CN1692693A - 白灵菇 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种白灵菇菌种，通过对新疆野外的野生白灵菇菌种经过人工驯化而成，在中国普通微生物中心保藏，保藏编号是CGMCC №0347。栽培方法包括：原种的制备和栽培种的生产。产量较其他菌种高，温度适应性较强。

Description

白灵菇

技术领域

本发明涉及一种食用菌及其栽培方法，特别是涉及白灵菇及其栽培方法。

背景技术

白灵菇学名白灵侧耳(Pleurotus nebrodensis)，隶属于真菌门、担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、侧耳科、侧耳属。是一种极为珍贵的食药用真菌，野生资源极少，专生于荒漠戈壁滩伞形科植物茎基部。其子实体肥大肉厚，洁白，肉质细腻、滑嫩，气味香，味道鲜美，营养丰富，有很高的食用、药用价值。

野生白灵菇存在如下缺陷：首先是资源有限，不能形成产量，栽培成本高，不能推向普通老百姓；其次，温度适应性差，对栽培条件要求高，不能大面积推广。

发明内容

本发明的目的是克服野生菌种(菌株)的缺陷，提供一种产量高、温度适应性强的白灵菇菌种(菌株)。同时，提供这种菌种(菌株)的栽培方法。

本发明的目的通过如下技术方案来实现。

本发明白灵菇菌种白灵10号的原种来自新疆野生白灵菇菌种，经过人工驯化而成。1998年4月2日已经在中国普通微生物中心保藏，保藏编号是CGMCC №0347。

本发明菌种白灵10号的特征在于：

1、形态特征

子实体侧生、平展，似手掌形。菌盖直径8-15厘米，初呈半球形，后逐渐伸展变平，基部平展，颜色洁白，菌盖厚2-4厘米、边缘渐薄，表面平滑。菌肉白色、紧实，有韧性。菌褶白色，后期呈淡黄色、密集、延生、不等长。菌柄长3-6厘米，柄粗3-5厘米，上粗下细，白色，实心、韧性强。单朵120-180克。担子4小梗，孢子无色，光滑，长椭圆形，(8-14)×(4-6)微米，孢子印白色。菌丝白色，绒毛状，气生型。

2、生物学特性

(1)营养  需要的主要营养物质有糖类、蛋白质、纤维素、半纤维素、维生素、矿物质等。

(2)温度  菌丝体培养温度20-24℃。在这样条件下，试管母种PDA培养基10-13天长满。适宜出菇13-15℃温度。出菇前，在0-5℃低温条件下处理5-7天刺激出菇。

(3)水分  菌丝体培养料含水量60％左右。出菇期要求含水量52％-55％，菇房空气相对湿度85％-90％。

(4)空气  要求通风良好、空气新鲜，二氧化碳浓度低于0.1％。

(5)光线  菌丝体不需要光线，出菇期需要光线照度300-1500勒克斯。

(6)时间要求  从菌袋接种到出菇一般需要90-100天。

本发明菌种的有益效果体现在如下方面：

1、本发明菌种的产量明显高于其他菌种的产量，从而提高了经济效益；

2、本发明菌种的温度适应性较强，降低了栽培技术难度，减少了生产成本。

附图说明

图1是菌株的IGS2经BsuRI酶切的电泳结果；

图2是菌株的IGS2经Hin6I酶切的电泳结果；

图3是菌株的IGS2经RsaI酶切的电泳结果；

图4是菌株的IGS2经Bsh1236I酶切的电泳结果。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进一步说明。

【实施例1】野生菌种的获得

野生菌种采自我国新疆伊犁郊外荒漠中阿魏茎基部的白灵菇子实体。经过中国科学院微生物研究所卯晓岚研究员鉴定，为一个野生手掌形白灵菇。形态特征如下：子实体侧生，表面平整洁白，似手掌形，菌盖平滑，直径8cm，厚2cm，菌肉白色，紧实，有韧性，菌褶白色，密集、延生、不等长。菌柄长5厘米，柄粗2厘米，上粗下细，白色，实心、韧性强。单朵85克。孢子印白色。

采用组织分离的方法，用PDA培养基培养，得到该野生白灵菇菌种。菌丝较弱，生长较慢，对温度比较敏感，导致经常培养失败。培养一定时间后容易出现杂菌污染，污染率达70-80％，菇体小，产量低，生物学效率仅达15％-20％。

【实施例2】野生菌种的驯化

通过两次栽培试验，掌握了该野生菌种的生长条件和栽培特点，根据本地野生白灵菇的生态环境，驯化的条件是：

1、培养料配方：棉仔壳90％、玉米粉6％、石灰2％、石膏1％、过磷酸钙1％。

2、温度：菌丝培养温度20-22℃。在这样条件下，试管母种PDA培养基13-15天长满。出菇温度8-15℃。出菇前，在-5-0℃低温条件下处理7-10天刺激出菇。

3、水分：菌丝体培养料含水量63％左右。出菇期要求含水量50％-55％，菇房空气相对湿度80％-85％。

4、空气：要求空气新鲜，二氧化碳浓度低于0.1％。

5、光线：菌丝体生长阶段不需要光线，出菇期需要光线照度800-1500勒克斯。

6、周期：从菌袋接种到出菇一般需要100-120天。

在上述驯化条件下，第一次驯化后生物学效率达到25％。第二次驯化试验后，生物学效率达到30％。由此获得母种。1998年4月2日已经在中国普通微生物中心保藏，保藏编号是CGMCC №0347。子实体侧生、平展，似手掌形。菌盖直径8-15厘米，初呈半球形，后逐渐伸展变平，基部平展，颜色洁白，菌盖厚2-4厘米、边缘渐薄，表面平滑。菌肉白色、紧实，有韧性。菌褶白色，后期呈淡黄色、密集、延生、不等长。菌柄长3-6厘米，柄粗3-5厘米，上粗下细，白色，实心、韧性强。单朵120-180克。担子4小梗，孢子无色，光滑，长椭圆形，(8-14)×(4-6)微米，孢子印白色。菌丝白色，绒毛状，气生型。

10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃下菌丝生长速度见下表。

从结果可以看出，本发明菌种(菌株)对温度的适应性较野生菌种有了很大的改进，菌丝生长速度也有了较大提高。

培养温度(℃)		10	15	20	25	30	35
								菌落直径(cm)	10号	0.7	1.1	5.0	7.2	5.7	1.3
野生	0.2	0.3	1.8	4.1	1.5	0.4

委托中国农业科学院对其DNA指纹进行检测。

实验方法：

1、DNA提取按常规方法进行。

2、IGS2的扩增：扩增体系为dNTP(2.5mM each)4μL，引物InvSRlR(5’-ACT GGC AGA ATC AAC CAG GTA-3”)和5SRNAR(5’-ACC GCATCC CGT CTG AT-3’)各2.5μL，Ex Taq TM DNA polymerase 1.25U，1×PCR buffer，Template 25ng，用ddH2O补齐至50μL。IGS2扩增反应条件为94℃变性1min，60℃复性1min，72℃延伸3min；共35个循环，72℃补平7min。

3、IGS2的限制性内切酶酶切：限制性内切酶应用BsuRI、Hin6I、RsaI、Bsh1236I(上海生工产品)。酶切体系中限制性内切酶(10U/μL)1μL，PCR产物6μL，10×buffer 1μL，用ddH2O补齐至10μL。置于37℃下对IGS2扩增产物酶切4小时。2.0％琼脂糖凝胶电泳2小时，使用Gel Doc EQ Gel Documentation System记录实验结果。

数据处理采用Quantity One分析软件进行数据处理和分析。

首先对菌株的IGS2进行扩增，然后采用BsuRI、Hin6I、RsaI、Bsh1236I四种限制性内切酶对IGS2产物进行酶切，可以将菌株的IGS2产物切成片断大小和数量不同的片断，电泳后可以直观的将菌株与其它白灵菇菌种进行区别。各种酶切的结果见下：

菌株的IGS2经BsuRI酶切，生成大小为1121bp、611bp、439bp、264bp、221bp和189bp共6个片断；菌株的IGS2经Hin6I酶切，生成大小为2311bp、380bp和230bp共3个片断；菌株的IGS2经RsaI酶切，生成大小为1688bp和687bp共2个片断；菌株的IGS2经Bsh1236I酶切，生成大小为2264bp和719bp共2个片断。

电泳结果可参见图1、图2、图3、图4，其中，图中J代表菌株，M代表λDNA/HindIII+EcoRI。

【实施例3】母种的制备

培养基采用PDA综合培养基。

在无菌室内，取白灵菇菌种约黄豆大小接入试管斜面培养基上，放25-28℃恒温培养箱中培养，培养期间常检查，去除污染试管，培养7-9天，白灵菇菌丝布满试管斜面培养基。菌丝浓白，粗壮，绒毛状，气生型。

【实施例4】原种的制备

培养基配方：玉米粒99％，石膏1％。

制作方法：将玉米过滤，去除霉粒、破粒和杂物，放入清水中浸泡，使其吸足水分，温度在10-20℃时，浸泡12-18小时；温度在20℃以上时，浸泡8-12小时。浸泡后放沸水中温火煮至无白心为准，冷却至30℃以下；按比例称好石膏，再加玉米粒，混合均匀。分别装入500毫升或750毫升菌种瓶，15磅压力灭菌2小时。冷至30℃以下时接入试管斜面菌种，每支试管斜面菌种分接4-5瓶，放25-28℃恒温培养，培养25-30天菌丝体布满培养斜面，菌丝体浓白，健壮。由此制得原种。

【实施例5】栽培种的制备

栽培种培养基配方：棉籽壳62％，玉米粒30％，麦麸5％，石膏1％，石灰2％，含水量70％。

制作方法是：玉米粒的处理方法与制作原种时相同。按照配方比例混合均匀，装入15×25cm的菌种袋内，12磅压力锅灭菌2小时。冷却到30℃以下接入菌种。每瓶原种接种15袋栽培种，在22-25℃环境中培养，培养30-35天，菌丝体布满培养基，菌丝体浓白、健壮，制得栽培种。

【实施例6】栽培种生产

栽培袋配方：棉籽壳73％，木屑10％，玉米粉7％，麦麸7％，石膏1％，石灰2％。

培养料按照实施例5方法发酵后，装栽培袋。装袋要求压实培养料，每袋重400-500克(干料)，封口采用两端折叠，线绳扎活口，有利于防止杂菌污染。栽培袋入常压灭菌锅，要求按口字形堆码，以利于蒸汽流通，灭菌彻底，灭菌时间以设在最下一层培养袋下四周同一水平的排气孔同时出气，保持10小时。若低于10小时，则底部菌袋灭菌不彻底，不利于白灵菇发菌，或造成杂菌污染。

培养袋灭菌后，将其搬入消过毒的冷室内冷却，当袋内温度降至30℃以下时，搬入接菌室内，接种前4小时，气雾灭菌，开紫外灯灭菌40分钟。接种操作人员须用酒精棉球擦手，菌种瓶用0.1％高锰酸钾液清洗消毒，接种工具镊子按常规方法灭菌。接种时一人解开培养袋口，一人用镊子把菌种夹入培养袋内。每接完一瓶菌种，镊子重新消毒一次，接种过程中，镊子不能与菌种以外的任何物件接触，以避免污染，封口用常规方法，接种为栽培袋两端接种。

栽培袋接种后，将栽培袋放入已消毒的培养室内墙式码放。根据不同季节，行距在5-30厘米之间，发菌时培养室要通风避光，温度保持在23-27℃，25℃为最适宜温度。当菌丝从接种处生长到培养袋三分之一时翻动栽培袋，上面的栽培袋放下层，下层栽培袋放上层。注意培养室的通风，利于菌丝生长，30-40天菌丝长满培养袋，对栽培袋定期检查，发现污染菌袋，检出处理。

当菌丝长满培养袋后，转入出菇棚进入出菇管理。出菇棚地面和墙壁要用PH值为13的石灰水上清液喷洒消毒，然后进行墙式码放，码放八层，行距60厘米，棚内相对湿度80-90％，温度控制在7-18℃。并保证每天15-18℃的时间不少于10小时，光照在400-1800LUX散射光的条件保持8-10小时。保持出菇棚有良好的通风换气条件，特别在气温较低的季节，每天上午、下午需要通风换气一次。当子实体原基形成米粒大小时，及时解开栽培袋口。当子实体长到豌豆大小时要挽口放菇，掌握好放菇时间是保证菇形的关键，约15-20天，子实体长大可采收。

Claims (3)

1、一种白灵菇菌种，其特征在于通过对新疆野外的野生白灵菇菌种经过人工驯化而成，在中国普通微生物中心保藏，保藏编号是CGMCC №0347。

2、根据权利要求1所述的白灵菇菌种，其特征在于其IGS2经BsuRI酶切，生成大小为1121bp、611bp、439bp、264bp、221bp和189bp共6个片断；经Hin6I酶切，生成大小为2311bp、380bp和230bp共3个片断；经RsaI酶切，生成大小为1688bp和687bp共2个片断；经Bsh1236I酶切，生成大小为2264bp和719bp共2个片断。

3、权利要求1所述的白灵菇菌种的栽培方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)母种的制备：培养基采用PDA综合培养基；

(2)原种的制备：培养基配方：玉米99％，石膏1％；

(3)栽培种的制备：栽培种培养基配方：棉籽壳62％，玉米粒30％，麸皮5％，石膏1％，石灰2％，含水量70％；

(4)栽培种生产：栽培袋配方：棉籽壳73％，木屑10％，玉米粉7％，麦麸7％，石膏1％，石灰2％。

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