CN1680240A

CN1680240A - 含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN1680240A
Application number: CN 200410026030
Authority: CN
Inventors: 汪云
Original assignee: Individual
Current assignee: Xi'an Tianxing Jian Natural Biological Products Co ltd
Priority date: 2004-04-09
Filing date: 2004-04-09
Publication date: 2005-10-12
Anticipated expiration: 2024-04-09
Also published as: CN100441555C

Abstract

本发明涉及一种含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物及其制备方法与应用。目前国内外大都采用有抗氧化作用的物质来延缓衰老，但效果不明显、稳定性不好、有一定的副作用；在中老年女性骨质疏松方面，单纯补钙效果不佳；在更年期综合症的药治疗方面，国内外采用激素替代疗法，但它有引起肿瘤发生的危险。本发明为含有白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物，含白藜芦醇的提取物可以从葡萄籽、皮或虎杖提取，含大豆异黄酮的提取物从大豆胚芽或豆粕提取。其具有延缓衰老、增加骨密度作用，因其具有***样活性，白藜芦醇和雌醇相似，大豆异黄酮和孕酮相似，其二者配伍能达到很好的效果，并且其无引发肿瘤的风险，因而本发明可以作为***替代物。

Description

含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物及其制备方法与应用

一、技术领域：

本发明涉及一种含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物及其制备方法与应用。

二、技术背景：

研究发现体内氧自由基的产生是衰老发展的重要因素之一，所以有效清除体内产生的氧自由基在抗衰老方面很重要。目前国内外大都采用有抗氧化作用的物质来延缓衰老，如维生素C、E及其它一些植物制剂；但是存在一些不足：如效果不明显、稳定性不好、有一定的副作用。

在中老年女性骨质疏松方面，传统的单纯补钙是没有明显效果的，因为这一人群的骨质疏松主要是由于卵巢分泌的***水平逐渐降低，而***又控制钙在骨骼上的沉积，它的减少会导致骨质疏松的发生。目前国内大都使用单纯补钙的方法；国外采用合成***补充的方法，但有很多副作用，使用受到很大限制。

在更年期综合症的药治疗方面，目前国内外采用激素替代疗法，就是补充合成***的方法。合成***虽然能有效治疗更年期综合症，但是它有引起肿瘤发生的危险，因此它的应用受到极大的限制。

三、发明内容：

本发明的目的在于提供一种具有延缓衰老、增加骨密度和作为***替代物的作用的含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物。

本发明的另一目的是提供含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物制备方法。

本发明的另一目的是提供含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物在延缓衰老、增加骨密度及作为***替代物中的应用。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物，其特殊之处在于它是由下述重量配比的原料组成：

含15％-20％的白藜芦醇提取物 140-220份

含20％-35％的大豆异黄酮提取物 60-120份

上述的含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物，其特殊之处在于：其中各原料的重量配比是：

含17％的白藜芦醇提取物 180份

含30％的大豆异黄酮提取物 90份

一种含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物的制备方法，其具体步骤如下：

(1)、所述的含白藜芦醇提取物的制备方法如下：

将葡萄籽、皮经纯净水冲洗，用70％乙醇60℃提取三次，每次2小时，醇提取液经过过滤，然后回收乙醇，浓缩提取液，浓缩液经过硅胶柱层析，洗脱液洗脱，在60-70℃、30分钟以上至波美度15的条件下浓缩，并在温度≥180℃，瞬间灭菌，喷雾干燥，将提取物成品，装入无菌袋，备用。

(2)、所述的含大豆异黄酮提取物的制备方法如下：

将大豆胚芽或豆粕用纯净水冲洗，用70％乙醇60℃提取三次，每次2小时，醇提取液经过过滤，回收乙醇、浓缩提取液，80％丙酮冷沉结晶，结晶用90％乙醇溶解，溶解液过滤，滤液回收乙醇，浓缩后，并在温度≥180℃，喷雾干燥，装入无菌袋，备用。

(3)、将葡萄籽、皮提取物，大豆提取物，按配方比例混匀灭菌，即得。

(1)所述的含白藜芦醇提取物的制备方法如下：

将虎杖根粉碎，用80％乙醇60℃提取三次，每次2小时，醇提取液经过过滤，然后回收乙醇，浓缩提取液。浓缩液加硫酸水解5小时后水洗3次，过滤，滤出物过氧化铝柱，洗脱液洗脱并结晶，真空干燥，将提取物成品装入无菌袋，备用，该提取物含有15％-20％的白藜芦醇。

(2)、所述的含大豆异黄酮提取物的制备方法如下：

(3)、将虎杖提取物，大豆提取物，按配方比例混匀灭菌，即得。

含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物在延缓衰老中的应用，该含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物具有抗衰老作用。

含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物在增加骨密度中的应用，该含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物具有增加骨密度作用。

含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物作为***替代物中的应用，该含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物具有作为***替代物的作用。

上述组合物内的白藜芦醇与大豆异黄酮的用量配比范围为：

白藜芦醇 0.2mg-5.0mg/公斤体重

大豆异黄酮 0.2mg-5.0mg/公斤体重

本发明相对于现有技术，其优点如下：

含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物具有很好的抗氧化活性，抗衰老效果好，且性质稳定，无副作用；

含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物具有***样活性，针对中老年女性的骨质疏松能从根本上达到改善作用，效果明显，而又无不良作用；

含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物有***样活性，但他们的分子结构完全不同；白藜芦醇和雌醇相似，大豆异黄酮和孕酮相似，其二者配伍能达到很好的效果。并且无引发肿瘤的风险，尤其白藜芦醇对***依赖肿瘤有对抗作用。因此该组方可以作为***替代药物；

本发明从葡萄籽、皮或虎杖提取含有白藜芦醇的提取物，从大豆胚芽或豆粕提取含有大豆异黄酮的提取物，其工艺简单，可以工厂化大规模生产；

本发明其组方合理，组合了两种物质的优点。

四、具体实施方式：

本发明含有白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物，含有白藜芦醇的提取物可以从葡萄籽、皮或虎杖提取，含有大豆异黄酮的提取物从大豆胚芽或豆粕提取；而本发明含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物具有***样活性，但他们的分子结构完全不同；白藜芦醇和雌醇相似，大豆异黄酮和孕酮相似，其二者配伍能达到很好的效果。并且无引发肿瘤的风险，尤其白藜芦醇对***依赖肿瘤有对抗作用。因此该组方不仅可以作为***替代物，还具有延缓衰老、增加骨密度的作用，下面将其作用实验数据分别列举如下：

报告一

本组合物可具有增加骨密度作用，下面将本组合物增加骨密度作用实验报告列举如下：

1材料和方法

1.1样品：本组合物为棕色粉末，人体推荐量1.20/60kgBw/d，每100g内容物含钙4.0g，供试验用。

1.2实验动物：体重70±5克左右的断乳WISTAR雄性大鼠(二级)，购自中国医学科学院实验动物研究所繁殖场，批准号：SCXK11-00-0006号。适应一周后，按体重随机分为五组，每组10只，自由进食，饮去离子水。

试验设基础饲料组、碳酸钙对照组及0.10、0.20、0.60g/kgBW三个剂量的本组合物试验组，(分别相当于人体推荐量的5、10、30倍)。

第1组：基础饲料组，每百克饲料含钙180mg

第2组：基础饲料组加碳酸钙对照组，每百克饲料含钙204mg

第3组：基础饲料组加本组合物组(0.10g/kgBW)，相当于每百克饲料含钙184mg

第4组：基础饲料组加本组合物组(0.20g/kgBW)，相当于每百克饲料含钙188mg

第5组：基础饲料组加本组合物组(0.60g/kgBW)，相当于每百克饲料含钙204mg

每100g基础饲料中含：

酪蛋白 10.0

黄豆粉 15.0

小麦面粉 54.0

玉米油或花生油 4.0

纤维素 2.0

混合维生素 1.0

氯化胆碱 0.2

dl-蛋氨酸 0.2

淀粉 11.0

混合盐 2.6

按要求本组合物拌在饲料中，连续喂饲料12周。

1.4动物生长发育观察指标：每周量身长，称体重一次。

1.5动物股骨长度及重量测量：动物喂养12周后断头处死，剥离取出右侧股骨，测量股骨长度。在105℃烤箱烤至恒重，称量骨重。

1.6骨密度测量：用SD-1000骨密度仪(核工业部北京地质研究院)，测量股骨中点及股骨于骺端骨密度。

1.7数据处理：用Stata软件包进行方差分析统计。

2结果

2.1本组合物对大鼠体重、身长的影响：

表1各组大鼠实验前后的体重变化

动物数体重 (g)

级别(Ca：mg/100g饲料) P₁ P₂

(只) 实验前实验后

基础饲料组(180.0) 10 68.0±2.4 370.0±6.6

碳酸钙对照组(204.0) 10 68.4±2.2 429.8±7.8^** 0.000

0.10g/kgBW本组合物(184.0) 10 68.8±2.1 369.9±2.9 0.995

0.20g/kgBW本组合物(188.0) 10 69.4±1.2 399.2±3.7^** 0.000 0.001

0.60g/kgBW本组合物(204.0) 10 69.4±1.5 435.6±32^**## 0.000 0.001

P₁：与基础饲料组比较**：P＜0.01 P₂：与碳酸钙对照组比较##：P＜0.01

由表1可见，喂饲大鼠本组合物12周后，0.20、0.60g/kgBW剂量组的大鼠体重明显高于基础饲料组(P＜0.01)；0.60g/kgBW剂量组的大鼠体重与石碳酸钙对照组比较明显增加(P＜0.01)。

表2 各组大鼠实验前后的身长变化

动物数身长 (cm)

级别(Ca：mg/100g饲料) P₁ P₂

(只) 实验前实验后

基础饲料组(180.0) 10 16.0±0.1 23.0±0.2

碳酸钙对照组(204.0) 10 15.9±0.1 27.2±0.3^** 0.000

0.10g/kgBW本组合物(184.0) 10 15.9±0.1 24.0±0.3 0.000

0.20g/kgBW本组合物(188.0) 10 16.0±0.2 26.2±0.2^** 0.000

0.60g/kgBW本组合物(204.0) 10 16.0±0.1 27.1±02^**## 0.000 0.865

P₁：与基础饲料组比较**：P＜0.01 P₂：与碳酸钙对照组比较##：P＞0.05

由表2可见，喂饲大鼠本组合物12周后，各剂量组的大鼠身长明显高于基础饲料组(P＜0.01＝；0.60g/kgBW剂量组的大鼠体重与碳酸钙对照组比较，差异无显著性(P＜0.05)。

2.2本发明对大鼠股骨长及股骨重量的影响：

表3 大鼠股骨长度

动物数股骨长度

级别(Ca：mg/100g饲料) P₁ P₂

(只) (cm)

基础饲料组(180.0) 10 3.39±0.04

碳酸钙对照组(204.0) 10 68.4±0.11^** 0.000

0.10g/kgBW本组合物(184.0) 10 68.8±0.33 0.995

0.20g/kgBW本组合物(188.0) 10 69.4±0.06^** 0.000 0.001

0.60g/kgBW本组合物(204.0) 10 69.4±0.06^**## 0.000 0.001

由表3可见，喂饲大鼠本组合物12周后，0.20、0.60g/kgBW剂量组的大鼠体重明显高于基础饲料组(P＜0.01)；0.60g/kgBW剂量组的大鼠体重与石碳酸钙对照组比较明显增加(P＜0.01)。

表4 大鼠股骨长度

动物数股骨重量

级别(Ca：mg/100g饲料) P₁ P₂

(只) (cm)

基础饲料组(180.0) 10 0.93±0.03

碳酸钙对照组(204.0) 10 1.19±0.03^** 0.000

0.10g/kgBW本组合物(184.0) 10 1.05±0.34 0.000

0.20g/kgBW本组合物(188.0) 10 1.17±0.03^** 0.000

0.60g/kgBW本组合物(204.0) 10 1.28±0.02^**## 0.000 0.000

由表4可见，喂饲大鼠本组合物12周后，各剂量组的大鼠股骨重量显著高于基础饲料组(P＜0.01)；0.60g/kgBW剂量组的大鼠股骨重量与碳酸钙对照组比较明显增加(P＜0.01)。

2.3本组合物对大鼠骨密度的影响：

表5 各组大鼠股骨干骺端骨密度比较

动物数股骨干骺端骨密度

级别(Ca：mg/100g饲料) P₁ P₂

(只) (g/cm²)

基础饲料组(180.0) 10 0.264±0.008

碳酸钙对照组(204.0) 10 0.282±0.007^** 0.000

0.10g/kgBW本组合物(184.0) 10 0.266±0.005 0.501

0.208/kgBW本组合物(188.0) 10 0.279±0.006^** 0.504

0.608/kgBW本组合物(204.0) 10 0.288±0.006^**# 0.000 0.048

P₁：与基础饲料组比较**：P＜0.01 P₂：与碳酸钙对照组比较#：P＜0.05

表6 各组大鼠股骨中点骨密度比较

动物数股骨干骺端骨密度

级别(Ca：mg/100g饲料) P₁ P₂

(只) (g/cm²)

基础饲料组(180.0) 10 0.253±0.005

碳酸钙对照组(204.0) 10 0.278±0.008^** 0.000

0.10g/kgBW本组合物(184.0) 10 0.263±0.008^** 0.002

0.208/kgBW本组合物(188.0) 10 0.264±0.008^** 0.001

0.608/kgBW本组合物(204.0) 10 0.281±0.004^** 0.000 0.276

P₁：与基础饲料组比较**：P＜0.01 P₂：与碳酸钙对照组比较#：P＞0.05

由表5、6可见，喂饲大鼠本组合物12周后，0.20、0.60g/kgBW剂量组的大鼠股骨干骺端骨密度及股骨中点骨密度明显高于基础饲料组(P＜0.01)；0.60g/kgBW剂量组的大鼠体重与石碳酸钙对照组比较明显增加(P＞0.05)。

2.4结论

本实验结果表明：在饲料中添加0.10、0.20、0.60g/kgBW剂量的本组合物，与基础饲料组比较，各剂量的本组合物可使钙摄入不足大鼠的股骨重量显著增加，0.20、0.60g/kgBW剂量的本组合物可使钙摄入不足大鼠的股骨长度及骨密度显著增加，并有统计学上的差异(P＜0.05)。由此可以判定本组合物具有增加骨密度的作用。

报告二

本组合物可具有延缓衰老的作用，下面将本组合物延缓衰老作用实验报告列举如下：

一、材料和动物

1、受试物：“本组合物”成品为棕色粉末，人体推荐用量1.2g人/日。用蒸馏水配制各剂量浓度。

2、蝇种：由西北大学生物系引进野生型“美国黑腹果蝇”(Drosophilamelanogaster)，本实验室扩大繁育备用。

3、大鼠：湖北省预防医学科学院实验动物中心提供18月龄SPE级Wister雌性大鼠40只，体重365-447g和月龄SPE级雌性Wister大鼠10只，体重210-228g(医动字19-084号)。

4、试验环境：室温24-26℃，生化箱温度25±1℃，湿度50％-70％RH。

二、设备与试剂

1、LR，H-250型生化培养箱(兰豹牌)，BS110S型电子天平(赛多利斯牌)，果蝇指管(2.5cm×高12m)、搪瓷盘、试管架、***、丙酸及基础培养基配料(玉米粉、白糖、琼脂粉、酵母粉)，电热恒温干燥箱，移动式紫外消毒灯(广西柳州第二医疗器械厂)。

2、抗氧化功能指标测定：930型荧光光度计、752C紫外可见分光光度计、恒温水箱、微量加样器、普通离心机、游涡混旋器、组织匀浆器、紫外灯、离心管、试管、吸管等、SOD测定试剂盒、MDA及GSH——PX活力测定试剂盒和脂褐质测定试剂盒(南京建成生物技术工程研究所出品)。

三、实验方法

1、实验依据：“保健食品功能学评程序和方法”***(1997)。

2、果蝇生存试验：

剂量设计：将“本组合物”成品液按人体推荐用量1.2g/人/日，推算设计(人体推荐量/3000×100％)：培养基中含受试物剂量(V/V)按1％，0.2％，0.04％，0.01％四组分别配制各剂量组培养基，对照组给予普通基础培养基。

实验方法：收集8小时内新羽化的果蝇成虫，***麻醉下随机将雌、雄果蝇称重、分别分为5组，每组200只蝇，再按每管25只蝇，将每组果蝇分放8个基础培养基蝇管中，于搪瓷盘中平放，按组放入生化培养箱中喂养。至两周时将各剂量组果蝇换入相应含受试物培养基管中，继续喂养。每四天换培养管一次，每天定时两次观察果蝇活动状态，并记录死亡蝇数一数，至果蝇全部死亡为止。

3、抗氧化功能指标测定：

剂量设计：将“本组合物”设计剂量0.4g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.1g/kg.bw三个剂量组，另设老龄对照组和少龄鼠对照组，每组10只大鼠，剂量分别相当于人体推荐量的20倍、10倍和5倍。

实验方法：各剂量组按每天灌胃一次给予受试物，对照组均给予等容量蒸馏水，连续66天，每周大鼠称重一次，于第67天摘眼球取全血、血清及肝组织分别进行四项生化指标测定：

①大鼠肝组织中脂褐质含量测定：按程序方法用930型荧光光度计进行测定。

②血清中SOD含量测定；按试剂盒法用752C紫外可见分光光度计进行测定。

③大鼠血清中MDA含量测定：按试剂盒法用752c紫外可见光光度计进行测定。

④大鼠血清中GSH——PX酶活力测定：按试剂盒法用752C紫外可见分光光度计进行测定。

观察指标：过氧化脂质两项指标为肝组织中脂褐质含量测定和血清中MDA含量测定：抗氧化酶两项指标为肝组织中SOD含量测定和全血中GSH-PX酶活力测定。将各剂量组以四个指标结果均与其对照组比较，进行方差分析。

四、实验结果

1、果蝇生存试验

“本组合物”对果蝇寿命影响结果编计表(X±S)

受试物浓蝇数平均体重半数死亡天平均寿命最高平均寿命

度(％） (只) (ug) 数(天) (天) (天)

雌雄雌雄雌雄雌雌雌雌

0 200 200 882 698 58 56 56.85±13.10 54.69±13.88 72.2±1.10 68.80±0.69

1.00 200 200 861 637 57 57 56.72±13.08 57.06±11.54 72.15±1.10 71.05±1.31^**

0.20 200 200 872 626 69** 65** 66.53±11.2^8** 62.35±11.52^** 80.75±1..33^** 73.02±3.92^**

0.04 200 200 856 664 66** 61** 65.83±14.77^** 58.48±13.59^** 76.25±3.37^* 72.80±1.40^**

0.01 200 200 853 663 57 57 57.38±13.59 56.74±11.02^** 70.55±4.31 72.50±1.14^*

*P＜0.05 ** P＜0.01 F＝29.20 P＜0.01 F＝52.74 P＜0.01 F＝8.89 P＜0.01

由上表可见雌、雄蝇0.20％剂量组与0.04％剂量组的平均寿命与最高平均寿命均高于对照组，其差异均有显著性(P＜0.01；雌、雄果蝇的0.20％g 0.04％的半数死亡天数均高于对照组4天。

2抗氧化功能指标测定

2.1对体重的影响

“本组合物”对大鼠体重的影响

初始体重中期体重结束体重

组别动物动物动物

体重(g) 体重(g) 体重(g)

g/kg.bw 只数只数只数

0.4 10 418.8±24.0 10 414.4±24.9 10 414.6±28.3

0.2 10 418.6±20.4 10 418.8±20.1 10 420.4±22.2

0.1 10 416.0±20.5 10 418.2±16.8 10 418.1±18.0

老龄对照 10 415.6±22.1 10 423.3±19.6 10 433.1±26.5

少龄对照 10 220.0±6.6 10 252.1±9.1 10 264.3±15.5

由上表可见，各剂量组与老龄对照组体重指标间差异均无显著性(P＞0.05)2.2老龄对照与少龄对照四项生化指标比较

“本组合物”老龄与少龄对照组结果统计

生化指标

组别

脂褐质 GSH-PX酶活力

g/kg.bw MDA(nmol/ml) SOD(nu/ml)

(μg/g肝) 单位

老龄对照 11.66±1.21 7.87±0.98 272.62±74.72 11.87±3.04

少龄对照 6.89±1.70 5.46±0.62 390.37±63.68 20.16±5.61

t值 7.207 6.770 3.792 4.106

由上表可见，老龄对照较少龄对照线MDA和脂褐质含量明显升高，SOD含量和GSH-PX酶活力明显降低，且差异均有高度显著性，即表明老龄对照组老龄化生化指标明显。

2.3脂褐质测定

“本组合物”对肝组织中脂褐质含量的影响

级别g/kg.bw 脂褐质(μg/g肝) q′ P值

0.4 8.96±1.89 ＞0.05

0.2 9.81±0.86 ＞0.05

0.1 10.68±1.28 ＞0.05

老龄对照组 11.66±1.21

F＝0.483 p＞0.05

由上表可见，各剂量组脂褐质含量与老龄对照组比较差异无显著性(P＞0.05)

2.4血清中MDA含量测定

“本组合物”对血清中MDA含量的影响

级别g/kg.bw MDA(nmol/ml) q′ P值

0.4 5.82±0.72 5.837 ＜0.01

0.2 6.81±0.76 3.023 ＜0.01

0.1 6.87±0.63 2.857 ＜0.01

老龄对照组 7.87±0.98

F＝3.343 p＞0.05

由上表可见，各剂量组MDA含量均低于老龄对照组，且差异均有高度显著性(p＜0.01)

2.5血清中SOD含量测定

“本组合物”对血清中SOD含量的影响

级别g/kg.bw SOD(nmol/ml) q′ P值

0.4 335.17±56.15 ＞0.05

0.2 318.11±69.62 ＞0.05

0.1 292.73±60.04 ＞0.05

老龄对照组 272.62±74.72

F＝3.343 p＞0.05

由上表可见，各剂量组SOD含量与老龄对照组比较差异无显著性(p＞0.05)。

2.6全血中GSH-PX活力测定

“本组合物”对血清中SOD含量的影响

级别g/kg.bw GSH-PX(活力单位) q′ P值

0.4 16.09±3.56 2.546 ＜0.05

0.2 14.70±4.36 1.709 ＞0.05

0.1 11.96±3.36 0.057 ＞0.05

老龄对照组 11.87±3.04

F＝3.343 p＜0.05

由上表可见，高剂量组GSH-PX含量高于老龄对照组，且差异有显著性(p＜0.05)。

五、结论：

1、果蝇生存试验：雌、雄果蝇平均寿命与最高平均寿命均有两组或两组以下为阳性结果。雌、雄果蝇半数死亡天数亦有两组为阳性结果。

2、抗氧化功能指标测定：

2.1肝组织中脂褐质含量测定为阴性结果。

2.2血清中SOD含量测定为阴性结果。

2.3血清中MDA含量测定为阳性结果。

2.4全血中GSH-PX活力测定为阳性结果。

综上所述，果蝇生存试验与抗氧化功能指标测定结果均为阳性，故可判断“本组合物”具有延缓衰老作用。

报告三

本组合物还具有作为***替代物的作用，白藜芦醇是一种中药提取物，最早发现它有***、心血管疾病、肝损害等多种疾病的作用，目前的研究也多集中于这些方面。后又发现它可能是与***受体结合参与细胞内信号通路的途径发挥作用。最新研究发现虽然它的分子结构与***类似，但并不与***结合完全相同的受体，从而有不同的细胞靶向，因此它可能会避免一些ERT所导致的副作用。

为了确定白藜芦醇是否具有这种作用，我们设计以幼龄小鼠为动物模型，观察白藜芦醇用药组与空白对照组、***对照组的区别。

具体方法：

取约20天龄12g昆明小鼠(未成熟)16只，随机分为3组：实验组，阴性对照组，阳性对照组。

实验组按100mg/kg.d喂食白藜芦醇悬浊液。

阴性对照组皮下注射橄榄油100ul。

阳性对照组按40ug/kg.d皮下注射己烯雌酚-橄榄油溶液200ul。

给药15天后处死称重取子宫。

结果：

	实验组	阴性组	阳性组
	实验组	阴性组	阳性组	体重(g)	17.9±1.14	19.7±1.09	21.7±2.05
子宫百分重(％)	0.059±0.005	0.046±0.005	0.100±0.021	体重(g)	17.9±1.14	19.7±1.09	21.7±2.05

比较三组数据，行T检验，发现实验组相对于阴性组和阳性组均存在显著差异。

同时取子宫内膜做组织切片，HE染色表明：

实验组与阴性组比较，明显发生内膜增生：而与***组相比，则不如其腺体增生明显，但比***组均匀。

因此，从以上实验结果可以得出结论：含白藜芦醇的提取物具有***样作用。目前合成***有肿瘤高发的风险，而白藜芦醇的抗肿瘤作用已被证实，所以可作为人类***替代品。

具体实施例1：

含15％-20％的白藜芦醇提取物 140-220g

含20％-35％的大豆异黄酮提取物 60-120g

(1)、所述的含白藜芦醇提取物的制备方法如下：

将葡萄籽、皮经纯净水冲洗，用70％乙醇60℃提取三次，每次2小时，醇提取液经过过滤，然后回收乙醇，浓缩提取液，浓缩液经过硅胶柱层析，洗脱液洗脱，在60-70℃、30分钟以上至波美度15的条件下浓缩，并在温度≥180℃，瞬间灭菌，喷雾干燥，将提取物成品装入无菌袋，备用，该提取物含有15％-20％的白藜芦醇。

(2)、所述的含大豆异黄酮提取物的制备方法如下：

将大豆胚芽或豆粕用纯净水冲洗，用70％乙醇60℃提取三次，每次2小时，醇提取液经过过滤，回收乙醇、浓缩提取液，80％丙酮冷沉结晶，结晶用90％乙醇溶解，溶解液过滤，滤液回收乙醇，浓缩后，并在温度≥180℃，喷雾干燥，装入无菌袋，备用，该提取物含有20％-35％的大豆异黄酮。

其制备物具有延缓衰老、增加骨密度和作为***替代物的作用；其用量为每天：

白藜芦醇 0.2mg-5.0mg/公斤体重

大豆异黄酮 0.2mg-5.0mg/公斤体重

具体实施例2：

含17％的白藜芦醇提取物 180g

含30％的大豆异黄酮提取物 90g

(1)、所述的含白藜芦醇提取物的制备方法如下：

将虎杖根粉碎，用80％乙醇60℃提取三次，每次2小时，醇提取液经过过滤，然后回收乙醇，浓缩提取液。浓缩液加硫酸水解5小时后水洗3次，过滤，滤出物过氧化铝柱，洗脱液洗脱并结晶，真空干燥，将提取物成品装入无菌袋，备用，该提取物含有17％的白藜芦醇。

(2)、所述的含大豆异黄酮提取物的制备方法如下：

将大豆胚芽或豆粕用纯净水冲洗，用70％乙醇60℃提取三次，每次2小时，醇提取液经过过滤，回收乙醇、浓缩提取液，80％丙酮冷沉结晶，结晶用90％乙醇溶解，溶解液过滤，滤液回收乙醇，浓缩后，并在温度≥180℃，喷雾干燥，装入无菌袋，备用，该提取物含有30％的大豆异黄酮。

其制备物的应用与实施例1相同。

Claims

1、一种含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料组成：

含15％-20％的白藜芦醇提取物 140-220份

含20％-35％的大豆异黄酮提取物 60-120份

2、根据权利要求1所述的含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物，其特征在于：其中各原料的重量配比是：

含17％的白藜芦醇提取物 180份

含30％的大豆异黄酮提取物 90份

3、一种含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物的制备方法，其具体步骤如下：

(1)、所述的含白藜芦醇提取物的制备方法如下：

(2)、所述的含大豆异黄酮提取物的制备方法如下：

4、一种含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物的制备方法，其具体步骤如下：

(1)所述的含白藜芦醇提取物的制备方法如下：

(2)、所述的含大豆异黄酮提取物的制备方法如下：

5、根据权利要求1所述的组合物在延缓衰老中的应用，该含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物具有抗衰老作用。

6、根据权利要求1所述的组合物在增加骨密度中的应用，该含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物具有增加骨密度作用。

7、根据权利要求1所述的组合物作为***替代物中的应用，该含白藜芦醇和大豆异黄酮的组合物具有作为***替代物的作用。

8、根据权利要求5、6、7所述的组合物的应用，其组合物内的白藜芦醇与大豆异黄酮的用量配比范围为：

白藜芦醇 0.2mg-5.0mg/公斤体重

大豆异黄酮 0.2mg-5.0mg/公斤体重