：031001，总脂肪酸含量为83.8％)，由四川美大康药业股份有限公司提供。用菜籽油配制各组药物，实验分组如下，各设高、低剂量组。模型对照组灌服等容积的菜籽油。

试验分组        S0      S1      S2    S3    S4    S5    S6

沙棘油比例      0       50％    60％  70％  80％  90％  100％

沙棘总黄酮比例  100％   50％    40％  30％  20％  10％  0

1.3试剂：红四氮唑(TTC)，批号F20030920，中国医药(集团)上海化学试剂公司生产。

1.4仪器：BL-420E四道生理记录仪，HX-200动物呼吸机，成都泰盟科技有限公司。

2实验方法与结果

2.1心肌缺血造模：取健康Wistar雄性大鼠120只，按体重随机分组如下表，叉开时间给药，连续灌胃给药4天，造模前禁食不禁水12小时，术次给药60分钟后用10％乌拉坦1.0ml/100g腹腔注射麻醉，仰位固定于大鼠手术板上，记录其正常心电图。完毕后颈部作一切口，分离组织，行气管插管术，接动物呼吸机，频率50次/分，潮气量8～10ml，吸呼比为2∶1。左锁骨中线第4～5肋间开胸，暴露心脏，以眼科镊轻提起心包膜，小心撕开，在左心耳下用针(3×6，3/8○)，000号丝线，于***处结扎左冠状动脉前降支。然后缝合关闭胸腔，记录结扎后5分钟、10分钟、15分钟、30分钟的心电图，比较结扎前后各时间段J点(ST段)的变化，以其变化值作为统计指标。冠脉结扎4h后处死动物，开胸取出心脏。将其用盐水冲洗，剔除非心脏组织和左右心耳，用吸水纸吸去水份，在电子天平上称量，即为全心室重量，从心尖到心底部平行将心脏切成0.1cm厚心肌片，盐水冲洗心肌片后，吸干水份，将心肌片放入1％TTC溶液中。置于37℃恒温水浴槽中孵浴5～7min，孵浴中不断摇动，以保证心肌均匀充分染色。然后取出心肌片，用生理盐水冲洗去掉多余TTC溶液，吸干水份后，剪去染色部分心肌。未染色部分称重，即得梗死心肌重量，求梗死心肌占全心重的百分比进行统计处理。

试验结果见表4、5。

以上实验结果表明，与模型对照组比较，七种配比中S0、S1、S2、S3、S4有明显降低大鼠冠脉结扎导致的J点升高作用(P＜0.05～0.01)，提示S0～S4具有保护冠脉结扎所致的心肌梗塞作用，其中以S3(沙棘油∶沙棘总黄酮＝70％∶30％)，S4(沙棘油∶沙棘总黄酮＝80％∶20％)作用最为明显。

以上结果表明，七种配比中S0(沙棘油∶沙棘总黄酮＝0∶100％)、S1(沙棘油∶沙棘总黄酮＝50％∶50％)、S2(沙棘油∶沙棘总黄酮＝60％∶40％)、S3(沙棘油∶沙棘总黄酮＝70％∶30％)、S4(沙棘油∶沙棘总黄酮＝80％∶20％)与模型对照组比较，均能明显减少心肌梗塞范围(P＜0.05～0.01)，说明S0～S4能减轻冠脉结扎所致大鼠心肌梗死。

(二)对垂体后叶素致心肌缺血大鼠的影响

1材料与方法

1.1动物：Wistar大鼠，雌雄各半，由成都中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：川实动管第11号。

1.2药品与分组：同上。

1.3试剂：垂体后叶素，批号20030802，中美合资沈阳济世制药有限公司生产。

1.4仪器：BL-420E四道生理记录仪，成都泰盟科技有限公司生产。

2.实验方法

实验前进行预筛，将对垂体后叶素不敏感大鼠剔除，取合格者110只，随机分组，连续灌胃给药4天，于末次给药后半小时10％乌拉坦腹腔注射麻醉，固定，皮下***心电图电极记录II导联心电图。稳定记录一段时间后由尾静脉注射给予垂体后叶素0.5U/Kg，15s推完。连续记录20min的心电图。以出现下列一项指征者为阳性心肌缺血：①T波低平(降低原T波高度50％以上)、双向、倒置②J点升高1.5mv以上，ST水平下移0.5mv③心律不齐。未出现这些改变者为阴性。以各组心肌缺血阳性率进行x2检验。

试验结果见表6。

以上结果表明，七种配比中S0、S1、S2、S3、S4、S5与模型对照组比较，均可明显降低静注垂体后叶素导致的心肌缺血阳性大鼠数目(p＜0.05)，S0高(沙棘油∶沙棘总黄酮＝0∶100％)、S1高(沙棘油∶沙棘总黄酮＝50％∶50％)、S3高(沙棘油∶沙棘总黄酮＝70％∶30％)、S4(沙棘油∶沙棘总黄酮＝80％∶20％)高剂量组作用尤为明显(p＜0.01)，说明对垂体后叶素所致心肌缺血具有保护作用。

(三)对急性高血脂模型小鼠血脂的影响

1实验材料

1.1动物：昆明种小鼠，雌雄各半，由由成都中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：川实动管第11号。

1.2药品与分组：同上。

1.3试剂：甘油三酯(GPO-PAP法检测)试剂盒，批号030906，总胆固醇(GOD-CE-PAP法检测)试剂盒，批号030910，均购自成都迈克科技有限公司。

2实验方法与结果

造摸方法：取18～22g小鼠150只，雌雄各半，随机分组，连续给药7天，第6天腹腔注射75％蛋黄乳0.5ml/只造成高血脂模型。20小时后摘眼球取血，离心分离血清，测血清中甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量。

试验结果见表7。

以上试验结果表明，七种配比中S2、S3、S4、S5、S6组具有明显的降低高脂大鼠血清中甘油三酯、总胆固醇含量，其中S3(沙棘油∶沙棘总黄酮＝70％∶30％)、S4(沙棘油∶沙棘总黄酮＝80％∶20％)、S5(沙棘油∶沙棘总黄酮＝90％∶10％)、S6(沙棘油∶沙棘总黄酮＝100％∶0)组降脂作用最为明显。

(四)有效部位组合物的药效筛选试验结论

通过以上两种抗心肌缺血实验和降血脂实验，结果显示，S0、S1、S2、S3、S4组对冠脉结扎所致的大鼠心肌缺血和垂体后叶素所致的大鼠心肌缺血均具有明显的保护作用，其中以S3组作用最强；而S2、S3、S4、S5、S6具有明显的降血脂作用。

以上结果表明，沙棘总黄酮是抗心肌缺血的主要有效部位，而沙棘油是降血脂的主要有效部位，二者以一定的配伍配比S3(沙棘油∶沙棘总黄酮＝70％∶30％)综合作用最为突出，既具有明显的抗心肌缺血作用，又具有明显的降血脂作用，充分发挥两类有效部位的作用，结合本品的功能与主治(主要用于治疗冠心病心绞痛)，本品的最佳处方配伍配比为沙棘油∶沙棘总黄酮＝7∶3。

试验例2本发明药物原料的药效学试验

为了研究沙棘有效部位组合物的最佳原料处方配比在治疗缺血性心脏病方面的药理作用，采用注射垂体后叶素和冠脉结扎两种方法制备急性心肌缺血大鼠模型，冠脉结扎制备心肌缺血犬模型，通过观察预防给药分别对两种模型动物心电图ST段、T波变化、血流动力学、心肌收缩性能和舒张性能、血清中相关酶(CK、LDH、MDA、SOD、NO)的水平四个方面的影响，探讨沙棘有效部位组合物对抗心肌缺血的作用及其作用机制；通过对高脂饲料喂饲性高血脂大鼠和急性血瘀模型大鼠的观察，考察沙棘有效部位组合物的调血脂作用和对血液流变学的影响。

结果：(1)沙棘有效部位组合物能显著改善注射垂体后叶素和冠脉结扎两种方法导致的大鼠心电图ST段、T波缺血性变化(p＜0.01)

(2)沙棘有效部位组合物可以减慢心率，降低血压，改善急性心肌缺血大鼠血流动力学(p＜0.01或p＜0.05)

(3)沙棘有效部位组合物对急性心肌缺血大鼠心肌收缩性能没有明显影响(p＞0.05)；沙棘有效部位组合物能够降低急性心肌缺血大鼠左室舒张末期压力(LVEDP)，升高左室压力最大下降速率(-dp/dtmax)，明显改善急性心肌缺血大鼠的心肌舒张性能(p＜0.01或p＜0.05)。

(4)沙棘有效部位组合物可以减慢心率，降低血压，而对心肌收缩性能没有明显影响，表明沙棘有效部位组合物可降低急性心肌缺血大鼠的心肌耗氧量，有利于缓解心脏缺血性病变。

(5)沙棘有效部位组合物能够显著降低急性心肌缺血大鼠血清中CK、LDH、MDA的水平，提高SOD、NO的活性，稳定心肌细胞结构及其功能，对抗缺血性损害(p＜0.01或p＜0.05)。

(6)沙棘有效部位组合物能够降低高血脂大鼠血清中TC、TG、LDL的水平，升高HDL水平(p＜0.01或p＜0.05)，表明具有很好的调血脂作用。

(7)沙棘有效部位组合物可以显著降低急性血淤模型大鼠高、中、低切全血粘度，高、低切全血还原粘度，红细胞聚集指数(p＜0.01或p＜0.05)，显示沙棘有效部位组合物能够改善血液流变学。

(8)沙棘有效部位组合物对结扎冠脉致心肌缺血犬心外膜心电图∑-ST及N-ST变化的影响

与模型对照组相比，沙棘有效部位组合物高、中、低剂量组、心达康片剂对照组以及硝苯地平组均可显著对抗结扎冠脉导致心肌缺血犬心外膜心电图∑-ST及N-ST变化(p＜0.05或p＜0.01)，而沙棘有效部位组合物低剂量组仅有对抗结扎冠脉导致结扎冠脉导致心肌缺血犬心外膜心电图∑-ST及N-ST变化的趋势(p＞0.05)

(9)沙棘有效部位组合物对结扎冠脉致心肌缺血犬血流动力学指标的影响

结扎冠脉诱发的急性心肌缺血犬血流动力学变化：结扎冠脉后MAP、HR先是略下降，然后恢复原水平或稍微加快；LVEDP明显升高；LVSP、+DP/Dtmax、-DP/DTmax下降，以上各指标变化表明心肌缺血引起心脏功能受损。

由结果可知，沙棘有效部位组合物各剂量组、心达康片剂对照组以及硝苯地平组在结扎冠脉后各时点心率HR均有不同程度下降，沙棘有效部位组合物高、中、低剂量组、心达康片剂对照组在结扎冠脉后30分钟时HR下降即跟模型对照组有差异(p＜0.01)；沙棘有效部位组合物高、中、低剂量组、心达康片剂对照组和硝苯地平组在结扎冠脉后30分钟时MAP即跟模型对照组有差异(p＜0.01或p＜0.05)，而沙棘有效部位组合物高、中、低剂量组和心达康片剂对照组在MAP下降幅度上又与硝苯地平组有着显著差异(p＜0.01)；对LVSP的影响：沙棘有效部位组合物高、中、低剂量组、心达康片剂对照组和硝苯地平组在结扎冠脉后各时点均与模型对照组相比有显著差异(p＜0.01)，这与其降低血压作用有关。

(10)沙棘有效部位组合物对结扎冠脉致心肌缺血犬心肌收缩性能和舒张性能的影响：对于+DP/DTmax，沙棘有效部位组合物各剂量组、心达康片剂对照组以及硝苯地平组在结扎冠脉后与模型对照组相比均无显著差异(p＞0.05)。与模型对照组相比，沙棘有效部位组合物各剂量组、心达康片剂对照组以及硝苯地平组在结扎后对Vce40没有显著影响(p＞0.05)；对于-DP/Dtmax和LVEDP的影响，沙棘有效部位组合物高、中剂量组、心达康片剂对照组及硝苯地平组均分别在结扎后与模型对照组有显著差异(p＜0.05或p＜0.01)，提示改善左心室舒张功能，减少回心血量，降低前负荷。

(11)沙棘有效部位组合物对结扎冠脉致心肌缺血犬心肌耗氧量的影响

结果显示：沙棘有效部位组合物、心达康片剂对照组和硝苯地平组可减慢心率，降低血压，而对心肌收缩性能没有影响，根据心肌耗氧量二项乘积“心率×血压”可推断沙棘有效部位组合物可以心肌耗氧量，改善梗塞心肌的能量供求关系，缓解缺血性损害。

(12)沙棘有效部位组合物对结扎冠脉致心肌缺血犬血清酶和心肌酶水平的影响模型组犬在结扎冠脉后血清中CK、LDH、MDA显著升高，NO、SOD明显降低；心肌组织中MDA显著升高，NO、SOD明显降低(与假手术组相比p＜0.01)，沙棘有效部位组合物高、中剂量组、心达康片剂对照组以及硝苯地平组犬结扎冠脉后血清和心肌组织中CK、LDH、MDA升高幅度，NO、SOD降低幅度，与模型组大鼠有显著差异(p＜0.05或p＜0.01)，沙棘有效部位组合物低剂量有对抗这种变化的趋势(p＞0.05)。

(13)沙棘有效部位组合物对结扎冠脉致心肌缺血犬心肌梗塞范围的影响沙棘有效部位组合物高、中剂量组、心达康片剂对照组以及硝苯地平组犬心肌梗塞范围与与模型组大鼠有极显著差异(p＜0.01)，沙棘有效部位组合物低剂量组没有显著差异(p＞0.05)。

结论：以上试验结果表明沙棘有效部位组合物具有较强的心肌缺血保护作用和明显的调血脂作用，能够改善血液流变学，在治疗缺血性心脏病方面具有很好的开发利用前景。

试验例3本发明药物急性毒性试验

沙棘有效部位组合物的最佳原料处方配比流浸膏最大浓度、最大容积给小鼠一次灌胃38g/Kg，给药10分钟后，部分动物表现为静伏少动，30分钟后逐渐恢复正常。动物的大小便及其颜色、被毛、肤色、鼻、眼、口腔分泌物均未见异常，试验后小鼠体重有所增长，未见动物死亡，故本品一次灌胃小鼠的最大给药量为38g生药/Kg(相当于成人临床每日最大推荐剂量的1520倍)。

沙棘有效部位组合物的最佳原料处方配比流浸膏最大浓度、最大容积给大鼠一次灌胃38g/Kg，给药10分钟后，部分动物表现为静伏少动，30分钟后逐渐恢复正常。动物的大小便及其颜色、被毛、肤色、鼻、眼、口腔分泌物均未见异常，试验后小鼠体重有所增长，未见动物死亡，故本品一次灌胃小鼠的最大给药量为19g生药/Kg(相当于成人临床每日最大推荐剂量的760倍)。

结论：从本品的急性毒性所试剂量与给药后动物反应判断，本品属无明显毒性药物。

                     表1、沙棘油中总脂肪酸含量测定结果

样品批号	亚油酸相对含量(％)	亚油酸含量(mg/g)	总脂肪酸含量(以亚油酸计，mg/g)
				031001021102031101031102040201040202040203041101041102041103平均含量	5.33674.20974.07364.97894.52894.56955.07555.73465.75715.22554.9490	45.3633.6734.8234.7236.7235.4236.6944.3142.5342.9538.71	849.96799.82854.77697.34810.79775.14722.88772.68738.74821.93784.41

表2、沙棘总黄酮中总黄酮含量测定结果

样品批号	总黄酮含量(％)(以异鼠李素计)
		020301020302020303030601030602030603040401040402040403040506	11.6111.7514.4912.7214.4912.1615.2312.6312.1612.23

                      表3、组合物有效部位含量测定结果

沙棘油批号	沙棘总黄酮批号	1∶2比例有效部位含量(％)	1∶99比例有效部位含量(％)
				021201021202030401030402030701030802031001040201040401040402	020301	60.5357.1960.8550.3657.9255.5552.0655.3853.1258.67	84.2679.3084.7469.1580.3876.8571.6876.6173.2581.49

          表4、对冠脉结扎模型大鼠心电图J点(mv)变化的影响( x±s)

组别	剂量(g/kg)	动物数(只)	正常	扎后5分钟	扎后10分钟	扎后15分钟	扎后30分钟
								模型对照组S0  高低S1  高低S2  高低S3  高低S4  高低S5  高低S6  高低	等容积0.30.150.30.150.30.150.30.150.30.150.30.150.30.15	888888888888888	0.014±0.020.014±0.020.015±0.020.018±0.020.010±0.020.011±0.020.012±0.030.011±0.020.012±0.030.010±0.020.008±0.020.015±0.020.012±0.020.012±0.020.013±0.02	0.164±0.040.114±0.05*0.116±0.060.114±0.06*0.145±0.050.116±0.040.137±0 050.103±0.02**0.113±0.05*0.115±0.04**0.126±0.060.124±0.080.154±0.100.152±0.090.154±0.10	0.210±0.050.116±0.06*0.118±0.090.120±0.100.132±0.080.116±0.09*0.137±0.100.091±0.06**0.116±0.09*0.121±0.03**0.135±0.100.130±0.100.154±0.120.155±0.100.157±0.09	0.285±0.080.126±0.08*0.129±0.06*0.125±0.09*0.129±0.160.119±0.11**0.130±0.06**0.111±0.08**0.125±0.09**0.129±0.03**0.135±0.11*0.129±0.06**0.165±0.090.162±0.110.169±0.09	0.232±0.080.124±0.09**0.135±0.06*0.116±0.08*0.122±0.09*0.097±0.11**0.125±0.09*0.104±0.08**0.133±0.09**0.146±0.07*0.137±0.09*0.122±0.09*0.146±0.080.160±0.090.165±0.08

注：与模型对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01

   表5、对冠脉结扎模型大鼠心肌梗塞区重量百分比的影响( X±S)

组别	剂量(g/kg)	动物数(只)	梗塞区重量百分率(％)
				模型对照组S0  高低S1  高低S2  高低S3  高低S4  高低S5  高低S6  高低	等容积0.30.150.30.150.30.150.30.150.30.150.30.150.30.15	888888888888888	31.96±5.2318.37±6.20**20.32±5.86*19.53±3.16**22.00±6.92*18.27±5.30**21.74±7.12*15.64±4.32**20.33±5.46*18.96±4.86**21.01±6.12*28.34±4.7824.68±7.4626.52±6.7828.63±5.42

注：与模型对照组比较，*p＜0.05；**p＜0.01

                表6 对垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血的影响

组别	剂量(g/kg)	动物数(只)	心肌缺血阳性数	心肌缺血阴性率
					模型对照组S0  高低S1  高低S2  高低S3  高低S4  高低S5  高低S6  高低	等容积0.30.150.30.150.30.150.30.150.30.150.30.150.30.15	101010101010101010101010101010	1045455645346677	0/106/10*5/10**6/10**5/10**5/10**4/10*6/10**5/10**7/10**6/10**4/10*4/10*3/103/10

注：与模型对照组比较，*p＜0.05；**p＜0.01

       表7 小鼠血清甘油三酯含量(TG)、总胆固醇(TC)含量

组别	剂量	TG含量(mmol/L)	TC含量(mmol/L)
				空白对照组模型对照组S0  高低S1  高低S2  高低S3  高低S4  高低S5  高低S6  高低	等容积等容积0.30.150.30.150.30.150.30.150.30.150.30.150.30.15	5.64±2.25**16.23±5.9615.74±5.2616.27±5.6012.89±3.3514.72±5.2410.34±4.64*11.46±5.247.26±2.76**8.64±4.59**6.19±2.31**8.02±3.51**7.94±4.32**8.79±4.61**6.54±3.71**7.26±4.56**	5.69±3.03**13.48±2.6911.64±2.3612.53±2.6210.91±1.7910.83±2.279.17±2.01*9.23±2.35*8.26±2.76**8.88±1.59*7.19±2.31**8.02±1.51**7.99±2.32**8.79±4.61**7.16±3.25**8.27±2.58**

注：与模型对照组比较：*p＜0.05，*p＜0.01

Claims (11)

1、一种治疗心血管疾病的药物组合物，其特征在于：它是含有下述重量配比的原料制备而成的药剂：

沙棘总黄酮1～3份、沙棘油1～99份。

2、根据权利要求1所述治疗心血管疾病的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的原料制备而成的药剂：

沙棘总黄酮1～3份、沙棘油1～99份。

3、根据权利要求2所述的治疗心血管疾病的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的原料制备而成的药剂：

沙棘总黄酮1～3份、沙棘油1～9份。

4、根据权利要求3所述的治疗心血管疾病的药物组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的原料制备而成的药剂：

沙棘总黄酮3份、沙棘油7份。

5、根据权利要求1-4任一项所述的治疗心血管疾病的药物组合物，其特征在于：所述的沙棘总黄酮中含总黄酮以异鼠李素计算，重量百分含量为10％以上，所述的沙棘油中含总脂肪酸以亚油酸计算，重量百分含量为70％以上。

6、根据权利要求5所述的治疗心血管疾病的药物组合物，其特征在于：它是由沙棘总黄酮、沙棘油为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。

7、根据权利要求6所述的治疗心血管疾病的药物组合物，其特征在于：所述的药剂是：软胶囊、胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、注射剂。

8、一种制备权利要求2所述的治疗心血管疾病的药物组合物的方法，它包括如下步骤：

a、取沙棘果实或种籽或果实与种籽的混合物粉碎，用溶剂法回流提取、超临界流体提取或压榨离心法任一种方法提取，收集沙棘油；

b、取沙棘果实粉碎，用85％以上的乙醇加热回流提取，浓缩至稠膏，用水沉淀，过滤，滤饼用石油醚脱脂，沉淀减压干燥，粉碎，得沙棘总黄酮；

c、取a、b步骤制备的沙棘总黄酮、沙棘油，按如下重量配比制备成药学上常用的药剂：

沙棘总黄酮1～3份、沙棘油1～99份。

9、一种制备权利要求2所述的治疗心血管疾病的药物组合物的方法，它包括如下步骤：

a、取沙棘果实或种籽或果实与种籽的混合物粉碎，用溶剂法回流提取、超临界流体提取或压榨离心法任一种方法提取，收集沙棘油；

b、取沙棘果实粉碎，用正己烷或固相萃取脱脂，加入80％乙醇回流，回收乙醇，加硅藻土拌匀、抽洗后蒸干，再加醋酸乙酯回流提取，回收醋酸乙酯，脱脂，即得沙棘总黄酮；

c、取a、b步骤制备的沙棘总黄酮、沙棘油，按如下重量配比制备成药学上常用的药剂：

沙棘总黄酮1～3份、沙棘油1～99份。

10、权利要求1～7任一项所述的药物组合物在制备治疗冠心病心绞痛的药物中的用途。

11、权利要求1～7任一项所述的药物组合物在制备治疗高脂血症的药物中的用途。