CN117599247B - 丝素蛋白微载体皮肤填充制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于丝素蛋白技术领域，具体涉及一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂及其制备方法和应用。所述方法包括：桑蚕丝脱胶、浓缩、干燥，得到干燥丝素；干燥丝素配置成水溶液，该溶液与维生素C混合，搅拌，冻干，得到VC负载丝素蛋白；将VC负载丝素蛋白配置成丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精与交联剂混合，35‑40℃静置，得到复合凝胶，灭菌，得到丝素蛋白微载体皮肤填充制剂。本发明制备的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂力学性能更好，生物相容性也好，应用价值高。
Description
技术领域
本发明属于丝素蛋白技术领域，具体涉及一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂及其制备方法和应用。
背景技术
丝素蛋白是一种高分子蛋白，主要含有18中氨基酸，丝素蛋白具有出色的机械性能、生物相容性和生物降解性，在生物材料和组织工程领域具有很好的应用前景。
目前，丝素蛋白以多种形式被应用(林楠,左保齐.医用再生丝素蛋白材料制备与研究进展[J].现代丝绸科学与技术,2020,35(3):9.)，包括：
(1)制备再生丝素溶液，具体包括脱胶步骤、溶解步骤。由于丝素蛋白和丝胶蛋白的协同作用会产生一定的免疫反应，所以脱胶是将丝素蛋白用作生物材料的关键步骤。蚕丝经过脱胶后可以溶解，溶解后的丝素蛋白可以制成多种剂型。
(2)制备丝素蛋白材料，包括制备水凝胶、多孔支架、薄膜、微球等材料。水凝胶的制备方法包括旋流剪切、超声振荡、酸处理、自然凝胶等；多孔支架通过冷冻干燥、粒子致孔等步骤制备；薄膜采用浇筑法等方法制备；微球采用喷雾干燥、冷冻干燥等方法制备。
皮肤填充制剂的主要作用是组织修复，通过局部注射的微创疗法，将具有皮肤组织修复功能的物质注入结构松弛的软组织局部，以改善皮肤松弛度，从而使该组织恢复正常的功能和外观。已有专利研究了利用丝素蛋白制备组织填充材料技术，如中国专利CN102836465B记载的方案，该专利将丝素蛋白与透明质酸复合，制备了复合凝胶，使得凝胶的体外抗酶解能显著提高，进而减缓了复合凝胶的降解速度，最终可延长复合凝胶在组织修补和填充的作用时间，另外，该专利由于在丝素蛋白颗粒中增加了透明质酸，增加了吸水性和储水功能，所以制得的复合凝胶储水功能和填充效果也不错。然而仅有透明质酸的皮肤修复功能，还是不能满足皮肤填充剂的需求，有些皮肤差的患者需要增加其他辅助因子来改善皮肤状况。
发明内容
为了解决“增加其他的辅助因子来改善皮肤状况”的技术问题，我们以丝素蛋白等物质为原料制成凝胶，开发出一种新的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂。具体的，本发明提供一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂及其制备方法和应用，相比于现有技术的复合凝胶，我们的技术方案可以负载维生素B5、I型胶原蛋白等多种辅助因子，辅助因子负载率高，有助于改善皮肤状况。
本发明的一个目的是提供一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，包括：
桑蚕丝脱胶、浓缩、干燥，得到干燥丝素；
干燥丝素配置成水溶液，该水溶液与维生素C混合，搅拌，冻干，得到VC负载丝素蛋白；
将VC负载丝素蛋白配置成丝素水溶液，将丝素水溶液、透明质酸、麦芽糊精与交联剂混合，35-40℃静置，得到复合凝胶，灭菌，即得到丝素蛋白微载体皮肤填充制剂。
优选的，上述丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，干燥丝素用双蒸水作为溶剂，配置成质量分数5-10％的水溶液，该水溶液与维生素C按照90-110:1的质量比例混合，搅拌15-30min，冻干，得到VC负载丝素蛋白。
优选的，上述丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，干燥丝素用双蒸水作为溶剂，配置成质量分数5％的水溶液，该水溶液与维生素C按照100:1的质量比例混合，搅拌20min，冻干，得到VC负载丝素蛋白。
优选的，上述丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，以PEG300-PEG600为溶剂，将VC负载丝素蛋白配置成30-40g/L的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精与交联剂按照10:1:0.5-0.8:0.2-0.5的质量比例混合，35-40℃静置，得到复合凝胶。麦芽糊精的加入可以提高复合凝胶的辅助因子负载性能。
优选的，上述丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，以PEG300为溶剂，将VC负载丝素蛋白配置成30g/L的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精与交联剂按照10:1:0.5:0.2的质量比例混合，40℃静置，得到复合凝胶。
优选的，上述丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，交联剂为辛基硫酸钠溶液、十二烷基磺酸钠中的一种或几种。进一步优选的，交联剂为浓度15g/L的辛基硫酸钠溶液、15g/L十二烷基磺酸钠的一种或几种。优选的，将所述交联剂与高分子化合物混合后，再与丝素溶液、麦芽糊精混合，35-40℃静置，得到复合凝胶。
在适合交联的条件下，高分子化合物在所述交联剂的存在下发生交联反应，例如，所述高分子化合物为选自下组中的一种或多种：透明质酸、透明质酸钠、壳聚糖、羧甲基壳聚糖、几丁质、羧甲基几丁质、胶原蛋白、明胶、丝素蛋白、羧甲基葡聚糖、羧甲基纤维素、氨基聚乙二醇、羧基聚乙二醇。所述高分子化合物在溶液中的起始质量浓度为0.5％-10％，例如0.6％-8％。
优选的，上述丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，所述脱胶的方法包括：
(1)用碱溶液煮沸桑蚕丝30min，过滤，收集沉淀；其中，所述碱溶液为质量分数0.05％的碳酸钠水溶液与质量分数0.03％的L-谷氨酸钠水溶液按照20:1体积比例混合而成的；
(2)将沉淀继续用所述碱溶液水溶液煮沸桑蚕丝30min，收集溶液；
(3)重复(2)操作，直至桑蚕丝脱胶完全，脱胶完全的物料称作丝素蛋白溶液。
本发明还提供了一种上述方法制备的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂。
本发明还提供了一种负载辅助因子的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂，制备方法如下：桑蚕丝脱胶、干燥，得到干燥丝素；
干燥丝素配置成水溶液，该水溶液与维生素C混合，搅拌，冻干，得到VC负载丝素蛋白；
以PEG300-PEG600为溶剂，将VC负载丝素蛋白配置成丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精、辅助因子与交联剂按照10:1:0.5-0.8:0.1:0.2-0.5的质量比例混合，35-40℃静置，得到复合凝胶，灭菌，即得到丝素蛋白微载体皮肤填充制剂。优选的，采用PEG300、PEG400、或者PEG600为溶剂。
需要说明的是，在本发明的发明构思下，辅助因子可以是以下选择：维生素B5、皮肤生长因子、维生素E、维生素A、I型胶原蛋白等具有皮肤修复效果的任何物质。
本发明还提供了一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的应用，具体的，丝素蛋白微载体皮肤填充制剂用于填充皮肤皱纹处或皮肤凹陷处。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明通过对丝素蛋白进行改良，使其先负载VC，然后再用于制备填充制剂，这样能提高填充制剂的抗酶解能力，呈现好的皮肤填充效果。原理：丝素蛋白具有吸附性能，已有研究显示其可以吸附金属，本发明利用丝素蛋白吸附VC，然后再用该VC负载丝素蛋白制备填充制剂，既能将VC包裹入填充制剂中，作为营养成分使用，还能提高填充制剂的抗酶解能力，提高材料填充皮肤的有效性。
进一步的，本发明中，麦芽糊精与改良的丝素蛋白溶液组合使用，制成的填充制剂抗酶解效果和辅助因子负载性能均更好。原理：麦芽糊精是介于淀粉和淀粉糖之间的低转化产品，具有填充效果，载体性好，稳定性也好，医药领域常用麦芽糊精作为药物载体，本发明考虑到麦芽糊精和维生素B5、I型胶原蛋白等多种辅助因子化学结构，提供一种具体的负载方法，在本发明的负载方法下，对辅助因子的负载率高，且制得的填充制剂的抗酶解性能也得到提高。
基于上述原理和我们的实验结果，本发明制备的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂抗酶解效果和辅助因子负载性能好，生物相容性也好，应用价值高。
附图说明
图1受试志愿者1的皮肤填充结果图，A，填充前，B填充后。
图2受试志愿者2的皮肤填充结果图，A，填充前，B填充后。
图3受试志愿者3的皮肤填充结果图，A，填充前，B填充后。
图1、图2和图3中，箭头所指方向为填充位置。
具体实施方式
为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案能予以实施，下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明。
在本发明的描述中，如未特殊说明，所用试剂均为市售，所用方法均为本领域常规技术。
1、主要实验试剂
桑蚕丝：浙江市售，是天然纤维。是将桑蚕茧剪开，去除其内的蛹和蜕皮，获得白净的茧壳。
I型胶原蛋白：CAS号9007-34-5，上海源叶生物科技有限公司。
透明质酸：CAS号9004-61-9，上海邦成化工有限公司。
麦芽糊精：CAS号9050-36-6，西亚化学科技(山东)有限公司。具有良好的化学稳定性和生物相容性。
维生素C：具有抗氧化性。
2、实施例
实施例1
一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，包括以下步骤：
1.1脱胶
1.1.1用碱溶液煮沸桑蚕丝30min，过滤，收集沉淀。其中，所述碱溶液为质量分数0.05％的碳酸钠水溶液与质量分数0.03％的L-谷氨酸钠水溶液按照20:1体积比例混合而成的。L-谷氨酸钠对光和热具有一定的稳定性，将其添加到桑蚕丝中进行处理，既能提高丝素蛋白的稳定性，还能够加速脱胶。
1.1.2将沉淀继续用1.1.1的碱溶液水溶液煮沸桑蚕丝30min，收集溶液。
1.1.3重复步骤1.1.2，直至桑蚕丝脱胶完全，脱胶完全的物料称作丝素蛋白溶液。其中，用苦味酸胭脂红溶液检测是否脱胶完全。
1.2处理
1.2.1透析、浓缩与干燥
将1.1.3的丝素蛋白溶液用砂芯漏斗过滤，滤液用乙酸溶液调整pH值至4后用硫酸盐饱和溶液盐析2h，析出沉淀进行离心分离得到蛋白质沉淀。将蛋白质沉淀转移至放有0.2μm孔径的微孔滤膜的砂芯抽滤漏斗中，依次用体积分数75％乙醇和去离子水进行抽滤淋洗。将淋洗后的滤饼超声分散于去离子水中，移入截留分子量为3500Da的透析袋中，透析袋内溶液用体积分数30％的聚乙二醇20000的水溶液进行浓缩。将浓缩液置入冷冻干燥机，在-30℃下进行预冻，冷冻状态下真空干燥10h，得到干燥丝素。
1.2.2丝素蛋白的改良：
以双蒸水为溶剂，将1.2.1收集的干燥丝素配置成质量分数5％的水溶液，该水溶液与维生素C按照100:1的质量比例混合，搅拌20min，-20℃冻干，得到VC负载丝素蛋白。
1.3制备复合凝胶
以PEG300为溶剂，将1.2.2的VC负载丝素蛋白配置成30g/L的丝素溶液；将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精、辅助因子与交联剂按照10:1:0.5:0.1:0.2的质量比例混合，40℃静置20min，后得到复合凝胶，所述复合凝胶121℃蒸汽灭菌15min，作为丝素蛋白微载体皮肤填充制剂使用，生物相容性好，填充效果好。
其中，交联剂为浓度15g/L的辛基硫酸钠水溶液。辅助因子为维生素B5。
实施例2
一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，包括以下步骤：
1.1脱胶
1.1.1用碱溶液煮沸桑蚕丝30min，过滤，收集沉淀。其中，所述碱溶液为质量分数0.05％的碳酸钠水溶液与质量分数0.03％的L-谷氨酸钠水溶液按照20:1体积比例混合而成的。
1.1.2将沉淀继续用1.1.1的碱溶液水溶液煮沸桑蚕丝30min，收集溶液。
1.1.3重复步骤1.1.2，直至桑蚕丝脱胶完全，脱胶完全的物料称作丝素蛋白溶液。其中，用苦味酸胭脂红溶液检测是否脱胶完全。
1.2处理
1.2.1透析、浓缩与干燥
将1.1.3的丝素蛋白溶液用砂芯漏斗过滤，滤液用乙酸溶液调整pH值至4后用硫酸盐饱和溶液盐析2h，析出沉淀进行离心分离得到蛋白质沉淀。将蛋白质沉淀转移至放有0.2μm孔径的微孔滤膜的砂芯抽滤漏斗中，依次用体积分数75％乙醇和去离子水进行抽滤淋洗。将淋洗后的滤饼超声分散于去离子水中，移入截留分子量为3500Da的透析袋中，透析袋内溶液用体积分数30％的聚乙二醇20000的水溶液进行浓缩。将浓缩液置入冷冻干燥机，在-30℃下进行预冻，冷冻状态下真空干燥10h，得到干燥丝素。
1.2.2丝素蛋白的改良：
以双蒸水为溶剂，将1.2.1收集的干燥丝素配置成质量分数5％的水溶液，该水溶液与维生素C按照90:1的质量比例混合，搅拌20min，-20℃冻干，得到VC负载丝素蛋白。
1.3制备复合凝胶
以PEG300为溶剂，将1.2.2的VC负载丝素蛋白配置成30g/L的丝素水溶液，将丝素水溶液、透明质酸、麦芽糊精、辅助因子与交联剂按照10:1:0.5:0.1:0.2的质量比例混合，40℃静置20min，后得到复合凝胶，所述复合凝胶121℃蒸汽灭菌15min，作为丝素蛋白微载体皮肤填充制剂使用，生物相容性好，填充效果好。
其中，交联剂为15g/L浓度的辛基硫酸钠溶液。辅助因子为维生素B5。
实施例3
一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，包括以下步骤：
1.1脱胶
1.1.1用碱溶液煮沸桑蚕丝30min，过滤，收集沉淀。其中，所述碱溶液为质量分数0.05％的碳酸钠水溶液与质量分数0.03％的L-谷氨酸钠水溶液按照20:1体积比例混合而成的。L-谷氨酸钠对光和热具有一定的稳定性，将其添加到桑蚕丝中进行处理，既能提高丝素蛋白的稳定性，还能够加速脱胶。
1.1.2将沉淀继续用1.1.1的碱溶液水溶液煮沸桑蚕丝30min，收集沉淀溶液。
1.1.3重复步骤1.1.2，直至桑蚕丝脱胶完全，脱胶完全的物料称作丝素蛋白溶液。其中，用苦味酸胭脂红溶液检测是否脱胶完全。
1.2.1透析、浓缩与干燥
将1.1.3的丝素蛋白溶液用砂芯漏斗过滤，滤液用乙酸溶液调整pH值至4后用硫酸盐饱和溶液盐析2h，析出沉淀进行离心分离得到蛋白质沉淀。将蛋白质沉淀转移至放有0.2μm孔径的微孔滤膜的砂芯抽滤漏斗中，依次用体积分数75％乙醇和去离子水进行抽滤淋洗。将淋洗后的滤饼超声分散于去离子水中，移入截留分子量为3500Da的透析袋中，透析袋内溶液用体积分数30％的聚乙二醇20000的水溶液进行浓缩。将浓缩液置入冷冻干燥机，在-30℃下进行预冻，冷冻状态下真空干燥10h，得到干燥丝素。
1.2.2丝素蛋白的改良：
以双蒸水为溶剂，将1.2.1收集的干燥丝素配置成质量分数5％的水溶液，该水溶液与维生素C按照110:1的质量比例混合，搅拌20min，-20℃冻干，得到VC负载丝素蛋白。
1.3制备复合凝胶
以PEG300为溶剂，将1.2.2的VC负载丝素蛋白配置成30g/L的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精、辅助因子与交联剂按照10:1:0.5:0.1:0.2的质量比例混合，40℃静置20min，后得到复合凝胶，所述复合凝胶121℃蒸汽灭菌15min，作为丝素蛋白微载体皮肤填充制剂使用，生物相容性好，填充效果好。
其中，交联剂为15g/L浓度的辛基硫酸钠溶液。辅助因子为维生素B5。
实施例4
一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，包括以下步骤：
1.1脱胶
1.1.1用碱溶液煮沸桑蚕丝30min，过滤，收集沉淀。其中，所述碱溶液为质量分数0.05％的碳酸钠水溶液与质量分数0.03％的L-谷氨酸钠水溶液按照20:1体积比例混合而成的。L-谷氨酸钠对光和热具有一定的稳定性，将其添加到桑蚕丝中进行处理，既能提高丝素蛋白的稳定性，还能够加速脱胶。
1.1.2将沉淀继续用1.1.1的碱溶液水溶液煮沸桑蚕丝30min，收集溶液。
1.1.3重复步骤1.1.2，直至桑蚕丝脱胶完全，脱胶完全的物料称作丝素蛋白溶液。其中，用苦味酸胭脂红溶液检测是否脱胶完全。
1.2处理
1.2.1透析、浓缩与干燥
将1.1.3的丝素蛋白溶液用砂芯漏斗过滤，滤液用乙酸溶液调整pH值至4后用硫酸盐饱和溶液盐析2h，析出沉淀进行离心分离得到蛋白质沉淀。将蛋白质沉淀转移至放有0.2μm孔径的微孔滤膜的砂芯抽滤漏斗中，依次用75％乙醇和去离子水进行抽滤淋洗。将淋洗后的滤饼超声分散于去离子水中，移入截留分子量为3500Da的透析袋中，透析袋内溶液用体积分数30％的聚乙二醇20000的水溶液进行浓缩。将浓缩液置入冷冻干燥机，在-30℃下进行预冻，冷冻状态下真空干燥10h，得到干燥丝素。
1.2.2丝素蛋白的改良：
以双蒸水为溶剂，将1.2.1收集的干燥丝素配置成质量分数5％的水溶液，该水溶液与维生素C按照100:1的质量比例混合，搅拌20min，-20℃冻干，得到VC负载丝素蛋白。1.3制备复合凝胶。
以PEG300为溶剂，将1.2.2的VC负载丝素蛋白配置成30g/L的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精、辅助因子与交联剂按照10:1:0.6:0.1:0.2的质量比例混合，40℃静置20min，后得到复合凝胶，所述复合凝胶121℃蒸汽灭菌15min，作为丝素蛋白微载体皮肤填充制剂使用，生物相容性好，填充效果好。
其中，交联剂为15g/L浓度的辛基硫酸钠溶液。辅助因子为维生素B5。
实施例5
一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，包括以下步骤：
1.1脱胶
1.1.1用碱溶液煮沸桑蚕丝30min，过滤，收集沉淀。其中，所述碱溶液为质量分数0.05％的碳酸钠水溶液与质量分数0.03％的L-谷氨酸钠水溶液按照20:1体积比例混合而成的。L-谷氨酸钠对光和热具有一定的稳定性，将其添加到桑蚕丝中进行处理，既能提高丝素蛋白的稳定性，还能够加速脱胶。
1.1.2将沉淀继续用1.1.1的碱溶液水溶液煮沸桑蚕丝30min，收集溶液。
1.1.3重复步骤1.1.2，直至桑蚕丝脱胶完全，脱胶完全的物料称作丝素蛋白溶液。其中，用苦味酸胭脂红溶液检测是否脱胶完全。
1.2处理
1.2.1透析、浓缩与干燥
将1.1.3的丝素蛋白溶液用砂芯漏斗过滤，滤液用乙酸溶液调整pH值至4后用硫酸盐饱和溶液盐析2h，析出沉淀进行离心分离得到蛋白质沉淀。将蛋白质沉淀转移至放有0.2μm孔径的微孔滤膜的砂芯抽滤漏斗中，依次用体积分数75％乙醇和去离子水进行抽滤淋洗。将淋洗后的滤饼超声分散于去离子水中，移入截留分子量为3500Da的透析袋中，透析袋内溶液用体积分数30％的聚乙二醇20000的水溶液进行浓缩。将浓缩液置入冷冻干燥机，在-30℃下进行预冻，冷冻状态下真空干燥10h，得到干燥丝素。
1.2.2丝素蛋白的改良：
以双蒸水为溶剂，将1.2.1收集的干燥丝素配置成质量分数5％的水溶液，该水溶液与维生素C按照100:1的质量比例混合，搅拌20min，-20℃冻干，得到VC负载丝素蛋白。
1.3制备复合凝胶
以PEG300为溶剂，将1.2.2的VC负载丝素蛋白配置成30g/L的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精、辅助因子与交联剂按照10:1:0.7:0.1:1的质量比例混合，40℃静置20min，后得到复合凝胶，所述复合凝胶121℃蒸汽灭菌15min，作为丝素蛋白微载体皮肤填充制剂使用，生物相容性好，填充效果好。
其中，交联剂为15g/L浓度的辛基硫酸钠溶液。辅助因子为维生素B5。
实施例6
一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，包括以下步骤：
1.1脱胶
1.1.1用碱溶液煮沸桑蚕丝30min，过滤，收集沉淀。其中，所述碱溶液为质量分数0.05％的碳酸钠水溶液与质量分数0.03％的L-谷氨酸钠水溶液按照20:1体积比例混合而成的。L-谷氨酸钠对光和热具有一定的稳定性，将其添加到桑蚕丝中进行处理，既能提高丝素蛋白的稳定性，还能够加速脱胶。
1.1.2将沉淀继续用1.1.1的碱溶液水溶液煮沸桑蚕丝30min，收集溶液。
1.1.3重复步骤1.1.2，直至桑蚕丝脱胶完全，脱胶完全的物料称作丝素蛋白溶液。其中，用苦味酸胭脂红溶液检测是否脱胶完全。
1.2处理
1.2.1透析、浓缩与干燥
将1.1.3的丝素蛋白溶液用砂芯漏斗过滤，滤液用乙酸溶液调整pH值至4后用硫酸盐饱和溶液盐析2h，析出沉淀进行离心分离得到蛋白质沉淀。将蛋白质沉淀转移至放有0.2μm孔径的微孔滤膜的砂芯抽滤漏斗中，依次用75％乙醇和去离子水进行抽滤淋洗。将淋洗后的滤饼超声分散于去离子水中，移入截留分子量为3500Da的透析袋中，透析袋内溶液用体积分数30％的聚乙二醇20000的水溶液进行浓缩。将浓缩液置入冷冻干燥机，在-30℃下进行预冻，冷冻状态下真空干燥10h，得到干燥丝素。
1.2.2丝素蛋白的改良：
以双蒸水为溶剂，将1.2.1收集的干燥丝素配置成质量分数5％的水溶液，该水溶液与维生素C按照100:1的质量比例混合，搅拌20min，-20℃冻干，得到VC负载丝素蛋白。
1.3制备复合凝胶
以PEG300为溶剂，将1.2.2的VC负载丝素蛋白配置成30g/L的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精、辅助因子与交联剂按照10:1:0.8:0.1:1的质量比例混合，40℃静置20min，后得到复合凝胶，所述复合凝胶121℃蒸汽灭菌15min，作为丝素蛋白微载体皮肤填充制剂使用，生物相容性好，填充效果好。
其中，交联剂为15g/L浓度的辛基硫酸钠溶液。辅助因子为维生素B5。
以上实施例制备的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的抗酶效果好，生物相容性好。
3、本发明的创新点的说明
(1)创新点1：本发明采用改进的碱溶液配方，提高脱胶效率，缩短脱胶时间。不同方法设计如下：
试验1-1：用碱溶液煮沸桑蚕丝30min，过滤，收集沉淀。其中，所述碱溶液为质量分数0.05％的碳酸钠水溶液与质量分数0.03％的L-谷氨酸钠水溶液按照20:1体积比例混合而成的。将沉淀继续用所述碱溶液水溶液煮沸桑蚕丝30min，检测是否脱胶完全。重复步骤“用所述碱溶液水溶液煮沸桑蚕丝30min，检测是否脱胶完全”直至桑蚕丝脱胶完全。
试验1-2：与试验1-1的操作基本相同，区别在于将碱溶液改为质量分数0.05％的碳酸钠水溶液。
本试验中，用苦味酸胭脂红溶液检测是否脱胶完全。不同方法的脱胶时间的对比结果参见表1。其中，现有技术的质量分数0.05％的碳酸钠水溶液作为对照组。
表1不同方法的脱胶时间的对比结果
注：表1中，效率提高率是以试验1-2的时间为对照计算的，故“-”的含义是不计算试验1-2的效率提高率。
表1的结果显示，使用碳酸钠水溶液与L-谷氨酸钠水溶液的混合液煮沸桑蚕丝脱胶时间最短。所以我们还探究了不同0.05％碳酸钠水溶液与0.03％L-谷氨酸钠水溶液的脱胶时间，以期获得最佳的比例。结果参见表2。
表2不同碳酸钠水溶液与L-谷氨酸钠水溶液的脱胶时间
| 比例 | 脱胶时间(min) |
| 40:1 | 240min |
| 30:1 | 150min |
| 20:1 | 120min |
| 10:1 | 150min |
| 5:1 | 240min |
表2结果显示，随着碳酸钠用量的逐渐减少，脱胶时间呈现先降低后增高的趋势，其中，当碳酸钠水溶液与L-谷氨酸钠水溶液为10-30:1的范围内时，脱胶时间较短，利于节约时间成本。
(2)创新点2：通过对丝素蛋白进行改良，提高抗酶解能力。试验设置如下。
试验2-1：采用实施例1的方法制备脱胶完全的干燥丝素。以双蒸水为溶剂，将干燥丝素配置成质量分数5％的水溶液，该水溶液与维生素C按照100:1的质量比例混合，搅拌20min，-20℃冻干，得到VC负载丝素蛋白；以PEG300为溶剂，将VC负载丝素蛋白配置成30g/L的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精、辅助因子与交联剂按照10:1:0.5:0.1:0.2的质量比例混合，40℃静置20min，后得到复合凝胶。交联剂为15g/L的辛基硫酸钠水溶液。辅助因子为维生素B5。
试验2-2：采用实施例1的方法制备脱胶完全的干燥丝素。以PEG300为溶剂，将干燥丝素配置成30g/L的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精、辅助因子与交联剂按照10:1:0.5:0.1:0.2的质量比例混合，40℃静置20min，后得到复合凝胶。交联剂为15g/L的辛基硫酸钠水溶液。辅助因子为维生素B5。
试验方法如下：透明质酸被透明质酸酶酶解后，可产生葡萄糖醛酸，通过测试透明质酸酶酶解前后的葡萄糖醛酸浓度，即可判断复合凝胶的抗酶解能力。
不同丝素蛋白处理方式制备的复合凝胶的体外酶解实验结果参见表3。
表3不同丝素蛋白处理方式制备的复合凝胶的体外酶解实验结果
表3的结果显示，试验2-1酶解后葡萄糖醛酸浓度低于试验2-2，说明添加VC以后，抗酶解效果更好。
我们还探究了混合液中不同VC用量对复合凝胶体外抗酶解性能的影响(试验2-1的方法更改了水溶液与维生素C的比例)，结果参见表4。
表4同VC用量对复合凝胶体外抗酶解性能的影响
表4结果显示，在复合凝胶的体系条件下，随着VC加入量的逐渐增多，抗酶解性能呈现先增高后趋于平稳的趋势，说明VC对于复合凝胶体系的抗酶解能力有强化效果。
(3)创新点3：麦芽糊精与改良的丝素蛋白溶液组合使用，制成的复合凝胶抗酶解效果和辅助因子负载性能均更好。
1)复合凝胶抗酶解效果试验
不同方法设计如下：
试验3-1：采用实施例1的方法制备脱胶完全的干燥丝素。以双蒸水为溶剂，将干燥丝素配置成质量分数5％的水溶液，该水溶液与维生素C按照100:1的质量比例混合，搅拌20min，-20℃冻干，得到VC负载丝素蛋白；以PEG300为溶剂，将VC负载丝素蛋白配置成30g/L的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精、辅助因子与交联剂按照10:1:0.5:0.1:0.2的质量比例混合，40℃静置20min，后得到复合凝胶。交联剂为15g/L的辛基硫酸钠水溶液。辅助因子为维生素B5。
试验3-2：采用实施例1的方法制备脱胶完全的干燥丝素。以双蒸水为溶剂，将干燥丝素配置成质量分数5％的水溶液，该水溶液与维生素C按照100:1的质量比例混合，搅拌20min，-20℃冻干，得到VC负载丝素蛋白；以PEG300为溶剂，将VC负载丝素蛋白配置成30g/L的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、辅助因子与交联剂按照10:1:0.1:0.2的质量比例混合，40℃静置20min，后得到复合凝胶。交联剂为15g/L的辛基硫酸钠水溶液。辅助因子为维生素B5。
不同处理方法的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂复合凝胶体外抗酶解性能对比结果参见表5。
表5不同方法对复合凝胶体外抗酶解性能的影响
表5结果显示，试验3-1的抗酶解效果更好。
我们还探究了不同丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精与交联剂比例对复合凝胶体外抗酶解性能的影响，结果参见表6。表6结果显示，10:0.5-0.8:0.1:0.2的范围内，材料的抗酶解性能均较佳。
表6丝素水溶液、麦芽糊精与交联剂比例对复合凝胶体外抗酶解性能的影响
2)辅助因子负载率试验
试验3-3：采用实施例1的方法制备脱胶完全的干燥丝素。以双蒸水为溶剂，将干燥丝素配置成质量分数5％的水溶液，该水溶液与维生素C按照100:1的质量比例混合，搅拌20min，-20℃冻干，得到VC负载丝素蛋白；以PEG300为溶剂，将VC负载丝素蛋白配置成30g/L的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精与交联剂按照10:1:0.5:1的质量比例混合，40℃静置20min，得到复合凝胶。其中，交联剂为15g/L的辛基硫酸钠水溶液。辅助因子为维生素B5。
试验3-4：采用实施例1的方法制备脱胶完全的干燥丝素。以双蒸水为溶剂，将干燥丝素配置成质量分数5％的水溶液，该水溶液与维生素C按照100:1的质量比例混合，搅拌20min，-20℃冻干，得到VC负载丝素蛋白；以PEG300为溶剂，将VC负载丝素蛋白配置成30g/L的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸与交联剂按照10:1:1的质量比例混合，40℃静置20min，得到复合凝胶。交联剂为15g/L的辛基硫酸钠水溶液。辅助因子为维生素B5。
本试验探究了对维生素B5的负载率，结果参见表7，结果显示，添加麦芽糊精后，可提高对维生素B5的负载率。
表7辅助因子负载率试验结果
| 试验组 | 辅助因子负载率(％) |
| 试验3-3 | 5.8 |
| 试验3-4 | 1.2 |
4.应用
我们还进行了填充修复皮肤试验，图1、图2和图3展示了不同受试志愿者的皮肤修复结果，图1、图2和图3中箭头所指是填充区，通过应用实验可知，本发明制备的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂更有利于用于修复皮肤。需要说明的是，为保护受试者隐私，图1、图2和图3仅采用了眼部效果图。
需要说明的是，本发明中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，由于采用的步骤方法与实施例相同，为了防止赘述，本发明描述了优选的实施例。尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (9)
1.一种丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，其特征在于，包括：
桑蚕丝脱胶、浓缩、干燥，得到干燥丝素；
干燥丝素配置成水溶液，该水溶液与维生素C混合，冻干，得到VC负载丝素蛋白；
将VC负载丝素蛋白配置成丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精与交联剂混合，35-40℃静置，得到复合凝胶，灭菌，得到丝素蛋白微载体皮肤填充制剂。
2.根据权利要求1所述的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，其特征在于，干燥丝素用双蒸水作为溶剂，配置成质量分数5-10％的水溶液，该水溶液与维生素C按照90-120:1的质量比例混合，搅拌15-30min，冻干，得到VC负载丝素蛋白。
3.根据权利要求2所述的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，其特征在于，配置成质量分数5％的水溶液，该水溶液与维生素C按照100:1的质量比例混合，搅拌20min，冻干，得到VC负载丝素蛋白。
4.根据权利要求3所述的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，其特征在于，以PEG300-PEG600为溶剂，将VC负载丝素蛋白配置成30-40g/L的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精与交联剂混合，35-40℃静置，得到复合凝胶。
5.根据权利要求4所述的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，其特征在于，以PEG300为溶剂，将VC负载丝素蛋白配置成30g/L的丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精与交联剂按照10:1:0.5:0.2的质量比例混合，40℃静置，得到复合凝胶。
6.根据权利要求5所述的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，其特征在于，交联剂为辛基硫酸钠溶液、十二烷基磺酸钠中的一种或几种。
7.根据权利要求1所述的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂的制备方法，其特征在于，所述脱胶的方法包括：
(1)用碱溶液煮沸桑蚕丝，过滤，收集沉淀；其中，所述碱溶液为碳酸钠水溶液与L-谷氨酸钠水溶液混合而成的；
(2)将沉淀继续用所述碱溶液水溶液煮沸桑蚕丝，收集溶液；
(3)重复(2)操作，直至桑蚕丝脱胶完全，脱胶完全的物料称作丝素蛋白溶液。
8.根据权利要求1-7任一种方法制备的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂。
9.根据权利要求8所述的丝素蛋白微载体皮肤填充制剂，其特征在于，丝素蛋白微载体皮肤填充制剂负载有辅助因子，制备方法如下：
桑蚕丝脱胶、浓缩、干燥，得到干燥丝素；
干燥丝素配置成水溶液，该水溶液与维生素C混合，搅拌，冻干，得到VC负载丝素蛋白；
以PEG300-PEG600为溶剂，将VC负载丝素蛋白配置成丝素溶液，将丝素溶液、透明质酸、麦芽糊精、辅助因子与交联剂混合，35-40℃静置，得到复合凝胶，灭菌，即得到丝素蛋白微载体皮肤填充制剂。
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|---|---|
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Citations (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2562415A1 (en) * | 2003-04-10 | 2005-02-10 | Tufts University | Concentrated aqueous silk fibroin solutions free of organic solvents and uses thereof |
| TW200529875A (en) * | 2004-02-03 | 2005-09-16 | Hayashibara Biochem Lab | Cosmetics |
| CN101032683A (zh) * | 2006-03-10 | 2007-09-12 | 郑亚津 | 叶黄素微囊及其制备方法 |
| CN102516777A (zh) * | 2011-11-29 | 2012-06-27 | 苏州大学 | 一种丝素蛋白水溶液及其制备方法 |
| CN102560888A (zh) * | 2012-01-17 | 2012-07-11 | 东华大学 | 负载水溶性维生素e的丝素蛋白纳米纤维膜及其制备方法 |
| TW201247179A (en) * | 2011-05-30 | 2012-12-01 | Univ Taipei Medical | Polyelectrolyte complex gels and soft tissue augmentation implants comprising the same |
| CN102836465A (zh) * | 2012-08-30 | 2012-12-26 | 浙江星月生物科技股份有限公司 | 一种注射用丝素蛋白透明质酸复合凝胶及其制备与应用 |
| CN103469351A (zh) * | 2013-07-18 | 2013-12-25 | 嘉兴学院 | 负载维生素c的丝素蛋白/透明质酸复合纳米纤维的制备方法 |
| WO2014168433A2 (ko) * | 2013-04-09 | 2014-10-16 | Kweon Seong Beom | 발모 및 흰머리 멜라닌 색소 재생과 피부 재생 촉진용 물질 조성물 |
| CN105688210A (zh) * | 2016-03-10 | 2016-06-22 | 陕西瑞凯生物科技有限公司 | 一种卵黄生物蛋白皮肤修护敷料及其制备方法 |
| CN106176281A (zh) * | 2016-07-26 | 2016-12-07 | 西安艾尔菲生物科技有限公司 | 载活性成分的丝素蛋白/ha复合微球冻干粉及制备和应用 |
| CN106492279A (zh) * | 2016-11-04 | 2017-03-15 | 武汉纺织大学 | 一种丝素蛋白‑透明质酸复合凝胶的快速制备方法 |
| CN108070106A (zh) * | 2017-11-22 | 2018-05-25 | 玖久丝绸股份有限公司 | 一种丝素蛋白接枝麦芽糊精多孔材料的制备方法 |
| CN108745216A (zh) * | 2018-01-14 | 2018-11-06 | 浙江工商大学 | 用于制作SF-Cd缓释微球的丝素蛋白粉的制备方法 |
| IT201700091328A1 (it) * | 2017-08-07 | 2019-02-07 | Leonardino S R L | Matrice elettrofilata a base di proteine della seta, procedimento per la sua preparazione, manufatti che la comprendono e loro uso in terapia ed in cosmetica |
| CN110237022A (zh) * | 2019-07-03 | 2019-09-17 | 斯微(上海) 生物科技有限公司 | 一种冻干粉、溶媒及其应用 |
| CN111973494A (zh) * | 2020-09-22 | 2020-11-24 | 南京飞天一淼科技服务有限公司 | 长效保湿型保湿面霜及其制备方法 |
| CN115463263A (zh) * | 2022-08-26 | 2022-12-13 | 上海交通大学医学院附属第九人民医院 | 一种可注射双网络水凝胶体系及其制备方法和应用 |
| CN116966341A (zh) * | 2023-08-25 | 2023-10-31 | 杭州雪境医疗器械有限公司 | 一种美容填充剂的制备方法及其应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA3180268A1 (en) * | 2020-05-28 | 2021-12-02 | Monica Serban | Devices comprising hyaluronic acid and silk fibroin |
-
2023
- 2023-12-14 CN CN202311721348.5A patent/CN117599247B/zh active Active
Patent Citations (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2562415A1 (en) * | 2003-04-10 | 2005-02-10 | Tufts University | Concentrated aqueous silk fibroin solutions free of organic solvents and uses thereof |
| TW200529875A (en) * | 2004-02-03 | 2005-09-16 | Hayashibara Biochem Lab | Cosmetics |
| CN101032683A (zh) * | 2006-03-10 | 2007-09-12 | 郑亚津 | 叶黄素微囊及其制备方法 |
| TW201247179A (en) * | 2011-05-30 | 2012-12-01 | Univ Taipei Medical | Polyelectrolyte complex gels and soft tissue augmentation implants comprising the same |
| CN102516777A (zh) * | 2011-11-29 | 2012-06-27 | 苏州大学 | 一种丝素蛋白水溶液及其制备方法 |
| CN102560888A (zh) * | 2012-01-17 | 2012-07-11 | 东华大学 | 负载水溶性维生素e的丝素蛋白纳米纤维膜及其制备方法 |
| CN102836465A (zh) * | 2012-08-30 | 2012-12-26 | 浙江星月生物科技股份有限公司 | 一种注射用丝素蛋白透明质酸复合凝胶及其制备与应用 |
| WO2014168433A2 (ko) * | 2013-04-09 | 2014-10-16 | Kweon Seong Beom | 발모 및 흰머리 멜라닌 색소 재생과 피부 재생 촉진용 물질 조성물 |
| CN103469351A (zh) * | 2013-07-18 | 2013-12-25 | 嘉兴学院 | 负载维生素c的丝素蛋白/透明质酸复合纳米纤维的制备方法 |
| CN105688210A (zh) * | 2016-03-10 | 2016-06-22 | 陕西瑞凯生物科技有限公司 | 一种卵黄生物蛋白皮肤修护敷料及其制备方法 |
| CN106176281A (zh) * | 2016-07-26 | 2016-12-07 | 西安艾尔菲生物科技有限公司 | 载活性成分的丝素蛋白/ha复合微球冻干粉及制备和应用 |
| CN106492279A (zh) * | 2016-11-04 | 2017-03-15 | 武汉纺织大学 | 一种丝素蛋白‑透明质酸复合凝胶的快速制备方法 |
| IT201700091328A1 (it) * | 2017-08-07 | 2019-02-07 | Leonardino S R L | Matrice elettrofilata a base di proteine della seta, procedimento per la sua preparazione, manufatti che la comprendono e loro uso in terapia ed in cosmetica |
| CN108070106A (zh) * | 2017-11-22 | 2018-05-25 | 玖久丝绸股份有限公司 | 一种丝素蛋白接枝麦芽糊精多孔材料的制备方法 |
| CN108745216A (zh) * | 2018-01-14 | 2018-11-06 | 浙江工商大学 | 用于制作SF-Cd缓释微球的丝素蛋白粉的制备方法 |
| CN110237022A (zh) * | 2019-07-03 | 2019-09-17 | 斯微(上海) 生物科技有限公司 | 一种冻干粉、溶媒及其应用 |
| CN111973494A (zh) * | 2020-09-22 | 2020-11-24 | 南京飞天一淼科技服务有限公司 | 长效保湿型保湿面霜及其制备方法 |
| CN115463263A (zh) * | 2022-08-26 | 2022-12-13 | 上海交通大学医学院附属第九人民医院 | 一种可注射双网络水凝胶体系及其制备方法和应用 |
| CN116966341A (zh) * | 2023-08-25 | 2023-10-31 | 杭州雪境医疗器械有限公司 | 一种美容填充剂的制备方法及其应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Review Research Progress in Enzymatically Cross-Linked Hydrogels as Injectable Systems for Bioprinting and Tissue Engineering;Raquel Naranjo-Alcazar et al;Gels;20230315;1-27 * |
| Stabilization of Natural Antioxidants by Silk Biomaterials;Tingting Luo et al;American Chemical Society;20160503;13573−13582 * |
| 维生素C功能化丝素蛋白纳米纤维的制备和表征;范林鹏;中国优秀硕士学位论文全文数据库工程科技Ⅰ辑;20110815;B016-56 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117599247A (zh) | 2024-02-27 |
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