CN1686256A - 草豆蔻提取物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及草豆蔻提取物及其医药新用途，草豆蔻总提取物或脂溶性部位具有显著的抗幽门螺旋杆菌作用，对幽门螺旋杆菌引起的胃粘膜损伤具有修复作用，可用于制备抗幽门螺旋杆菌药物和治疗与幽门螺旋杆菌感染相关疾病的药物。

Description

草豆蔻提取物及其用途

技术领域

本发明涉及草豆蔻提取物及其用途，具体涉及草豆蔻提取物及其在制备抗幽门螺旋杆菌感染药物中的用途以及在制备治疗与幽门螺旋杆菌感染相关疾病的药物中的用途。

背景技术

慢性活动性胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡、胃淋巴组织(MALT)淋巴瘤和胃癌是严重危害人类健康及生命的疾病，医学研究证实以上疾病均与幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori，简称Hp)感染有关。资料显示，全世界约有50％以上的人口感染幽门螺旋杆菌，以发展中国家尤为严重，成年人幽门螺旋杆菌感染率达60-80％。1994年国际癌症研究机构(IARC)将Hp列为人类I类致癌源。目前国内外都采用抗内分泌药及抗生素联合疗法来治疗Hp的感染，但由于副作用大，病人耐受性差，又易产生耐药性，疗效及应用受到了影响。因此，寻找抗Hp感染和治疗与其相关疾病的新途径成为引人关注的研究课题。

姜科山姜属植物草豆蔻(Alpinia katsumadai Hayata)为常用传统中药，在临床上常用于治疗脘腹胀痛，脾胃寒湿，呕吐泄泻。现代药理学研究表明，草豆蔻煎剂低浓度对豚鼠离体肠管呈兴奋作用，浓度高于1％及挥发油饱和水溶液则产生抑制作用；巴甫洛夫小胃试验中，草豆蔻10％水浸液灌入主胃，测小胃分泌情况，发现对胃总酸排出量无影响，但胃蛋白酶活性显著升高。

有关草豆蔻及其提取物在制备抗幽门螺旋杆菌感染药物和治疗与幽门螺旋杆菌感染有关疾病的药物中的应用目前尚无文献报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种草豆蔻提取物，该提取物具有良好的抗幽门螺旋杆菌和修复幽门螺旋杆菌引起的胃粘膜损伤作用，可用于制备抗幽门螺旋杆菌感染药物和治疗与幽门螺旋杆菌感染相关疾病的药物。

本发明所述的治疗与幽门螺旋杆菌感染相关疾病的药物具体涉及治疗由幽门螺旋杆菌感染而引起的活动性胃炎、胃糜烂的药物；治疗幽门螺旋杆菌感染而引起的胃溃疡(无论有无并发症如胃出血、胃穿孔)、十二指肠溃疡的药物；治疗由幽门螺旋杆菌感染而引起的胃淋巴组织(MALT)淋巴瘤、早期胃癌及中度肠腺化生或不典型增生的药物。

本发明中草豆蔻的药用部位为种子，在制备上述用途的药物时，可以将草豆蔻的种子进行提取，将提取物制成药物。本发明所述的草豆蔻提取物指以草豆蔻(Alpinia katsumadaiHayata)的种子为原料，采用本领域已知的常规化学提取方法制备得到总提取物或脂溶性部位。根据本发明，将草豆蔻的种子粉碎，用有机溶剂或/和水提取制备得到总提取物，所用的有机溶剂可采用醇类，如乙醇，甲醇等，其中优选95％(体积比)乙醇。

将总提取物溶于水后，分别以石油醚、酯类(或卤代烃类)溶剂萃取，取酯类(或卤代烃类)溶剂萃取相，回收溶剂后干燥即得到脂溶性部位，所用的酯类或卤代烃类溶剂可以采用乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷等，其中优选乙酸乙酯。脂溶性部位也可以直接通过二氧化碳(CO₂)超临界萃取获得。

本发明中草豆蔻提取物以二苯基庚酮类化合物作为质量控制的指标成分。草豆蔻总提取物中二苯基庚酮类化合物的相对含量大于等于10％，其中优选大于等于25％；草豆蔻脂溶性部位中二苯基庚酮类化合物的相对含量大于等于30％，其中优选大于等于50％。草豆蔻提取物中二苯基庚酮类化合物的相对含量采用高效液相色谱法进行分析，测定时，将草豆蔻提取物样品配制成5mg/ml的甲醇溶液，色谱柱为3.9×150mm Symmetry C18(5μm)，柱温为20℃，流动相为35-100％乙睛水溶液，流速1mL/min，DAD检测器，检测波长为254和200nm，检测时间0-20min，用外标法测定保留时间为7.0至11.5min范围内的成分含量，以254nm色谱图中峰面积法计算出草豆蔻提取物中二苯基庚酮类化合物的相对含量。

以草豆蔻的提取物为活性部位，配以适当载体或赋形剂可以制成片剂、颗粒剂、胶囊或口服液等常用的药物制剂。

下面通过药理试验来说明本发明所述草豆蔻提取物的生物活性：

一、草豆蔻提取物的体外抗幽门螺旋杆菌效果实验

1、实验材料：

实验菌株：Hp-SS1幽门螺旋杆菌菌株(购自中山医科大学附属医院消化科)；Hp-F44幽门螺旋杆菌菌株和Hp-沪东幽门螺旋杆菌菌株(来自上海生物工程中心)。

待测样品：根据实施例1的方法制备的草豆蔻总提取物及草豆蔻脂溶性部位。待测样品以1％DMSO水溶液稀释，浓度梯度设置为1000μg/ml、500μg/ml、250μg/ml、125μg/ml、62.5μg/ml、31.2μg/ml、15.6μg/ml、7.80μg/ml、3.90μg/ml和2.0μg/ml。

阳性对照物为甲硝唑，以1％DMSO水溶液稀释，浓度梯度设置为40μg/ml、20μg/ml、10μg/ml和5.0μg/ml。

2、实验方法：

移取各浓度的待测样品和阳性对照物各0.5ml，分别加入到4.5ml营养琼脂培养基中，混合均匀，倾注成无菌平板，并接种10⁷CFU/ml处于对数生长的实验菌株。微需氧培养5天后，盲刮转移至无药培养基中，37℃微需氧培养4-5天，观察有无幽门螺旋杆菌生长，测得最低杀菌浓度(Minimum Bactericidal Concentrations，MBCs)。

3、实验结果

实验结果见表1。

                 表1草豆蔻提取物的体外抗幽门螺旋杆菌(Hp)效果

样品	对不同Hp菌株的最低杀菌浓度(MBCs)(μg/mL)
				Hp-SS1	Hp-F44	Hp-沪东
	阳性对照(甲硝唑)草豆蔻总提取物草豆蔻脂溶性部位	1.050.025.0	1.050.025.0				1.050.050.0

实验结果表明，草豆蔻的总提取物及脂溶性部位对三种实验Hp菌株的MBCs均低于100μg/mL，均显示有抗幽门螺旋杆菌作用，较之阳性对照稍弱。

二、草豆蔻脂溶性部位的小鼠体内药理学实验

二级C57BL/6小鼠60只，体重20-25g，随机挑选10只，设为未感染组，其余小鼠用10⁹CFU/ml以上菌浓的幽门螺旋杆菌(Hp-SS1)灌胃，实现体内的Hp定植。将Hp定植的小鼠随机分为5个实验组，每组10只小鼠。实验组包括未感染组、空白对照组、阳性药物对照组和草豆蔻脂溶性部位实验组，其中草豆蔻脂溶性部位实验组包括草豆蔻脂溶性部位的高剂量组(600mg/kg)、中等剂量组(400mg/kg)和高剂量加甲硝唑(600mg/kg+104mg/kg)组；阳性对照组采用当前西医使用的三联疗法：以奥美拉唑10.4mg/kg、克拉霉素130mg/kg和甲硝唑208mg/kg联合使用；空白对照组为相应的赋形剂。以上实验药物按照每只小鼠20g，给药体积为0.5mL计算，用0.6％羧甲基纤维素钠-色拉油(1:1)配制成相应浓度的悬浮液，经胃管灌服，每天两次，连续给药14天。停止给药30天后，于无菌室内解剖小鼠，作以下检查：

(1)快速尿素酶试验和细菌培养法：检查幽门螺旋杆菌(Hp)的根除率。

(2)组织学检查：检查幽门螺旋杆菌感染引起的小鼠胃粘膜损伤(包括糜烂、腺体增生和形成腺瘤等)的恢复情况。

快速尿素酶试验和细菌培养法以及组织学检查的操作参照文献方法(胡伏莲，周殿元主编，幽门螺旋杆菌感染的基础与临床，北京：中国科学技术出版社，2002)。

实验结果见表2。

                      表2草豆蔻脂溶性部位的小鼠体内药理实验结果

组别	Hp根除率(％)	治疗效果
			未感染组阳性对照组空白对照组草豆蔻脂溶性部位高剂量组草豆蔻脂溶性部位高剂量+甲硝唑组草豆蔻脂溶性部位中等剂量组	-60010010070	未见腺体增生等病变30％部分恢复，70％仍有中度和重度腺体增生100％胃幽门黏膜上皮腺体增生，形成腺瘤，核***多见80％基本恢复正常，20％完全恢复70％基本恢复正常，30％完全恢复40％基本恢复正常，60％部分恢复

以上药效学试验证明，较之于阳性对照组，草豆蔻的脂溶性部位在幽门螺旋杆菌感染引起的胃粘膜损伤动物模型上显示较强的治疗作用。

三、草豆蔻提取物的小鼠毒性试验

按常规方法(徐叔云，卞如濂，陈修主编，药理实验方法学，北京：人民卫生出版社，1985)，将小鼠随机分组，各组分别灌服一定量的草豆蔻的总提取物或脂溶性部位，观察7天，测得草豆蔻总提取物及脂溶性部位的LD₅₀分别为6.9和4.2g/kg。

小鼠急性毒性试验证明，草豆蔻总提取物及脂溶性部位基本安全无毒。

有益效果：

本发明为传统常用中药草豆蔻发掘了新的医药用途，开拓了一个新的应用领域，其总提取物和脂溶性部位将有很好的开发和药用前景。常用中药草豆蔻的原料来源丰富、价廉，其总提取物和脂溶性部位制备工艺简单，并可制成片剂、口服液、胶囊、颗粒剂等多种口服剂型，使用方便且基本安全无毒。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。

实施例1草豆蔻总提取物及草豆蔻脂溶性部位的制备

草豆蔻种子5.0Kg粉碎后，依次用12L、10L和10L的95％乙醇常温浸泡提取三次，每次3天，合并提取液，回收溶剂后干燥，得到450-600g棕色粘稠膏状物，即草豆蔻总提取物，经高效液相色谱分析，该总提取物中二苯基庚酮类化合物的相对含量为23-37％。将草豆蔻总提取物溶于水，然后分别以石油醚、乙酸乙酯萃取，得石油醚部分、乙酸乙酯部分和水溶性部分。取乙酸乙酯部分，经回收溶剂干燥，185-225克黄色粘稠膏状草豆蔻脂溶性部位，其提取率为3.7-4.5％，经高效液相色谱分析，该脂溶性部位中二苯基庚酮类化合物的相对含量为39-63％。

实施例2草豆蔻总提取物及草豆蔻脂溶性部位的制备

草豆蔻种子5.0Kg粉碎后，依次12L、10L和10L的80％含水甲醇常温浸泡提取三次，每次3天，合并提取液，回收溶剂后干燥，得到550-700g深棕色粘稠膏状物，即草豆蔻总提取物，经高效液相色谱分析，该总提取物中二苯基庚酮类化合物的相对含量为18-32％。将草豆蔻总提取物溶于水，然后分别以石油醚、氯仿萃取，得石油醚部分、氯仿部分和水溶性部分。取氯仿部分，经回收溶剂干燥，得到160-210克黄色粘稠膏状物，即草豆蔻脂溶性部位，其提取率为3.2-4.2％，经高效液相色谱分析，该脂溶性部位中二苯基庚酮类化合物的相对含量为34-58％。

实施例3草豆蔻片剂的制备

按照实施例1所述的方法制备得到草豆蔻脂溶性部位。取草豆蔻脂溶性部位200g、羟丙纤维素120g、微粉硅胶30g混合均匀，用10％预胶化淀粉浆作为粘合剂，湿法制粒，烘干，加入适量硬脂酸镁混合，压制成1000片片剂。

实施例4草豆蔻颗粒剂的制备

按照实施例1所述的方法制备得到草豆蔻脂溶性部位。取草豆蔻脂溶性部位400g、蔗糖250g、羟丙纤维素120g、微粉硅胶30g、枸橼酸、碳酸氢钠适量混合均匀，以适量70％乙醇作湿润剂，湿法制粒，过筛，烘干，分装制成2000袋颗粒剂。

实施例5草豆蔻硬胶囊的制备

按照实施例1所述的方法制备得到草豆蔻脂溶性部位。取草豆蔻提取物的脂溶性部位400g、羟丙纤维素120g、微粉硅胶30g、枸橼酸、碳酸氢钠适量混合均匀，以适量70％乙醇作湿润剂，湿法制粒，过筛，烘干，加入适量硬脂酸镁，混合均匀，分装制成4000粒硬胶囊。

实施例6草豆蔻口服液的制备

按照实施例1所述的方法制备得到草豆蔻脂溶性部位。取蒸馏水适量，加入100g聚山梨酯-80制成溶液，再加入草豆蔻脂溶性部位400g，边加热边搅拌使溶解，另外，将蔗糖20g、防腐剂适量溶于蒸馏水，在搅拌下缓缓加入上述溶液中，加蒸馏水至1000ml，混匀，冷却，过滤，分装为200支，灭菌，制得口服液。

Claims (7)

1、一种草豆蔻提取物，其特征在于所述提取物为由草豆蔻种子提取得到的草豆蔻总提取物或草豆蔻脂溶性部位，其中草豆蔻总提取物中二苯基庚酮类化合物相对含量大于等于10％；草豆蔻脂溶性部位中二苯基庚酮类化合物相对含量大于等于30％。

2、权利要求1所述的草豆蔻提取物在制备抗幽门螺旋杆菌感染的药物中的用途。

3、权利要求1所述的草豆蔻提取物在制备治疗与幽门螺旋杆菌感染相关性疾病的药物中的用途。

4、根据权利要求3所述的用途，其特征在于所述与幽门螺旋杆菌感染相关性疾病指活动性胃炎或胃糜烂。

5、根据权利要求3所述的用途，其特征在于所述与幽门螺旋杆菌感染相关性疾病指胃溃疡或十二指肠溃疡。

6、根据权利要求3所述的用途，其特征在于所述与幽门螺旋杆菌感染相关性疾病指胃淋巴组织淋巴瘤或早期胃癌。

7、根据权利要求3所述的用途，其特征在于所述与幽门螺旋杆菌感染相关性疾病指中度肠腺化生或不典型增生。