CN1308233A - 快速测定氨基酸的方法 - Google Patents
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Abstract
快速测定氨基酸的方法属于高效液相色谱的应用技术领域,它的特征是通过改变流速、柱温、梯度等色谱条件,建立了一套不同型号的色谱柱在不同液相色谱仪器上使18－21种利用AQC衍生剂衍生的氨基化合物在5－25min内快速分离测定的方法,使样品测定周期缩短一半以上,大幅度地提高了工作效率,节约分析检测成本,拓宽了AccQ.Tag法应用领域,具有广泛的应用和推广价值。
Description
快速测定氨基酸的方法属于高效液相色谱应用技术领域。
AccQ.Tag法是美国Warers公司于1994年推出的全新的氯基酸测定方法，与以前的各种氨基酸测定方法相比，具有衍生产物稳定、分析灵敏度高、反应速度快、不需除去多余的衍生剂等优点，因此操作简单、容易掌握、对技术人员要求不商，是深受分析工作者欢迎的氨基酸测试方法。该方法起初建立在萤光检测基础上，推出后不久由Watrers公司北京实验室的刘洪基等人发展的用紫外检测器检测，之后一直沿用至今。该方法的不足之处表现在：
1、分离18种氨基酸需要35min，测定周期需要45min，对于大量样品测试显得十分费时：
2、AccQ.Tag标准方法只提供了AccQ.Tag专用柱，价格相对一般色谱柱如Nova-PakC18柱贵200多美元，没有提供使用其它色谱柱和在相对样高流速下测定氨基酸的梯度和方法，使应用受到限制。
本发明提供了一种快速测定氨基酸的方法，该方法较AccQ.Tag方法
1、缩短分析时间，提高工作效率：
2、建立一套用不同类型的色谱柱快速分析氨基酸的方法，节省检测成本，为用户提供方便。
快速测定氨基酸的方法的内容如下：
1、在原有AccQ.Tag法的基础上使用AccQ.Tag专用柱，将流速由1.0ml/min提高到1.2-4.0ml/min，通过优化梯度，使18种氯基酸在17.5min内得到完全分离，分离周期缩短到22.5min柱反压低于300Psi分析结果准确可靠；
2、采用Pico.Tag专用柱、Nova-PakC18柱、SymmetryC18柱、Xterra柱等不同类型的反相C18柱代替AccQ.Tag柱，通过优化梯度，在10-20min内使18种氨基酸达到基线分离。
快速测定氨基酸的方法在原有的方法上作了重大改进，主要表现在：
1、将分析时间缩短了一半以上，大幅度提高了工作效率；
2、建立了一套用不同型号的反相C18柱在不同的色谱条件、不同的高效相色谱***如Waters2690分离单元、510泵×2、515泵×2、600泵***或其它公司色谱***下快速分离测定氨基酸的方法，为分析测试工作带来了极大的方便。大大地拓宽AccQ.Tag法的应用领域，节约了分析检测的成本。
快速测定氨基酸的方法的具体实施方案如下：
仪器：WatersAllance***，包括Waters2690分离单元，Millennium32色谱管理***，2487紫外检测器，AccQ.Tag专用柱、Nova-PakC18柱、SymmetryC18柱、Xterra柱。
样品制备：将2.5umol/ml的氨基酸标准样品(Water公司提供，含17种游离氨基酸，可自己添加色氨酸)稀释成0.50umol/ml的氨基酸标样，取10ul于6×50mm衍生管中，加入75ml缓冲液，15mlAccQ.Fluor衍生剂，衍生完成后上机测试。
流动相的按照标准AccQ.Tag方法制备。
色谱条件为：柱温36-400℃、流速1.5-2.5ml/min，检测波长：248-254mn，梯度分离。
分离时间：AccQ.Tag柱(3.9×150mm):12.0-25.0min；
pico.Tag柱(3.9×150mm):12.0-25.0min；
Nova-PakC18柱(3.9×150mm):12.0-25.0min；
Nova-PakC18柱(4.6×150mm):12.0-25.0min；
SymmetryC18柱(3.9×150mm):12.0-20.0min；
Xterra柱：流速0.50-2.0ml/min，时间：5.0-20.0min。
Claims (4)
1、速测定氨基酸的方法，其特征是：
(1)使用AccQ.Tag柱，将流速由1.0ml/min增加到1.2-4.0ml/min，优化梯度表，使18种氨基酸的分离时间由35min缩短为10.0-20.0min，每个样品的测试周期由45min缩短到15.0-25.0min，包括AMQ、NH3和牛磺酸共21种成分，均达到基线分离：
(2)利用Nova-Pak柱、symmetry柱、Pico.Tag柱等不同类型的反相C18柱代替AccQ.Teg专用柱在柱温35-55℃，流速为1.0-4.0ml/min的条件下，在10.0-25.0min内，通过优代梯度，包括AMQ、NH3和牛磺酸共21种成分，均达到基线分离；
(3)利用Waters公司最新产品Xterra色谱柱在35-60℃、流速在0.20-4.0ml/min的色谱条件下，通过优化梯度，包括AMQ、NH3和牛磺酸共21种成分，均在5.0-20.0min以内极快速地达到基线分离。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征是：不同型号的色谱柱包括Waters公司的AccQ.Tag柱、Noca-Pak柱、symmetry柱、Pico.Tag柱，Xterra超短柱系列以及其它公司生产的性能优良反相C18和C8色谱柱。
3、根据权利要求1所述的方法，其特征是：不同色普***包括Waters2690分离单元，510泵×2、515泵×2、600泵***或其它公司生产的能够提供优异分离精度的高效液相色谱***。
4、根据权利要求1所述的方法，其特征是：色谱分析要条件为柱温35-55℃，流速为0.2-4.0ml/min，检测波长为210-280nm流动相A的酸度为4.80-5.80，分离时间为25min。
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN1320354C (zh) * | 2005-07-14 | 2007-06-06 | 天津药业研究院有限公司 | 氨基酸的分析方法 |
| CN100362346C (zh) * | 2006-06-21 | 2008-01-16 | 广州星群（药业）股份有限公司 | 检测夏桑菊制剂中氨基酸类成分的方法 |
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| CN103822894A (zh) * | 2014-02-11 | 2014-05-28 | 广东恒兴饲料实业股份有限公司 | 一种基于近红外光谱法快速检测鱼粉中牛磺酸含量的方法 |
| CN108645953A (zh) * | 2018-04-28 | 2018-10-12 | 山东省食品药品检验研究院 | 一种特殊食品中牛磺酸的检测方法 |
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2000
- 2000-12-26 CN CN 00128172 patent/CN1308233A/zh active Pending
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