CN1235601C - 一种海洋星虫提取物及制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种海洋星虫有效成份提取物及制备方法和应用。本发明公开的海洋星虫有效成份提取物是选用海洋星虫为原料，用盐溶液抽提，有机溶剂分级沉淀，超滤，冷冻干燥后获得活性组分提取物。其主要功效成分为活性蛋白质、牛磺酸、精氨酸、微量元素锌等。免疫学研究发现，海洋星虫提取物能够显著提高机体免疫功能，使机体脾指数和胸腺指数显著增加，淋转率显著提高。动物抗疲劳试验发现，海洋星虫提取物具有显著的抗疲劳作用，能够显著延长小鼠负重游泳时间，加快动物血乳酸消除，降低运动动物血清尿素氮。动物延缓衰老研究发现，海洋星虫提取物能够显著延缓衰老，显著降低大鼠血清MDA含量，增加血清SOD活性，延长果蝇生存时间。说明海洋星虫提取物能够具有提高机体免疫功能，以及抗疲劳和延缓衰老作用。

Description

一种海洋星虫提取物及制备方法和应用

技术领域：

本发明涉及一种海洋生物提取物及制备方法，具体涉及一种海洋星虫活性组分提取物及制备方法和应用。

背景技术：

海洋星虫又名海蚕沙、海蚕、海沙虫，它不仅是味道鲜美的海味珍品，亦是一种低糖、低脂肪、高蛋白和富含锌、铁、钙、磷、碘等多种矿物质的高级营养保健食品。

海洋星虫除作食用外，民间还把它作为治疗虚火上炎及滋阴补肾之食疗药物。一般用于目赤、面部潮红。夏日盛暑因烈日暴晒，身体发热，便秘的患者，用之可缓解症状。因疲劳过度，四肢乏力，多服之可精神焕发，精力迅速恢复，故闽南人称之为“动物人参”。沿海民间常用以取代昂贵的冬虫夏草，因而又被美称为“海洋里的冬虫夏草”。此外，在闽、台、粤、琼等沿海地区，渔民家常用海洋星虫煮稀饭喂养幼儿，具有健脾滋补等食疗作用。

海洋星虫的保健功能，在我国古代医药专著中多有记载。海洋星虫自古以来被视为“海药”，唐末五代时的著名本草学家李荀广游岭南，知晓南国乡土风物，熟悉南国药用动植物，所著《海药本草》记载了大量外来药，其中就记载了“海蚕沙”，云其“生南海山石间，其蚕形，大如姆指，沙甚白，如玉粉状，每有节”。海蚕沙“味咸，大温，无毒。主虚劳冷气，褚风不遂。久服令人光泽，补虚羸，轻身，延年不老”。著名本草学家李时珍，在其所著《本草纲目》之中同样也记载有“海蚕”的药用功效。中医认为海洋星虫性味甘、咸、寒，有清肺补虚、滋阴降火功效，临床实践证实骨蒸潮热、阴虚盗汗、肺虚咳喘、胸闷痰多等疾病，食用海洋星虫有疗效。对肺痨咳嗽、神经衰弱、小儿脾虚等疾患，若用海洋星虫与姜片煲炖亦有很好的治疗效果。以淮杞园肉煲海洋星虫汤，不仅营养丰富，味道鲜美，而且具有滋阴养颜之效。民间效方有：①海沙虫煎：取海沙虫30g，水煎煮熟，1剂，每日水煎服2次，具有滋阴降火、清肺化痰功效，主治肺结核病、咳嗽吐痰、潮热盗汗；②加味海沙虫汤：取海沙虫10g，百部15g，生甘草5g；水煎，1剂，每日水煎服2次，具有滋阴润肺、止咳祛痰功效，主治阴虚型肺结核病。

现代医学研究发现海洋星虫(P.Similis)的水解提取液具有收缩血管、加快心率、增强心博出量和冠脉血流量的作用，对失血性低血压有显著升压作用，亦有良好的镇静止痛效果。黄哲元等用海洋星虫的制成品-土蒜冻进行的药学研究结果表明，海洋星虫的水提取液对小鼠具有明显的抗疲劳、耐缺氧、耐高温的作用；发现它们含有6-7种人体必需氨基酸，尤其以Lys，Leu，Val含量较高；微量元素中尤其含锌量很高，可达68μg/g。俞振良等人实验发现泥蒜-海虾合剂具有明显的催乳作用。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是采用现代生化技术，从海洋星虫中分离得到其活性组分，提供一种具有显著抗疲劳和延缓衰老作用的营养保健品或药品。

本发明公开的海洋星虫活性组分提取物是选用海洋星虫为原料，用盐溶液抽提，有机溶剂分级沉淀，超滤，冻干等步骤获取的活性组分提取物。具体的是采用海洋星虫为原料，用含1～2mol/L盐酸盐和1～10mmol/L EDTA的磷酸缓冲液抽提，高速离心，上清液用终浓度为20％～70％的无水乙醇分级沉淀，收集20％～70％的无水乙醇沉淀组分，真空冷冻干燥，干燥物溶解后用截留分子量为1万和10万的超滤膜分别超滤，收集1～10万的组分，浓缩，冻干，获得。

该活性组份提取物含有活性成份蛋白质、牛磺酸、微量元素和精氨酸，其中蛋白质的含量≥55％。

本发明所述活性组分提取物中的蛋白质分子量在1万、2.8万、3.1万的三种活性蛋白含量占总蛋白含量18％以上，占总提取物活性组分含量5.67％以上。

本发明所要解决的另一技术问题是公开上述海洋星虫活性组分提取物的制备方法。

本发明海洋星虫活性组分提取物是通过下述技术方案获得的：

海洋星虫原料清洗干净后匀浆于2～5倍体积的含盐酸盐的缓冲溶液中，室温提取24h，8000rpm高速离心30min，上清液用终浓度为20％～70％的无水乙醇分级沉淀，收集20％～70％的无水乙醇沉淀组分，真空冷冻干燥，干燥物溶解后用截留分子量为1万和10万的超滤膜分别超滤，收集1～10万的组分，浓缩，冻干，即得到海洋星虫活性组分。

本发明所述的含盐酸盐的缓冲溶液可选用10～20mmol/L PB溶液或其它磷酸盐缓冲液，其中含1～2mol/L盐酸盐和1～5mmol/LEDTA，所述的盐酸盐可选用NaCl、KCl等。

本发明所述活性峰可用MTT细胞活性试验测定或用SDS-PAGE电泳鉴定。

本发明所要解决的另一技术问题是公开上述海洋星虫活性组分提取物在制备抗疲劳和延缓衰老保健品或药品中的应用。

本发明海洋星虫活性组分可作为抗疲劳与延缓衰老保健食品及相关药物的活性成份，根据保健及治疗需要，与食用及药用辅料制成各种制剂。

本发明海洋星虫的抗疲劳作用研究选用昆明种小鼠为研究对象，设立低、中、高三个剂量的海洋星虫样品组，剂量分别为0.04、0.09、0.26g/kg，分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍，另设立蒸馏水对照组。每组动物数为10只，灌胃给药，灌胃容量为0.4ml/20g。结果显示，本品对动物体重无明显影响，能够明显延长小鼠负重游泳时间，明显加快运动后小鼠血乳酸消除，显著降低血清尿素氮含量；说明海洋星虫提取物具有明显的抗疲劳作用。

本发明海洋星虫的延缓衰老功能的抗氧化作用研究选用SD大鼠为研究对象，设立低、中、高三个剂量的海洋星虫样品组，剂量分别为0.04、0.09、0.26g/kg，分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍，另设立蒸馏水对照组和青年动物对照组。每组动物数为10只，灌胃给药，灌胃容量为1ml/100g，连续给药30天。结果提示海洋星虫提取物能够降低SD大鼠血清MDA含量，增加血清SOD活性，说明海洋星虫提取物具有抗氧化作用。

下面对本发明海洋星虫提取物的抗疲劳和延缓衰老作用作进一步描述：

本发明海洋星虫活性组分富含蛋白质、牛磺酸、微量元素、精氨酸等活性物质。

牛磺酸(Taurine)，又名2-氨基乙烷亚磺酸，是细胞内含量最高的游离氨基酸。近年来研究证明它具有平衡细胞渗透压、维持细胞膜稳定性、调节细胞钙稳态和对抗氧自由基损伤等细胞保护作用。牛磺酸的主要药理作用活性有：A、解热、镇痛、消炎；B、镇静、安神；C、保护细胞膜、保肝利胆；D、抗病毒、抗病原菌；E、解毒、解化学中毒、预防中毒等。牛磺酸的主要生理调节作用有：A、促进大脑发育，调节神经传导，改善脑功能，抑制和治疗老年性痴呆；B、提高机体特异性和非特异性免疫；C、增强和改善视力，维持视觉功能；D、促进营养物质钙、脂类、维生素的吸收；E、改善儿童厌食和睡眠不良，促进儿童生长发育。

精氨酸能够调节机体细胞因子的水平，促进婴儿生长发育，促进创伤修复，减少应激时蛋白质的过分降解。精氨酸能够增加胸腺的重量，刺激胸腺淋巴细胞和胸腺皮质与髓质的各种CD细胞，从而增强机体免疫功能。

锌是目前研究最多，保健功能作用最为清楚的微量元素，具有抗生物过氧化、促进发育、提高机体免疫功能、增强骨骼发育、防止性功能减退、辅助降低血糖等多种保健作用。

蛋白质是机体生命活动的重要物质基础，是提供机体组织蛋白的主要原料，是构成机体的主要结构成分，是体内的一个重要载体；同时蛋白质作为酶、抗体、激素等，在生命活动中对细胞的生长分化的调控以及遗传信息的表达，起着重要的作用；是各种代谢不可缺少的物质基础。我们的研究表明海洋星虫提取物蛋白质含量在55％以上，其中分子量在1万左右，2.8万，3.1万三种活性蛋白含量约占总蛋白的18％，海洋星虫提取物中三种活性蛋白的含量为5.67％。我们发现这三种蛋白具有非常显著的抗疲劳、抗衰老功效

用本发明海洋星虫提取物进行有关功效试验：

1、海洋星虫提取物能够显著提高机体免疫功能

研究发现海洋星虫提取物灌胃给药对小鼠脾脏和胸腺重量指数有显著增强作用，高剂量组P值均小于0.01(如表1)；能显著促进小鼠淋巴细胞转化，给药剂量为0.2g/kg·d时显著提高淋巴细胞转化率(P＜0.05)，给药剂量为1.0g/kg·d时非常显著提高淋巴细胞转化率(P＜0.01)(如表2)。说明海洋星虫提取物对机体免疫功能具有显著的促进作用。

                       表1  海洋星虫提取物灌胃给药对小鼠脾脏和胸腺指数的影响

组别	动物数(只)	剂量(g/kg·d)	给药方式(天)	脾指数(mg/g)	胸腺指数(mg/g)
						生理盐水	9	0	Po×20	4.04±0.33	2.22±0.47
海洋星虫	11	0.2	Po×20	4.24±0.57	2.27±0.85
						海洋星虫	10	1.0	Po×20	4.66±0.74**	2.33±0.35**

                      表2  海洋星虫提取物灌胃给药对小鼠淋巴细胞转化率的影响

组别	动物数(只)	剂量(g/kg·d)	给药方式(天)	淋转率	P值
						生理盐水	9	0	Po×20	0.047±0.028
海洋星虫	11	0.2	Po×20	0.092±0.062	＜0.05
						海洋星虫	10	1.0	Po×20	0.142±0.111	＜0.01

2、海洋星虫提取物具有显著的抗疲劳作用

(1)海洋星虫提取物能够显著延长小鼠负重游泳时间

采用小鼠负重游泳试验，结果如表3。昆明种小鼠口服给药30天后，负重游泳时间显著延长，给药中剂量组负重游泳时间与对照组相比有显著性延长(P＜0.05)。高剂量组负重游泳时间与对照组相比有非常显著延长(P＜0.01)。

          表3  样品对小鼠负重游泳时间的影响(X±SD)

剂量(g/kg.d)	动物数(只)	负重游泳时间(秒)
			对照组	10	456±125
0.04	10	527±180
			0.09	10	577±152*
0.26	10	687±136**

(2)海洋星虫提取物能够显著加快动物血乳酸的消除

昆明种小鼠口服给药30天后，在末次给药后30分钟、负重(2％体重)游泳后0分钟、游泳后热风吹干并安静30分钟后，分别测定小鼠血乳酸水平。结果如图1所示，运动前和运动后0分钟各给药组动物血乳酸水平与对照组动物均无明显差异(P＞0.05)，给药组动物运动后30分钟血乳酸水平随着给药剂量的增加而逐渐下降，高剂量组下降非常显著(P＜0.05)。

(3)海洋星虫提取物能够显著降低运动小鼠血清尿素氮

昆明种小鼠口服给药30天后，在末次给药后30分钟，将小鼠放入30℃水温游泳90分钟，热风烘干，安静后，取血清测尿素氮。结果见图2，随着给药剂量的增加，小鼠血清尿素氮逐渐下降，高剂量组有显著性差异。

上述结果提示经口给予小鼠不同剂量的海洋星虫提取物30天后，小鼠负重游泳时间明显延长，运动后小鼠血乳酸消除明显加快，血清尿素氮含量下降显著；说明海洋星虫提取物具有明显的抗疲劳作用。

3、海洋星虫提取物具有显著的延缓衰老作用

1)海洋星虫提取物具有显著的抗氧化作用

20月龄的SD雄性大白鼠为研究对象，分为低、中、高三剂量组，另设老龄动物对照组和青年动物对照组(给予蒸馏水)，每组10只动物。连续口服给药30天后于第31天，摘眼球取血，离心取血清。测定血中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)含量和血中超氧化物歧化酶(SOD)活力。

海洋星虫提取物对SD大鼠体重的影响如表4所示。样品各剂量组与老年对照组相比，均无显著性差异。海洋星虫提取物对SD大鼠血清过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)含量的影响如图3，与老龄对照组比较，各给药组随着给药剂量的增MDA含量逐渐下降，高剂量组下降明显。海洋星虫提取物对SD大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响如图4，与老龄对照组比较，各给药组随着给药剂量的增SOD活性逐渐上升，高剂量组上升显著。

                             表4  海洋星虫提取物对SD大鼠体重的影响

组别	动物数	初始体重	中期体重	终期体重
					老年对照	10	485±14	512±12	541±16
低剂量(0.04g/kg.d)	10	480±16	511±18	538±15
					中剂量(0.09g/kg.d)	10	482±16	510±18	541±18
高剂量(0.26g/kg.d)	10	480±18	513±16	546±20
					青年对照	10	78±4*	140±11*	187±11*

上述结果提示海洋星虫提取物能够降低SD大鼠血清MDA含量，增加血清SOD活性，说明海洋星虫提取物具有抗氧化作用。

2)海洋星虫提取物能够明显延长果蝇生存时间

八小时新羽化果蝇成虫为研究对象，每组400只，雌雄各半。设0.006％、0.017％、0.052％和0.156％四个剂量组和一个对照组(普通玉米粉)，每组样本数为200只。在气温25±1℃条件下培养，每四天更换新鲜配制的培养基一次，每两天观察记录果蝇生存数和死亡数，直到全部果蝇死亡为止。计算出半数死亡时间、平均寿命和平均最高寿命等三个指标。结果如表5所示。高剂量的海洋星虫能够显著延长雌雄果蝇的平均寿命和雄果蝇平均最高寿命，说明海洋星虫提取物具有延年益寿之功效。

                                表5  海洋星虫提取物对果蝇生存的影响

样品浓度(％)	平均体重(μg)		半数死亡时间(天)		平均寿命(天)		平均最高寿命(天)
									雄	雌	雄	雌	雄	雌	雄	雌
	0	611	632	55	69	55±9	68±9	72±4									80±2
0.006									609	633	55	71	55±12	68±10	73±3	80±2
	0.017	613	628	55	71	56±11	68±10	74±4									80±2
0.052									612	629	57	72	56±11	70±8	74±2	81±2
	0.156	609	635	58	72	59±11*	71±7*	76±4*									81±2

上述试验结果海洋星虫提取物具有抗氧化和延年益寿的功效，说明海洋星虫提取物具有延缓衰老作用。

4、结论

本发明海洋星虫提取物采用广西北海无污染天然的海洋星虫提取精制而成。富含多种营养成分，如含有人体必需的8种氨基酸及多种具有重要生物学功能的活性蛋白质，含有丰富天然牛磺酸及人体所需矿物质及微量元素，广泛适用于儿童、老人及病人，具有多种保健功能。我们及上海预防医学研究中心的检测结果说明海洋星虫具有明显的抗疲劳和延缓衰老功效，海洋星虫提取物能够增强动物在应激状态下的耐力，显著提高衰老期小鼠存活率，增强机体SOD活性，具有明显的抗衰老作用。具有双向调节功能。具有抗衰老及延年益寿功能。

陆地冬虫夏草因其独特的疗效、滋补作用被誉为诸虚百损之圣药，备受历代医家重视，在国内外享有盛名。俗语云“宁得虫草一把，不要金玉满车”足显其名贵。但是，近年来由于青藏高原气候条件的破坏，使冬虫夏草的主要产地青海省出现了暖冬和长期干旱，导致了冬虫夏草产量的锐减，并使该品面临灭绝的危险。

海洋星虫在功效成分上与冬虫夏草极其类似，作为正濒临灭绝的陆地冬虫夏草的唯一天然替代品，其资源丰富，又可人工养殖，成本低廉，开发海洋星虫必将成为21世纪的黄金产业。

附图说明：

图1、海洋星虫提取物对运动小鼠血乳酸的影响

图2、对小鼠运动后血清尿素氮的影响

图3、海洋星虫提取物对SD大鼠MDA含量的影响

图4、海洋星虫提取物对SD大鼠血清SOD活性的影响

图5、实施例1海洋星虫提取物的活性组分含量

图6、实施例2海洋星虫提取物的活性组分含量

具体实施方式

实施例1

海洋星虫原料清洗干净后匀浆于2倍体积的含2mol/lNaCl的10mmol/lPB缓冲溶液中，室温提取24h，8000rpm高速离心30min，上清液用终浓度为20％～70％的无水乙醇分级沉淀，收集20％～70％的无水乙醇沉淀组分，真空冷冻干燥，干燥物溶解后用截留分子量为1万和10万的超滤膜分别超滤，收集1～10万的组分，浓缩，冻干，即得到海洋星虫活性组分。活性组分各活性成份含量见图5。

实施例2

海洋星虫原料清洗干净后匀浆于5倍体积的含1mol/lKCl的20mmol/lPB缓冲溶液中，室温提取24h，10000rpm高速离心20min，上清液用终浓度为20％～70％的无水乙醇分级沉淀，收集20％～70％的无水乙醇沉淀组分，真空冷冻干燥，干燥物溶解后用截留分子量为1万和10万的超滤膜分别超滤，收集1～10万的组分，浓缩，冻干，即得到海洋星虫活性组分。活性组分各活性成份含量见图6。

Claims (7)

1、一种具有抗疲劳和延缓衰老作用的海洋星虫提取物，其特征在于该提取物是采用海洋星虫为原料，用含1～2mol/L盐酸盐和1～10mmol/L EDTA的磷酸缓冲液抽提，高速离心，上清液用终浓度为20％～70％的无水乙醇分级沉淀，收集20％～70％的无水乙醇沉淀组分，真空冷冻干燥，干燥物溶解后用截留分子量为1万和10万的超滤膜分别超滤，收集1～10万的组分，浓缩，冻干，获得。

2、一种如权利要求1所述的海洋星虫提取物，其特征在于该提取物含有蛋白质、牛磺酸、微量元素和精氨酸。

3、一种如权利要求1所述的海洋星虫提取物，其特征在于其中蛋白质的含量为55％。

4、一种如权利要求1所述的海洋星虫提取物的制备方法，其特征在于该提取物通过下述方法获得：

海洋星虫原料清洗干净后匀浆于2～5倍体积的含盐酸盐的缓冲溶液中，室温提取24h，8000rpm高速离心30min，上清液用终浓度为20％～70％的无水乙醇分级沉淀，收集20％～70％的无水乙醇沉淀组分，真空冷冻干燥，干燥物溶解后用截留分子量为1万和10万的超滤膜分别超滤，收集1～10万的组分，浓缩，冻干，即得。

5、一种如权利要求4所述的海洋星虫提取物的制备方法，其特征在于其中所述的含盐酸盐的缓冲溶液选自10～20mmol/L磷酸缓冲液，其中含1～2mol/L盐酸盐和1～10mmol/L EDTA，所述的盐酸盐选自NaCl或KCl。

6、一种如权利要求1所述的海洋星虫提取物在制备抗疲劳和延缓衰老保健品或药品中的应用。

7、一种如权利要求7所述的海洋星虫提取物的应用，其特征在于该提取物作为抗疲劳与延缓衰老保健食品及相关药物的活性成份，与食用及药用辅料制成各种制剂。

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