CN102058815A - 草豆蔻油在制备治疗细菌感染性疾病的药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了草豆蔻油在制备治疗细菌感染性疾病的药物中的用途。本发明还提供了一种治疗细菌感染性疾病的药物组合物。本发明药物对革兰氏阳性菌和阴性菌具有抗菌活性,对其中的耐药株也有较强的抑菌作用,并且在体内同样具有良好的抗菌作用,能有效治疗临床革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中的各类菌株所致的感染性疾病,为临床提供了一种新的用药选择。
Description
技术领域
本发明涉及细菌感染性疾病,具体地,是在制备治疗细菌感染性疾病的药物中的用途。
背景技术
细菌感染性疾病为目前常见的感染性疾病之一,它是细菌在一定条件下侵入人体一些部位时,引发的感染性疾病,例如因侵入部位不同,会发生各类腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎、阑尾炎、肺炎、新生儿脑膜炎等;还可侵入血液,进入体循环,从而引起宿主发热、毒血症、败血症、心包炎、肝周炎、气囊炎等,甚至会引起休克死亡。
目前,针对细菌感染性疾病多采用抗生素治疗。抗生素的发展和运用曾使细菌性疾病得到有效的控制,但随之而来的细菌耐药性等难题给广大国内外科技工作者提出了更大的挑战,积极开发新的抗菌药及从天然药物中寻找“抗生素替代品”等研究成了目前国内外的研究热点和难点。中药作为祖国医学的宝贵遗产,具有独特的资源优势,且毒副作用小、不易产生抗药性,因此,从中药中寻找抗生素替代品显得尤为必要。
草豆蔻为姜科山姜属植物草豆蔻Alpinia katsumadai Hayata的干燥近成熟种子,主产于广西、广东等地。中医认为,其性温,味辛,归脾、胃经,有燥湿,行气、温中、止呕等功效,用于寒湿阻中证和中寒吐泄证,适用于胸腹满闷,不思饮食,或胸闷脘痛,气逆作呕,噎膈反胃及痰饮积聚等。含有挥发油和黄酮类物质,其挥发油为黄色油状透明物质,具有特殊的刺激性气味。
研究表明,草豆蔻中的有效成分主要为黄酮类、双苯庚酮类等化合物。对草豆蔻提取物的药效作用也有报道,如专利申请号:200510075386.3,发明名称:草豆蔻提取物及其制备,该发明涉及一种草豆蔻提取物及其制备,本发明的草豆蔻提取物,其特征在于,所述提取物中包括草豆蔻乙醇提取物0.01~10份,草豆蔻挥发油0.01~4份,还可含有草豆蔻水溶性提取物0.01~15份。其中草豆蔻提取物用于治疗胃排空延缓、肠道运动延缓引起的消化不良症,或称为胃肠道运动障碍以及抗炎镇痛的作用。
目前还未见将草豆蔻油用于治疗细菌感染性疾病的相关报道。
发明内容
本发明的技术方案是提供了草豆蔻油的新用途。本发明还提供了一种治疗细菌感染性疾病的药物组合物。
本发明提供了草豆蔻油在制备治疗细菌感染性疾病的药物中的用途。
进一步地,所述的细菌感染性疾病是指由革兰氏阴性菌、阳性菌引起的感染性疾病。
进一步地,所述的细菌感染性疾病是指由临床耐药菌株引起的感染性疾病。
其中,所述的草豆蔻油来源于姜科山姜属植物草豆蔻Alpinia katsumadai Hayata的种子提取的挥发油。
本发明还提供了一种治疗细菌感染性疾病的药物组合物,它是由草豆蔻油为活性成分,加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂;草豆蔻油是通过如下方法制备得到的:取草豆蔻,粉碎成粗粉,加入10-14倍重量的蒸馏水,浸泡1-5小时后,采用水蒸气蒸馏法提取2-6小时,即得本发明草豆蔻油。
其中,所述的药剂是口服制剂、注射制剂、乳池灌注制剂或外用制剂,其中,乳池灌注制剂指适用于乳池灌注的各类制剂。
其中,所述的制剂中含有草豆蔻油的含量为0.1%~100%w/w。
本发明所指的细菌感染性疾病是指由各种革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、人葡萄球菌、溶血葡萄球菌、科氏葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、腐生葡萄球菌、耳葡萄球菌、表皮葡萄球菌、木糖葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、链球菌、肠球菌、巨型球菌、棒状杆菌、绿脓杆菌、吉氏库特氏菌等)、革兰氏阴性菌(大肠埃希菌、沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌、鲁氏不动杆菌、铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、少动鞘氨醇单胞菌、豚鼠气单菌、产吲哚金黄杆菌、弗氏志贺氏菌、普通变形菌等)和芽孢杆菌(弯曲芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、矮小芽孢杆菌等)所引起的的人和动物(马、牛、羊、猪、鸡、鸭、鹅、鱼等)各种细菌感染性疾病,或病毒病引发的细菌性并发感染等各类疾病,具体包括大肠杆菌病、沙门氏菌病、耶尔辛氏菌病、弯曲菌病、布鲁氏菌病、鼻疽、类鼻疽、绿脓杆菌病、葡萄球菌病、链球菌病、李氏杆菌病、棒状杆菌病、丹毒、破伤风等各类***共患的细菌性传染疾病。
本发明所指的临床耐药菌株是指金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、吉氏库特氏菌、巨型球菌、链球菌、棒状杆菌、粪肠球菌、芽孢杆菌、大肠埃希菌、单胞菌、鲁氏不动杆菌、阴沟肠杆菌、产吲哚金黄杆菌、弗氏志贺氏菌或普通变形菌等细菌中,对β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、喹诺酮类等5类抗生素已产生不同程度的抗药性的耐药菌株。
本发明药物对革兰氏阳性菌和阴性菌具有抗菌活性,对其中的耐药株也有较强的抑菌作用,并且在体内同样具有良好的抗菌作用,能有效治疗临床革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中的各类菌株所致的感染性疾病,为临床提供了一种新的用药选择。
具体实施方式
实施例1 本发明草豆蔻油的制备
取草豆蔻,粉碎过20-40目筛,加入10-14倍重量的蒸馏水,浸泡1-5小时后,采用水蒸气蒸馏法提取2-6小时,即得本发明草豆蔻油。
本发明草豆蔻油也可按照药典(2005年版)附录XD挥发油测定法提取,还可采用有机溶剂提取、超临界CO2萃取等现有技术进行提取,或者通过购买市售产品获得。实施例1对本发明草豆蔻油的制备方法,不应理解为是对本发明保护范围的限制,凡基于上述技术思想,利用本领域普通技术知识和惯用手段所做的修改、替换、变更均属于本发明的范围。
以下通过药效学试验进一步证明本发明的有益效果。
试验例1
1材料及仪器
1.1实验仪器
多点接种仪(日本佐久间制作所,SAKUMA MIT-P型),电热恒温水浴锅(北京同华医疗器械厂,DSY-1-6孔),实验室用高压灭菌器(SANYO,MLS-3780型),CO2INCUBATOR(SANYO,MOC-15A),节能净化工作台(成都新光非兰特净化工程有限公司)。
1.2实验菌株
①标准菌株:大肠埃希菌标准株(ATCC25922)和金黄色葡萄球菌标准株(ATCC25923);大肠埃希菌标准株[CMCC(B)44102]和金黄色葡萄球菌标准株[CMCC(B)26003];绿脓杆菌标准株(NCTC10662)。
②受试菌株:见表1。
采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的K-B法测定其对β-内酰胺类(青霉素、头孢噻吩、头孢噻肟)、氨基糖苷类(链霉素、庆大霉素);大环内酯类(红霉素;四环素类:四环素)、喹诺酮类(环丙沙星)共5类抗菌药物的敏感性,其耐药性分析结果见表2。
表1:受试菌株的种类和数量
表2:受试菌株对8种抗菌药物的耐药性分析
单位:株
注:S表示敏感,I表示中介,R表示耐药。多重耐药性试验是在已筛选出耐药菌的前提下进行的,分别对每个菌株进行了1-5类抗生素多重耐药的筛选。
1.3药物
试验药物:本发明药物。阳性药物:注射用头孢噻肟钠(四川制药制剂有限公司,批号:080301),注射用盐酸头孢吡肟(山东罗欣药业股份有限公司,批号:0903238)。
1.4实验动物
小鼠(SPF级)[成都中医药大学实验动物研究中心,生产许可证号:SCXK(川)2008-11,使用合格证号:SCXK(川)2008-049]。
1.5培养基、试剂及耗材
Mueller-Hinton agar(OXOID,批号:729683),Mucin from porcine stomach,Type II(SIGMA,批号:108k0010),营养琼脂(北京奥博星生物技术有限责任公司,批号:20082502),氯化钠(天津市大茂化学试剂厂,批号:20080328),吐温-80(成都市科龙化工试剂厂,批号:20080925),一次性无菌培养皿(江苏康健生物有限公司),Mcfarland Standard(bioMeriéux,Inc.批号:821772701)等。
2试验方法
2.1体外抑菌活性试验
含药平板的制备:采用倍比稀释法用1%吐温-80对草豆蔻油进行稀释,分别稀释成1∶2~1∶256共8个梯度,在一次性无菌培养皿中分别加入不同浓度梯度的药液1ml和14ml灭菌的MH培养基,即各药物在平板中的稀释梯度分别为29.92mg/ml~0.23mg/ml,充分混匀,烘干后备用,以平板内加入等量生理盐水代替药物制备阳性对照平板。
菌液配置:将受试菌株和药敏质控菌株用无菌生理盐水调至菌液浓度1.5×106CFU/ml。
体外抑菌活性测定:采用多点接种仪将实验菌株的菌液加入不同浓度梯度的含药平板和阳性对照平板,并以生理盐水代替菌液作阴性对照。37℃恒温培养18~24h,观察各菌株在含不同浓度梯度药物平板中的生长情况。
结果判定及数据统计:以无细菌生长平板内药物的最小浓度为此药对该菌株的最低抑菌浓度(MIC),并统计药物抑制同种属50%和90%细菌时的最小浓度,即MIC50和MIC90。
2.2本发明药物的体内抗菌试验
实验菌株:选择金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌各1株,分别代表革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。(金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌为两类典型的细菌,感染率较高,耐药性较强,因此,选择这两类细菌分别作为革兰氏阳性、阴性菌的代表,进行体内抑菌试验;其中,该株金黄色葡萄球菌对青霉素和红霉素耐药,大肠埃希菌对链霉素和四环素耐药。)
菌株毒力的测定:将实验菌株于37℃恒温培养至对数期,采用2倍稀释法用生理盐水分别对其进行稀释,配置成不同浓度梯度的菌液。取1份稀释的菌液与1份10%胃膜素混合,对小鼠进行腹腔注射,并以5%胃膜素做阴性对照。在对照小鼠不死亡的前提下,记录各剂量组小鼠24~48h内的死亡率,测定SPF小鼠全部死亡的最低细菌量(稀释度),即该菌液的最小致死量(MLD)。
体内抗菌试验:选择标准体重的KM小鼠(SPF),雌雄各半,每组10只。以高、中、低3个剂量分别肌肉注射小鼠,连续预防给药6天,并在第6天给药的同时进行攻毒,即对小鼠分别腹腔注射金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌。同时以生理盐水代替药物为模型组;以既不给药也不攻毒为空白组;以只注射不含细菌的5%胃膜素为胃膜素对照组。
数据统计:观察和记录两周内小鼠的死亡或存活数,并统计其存活率。
3结果与分析
3.1本发明药物的体外抑菌活性
采用琼脂平板二倍稀释法测定了本发明药物对120株33种乳腺炎病原菌和标准菌株的MIC,统计分析其对革兰氏阳性菌(葡萄球菌、链球菌、巨型球菌、吉氏库特氏菌、芽孢杆菌)和革兰氏阴性菌(大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、鲁氏不动杆菌、产吲哚金黄杆菌、单胞菌属)的MIC50和MIC90,其中对革兰氏阳性菌的体外抑菌活性见表3,对革兰氏阴性菌的体外抑菌活性见表4。
表3:发明药物对革兰氏阳性菌的体外抑菌活性
单位:mg/ml
由上表可知,本发明药物对革兰氏阳性菌的体外抑菌活性较强,MIC50和MIC90均主要介于0.94~1.87mg/ml。除对葡萄球菌不同菌株的抑菌活性差异较大外,MIC介于0.23~3.74mg/ml;而对其余同种属不同菌株的抑菌活性差异较小,MIC主要介于0.94~1.87mg/ml,仅浮动1个浓度梯度。
表4:发明药物对革兰氏阴性菌的体外抑菌活性
单位:mg/ml
注:“-”表示药物在平板中的最大浓度29.92mg/ml时无抑菌活性。
本发明药物对革兰氏阴性菌的抑菌活性普遍较强,对于不同种属的菌株,其抑菌活性差异较大,其中对大肠埃希菌的抑菌活性最差,17株大肠埃希菌中对7株大肠埃希菌在最大浓度29.92mg/ml时无抑菌活性;其次为单胞菌,12株单胞菌中对4株菌在最大浓度29.92mg/ml时无抑菌活性;再次为普通变形菌(29.92mg/ml)和阴沟肠杆菌(7.49~29.92mg/ml),抑菌活性相对较高的是弗氏志贺氏菌(0.23mg/ml)、产吲哚金黄杆菌(0.47~14.96mg/ml)和鲁氏不动杆菌(0.47~14.96mg/ml)。此外,本发明药物对同一种属不同菌株的抑菌活性差异较大,如对单胞菌不同菌株的抑菌活性差异较大,MIC介于0.96~30.70mg/ml。
对比分析表3和表4,发现本发明药物除对7株大肠埃希菌菌株和4株单胞菌无抑菌活性外,对其余革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有较强的体外抑菌活性,且对革兰氏阳性菌的活性明显强于对革兰氏阴性菌的抑菌活性。
3.2体内抗菌活性
采用肌肉注射的方式对SPF小鼠进行预防给药6天,同时在第6天分别用金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌对小鼠进行攻毒,并观察其攻毒后14d内小鼠的死亡情况,对其进行统计分析。结果见表5。
表5:发明药物对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的体内抗菌活性
由上表可知,草豆蔻油在高、中、低三个剂量对分别由金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌感染模型小鼠均有较强的保护力,并呈量效关系。其中高剂量对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌引起的感染小鼠保护力均达100%,中剂量对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌引起的感染小鼠保护力均为90%;低剂量对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌引起的感染小鼠的保护力分别为90%和40%。此外,对比分析药物对两种不同菌种诱发的感染小鼠的保护力情况,发现随着剂量的降低,相同量的药物对金葡菌感染模型小鼠保护力强于大肠埃希菌感染模型小鼠,也即本发明药物对以金葡菌为代表的革兰氏阳性菌的体内抗菌活性强于以大肠埃希菌为代表的革兰氏阴性菌,与本发明药物的体外抗菌活性结果一致。说明本发明药物在体内外对革兰氏阳性菌的抗菌活性均强于对革兰氏阴性菌的活性。
本发明药物对革兰氏阳性菌和阴性菌具有抗菌活性,对其中的耐药株、敏感株也有较强的活性,并且在体内同样具有良好的抗菌作用,能有效治疗临床革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中的各类菌株所致的感染性疾病,为临床提供了一种新的用药选择。
Claims (9)
1.草豆蔻油在制备治疗细菌感染性疾病的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述的细菌感染性疾病是指由革兰氏阴性菌、阳性菌引起的感染性疾病。
3.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述的细菌感染性疾病是指由临床耐药菌株引起的感染性疾病。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的用途,其特征在于:所述的草豆蔻油来源于姜科山姜属植物草豆蔻Alpinia katsumadai Hayata的种子提取的挥发油。
5.根据权利要求1-3任意一项所述的用途,其特征在于:所述的草豆蔻油是通过如下方法制备得到的:取草豆蔻,粉碎成粗粉,加入10-14倍重量的蒸馏水,浸泡1-5小时后,采用水蒸气蒸馏法提取2-6小时,即得草豆蔻油。
6.一种治疗细菌感染性疾病的药物组合物,其特征在于:它是由草豆蔻油为活性成分,加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
7.根据权利要求6所述的药物组合物,其特征在于:所述的草豆蔻油是通过如下方法制备得到的:取草豆蔻,粉碎成粗粉,加入10-14倍重量的蒸馏水,浸泡1-5小时后,采用水蒸气蒸馏法提取2-6小时,即得草豆蔻油。
8.根据权利要求6或7所述的药物组合物,其特征在于:所述的药剂是口服制剂、注射制剂、乳池灌注制剂或外用制剂。
9.根据权利要求8所述的药物组合物,其特征在于:所述的制剂中含有草豆蔻油的含量为0.1%~100%w/w。
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