CN117368492B - 一种同型半胱氨酸检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒。本发明的同型半胱氨酸检测试剂盒含第一试剂、第二试剂、第三试剂和样本稀释液,第一试剂为含有S‑腺苷‑L‑同型半胱氨酸水解酶的保存液,第二试剂为含有共轭S‑腺苷‑半胱氨酸和腺苷的保存液,第三试剂为含有包被S‑腺苷‑L‑同型半胱氨酸抗体的微球的保存液,样本稀释液为TCEP水溶液,它们各自在4℃均能够稳定保存14个月,完全满足生化平台对试剂稳定性的要求。其中第一试剂和第二试剂混合后在4周内稳定性较好,可在上机检测前预先混合好,符合现有全自动生化分析平台对试剂数量的限制,从而实现同型半胱氨酸在全自动生化分析平台上的定量检测,操作简单,收费低,具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于体外诊断生化检测技术领域,具体涉及一种同型半胱氨酸检测试剂盒。
背景技术
同型半胱氨酸(Hcy)是体内三种含硫氨基酸之一,是蛋氨酸代谢的中间产物,其本身不参与蛋白质的合成。蛋氨酸分子含有S甲基;在与ATP作用生成S腺苷蛋氨酸后,可通过各种转甲基作用为体内已知的约50多种具有重要生理活性的物质提供甲基。S腺苷蛋氨酸在甲基转移酶作用下将甲基转移至另一物质后,生成S腺苷同型半胱氨酸,后者进一步脱去腺苷,生成同型半胱氨酸。血浆中的同型半胱氨酸约70%与白蛋白结合,为结合型。其余的游离型则主要以二硫同型半胱氨酸和以二硫键结合的同型半胱氨酸-半胱氨酸化合物形式存在,只有少量以还原型同型半胱氨酸存在于血浆中。我们通常所指的浓度是总的同型半胱氨酸浓度。正常空腹状态下,Hcy血浆浓度为5~15μmol/L,遗传或获得性因素使得Hcy浓度持续高于正常值,即称为高同型半胱氨酸血症。近年来大量研究证实同型半胱氨酸水平升高与心脑血管疾病、外周血管疾病、神经***退行性疾病、糖尿病、妊娠高血压综合征、肝硬化、慢性肾病等疾病高度相关。
目前用于检测Hcy的方法主要有液高效液相法、循环酶法、酶联免疫法和化学发光免疫法。液高效液相(HPLC)法需要进行衍生化处理,操作较为复杂,只能单个样本进行检测,不能满足市场需求,只能是进行研究用。循环酶法操作简单,是目前检测HCY在全自动生化分析平台常用方法,收费低,但此法主要使用的是酶,而且是多种酶一起使用,每种酶的保存条件和适应的缓冲环境都不太一样,导致酶法HCY试剂稳定性一直是市场一个痛点。酶联免疫法为手工方法,临床使用极为不便,且耗时长,发光免疫法结果准确,操作简单,试剂稳定,但测试所需时间长,收费贵,且发光有四种试剂组分,而现有普遍使用的全自动生化分析平台只能实现两种试剂组分的自动取液及混合工作,发光免疫法中试剂预先混合后的稳定性显著降低,上机检测的结果准确性降低,因此现有发光免疫法无法在全自动生化分析平台上普及使用。
发明内容
本发明的目的是提供一种各试剂稳定性更好,检测灵敏度更高的能够在现有全自动生化分析平台上使用的同型半胱氨酸检测试剂盒。
为解决上述技术问题,本发明采用如下技术方案:
一种同型半胱氨酸检测试剂盒,所述同型半胱氨酸检测试剂盒包括第一试剂、第二试剂、第三试剂和样本稀释液,所述第一试剂的配方为:0.1~1KU S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶、0.01~0.1wt% 防腐剂、0.05~2wt% 蛋白类物质、3~8wt% 糖类物质、0.05~0.5wt%表面活性剂、0.05~0.5mmol/L苯甲基磺酰氟或0.005~0.05wt% 精氨酸,其余为pH值7.2~8的PBS缓冲液,所述第二试剂的配方为:0.01~0.1g/L共轭S-腺苷-半胱氨酸、5~20mg/L腺苷、0.2~0.8mol/L柠檬酸,其余为pH值7~8的PBS缓冲液,所述第三试剂为含有包被S-腺苷-L-同型半胱氨酸抗体的微球的保存液,所述样本稀释液含有TCEP。
优选地,所述防腐剂为庆大霉素、ProClin300、硫柳汞中的一种或多种。
优选地,所述蛋白类物质为BSA、酪蛋白、卵清蛋白中的一种或多种。
优选地,所述糖类物质为蔗糖、海藻糖、山梨醇中的一种或多种。
优选地,所述表面活性剂为吐温-20、曲拉通X-100、PEG中的一种或多种。
优选地,所述样本稀释液为浓度为0.01~0.1g/L的 TCEP水溶液,进一步优选为浓度为0.01~0.05g/L的 TCEP水溶液。
优选地,所述样本稀释液的pH值为4~6,进一步优选pH值为4~5。
优选地,所述微球为羧基含量为0.03~0.10 meq/g的羧基微球。
优选地,所述微球的材质为聚苯乙烯。
优选地,所述羧基微球的粒径为60~400nm,进一步优选为100~350nm,更进一步优选为150~300nm。
优选地,所述第三试剂的配方为:0.01~0.2g/L包被S-腺苷-L-同型半胱氨酸抗体的微球,0.05~0.2wt% BSA,5~15wt% 蔗糖,0.5~1.2wt% NaCl,0.01~0.1wt% 防腐剂,其余为pH值7.0~7.5的HEPES缓冲液。
优选地,所述第三试剂中的包被S-腺苷-L-同型半胱氨酸抗体的微球在制备过程中使用北京博尔迈生物技术有限公司的CE210或CE510进行封闭。
S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH)抗体包被羧基微球会存在非特异性吸附,使本底值异常,因此需要用到封闭剂,但实验发现常规使用的封闭剂如BSA、酪蛋白、明胶、PEG等对抑制特异性吸附的效果一般,而北京博尔迈生物技术有限公司的CE210或CE510却能够尽可能保持抗体的构型及特性,极大的降低非特异性吸附,也提高了第三试剂的稳定性。
根据一些具体实施方式,所述第一试剂的配方为:0.4~0.6KU S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶、0.03~0.08wt% ProClin300、0.05~1.5wt% 蛋白类物质、3~8wt% 糖类物质、0.08~0.3wt% 表面活性剂、0.08~0.2mmol/L苯甲基磺酰氟或0.008~0.02wt% 精氨酸,其余为pH值7.2~7.6的PBS缓冲液。
根据一些具体实施方式,所述第二试剂的配方为:0.04~0.08g/L共轭S-腺苷-半胱氨酸、5~15mg/L腺苷、0.4~0.6mol/L柠檬酸,其余为pH值7.2~7.8的PBS缓冲液。
本发明的同型半胱氨酸检测试剂盒采用免疫竞争法原理对同型半胱氨酸进行检测,待测样本中不同形式的同型半胱氨酸被还原剂还原为游离的同型半胱氨酸,游离的同型半胱氨酸被S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶和腺苷转化为S-腺苷-L-同型半胱氨酸,S-腺苷-L-同型半胱氨酸和共轭S-腺苷-半胱氨酸(SAC)竞争有限的包被有SAH抗体的羧基微球。当反应混合物中不存在S-腺苷-L-同型半胱氨酸时,SAC通过SAH抗体与微球结合并聚集,产生很强的透射光信号。当反应混合物中存在S-腺苷-L-同型半胱氨酸,其优先与SAH抗体结合,S-腺苷-L-同型半胱氨酸浓度越高,SAC通过SAH抗体与微球结合并聚集的量越少,透射光信号越弱。本发明的同型半胱氨酸检测试剂盒中的各试剂稳定性好,该试剂盒的检测灵敏度高、准确度高,该试剂盒无放射性风险,可在全自动生化分析平台上使用,操作简单,检测时间短,不易出现交叉反应。
本发明与现有技术相比具有如下优势:
本发明的同型半胱氨酸检测试剂盒含第一试剂、第二试剂、第三试剂和样本稀释液,第一试剂为含有S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶的保存液,第二试剂为含有共轭S-腺苷-半胱氨酸和腺苷的保存液,第三试剂为含有包被S-腺苷-L-同型半胱氨酸抗体的微球的保存液,样本稀释液为TCEP水溶液,它们各自在4℃均能够稳定保存14个月,完全满足生化平台对试剂稳定性的要求。其中第一试剂和第二试剂混合后在4周内稳定性较好,可在上机检测前预先混合好,符合现有全自动生化分析平台对试剂数量的限制,从而实现同型半胱氨酸在全自动生化分析平台上的定量检测。全自动生化分析平台操作简单,收费低,因此本发明的同型半胱氨酸检测试剂盒具有更广阔的应用前景。
附图说明
图1为实施例1的同型半胱氨酸检测试剂盒与雅培同型半胱氨酸检测试剂盒的检测结果相关性分析结果图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述。但本发明并不限于以下实施例。实施例中采用的实施条件可以根据具体使用的不同要求做进一步调整,未注明的实施条件为本行业中的常规条件。本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
以下实施例和对比例中,室温是指25±5℃。
以下实施例和对比例中,若无特殊说明,所使用的原料、试剂等均为常规市售产品。
S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶购自上海沪峥生物科技有限公司。
共轭S-腺苷-半胱氨酸(SAC)为实验室内部合成,由 BSA和SAH通过EDC偶联得到的复合物。BSA即牛血清白蛋白,购自西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司。SAH即S-腺苷-L-同型半胱氨酸,购自阿拉丁生化科技股份有限公司。EDC购自赛默飞世尔科技,货号22981。偶联方法如下:
1、取5mL离心管,加入10mM PBS 1mL,称取牛血清白蛋白10mg倒入离心管中,颠倒混匀至完全溶解;
取1mg EDC按照1mg/mL浓度溶解于1mL反应缓冲液中,混合完全溶解后,用1mL移液器取100μL添加到步骤1的5mL离心管中,混匀并在旋转器中于室温下混合20min,反应缓冲液为10 mM HEPES缓冲液(pH 7.0);
取1mg SAH添加到100μL DMSO(西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司)中,溶解混匀,并加入到步骤1的5mL离心管中,混匀并在旋转器中于室温下混合2h;
放置冷藏冰箱(2-8摄氏度)静置24小时后,即得共轭S-腺苷-半胱氨酸(SAC)。
腺苷购自西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司;S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH)抗体购自阿拉丁生化科技股份有限公司。
微球为购自北京博尔迈生物技术有限公司的羧基微球溶液,货号:P0323,粒径287nm,10wt%。
EDC购自赛默飞世尔科技,货号22981。
封闭溶液:CE210,购自北京博尔迈生物技术有限公司,货号:BLMCE210。
实施例1
本实施例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其包括第一试剂、第二试剂、第三试剂和样本稀释液,其制备方法如下:
1、按照以下配方配制第一试剂:0.5KU S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶、0.05wt%ProClin300、1wt% BSA、5wt% 海藻糖、0.1wt% 吐温-20、0.1mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF),其余为pH值为7.4的PBS缓冲液。
2、按照以下配方配制第二试剂:0.05g/L共轭S-腺苷-半胱氨酸(SAC)、10mg/L腺苷、0.5mol/L柠檬酸,其余为pH值为7.4的10mM PBS缓冲液。
3、制备第三试剂:
材料准备:微球;反应缓冲液:10 mM HEPES缓冲液(pH 7.0);S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH)抗体;界面活性剂:10% Tween-20;封闭溶液:CE210;配制试剂保存液:0.1wt%BSA,10wt% 蔗糖,0.9wt% NaCl,0.05wt% ProClin300,其余为20 mM HEPES缓冲液(pH7.0)。
具体步骤:
a.向微管中加入50 μL微球、950 μL反应缓冲液,混合均匀得到1000μL 胶乳分散液;
b.取1mg EDC按照1mg/mL浓度溶解于1mL反应缓冲液中,混合完全溶解后,用1mL移液器取300μL添加到胶乳分散液中,混匀并在旋转器中于室温下混合20min;
c.添加1mg S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH)抗体,于室温下混合反应1小时;
d.向反应后的溶液中添加15 μL界面活性剂(10%Tween-20),混匀继续反应10min;
e.向反应后的溶液中添加50 μL封闭溶液(CE210),混匀继续反应1小时;
f.将溶液置于高速冷冻离心机(设置:8000g、4℃、20min)离心,离心完成后去除上清。
g.向微管中加入10mL试剂保存液,使用超声波细胞破碎仪(宁波新芝生物JY92-Ⅱ型)进行超声分散,超声功率为65w,超声时间3min,得到S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH)抗体胶乳试剂(即第三试剂)10mL。
4、配制样本稀释液:使用纯水和TCEP配制浓度为0.0126g/L的 TCEP水溶液,采用梅特勒-托利多仪器有限公司 FE28型PH计,用1mol/L NaOH调节pH值至5.0。
将本实施例的试剂盒置于2~8℃冷藏保存。
本实施例的试剂盒基于竞争免疫测试法进行免疫学检测,检测所用仪器为全自动生化分析仪(日立公司的型号为7180型的全自动生化分析仪),测试前,将第一试剂和第二试剂按照体积比1:1混合混匀,将样本稀释液置于全自动生化分析仪的稀释液位置、第一试剂和第二试剂的混合液、第三试剂分别放置在仪器的对应试剂槽孔中,待测样本置于样本盘中,测试时,自动取10μL样本稀释液、10μL待测样本、180μL第一试剂和第二试剂的混合液并混合均匀,37℃孵育反应5min后,自动加入90μL第三试剂,37℃孵育反应5min后,仪器自动检测吸光度,仪器中预先设有对应的标准曲线,自动将检测结果代入标准曲线转换为浓度输出。
性能测试:
1.精密度
参照CLSI EP5-A2文件,在日立7180全自动生化分析仪(仪器1)和迈瑞BS-830全自动生化分析仪(仪器2)上,分别对低值质控品(6μmol/L)、高值质控品(12μmol/L)和3份血清进行检测,每天在2个不同时间段(北京时间上午10-11点,北京时间下午15-16点)分别检测2次,共检测20天,每天检测时,针对不同时间段分别形成一条新的校准曲线。数据见下表1:
表1显示,实施例1的同型半胱氨酸检测试剂盒的精密度达到5%及以下,现有同型半胱氨酸检测试方法的检测精密度一般最低在8%,本发明提供的同型半胱氨酸检测试剂盒的灵敏度较高。
2.准确度检测
取浓度为10μmol/L及20μmol/L两个同型半胱氨酸质控品,每个样本浓度各做3个平行测试,计算相对偏差,结果见表2。
表2显示,质控水平1和质控水平2的相对偏差分别为2.33%和1.83%,明显小于10%,说明实施例1的同型半胱氨酸检测试剂盒的准确度高。
3.上机稳定性测试
第一试剂和第二试剂混合后4℃上机稳定性测试。
将第一试剂和第二试剂按照体积比1:1混合混匀得到第一试剂和第二试剂的混合液,将样本稀释液置于全自动生化分析仪的稀释液位置、第一试剂和第二试剂的混合液、第三试剂分别放置在仪器的对应试剂槽孔中,在第1/3/5/8/10/15/25/31天时分别对2个水平的质控品进行检测,每个质控品重复检测三次,评价标准为与试剂上机第1天检测质控比较,每次结果与第1天的相对偏差不超过正负10%,本测试实验中的第1天是指配制第一试剂和第二试剂的混合液的当天。测试结果见表3。
表3显示,第一试剂和第二试剂的混合液在放置四周后对检测结果的偏差小于8%,一般要求10%为标准,说明具有良好的稳定性,理论上第一试剂和第二试剂的混合液可以连续使用四周不更换,对待测样本中同型半胱氨酸浓度的定量结果影响不明显。
4.临床符合度测试
采集本市一医疗机构提供的100例样本,用实施例1的同型半胱氨酸检测试剂盒和雅培同型半胱氨酸检测试剂盒(化学发光微粒子免疫检测法)分别进行测试,雅培同型半胱氨酸检测试剂盒使用方法参考其说明书。计算试验结果相关性为:R2=0.9931,K值为0.9549,结果见图1(横坐标为对照雅培同型半胱氨酸检测试剂盒的检测值,纵坐标为实施例1的同型半胱氨酸检测试剂盒的检测值)。结果显示实施例1的同型半胱氨酸检测试剂盒与雅培同型半胱氨酸检测试剂盒的检测结果相关性非常好,能满足实际应用的需求。在进行本测试前,实施例1的同型半胱氨酸检测试剂盒已经在2~8℃冷藏保存了5个月,所有样本使用同一第一试剂和第二试剂的混合液,所有样本使用2周时间分批测完。
实施例2
本实施例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其基本同实施例1,区别仅在于第一试剂配方调整为:0.5KU S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶、0.05wt% ProClin300、0.5wt% 酪蛋白、5wt% 蔗糖、0.1wt% 曲拉通X-100、0.1mmol/L PMSF,其余为pH值为7.4的10mM PBS缓冲液。
实施例3
本实施例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其基本同实施例1,区别仅在于第一试剂配方调整为:0.5KU S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶、0.05wt% ProClin300、0.1wt% 卵清蛋白、0.5wt% 酪蛋白、1wt% 山梨醇、0.1wt% 吐温-20、0.01wt% 精氨酸,其余为pH值为7.4的10mM PBS缓冲液。
对比例1
本对比例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其基本同实施例1,区别仅在于第一试剂配方调整为:0.5KU S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶、0.05wt% ProClin300、1wt% BSA、5wt% 海藻糖、0.1wt% 吐温-20、0.1mmol/L PMSF,其余为pH值为6.0的100mM MES缓冲液。
对比例2
本对比例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其基本同实施例1,区别仅在于第一试剂配方调整为:0.5KU S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶、0.05wt% ProClin300、5wt% 海藻糖、0.1wt% 吐温-20、0.1mmol/L PMSF,其余为pH值为7.4的10mM PBS缓冲液。
对比例3
本对比例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其基本同实施例1,区别仅在于第一试剂配方调整为:0.5KU S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶、0.05wt% ProClin300、1wt% BSA、0.1wt% 吐温-20、0.1mmol/L PMSF,其余为pH值为7.4的10mM PBS缓冲液。
对比例4
本对比例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其基本同实施例1,区别仅在于第一试剂配方调整为:0.5KU S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶、0.05wt% ProClin300、1wt% BSA、5wt% 海藻糖、0.1mmol/L PMSF,其余为pH值为7.4的10mM PBS缓冲液。
对比例5
本对比例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其基本同实施例1,区别仅在于第一试剂配方调整为:0.5KU S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶、0.05wt% ProClin300、1wt% BSA、5wt% 海藻糖、0.1wt% 吐温-20,其余为pH值为7.4的10mM PBS缓冲液。
稳定性测试
将多个上述实施例1~3和对比例1~5的同型半胱氨酸检测试剂盒分别置于4℃下保存,在保存当天、一个月时、三个月时、六个月时、九个月时、十二个月时以及十四个月时分别取试剂盒测试同一质控品的同型半胱氨酸浓度,分别计算保存一个月时、三个月时、六个月时、九个月时、十二个月时以及十四个月时的测试值与保存当天的测试值的差异百分比。
实施例1~3和对比例1~5的同型半胱氨酸检测试剂盒在4℃下的稳定性测试结果见表4。
以下实施例2~3和对比例1~5的同型半胱氨酸检测试剂盒使用了更多的第一试剂配方,将它们与实施例1的同型半胱氨酸检测试剂盒进行比较,其中实施例2和实施例3能够达到与实施例1较接近的结果,能够控制在十四个月比例小于10%,而对比例1~5的长期稳定性不佳,说明S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶降解比例较多,将会影响试剂盒后期检测结果。
对比例6
本对比例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其基本同实施例1,区别仅在于第二试剂配方调整为:0.05g/L共轭S-腺苷-半胱氨酸(SAC)、10mg/L腺苷、0.1mol/L柠檬酸,其余为pH值为7.4的10mM PBS缓冲液。
对比例7
本对比例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其基本同实施例1,区别仅在于第二试剂配方调整为:0.05g/L共轭S-腺苷-半胱氨酸(SAC)、10mg/L腺苷、1mol/L柠檬酸,其余为pH值为7.4的10mM PBS缓冲液。
对比例8
本对比例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其基本同实施例1,区别仅在于第二试剂配方调整为:0.05g/L共轭S-腺苷-半胱氨酸(SAC)、10mg/L腺苷、1mol/L柠檬酸,其余为pH值为6.0的100mM MES缓冲液。
将对比例6至8的同型半胱氨酸检测试剂盒同样分别置于4℃下保存,在保存当天、一个月时、三个月时、六个月时、九个月时、十二个月时以及十四个月时分别取试剂盒测试同一质控品的同型半胱氨酸浓度,分别计算保存一个月时、三个月时、六个月时、九个月时、十二个月时以及十四个月时的测试值与保存当天的测试值的差异百分比,并与实施例1进行比较。
实施例1和对比例6至8的同型半胱氨酸检测试剂盒的在4℃下的稳定性测试结果见表5。
对比例6~8提供了更多的第二试剂配方,表5显示当第二试剂中添加适量的柠檬酸且使用pH值为7.4的PBS缓冲液保存时,能够有效防止SAH降解,保证同型半胱氨酸检测试剂盒长期保存后的检测效果。
实施例4
本实施例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其基本同实施例1,区别仅在于第三试剂制备过程中封闭剂换成CE510(北京博尔迈公司 货号BLMCE510)。
对比例9
本对比例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其基本同实施例1,区别仅在于第三试剂制备过程中封闭剂换成BSA。
对比例10
本对比例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其基本同实施例1,区别仅在于第三试剂制备过程中封闭剂换成酪蛋白。
对比例11
本对比例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其基本同实施例1,区别仅在于第三试剂制备过程中封闭剂换成明胶。
对比例12
本对比例提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其基本同实施例1,区别仅在于第三试剂制备过程中封闭剂换成PEG-6000。
分别采用实施例1、实施例4和对比例9至11的同型半胱氨酸检测试剂盒对不同浓度的标准品进行上机测试,对应的吸光度值见表6。
表6显示,选用CE210或CE510信号明显增强。
以上对本发明做了详尽的描述,其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明的内容并加以实施,并不能以此限制本发明的保护范围,凡根据本发明的精神实质所作的等效变化或修饰,都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于,所述同型半胱氨酸检测试剂盒包括第一试剂、第二试剂、第三试剂和样本稀释液,
所述第一试剂的配方为:0.1~1KU S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶、0.01~0.1wt% 防腐剂、0.05~2wt% 蛋白类物质、3~8wt% 糖类物质、0.05~0.5wt% 表面活性剂、0.05~0.5mmol/L苯甲基磺酰氟或0.005~0.05wt% 精氨酸,其余为pH值7.2~8的PBS缓冲液,
所述第二试剂的配方为:0.01~0.1g/L共轭S-腺苷-半胱氨酸、5~20mg/L腺苷、0.2~0.8mol/L柠檬酸,其余为pH值7~8的PBS缓冲液,
所述第三试剂为含有包被S-腺苷-L-同型半胱氨酸抗体的微球的保存液;
所述样本稀释液含有TCEP。
2.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于,所述防腐剂为庆大霉素、ProClin300、硫柳汞中的一种或多种;
和/或,所述蛋白类物质为BSA、酪蛋白、卵清蛋白中的一种或多种;
和/或,所述糖类物质为蔗糖、海藻糖、山梨醇中的一种或多种;
和/或,所述表面活性剂为吐温-20、曲拉通X-100、PEG中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于,所述样本稀释液为浓度为0.01~0.1g/L的 TCEP水溶液。
4.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于,所述样本稀释液的pH值为4~6。
5.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于,所述微球为羧基含量为0.03~0.10 meq/g的羧基微球,和/或,所述微球的材质为聚苯乙烯。
6.根据权利要求5所述的同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于,所述羧基微球的粒径为60~400nm。
7.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于,所述第三试剂的配方为:0.01~0.2g/L包被S-腺苷-L-同型半胱氨酸抗体的微球,0.05~0.2wt% BSA,5~15wt% 蔗糖,0.5~1.2wt% NaCl,0.01~0.1wt% 防腐剂,其余为pH值7.0~7.5的HEPES缓冲液。
8.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于,所述第三试剂中的包被S-腺苷-L-同型半胱氨酸抗体的微球在制备过程中使用北京博尔迈生物技术有限公司的CE210或CE510进行封闭。
9.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于,所述第一试剂的配方为:0.4~0.6KU S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶、0.03~0.08wt% ProClin300、0.05~1.5wt%蛋白类物质、3~8wt% 糖类物质、0.08~0.3wt% 表面活性剂、0.08~0.2mmol/L苯甲基磺酰氟或0.008~0.02wt% 精氨酸,其余为pH值7.2~7.6的PBS缓冲液。
10.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒,其特征在于,所述第二试剂的配方为:0.04~0.08g/L共轭S-腺苷-半胱氨酸、5~15mg/L腺苷、0.4~0.6mol/L柠檬酸,其余为pH值7.2~7.8的PBS缓冲液。
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乳胶增强散射比浊法检测血中同型半胱氨酸及临床应用;贺帅;马竞;邹金宏;;检验医学与临床(21);第2678页检测原理、试剂组成 * |
贺帅 ; 马竞 ; 邹金宏 ; .乳胶增强散射比浊法检测血中同型半胱氨酸及临床应用.检验医学与临床.2011,(21),第2678页检测原理、试剂组成. * |
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