CN117982673A - 抗her3抗体-药物偶联物的应用 - Google Patents

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Abstract

本申请的问题在于，提供一种抗HER3抗体‑药物偶联物的应用。本申请的技术方案在于提供抗HER3抗体‑药物偶联物在制造EGFR‑TKI耐受性的非小细胞肺癌的治疗用药中的应用。

Description

抗HER3抗体-药物偶联物的应用
本申请是下述申请的分案申请：
发明名称：EGFR-TKI耐受性的非小细胞肺癌的治疗剂以及抗HER3抗体-药物偶联物的应用
国际申请日：2018年02月27日
国际申请号：PCT/JP2018/007152
国家申请号：201880014522.3
技术领域
本发明涉及一种EGFR-TKI耐受性的非小细胞肺癌的治疗剂以及治疗方法，其特征在于，施用抗HER3抗体-药物偶联物。
背景技术
在使用对于表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor；EGFR)基因突变阳性的非小细胞肺癌有效的EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)的治疗中，多数情况下，在持续治疗的过程中治疗对象癌对于该抑制剂的耐药性增强，结果是病情加剧。已知：对作为第一代EGFR-TKI的吉非替尼(Gefitinib)和厄洛替尼(Erlotinib)、以及作为第二代EGFR-TKI的阿法替尼(Afatinib)有耐受性的癌症中的约半数在EGFR基因上有T790M突变。作为对于已确认EGFR T790M突变为阳性的非小细胞肺癌有效的药剂，已知有作为第三代EGFR-TKI的奥希替尼(Osimertinib)(非专利文献1)。但是，对于对奥希替尼有耐受性的非小细胞肺癌，尚未承认有最佳的药剂。另外，对于对EGFR-TKI显示耐受性且已确认EGFRT790M突变为阴性的非小细胞肺癌，也尚未承认有最佳的药剂。
人表皮生长因子受体3(也已知为HER3、ErbB3)是属于受体蛋白质酪氨酸激酶的表皮生长因子受体亚家族的跨膜受体。已知：癌细胞中的HER3的表达量的增加与对于EGFR-TKI的耐受性的获得具有关联性(非专利文献2)。另外，进行了验证抗HER3抗体对于非小细胞肺癌的效果的研究(非专利文献3)。
使具有细胞毒性的药物结合于与在癌细胞表面表达且能够在细胞中内在化的抗原结合的抗体而成的抗体-药物偶联物(Antibody-Drug Conjugate；ADC)能够选择性地将药物送达至癌细胞，由此能够期待使药物蓄积于癌细胞内而杀灭癌细胞(非专利文献4～8)。
作为抗体-药物偶联物之一，已知有以抗HER3抗体和作为拓扑异构酶I抑制剂的依沙替康(Exatecan)为构成要素的抗体-药物偶联物(专利文献1)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开第2015/155998号
非专利文献
非专利文献1：I.Sullivan et al.Ther Adv Respir Dis 2016,Vol.10(6)549-565.
非专利文献2：N.V.Sergina et al.Nature 2007January 25；445(7126):437-441.
非专利文献3：K Yonesaka et al.,Oncogene(2016)35,878-886.
非专利文献4：Ducry,L.,et al.,Bioconjugate Chem.(2010)21,5-13.
非专利文献5：Alley,S.C.,et al.,Current Opinion in Chemical Biology(2010)14,529-537.
非专利文献6：Damle N.K.Expert Opin.Biol.Ther.(2004)4,1445-1452.
非专利文献7：Senter P.D.,et al.,Nature Biotechnology(2012)30,631-637.
非专利文献8：Howard A.et al.,J Clin Oncol 29:398-405.
发明内容
发明所要解决的问题
本发明的问题是，提供一种EGFR-TKI耐受性的非小细胞肺癌的治疗剂以及治疗方法。
用于解决问题的方案
本发明人等发现了：抗HER3抗体-药物偶联物对于EGFR-TKI耐受性的非小细胞肺癌显示出优异的抗肿瘤效果。
即，本发明涉及如下内容。
[1]
一种EGFR-TKI耐受性的非小细胞肺癌的治疗剂，其含有抗HER3抗体-药物偶联物作为有效成分。
[2]
根据[1]所述的治疗剂，其中，非小细胞肺癌为EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌。
[3]
根据[1]或[2]所述的治疗剂，其中，EGFR-TKI为吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼或奥希替尼。
[4]
根据[1]或[2]所述的治疗剂，其中，EGFR-TKI为奥希替尼。
[5]
根据[2]所述的治疗剂，其中，EGFR-TKI为吉非替尼、厄洛替尼或阿法替尼。
[6]
根据[2]所述的治疗剂，其中，EGFR-TKI为吉非替尼或厄洛替尼。
[7]
根据[1]～[6]中任一项所述的治疗剂，其中，非小细胞肺癌表达HER3。
[8]
根据[1]～[7]中任一项所述的治疗剂，其中，抗HER3抗体-药物偶联物为下式所示的药物连接子与抗HER3抗体通过硫醚键进行键结而成的抗HER3抗体-药物偶联物。
(式中，A表示与抗HER3抗体的键结位置)
[9]
根据[1]～[8]中任一项所述的治疗剂，其中，抗HER3抗体为包含重链和轻链的抗体，所述重链包含：CDRH1，其由序列号1所示的氨基酸序列组成；CDRH2，其由序列号2所示的氨基酸序列组成；以及CDRH3，其由序列号3所示的氨基酸序列组成，所述轻链包含：CDRL1，其由序列号4所示的氨基酸序列组成；CDRL2，其由序列号5所示的氨基酸序列组成；以及CDRL3，其由序列号6所示的氨基酸序列组成。
[10]
根据[1]～[8]中任一项所述的治疗剂，其中，抗HER3抗体为包含重链和轻链的抗体，所述重链包含：重链可变区，其由序列号7所示的氨基酸序列组成，所述轻链包含：轻链可变区，其由序列号8所示的氨基酸序列组成。
[11]
根据[1]～[8]中任一项所述的治疗剂，其中，抗HER3抗体为包含重链和轻链的抗体，所述重链由序列号9所示的氨基酸序列组成，所述轻链由序列号10所示的氨基酸序列组成。
[12]
根据[11]所述的治疗剂，其中，抗HER3抗体的重链羧基末端的赖氨酸残基缺失。
[13]
根据[1]～[12]中任一项所述的治疗剂，其中，抗HER3抗体-药物偶联物中的每个抗体的药物连接子的平均结合数为7至8个的范围。
[14]
根据[1]～[12]中任一项所述的治疗剂，其中，抗HER3抗体-药物偶联物中的每个抗体的药物连接子的平均结合数为7.5至8个的范围。
[15]
根据[1]～[14]中任一项所述的治疗剂，其特征在于，与第二药剂并用地施用。
[16]
根据[15]所述的治疗剂，其中，第二药剂为吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼或奥希替尼。
[17]
根据[16]所述的治疗剂，其中，第二药剂为厄洛替尼。
[18]
根据[16]所述的治疗剂，其中，第二药剂为奥希替尼。
[19]
一种EGFR-TKI耐受性的非小细胞肺癌的治疗方法，其特征在于，施用抗HER3抗体-药物偶联物。
[20]
根据[19]所述的治疗方法，其中，非小细胞肺癌为EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌。
[21]
根据[19]或[20]所述的治疗方法，其中，EGFR-TKI为吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼或奥希替尼。
[22]
根据[19]或[20]所述的治疗方法，其中，EGFR-TKI为奥希替尼。
[23]
根据[20]所述的治疗方法，其中，EGFR-TKI为吉非替尼、厄洛替尼或阿法替尼。
[24]
根据[20]所述的治疗方法，其中，EGFR-TKI为吉非替尼或厄洛替尼。
[25]
根据[19]～[24]中任一项所述的治疗方法，其中，非小细胞肺癌表达HER3。
[26]
根据[19]～[25]中任一项所述的治疗方法，其中，抗HER3抗体-药物偶联物为下式所示的药物连接子与抗HER3抗体通过硫醚键进行键结而成的抗HER3抗体-药物偶联物。
(式中，A表示与抗HER3抗体的键结位置)
[27]
根据[19]～[26]中任一项所述的治疗方法，其中，抗HER3抗体为包含重链和轻链的抗体，所述重链包含：CDRH1，其由序列号1所示的氨基酸序列组成；CDRH2，其由序列号2所示的氨基酸序列组成；以及CDRH3，其由序列号3所示的氨基酸序列组成，所述轻链包含：CDRL1，其由序列号4所示的氨基酸序列组成；CDRL2，其由序列号5所示的氨基酸序列组成；以及CDRL3，其由序列号6所示的氨基酸序列组成。
[28]
根据[19]～[26]中任一项所述的治疗方法，其中，抗HER3抗体为包含重链和轻链的抗体，所述重链包含：重链可变区，其由序列号7所示的氨基酸序列组成，所述轻链包含：轻链可变区，其由序列号8所示的氨基酸序列组成。
[29]
根据[19]～[26]中任一项所述的治疗方法，其中，抗HER3抗体为包含重链和轻链的抗体，所述重链由序列号9所示的氨基酸序列组成，所述轻链由序列号10所示的氨基酸序列组成。
[30]
根据[29]所述的治疗方法，其中，抗HER3抗体的重链羧基末端的赖氨酸残基缺失。
[31]
根据[19]～[30]中任一项所述的治疗方法，其中，抗HER3抗体-药物偶联物中的每个抗体的药物连接子的平均结合数为7至8个的范围。
[32]
根据[19]～[30]中任一项所述的治疗方法，其中，抗HER3抗体-药物偶联物中的每个抗体的药物连接子的平均结合数为7.5至8个的范围。
[33]
根据[19]～[32]中任一项所述的治疗方法，其特征在于，抗HER3抗体-药物偶联物与第二药剂并用地施用。
[34]
根据[33]所述的治疗方法，其中，第二药剂为吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼或奥希替尼。
[35]
根据[34]所述的治疗方法，其中，第二药剂为厄洛替尼。
[36]
根据[34]所述的治疗方法，其中，第二药剂为奥希替尼。
[37]
一种抗HER3抗体-药物偶联物，其用于治疗EGFR-TKI耐受性的非小细胞肺癌。
[38]
根据[37]所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，非小细胞肺癌为EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌。
[39]
根据[37]或[38]所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，EGFR-TKI为吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼或奥希替尼。
[40]
根据[37]或[38]所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，EGFR-TKI为奥希替尼。
[41]
根据[38]所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，EGFR-TKI为吉非替尼、厄洛替尼或阿法替尼。
[42]
根据[38]所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，EGFR-TKI为吉非替尼或厄洛替尼。
[43]
根据[37]～[42]中任一项所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，非小细胞肺癌表达HER3。
[44]
根据[37]～[43]中任一项所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，抗HER3抗体-药物偶联物为下式所示的药物连接子与抗HER3抗体通过硫醚键进行键结而成的抗HER3抗体-药物偶联物。
(式中，A表示与抗HER3抗体的键结位置)
[45]
根据[37]～[44]中任一项所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，抗HER3抗体为包含重链和轻链的抗体，所述重链包含：CDRH1，其由序列号1所示的氨基酸序列组成；CDRH2，其由序列号2所示的氨基酸序列组成；以及CDRH3，其由序列号3所示的氨基酸序列组成，所述轻链包含：CDRL1，其由序列号4所示的氨基酸序列组成；CDRL2，其由序列号5所示的氨基酸序列组成；以及CDRL3，其由序列号6所示的氨基酸序列组成。
[46]
根据[37]～[44]中任一项所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，抗HER3抗体为包含重链和轻链的抗体，所述重链包含：重链可变区，其由序列号7所示的氨基酸序列组成，所述轻链包含：轻链可变区，其由序列号8所示的氨基酸序列组成。
[47]
根据[37]～[44]中任一项所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，抗HER3抗体为包含重链和轻链的抗体，所述重链由序列号9所示的氨基酸序列组成，所述轻链由序列号10所示的氨基酸序列组成。
[48]
根据[47]所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，抗HER3抗体的重链羧基末端的赖氨酸残基缺失。
[49]
根据[37]～[48]中任一项所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，抗HER3抗体-药物偶联物中的每个抗体的药物连接子的平均结合数为7至8个的范围。
[50]
根据[37]～[48]中任一项所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，抗HER3抗体-药物偶联物中的每个抗体的药物连接子的平均结合数为7.5至8个的范围。
[51]
根据[37]～[50]中任一项所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其特征在于，与第二药剂并用地施用。
[52]
根据[51]所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，第二药剂为吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼或奥希替尼。
[53]
根据[52]所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，第二药剂为厄洛替尼。
[54]
根据[52]所述的抗HER3抗体-药物偶联物，其中，第二药剂为奥希替尼。
[55]
抗HER3抗体-药物偶联物在制造EGFR-TKI耐受性的非小细胞肺癌的治疗用药中的应用。
[56]
根据[55]所述的应用，其中，非小细胞肺癌为EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌。
[57]
根据[55]或[56]所述的应用，其中，EGFR-TKI为吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼或奥希替尼。
[58]
根据[55]或[56]所述的应用，其中，EGFR-TKI为奥希替尼。
[59]
根据[56]所述的应用，其中，EGFR-TKI为吉非替尼、厄洛替尼或阿法替尼。
[60]
根据[56]所述的应用，其中，EGFR-TKI为吉非替尼或厄洛替尼。
[61]
根据[55]～[60]中任一项所述的应用，其中，非小细胞肺癌表达HER3。
[62]
根据[55]～[61]中任一项所述的应用，其中，抗HER3抗体-药物偶联物为下式所示的药物连接子与抗HER3抗体通过硫醚键进行键结而成的抗HER3抗体-药物偶联物。
(式中，A表示与抗HER3抗体的键结位置)
[63]
根据[55]～[62]中任一项所述的应用，其中，抗HER3抗体为包含重链和轻链的抗体，所述重链包含：CDRH1，其由序列号1所示的氨基酸序列组成；CDRH2，其由序列号2所示的氨基酸序列组成；以及CDRH3，其由序列号3所示的氨基酸序列组成，所述轻链包含：CDRL1，其由序列号4所示的氨基酸序列组成；CDRL2，其由序列号5所示的氨基酸序列组成；以及CDRL3，其由序列号6所示的氨基酸序列组成。
[64]
根据[55]～[62]中任一项所述的应用，其中，抗HER3抗体为包含重链和轻链的抗体，所述重链包含：重链可变区，其由序列号7所示的氨基酸序列组成，所述轻链包含：轻链可变区，其由序列号8所示的氨基酸序列组成。
[65]
根据[55]～[62]中任一项所述的应用，其中，抗HER3抗体为包含重链和轻链的抗体，所述重链由序列号9所示的氨基酸序列组成，所述轻链由序列号10所示的氨基酸序列组成。
[66]
根据[65]所述的应用，其中，抗HER3抗体的重链羧基末端的赖氨酸残基缺失。
[67]
根据[55]～[66]中任一项所述的应用，其中，抗HER3抗体-药物偶联物中的每个抗体的药物连接子的平均结合数为7至8个的范围。
[68]
根据[55]～[66]中任一项所述的应用，其中，抗HER3抗体-药物偶联物中的每个抗体的药物连接子的平均结合数为7.5至8个的范围。
[69]
根据[55]～[68]中任一项所述的应用，其特征在于，抗HER3抗体-药物偶联物与第二药剂并用地施用。
[70]
根据[69]所述的应用，其中，第二药剂为吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼或奥希替尼。
[71]
根据[70]所述的应用，其中，第二药剂为厄洛替尼。
[72]
根据[70]所述的应用，其中，第二药剂为奥希替尼。
发明效果
根据本发明，能够提供一种EGFR-TKI耐受性的非小细胞肺癌的治疗剂以及治疗方法，其特征在于，施用抗HER3抗体-药物偶联物。
附图说明
图1是表示抗HER3抗体(1)的重链氨基酸序列的图。
图2是表示抗HER3抗体(1)的轻链氨基酸序列的图。
图3是表示HER3-ADC(1)的、对于HCC827细胞株以及HCC827GR5细胞株的细胞增殖抑制活性的图。图中的误差条(error bar)表示标准误差(n＝6)。
图4是表示HCC827细胞株以及HCC827GR5细胞株中的HER3的mRNA量的图。
图5是表示通过HER3-ADC(1)单剂、厄洛替尼单剂、或HER3-ADC(1)与厄洛替尼的并用实现的对于HCC827GR5细胞株的细胞增殖抑制活性的图。图中的误差条表示标准误差(n＝6)。
图6是表示通过HER3-ADC(1)单剂、厄洛替尼单剂、或HER3-ADC(1)与厄洛替尼的并用治疗实现的对于裸鼠移植HCC827GR5细胞株的抗肿瘤效果的图。图中的误差条表示标准偏差(n＝10)。
图7是表示奥希替尼对于PC9细胞株以及PC9AZDR7细胞株的细胞增殖抑制活性的图。图中的误差条表示标准误差(n＝6)。
图8是表示PC9细胞株以及PC9AZDR7细胞株中的HER3的蛋白质量的图。图中的误差条表示标准偏差(n＝3)。
图9是表示HER3-ADC(1)单剂对于裸鼠移植PC9细胞株的抗肿瘤效果的图。图中的误差条表示标准误差(对照组n＝8，HER3-ADC(1)组n＝9)，箭头表示药剂的施用。
图10是表示HER3-ADC(1)单剂对于裸鼠移植PC9AZDR7细胞株的抗肿瘤效果的图。图中的误差条表示标准误差(对照组n＝8，HER3-ADC(1)组n＝9)，箭头表示药剂的施用。
图11是表示HER3-ADC(1)与奥希替尼并用对于裸鼠移植PC9AZDR7细胞株的抗肿瘤效果的图。图中的误差条表示标准误差(对照组n＝11，HER3-ADC(1)单剂组n＝12，奥希替尼单剂组n＝12，HER3-ADC(1)与奥希替尼的并用组n＝10)，箭头表示药剂的施用。
具体实施方式
以下，对用于实施本发明的优选方式进行说明。需要说明的是，以下说明的实施方式示出了本发明的代表性实施方式的一个例子，不会据此缩小地解释本发明的范围。
在本发明中，“EGFR-TKI”表示EGFR酪氨酸激酶抑制剂，例如可以列举出吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼、以及奥希替尼。
在本发明中，有时也将吉非替尼以及厄洛替尼称为第一代EGFR-TKI，将阿法替尼称为第二代EGFR-TKI，进一步将奥希替尼称为第三代EGFR-TKI。
在本发明中，“EGFR-TKI耐受性的非小细胞肺癌”表示：已确认对EGFR-TKI显示耐受性的非小细胞肺癌；以及能够合理地识别或预测到对EGFR-TKI显示耐受性的非小细胞肺癌。
在本发明中，“EGFR T790M突变”表示：位于EGFR酪氨酸激酶结构域的ATP结合位点的门控(gatekeeper)区的第790个氨基酸苏氨酸被转化为蛋氨酸的突变(Pao W,et al.,PLoS Med.2(3):e73,2005，Kobayashi S,et al.,N Engl J Med.352(8):786-792,2005)。EGFR T790M突变的有无可以从非小细胞肺癌的患者采取组织样本或血浆样本，通过实时PCR法等方法来确认。
在本发明中，“EGFR T790M突变阳性的非小细胞肺癌”表示：已确认EGFR T790M突变为阳性的非小细胞肺癌；以及能够合理地识别或预测到EGFR T790M突变为阳性的非小细胞肺癌。
对于EGFR T790M突变阳性的非小细胞肺癌而言，认为：EGFR的ATP结合位点的立体结构产生变化，因空间位阻等机制而对第一代EGFR-TKI以及第二代EGFR-TKI显示耐受性，在第一代EGFR-TKI以及第二代EGFR-TKI的耐受性例子的约半数的病例中得到确认。作为对于EGFR T790M突变阳性的非小细胞肺癌有效的药剂，已知有作为第三代EGFR-TKI的奥希替尼。
对于奥希替尼耐受性的非小细胞肺癌，尚未承认有最佳的药剂，存在未满足的医疗需求(unmet medical need)。
作为相当于奥希替尼耐受性的非小细胞肺癌的细胞株，例如可以列举出PC9AZDR7细胞株。PC9AZDR7细胞株是以作为人非小细胞肺癌的细胞株的PC9为亲株，并获得了对于奥希替尼的耐受性的细胞株，可以通过本申请说明书的实施例3-1所记载的方法来建立。
药剂对于奥希替尼耐受性的非小细胞肺癌的抗肿瘤效果可以通过针对对于上述细胞株的体外(in vitro)的细胞增殖抑制活性、将上述细胞株移植到裸鼠的模型的体内(in vivo)的肿瘤增殖抑制率等进行试验来确认。
在本发明中，“EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌”表示：已确认EGFR T790M突变为阴性的非小细胞肺癌；以及能够合理地识别或预测到EGFR T790M突变为阴性的非小细胞肺癌。
在EGFR-TKI耐受性的病例中，EGFR T790M突变阳性的非小细胞肺癌以外的病例相当于EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌。虽然认为这样的EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌因EGFR T790M突变以外的突变(例如MET基因的扩增)等而获得了耐受性，但也给出了存在未知的耐受性机理的启示。
对于对EGFR-TKI显示耐受性的EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌，尚未承认有最佳的药剂，存在未满足的医疗需求。
作为相当于对EGFR-TKI显示耐受性的EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌的细胞株，例如可以列举出HCC827GR5细胞株(Engelman JA et al.,Science2007,316(5827),1039-1043)。HCC827GR5细胞株是以作为人非小细胞肺癌的细胞株的HCC827为亲株，并获得了对于作为EGFR-TKI的吉非替尼的耐受性的细胞株。另外，11-18细胞株(Proc Natl AcadSci U S A.2012Jul31；109(31):E2127-33)、Ma70GR细胞株(K Yonesaka et al.,Oncogene(2016)35,878-886)也可以用作相当于对EGFR-TKI显示耐受性的EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌的细胞株。
药剂对于对EGFR-TKI显示耐受性的EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌的抗肿瘤效果可以通过针对对于上述细胞株的体外(in vitro)的细胞增殖抑制活性、将上述细胞株移植到裸鼠的模型的体内(in vivo)的肿瘤增殖抑制率等进行试验来确认。
在本发明中，“HER3”与人表皮生长因子受体3(有时也称为ErbB3)同义，与HER1、HER2以及HER4同为属于受体蛋白质酪氨酸激酶的表皮生长因子受体亚家族的跨膜受体。已知：HER3在乳腺癌、胃肠癌以及胰腺癌等多种癌症中表达，通过与EGFR、HER2等酪氨酸激酶受体等形成异源二聚体，自身受到磷酸化，诱导癌细胞的增殖、细胞凋亡抑制信号。
本发明中使用的HER3蛋白质可以从人的HER3表达细胞直接纯化进行使用，或者，在用作抗原时，将该细胞的细胞膜级分用作HER3蛋白质，另外，可以通过在体外(in vitro)合成HER3或者利用基因操作在宿主细胞中产生HER3来得到。在基因操作中，具体而言，可以通过在将HER3 cDNA嵌入到能够表达HER3 cDNA的载体后，将该载体在含有转录和翻译所需的酶、基质以及能量物质的溶液中进行培养，来合成HER3。或者，可以通过利用该载体使其他原核生物、或真核生物的宿主细胞进行转化，使其表达HER3，来得到该蛋白质。另外，也可以将所述的利用基因操作得到的HER3表达细胞或表达HER3的细胞株用作HER3蛋白质抗原。
HER3的RNA序列、cDNA序列以及氨基酸序列被公开在公共数据库上，例如可以通过AAA35979(包含由氨基末端19个氨基酸残基组成的信号序列的前体)、M34309(NCBI)等收录号(Accession number)进行参照。
另外，由在上述HER3的氨基酸序列中取代、缺失、附加和/或***了1至10个氨基酸的氨基酸序列组成的具有与该蛋白质同等的生物活性的蛋白质也包含于HER3。
在本发明中，“抗HER3抗体”表示具有通过与HER3特异性结合，优选为与HER3结合而在HER3表达细胞中内在化的活性的抗体，换言之，表示具有在与HER3结合后，向HER3表达细胞内移动的活性的抗体。
本发明中使用的抗HER3抗体可以通过公知的方式获取。例如，可以通过如下方式来得到：使用该领域中通常实施的方法，将作为抗原的HER3或选自HER3的氨基酸序列中的任意多肽免疫给动物，采取、纯化在生物体内产生的抗体。抗原的来源不限定于人，也可以将源自小鼠、大鼠等人以外的动物的抗原免疫给动物。在该情况下，通过对与所获取的异种抗原结合的抗体和人抗原的交叉性进行试验，能够分选出可适用于人的疾病的抗HER3抗体。
另外，也可以按照公知的方法(例如，Kohler and Milstein,Nature(1975)256,p.495-497；Kennet,R.ed.,Monoclonal Antibodies,p.365-367,Plenum Press,N.Y.(1980))，通过使产生针对抗原的抗体的抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合来建立杂交瘤，得到单克隆抗体。
需要说明的是，抗原可以通过利用基因操作使宿主细胞产生对抗原蛋白质进行编码的基因来得到。具体而言，制作能够表达抗原基因的载体，将其导入至宿主细胞来使该基因表达，纯化所表达的抗原即可。通过使用将上述的利用基因操作得到的抗原表达细胞或表达抗原的细胞株免疫给动物的方法，也能够获取抗体。
本发明中使用的抗HER3抗体优选为以降低对于人的异种抗原性等为目的而人为改变的基因重组型抗体，例如嵌合(Chimeric)抗体、人源化(Humanized)抗体，或者优选为仅具有源自人的抗体的基因序列的抗体，即人抗体。这些抗体可以使用已知的方法进行制造。
作为嵌合抗体，可以列举出：抗体的可变区与恒定区相互异种的抗体，例如将源自小鼠或大鼠的抗体的可变区与源自人的恒定区接合而成的嵌合抗体(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,81,6851-6855,(1984))。
作为人源化抗体，可以列举出：仅将异种抗体的互补性决定区(CDR；complementarity determining region)嵌入至源自人的抗体而成的抗体(Nature(1986)321,p.522-525)；通过CDR移植法，除了异种抗体的CDR的序列之外，还将异种抗体的一部分骨架的氨基酸残基移植到人抗体而成的抗体(国际公开第90/07861号)；使用基因转化诱变(gene conversion mutagenesis)策略进行人源化而成的抗体(美国专利第5821337号)。
作为人抗体，可以列举出：使用具有包含人抗体的重链和轻链的基因的人染色体片段的人抗体产生小鼠而制作出的抗体(参照Tomizuka,K.et al.,Nature Genetics(1997)16,p.133-143；Kuroiwa,Y.et.al.,Nucl.Acids Res.(1998)26,p.3447-3448；Yoshida,H.et.al.,Animal Cell Technology:Basic and Applied Aspects vol.10,p.69-73(Kitagawa,Y.,Matsuda,T.and Iijima,S.eds.),Kluwer Academic Publishers,1999；Tomizuka,K.et.al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2000)97,p.722-727等。)。或者，也可以列举出：通过从人抗体库分选出的噬菌体展示而获取到的抗体(参照Wormstone,I.M.et.al,Investigative Ophthalmology&Visual Science.(2002)43(7),p.2301-2308；Carmen,S.et.al.,Briefings in Functional Genomics and Proteomics(2002),1(2),p.189-203；Siriwardena,D.et.al.,Ophthalmology(2002)109(3),p.427-431等。)。
本发明中使用的抗HER3抗体也包含抗体的修饰体。该修饰体意指，对本发明的抗体实施化学或生物学修饰而成的物质。化学修饰体包括具有化学部分与氨基酸骨架的键结、化学部分与N-键结或O-键结烃链的键结的化学修饰体等。生物学修饰体包括：翻译后修饰(例如，N-键结或O-键结型糖链的附加、N末端或C末端的处理(processing)、脱酰胺化、天冬氨酸的异构化、蛋氨酸的氧化等)过的物质；通过使用原核生物宿主细胞进行表达而在N末端附加了蛋氨酸残基的物质等。另外，本发明中使用的为了能够进行抗HER3抗体或抗原的检测或离析而标记过的物质，例如，酶标记体、荧光标记体、亲和力(affinity)标记体也包含于上述修饰体的意思中。这样的本发明中使用的抗HER3抗体的修饰体对于抗体的稳定性以及血中滞留性的改善、抗原性的降低、抗体或抗原的检测或离析等是有用的。
另外，通过调节与本发明中使用的抗HER3抗体键结的糖链修饰(糖基化(glycosylation)、去岩藻糖基化(defucosylation)等)，能够增强抗体依赖性细胞毒活性(cytotoxicity activity)。作为抗体的糖链修饰的调节技术，已知有国际公开第99/54342号、国际公开第00/61739号、国际公开第02/31140号等，但不限定于此。本发明中使用的抗HER3抗体也包含调节了该糖链修饰的抗体。
需要说明的是，已知：在由哺乳类培养细胞生产的抗体中，其重链的羧基末端的赖氨酸残基缺失(Journal of Chromatography A,705:129-134(1995))，另外，还已知：重链羧基末端的甘氨酸、赖氨酸这两个氨基酸残基缺失，重新位于羧基末端的脯氨酸残基被酰胺化(Analytical Biochemistry,360:75-83(2007))。但是，这些重链序列的缺失以及修饰不影响抗体的抗原结合能力以及效应子功能(补体的活化、抗体依赖性细胞毒性作用等)。因此，本发明中使用的抗HER3抗体也包含受到该修饰的抗体以及该抗体的功能性片段，也包含在重链羧基末端缺失了一个或两个氨基酸的缺失体、以及酰胺化的该缺失体(例如，羧基末端部位的脯氨酸残基被酰胺化的重链)等。不过，只要保持有抗原结合能力以及效应子功能，本发明中使用的抗HER3抗体的重链的羧基末端的缺失体就不限定于上述的种类。构成本发明中使用的抗HER3抗体的两条重链可以为选自由全长以及上述缺失体构成的组中的重链的任一种，也可以为将任意两种组合而成的重链。各缺失体的量比可能受到产生本发明中使用的抗HER3抗体的哺乳类培养细胞的种类以及培养条件的影响，但本发明中使用的抗HER3抗体优选可以列举出：在两条重链的双方，羧基末端的一个氨基酸残基缺失的抗HER3抗体。
作为本发明中使用的抗HER3抗体的同种型(isotype)，例如可以列举出IgG(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)等，优选可以列举出IgG1或IgG2。另外，它们的变体也可以用作本发明的抗HER3抗体。
作为能够在本发明中使用的抗HER3抗体，可以列举出：帕曲土单抗(Patritumab,U3-1287)、U1-59(国际公开第2007/077028号)、AV-203(国际公开第2011/136911号)、LJM-716(国际公开第2012/022814号)、Duligotumab(MEHD-7945A)(国际公开第2010/108127号)、Istiratumab(MM-141)(国际公开第2011/047180号)、Lumretuzumab(RG-7116)(国际公开第2014/108484号)、Setibantumab(MM-121)(国际公开第2008/100624号)、REGN-1400(国际公开第2013/048883号)、ZW-9(国际公开第2013/063702)、以及它们的变体、活性片段、修饰体等，优选地，可以列举出Patritumab以及U1-59。这些抗HER3抗体可以通过上述文献所记载的方法进行制造。
在本发明中，“抗体-药物偶联物”表示将具有细胞毒性的药物经由连接子结合于抗体而成的复合体。作为抗体-药物偶联物，例如，可以列举出：美国专利第6214345号、国际公开第2002/083067号、国际公开第2003/026577号、国际公开第2004/054622号、国际公开第2005/112919号、国际公开第2006/135371号、国际公开第2007112193号、国际公开第2008/033891号、国际公开第2009/100194号、国际公开第2009/134976号、国际公开第2009/134977号、国际公开第2010/093395号、国际公开第2011/130613号、国际公开第2011/130616号、国际公开第2013/055993号、国际公开第2014/057687号、国际公开第2014/061277号、国际公开第2014/107024号、国际公开第2014/134457号、以及国际公开第2014/145090号所记载的抗体-药物偶联物，优选为国际公开第2014/057687号以及国际公开第2014/061277号所记载的抗体-药物偶联物，更优选为国际公开第2014/057687号所记载的抗体-药物偶联物。这些抗体-药物偶联物可以通过上述文献所记载的方法进行制造。
作为具有细胞毒性的药物，只要是具有抗肿瘤效果，具有能够键结于连接子的取代基、部分结构的药物，就没有特别限制，例如可以列举出：喜树碱(Camptothecin)、卡里奇霉素(Calicheamicin)、多柔比星(Doxorubicin)、柔红霉素(Daunorubicin)、丝裂霉素C(Mitomycin C)、博来霉素(Bleomycin)、环孢苷(Cyclocytidine)、长春新碱(Vincristine)、长春花碱(Vinblastine)、甲氨蝶呤(Methotrexate)、顺铂(Cisplatin)、澳瑞他汀E(Auristatin E)、美登素(Maytansine)、紫杉醇(Paclitaxel)、吡咯并苯并二氮杂卓(Pyrrolobenzodiazepine)以及它们的衍生物，优选地，可以列举出喜树碱衍生物，更优选地，可以列举出依沙替康(Exatecan)衍生物。作为拓扑异构酶I抑制剂的依沙替康(IUPAC名：(1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-1，2，3，9，12，15-六氢-9-羟基-4-甲基-10H，13H-苯并[de]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13-二酮，也可以表示为(化学名：((1S，9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-10，13(9H，15H)-二酮)))为下式所示的化合物。
在本发明中，“药物连接子”表示抗体-药物偶联物中的药物和连接子部分，换言之，表示抗体-药物偶联物中的抗体以外的部分结构。
在本发明中，“抗HER3抗体-药物偶联物”表示抗体-药物偶联物中的抗体为抗HER3抗体的抗体-药物偶联物。作为抗HER3抗体-药物偶联物，例如可以列举出国际公开第2012/019024号、国际公开第2012/064733号、以及国际公开第2015/155998号所记载的抗体-药物偶联物，优选地，可以列举出国际公开第2015/155998号所记载的抗体-药物偶联物。这些抗HER3抗体-药物偶联物可以通过上述文献所记载的方法进行制造。
本发明中更优选使用的抗HER3抗体-药物偶联物为下式所示的药物连接子与抗HER3抗体通过硫醚键进行键结而成的抗HER3抗体-药物偶联物。
(式中，A表示与抗HER3抗体的键结位置)
该药物连接子与在抗体的链间的二硫键部位(两处重链-重链之间以及两处重链-轻链之间)产生的硫醇基(换言之，半胱氨酸残基的硫原子)键结。
本发明中更优选使用的上述的抗HER3抗体-药物偶联物也可以由下式表示。
在此，药物连接子通过硫醚键与抗体键结。另外，n与所谓的平均药物结合数(DAR；Drug-to-Antibody Ratio：药物/抗体比率)同义，表示每个抗体的药物连接子的平均结合数。
本发明中更优选使用的抗HER3抗体-药物偶联物在迁移至肿瘤细胞内后，连接子部分断裂，释放出下式所示的化合物。
认为上述化合物是本发明中更优选使用的上述的抗HER3抗体-药物偶联物的抗肿瘤活性的主体，已确认具有拓扑异构酶I抑制作用(Ogitani Y.et al.,Clinical CancerResearch,2016,Oct 15；22(20):5097-5108,Epub 2016Mar 29)。
本发明中使用的抗HER3抗体-药物偶联物的抗HER3抗体部分优选为包含重链和轻链的抗体，所述重链包含：CDRH1，其由序列号1所示的氨基酸序列组成；CDRH2，其由序列号2所示的氨基酸序列组成；以及CDRH3，其由序列号3所示的氨基酸序列组成，所述轻链包含：CDRL1，其由序列号4所示的氨基酸序列组成；CDRL2，其由序列号5所示的氨基酸序列组成；以及CDRL3，其由序列号6所示的氨基酸序列组成。
更优选为包含重链和轻链的抗体，所述重链包含：重链可变区，其由序列号7所示的氨基酸序列组成，所述轻链包含：轻链可变区，其由序列号8所示的氨基酸序列组成。
进一步更优选为包含重链和轻链的抗体，所述重链由序列号9所示的氨基酸序列组成，所述轻链由序列号10所示的氨基酸序列组成，或者，进一步更优选为所述抗体的重链羧基末端的赖氨酸残基缺失的抗体。
用于制造上述的抗HER3抗体-药物偶联物的药物连接子中间体由下式表示。
上述的药物连接子中间体可以用N-[6-(2，5-二氧代-2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰基]甘氨酰基甘氨酰基-L-苯丙氨酰基-N-[(2-{[(1S，9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10，13-二氧代-2，3，9，10，13，15-六氢-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3'，4'：6，7]吲哚嗪并[1，2-b]喹啉-1-基]氨基}-2-氧代乙氧基)甲基]甘氨酰胺这一化学名来表示，可以参考国际公开第2014/057687号以及国际公开第2015/155998号等的记载进行制造。
本发明中优选使用的抗HER3抗体-药物偶联物可以通过使前述的药物连接子中间体与具有硫醇基(或者也称为巯基)的抗HER3抗体反应来进行制造。
具有巯基的抗HER3抗体可以通过本领域技术人员公知的方法得到(Hermanson,G.T,Bioconjugate Techniques,pp.56-136,pp.456-493,Academic Press(1996))。例如，相对于每个抗体内链间二硫键，使用0.3至3摩尔当量的三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)等还原剂，在含有乙二胺四乙酸(EDTA)等螯合剂的缓冲液中，使其与抗HER3抗体进行反应，由此，可以得到具有抗体内链间二硫键被部分或完全还原的巯基的抗HER3抗体。
进而，相对于每个具有巯基的抗HER3抗体，使用2至20摩尔当量的药物连接子中间体，由此，可以制造每个抗体结合有2个至8个药物的抗HER3抗体-药物偶联物。
所制造的抗HER3抗体-药物偶联物的每一分子抗体的平均药物结合数例如可以通过如下方法进行计算：通过测定280nm以及370nm这两个波长下的抗HER3抗体-药物偶联物及其偶联前体(conjugation precursor)的UV吸光度进行计算的方法(UV法)；通过HPLC测定对用还原剂处理抗体-药物偶联物而得到的各片段进行定量来计算的方法(HPLC法)。
抗HER3抗体与药物连接子中间体的偶联、以及抗HER3抗体-药物偶联物的每一分子抗体的平均药物结合数的计算可以参考国际公开第2015/155998号等的记载来实施。
本发明中使用的抗HER3抗体-药物偶联物的每个抗体的药物连接子的平均结合数优选为2至8，更优选为3至8，进一步更优选为7至8，进一步更优选为7.5至8，进一步更优选约为8。
本发明的治疗剂以及治疗方法的特征在于施用抗HER3抗体-药物偶联物，能够用于治疗EGFR-TKI耐受性的非小细胞肺癌。所述“非小细胞肺癌”既可以为EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌，也可以为EGFR T790M突变阳性的非小细胞肺癌。
所述“EGFR-TKI耐受性的非小细胞肺癌”中的“EGFR-TKI”优选为吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼、或奥希替尼，更优选为奥希替尼。另外，在所述“EGFR-TKI耐受性的非小细胞肺癌”中的“非小细胞肺癌”为EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌的情况下，所述“EGFR-TKI”优选为吉非替尼、厄洛替尼或阿法替尼，更优选为吉非替尼或厄洛替尼。
所述“EGFR-TKI耐受性的非小细胞肺癌”优选表达HER3，更优选高表达HER3。HER3的表达例如可以通过如下检测进行确认：通过免疫组织化学法(IHC)、流式细胞仪、蛋白质印迹法(western blot法)等进行的HER3的基因产物(蛋白质)水平的检测；或者，通过原位杂交法(ISH)、定量PCR法(q-PCR)进行的基因的转录水平的检测。HER3是否高表达可以使用本领域技术人员公知的方法来判定。
本发明的治疗剂以及治疗方法也可以含有本发明中使用的抗HER3抗体-药物偶联物以外的一种以上的其他药剂(例如第二药剂)。即，本发明的治疗剂或本发明中使用的抗HER3抗体-药物偶联物也可以与其他药剂并用地施用，由此能够增强抗癌效果。以这样的目的使用的其他药剂既可以与本发明中使用的抗HER3抗体-药物偶联物同时、分别或者连续地施用于个体中，也可以改变各自的施用间隔来施用。其他药剂或第二药剂优选为癌症治疗剂。作为这样的癌症治疗剂，只要是具有抗肿瘤活性的药剂就没有限定，例如为选自由EGFR-TKI、顺铂(Cisplatin)、卡铂(Carboplatin)、奥沙利铂(Oxaliplatin)、紫杉醇(Paclitaxel)、多西紫杉醇(Docetaxel)、吉西他滨(Gemcitabine)、卡培他滨(Capecitabine)、伊立替康(Irinotecan)(CPT-11)、依托泊苷(Etoposide)、环磷酰胺(Cyclophosphamide)、多柔比星(Doxorubicin)、长春碱(Vinblastin)以及长春新碱(Vincristine)构成的组中的至少一种，优选为EGFR-TKI。
作为上述的EGFR-TKI，优选为吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼、或奥希替尼，更优选为厄洛替尼或奥希替尼，进一步更优选为奥希替尼。
本发明的治疗剂以及治疗方法能够选择用作用于作为癌症治疗的主要治疗法的药物疗法的药剂，其结果是，能够延迟癌细胞的生长，抑制增殖，进而破坏癌细胞。通过这些作用，在癌症患者中，能够实现从癌症症状中的解放、QOL的改善，维持癌症患者的生命而实现治疗效果。即使在未达到破坏癌细胞的情况下，也能够通过抑制、控制癌细胞的增殖来在癌症患者中实现更高的QOL并且实现更长期的生存。
除了在这样的药物疗法中以药物单独使用之外，本发明的治疗剂以及治疗方法也可以用作在辅助疗法中与其他疗法组合的药剂，可以与外科手术、放射线疗法、激素疗法等组合。进而，也可以用作新辅助疗法中的药物疗法的药剂。
除了以上那样的治疗使用之外，本发明的治疗剂以及治疗方法还能够期待抑制微小转移癌细胞的增殖，进而破坏这一预防效果。例如，能够期待抑制、破坏在转移过程中存在于体液中的癌细胞的效果、对于刚着床于任意组织后的微小癌细胞的抑制、破坏等效果。因此，特别是能够期待外科去癌后的癌转移的抑制、预防效果。
除了作为全身疗法应用于患者之外，本发明的治疗剂以及治疗方法还能够局部应用于癌组织而期待治疗效果。
本发明的治疗剂以及治疗方法能够优选用于哺乳动物，但能够更优选用于人。
本发明的治疗剂能够以含有一种以上的药学上相容的成分的医药组合物的形式施用。作为在本发明的医药组合物中使用的物质，在施用量、施用浓度中，可以从该领域中通常使用的其他制剂添加物适当选择进行应用。例如，上述医药组合物代表性地含有一种以上的药学载体(例如，灭菌后的液体)。在此，液体例如包括水以及油(石油、动物来源、植物来源或合成来源的油)。油例如可以为花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。在上述医药组合物施用于静脉内的情况下，水为更具代表性的载体。盐水溶液以及葡萄糖(dextrose)水溶液以及甘油水溶液也可以用作液体载体，特别是用于注射用溶液。合适的药学赋形剂可以从该领域中公知的赋形剂中适当选择。如果需要，则上述医药组合物也可以含有微量的湿润剂或乳化剂、或者pH缓冲化剂。合适的药学载体的例子记载于E.W.Martin的“Remington's Pharmaceutical Sciences”。其配方对应于施用的方案。
各种送达***是公知的，能够用于施用本发明的医药组合物。作为导入路径，可以列举出皮内、肌肉内、腹腔内、静脉内以及皮下的路径，但不限定于此。施用例如可以是通过注入或团注(bolus injection)进行的。在特定的优选实施方式中，上述抗体-药物偶联物的施用是通过注入进行的。非经口的施用为优选的施用路径。
在代表性实施方式中，上述医药组合物以适合于向人的静脉内施用的组合物的形式按照常规的步骤制成配方。代表性的是，用于静脉内施用的组合物为灭菌的等渗性的水性缓冲液中的溶液。在必要的情况下，上述医药组合物还可以含有增溶剂以及用于缓解注射部位的疼痛的局部麻醉剂(例如，利多卡因)。一般而言，上述成分例如以密封于显示活性剂的量的安瓿(ampoule)或小袋(sachet)等并封口的容器中的干燥冻结干燥粉末或无水的浓缩物的形式，通过单独或在单位剂形中一起混合的任一种方式进行供给。在上述医药组合物通过注入进行施用的形态的情况下，例如可以用含有灭菌的制药级别的水或盐水的注入瓶进行给药。在上述医药通过注射进行施用的情况下，例如可以提供注射用灭菌水或盐水的安瓿，使得上述成分可以在施用前混合。
本发明中使用的抗HER3抗体-药物偶联物的每次的施用量优选为1.6mg/kg至12.4mg/kg的范围，更优选为3.2mg/kg、4.8mg/kg、6.4mg/kg、8mg/kg、9.6mg/kg或12.4mg/kg，进一步更优选为4.8mg/kg、6.4mg/kg、8mg/kg、9.6mg/kg或12.4mg/kg。
另外，在将本发明中使用的抗HER3抗体-药物偶联物与第二药剂(优选为EGFR-TKI，更优选为厄洛替尼或奥希替尼，进一步更优选为奥希替尼)并用的情况下，本发明中使用的抗HER3抗体-药物偶联物的每次的施用量优选为0.8mg/kg至12.4mg/kg的范围，更优选为1.6mg/kg、3.2mg/kg、4.8mg/kg、6.4mg/kg、8mg/kg、9.6mg/kg或12.4mg/kg，进一步更优选为3.2mg/kg、4.8mg/kg、6.4mg/kg、8mg/kg、9.6mg/kg或12.4mg/kg。
本发明中使用的抗HER3抗体-药物偶联物的施用间隔优选为一周一次(q1w)、两周一次(q2w)、三周一次(q3w)或四周一次(q4w)，更优选为三周一次(q3w)。
实施例
通过以下所示的例子来具体地说明本发明，但本发明不限定于此。另外，这些例子在任何意思中均不作限定解释。
实施例1：抗体-药物偶联物的制备
按照国际公开第2015/155998号所记载的制造方法，使用包含由序列号9所示的氨基酸序列组成的重链(图1)以及由序列号10所示的氨基酸序列组成的轻链(图2)的抗HER3抗体(在本发明中称为“抗HER3抗体(1)”)，制造了下式所示的药物连接子与抗HER3抗体通过硫醚键进行键结而成的抗HER3抗体-药物偶联物(在本发明中称为“HER3-ADC(1)”)。HER3-ADC(1)中的每个抗体的平均药物结合数为7.6。
(式中，A表示与抗体的键结位置)
实施例2：HER3-ADC(1)对于HCC827GR5细胞株的敏感性试验
实施例2-1：对于HCC827细胞株以及HCC827GR5细胞株的细胞增殖抑制活性
在含有R10培养基(10％胎牛血清以及1％青霉素-链霉素B(和光纯药制))的RPMI1640培养基(Sigma制)中培养HCC827细胞株。在上述的培养基中含有最终浓度1μM的吉非替尼的培养基中培养HCC827GR5细胞株。需要说明的是，已报告HCC827GR5细胞株对于厄洛替尼单剂以及抗HER3抗体(1)(HER3-ADC(1)的抗体部分)的单剂治疗未显示出强敏感性(K Yonesaka et al.,Oncogene(2016)35,878-886)。在培养HCC827细胞株以及HCC827GR5细胞株后，通过胰蛋白酶处理进行剥离，回收细胞，测定细胞悬浮液中的细胞数，悬浮于含有10％胎牛血清的RPMI1640培养基，制备成100000个/mL的浓度。将各细胞悬浮液50μL添加于Sumilon 96孔(well)板(Sumitomo Bakelite制)的各孔中(5000个/孔)，进行了培养。在培养开始3天后，添加溶解于R10培养基的HER3-ADC(1)稀释液或作为阴性对照而不含有药剂的R10培养基，进行了培养(最终的溶液量为各孔100μl，另外，培养液的最终浓度设为0μg/mL、0.0033μg/mL、0.01μg/mL、0.033μg/mL、0.1μg/mL、0.33μg/mL、1μg/mL、3.3μg/mL、10μg/mL)。在治疗开始第7天，在各孔中分别添加CellTiter Glo(Promega公司制)50μL后，用板式搅拌器(plate mixer)进行2分钟搅拌，在遮光条件下静置了30分钟。从各孔分取120μL，转移至黑色的微孔板(microplate)，用光度计测定了发光值。
各药剂的细胞增殖抑制活性(对照％：对应英文为％Control)使用下式进行计算。
对照％＝(样本添加孔中的发光值的平均值÷阴性对照孔中的发光值的平均值)×100
各组以6孔进行了实验。
将其结果示于图3。对于HCC827GR5细胞株，在HER3-ADC(1)的10μg/mL、3.3μg/mL、1μg/mL添加组中，分别观察到41.3％、40.0％以及50.0％的细胞增殖抑制活性。另一方面，对于HCC827细胞株，在3.3μg/mL以下的浓度下，未观察到细胞增殖抑制活性。
根据以上的结果明显可知，HER3-ADC(1)对于HCC827GR5细胞株显示出细胞增殖抑制活性。
实施例2-2：HCC827细胞株以及HCC827GR5细胞株中的HER3 mRNA的表达
1.总RNA(Total RNA)的制备
总RNA的制备使用Rneasy Mini Kit(Qiagen制)来进行。在含有R10培养基(10％胎牛血清以及1％青霉素-链霉素B(和光纯药制))的RPMI1640培养基(Sigma制)中培养HCC827细胞株。在上述的培养基中含有最终浓度1μM的吉非替尼的培养基中培养HCC827GR5细胞株。在培养HCC827细胞株以及HCC827GR5细胞株后，通过胰蛋白酶处理进行剥离，回收细胞，测定细胞悬浮液中的细胞数，悬浮于含有10％胎牛血清的RPMI1640培养基。回收各细胞5000000个，在离心分离后，加入Buffer RLT(以100：1含有β巯基乙醇)600μL，搅拌30秒后，在－80℃下进行保存。将所制备的溶液溶解后，添加于QIAShredder，以15000rpm进行2分钟离心分离，向提取液中添加70％乙醇600μL，进行搅拌。将该溶液添加于离心柱(Spincolumn)后，以12000rpm离心分离15秒。向离心柱添加80μL的DNase(+)(70μL BufferRDD、10μL DNaseI储备液)，在室温下静置15分钟后，添加700μL的BufferRW，以10000rpm以上进行15秒离心分离。更换收集管(Collection tube)，添加500μL的Buffer RPE后，以10000rpm以上进行15秒离心分离，废弃了提取液。再次加入500μL的Buffer RPE并进行2分钟离心分离后，更换为回收用管并向离心柱添加无RNA酶的水(Rnase-free water)100μL，静置5分钟。以12000rpm以上进行15秒离心分离后，测定了回收用管内的总RNA量。
2.cDNA的制备
cDNA的制备使用高容量RNA-to-cDNA试剂盒(High Capacity RNA-to-cDNA Kit)(Applied Biosystems制)来进行。向由2x RT Buffer、20x RT Enzyme Mix、Nuclease-freeH20制备的溶液中添加通过上述操作制备的RNA 2μg，制备了总体积20μL的溶液。进行离心分离并去除气泡后，装接于热循环仪，在37℃下反应60分钟、在95℃下反应5分钟后，冷却至4℃，由此进行逆转录反应，制备了cDNA。
3.定量PCR反应
定量聚合酶链反应(qPCR)反应使用MicroAmp光学96-孔反应板来进行。将通过上述操作制备的cDNA 50ng添加于板中，添加了12.5μL的Soraris qPCR Master Mix(2x)(Thermo Fisher Scientific制)以及HER3的mRNA扩增用的Soraris Primer/Probe set(20x)(Thermo Fisher Scientific制)12.5μL以及蒸馏水。为了制作计算出mRNA量的校正曲线，对由人大肠癌细胞HCT116通过同样的方法制备的cDNA 200ng、100ng、20ng也进行同样的操作。将添加了各种样本的板装接于ABI 7900HT(Applied Biosystems制)，在95℃下反应15分钟后，进行60个循环的95℃下15秒、60℃下60秒的反应，然后在4℃下冷却10分钟后，测定各孔的荧光强度，对PCR产物量进行定量，由此测定了各样本的mRNA量。
将其结果示于图4。HCC827GR5细胞株中的HER3的mRNA量是显著高于源自HCC827细胞株的HER3的mRNA量的值(学生t-检验(student t-test)，p＜0.05)。
实施例2-3：对于HCC827GR5细胞株的细胞增殖抑制活性
在含有R10培养基(10％胎牛血清以及1％青霉素-链霉素B(和光纯药制))的RPMI1640培养基(Sigma制)中含有最终浓度1μM的吉非替尼的培养基中培养HCC827GR5细胞株。在培养HCC827GR5细胞株后，通过胰蛋白酶处理进行剥离后，回收细胞，测定细胞悬浮液中的细胞数，悬浮于含有10％胎牛血清的RPMI1640培养基，调整成100000个/mL的浓度。将细胞悬浮液50μL添加于Sumilon 96孔(well)板(Sumitomo Bakelite制)的各孔中(5000个/孔)，进行了培养。在培养3天后，加入溶解于R10培养基的HER3-ADC(1)稀释液(培养液的最终浓度：0μg/mL、0.0033μg/mL、0.01μg/mL、0.033μg/mL、0.1μg/mL、0.33μg/mL、1μg/mL、3.3μg/mL、10μg/mL)、厄洛替尼稀释液(培养液的最终浓度：0μM、0.0033μM、0.01μM、0.033μM、0.1μM、0.33μM、1μM、3.3μM、10μM)、溶解于含有厄洛替尼(培养液的最终浓度1μM)的R10培养基的HER3-ADC(1)稀释液(培养液的最终浓度：0μg/mL、0.0033μg/mL、0.01μg/mL、0.033μg/mL、0.1μg/mL、0.33μg/mL、1μg/mL、3.3μg/mL、10μg/mL)以及作为阴性对照的不含有药剂的R10培养基，各孔的最终培养液量设为100μL，进行了培养。在治疗开始第7天，在各孔中分别添加CellTiter Glo(Promega公司制)50μL后，用板式搅拌器进行2分钟搅拌，在遮光条件下静置了30分钟。从各孔分取120μL，转移至黑色的微孔板，用光度计测定了发光值。
各药剂对于HCC827GR5细胞株的细胞增殖抑制活性(对照％：对应英文为％Control)使用下式进行计算。
对照％＝(样本添加孔中的发光值的平均值÷阴性对照孔中的发光值的平均值)×100
各组以6孔进行了实验。
将其结果示于图5。对于HCC827GR5细胞株，在HER3-ADC(1)的10μg/mL、3.3μg/mL、1μg/mL添加组中，分别观察到41.3％、40.0％以及50.0％的细胞增殖抑制活性，在厄洛替尼的10μg/mL、3.3μg/mL、1μg/mL添加组中，分别观察到31.7％、52.6％以及69.2％的细胞增殖抑制活性。另一方面，在厄洛替尼1μM与HER3-ADC(1)的10μg/mL、3.3μg/mL、1μg/mL的并用组中，分别观察到3.1％、3.2％以及3.0％的细胞增殖抑制活性。
根据以上的结果可知，对于HCC827GR5细胞株，通过HER3-ADC(1)与厄洛替尼的并用，显示出比HER3-ADC(1)或厄洛替尼单剂的处理时高的细胞增殖抑制活性。
实施例2-4：对于裸鼠移植HCC827GR5细胞株的抗肿瘤效果
在含有R10培养基(10％胎牛血清以及1％青霉素-链霉素B(和光纯药制))以及最终浓度1μM的厄洛替尼的RPMI1640培养基(Sigma制)中培养HCC827GR5细胞株后，通过胰蛋白酶处理进行剥离后，回收细胞，测定细胞悬浮液中的细胞数，悬浮于R10培养基，制备成75000000个/mL的浓度。将所制备的细胞悬浮液100μL(7500000个)移植到6周龄的雌性裸鼠(BALB/cAJcl-nu/nu)的腹侧部皮下后，所移植的肿瘤的推定肿瘤体积的平均值为110mm3，在肿瘤移植7天后进行分组，开始了药剂的施用(第0天)。用磷酸缓冲生理盐水(PBS)溶解HER3-ADC(1)，制备成1mg/mL的浓度。厄洛替尼溶解于羟丙基甲基纤维素(HPMC)溶液，制备成2.75mg/mL。在各药剂的单剂治疗组中，从第0天至最大第49天，将所制备的HER3-ADC(1)以200μL/小鼠(10mg/kg)每周一次(共7次)向腹腔内进行施用，将所制备的厄洛替尼以0.18mL/小鼠(25mg/kg)每周6次(共19次)经口进行施用。另外，在并用治疗组中，从第0天起以与单剂治疗组相同的施用量以及时间表施用HER3-ADC(1)以及厄洛替尼。作为对照组，设定未进行施用的组。任一组均使用一组10只小鼠。在施用开始后，一周两次(第0、3、7、10、14、17、21、24、28、31、35、38、41、45、49天)，测定肿瘤径(长径、短径)，按照下述所示的算式计算出各组的推定肿瘤体积，然后，计算出各组的推定肿瘤体积的平均值。
推定肿瘤体积(体积，mm3)＝长径(mm)×短径(mm)2÷2
另外，按照下述所示的算式来计算出各组与对照组相比的肿瘤增殖抑制率。
肿瘤增殖抑制率(％)＝100－(治疗组的推定肿瘤体积的平均值÷对照组的推定肿瘤体积的平均值×100)
需要说明的是，在对照组以及厄洛替尼单剂治疗组中，在第21天的时候，推定肿瘤体积达到了1200至1500mm3，因此，从动物伦理的观点考虑结束了测定。伴随于此，肿瘤增殖抑制率(％)的计算截止于第21天。
将其结果示于表1、表2以及图6。对于HCC827GR5细胞株，厄洛替尼未显示出有效性。相对于此，在HER3-ADC(1)治疗组以及HER3-ADC(1)与厄洛替尼的并用的治疗组中，观察到显著的抗肿瘤效果(在第21天，Dunnet's多重比较检验(Dunnet's Multiple Comparisontest)p＜0.001)。
根据以上的结果可知，对于裸鼠移植HCC827GR5细胞株，通过HER3-ADC(1)单剂或HER3-ADC(1)与厄洛替尼的并用，显示出显著高于无处理或厄洛替尼单剂的治疗时的抗肿瘤效果(在第21天，Dunnet's多重比较检验(Dunnet's Multiple Comparison test)p＜0.001)。
[表1]
/>
N.A.：不实施测定。
[表2]
肿瘤增殖抑制率(％) 第0天 第3天 第7天 第10天 第14天
HER3-ADC(1)治疗组 7.4 14.5 50.7 63.3 77.4
厄洛替尼治疗组 2.7 22.0 26.0 29.1 14.5
并用治疗组 10.5 42.6 79.0 84.8 89.1
肿瘤增殖抑制率(％) 第17天 第21天
HER3-ADC(1)治疗组 88.5 86.9
厄洛替尼治疗组 20.4 21.1
并用治疗组 93.7 91.9
根据实施例2的结果，确认到HER3-ADC(1)对于HCC827GR5细胞株的抗肿瘤效果。HCC827GR5细胞株是以作为人非小细胞肺癌的细胞株的HCC827为亲株，并获得了对于EGFR-TKI的耐受性的细胞株，是相当于EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌的细胞株。
综上所述，示出了：通过施用抗HER3抗体-药物偶联物，能够提供EGFR-TKI耐受性且EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌的治疗剂以及治疗方法。
实施例3：HER3-ADC(1)对于PC9细胞株以及PC9AZDR7细胞株的敏感性试验
实施例3-1：奥希替尼耐受性PC9细胞株的制作
在含有10％胎牛血清以及1％青霉素-链霉素B(和光纯药制)的RPMI-1640培养基(Sigma制)中培养作为非小细胞肺癌株的PC9。在培养液中添加1nM的奥希替尼后，进行培养，阶段性地提高奥希替尼的添加浓度来进行传代培养，最终在含有100nM的奥希替尼的培养基中进行培养，由此建立了奥希替尼耐受性PC9细胞株(PC9AZDR7)。
实施例3-2：对于PC9以及PC9AZDR7细胞株的细胞增殖抑制活性
在含有10％胎牛血清以及1％青霉素-链霉素B(和光纯药制)的RPMI1640培养基(Sigma制)中培养PC9以及PC9AZDR7细胞株。PC9AZDR7添加100nM的奥希替尼进行培养。在培养PC9以及PC9AZDR7细胞株后，通过胰蛋白酶处理进行剥离，回收细胞，测定细胞悬浮液中的细胞数，悬浮于含有2％胎牛血清的RPMI1640培养基中后，将各细胞悬浮液50μL添加于Sumilon 96孔板(Sumitomo Bakelite制)的各孔(10000个/孔)，进行了培养。在培养开始1天后添加制备成各种浓度的奥希替尼稀释液或作为阴性对照而不含有药剂的RPMI-1640培养基，进行了培养。奥希替尼的最终浓度设为0μM、0.001μM、0.0033μM、0.01μM、0.033μM、0.1μM、0.33μM、1μM、3.3μM。在治疗开始第3天，在各孔中分别添加CellTiter Glo(Promega公司制)50μL后，用板式搅拌器进行2分钟搅拌，在遮光条件下静置了30分钟。从各孔分取120μL，转移至黑色的微孔板，用光度计测定了发光值。
各药剂的细胞增殖抑制活性(对照％：对应英文为％of Control)使用下式进行计算。
对照％＝(样本添加孔中的发光值的平均值÷阴性对照孔中的发光值的平均值)×100
各组以6孔进行了实验。
将其结果示于图7。对于PC9细胞株，在奥希替尼的0.01μM以上的添加组中，观察到强细胞增殖抑制活性。另一方面，对于PC9AZDR7细胞株，在1μM以下的浓度下，未观察到细胞增殖抑制活性。
根据以上的结果明显可知，PC9AZDR7对于奥希替尼显示出耐药性。
实施例3-3：PC9细胞株以及PC9AZDR7细胞株中的HER3蛋白质的表达
PC9以及PC9AZDR7各细胞株中的HER3蛋白质的表达使用QIFIKIT(Dako制)进行测定。在培养PC9以及PC9AZDR7后，在添加小鼠抗人HER3抗体(Clone1B4C3，Dako制)或者小鼠IgG2a同种型对照抗体后进行培养，用FITC复合抗小鼠IgG抗体(Dako制)进行培养。对各样本使用LSRFortessaX-20(BD Biosciences制)来测定荧光强度，由此测定了各细胞株中的HER3蛋白质的表达量。
将其结果示于图8。PC9中的HER3蛋白质的表达量为5088个/细胞，相对于此，PC9AZDR7中的表达量为15469个/细胞，观察到比PC9高3倍以上的HER3蛋白质的表达(未配对T检验(unpaired T test)，p＜0.001)。
根据以上的结果明显可知，由作为非小细胞肺癌株的PC9建立的对于奥希替尼显示出耐受性的PC9AZDR7中的HER3蛋白质的表达量显著高于作为亲株的PC9。
实施例3-4：HER3-ADC(1)对于裸鼠移植PC9以及PC9AZDR7细胞株的抗肿瘤效果
在含有10％胎牛血清以及1％青霉素-链霉素B(和光纯药制)的RPMI1640培养基(Sigma制)中培养PC9以及PC9AZDR7细胞株。在含有最终浓度100nM的奥希替尼的培养基中培养PC9AZDR7细胞株。在培养后，通过胰蛋白酶处理进行剥离后，回收细胞，测定细胞悬浮液中的细胞数，制备了各细胞悬浮液。将所制备的各细胞悬浮液100μL(5000000个)移植到6周龄的雌性裸鼠(BALB/cAJcl-nu/nu)的腹侧部皮下后，在所移植的肿瘤的推定肿瘤体积的平均值为约200mm3的时候进行分组，开始了药剂的施用(第0天)。用磷酸缓冲生理盐水(PBS)溶解HER3-ADC(1)，制备成0.6mg/mL的浓度。将所制备的HER3-ADC(1)以100μL/小鼠(3mg/kg)在第0天进行一次腹腔内施用。作为对照组，设定仅有PBS的施用组。对照组使用8只小鼠，HER3-ADC(1)组使用9只小鼠。在施用开始后，一周两次，测定肿瘤径(长径、短径)，按照下述所示的算式计算出各组的推定肿瘤体积，然后，计算出各组的推定肿瘤体积的平均值。
推定肿瘤体积(体积，mm3)＝长径(mm)×短径(mm)2÷2
另外，按照下述所示的算式来计算出各组与对照组相比的肿瘤增殖抑制率。
肿瘤增殖抑制率(％)＝100－(治疗组的推定肿瘤体积的平均值÷对照组的推定肿瘤体积的平均值×100)
将HER3-ADC(1)对于PC9细胞株的抗肿瘤效果示于表3以及图9，将HER3-ADC(1)对于PC9AZDR7细胞株的抗肿瘤效果示于表4以及图10。对于PC9细胞株，HER3-ADC(1)未显示出有效性(第21天的肿瘤增殖抑制率17％)。相对于此，在PC9AZDR7的HER3-ADC(1)治疗组中，观察到显著的抗肿瘤效果(第18天的肿瘤增殖抑制率72％)(在第18天，未配对t检验(unpaired t test)p＜0.05)。
[表3]
[表4]
根据以上的结果明显可知，HER3-ADC(1)对于裸鼠移植PC9AZDR7细胞株显示出显著高于对照组的抗肿瘤效果。
综上所述，示出了：通过施用抗HER3抗体-药物偶联物，能够提供奥希替尼耐受性的非小细胞肺癌的治疗剂以及治疗方法。
实施例3-5：HER3-ADC(1)与奥希替尼并用对于裸鼠移植PC9AZDR7细胞株的抗肿瘤效果
在含有10％胎牛血清以及1％青霉素-链霉素B(和光纯药制)以及100nM的奥希替尼的RPMI1640培养基(Sigma制)中培养PC9AZDR7细胞株。在培养PC9AZDR7细胞株后，通过胰蛋白酶处理进行剥离，回收细胞，测定细胞悬浮液中的细胞数，制备了各细胞悬浮液。将所制备的各细胞悬浮液100μL(34000000个)移植到6周龄的雌性裸鼠(BALB/cAJcl-nu/nu)的腹侧部皮下后，在所移植的肿瘤的推定肿瘤体积的平均值为约60mm3的时候进行分组(第0天)，从分组的下一天(第1天)起开始药剂的施用。用磷酸缓冲生理盐水(PBS)溶解HER3-ADC(1)，制备成0.1mg/mL的浓度。将奥希替尼溶解于含有0.1％二甲基亚砜以及30％聚乙二醇300的注射用蒸馏水中，制备成0.2mg/mL的浓度。在各药剂的单剂组中，将HER3-ADC(1)以200μL/小鼠(1mg/kg)在第1天进行腹腔内施用，将奥希替尼以100μL/小鼠(1mg/kg)在第1、2、3、4、5、8、9、10、11、12、15、16、17、18以及19天进行经口施用。在HER3-ADC(1)与奥希替尼的并用组中，以与各单剂组同样的施用量以及施用时间表施用各药剂。作为对照组，设定未进行施用的组。对照组使用11只小鼠，HER3-ADC(1)单剂组使用12只小鼠，奥希替尼单剂组使用12只小鼠，HER3-ADC(1)与奥希替尼的并用组使用10只小鼠。在施用开始后，一周两次，测定肿瘤径(长径、短径)，按照下述所示的算式计算出各组的推定肿瘤体积，然后，计算出各组的推定肿瘤体积的平均值。
推定肿瘤体积(体积，mm3)＝长径(mm)×短径(mm)2÷2
另外，按照下述所示的算式来计算出各组与对照组相比的肿瘤增殖抑制率。
肿瘤增殖抑制率(％)＝100－(治疗组的推定肿瘤体积的平均值÷对照组的推定肿瘤体积的平均值×100)
将其结果示于表5以及图11。对于PC9AZDR7细胞株，在HER3-ADC(1)1mg/kg以及奥希替尼1mg/kg各单剂治疗组中，未显示出高有效性(第21天的肿瘤增殖抑制率：HER3-ADC(1)，25.3％，奥希替尼，27.7％)。相对于此，在HER3-ADC(1)1mg/kg与奥希替尼1mg/kg的并用治疗组中，观察到显著的抗肿瘤效果(第21天的肿瘤增殖抑制率66.6％，在第21天，对于HER3-ADC(1)单剂治疗组，p＝0.0057，对于奥希替尼单剂治疗组，p＝0.0092，Dunnett's检验(Dunnett's test))。
[表5]
/>
[表6]
肿瘤增殖抑制率(％) 第0天 第5天 第8天 第11天 第16天 第18大 第21天
HER3-ADC(1)治疗组 10.9 0.2 7.6 22.5 14.5 7.8 25.3
奥希替尼治疗组 5.3 6.0 5.8 17.9 6.7 9.e 27.7
并用治疗组 16.1 49.9 53.4 67.5 62.2 58.5 66.6
根据以上的结果明显可知，通过HER3-ADC(1)与奥希替尼的并用进行的治疗对于裸鼠移植PC9AZDR7细胞株显示出显著高于HER3-ADC(1)单剂或奥希替尼单剂的治疗的抗肿瘤效果。
序列表自由文本
序列号1：抗HER3抗体(1)的CDRH1的氨基酸序列；序列号2：抗HER3抗体(1)的CDRH2的氨基酸序列；序列号3：抗HER3抗体(1)的CDRH3的氨基酸序列；序列号4：抗HER3抗体(1)的CDRL1的氨基酸序列；
序列号5：抗HER3抗体(1)的CDRL2的氨基酸序列；
序列号6：抗HER3抗体(1)的CDRL3的氨基酸序列；
序列号7：抗HER3抗体(1)的重链可变区的氨基酸序列；序列号8：抗HER3抗体(1)的轻链可变区的氨基酸序列；序列号9：抗HER3抗体(1)的重链的氨基酸序列；
序列号10：抗HER3抗体(1)的轻链的氨基酸序列。

Claims (18)

1.抗HER3抗体-药物偶联物在制造EGFR-TKI耐受性的非小细胞肺癌的治疗用药中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其中，
非小细胞肺癌为EGFR T790M突变阴性的非小细胞肺癌。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其中，
EGFR-TKI为吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼或奥希替尼。
4.根据权利要求1或2所述的应用，其中，
EGFR-TKI为奥希替尼。
5.根据权利要求2所述的应用，其中，
EGFR-TKI为吉非替尼、厄洛替尼或阿法替尼。
6.根据权利要求2所述的应用，其中，
EGFR-TKI为吉非替尼或厄洛替尼。
7.根据权利要求1或2所述的应用，其中，
非小细胞肺癌表达HER3。
8.根据权利要求1或2所述的应用，其中，
抗HER3抗体-药物偶联物为下式所示的药物连接子与抗HER3抗体通过硫醚键进行键结而成的抗HER3抗体-药物偶联物，
式中，A表示与抗HER3抗体的键结位置。
9.根据权利要求1或2所述的应用，其中，
抗HER3抗体为包含重链和轻链的抗体，所述重链包含：CDRH1，其由序列号1所示的氨基酸序列组成；CDRH2，其由序列号2所示的氨基酸序列组成；以及CDRH3，其由序列号3所示的氨基酸序列组成，所述轻链包含：CDRL1，其由序列号4所示的氨基酸序列组成；CDRL2，其由序列号5所示的氨基酸序列组成；以及CDRL3，其由序列号6所示的氨基酸序列组成。
10.根据权利要求1或2所述的应用，其中，
抗HER3抗体为包含重链和轻链的抗体，所述重链包含：重链可变区，其由序列号7所示的氨基酸序列组成，所述轻链包含：轻链可变区，其由序列号8所示的氨基酸序列组成。
11.根据权利要求1或2所述的应用，其中，
抗HER3抗体为包含重链和轻链的抗体，所述重链由序列号9所示的氨基酸序列组成，所述轻链由序列号10所示的氨基酸序列组成。
12.根据权利要求11所述的应用，其中，
抗HER3抗体的重链羧基末端的赖氨酸残基缺失。
13.根据权利要求1或2所述的应用，其中，
抗HER3抗体-药物偶联物中的每个抗体的药物连接子的平均结合数为7至8个的范围。
14.根据权利要求1或2所述的应用，其中，
抗HER3抗体-药物偶联物中的每个抗体的药物连接子的平均结合数为7.5至8个的范围。
15.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，
抗HER3抗体-药物偶联物与第二药剂并用地施用。
16.根据权利要求15所述的应用，其中，
第二药剂为吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼或奥希替尼。
17.根据权利要求16所述的应用，其中，
第二药剂为厄洛替尼。
18.根据权利要求16所述的应用，其中，
第二药剂为奥希替尼。
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