CN117015528A - 作为激酶抑制剂的吲哚衍生物 - Google Patents

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Abstract

本文公开了蛋白激酶抑制剂，特别是布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、包含它们的药物组合物、用于制备它们的方法以及这些抑制剂用于治疗或预防与激酶功能相关的疾病、障碍和病症的用途。具体地，本发明涉及CNS可穿透的BTK抑制剂。

Description

作为激酶抑制剂的吲哚衍生物
技术领域
本发明总体上涉及蛋白激酶抑制剂，特别是布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、包含它们的药物组合物、用于制备它们的方法以及此类抑制剂用于治疗或预防与激酶功能相关的疾病、障碍和病症的用途。
背景技术
蛋白激酶是真核细胞中一大类细胞内和跨膜信号传导蛋白。这些酶负责将末端(γ)磷酸从ATP转移到靶蛋白的特定氨基酸残基。靶蛋白中特定氨基酸残基的磷酸化可以调节它们的活性，从而导致细胞信号传导和代谢的显著变化。蛋白激酶存在于细胞膜、胞质溶胶和细胞器(诸如细胞核)中，并且负责介导多种细胞功能，包括代谢、细胞生长和分化、细胞信号传导、免疫应答调节和细胞死亡。丝氨酸激酶特异性地磷酸化靶蛋白中的丝氨酸或苏氨酸残基。类似地，酪氨酸激酶(包括酪氨酸受体激酶)磷酸化靶蛋白中的酪氨酸残基。酪氨酸激酶家族包括：TEC、SRC、ABL、JAK、CSK、FAK、SYK、FER、ACK和受体酪氨酸激酶亚家族，这些亚家族包括ERBB、FGFR、VEGFR、RET和EPH。受体酪氨酸激酶超家族的亚类I包括ERBB受体并且包括四个成员：ErbB1(也称为表皮生长因子受体(EGFR))、ErbB2、ErbB3和ErbB4。
激酶对与健康和疾病相关的关键生物过程发挥控制作用。此外，各种蛋白激酶的异常激活或过度表达与以良性和恶性增殖为特征的多种疾病和障碍以及由免疫***的不适当激活引起的疾病的机制有关。因此，针对所选择的激酶或激酶家族的抑制剂被认为可用于治疗癌症、血管疾病、自身免疫性疾病和炎性病症，包括但不限于：实体瘤、血液恶性肿瘤、血栓、关节炎、移植物抗宿主病、红斑狼疮、牛皮癣、结肠炎、回肠炎、多发性硬化、葡萄膜炎、冠状动脉血管病、***性硬化、动脉粥样硬化、哮喘、移植排斥、过敏反应、局部缺血、皮肌炎、天疱疮等。
TEC激酶是主要但非唯一地在造血来源的细胞中表达的非受体酪氨酸激酶家族。Tec家族包括TEC、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)、诱导型T细胞激酶(ITK)、静息淋巴细胞激酶(RLK/酪氨酸蛋白激酶TXK)和骨髓表达激酶(BMX/ETK)。
BTK在B细胞受体信号传导以及B细胞发育和激活的调节中很重要。人类中编码BTK的基因的突变导致X连锁无丙种球蛋白血症，其特征在于免疫功能降低，包括B细胞成熟受损、免疫球蛋白和外周B细胞水平降低和T细胞非依赖性免疫应答减弱。BTK被Src家族激酶激活并磷酸化PLCγ，从而导致对B细胞功能和存活产生影响。另外，BTK对于肥大细胞、巨噬细胞和中性粒细胞的细胞功能很重要，表明BTK抑制在治疗由这些和相关细胞介导的疾病(包括炎症、骨病和过敏性疾病)方面是有效的。BTK抑制对淋巴瘤细胞的存活也很重要，表明BTK的抑制可用于治疗淋巴瘤和其它癌症。因此，BTK和相关激酶的抑制剂作为抗炎剂和抗癌剂受到极大关注。BTK对于血小板功能和血栓形成也很重要，表明BTK选择性抑制剂也可用作抗血栓形成剂。此外，BTK是炎性体激活所需的，并且BTK的抑制可用于治疗炎性体相关障碍，包括：中风、痛风、2型糖尿病、肥胖诱导的胰岛素抵抗、动脉粥样硬化和Muckle-Wells综合征。此外，BTK在HIV感染的T细胞中表达，并且用BTK抑制剂治疗使感染的细胞对凋亡性死亡敏感并导致病毒产生减少。因此，BTK抑制剂被认为可用于治疗HIV-AIDS和其它病毒感染。
因此，仍然需要总体上调节蛋白激酶的化合物，以及调节特定蛋白激酶诸如BTK的化合物，以及用于治疗将受益于这种调节的疾病、障碍和病症的相关组合物和方法。
发明内容
在一个方面，提供了具有式(I)的结构的化合物：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其中：
为/>者/>
RB为-H或-Me；
RC为-CH＝CH2、-C≡CH或-C≡C-CH3；
RA为
其中
RA1为-H、-F、-Cl、-CH3或-CN；并且
RA2为-H或-F。
在一个实施方案中，提供了一种药物组合物，该药物组合物包含具有式(I)的结构的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
在一个实施方案中，提供了一种调节蛋白激酶的方法，该方法包括使蛋白激酶与有效量的具有式(I)的结构的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体、同位素或药物组合物接触。在一个实施方案中，蛋白激酶是BTK。
在一个实施方案中，提供了一种用于治疗BTK依赖性病症的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用有效量的具有式(I)的结构的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体、同位素或药物组合物。
在一个实施方案中，提供了具有式(I)的结构的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体、同位素或药物组合物在制造药物中的用途。
具体实施方式
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与要求保护的主题所属领域的技术人员通常理解的相同含义。应当理解，详细描述仅是示例性和说明性的，而不是对所要求保护的任何主题的限制。在本申请中，除非另外特别说明，否则单数的使用包括复数。必须注意的是，如在说明书中使用的，除非上下文另外清楚地指明，否则单数形式“一个”、“一种”和“该/所述”包括多个指代物。在本申请中，除非另有说明，否则“或”的使用是指“和/或”。此外，术语“包括”以及其它形式诸如“包含”、“含有”和“具有”的使用不是限制性的。
尽管可以在单个实施方案的上下文中描述本发明的各种特征，但是也可以单独地或以任何合适的组合来提供这些特征。相反地，尽管为了清楚起见，本发明可以在单独的实施方案的上下文中进行描述，但是本发明也可以在单个实施方案中实施。
说明书中对“一些实施方案”，“实施方案”，“一个实施方案”或“其它实施方案”的引用意味着结合这些实施方案描述的特定特征、结构或特性被包括在本发明的至少一些实施方案中，但不一定被包括在本发明的所有实施方案中。
如本文所用，范围和量可表示为“约”特定值或范围。约还包括确切的量。因此，“约100μL”意指“约100μL”以及“100μL”。在一些实施方案中，约意指在该值的5％以内。因此，“约100μL”意指95μL-105μL。一般来讲，术语“约”包括预期在实验误差内的量。
如本文所用，“烷基”意指直链或支链饱和烃基。“低级烷基”意指具有1至8个碳原子，在一些实施方案中1至6个碳原子，在一些实施方案中1至4个碳原子，以及在一些实施方案中1至2个碳原子的直链或支链烷基。直链低级烷基的示例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基和正辛基。支链低级烷基的示例包括但不限于异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、新戊基、异戊基和2,2-二甲基丙基。
“烯基”包括如上定义的直链、支链和环状烷基，不同的是在两个碳原子之间存在至少一个双键。因此，烯基基团具有2至约20个碳原子，并且通常具有2至12个碳原子，或在一些实施方案中具有2至8个碳原子。示例包括但不限于-CH＝CH2、-CH＝CH(CH3)、-CH＝C(CH3)2、-C(CH3)＝CH2、-C(CH3)＝CH(CH3)、-C(CH2CH3)＝CH2、-CH＝CHCH2CH3、-CH＝CH(CH2)2CH3、-CH＝CH(CH2)3CH3、-CH＝CH(CH2)4CH3、乙烯基、环己烯基、环戊烯基、环己二烯基、丁二烯基、戊二烯基和己二烯基等。
“炔基”包括直链和支链烷基，不同的是在两个碳原子之间存在至少一个三键。因此，炔基基团具有2至约20个碳原子，并且通常具有2至12个碳原子，或在一些实施方案中具有2至8个碳原子。示例包括但不限于-C≡CH、-C≡C(CH3)、-C≡C(CH2CH3)、-CH2C≡CH、-CH2C≡C(CH3)和-CH2C≡C(CH2CH3)等。
如本文所用，“亚烷基”意指二价烷基。直链低级亚烷基的示例包括但不限于亚甲基(即，-CH2-)、亚乙基(即，-CH2CH2-)、亚丙基(即，-CH2CH2CH2-)和亚丁基(即，-CH2CH2CH2CH2-)。如本文所用，“杂亚烷基”是其中一个或多个碳原子被杂原子替代的亚烷基，该杂原子诸如但不限于N、O、S或P。
“烷氧基”是指通过氧原子连接的如上定义的烷基(即，-O-烷基)。低级烷氧基的示例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、正丁氧基、异丙氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。
术语“碳环的”和“碳环”表示其中环原子是碳的环结构。碳环可以是单环或多环。碳环包括饱和环和不饱和环。碳环包括环烷基和芳基。在一些实施方案中，碳环具有3至8个环成员，而在其它实施方案中，环碳原子的数量为4、5、6或7。除非有相反的特别说明，否则碳环可以被多达N个取代基取代，其中N是碳环的大小，例如被烷基、氨基、羟基、氰基、羧基、硝基、硫基、烷氧基和卤素基团取代。
“环烷基”是形成环结构的烷基，其可以是取代的或未取代的。环烷基的示例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。在一些实施方案中，环烷基具有3个至8个环成员，然而在其它实施方案中，环碳原子的数量在3个至5个、3个至6个或3个至7个的范围内。环烷基进一步包含如但不限于降冰片基、金刚烷基、冰片基、莰稀基、异莰稀基和蒈稀基的多环环烷基和如但不限于十氢萘酯等的稠环。环烷基还包括被如上定义的直链或支链烷基取代的环。代表性的取代环烷基基团可以是单取代的或多于一次取代的，诸如但不限于2,2-、2,3-、2,4-、2,5-或2,6-二取代的环己基基团或单、二或三-取代的降冰片基或环庚基基团，它们可被例如氨基、羟基、氰基、羧基、硝基、硫基、烷氧基和卤素基团取代。
“芳基”是不含杂原子的环状芳族烃。因此，芳基包括但不限于苯基、甘菊环基、庚搭烯基、联苯基、引达省基、芴基、菲基、三亚苯基、芘基、并四苯基、基、亚联苯基、蒽基和萘基。在一些实施方案中，芳基在基团的环部分中含有6个至14个碳。术语“芳基(aryl)”和“芳基(aryl groups)”包含稠环，其中至少一个环但不一定所有环是芳香族的，如稠合的芳香族-脂肪族环***(例如，茚满基、四氢萘基等)。
“碳环烷基”是指一个或多个氢原子被碳环替代的如上定义的烷基。碳环烷基的示例包括但不限于苄基等。
如本文所用，“杂环”或“杂环基”基团包括含有3个或更多个环成员的芳族和非芳族环化合物(杂环)，其中一个或多个为杂原子，诸如但不限于N、O、S或P。如本文所定义的杂环基团可为杂芳基基团或包含至少一个环杂原子的部分或完全饱和的环状基团。在一些实施方案中，杂环基团包括3至20个环成员，而其它这样的基团具有3至15个环成员。至少一个环含有杂原子，但多环体系中的每个环不需要含有杂原子。例如，二氧戊环基环和苯并二氧戊环基环体系(亚甲基二氧苯基环体系)均是本文含义内的杂环基团。被指定为C2杂环的杂环基团可以是具有两个碳原子和三个杂原子的5元环、具有两个碳原子和四个杂原子的6元环等。同样，C4杂环可以是具有一个杂原子的5元环、具有两个杂原子的6元环等。碳原子数加上杂原子数的总和等于环原子的总数。饱和杂环是指不含不饱和碳原子的杂环。
“杂芳基”基团为含有5个或更多个环成员的芳族环化合物，其中一个或多个环成员为杂原子，诸如但不限于N、O和S。被指定为C2杂芳基的杂芳基基团可为具有两个碳原子和三个杂原子的5元环、具有两个碳原子和四个杂原子的6元环等。同样，C4杂芳基可以是具有一个杂原子的5元环、具有两个杂原子的6元环等。碳原子数加上杂原子数的总和等于环原子的总数。杂芳基包括但不限于诸如吡咯基、吡唑基、***基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、吡啶基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、氮杂吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、氮杂苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、咪唑并吡啶基、异噁唑并吡啶基、噻萘基、嘌呤基、黄嘌呤基、腺嘌呤基、鸟嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、喹喔啉基和喹唑啉基的基团。术语“杂芳基”包括稠环化合物，诸如其中至少一个环但不一定所有环是芳族的，包括四氢喹啉基、四氢异喹啉基、吲哚基和2,3-二氢吲哚基。
“杂环烷基”是指一个或多个氢原子被杂环替代的如上定义的烷基。杂环烷基的示例包括但不限于吗啉代乙基等。
“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
“卤代烷基”是指一个或多个氢原子被卤素替代的如上定义的烷基。低级卤代烷基的示例包括但不限于-CF3、-CH2CF3等。
“卤代烷氧基”是指一个或多个氢原子被卤素替代的如上定义的烷氧基。低级卤代烷氧基的示例包括但不限于-OCF3、-OCH2CF3等。
“羟基烷基”是指一个或多个氢原子被-OH替代的如上定义的烷基。低级羟烷基的示例包括但不限于-CH2OH、-CH2CH2OH等。
如本文所用，术语“任选取代的”是指具有0、1或更多个取代基诸如0-25、0-20、0-10或0-5个取代基的基团(例如，烷基、碳环或杂环)。取代基包括但不限于-ORa、-NRaRb、-S(O)2Ra或-S(O)2ORa、卤素、氰基、烷基、卤代烷基、烷氧基、碳环、杂环、碳环烷基或杂环烷基，其中每个Ra和Rb独立地为H、烷基、卤代烷基、碳环或杂环，或者Ra和Rb与它们所连接的原子一起形成3-8元碳环或杂环。
“异构体”在本文中用于涵盖结构的所有手性形式、非对映异构体形式或外消旋形式，除非明确指出特定立体化学或异构形式。此类化合物可以在任何或所有不对称原子处以任何富集程度富集或解析光学异构体，如由图式可显而易见。外消旋混合物和非对映异构体混合物以及单独的光学异构体均可以被合成为基本上不含其对映异构体或非对映异构体配偶体，并且这些均在本公开的某些实施方案的范围内。由手性中心的存在产生的异构体包括一对称为“对映异构体”的不可重叠的异构体。纯化合物的单种对映异构体是旋光性的(即，它们可以旋转平面偏振光的平面并且指定为R或S)。
“分离的光学异构体”是指已经从相同式的相应光学异构体基本上纯化的化合物。例如，分离的异构体可为至少约80％、至少80％或至少85％纯的。在其它实施方案中，分离的异构体为按重量计至少90％纯的或至少98％纯的、或至少99％纯的。
“基本上对映体或非对映体”纯意指一种对映体相对于另一种对映体或非对映体的对映体或非对映体富集水平为至少约80％，并且更具体地超过80％、85％、90％、95％、98％、99％、99.5％或99.9％。
术语“外消旋体”和“外消旋混合物”是指两种对映异构体的等量混合物。外消旋体被标记为“(±)”，因为它不是旋光性的(即，不会沿任一方向旋转平面偏振光，因为它的组成对映异构体彼此抵消)。
“水合物”是与水分子结合存在的化合物。结合可以包含化学计量量的水，如一水合物或二水合物，或者可以包含随机量的水。如本文所用的术语“水合物”是指固体形式；换句话说，水溶液中的化合物尽管可以是水合的，但不是如本文所用的术语的水合物。
“溶剂化物”类似于水合物，不同之处在于存在除水之外的溶剂。例如，甲醇或乙醇可以形成“醇化物”，其同样可以是化学计量的或非化学计量的。如本文所用的术语“溶剂化物”是指固体形式；换句话说，溶剂溶液中的化合物尽管可以是溶剂化的，但不是如本文所用的术语的溶剂化物。
“同位素”是指质子数相同但中子数不同的原子，并且式(I)的化合物的同位素包括其中一个或多个原子被该原子的同位素替代的任何这样的化合物。例如，碳12是最常见的碳形式，具有六个质子和六个中子，而碳13具有六个质子和七个中子，并且碳14具有六个质子和八个中子。氢具有两种稳定同位素，氘(一个质子和一个中子)和氚(一个质子和两个中子)。虽然氟具有几种同位素，但氟19的寿命最长。因此，具有式(I)的结构的化合物的同位素包含但不限于以下式(I)的化合物：其中一个或多个碳12原子被碳13和/或碳14原子置换，其中一个或多个氢原子被氘和/或氚置换，和/或其中一个或多个氟原子被氟19置换。
“盐”通常是指与抗衡离子结合的呈离子形式的有机化合物，如羧酸或胺。例如，在阴离子形式的酸与阳离子之间形成的盐被称为“酸加成盐”。相反地，在阳离子形式的碱与阴离子之间形成的盐被称为“碱加成盐”。
术语“药学上可接受的”是指已经批准用于人类消费并且通常是无毒的药剂。例如，术语“药学上可接受的盐”是指无毒的无机酸或有机酸和/或碱加成盐(参见例如Lit等人，Salt Selection for Basic Drugs,Int.J.Pharm.,33,201-217,1986)(以引用方式并入本文)。
本公开的化合物的药学上可接受的碱加成盐包括例如金属盐，包括碱金属盐、碱土金属盐和过渡金属盐，例如钙盐、镁盐、钾盐、钠盐和锌盐。药学上可接受的碱加成盐还包括由碱性胺例如N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因制备的有机盐。
药学上可接受的酸加成盐可以由无机酸或有机酸制备。无机酸的示例包含盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、碳酸、硫酸和磷酸。合适的有机酸可选自脂族、脂环族、芳族、芳族脂族、杂环、羧酸和磺酸类有机酸，其示例包括甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、葡糖醛酸、马来酸、富马酸、丙酮酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯甲酸、邻氨基苯甲酸、4-羟基苯甲酸、苯乙酸、扁桃酸、马尿酸、丙二酸、草酸、扑酸(双羟萘酸)、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、泛酸、三氟甲磺酸、2-羟基乙磺酸、对甲苯磺酸、磺胺酸、环己基氨基磺酸、硬脂酸、海藻酸、β羟基丁酸、水杨酸、半乳糖二酸和半乳糖醛酸。
尽管药学上不可接受的盐通常不能用作药物，但此类盐可以用作例如本文所述的化合物的合成中的中间体，例如在其通过重结晶的纯化中。
在某些实施方案中，本公开提供了一种药物组合物，该药物组合物包含如本文所述的化合物或其药学上可接受的异构体、外消旋体、水合物、溶剂化物、同位素或盐，以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。例如，活性化合物通常与载体混合或由载体稀释或封装在载体中，所述载体可以呈安瓿、胶囊、小药囊、纸或其它容器的形式。当活性化合物与载体混合时，或当载体用作稀释剂时，所述载体可以是充当活性化合物的媒剂、赋形剂或介质的固体、半固体或液体材料。活性化合物可以吸附在粒状固体载体上，例如含在小药囊中。合适载体的一些示例是水、盐溶液、醇、聚乙二醇、聚羟基乙氧基化蓖麻油、花生油、橄榄油、明胶、乳糖、白土、蔗糖、糊精、碳酸镁、糖、环糊精、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、***胶、硬脂酸或纤维素的低级烷基醚、硅酸、脂肪酸、脂肪酸胺、脂肪酸单甘油酯和甘油二酯、季戊四醇脂肪酸酯、聚氧乙烯、羟甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。类似地，载体或稀释剂可以包含如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯等本领域已知的任何缓释材料，其单独或与蜡混合。
如本文所用，术语“药物组合物”是指含有与药学上可接受的载体一起配制的一种或多种本文所述的化合物或其药学上可接受的异构体、外消旋体、水合物、溶剂化物、同系物或盐的组合物，其还可包括其它添加剂，并且在政府管理机构批准下作为用于治疗哺乳动物疾病的治疗方案的一部分而制造或销售。药物组合物可以配制成例如以单位剂型(例如，片剂、胶囊、囊片、软胶囊或糖浆)口服施用；局部施用(例如，作为霜膏、凝胶、洗剂或软膏)；静脉内施用(例如，作为不含颗粒栓子的无菌溶液和在适于静脉内使用的溶剂体系中)；或以本文所述的任何其它制剂形式。用于选择和制备合适制剂的常规程序和成分描述于例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第21版，Gennaro编辑，Lippencott Williams&Wilkins(2005)和出版于2013年的The United StatesPharmacopeia:The National Formulary(USP 36NF31)中。
在其它实施方案中，提供了制备具有本文所述的化合物的组合物的方法，这些方法包括将本公开的化合物与药学上可接受的载体或稀释剂一起配制。在一些实施方案中，药学上可接受的载体或稀释剂适于口服施用。在一些此类实施方案中，方法可以进一步包含将组合物调配成片剂或胶囊的步骤。在其它实施方案中，药学上可接受的载体或稀释剂适于肠胃外施用。在一些此类实施方案中，方法进一步包含冻干组合物以形成冻干制剂的步骤。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指除所公开的化合物或其药学上可接受的异构体、外消旋体、水合物、溶剂化物、同系物或盐之外(例如，能够悬浮或溶解活性化合物的载体)并且在患者中具有无毒且非炎性特性的任何成分。赋形剂可以包括例如：抗粘剂、抗氧化剂、粘合剂、包衣、压缩助剂、崩解剂、染料(着色剂)、润肤剂、乳化剂、填充剂(稀释剂)、成膜剂或包衣、调味剂、芳香剂、助流剂(流动增强剂)、润滑剂、防腐剂、印刷油墨、吸附剂、悬浮剂或分散剂、甜味剂或水合水。示例性赋形剂包括但不限于：丁基化羟基甲苯(BHT)、碳酸钙、磷酸钙(二元)、硬脂酸钙、交联羧甲基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、柠檬酸、交聚维酮、半胱氨酸、乙基纤维素、明胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乳糖、硬脂酸镁、麦芽糖醇、甘露醇、甲硫氨酸、甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、微晶纤维素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚维酮、预胶化淀粉、对羟基苯甲酸丙酯、棕榈酸视黄酯、虫胶、二氧化硅、羧甲基纤维素钠、柠檬酸钠、羧基乙酸淀粉钠、山梨糖醇、淀粉(玉米)、硬脂酸、硬脂酸、蔗糖、滑石粉、二氧化钛、维生素A、维生素E、维生素C和木糖醇。
调配物可以与不会与活性化合物发生有害反应的辅助试剂混合。此类添加剂可以包含润湿剂、乳化剂和悬浮剂、影响渗透压的盐、缓冲剂和/或着色物质、防腐剂、甜味剂或调味剂。如果期望的话，也可以对组合物进行灭菌。
施用途径可以是将本公开的活性化合物有效转运到适当的或期望的作用部位的任何途径，诸如口服、鼻、肺、颊、皮下、皮内、透皮或肠胃外，例如直肠、贮库、皮下、静脉内、尿道内、肌内、鼻内、眼用溶液或软膏，优选口服途径。
剂型可以每天施用一次，或每天施用多于一次，如每天两次或三次。另选地，如果处方医师认为合适的话，则剂型的施用频率可以低于每天，诸如每隔一天或每周。给药方案包括例如剂量滴定到对于待治疗的适应症必需或有用的程度，从而使患者的身体适应治疗和/或最小化或避免与治疗相关的不希望的副作用。其它剂型包含延迟或控释形式。合适的剂量方案和/或形式包括例如在Physicians’Desk Reference的最新版中阐述的那些，其以引用方式并入本文。
如本文所用，术语“施用”是指通过任何可接受的方式或途径(包括(例如)通过口服、肠胃外(例如静脉内)或局部施用)向受试者提供化合物、包含该化合物的药物组合物。
如本文所用，术语“治疗”是指改善疾病或病理状况的体征或症状的干预。如本文所用，关于疾病、病理状况或症状的术语“治疗”也是指治疗的任何可观察到的有益效果。有益效果可以通过例如以下来证明：易感受试者中疾病的临床症状的延迟发作、疾病的一些或所有临床症状的严重程度降低、疾病的进展减慢、疾病复发的次数降低、受试者的整体健康或福祉的改善或者通过本领域众所周知的对特定疾病具有特异性的其它参数来证明。预防性治疗是对未表现出疾病体征或仅表现出早期体征的受试者施用的治疗，目的是降低发生病理的风险。治疗性治疗是在疾病的体征和症状出现后给予受试者的治疗。
如本文所用，术语“受试者”是指动物(例如，哺乳动物，诸如人)。待根据本文所述的方法治疗的受试者可以是已被诊断患有涉及脱髓鞘、髓鞘形成不足或髓磷脂鞘发育不全的神经退化性疾病的受试者，例如被诊断患有多发性硬化或脑瘫的受试者，或处于发展该病症的风险中的受试者。诊断可以通过本领域已知的任何方法或技术进行。本领域技术人员将理解，根据本公开内容要治疗的受试者可以已经接受标准测试，或者可以在未经检查的情况下被鉴定为由于存在一种或多种与疾病或病状相关联的风险因素而有风险。
如本文所用，术语“有效量”是指足以在用药剂治疗的受试者中实现期望作用的指定药剂的量。理想地，药剂的有效量是足以抑制或治疗疾病而不在受试者中引起显著毒性的量。药剂的有效量将取决于被治疗的受试者、病痛的严重程度和药物组合物的施用方式。根据本公开，本领域技术人员将理解确定足以在受试者中实现期望效果的所公开的化合物的有效量的方法。
如本文所用，术语“调节”是指提高或降低一种或多种蛋白激酶的活性的能力。因此，本发明的化合物可用于通过使蛋白激酶与本文所述的任何一种或多种化合物或组合物接触来调节蛋白激酶的方法中。在一些实施方案中，化合物可以充当一种或多种蛋白激酶的抑制剂。在一些实施方案中，化合物可用于刺激一种或多种蛋白激酶的活性。在另外的实施方案中，本发明的化合物可用于通过施用调节量的如本文所述的化合物来调节需要调节受体的个体中的蛋白激酶的活性。
如本文所用，术语“BTK介导的”或“BTK调节的”或“BTK依赖性”疾病或障碍意指已知BTK或其突变体在其中起作用的任何疾病或其它有害病症。因此，本申请的另一个实施方案涉及治疗已知BTK或其突变体在其中起作用的一种或多种疾病或减轻其严重程度。具体地，本申请涉及一种治疗选自增生性障碍或自身免疫性障碍的疾病或病症或减轻其严重程度的方法，其中所述方法包括向对其有需要的患者施用式(I)的化合物或根据本申请的组合物。
化合物
本文公开了具有式(I)的结构的化合物：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其中：
为/>或者/>
RB为-H或-Me；
RC为-CH＝CH2、-C≡CH或-C≡C-CH3；
RA为
其中
RA1为-H、-F、-Cl、-CH3或-CN；并且
RA2为-H或-F。
在一些实施方案中，化合物具有式(IA)的结构：
在其它实施方案中，化合物具有式I-A-(S)或I-A-(R)的结构：
在一些实施方案中，化合物具有式(IB)的结构：
在其它实施方案中，化合物具有式I-B-(S)或I-B-(R)的结构：
在一些实施方案中，化合物具有式(IC)的结构：
在其它实施方案中，化合物具有式I-C-(S)或I-C-(R)的结构：
在其它实施方案中，化合物具有式1-C-(1R,3S)、1-C-(1S,3R)、1-C-(1R,3R)或1-C-(1S,3S)的结构：
在一些实施方案中，化合物具有式(ID)的结构：
在其它实施方案中，化合物具有式1-D-(1R,3S)、1-D-(1S,3R)、1-D-(1R,3R)或1-D-(1S,3S)的结构：
在一些实施方案中，RB为H。在其它实施方案中，RB为Me。
在一些实施方案中，RC为-CH＝CH2。在其它实施方案中，RC为-C≡C-CH3。在其它实施方案中，RC为-C≡CH。在其它实施方案中，RC为-CH＝CH2或-C≡C-CH3。
在一些实施方案中，RA1为-F。在其它实施方案中，RA1为-Cl。在其它实施方案中，RA1为-CH3。在其它实施方案中，RA1为-CN。在其它实施方案中，RA1为-F或-Cl。在其它实施方案中，RA1为-F、-Cl或-CN。在其它实施方案中，RA1为H。
在一些实施方案中，RA2为-H。在一些实施方案中，RA2为-F。
在一些实施方案中，RA1为-Cl或-CN；并且RC为-C≡C-CH3。在一些实施方案中，RA1为-Cl；RA2为-H并且RC为-C≡C-CH3。在一些实施方案中，RA1为-CN，RA2为-F并且RC为-C≡C-CH3。
在一些实施方案中，化合物是具有式(I)的结构的化合物的盐。在其它实施方案中，盐是药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物是具有式(I)的结构的化合物的溶剂化物。在一些实施方案中，化合物是具有式(I)的结构的化合物的水合物。在一些实施方案中，化合物是具有式(I)的结构的化合物的异构体。在一些实施方案中，化合物是具有式(I)的结构的化合物的互变异构体。在一些实施方案中，化合物是具有式(I)的结构的化合物的同位素。
在一些实施方案中，具有式(I)的结构的化合物作为异构体的混合物存在。在一些实施方案中，具有式(I)的结构的化合物作为异构体的50/50混合物存在。在一些实施方案中，具有式(I)的结构的化合物作为异构体的混合物存在，其中一种异构体以比另一种异构体更大的量存在。在一些实施方案中，具有式(I)的结构的化合物作为外消旋混合物存在。
在一些实施方案中，具有式(I)的结构的化合物作为单一异构体存在。在一些实施方案中，异构体是顺式异构体。在一些实施方案中，异构体是反式异构体。
在一些实施方案中，具有式(I)的结构的化合物作为单一对映体存在。在一些实施方案中，异构体是对映体。在一些实施方案中，异构体是(1R,3S)异构体。在一些实施方案中，异构体是(1R,3R)异构体。在一些实施方案中，异构体是(1S,3S)异构体。在一些实施方案中，异构体是(1S,3R)异构体。
本文还提供了药物组合物，该药物组合物包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
本文还提供了一种抑制蛋白激酶的方法，该方法包括使蛋白激酶与有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体、同位素或药物组合物接触。在一些实施方案中，蛋白激酶是BTK。
本文还提供了用于治疗BTK依赖性病症的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体、同位素或药物组合物。在一些实施方案中，BTK依赖性病症是癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病或血栓栓塞性疾病。在一些实施方案中，自身免疫性疾病是多发性硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣、干燥综合征或***性红斑狼疮。在一些实施方案中，炎性疾病是荨麻疹。
本文还提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体、同位素或药物组合物在制造药物中的用途。在一些实施方案中，药物用于治疗癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病或血栓栓塞性疾病。在一些实施方案中，自身免疫性疾病是多发性硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣、干燥综合征或***性红斑狼疮。在一些实施方案中，炎性疾病是荨麻疹。
在一个实施方案中，提供了式(IA)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其具有表1的化合物的结构。
表1：式(IA)的化合物
/>
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在另一个实施方案中，提供了式(IB)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其具有表2的化合物的结构。
表2：式(IB)的化合物
/>
在另一个实施方案中，提供了式(IC)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其具有表3的化合物的结构。
表3：式(IC)的化合物
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/>
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在另一个实施方案中，提供了式(ID)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其具有表4的化合物的结构。
表4：式(ID)的化合物
在另外的实施方案中是式(I)的化合物的药学上可接受的盐。在其它实施方案中是式(I)的化合物的溶剂化物。在其它实施方案中是式(I)的化合物的水合物。在其它实施方案中是式(I)的化合物的异构体。在其它实施方案中是式(I)的化合物的互变异构体。在其它实施方案中是式(I)的化合物的外消旋体。在其它实施方案中是式(I)的化合物的同位素形式。
在另外的实施方案中，是包含式(I)的化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
疾病
本文描述了一种抑制蛋白激酶的方法，该方法包括使蛋白激酶与有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体、同位素或药物组合物接触。在一些实施方案中，蛋白激酶是BTK。
本文还描述了用于治疗BTK依赖性病症的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体、同位素或药物组合物。
在一些实施方案中，BTK依赖性病症是癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病或血栓栓塞性疾病。在一些实施方案中，自身免疫性疾病是多发性硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣、干燥综合征或***性红斑狼疮。在一些实施方案中，炎性疾病是荨麻疹。在一些实施方案中，BTK依赖性病症是癌症。在一些实施方案中，BTK依赖性病症是自身免疫性疾病。在一些实施方案中，BTK依赖性病症是炎性疾病。在一些实施方案中，BTK依赖性病症是血栓栓塞性疾病。在一些实施方案中，BTK依赖性病症是多发性硬化。在一些实施方案中，BTK依赖性病症是类风湿性关节炎。在一些实施方案中，BTK依赖性病症是牛皮癣。在一些实施方案中，BTK依赖性病症是干燥综合征。在一些实施方案中，BTK依赖性病症是***性红斑狼疮。在一些实施方案中，BTK依赖性病症是荨麻疹。
在一些实施方案中是式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体、同位素或药物组合物在制造药物中的用途。在一些实施方案中，药物用于治疗癌症。在一些实施方案中，药物用于治疗自身免疫性疾病。在一些实施方案中，药物用于治疗炎性疾病。在一些实施方案中，药物用于治疗血栓栓塞性疾病。在一些实施方案中，药物用于治疗多发性硬化。在一些实施方案中，药物用于治疗类风湿性关节炎。在一些实施方案中，药物用于治疗牛皮癣。在一些实施方案中，药物用于治疗干燥综合征。在一些实施方案中，药物用于治疗***性红斑狼疮。在一些实施方案中，药物用于治疗荨麻疹。
因此，抑制BTK活性可用于治疗过敏性障碍和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病，包括但不限于：SLE、类风湿性关节炎、多发性血管炎、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、重症肌无力、过敏性鼻炎、多发性硬化(MS)、移植排斥、I型糖尿病、膜性肾炎、炎性肠病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性甲状腺炎、寒热凝集素疾病、埃文斯综合征、溶血性尿毒综合征/血栓性血小板减少性紫癜、结节病、干燥综合征、外周神经病(例如格林-巴利综合征)、寻常天疱疮和哮喘。
此外，已报道BTK在控制某些B细胞癌症中的B细胞存活方面起作用。例如，BTK已被证明对于BCR-Abl阳性B细胞急性成淋巴细胞性白血病细胞的存活很重要。因此，抑制BTK活性可用于治疗B细胞淋巴瘤和白血病。
本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物或互变异构体可以任选地与皮质类固醇、非皮质类固醇、免疫抑制剂和/或抗炎剂组合用于治疗上文列出的疾病。在一个实施方案中，免疫抑制剂选自干扰素α、干扰素γ、环磷酰胺、他克莫司、麦考酚酸吗乙酯、甲氨蝶呤、氨苯砜、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、抗CD20剂(诸如利妥昔单抗、奥法木单抗、奥妥珠单抗或维妥珠单抗或它们的生物类似物形式)、抗TNFα剂(诸如依那西普、英夫利昔单抗、戈利木单抗、阿达木单抗或赛妥珠单抗佩戈或它们的生物类似物形式)、针对配体或其受体的抗IL6剂(诸如托珠单抗、沙利姆单抗、奥洛珠单抗、艾司利尤单抗或司妥昔单抗)、针对配体或其受体的抗IL17剂(诸如苏金单抗、乌司奴单抗、布洛鲁单抗或依奇珠单抗)、针对配体或其受体的抗IL1剂(诸如列洛西普、康纳单抗或阿那白滞素)、针对配体或其受体的抗IL2剂(诸如巴利昔单抗或达珠单抗)、抗CD2剂诸如阿法西普、抗cd3剂诸如莫罗单抗-cd3、抗CD80/86剂诸如阿巴西普或贝拉西普、抗神经鞘氨醇-1-磷酸受体剂诸如芬戈莫德、抗C5剂诸如依库珠单抗、抗整联蛋白α4剂诸如那他珠单抗、抗α4β7剂诸如维多珠单抗、抗mTOR剂诸如西罗莫司或依维莫司、抗钙调神经磷酸酶剂诸如他克莫司，以及抗BAFF/BlyS剂(诸如贝利木单抗、VAY736或布利斯比莫德)、来氟米特和特立氟胺。优选地，免疫抑制剂是利妥昔单抗、奥法木单抗、奥妥珠单抗或维妥珠单抗或它们的生物类似物形式。
化合物合成
具有式(I)的结构的化合物可使用本领域技术人员已知的标准合成技术来合成。例如，本公开的化合物可使用方案1-17中阐述的一般合成程序来合成。
具有式(IA)和(1B)的结构的化合物可根据一般方案1合成，通过首先使用强碱诸如LDA的THF溶液和N-苯基-双(三氟甲磺酰亚胺)将酮转化为烯醇三氟甲磺酸酯(ii)，从3-氨基-保护的环己-1-酮(i)开始。通过使化合物(ii)与双(频哪醇合)二硼和钯催化剂诸如(1,1'-双(二苯基膦)二茂铁)二氯化钯(II)反应，可实现异构的乙烯基硼酸酯(iii)的转化。中间体(iv)可使用钯催化的芳基卤与乙烯基硼酸酯(iii)之间的交叉偶联来形成。产物(iv)可脱保护得到胺盐(v)，可使用形成酰胺键的标准程序诸如HATU和叔胺碱将其酰化。另选地，可将中间体(iv)的芳环进一步官能化，得到中间体(vii)，可使用上述方案将其制作成最终目标物(ix)。在一些情况下，使用手性色谱法纯化最终目标物，得到期望化合物的单一异构体。
方案1：制备式(I)的化合物的一般合成
更详细的程序概述如下。
I受保护的3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-胺
使胺保护的3-氨基环己-1-酮与1,1,1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲基磺酰基)甲磺酰胺反应，得到5-氨基保护的环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯，然后通过与4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷反应，将其转化为氨基保护的3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-胺，如方案2中所示。
方案2：受保护的3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-胺
II式(IA)的化合物，其中RA1为H或Cl；RA2为H或F并且RB为H(路线1)
4-溴-5-氟-2-硝基苯甲酸(RA2为H)或4-溴-2,3-二氟-6-硝基苯甲酸(RA2为F)通过与异丙烯基溴化镁反应转化为吲哚。将酸基团酰胺化，然后将4-溴吲哚与3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-胺偶联。RA1任选地通过与氯化剂诸如NCS反应从H转化为Cl。根据方案3，适当时去除任何胺保护基，并使胺与RC-COOH反应，得到最终的式(IA)的化合物。
方案3：式(IA)的化合物，路线1
III式(IA)的化合物，其中RA1为H或Cl；RA2为H或F并且RB为H(路线2)
在另选的合成中，将1,4-二溴-2-氟苯(RA2为H)或1,4-二溴-2,3-二氟苯(RA2为F)在6位胺化并在5位碘化。与丙炔的反应将碘转化为丙炔基衍生物，然后将其环化得到吲哚。将7-溴转化为羧基，然后转化为酰胺。与路线1一样，然后将4-溴吲哚与3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-胺偶联。根据方案4，RA1任选地通过与合适的氯化剂诸如NCS反应而从H转化为Cl，适当时去除任何保护基团，并使胺与RC-COOH反应得到最终的式(IA)的化合物。
方案4：式(IA)的化合物，路线3
IV式I-A-(S)或I-B-(S)的化合物，其中RA1为Me；RA2为H或F并且RB为H
胺保护的(S)-3-氨基环己-1-酮与1,1,1-三氟-N-苯-N-(三氟甲基磺酰基)甲磺酰胺在双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(NAHMDS)的存在下反应，得到3-胺保护和5-胺保护的环己烯基三氟甲磺酸酯异构体的混合物。将它们活化并与4-溴-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲腈(RA2为H)或4-溴-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲腈(RA2为F)偶联。然后将腈基转化为酰胺，并且根据方案5，在需要时去除任何保护基团后，使胺与RC-COOH反应得到最终化合物的混合物。手性色谱法提供单独的异构体。
方案5：式I-A-(S)或I-B-(S)的化合物
V式I-A-(R)或I-B-(R)的化合物，其中RA1为Me；RA2为H或F并且RB为H
式I-A-(R)或I-B-(R)的化合物以类似于式I-A-(S)或I-B-(S)的化合物的方式制备，如上文和方案5中所述，从胺保护的(R)-3-氨基环己-1-酮代替胺保护的(S)-3-氨基环己-1-酮开始。
方案6：式I-A-(R)或I-B-(R)的化合物
VI式I-A-(S)或I-B-(S)的化合物，其中RA1为Me；RA2为H或F并且RB为Me
如上所述，将活化的(S)-胺保护的环己烯与受保护的4-溴-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-腈(RA2为H)或4-溴-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-腈(RA2为F)偶联。甲基化后，将吲哚脱保护并将腈基团转化为酰胺。根据方案7，在需要时去除任何保护基团后，使胺与RC-COOH反应得到最终化合物的混合物。手性色谱法提供单独的异构体。
方案7：式I-A-(S)或I-B-(S)的化合物，其中RB为Me
VII式I-A-(R)或I-B-(R)的化合物，其中RA1为Me；RA2为H或F并且RB为Me
式I-A-(R)或I-B-(R)的化合物，其中RB为Me，以类似于式I-A-(S)或I-B-(S)的化合物的方式制备，其中RB为Me，如上文和方案7中所述，从(R)异构体代替(S)开始。
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方案8：式I-A-(R)或I-B-(R)的化合物，其中RB为Me
VIII式I-C的化合物
式I-C的化合物根据下文方案9制备。将3-氨基保护的环己-1-酮用苯基三氟甲磺酰亚胺处理，得到3-OTf环己烯-1-胺，然后将其活化并与RA溴化物偶联。将环己烯还原成环己烷，去除胺保护基团并通过用RC酸处理引入RC。
方案9：式(IC)的化合物
根据方案10，RA1基团(例如卤素、CN)的引入可通过用合适的剂处理胺保护的3-RA-环己-1-胺来实现，得到3-取代的吲哚。
方案10：RA1取代基的引入
在方案11所示的另选路线中，活化的氨基保护的环己烯可与RA溴化物偶联，随后将其还原成环己烷、胺脱保护和RC酰胺形成。
方案11：式(IC)的化合物，另选合成路线
根据方案12，式I-C的化合物可通过典型的分离技术，诸如超临界流体色谱法(SFC)、手性HPLC等分离成单独的异构体。
方案12：式(IC)化合物：异构体的分离
IX式I-D的化合物
式I-D的化合物根据下文方案13制备。将3-氨基保护的环戊-1-酮用苯基三氟甲磺酰亚胺处理，得到3-OTf环戊烯-1-胺，然后将其活化并与RA溴化物偶联。将环己烯还原成环己烷，去除胺保护基团并通过用RC酸处理引入RC。
方案13：式(ID)的化合物
根据方案14，RA1基团(例如卤素、CN)的引入可通过用合适的剂处理胺保护的3-RA-环己-1-胺来实现，得到3-取代的吲哚。
方案14：RA1取代基的引入
在方案15所示的另选路线中，活化的氨基保护的环戊烯可与RA溴化物偶联，随后将其还原成环戊烷、胺脱保护和RC酰胺形成。
方案15：式(ID)的化合物，另选合成路线
吲哚环上7-甲酰胺官能团的引入可通过用例如Parkins催化剂([PtH{(PMe2O)2H}(PMe2OH)])处理转化腈基团来实现。RB从H到甲基的转化可通过用甲基化剂诸如甲基碘处理来实现，参见方案16。
方案16：甲酰胺的形成和RB＝Me的引入
根据方案17，式I-D的化合物可通过典型的分离技术，诸如超临界流体色谱法(SFC)、手性HPLC等分离成单独的异构体。
方案17：式(IC)化合物：异构体的分离
本文所述的反应、过程和合成方法不限于以下实验部分中描述的特定条件，而是旨在作为对本领域的合适技术人员的指导。例如，反应可以在任何合适的溶剂或其它试剂中进行以进行必要的转化。通常，合适的溶剂是质子或非质子溶剂，其在反应进行的温度(即，可以在冷冻至沸腾温度范围内的温度)处基本上不与反应物、中间体或产物反应。给定的反应可以在一种溶剂或多于一种溶剂的混合物中进行。取决于具体的反应，可以采用用于反应后具体后处理的合适的溶剂。
除非另有说明，否则采用质谱(MS)、液相色谱-质谱(LCMS)、NMR、HPLC、蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药理学的常规方法。使用标准有机化学技术，诸如在例如March’s Advanced Organic Chemistry，第7版，John Wiley and Sons,Inc(2013)中所述的那些，来制备化合物。可以采用本文所描述的合成转化的替代反应条件，诸如改变溶剂、反应温度、反应时间以及不同的化学试剂和其它反应条件。必要时，可能需要使用适当的保护基团。这种基团的引入和裂解可使用Peter G.M.Wuts和Theodora W.Green，ProtectingGroups in Organic Synthesis，第4版，Wiley-Interscience.(2006)中描述的标准方法进行。所有的起始物质和试剂均是可商购获得的或容易制备的。
实施例
提供以下实施例仅用于说明目的，而不是限制本文提供的权利要求的范围。虽然本文已经示出并描述了本发明的优选实施方案，但是对于本领域技术人员来说显而易见的是，这些实施方案仅作为示例提供。在不偏离本发明的情况下，本领域技术人员现在将想到许多变化、改变和替代。应理解的是，本文所述的本发明实施方案的各种替代方案可用于实施本发明。这意味着以下权利要求书限定本发明的范围并且因此涵盖这些权利要求及其等效物范围内的方法和结构。
实施例1
合成
外消旋4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7- 甲酰胺(化合物1-A-(rac))
(S)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物1-A-(S))
和
(R)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物1-A-(R))
步骤1：4-溴-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酸
向配备有机械搅拌器、温度计、附加漏斗和鼓泡器的5L四颈烧瓶中装入THF(1.1L)，随后装入4-溴-5-氟-2-硝基苯甲酸(100.0g，0.379摩尔，1.0当量)。将所得溶液用N2冲洗5min，并在EtOH-干冰浴中冷却至低于-70℃。滴加异丙烯基溴化镁溶液(0.5M的THF溶液，3.03L，1.52摩尔，4.0当量)，同时确保在添加期间内部温度保持低于-65℃。此后，将反应混合物在-70℃处再搅拌2h。将反应通过添加饱和NH4Cl水溶液(200mL)、随后添加柠檬酸水溶液(1L，20重量％)淬灭。移开冷却浴并且将反应升温至高于0℃。添加EtOAc(1L)并分离各层。将水层用EtOAc(200mL×2)萃取并将合并的有机萃取物减压浓缩。将所得黄色残余物重新溶解在EtOAc(1.5L)中，用饱和NH4Cl水溶液(100mL)和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗产物用DCM(300mL)在室温(20℃)处研磨16h。将产物通过真空过滤收集，用冷DCM(20mL)漂洗，并在IR灯下干燥。获得4-溴-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酸，为褐色固体(38.0g，0.140摩尔，37％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.36(brs,1H),11.27(s,1H),7.48(d,J＝9.8Hz,1H),6.26(dd,J＝2.3,1.1Hz,1H),2.62–2.15(m,3H)。
步骤2：4-溴-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酸酰胺
将4-溴-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酸(87.5g，0.322摩尔，1.0当量)在DMF(440mL)中的溶液在冰水浴中冷却至0℃-5℃。一次性添加NH4Cl(34.4g，0.644摩尔，2.0当量)，随后添加iPr2NEt(124.8g，0.966摩尔，3.0当量)。在10min内向所得溶液中分批添加固体HATU(146.8g，0.386摩尔，1.2当量)。该反应是温和放热的，并且在添加期间内部温度保持低于15℃。此后，移开冷却浴并将反应在室温处再搅拌2h。LC-MS分析表明反应完成。将褐色反应溶液转移到5L烧瓶中并缓慢添加冰冷的水(约3L)。将所得棕褐色沉淀通过真空过滤收集，用水(500mL)洗涤，并重新溶解在EtOAc(1.5L)中，将其进一步用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。将粗产物用DCM(200mL)和EtOAc(20mL)的混合物在室温处研磨1h，得到4-溴-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酸酰胺，干燥后为褐色粉末(73.2g，0.270摩尔，84％收率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.29(s,1H),8.13(s,1H),7.61(d,J＝10.4Hz,1H),7.59(brs,1H),6.21(dd,J＝2.3,1.1Hz,1H),3.34(s,2H),2.44(d,J＝0.9Hz,3H)。
步骤3：5-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯
在-78℃处在N2下向(3-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯(20.00g，93.76mmol)和1,1,1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲基磺酰基)甲磺酰胺(43.55g，121.91mmol)在THF(300mL)中的溶液中添加LDA(2M的THF溶液，103mL，206mmol)。添加后将反应混合物在0℃处搅拌2h，用饱和氯化铵水溶液(500mL)淬灭并用乙酸乙酯(300mL×3)萃取。将合并的有机层用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至10％)洗脱，得到5-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯(30.0g)，为黄色固体。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ5.83-5.71(m,1H),4.68-4.36(m,1H),4.06-3.85(m,1H),2.79-2.61(m,1H),2.39-2.19(m,3H),1.90-1.76(m,1H),1.68-1.55(m,1H),1.45(s,9H)。
步骤4：(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
将5-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯(30.00g，86.87mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(22g，86.87mmol)、乙酸钾(25.58g，260.62mmol)和Pd(dppf)Cl2(3.18g，4.34mmol)在二氧杂环己烷(300mL)中的混合物脱气并用氮气回填五次。将反应混合物在氮气下在100℃处搅拌2h。将冷却的反应混合物用水(500mL)淬灭并用乙酸乙酯(300mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将所得残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至15％)洗脱，得到(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(8.5g)，为黄色固体。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.61-6.49(m,1H),4.64-4.40(m,1H),3.85-3.63(m,1H),2.60-2.43(m,1H),2.32-2.17(m,2H),2.00-1.80(m,2H),1.72-1.60(m,1H),1.44(s,9H),1.25(s,12H)。ESI-MS[M+H-Boc]+计算值(C17H30BNO4)224.24，实测值：224.15。
步骤5：(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
将(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(6.56g，20.29mmol)、4-溴-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(5g，18.44mmol)、碳酸钾(7.65g，55.33mmol)和Pd(dppf)Cl2(675mg，0.92mmol)在二氧杂环己烷(80mL)和水(20mL)中的混合物脱气并用氮气回填五次。将反应混合物在氮气下在90℃处加热2h。将冷却的反应混合物用水(200mL)稀释并用乙酸乙酯(150mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至45％)洗脱，得到(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(7.0g)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.91(s,1H),8.01(s,1H),7.51-7.36(m,2H),6.96-6.84(m,1H),6.14(s,1H),5.84-5.77(m,1H),3.76-3.56(m,1H),2.44-2.24(m,7H),1.93-1.81(m,1H),1.65-1.45(m,1H),1.40(s,9H)。ESI-MS[M-H]-计算值(C21H26FN3O3)386.20，实测值：386.15
步骤6：(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃处，向(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(7.0g，18.07mmol)在DMF(50mL)中的溶液中添加N-氯代琥珀酰亚胺(2.65g，19.88mmol)。将反应混合物在0℃处搅拌1h。将反应混合物用水(200mL)淬灭并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至50％)洗脱，得到(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(7.0g)，为黄色固体。ESI-MS[M+H-tBu]+计算值(C21H25ClFN3O3)366.16、368.15，实测值：366.30、368.30。
步骤7：4-(5-氨基环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐
将(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(7g，16.59mmol)和氯化氢(4M的二氧杂环己烷溶液，70mL)的混合物在25℃处搅拌1h。将反应混合物真空浓缩，得到4-(5-氨基环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐(6.0g，粗物质)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C16H17ClFN3O)322.10、324.10，实测值：322.35、324.35。
步骤8：外消旋4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(化合物1-A-(rac))
向4-(5-氨基环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐(6.0g，16.75mmol)在DMF(60mL)中的混合物中添加HATU(7.64g，20.1mmol)、丁-2-炔酸(1.69g，20.1mmol)和DIEA(10.82g，83.75mmol)。将反应混合物在20℃处搅拌1h。将所得混合物用水(200mL)稀释并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。将合并的有机层用水(100mL×2)和盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至50％)洗脱，得到4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(3.5g)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.32(s,1H),8.61-8.50(m,1H),8.10(s,1H),7.55-7.52(m,2H),5.60(s,1H),4.14-3.93(m,1H),2.39(s,3H),2.35-2.22(m,4H),1.94(s,3H),1.90-1.82(m,1H),1.68-1.47(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H19ClFN3O2)388.11、390.11，实测值：388.05、390.05。
步骤9：(S)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺和(R)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(化合物1-A-(S)和1-A-(R))
将4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(3.5g，9mmol)通过制备型SFC用以下条件分离：柱：CHIRALPAK AD-H，2×25cm，5μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH(0.1％2M NH3-MeOH)；流速：70mL/min；梯度：30％B；柱温：35℃；背压：100巴；220nm；
保留时间＝3.69min
(R)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺或(S)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(1.02g，40％)，为浅黄色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.32(s,1H),8.55(s,1H),8.09(s,1H),7.60-7.48(m,2H),5.61(s,1H),4.14-3.93(m,1H),2.45-2.20(m,7H),2.05-1.80(m,4H),1.70-1.45(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H19ClFN3O2)388.11、390.11，实测值：388.10、390.10。
保留时间＝4.13min
(S)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺或(R)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(1.13g，41％)，为灰白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.31(s,1H),8.55(s,1H),8.09(s,1H),7.61-7.47(m,2H),5.61(s,1H),4.14-3.93(m,1H),2.45-2.20(m,7H),2.05-1.80(m,4H),1.70-1.45(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H19ClFN3O2)388.11、390.11，实测值：388.10、390.10。
实施例2
合成
外消旋4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲 哚-7-甲酰胺(化合物2-A-(rac))
(S)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚- 7-甲酰胺(化合物2-A-(S))
和
(R)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚- 7-甲酰胺(化合物2-A-(R))
步骤1：1,4-二溴-2,3-二氟-5-硝基苯
在0℃处，向1,4-二溴-2,3-二氟苯(25.0g，91.95mmol)在浓硫酸(200mL)中的溶液中添加硝酸钾(11.0g，108.8mmol)。将反应混合物在25℃处搅拌16h。将反应混合物倒入冰水(1L)中并在0℃处搅拌30min。将所得沉淀过滤，将滤饼用水洗涤并减压干燥，得到1,4-二溴-2,3-二氟-5-硝基苯(27.0g)，为黄色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.47(dd,J＝6.0,2.4Hz 1H)。
步骤2:2,5-二溴-3,4-二氟苯胺
向1,4-二溴-2,3-二氟-5-硝基苯(27.0g，85.21mmol)在乙酸(260mL)中的溶液中添加铁粉(47.6g，852.0mmol)。将反应混合物在45℃处搅拌5h。将冷却的反应混合物过滤，并将滤液倒入冰水(500mL)中并再过滤。将滤饼用水(300mL)洗涤并减压干燥，得到呈黄色固体的2,5-二溴-3,4-二氟苯胺(23.0g，94％收率)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ6.88(dd,J＝6.0,2.4Hz 1H),5.74(brs,2H)。
步骤3：2,5-二溴-3,4-二氟-6-碘苯胺
向2,5-二溴-3,4-二氟苯胺(23.0g，80.17mmol)在乙酸(250mL)中的溶液中添加N-碘代琥珀酰亚胺(19.84g，88.18mmol)。将反应混合物在25℃处搅拌2h，然后倒入冰水(500mL)中并过滤。将滤饼用水(100mL)洗涤并减压干燥。将粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0至5％)洗脱，得到呈灰白色固体的2,5-二溴-3,4-二氟-6-碘苯胺(30.0g，90％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ5.63(s,2H)。ESI-MS[M-H]-计算值(C6H2Br2F2IN)409.76、411.75、413.75，实测值：409.75、411.75、413.70。
步骤4：2,5-二溴-3,4-二氟-6-(丙-1-炔-1-基)苯胺
在氮气下，向2,5-二溴-3,4-二氟-6-碘苯胺(30.0g，72.68mmol)、碘化铜(I)(2.77g，14.54mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(5.12g，7.27mmol)在三乙胺(365mL)中的混合物中添加丙-1-炔(1M的THF溶液，364mL)。将反应混合物在密封烧瓶中在50℃处搅拌4h。将冷却的反应混合物用水(300ml)淬灭并用乙酸乙酯(300ml×3)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0至10％)洗脱，得到呈黄色固体的2,5-二溴-3,4-二氟-6-(丙-1-炔-1-基)苯胺(20.0g，84％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ5.79(s,2H),2.18(s,3H)。ESI-MS[M-H]-计算值(C9H5Br2F2N)321.88、323.87、325.87，实测值：322.00、324.00、326.00
步骤5：4,7-二溴-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚
将2,5-二溴-3,4-二氟-6-(丙-1-炔-1-基)苯胺(20.0g，61.55mmol)和PdCl2(1.09g，6.15mmol)在乙腈(400mL)中的混合物脱气并用氮气回填三次，然后在85℃处搅拌5h。将冷却的反应混合物真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0至10％)洗脱，得到呈黄色固体的4,7-二溴-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚(17.0g，85％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.75(s,1H),6.28(s,1H),2.41(s,3H)。ESI-MS[M-H]-计算值(C9H5Br2F2N)321.88、323.87、325.87，实测值：321.80、323.80、325.80
步骤6：4,7-二溴-5,6-二氟-2-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)-甲基)-1H-吲哚
在0℃处，向4,7-二溴-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚(10.0g，30.77mmol)在THF(200mL)中的搅拌溶液中添加氢化钠(1.60g，40.01mmol，60％)。在该温度处搅拌1h后，在0℃处添加2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(7.70g，46.16mmol)。然后将反应混合物在25℃处搅拌16h，用水(200mL)淬灭并用乙酸乙酯(150mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0至10％)洗脱，得到呈黄色油状物的4,7-二溴-5,6-二氟-2-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚(12.3g，87％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ6.42(s,1H),5.78(s,2H),3.55(t,J＝7.8Hz,2H),2.47(s,3H),0.83(t,J＝8.1Hz,2H),-0.08(s,9H)。
步骤7：4-溴-5,6-二氟-2-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-7-甲酸
在氮气下在-70℃处，向4,7-二溴-5,6-二氟-2-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚(12.3g，27.03mmol)在THF(130mL)中的溶液中添加正丁基锂(2.5M的正己烷溶液，13mL，32.5mmol)。在该温度处搅拌0.5h并在0℃处搅拌0.5h后，将反应混合物冷却至-70℃并用二氧化碳鼓泡30min。在25℃处搅拌1.5h后，将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(100mL)淬灭并用二氯甲烷(100mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到4-溴-5,6-二氟-2-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-7-甲酸(11.4g，粗物质)，为黄色固体。ESI-MS[M-H]-计算值(C16H20BrF2NO3Si)418.04、420.03，实测值：417.95、419.95。
步骤8：4-溴-5,6-二氟-2-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-7-甲酰胺
在0℃处，向4-溴-5,6-二氟-2-甲基-1-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)吲哚-7-甲酸(11.4g，27.12mmol)和氯化铵(2.18g，40.68mmol)在DMF(100mL)中的搅拌混合物中添加HATU(12.38g，32.55mmol)和DIPEA(17.53g，135.61mmol)。在25℃处搅拌16h后，将反应混合物用水(300ml)淬灭并用乙酸乙酯(300ml×3)萃取。将合并的有机层用盐水(200ml×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0至50％)洗脱，得到呈黄色固体的4-溴-5,6-二氟-2-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-7-甲酰胺(6.3g，55％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.34(s,1H),8.10(s,1H),6.40(s,1H),5.50(s,2H),3.42(t,J＝8.1Hz,2H),2.46(s,3H),0.81(t,J＝8.1Hz,2H),-0.06(s,9H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C16H21BrF2N2O2Si)419.05、421.05，实测值：419.20、421.20
步骤9：4-溴-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
将4-溴-5,6-二氟-2-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-7-甲酰胺(6.3g，15.02mmol)、TBAF(1M的THF溶液，150mL，150.2mmol)和乙烷-1,2-二胺(30mL，450.6mmol)在THF(60mL)中的混合物在75℃处搅拌40h。将反应混合物冷却至0℃并用2M盐酸酸化至pH4。将所得沉淀通过过滤收集，用水(100mL)洗涤并减压干燥，得到4-溴-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(3.5g，80％)，为黄色固体。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.38(s,1H),7.97(s,1H),7.90(s,1H),6.20(s,1H),2.40(s,3H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C10H7BrF2N2O)288.97、290.97，实测值：288.95、290.95。
步骤10：(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
将4-溴-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(1.5g，5.19mmol)、(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1.84g，5.71mmol)、碳酸钾(2.9g，20.76mmol)和Pd(dppf)Cl2(378mg，0.519mmol)在二氧杂环己烷(16mL)和水(4mL)中的混合物脱气并用氮气回填五次。将反应混合物在90℃处加热2h。将冷却的反应混合物用水(60mL)淬灭并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至30％)洗脱，得到(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1.6g，76％)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H25F2N3O3)406.19，实测值：406.20。
步骤11：(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃处，向(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.74mmol)在DMF(6mL)中的搅拌溶液中添加NCS(99mg，0.74mmol)。将反应混合物在25℃处搅拌3h，用水(30mL)淬灭并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至35％)洗脱，得到(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯。(270mg，83％)，为黄色固体。ESI-MS[M+H-tBu]+计算值(C21H24ClF2N3O3)384.15、386.15，实测值：384.20、386.20
步骤12：4-(5-氨基环己-1-烯-1-基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐
向(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(230mg，0.52mmol)在MeOH(1mL)中的搅拌溶液中添加4M氯化氢的二氧杂环己烷溶液(3mL)。将反应混合物在25℃处搅拌1h，然后真空浓缩，得到4-(5-氨基环己-1-烯-1-基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐(190mg，粗物质)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C16H16ClF2N3O)340.09、342.09，实测值：340.25、342.25。
步骤13：外消旋4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(化合物2-A-(rac))
向4-(5-氨基环己-1-烯-1-基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐(160mg，0.43mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加2-丁炔酸(36mg，0.43mmol)、HATU(210mg，0.55mmol)和DIEA(275mg，2.13mmol，0.35mL)。将反应混合物在25℃处搅拌1h，用水(30mL)淬灭并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC用以下条件纯化：柱：XBridge Prep C18 OBD柱，19×150mm，5um；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在10min内28％B至43％B；220nm；RT1：10.88min，得到4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(120mg，69％)，为白色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H18ClF2N3O2)406.11、40811，实测值：406.05、408.05。
步骤14：(S)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(化合物2-A-(S))和(R)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(化合物2-A-(R))
将4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(120mg)通过手性制备型HPLC用以下条件分离：柱：(R,R)-WHELK-O1-Kromasil，2.12×25cm，5um；流动相A：己烷(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：在24min内30％B至30％B；220/254nm。
保留时间＝17.654min
(S)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺或(R)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(49.9mg，42％收率)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.39(s,1H),8.65-8.50(m,1H),7.97-7.81(m,2H),5.66(s,1H),4.03(s,1H),2.40-2.18(m,7H),1.94(s,3H),1.91-1.80(m,1H),1.66-1.46(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H18ClF2N3O2)406.11、408.11，实测值：406.10、408 10。
保留时间＝20.658min
(R)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺或(S)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(51.2mg，43％)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.40(s,1H),8.55(s,1H),7.97-7.82(m,2H),5.66(s,1H),4.04(s,1H),2.34(s,3H),2.33-2.10(m,4H),1.94(s,3H),1.91-1.80(m,1H),1.64-1.50(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H18ClF2N3O2)406.11、408.11，实测值：406.10、408 10。
实施例3
合成
(S)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物3-A-(S))
和
(S)-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物3-B-(S))
步骤1：(S)-5-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯和
(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯
在-78℃处，向(S)-(3-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯(10.0g，46.89mmol)和1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺(21.8g，60.95mmol)在THF(150mL)中的混合物中添加滴加双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(2M的THF溶液，58.6mL，117.2mmol)。添加后，将反应混合物在25℃处搅拌2h。将所得混合物用水(300mL)淬灭并用乙酸乙酯(150mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(5％)洗脱，得到(S)-5-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯和(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯的混合物(17.5g，粗物质)，为黄色固体。
步骤2：(S)-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
将(S)-5-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯和(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯(17.5g，粗物质)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(12.9g，50.68mmol)、Pd(dppf)Cl2·DCM(4.14g，5.07mmol)和乙酸钾(14.92g，152.03mmol)在二氧杂环己烷(250mL)中的混合物脱气并用氮气回填五次。将反应混合物在100℃处加热2h。将冷却的反应混合物用水(500mL)稀释并用乙酸乙酯(300mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(5％)洗脱，得到(S)-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的混合物(15.0g，粗物质)，为无色油状物。
步骤3：(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
将(S)-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(3.1g，7.8mmol)、4-溴-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲腈(2.5g，9.36mmol)、Pd(dppf)Cl2·DCM(764mg，0.94mmol)和磷酸钾(3.88g，28.08mmol)在1,4-二氧杂环己烷(30mL)和水(8mL)中的混合物脱气并用氮气回填五次并在90℃处搅拌3h。将冷却的反应混合物用水(60mL)稀释并用乙酸乙酯(60mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(60mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的混合物(4.0g，粗物质)，为棕色油状物。
ESI-MS[M-H]-计算值(C22H26FN3O2)382.20，实测值：382.20
步骤4：(S)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
向(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁基叔丁酯和(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(4.0g，粗物质)在乙醇(40mL)和水(10mL)中的混合物中添加Parkin催化剂(445mg，1.04mmol)。将反应混合物在90℃处搅拌2h，使其冷却，用水(60mL)稀释并用乙酸乙酯(60mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(60mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(45％)洗脱，得到(S)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的混合物(2.58g)，为黄色固体。
ESI-MS[M+H]+计算值(C22H28FN3O3)402.21，实测值：402.35
步骤5：(S)-4-(5-氨基环己-1-烯-1-基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐和(S)-4-(3-氨基环己-1-烯-1-基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐
将(S)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(2.58g，6.43mmol)和氯化氢(4.0M的1,4-二氧杂环己烷溶液，20mL)的混合物在20℃处搅拌1h。将所得混合物真空浓缩，得到(S)-4-(5-氨基环己-1-烯-1-基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐和(S)-4-(3-氨基环己-1-烯-1-基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐的混合物(2.15g，粗物质)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C17H20FN3O)302.16，实测值：302.15。
步骤6：(S)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(化合物3-A-(S))和(S)-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(化合物3-B-(S))
向(S)-4-(5-氨基环己-1-烯-1-基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐和(S)-4-(3-氨基环己-1-烯-1-基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐(2.15g，粗物质)在DMF(30mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(3.63g，9.55mmol)、丁-2-炔酸(642mg，7.64mmol)和N,N-二异丙基乙胺(4.11g，31.82mmol)。将反应混合物在25℃处搅拌2h。将所得混合物用水(60mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(40mL×3)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(60％)洗脱，得到1.7g的混合异构体。
将混合物(1.7g)通过制备型SFC用以下条件分离：柱：GreenSep Basic，3×15cm，5μm；流动相A：CO2，流动相B：IPA(0.5％2M NH3-MeOH)；流速：80mL/min；梯度：40％B；柱温：35℃；背压：100巴；220nm。
保留时间＝5.3min化合物3-B-(S)
(S)-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(345mg)，为白色固体；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),8.56(d,J＝7.6Hz,1H),8.00(s,1H),7.54-7.27(m,2H),5.56(s,1H),3.98(s,1H),2.46-2.15(m,7H),2.15-1.99m,3H),1.92(s,3H),1.91-1.82(m,1H),1.63-1.48(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H22FN3O2)368.17，实测值：368.35。
保留时间＝6.32min化合物3-A-(S)
(S)-4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(825.2mg)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.72(s,1H),8.75(d,J＝7.6Hz,1H),8.00(s,1H),7.54-7.27(m,2H),5.56(s,1H),4.55-4.33(m,1H),2.46-2.15(m,7H),2.15-1.99m,3H),1.92(s,3H),1.91-1.82(m,1H),1.80-1.48(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H22FN3O2)368.17，实测值：368.35。
实施例4
合成
(S)-5-氟-2,3-二甲基-4-(5-(N-甲基丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-1H-吲 哚-7-甲酰胺(化合物4-A-(S))
和
(S)-5-氟-2,3-二甲基-4-(3-(N-甲基丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-1H-吲 哚-7-甲酰胺(化合物4-B-(S))
步骤1：4-溴-5-氟-2,3-二甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-7-甲腈
在0℃处在氮气气氛下，向4-溴-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲腈(1.00g，3.74mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加氢化钠(225mg，5.63mmol，60％)。在0℃处搅拌1小时后，在0℃处添加2-(氯甲氧基)乙基-三甲基硅烷(1.25g，7.49mmol)。将反应混合物在25℃处进一步搅拌1小时。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将合并的有机层用水(30mL×2)和盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到4-溴-5-氟-2,3-二甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-7-甲腈(1.50g，粗物质)，为棕色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.69(d,J＝9.0Hz,1H),5.69(s,2H),3.53(t,J＝7.8Hz,2H),2.42(s,3H),2.37(s,3H),0.82(t,J＝7.8Hz,2H),-0.10(s,9H)。
步骤2：(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)-乙氧基)甲基)-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和
(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
向4-溴-5-氟-2,3-二甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-7-甲腈(1.50g，3.77mmol)以及(S)-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的混合物(参见实施例3，步骤2；1.46g，4.53mmol)在THF(8mL)和水(2mL)中的混合物中添加Pd(dppf)Cl2(276mg，0.38mmol)和磷酸钾(2.40g，11.32mmol)。将反应混合物脱气并用氮气回填三次并在60℃处搅拌2小时。将冷却的反应混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(40mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至10％)洗脱，得到(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)-乙氧基)甲基)-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1.40g，72％)，为浅黄色油状物。ESI-MS[M-H]-计算值(C28H40FN3O3Si)512.28，实测值：512.20。
步骤3：(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃处在氮气气氛下，向(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1.30g，2.53mmol)在DMF(15mL)中的溶液中添加氢化钠(202mg，5.06mmol，60％)。搅拌30分钟后，在0℃处添加碘甲烷(1.08g，7.59mmol)。将反应混合物在0℃处进一步搅拌1小时。将混合物用饱和氯化铵水溶液(60mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL×3)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至15％)洗脱，得到(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的混合物(1.10g，82％)，为浅黄色油状物。ESI-MS[M+H]+计算值(C29H42FN3O3Si)528.30，实测值：528.30。
步骤4：(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
在25℃处，向来自以上步骤3的混合物(1.10g，2.08mmol)在THF(10mL)中的溶液中添加TBAF(5.45g，20.84mmol)和二乙胺(3.05g，41.69mmol)。在70℃处搅拌16小时后，将冷却的混合物用水(70mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至25％)洗脱，得到(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的混合物(340mg，41％)，为棕色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C23H28FN3O3)398.22，实测值：398.35。
步骤5：(S)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
向(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(340mg，0.86mmol)在乙醇(5mL)和水(5mL)中的混合物中添加Parkin催化剂(18mg，0.04mmol)。将反应混合物在90℃处搅拌2h。将冷却的反应混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至60％)洗脱，得到(S)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯和(S)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的混合物(270mg，76％)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C23H30FN3O3)416.23，实测值：416.25。
步骤6：(S)-5-氟-2,3-二甲基-4-(5-(甲基氨基)环己-1-烯-1-基)-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐和(S)-5-氟-2,3-二甲基-4-(3-(甲基氨基)环己-1-烯-1-基)-1H-吲哚-7-甲酰胺
将来自以上步骤5的化合物(270mg，0.65mmol)和氯化氢(4M的1,4-二氧杂环己烷溶液，5mL)的混合物在25℃处搅拌2h。将反应混合物真空浓缩成(S)-5-氟-2,3-二甲基-4-(5-(甲基氨基)环己-1-烯-1-基)-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐和(S)-5-氟-2,3-二甲基-4-(3-(甲基氨基)环己-1-烯-1-基)-1H-吲哚-7-甲酰胺(240mg，粗物质)，为黄色固体。
ESI-MS[M+H]+计算值(C18H22FN3O)316.17，实测值：316.15。
步骤7：(S)-5-氟-2,3-二甲基-4-(5-(N-甲基丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-1H-吲哚-7-甲酰胺(化合物4-A-(S))和(S)-5-氟-2,3-二甲基-4-(3-(N-甲基丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-1H-吲哚-7-甲酰胺(化合物4-B-(S))
向来自以上步骤6的化合物(240mg，0.68mmol)在DMF(5mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(391mg，1.02mmol)、丁-2-炔酸(69mg，0.82mmol)和N,N-二异丙基乙胺(441mg，3.41mmol)。将反应混合物在25℃处搅拌1h。将所得混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机层用水(20mL×3)和盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC用以下条件纯化：柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30×150mm，5um；流动相A：水(10mmol/LNH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：乙腈；流速：60mL/min；梯度：在7min内34％B至54％B，254nm；RT：6.95min，得到混合物。
将混合物通过制备型SFC用以下条件进一步分离：柱：CHIRAL ART Cellulose-SB，2×25cm，5um；流动相A：己烷(0.1％FA)，流动相B：EtOH；流速：20mL/min；梯度：在25min内10％B至10％B；254nm。
保留时间＝34.34min化合物4-B-(S)
(S)-5-氟-2,3-二甲基-4-(3-(N-甲基丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-1H-吲哚-7-甲酰胺(19.6mg，7％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.72(d,J＝7.2Hz,1H),8.00(s,1H),7.53-7.31(m,2H),5.62(d,J＝4.0Hz,1H),4.79-4.46(m,1H),3.10-3.05(m,1H),2.79(s,2H),2.69-2.55(m,0.6H),2.45-2.30(m,5.4H),2.24-2.10(m,3.5H),2.08-1.96(m,3.5H),1.95-1.68(m,2H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C22H24FN3O2)382.19，实测值：382.10
保留时间＝40.95min化合物4-A-(S)
(S)-5-氟-2,3-二甲基-4-(5-(N-甲基丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-1H-吲哚-7-甲酰胺(54.8mg，21％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.75(d,J＝8.8Hz,1H),8.01(s,1H),7.53-7.31(m,2H),5.52-5.30(m,1H),5.21-5.02(m,1H),3.10-3.05(m,1H),2.81-2.70(m,2H),2.45-2.23(m,4H),2.29-2.19(m,1H),2.19-2.10(m,3H),2.09-2.01(m,3H),1.97-1.63(m,4H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C22H24FN3O2)382.19，实测值：382.10
实施例5
合成
4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺 (化合物5-B-(rac))
(S)-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物5-B-(S))
和
(R)-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物5-B-(R))
步骤1：(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
将来自以上实施例3步骤2的(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1.00g，3.09mmol)、4-溴-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(704mg，2.58mmol)、碳酸钾(1.07g，7.73mmol)和Pd(dppf)Cl2(189mg，0.26mmol)在二氧杂环己烷(20mL)和水(5mL)中的混合物脱气并用氮气回填五次。将反应混合物在氮气下在90℃处加热2h。将冷却的反应混合物用水(80mL)稀释，并用乙酸乙酯(60mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(60mL)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至15％)洗脱，得到(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的混合物(700mg，70％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.91(s,1H),8.01(s,1H),7.51-7.36(m,2H),6.96-6.84(m,1H),6.14(s,1H),5.84-5.77(m,1H),3.76-3.56(m,1H),2.44-2.24(m,7H),1.93-1.81(m,1H),1.65-1.45(m,1H),1.40(s,9H)。ESI-MS[M-H]-计算值(C21H26FN3O3)386.20，实测值：386.15
步骤2：(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
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在0℃处，向(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(350mg，0.90mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加N-氯代琥珀酰亚胺(133mg，0.99mmol)。将反应混合物在0℃处搅拌1h。完成后，将反应混合物用水(30ml)淬灭并用乙酸乙酯(20ml×3)萃取。将合并的有机层用盐水(30ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至60％)洗脱，得到(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的混合物(280mg，73％)，为黄色固体。ESI-MS[M+H-tBu]+计算值(C21H25ClFN3O3)366.16、368.15，实测值：366.00、368.00。
步骤3：4-(5-氨基环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐和4-(3-氨基环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐
将(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(280mg，0.66mmol)和氯化氢(4M的二氧杂环己烷溶液，6mL)的混合物在25℃处搅拌1h。完成后，将反应混合物真空浓缩，得到4-(5-氨基环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐和4-(3-氨基环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐的混合物(200mg，粗物质)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C16H17ClFN3O)322.10、324.10，实测值：322.10、324.10
步骤4：4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺和4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺的制备
向4-(5-氨基环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐和4-(3-氨基环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐(200mg，0.56mmol)在DMF(6mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(255mg，0.67mmol)、丁-2-炔酸(56mg，0.67mmol)和N,N-二异丙基乙胺(361mg，2.80mmol)。将反应混合物在20℃处搅拌1h。将所得混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。将合并的有机层用水(30mL×2)和盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。
将残余物通过制备型HPLC用以下条件纯化：柱：XBridge Prep OBD C18柱，19×250mm，5um；流动相A：水(10MMOL/L NH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在10min内33％B至47％B；220nm。
4-(5-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝9.03min，为白色固体(85mg，39％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.32(s,1H),8.61-8.50(m,1H),8.10(s,1H),7.55-7.52(m,2H),5.60(s,1H),4.14-3.93(m,1H),2.39(s,3H),2.35-2.22(m,4H),1.94(s,3H),1.90-1.82(m,1H),1.68-1.47(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H19ClFN3O2)388.11、390.11，实测值：388.10、390.10。
4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝9.65min，为灰白色固体(10.2mg，5％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.32(s,1H),8.79-8.57(m,1H),8.09(s,1H),7.59-7.49(m,2H),5.44(s,1H),4.52-4.39(m,1H),2.38(s,3H),2.31-2.21(m,1H),2.19-2.09(m,1H),1.95(s,3H),1.92-1.52(m,4H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H19ClFN2O2)388.11、390.11，实测值：388.10、390.10。
步骤5：假定的(S)-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺和假定的(R)-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺的制备
将4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(化合物5-B-rac，160mg)通过制备型手性HPLC用以下条件分离：柱：(R,R)-WHELK-O1-Kromasil，2.12×25cm，5um；流动相A：MTBE(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：在12min内10％B至10％B；220/254nm。
(S)-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺或(R)-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰 胺
保留时间＝7.31min(51.1mg，32％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.32(s,1H),8.87-8.52(m,1H),8.09(s,1H),7.82-7.35(m,2H),5.61(s,1H),4.03(s,1H),2.45-2.08(m,5H),2.08-1.45(m,7H)。ESI-MS[M-H]-计算值(C20H19ClFN3O2)386.10、388.11，实测值：386.10、388.10
(R)-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺或(S)-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己-1-烯-1-基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰 胺
保留时间＝8.818min(52.1mg，33％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.31(s,1H),8.87-8.52(m,1H),8.09(s,1H),7.82-7.35(m,2H),5.61(s,1H),4.03(s,1H),2.45-2.08(m,5H),2.08-1.45(m,7H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H19ClFN3O2)386.10、388.11，实测值：386.10、388.10
实施例6
合成
外消旋4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺 (化合物6-(rac))
4-((顺式)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺 (化合物6-(顺式))
4-((反式)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺 (化合物6-(反式))
4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺 (化合物6-(1R,3S))
4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺 (化合物6-(1S,3R))
4-((1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺 (化合物6-(1R,3R))
和
4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺 (化合物6-(1S,3S))
步骤1：5-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯和3-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯的混合物
在-78℃处在N2下，向(3-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯(5.00g，23.44mmol)和1,1,1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲基磺酰基)甲磺酰胺(10.89g，30.48mmol)在THF(75mL)中的溶液中添加NaHMDS(2M的THF溶液，26mL，52mmol)。添加后，将反应混合物在0℃处搅拌2h。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(150mL)淬灭并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。将合并的萃取物用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至10％)洗脱，得到5-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯和3-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯的混合物(7.0g，粗物质)，为黄色固体。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ5.83-5.71(m,1H),4.68-4.36(m,1H),4.06-3.85(m,1H),2.79-2.61(m,1H),2.39-2.19(m,3H),1.90-1.76(m,1H),1.68-1.55(m,1H),1.45(s,9H)。
步骤2：(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的混合物
将5-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯和3-((叔丁氧羰基)氨基)环己-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯(6.00g，17.37mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(4.41g，17.4mmol)、乙酸钾(5.12g，52.1mmol)和Pd(dppf)Cl2(635mg，0.87mmol)在二氧杂环己烷(90mL)中的混合物脱气并用氮气回填五次。将反应混合物在氮气下在100℃处搅拌2h。将冷却的反应混合物用水(200mL)淬灭并用乙酸乙酯(150mL×3)萃取。将合并的萃取物用盐水(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至15％)洗脱，得到(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的混合物(3.26g，58％)，为黄色固体。1H NMR(300MHz，氯仿-d)δ6.62-6.49(m,1H),4.64-4.40(m,1H),3.85-3.63(m,1H),2.60-2.43(m,1H),2.32-2.17(m,2H),2.00-1.80(m,2H),1.72-1.60(m,1H),1.44(s,9H),1.25(s,12H)。ESI-MS[M+H-Boc]+计算值(C17H30BNO4)224.24，实测值：224.15。
步骤3：(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的混合物
将(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1.00g，3.09mmol)、4-溴-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(704mg，2.58mmol)、碳酸钾(1.07g，7.73mmol)和Pd(dppf)Cl2(189mg，0.26mmol)在二氧杂环己烷(20mL)和水(5.0mL)中的混合物脱气并用氮气回填五次。将反应混合物在氮气下在90℃处加热2h。将冷却的反应混合物用水(80mL)稀释，并用乙酸乙酯(60mL×3)萃取。将合并的萃取物用盐水(60mL)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至15％)洗脱，得到(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯和(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯的混合物(700mg，70％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.91(s,1H),8.01(s,1H),7.51-7.36(m,2H),6.96-6.84(m,1H),6.14(s,1H),5.84-5.77(m,1H),3.76-3.56(m,1H),2.44-2.24(m,7H),1.93-1.81(m,1H),1.65-1.45(m,1H),1.40(s,9H)。ESI-MS[M-H]-计算值(C21H26FN3O3)386.20，实测值：386.15
步骤4：(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
将(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(350mg，0.90mmol)和Pd/C(10％，200mg)在甲醇(25mL)中的混合物在氢气(2atm)下在25℃处搅拌16h。完成后，将反应混合物过滤。将滤液真空浓缩，得到(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(270mg，77％)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H28FN3O3)390.21，实测值：390.15。
步骤5：(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃处，向(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(270mg，0.70mmol)在DMF(7.0mL)中的混合物中添加N-氯代琥珀酰亚胺(94mg，0.70mmol)。将反应混合物在0℃处搅拌1h。完成后，将反应混合物用水(30mL)淬灭并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的萃取物用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至60％)洗脱，得到(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(220mg，73％)，为黄色固体。ESI-MS[M-H]-计算值(C21H27ClFN3O3)422.17、424.17，实测值：422.10、424.10。
步骤6：4-(3-氨基环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐
将(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(220mg，0.52mmol)和氯化氢(4M的二氧杂环己烷溶液，7mL)的混合物在20℃处搅拌1h。完成后，将反应混合物真空浓缩，得到4-(3-氨基环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐(200mg，粗物质)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C16H19ClFN3O)324.12、326.12，实测值：324.10、326.10
步骤7：4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
向4-(3-氨基环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐(200mg，0.56mmol)在DMF(6.0mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(254mg，0.67mmol)、丁-2-炔酸(56mg，0.67mmol)和N,N-二异丙基乙胺(358mg，2.78mmol)。将反应混合物在20℃处搅拌1h。将所得混合物用水(30mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。将合并的萃取物用水(30mL×2)和盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。
步骤8：4-(顺式-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺和4-(反式-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
将4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺通过HPLC在以下条件下纯化：柱：XBridge Prep OBD C18柱，30×250mm，5um；流动相A：水(10MMOL/L NH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在7min内35％B至45％B；220nm。4-(顺式-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺。
化合物6-(顺式)
保留时间＝5.68min(100mg，46％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.28(s,1H),8.53(d,J＝6.0Hz,1H),8.05(s,1H),7.57-7.42(m,2H),4.19(t,J＝9.2Hz,1H),4.05-3.96(m,1H),2.39(s,3H),2.07-1.82(m,7H),1.78-1.65(m,2H),1.63-1.50(m,2H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H21ClFN3O2)390.13、392.13，实测值：390.10、392.10。
化合物6-(反式)
保留时间＝6.80min(23.6mg，10％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.33(s,1H),8.52(d,J＝7.6Hz,1H),8.07(s,1H),7.56-7.47(m,2H),4.09-3.97(m,1H),3.76-3.64(m,1H),2.39(s,3H),1.93(s,3H),1.89-1.64(m,6H),1.51-1.34(m,1H),1.32-1.17(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H21ClFN2O2)390.13、392.13，实测值：390.10、392.10。
步骤9A：顺式异构体的分离：
将4-(顺式-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(90mg)通过制备型手性HPLC在以下条件下分离：柱：CHIRALPAK IG，20×250mm，5um；流动相A：己烷(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：在18min内50％B至50％B；220/254nm。
4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺或4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝8.691min(34.5mg，38％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.28(s,1H),8.54(d,J＝6.0Hz,1H),8.06(s,1H),7.60-7.40(m,2H),4.30-4.10(m,1H),4.00(s,1H),2.39(s,3H),2.10-1.80(m,7H),1.78-1.48(m,4H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H21ClFN3O2)390.13、392.13，实测值：390.10、392.10。
4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺或4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝16.192min(34.1mg，38％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.29(s,1H),8.54(d,J＝5.7Hz,1H),8.06(s,1H),7.60-7.40(m,2H),4.30-4.10(m,1H),4.01(s,1H),2.39(s,3H),2.10-1.80(m,7H),1.78-1.48(m,4H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H21ClFN3O2)390.13、392.13，实测值：390.10、392.10
步骤9B：反式异构体的分离：
将4-(反式-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基]-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(250mg)通过手性制备型HPLC用以下条件分离：柱：CHIRALPAK IG，2×25cm，5um；流动相A：己烷(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：在15min内50％B至50％B；254/220nm。
4-[(1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基]-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺或4-[(1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基]-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝7.327min(101.3mg，41％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.32(s,1H),8.51(d,J＝8.0Hz,1H),8.07(s,1H),7.56-7.45(m,2H),4.10-3.95(m,1H),3.78-3.65(m,1H),2.39(s,3H),2.01-1.71(m,8H),1.54-1.16(m,3H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H21ClFN3O2)390.13、392.13，实测值：390.15、392.15。
4-[(1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基]-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺或4-[(1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基]-3-氯-5-氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝12.317min(100.9mg，40％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.33(s,1H),8.51(d,J＝8.0Hz,1H),8.07(s,1H),7.55-7.45(m,2H),4.11-3.95(m,1H),3.78-3.67(m,1H),2.39(s,3H),2.01-1.71(m,8H),1.50-1.18(m,3H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H21ClFN3O2)390.13、392.13，实测值：390.15、392.15。
实施例7
合成
4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7- 甲酰胺(化合物7-(1R,3S))
4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7- 甲酰胺(化合物7-(1S,3R))
4-((1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7- 甲酰胺(化合物7-(1R,3R))
和
4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7- 甲酰胺(化合物7-(1S,3S))
步骤1：(3-(3-溴-7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃处，向(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.23mmol)在DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加NBS(218mg，1.23mmol)。将反应混合物在0℃处搅拌1h。将反应混合物用水(30mL)淬灭并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至33％)洗脱，得到(3-(3-溴-7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，83％)，为黄色固体。ESI-MS[M+H-Boc]+计算值(C21H26BrF2N3O3)386.11、388.11，实测值：386.00、388.00。
步骤2：(3-(7-氨基甲酰基-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
将(3-(3-溴-7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.03mmol)、Zn(CN)2(499mg，1.03mmol)和Pd(PPh3)4(119mg，0.10mmol)在DMF(15mL)中的混合物脱气并用氮气回填五次。将反应混合物在120℃处加热2h。将冷却的反应混合物用水(60mL)淬灭并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至35％)洗脱，得到(3-(7-氨基甲酰基-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，44％)，为黄色固体。ESI-MS[M+H-Boc]+计算值(C22H26F2N4O3)333.20，实测值：333.35
步骤3：4-(3-氨基环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐
将(3-(7-氨基甲酰基-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.462mmol)和氯化氢(4M的二氧杂环己烷溶液，5mL)的混合物在25℃处搅拌1h。将所得混合物真空浓缩，得到4-(3-氨基环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐(170mg，粗物质)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C17H18F2N4O)333.14，实测值：333.15。
步骤4：4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
向4-(3-氨基环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐(150mg，0.406mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加2-丁炔酸(34mg，0.406mmol)、HATU(185mg，0.488mmol)和DIEA(263mg，2.03mmol)。将反应混合物在20℃处搅拌2h。将反应混合物用水(40mL)淬灭并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC用以下条件纯化：柱：YMC-Actus Triart C18，30mm×150mm，5um；流动相A：水(50mmol/L NH4HCO3)，流动相B：乙腈；流速：60mL/min；梯度：在9min内33％B至53％B，254nm；RT：7.27min，得到4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(130mg，80％)，为白色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H20F2N4O2)399.16，实测值：399.20。
步骤5：顺式和反式异构体的分离
将4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(130mg)通过制备型手性SFC用以下条件分离：柱：Viridis BEH 2-乙基吡啶Prep OBD，3×15cm，5μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC；流速：60mL/min；梯度：12％B；柱温：35℃；背压：100巴；254nm。
顺式-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物7-(顺式))
保留时间＝6.53min(70mg，54％)，为白色固体。
反式-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物7-(反式))
保留时间＝10.55min(40mg，31％)，为白色固体。
步骤6A：顺式异构体的分离
将顺式-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(70mg)通过制备型手性HPLC在以下条件下分离：柱：CHIRALPAK IG，2×25cm，5μm；流动相A：己烷(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：在23min内50％B至50％B；220/254nm。
4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7- 甲酰胺(化合物7-(1R,3S))或4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟- 2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝8.68min(28.9mg，41％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.11(s,1H),8.33(brs,1H),8.14-7.76(m,2H),4.03(s,1H),3.77(s,1H),2.55(s,3H),2.28-1.90(m,5H),1.89-1.70(m,4H),1.69-1.47(m,2H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H20F2N4O2)399.16，实测值：399.15。
4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7- 甲酰胺(化合物7-(1S,3R))或4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟- 2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝19.003min(29.4mg，42％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.11(s,1H),8.33(brs,1H),8.09-7.76(m,2H),4.03(s,1H),3.77(s,1H),2.55(s,3H),2.29-1.92(m,5H),1.90-1.68(m,4H),1.69-1.51(m,2H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H20F2N4O2)399.16，实测值：399.15。
步骤6B：反式异构体的分离
将反式-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(40mg)通过制备型手性HPLC在以下条件下分离：柱：CHIRALPAK IG，2×25cm，5μm；流动相A：己烷(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：在23min内50％B至50％B；220/254nm。
4-((1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7- 甲酰胺(化合物7-(1R,3R))或4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟- 2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝7.036min(15mg，37％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.13(s,1H),8.55(d,J＝7.2Hz,1H),8.13-7.75(m,2H),3.84-3.50(m,2H),2.55(s,3H),2.09-1.59(m,9H),1.56-1.38(m,1H),1.37-1.26(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H20F2N4O2)399.16，实测值：399.15。
4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7- 甲酰胺(化合物7-(1S,3S))或4-((1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氰基-5,6-二氟- 2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝14.867min(14mg)，为白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.13(s,1H),8.55(d,J＝7.2Hz,1H),8.07-7.75(m,2H),3.79-3.48(m,2H),2.55(s,3H),2.09-1.61(m,9H),1.52-1.20(m,2H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H20F2N4O2)399.16，实测值：399.10。
实施例8
合成
4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰 胺
4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰 胺
4-((1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰 胺
和
4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰 胺
步骤1：(3-(7-氨基甲酰基-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃处，向(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(1.8g，4.42mmol)在乙腈(20mL)和DMSO(5mL)中的搅拌溶液中添加SelectfluorII(1.27g，3.98mmol)。将反应混合物在0℃处搅拌1h。将反应混合物用水(60mL)淬灭并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC用以下条件纯化：柱：YMC-Actus Triart C18，30mm×150mm，5um；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：乙腈；流速：60mL/min；梯度：在7min内54％B至74％B，254nm；RT：6.53min，得到(3-(7-氨基甲酰基-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(510mg，27％)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.86(d,J＝12.4Hz,1H),7.94-7.71(m,2H),7.06-6.79(m,1H),3.80(s,1H),3.65-3.50(m,1H),2.36-2.25(m,3H),1.98-1.65(m,6H),1.60-1.47(m,2H),1.42-1.32(m,9H)。ESI-MS[M+H-Boc]+计算值(C21H26F3N3O3)326.19，实测值：326.10。
步骤2：4-(3-氨基环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐
向(3-(7-氨基甲酰基-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(510mg，1.20mmol)在MeOH(1mL)中的搅拌溶液中添加4M氯化氢的二氧杂环己烷溶液(6mL)。将反应混合物在25℃处搅拌1h。将所得混合物真空浓缩，得到4-(3-氨基环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐(420mg，粗物质)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C16H18F3N3O)326.14，实测值：326.10。
步骤3：4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
向4-(3-氨基环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(420mg，1.16mmol)在DMF(8mL)中的搅拌溶液中添加2-丁炔酸(107mg，1.28mmol)、DIEA(750mg，5.80mmol)和HATU(574mg，1.51mmol)。将反应混合物在25℃处搅拌1h。将反应混合物用水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(3×40mL)萃取。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC用以下条件纯化：柱：XBridge Prep OBD C18柱，30×150mm，5um；流动相A：水(50mmol/LNH4HCO3)，流动相B：乙腈；流速：60mL/min；梯度：在9min内40％B至60％B，254nm；RT：7.8min，得到4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(300mg，66％)，为白色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H20F3N3O2)392.15，实测值：392.35。
步骤4：顺式和反式异构体的分离
将4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(300mg)通过制备型手性HPLC用以下条件分离：柱：DAICEL DCpak P4VP，2×25cm，5μm；流动相A：CO2，流动相B：乙腈/MeOH＝4:1(0.1％2M NH3-MeOH)；流速：50mL/min；梯度：35％B；柱温：35℃；背压：100巴；254nm。
顺式-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(化合物8-(顺式))
保留时间＝3.97min(120mg，40％)，为灰白色固体
反式-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(化合物8-(反式))
保留时间＝5.0min(120mg，40％)，为灰白色固体。
ESI-MS[M+H]+计算值(C20H20F3N3O2)392.15，实测值：392.15。
步骤5A：顺式异构体的分离
将顺式-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(120mg)通过制备型手性HPLC用以下条件分离：柱：CHIRALPAK IG，2×25cm，5um；流动相A：己烷(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：在16min内50％B至50％B；254/220nm。
4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰 胺(化合物8-(1R,3S))或4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基- 1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝5.332min(46.7mg，39％)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.79(s,1H),8.70(d,J＝6.8Hz,1H),7.93-7.73(m,2H),4.17-4.03(m,1H),3.67-3.56(m,1H),2.31(s,3H),1.98(s,3H),1.96-1.76(m,4H),1.75-1.65(m,2H),1.62-1.48(m,2H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H20F3N3O2)392.15，实测值：392.35。
4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰 胺(化合物8-(1S,3R))或4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基- 1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝13.386min(48.5mg，40％)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.87(s,1H),8.70(d,J＝6.8Hz,1H),7.97-7.70(m,2H),4.17-4.02(m,1H),3.61-3.56(m,1H),2.32(s,3H),1.98(s,3H),1.97-1.75(m,4H),1.74-1.65(m,2H),1.63-1.48(m,2H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H20F3N3O2)392.15，实测值：392.15。
步骤5B：反式异构体的分离
将反式-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(120mg)通过制备型手性HPLC用以下条件分离：柱：CHIRALPAK IG，2×25cm，5um；流动相A：己烷(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：在15min内50％B至50％B；254/220nm。
4-((1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰 胺(化合物8-(1R,3R))或4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基- 1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝6.029min(46.7mg，39％)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.89(s,1H),8.53(d,J＝8.0Hz,1H),7.95-7.73(m,2H),3.69(s,1H),3.31-3.25(m,1H),2.31(m,3H),1.92(s,3H),1.89-1.65(m,6H),1.46-1.42(m,1H),1.39-1.32(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H20F3N3O2)392.15，实测值：392.15。
4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰 胺(化合物8-(1S,3S))或4-((1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3,5,6-三氟-2-甲基- 1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝9.994min(46.6mg，39％)，为灰白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.89(s,1H),8.53(d,J＝8.0Hz,1H),7.93-7.75(m,2H),3.69(s,1H),3.31-3.26(m,1H),2.32(m,3H),1.92(s,3H),1.89-1.66(m,6H),1.50-1.35(m,1H),1.34-1.26(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H20F3N3O2)392.15，实测值：392.20。
实施例9
合成
4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺
4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺
4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺和
4-((1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺
步骤1：(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
将4-溴-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(450mg，1.48mmol)、(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(528mg，1.63mmol)、碳酸钾(616mg，4.45mmol)和Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(121mg，0.148mmol)在二氧杂环己烷(12mL)和水(3mL)中的混合物脱气并用氮气回填五次。将反应混合物在90℃处加热2h。将冷却的反应混合物用水(60mL)淬灭并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至34％)洗脱，得到(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(560mg，89％)，为黄色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H),7.91-7.59(m,2H),7.14-6.81(m,1H),5.70-5.44(m,1H),4.25-3.51(m,1H),2.44-2.00(m,9H),1.99-1.46(m,3H),1.38(s,9H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C22H27F2N3O3)420.20，实测值：420.35。
步骤2：(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
向(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-2-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.19mmol)在乙酸乙酯(30mL)中的溶液中添加Pd/C(1g，10％)。将反应混合物在氢气(2atm)下在25℃处搅拌3天。过滤反应混合物。真空浓缩滤液。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(53％)洗脱，得到(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(490mg，97％)，为白色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C22H29F2N3O3)422.22，实测值：422.20。
步骤3：4-(3-氨基环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐
将(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(490mg，1.16mmol)和氯化氢(4M的二氧杂环己烷溶液，6mL)的混合物在25℃处搅拌1h。将所得混合物真空浓缩，得到4-(3-氨基环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐(400mg，粗物质)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C17H21F2N3O)322.17，实测值：322.15。
步骤4：4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
向4-(3-氨基环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐(400mg，1.16mmol)和2-丁炔酸(117mg，1.40mmol)在DMF(10mL)中的混合物中添加HATU(663mg，1.75mmol)和DIEA(902mg，6.98mmol)。将反应混合物在25℃处搅拌1h。将反应混合物用水(40mL)淬灭并用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用水(2×30mL)和盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用甲醇的二氯甲烷溶液(0％至15％)洗脱，得到4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(200mg，44％)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H23F2N3O2)388.18，实测值：388.15。
步骤5：顺式和反式异构体的分离
将4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(200mg)通过制备型手性HPLC用以下条件分离：柱：CHIRALPAK IG，2×25cm，5um；流动相A：己烷/DCM＝3:1(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：在26min内20％B至20％B；220/254nm。
4-((3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺保留时间＝10.291min(100mg，50％)，为白色固体。
4-((3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺保留时间＝13.464min(80mg，40％)，为白色固体。
步骤6A：顺式异构体的分离
将顺式-4-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(100mg)通过制备型手性HPLC用以下条件分离：柱：CHIRALPAK IG，2×25cm，5um；流动相A：己烷/DCM＝3:1(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：在26min内20％B至20％B；220/254nm。
4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物9-(1S,3S))或4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲 基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝10.291min(16.2mg，16％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.72(s,1H),8.51(d,J＝8.1Hz,1H),7.78(s,1H),7.76(s,1H),3.83-3.62(m,1H),3.59-3.41(m,1H),2.39-2.18(m,6H),1.98-1.63(m,9H),1.58-1.36(m,1H),1.35-1.02(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H23F2N3O2)388.18，实测值：388.15。
4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物9-(1R,3S))或4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲 基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝13.464min(41.4mg，41％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.69(s,1H),8.65(d,J＝6.0Hz,1H),7.77(s,1H),7.65(s,1H),4.04(s,1H),3.70(t,J＝12.0Hz,1H),2.31(s,6H),2.05-1.53(m,11H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H23F2N3O2)388.18，实测值：388.15。
步骤6B：反式异构体的分离
将反式-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(80mg)通过制备型手性HPLC用以下条件分离：柱：CHIRALPAK IG，2×25cm，5um；流动相A：己烷/DCM＝3:1(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：在16min内20％B至20％B；220/254nm。
4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物9-(1S,3R))或4-((1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲 基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝8.78min(28mg，34％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.69(s,1H),8.65(d,J＝6.0Hz,1H),7.77(s,1H),7.65(s,1H),4.03(s,1H),3.70(t,J＝12.0Hz,1H),2.31(s,6H),2.03-1.54(m,11H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H23F2N3O2)388.18，实测值：388.10。
4-((1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物9-(1R,3R))或4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5,6-二氟-2,3-二甲 基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝14.032min(15.9mg，19％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H),8.52(d,J＝8.0Hz,1H),7.79(s,1H),7.68(s,1H),3.80-3.64(m,1H),3.59-3.46(m,1H),2.42-2.16(m,6H),1.97-1.63(m,9H),1.53-1.36(m,1H),1.33-1.16(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H23F2N3O2)388.18，实测值：388.35。
实施例10
合成
4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
和
4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
步骤1：((1S)-3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
将(S)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(700mg，1.74mmol)和10％碳载钯(700mg)在乙醇(10mL)和四氢呋喃(10mL)中的混合物在氢气(2atm)下在50℃处搅拌2天。将冷却的反应混合物过滤。真空浓缩滤液。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(40％)洗脱，得到((1S)-3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(650mg，92％)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C22H30FN3O3)404.23，实测值：404.30。
步骤2：4-((3S)-3-氨基环己基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯
向((1S)-3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(250mg，0.61mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加三氟乙酸(2mL)。将反应混合物在25℃处搅拌2h。将所得混合物真空浓缩，得到4-((3S)-3-氨基环己基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯(300mg，粗物质)，为棕色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C17H22FN3O)304.18，实测值：304.45。
步骤3：4-((3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
向4-((3S)-3-氨基环己基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯(300mg，粗物质)在DMF(10mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(412mg，1.08mmol)、丁-2-炔酸(72.5mg，0.86mmol)和N,N-二异丙基乙胺(464mg，3.59mmol)。将反应混合物在25℃处搅拌2h。将所得混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC用以下条件纯化：柱：XBridgePrep OBD C18柱，30×150mm，5um；流动相A：水(20mmol/L NH4HCO3)，流动相B：乙腈；流速：60mL/min；梯度：在7min内30％B至50％B，254nm；RT：5.28min，得到4-((3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(140mg，61％，经两个步骤)，为白色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H24FN3O2)370.19，实测值：370.15。
步骤5：异构体的分离
将4-((3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(140mg)通过制备型手性HPLC用以下条件分离：柱：CHIRALPAK IG，2×25cm，5um；流动相A：己烷(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：20mL/min；梯度：在20min内40％B至40％B；254nm。
4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺或4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝10.599min(25.2mg，18％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.68(s,1H),8.49(d,J＝7.5Hz,1H),7.96(s,1H),7.53-7.28(m,2H),3.86-3.64(m,1H),3.60-3.42(m,1H),2.44-2.22(m,6H),1.93(s,3H),1.89-1.68(m,6H),1.56-1.37(m,1H),1.35-1.15(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H24FN3O2)370.19，实测值：370.15。
4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺或4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝18.172min(47.4mg，33％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.65(s,1H),8.63(d,J＝6.0Hz,1H),7.95(s,1H),7.48-7.25(m,2H),4.09-3.96(m,1H),3.86-3.60(m,1H),2.40-2.27(m,6H),2.08-1.81(m,7H),1.80-1.47(m,4H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H24FN3O2)370.19，实测值：370.15。
实施例11
合成
4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺
4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺
4-((1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺
和
4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺
步骤1：(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
将4-溴-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(1.5g，5.19mmol)、(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1.84g，5.71mmol)、碳酸钾(2.9g，20.76mmol)和Pd(dppf)Cl2(378mg，0.519mmol)在二氧杂环己烷(16mL)和水(4mL)中的混合物脱气并用氮气回填五次。将反应混合物在90℃处加热2h。将冷却的反应混合物用水(60mL)淬灭并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至30％)洗脱，得到(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1.6g，76％)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H25F2N3O3)406.19，实测值：406.20。
步骤2：(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
向(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1.6g，3.95mmol)在甲醇(100mL)中的搅拌溶液中添加Pd/C(1.6g，10％)。将反应混合物在氢气(2atm)下在25℃处搅拌16h。将反应混合物过滤。真空浓缩滤液。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至35％)洗脱，得到(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(1.5g，93％)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H27F2N3O3)408.20，实测值：408.20。
步骤3：(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃处，向(3-(7-氨基甲酰基-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(450mg，1.10mmol)在DMF(8mL)中的搅拌溶液中添加NCS(147mg，1.10mmol)。将反应混合物在25℃处搅拌3h。将反应混合物用水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至34％)洗脱，得到(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(400mg，82％)，为黄色固体。ESI-MS[M+H-tBu]+计算值(C21H26ClF2N3O3)386.16、388.16，实测值：386.10、388.10。
步骤4：4-(3-氨基环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐
向(3-(7-氨基甲酰基-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(400mg，0.9mmol)在甲醇(2mL)中的搅拌溶液中添加4M氯化氢的二氧杂环己烷溶液(5mL)。将反应混合物在25℃处搅拌1h。将所得混合物真空浓缩，得到4-(3-氨基环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐(340mg，粗物质)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C16H18ClF2N3O)342.11、344.11，实测值：342.15、344.15。
步骤5：4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
向4-(3-氨基环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺盐酸盐(300mg，0.88mmol)在DMF(6mL)中的搅拌溶液中添加2-丁炔酸(74mg，0.88mmol)、HATU(401mg，1.06mmol)和DIEA(581mg，4.4mmol，0.8mL)。将反应混合物在25℃处搅拌1h。将反应混合物用水(40mL)淬灭并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用甲醇的二氯甲烷溶液(0％至34％)洗脱，得到4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(300mg，84％)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H20ClF2N3O2)408.12、410.12，实测值：408.35、410.35。
步骤6：顺式和反式异构体的分离
将4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(300mg)通过制备型HPLC用以下条件分离：柱：XBridge Prep C18 OBD柱，19×150mm，5um；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：乙腈；流速：25mL/min；梯度：在7min内38％B至58％B；220nm。
顺式-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰 胺(化合物10-顺式)
保留时间＝4.95min(150mg，50％)
反式-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰 胺(化合物10-反式)
保留时间＝5.58min(130mg，43％)，为白色固体。
ESI-MS[M+H]+计算值(C20H20ClF2N3O2)408.12、410.12，实测值：408.10、410.10。
步骤7A：顺式异构体的分离
将顺式-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(150mg)通过手性制备型HPLC用以下条件分离：柱：CHIRALPAK IG，2×25cm，5um；流动相A：己烷(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：18mL/min；梯度：在19min内50％B至50％B；220/254nm。
4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物11-(1R,3S))或4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5,6-二氟-2- 甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝6.88min(57.6mg，38％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.33(s,1H),8.55(d,J＝6.0Hz,1H),7.98-7.74(m,2H),4.20(t,J＝12.4Hz,1H),4.01(s,1H),2.35(s,3H),2.06(d,J＝13.0Hz,1H),1.97(s,3H),1.95-1.49(m,7H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H20ClF2N3O2)408.12、410.12，实测值：408.30、410.30。
4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物11-(1S,3R))或4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5,6-二氟-2- 甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝16.692min(57.9mg，39％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.33(s,1H),8.55(d,J＝6.0Hz,1H),7.97-7.75(m,2H),4.18(t,J＝12.6Hz,1H),4.01(s,1H),2.35(s,3H),2.06(d,J＝13.0Hz,1H),1.97(s,3H),1.95-1.52(m,7H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H20ClF2N3O2)408.12、410.12，实测值：408.30、410.30。
步骤7B：反式异构体的分离
将反式-4-(3-(丁-2-炔酰氨基)环己基)-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(130mg)通过手性制备型HPLC用以下条件分离：柱：CHIRALPAK IG，2×25cm，5um；流动相A：己烷(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：18mL/min；梯度：在15min内50％B至50％B；220/254nm。
4-[(1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基]-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物11-(1R,3R))或4-[(1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基]-3-氯-5,6-二氟-2- 甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝7.396min(47.9mg，37％)，为灰白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.39(s,1H),8.52(d,J＝8.0Hz,1H),7.99-7.71(m,2H),4.04(t,J＝7.5Hz,1H),3.70(s,1H),2.35(s,3H),1.93(s,3H),1.90-1.60(m,6H),1.53-1.15(m,2H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H20ClF2N3O2)408.12、410.12，实测值：408.10、410.10。
4-[(1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基]-3-氯-5,6-二氟-2-甲基-1H-吲哚-7-甲 酰胺(化合物11-(1S,3S))或4-[(1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环己基]-3-氯-5,6-二氟-2- 甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝12.384min(46.5mg，36％)，为灰白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.39(s,1H),8.52(d,J＝8.0Hz,1H),7.91-7.84(m,2H),4.04(t,J＝7.5Hz,1H),3.70(s,1H),2.35(s,3H),1.93(s,3H),1.90-1.60(m,6H),1.53-1.15(m,2H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H20Cl2N3O2)408.12、410.12，实测值：408.15、410.15。
实施例12
合成
4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
和
4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺。
步骤1：(S)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环戊-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯
在-78℃处在氮气气氛下，向(S)-(3-氧代环戊基)氨基甲酸叔丁酯(1g，5.02mmol)和1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺(2.33g，6.52mmol)在THF(20mL)中的搅拌混合物中添加双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(2M的四氢呋喃溶液，7.53mL)。将反应混合物在-78℃处搅拌0.5h并在0℃处搅拌2h。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(60mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到(S)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环戊-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯(1.60g，粗物质)为棕色油状物。ESI-MS[M-H]-计算值(C11H16F3NO5S)330.07，实测值：330.20。
步骤2：(S)-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
将(S)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环戊-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯(1.60g，粗物质)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.59g，6.28mmol)、乙酸钾(1.42g，14.49mmol)和Pd(dppf)Cl2(353mg，0.483mmol)在1,4-二氧杂环己烷(20mL)中的混合物脱气并用氮气回填几次。将反应混合物在氮气下在100℃处搅拌2h。将反应混合物用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(3×60mL)萃取。将合并的有机层用盐水(60mL)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至20％)洗脱，得到(S)-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(550mg，粗物质)为棕色油状物。
步骤3：(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
将4-溴-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲腈(300mg，1.12mmol)、Pd(dppf)Cl2(82.18mg，0.112mmol)、(S)-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(451.5mg，粗物质)和磷酸钾(715mg，3.37mmol)在四氢呋喃(12mL)和水(3mL)中的混合物脱气并用氮气回填五次。将反应混合物在氮气下在60℃处搅拌8h。将冷却的混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(3×40mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(550mg，粗物质)为棕色油状物。ESI-MS[M-H]-计算值(C21H24FN3O2)368.19，实测值：368.15。
步骤4：(S)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
/>
向(S)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(550mg，粗物质)在乙醇(10mL)和水(10mL)中的混合物中添加parkin催化剂(63mg，0.148mmol)。将反应混合物在90℃处搅拌2小时。将冷却的混合物用水(60mL)稀释并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到(S)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，25％，经两个步骤)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H),8.01(s,1H),7.57-7.35(m,2H),7.23-7.05(m,1H),5.69-5.51(m,1H),4.84-4.55(m,1H),2.73-2.52(m,2H),2.43-2.35(m,1H),2.34(s,3H),2.07(s,3H),1.87-1.74(m,1H),1.41(s,9H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H26FN3O3)388.20，实测值：388.15。
步骤5：((1S)-3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊基)氨基甲酸叔丁酯
将(S)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，0.28mmol)和10％碳载钯(100mg)在乙醇(5mL)和四氢呋喃(5mL)中的混合物在氢气(2-3atm)下在25℃处搅拌12h。过滤反应混合物。将滤液真空浓缩，得到((1S)-3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，91％)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H28FN3O3)390.21，实测值：390.40。
步骤6：4-((3S)-3-氨基环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯
向((1S)-3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.26mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加三氟乙酸(2mL)。将反应混合物在25℃处搅拌1小时。将所得混合物真空浓缩，得到4-((3S)-3-氨基环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯(130mg，粗物质)，为棕色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C16H20FN3O)290.16,，实测值：290.15。
步骤7：4-((3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
向4-((3S)-3-氨基环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯(130mg，粗物质)在DMF(10mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(185mg，0.483mmol)、丁-2-炔酸(32.5mg，0.386mmol)和N,N-二异丙基乙胺(208mg，1.61mmol)。将反应混合物在25℃处搅拌2h。将所得混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(30mL×2)萃取。将合并的有机层用水(30mL×2)和盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC在以下条件下纯化：柱：柱：YMC-Actus Triart C18，30mm×150mm，5um；流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：乙腈；流速：60mL/min；梯度：在7min内36％B至56％B，254nm，将其在RT：6.50min下洗脱，得到4-((3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(50mg)。
步骤8：异构体的分离
4-((3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(50mg)，将其通过制备型手性SFC在以下条件下进一步分离：柱：DAICEL DCpak P4VP，2×25cm，5μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH(0.5％2M NH3-MeOH)-HPLC；流速：50mL/min；梯度：40％B；柱温：35℃；背压：100巴；254nm。
4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺 或4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝3.88min(15.8mg，31％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.66(s,1H),8.68(d,J＝7.3Hz,1H),7.96(s,1H),7.49-7.27(m,2H),4.35-4.08(m,1H),4.03-3.81(m,1H),2.38-2.23(m,6H),2.21-2.08(m,1H),2.06-1.80(m,7H),1.79-1.61(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H22FN3O2)356.17，实测值：356.10。
4-((1S,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺 或4-((1R,3S)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
保留时间＝4.93min(6.4mg，12％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.66(s,1H),8.67(d,J＝7.3Hz,1H),7.97(s,1H),7.53-7.23(m,2H),4.41-4.28(m,1H),4.16-4.04(m,1H),2.42-2.24(m,6H),2.18-2.02(m,3H),1.96(s,3H),1.92-1.77(m,2H),1.71-1.53(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H22FN3O2)356.17，实测值：356.10。
实施例13
合成
4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
和
4-((1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
步骤1：(R)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环戊-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯
在-78℃处在氮气气氛下，向(R)-(3-氧代环戊基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g，5.02mmol)和1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺(2.33g，6.52mmol)在THF(15mL)中的搅拌混合物中添加双(三甲基甲硅烷基)酰胺钠(2M的四氢呋喃溶液，7.53mL)。将反应混合物在-78℃处搅拌0.5h并在0℃处搅拌2h。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(60mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到(R)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环戊-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯(1.50g，粗物质)，为棕色油状物。ESI-MS[M-H]-计算值(C11H16F3NO5S)330.07，实测值：330.15。
步骤2：(R)-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯。
将(R)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环戊-1-烯-1-基三氟甲磺酸酯(1.50g，粗物质)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.38g，5.43mmol)、乙酸钾(1.33g，13.58mmol)和Pd(dppf)Cl2(331mg，0.452mmol)在1,4-二氧杂环己烷(20mL)中的混合物脱气并用氮气回填几次。将反应混合物在氮气下在100℃处搅拌2h。将反应混合物用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(3×80mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯的石油醚溶液(0％至20％)洗脱，得到(R)-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(650mg，粗物质)，为棕色油状物。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.08-6.86(m,1H),6.28-6.14(m,1H),4.68-4.38(m,1H),2.32-2.06(m,2H),1.60-1.41(m,2H),1.38(s,9H),1.24-1.20(m,12H)。
步骤3：(R)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯。
将4-溴-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲腈(300mg，1.12mmol)、Pd(dppf)Cl2(82.18mg，0.112mmol)、(R)-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(451mg，粗物质)和磷酸钾(715mg，3.37mmol)在四氢呋喃(16mL)和水(4mL)中的混合物脱气并用氮气回填五次。将反应混合物在氮气下在60℃处搅拌8h。将冷却的混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到(R)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(600mg，粗物质)，为棕色油状物。ESI-MS[M-H]-计算值(C21H24FN3O2)368.19，实测值：368.25。
步骤4：(R)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯。
向(R)-(3-(7-氰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(600mg，粗物质)在乙醇(15mL)和水(15mL)中的混合物添加Parkin催化剂(69mg，0.162mmol)。将反应混合物在90℃处搅拌2h。将冷却的混合物用水(80mL)稀释并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到(R)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(280mg，64％，经两个步骤)，为黄色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H),8.01(s,1H),7.62-7.34(m,2H),7.25-7.01(m,1H),5.72-5.48(m,1H),4.85-4.49(m,1H),2.80-2.53(m,2H),2.43-2.21(m,4H),2.07(s,3H),1.90-1.74(m,1H),1.40(s,9H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H26FN3O3)388.20，实测值：388.35。
步骤5：((1R)-3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊基)氨基甲酸叔丁酯。
将(R)-(3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯(280mg，0.722mmol)和10％碳载钯(300mg)在乙醇(10mL)和四氢呋喃(10mL)中的混合物在氢气(2-3atm)下在25℃处搅拌12h。过滤反应混合物。将滤液真空浓缩，得到((1R)-3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊基)氨基甲酸叔丁酯(270mg，96％)，为黄色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C21H28FN3O3)390.21，实测值：390.40。
步骤6：4-((3R)-3-氨基环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯。
向((1R)-3-(7-氨基甲酰基-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-4-基)环戊基)氨基甲酸叔丁酯(270mg，0.693mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加三氟乙酸(2mL)。将反应混合物在25℃处搅拌2h。将所得混合物真空浓缩，得到4-((3R)-3-氨基环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯(350mg，粗物质)，为棕色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C16H20FN3O)290.16,，实测值：290.10。
步骤7：4-((3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺
向4-((3R)-3-氨基环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸酯(350mg，粗物质)在DMF(10mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(497mg，1.30mmol)、丁-2-炔酸(87.5mg，1.04mmol)和N,N-二异丙基乙胺(560mg，4.34mmol)。将反应混合物在20℃处搅拌2h。将所得混合物用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用水(50mL×2)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。
将残余物通过制备型HPLC用以下条件纯化：柱：Xselect CSH OBD柱，30×150mm，5um，流动相A：水(10mmol/L NH4HCO3+0.1％NH3.H2O)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：在7min内25B至51B；220nm；RT1：6.37min，得到4-((3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(140mg，57％，经两个步骤)，为白色固体。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H22FN3O2)356.17，实测值：356.10。
步骤8：异构体的分离
将4-((3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(140mg)通过制备型手性SFC用以下条件分离：柱：DAICEL DCpak P4VP，2×25cm，5μm；流动相A：CO2，流动相B：MeOH(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC；流速：50mL/min；梯度：38％B；柱温：35℃；背压：100巴；254nm。
4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺或4-((1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(化合物 13-(1R,3R))
保留时间＝4.35min(56.7mg，40％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.66(s,1H),8.68(d,J＝7.4Hz,1H),7.97(s,1H),7.48-7.28(m,2H),4.26-4.04(m,1H),4.01-3.82(m,1H),2.39-2.25(m,6H),2.22-2.06(m,1H),2.05-1.81(m,7H),1.80-1.66(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H22FN3O2)356.17，实测值：356.10。
4-((1R,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺 (化合物13-(1R,3R))或4-((1S,3R)-3-(丁-2-炔酰氨基)环戊基)-5-氟-2,3-二甲基-1H-吲 哚-7-甲酰胺
保留时间＝5.57min(37.0mg，26％)，为白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.66(s,1H),8.67(d,J＝7.3Hz,1H),7.97(s,1H),7.49-7.25(m,2H),4.41-4.27(m,1H),4.19-4.01(m,1H),2.41-2.28(m,6H),2.22-2.01(m,3H),1.96(s,3H),1.92-1.74(m,2H),1.71-1.51(m,1H)。ESI-MS[M+H]+计算值(C20H22FN3O2)356.17，实测值：356.15。
实施例14
BTK IC50
以所需浓度制备化合物(测试或对照)在DMSO中的溶液，并使用TECAN EVO200在384pp板中通过3倍稀释连续稀释至11个浓度。使用Echo550将20nL原液转移至384板。DMSO用作载体对照。
制备两种单独的溶液—含有MgCl2(10mM)、Brij-35(0.01％)、DTT(2mM)、BSA(0.05％)、EGTA(1mM)、HEPE(pH7.5)(50mM)、FLPeptide(6uM)和ATP(4mM)的ATP溶液；以及含有MgCl2(10mM)、Brij-35(0.01％)、DTT(2mM)、BSA(0.05％)、EGTA(1mM)、HEPE(pH7.5)(50mM)和BTK(2.67nM)的BTK溶液。(BTK获自Carna；FLPeptide2获自PerkinElmer并且依鲁替尼获自Selleck)。向每个孔中添加5uL ATP溶液，然后添加15uL BTK溶液以引发反应。(注意每个孔的最终体积为20uL，含有MgCl2(10mM)、Brij-35(0.01％)、DTT(2mM)、BSA(0.05％)，EGTA(1mM)、HEPE(pH7.5)(50mM)、FLPeptide(1.5uM)、ATP(1mM)和BTK(2nM))。将板在室温处温育90分钟，然后添加终止缓冲液(75uL，含有0.5M EDTA)以终止反应。使用EZ读板器分析来自每个孔的样品。
根据以下公式使用读取转化率(CR)计算剩余活性％：
使用XLFit(公式201)通过浮动底部和顶部计算IC50。
对于实施例1-13中所述的化合物，BTK IC50值提供于表5中，其中：
“A”表示<1nM的IC50；
“B”表示1-10nM的IC50；并且
“C”表示>10nM的IC50。
表5：BTK IC50(nM)
实施例15
用于确定RAMOS B细胞中的BTK活性的测定
在测定前一天，将Ramos B细胞接种于接种培养基(含有1％FBS和1×青霉素-链霉素的RPMI1640培养基)中。在测定当天，按照FLIRP钙6测定试剂盒的手册制备2X染料溶液：用测定缓冲液(20mM HEPES的1X HBSS溶液，pH7.4)稀释染料；添加丙磺舒至5mM的最终浓度；剧烈涡旋1分钟-2分钟。通过离心收集细胞，将沉淀重悬于接种培养基中。计数后，将细胞以3×106个/ml的密度重悬于接种培养基中。向细胞悬浮液中添加等体积的2X染料溶液。然后将细胞以20μl/孔接种到384孔聚-D-赖氨酸包被的板中。将板以1000rpm离心3分钟，然后在37℃处温育2小时，然后在25℃再温育15分钟。在稀释缓冲液(20mM HEPES和0.1％BSA的1X HBSS溶液，pH7.4)中以3X浓度制备化合物。通过使用Echo 550(Labcyte)将连续稀释的化合物从源板转移至384孔化合物板。向化合物板中添加20μl/孔化合物稀释缓冲液，并在板振荡器上混合2分钟。在稀释缓冲液中制备4X EC80的抗IgM(JacksonImmunoResearch)并以20μl/孔添加到新的384孔化合物板中。在25℃处在黑暗中温育60分钟后；将细胞板，含有4XEC80的抗IgM的化合物板和FLIPR末端置于FLIPR(分子装置)中。通过FLIPR将10ul/孔的4X EC80抗IgM转移到细胞板中。以1秒间隔读板160秒。关于实施例1-13中所述化合物的Ramos活性的IC50值小于10nM。
实施例16
用于确定BTK失活速率的测定
本实施例采用基于BTK活性位点探针的测定，其在人和小鼠血液或小鼠脑裂解物中使用生物素化的共价抑制剂。
实验程序
人全血化合物处理和裂解
人全血获自StemExpress(Stockton，CA)，并将其保持在环境温度下直至实验时间，其在收集后约24小时。
1.通过使用10x裂解缓冲液(Cell Signaling Technology，#9083S，Danvers，MA)、分子生物学级水、100x Halt蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(ThermoFisher，#78440，Waltham，MA)和BTK活性位点探针(最终：0.4μM)制备1x裂解缓冲液。这在每个实验日新鲜制备。
2.将裂解缓冲液以30μL的体积添加到V型底板(Greiner Bio-One，#651261，Monroe，NC)中的所有孔中，以准备用于时间点收集。
3.将化合物在100％DMSO中重构为10mM的储液，并在DMSO中以2倍系列稀释度稀释以生成8点曲线，最后一点仅为DMSO。
4.使用1μL制备的DMSO滴定到299μL 1x PBS中，形成工作的10x稀释系列，以便保持DMSO恒定(0.03％DMSO终浓度)。
5.将全血以每孔225μL的体积添加到新的96w v型底板中。
6.对于化合物处理，将25μL在PBS中的10x系列稀释液添加到225μL全血中，然后简短地上下吸移两次。
7.然后用塑料盖覆盖板并在37℃处温育5、10、15、30、60分钟。
8.在每个时间点，从每个柱中抽取30μL经化合物或DMSO(媒介物)处理的血液，并添加到含有30μL补充有BTK活性位点探针的裂解缓冲液的预加载的收集板中。然后通过上下吸移两次来简短地混合样品。
9.将具有收集和裂解的样品的板在室温处振荡并在旋转器上用密封膜覆盖60分钟。将这些样品新鲜用于经由ELISA检测，如果需要重复，将剩余样品冷冻在-80℃处。
使用ELISA确定未被占据的BTK的量
1.当裂解样品时，将所有链霉亲和素预包被的板(R&D Systems，#CP004，Minneapolis，MN)置于室温。
2.制备测定缓冲液1，1x PBS+0.05％Tween 20+1％BSA，过滤，并且当不使用时储存在4℃处。
3.使用该测定缓冲液1，以所有样品所需的量制备测定缓冲液+1x蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合物(PIC)。
4.将体积为90μL/孔的测定缓冲液+PIC添加到血样的ELISA板中。
5.将体积为50μL/孔的测定缓冲液+PIC添加到脑样品的ELISA板中。
6.将裂解的血样(10μL)添加到ELISA板中。
7.将裂解的脑样品(50μL)添加到ELISA板中。
8.将总共100μL/孔的样品一式两份加载到ELISA板中，并保持在板中，密封，在4℃处过夜。
9.第二天，使用洗板机以250μL/孔用1x洗涤缓冲液(1x PBS+0.05％Tween 20)洗涤板三次。
10.每次将板倒置以排出所有流体，并在干净的纸巾上吸干以去除剩余的液体。
11.制备测定缓冲液2(1x PBS+0.05％Tween 20+0.5％BSA)，并且当不使用时保存在4℃处。
12.将一抗α-BTK(克隆D3H5，Cell Signaling Technology#8547S，Danvers，MA)在测定缓冲液2中以1:500稀释。
13.以100μL/孔添加稀释的a-BTK抗体。
14.用粘性膜覆盖板并在室温处温育90分钟。
15.使用洗板机用1X洗涤缓冲液以250μL/孔洗涤板三次。
16.每次将板倒置以排出所有流体，并在干净的纸巾上吸干以去除剩余的液体。
17.将检测抗体(Jackson Immuno Research，#711-005-152)用测定缓冲液2以1:2,500稀释。
18.以100μL/孔添加稀释的抗体。
19.用粘性膜覆盖板并在室温处温育一小时。
20.使用洗板机用1x洗涤缓冲液以250μL/孔洗涤板三次。
21.每次将板倒置以排出所有流体，并在干净的纸巾上吸干以去除剩余的液体。
22.将预热的TMB底物(ThermoFisher，#34029)以100μL/孔添加到板中。
23.将板在室温处在黑暗中温育3-5分钟。
24.通过添加50μL/孔的2N硫酸(H2SO4)(R&D Systems，#DY994)停止反应。
25.在Pherastar读板机(BMG，Germany)中以450nm和570nm(校正波长)的波长读取板。
数据分析
使用GraphPad Prism，将原始吸光度数据作为时间(x轴，分钟)对浓度(y轴，nM)作图，并拟合至单相衰减模型(Y＝(Y0-平台)*exp(-K*X)+平台)。通过该模型计算每种浓度的最佳拟合值，并在由GraphPad提供的结果表格汇总中报告为K(抑制速率常数，kobs)。
再次在Prism中，将每种浓度的化合物的速率常数(kobs)相对于化合物浓度重新作图，并拟合至双曲线方程(Michaelis-Menten模型)。使用该模型，取Vmax(kinact)和Km(Ki)的最佳拟合值并用于通过式(kinact/Ki)*10,000确定全血中失活的二阶速率常数，然后将其表示为计算的BTK失活速率常数(kinact/Ki)10-4nM-1min-1(并在重复测量的情况下取平均值)。
对于所提及的化合物，计算的BTK失活速率常数提供于表6中，其中：
“A”表示<5nM的Kinact/Ki；
“B”表示5-10nM的Kinact/Ki；并且
“C”表示>10nM的Kinact/Ki。
表6：BTK IC50(nM)
实施例17
用于确定B细胞中对BTK的抑制的测定
为了研究B细胞中对BTK的抑制作用，在人全血(hWB)过夜刺激后测量淋巴细胞活化标志物分化簇69(CD69)的上调。
将供试品(TA)的10mM储液在DMSO中稀释至2mM，随后在DMSO中进行8次连续1:4系列稀释。然后将系列稀释的化合物在测定培养基(RPMI+1％HI-FBS)中进一步逐步稀释(1:10和1:5)，以产生用于生成9点剂量-响应曲线(DRC)的4x工作浓度。
将前一天收集的NaHep hWB在测定培养基中以1:1(v/v)稀释，并且将70μL稀释的hWB添加到平底96孔板的每个孔中，同时排除周边孔。对于每个板，将25μL含有媒介物的测定培养基添加到指定用于非刺激(Bkg)和刺激(Veh)对照条件的一式三份的孔中，以实现0.5％(v/v)的最终DMSO。接着，在0.5％DMSO(v/v)中以在0.153nM至10,000nM范围内的终浓度将25μL的4x工作浓度的TA添加到一式三份的孔中。预处理1h后，添加5μL的20x抗IgD-葡聚糖，导致终浓度为1ng/mL，用于刺激B细胞(并向非刺激对照孔中添加等体积的培养基)。混合后，将板移至湿润的5％CO2、37℃培养箱中过夜(约18h)。通过添加抗体的主混合物(1μL/孔的BV421抗CD19、FITC抗CD45、PE抗CD69、PerCP/Cy5.5抗CD3)加上0.5μL/孔的eFluor506可固定活力染料来完成用于荧光激活细胞分选(FACS)的表面染色。混合后，将样品转移至96孔深孔板中，用于RBC裂解并使用1x的组合缓冲液固定。将板以300×g离心5分钟，吸取上清液，并将沉淀的细胞重悬于600μL的FACS缓冲液中，然后在Attune NxT流式细胞仪上采集。对于FACS分析，对活的CD45+WBC细胞进行门控以进一步询问CD19+B细胞，并且对于每种浓度的化合物报告该群体内CD69+事件的百分比。
通过将原始值代入以下公式中来确定抑制％的计算：
在该公式中，0％抑制是相当于Veh的TA的响应水平，而100％抑制被定义为相当于如针对每个测定分别定义的Bkg的TA的响应水平。使用GraphPad Prism软件，使用非线性、4-参数、可变斜率曲线拟合函数，从每个TA浓度下的一式三份值生成抑制性DRC。
通过该实验，用下表7中列出的TA离体预处理hWB各自提供B细胞活化的抑制，如通过CD69上调所测量的，其中平均IC50小于35nM。
表7：hWB中的CD69抑制IC50(nM)
本说明书中提到的和/或专利申请数据表中所列的所有美国专利、美国专利申请公布、美国专利申请、外国专利、外国专利申请和非专利公布均全文以引用方式并入本文。为此，本申请要求2021年1月12日提交的美国临时申请号63/136,594的优先权权益，该美国临时申请据此全文以引用方式并入。

Claims (37)

1.一种具有式(I)的结构的化合物：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其中：
RB为-H或-Me；
RC为-CH＝CH2、-C≡CH或-C≡C-CH3；
RA为
其中
RA1为-H、-F、-Cl、-CH3或-CN；并且
RA2为-H或-F。
2.根据权利要求1所述的化合物，其具有式(IA)的结构：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其中：
RB为H或Me；
RC为-CH＝CH2或-C≡C-CH3；
RA为
其中
RA1为-H、-F、-Cl、-CH3或-CN；并且
RA2为H或F。
3.根据权利要求1所述的化合物，其具有式I-A-(S)或I-A-(R)的结构：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其中：
RB为H或Me；
RC为-CH＝CH2或-C≡C-CH3；
RA为
其中
RA1为-H、-F、-Cl、-CH3或-CN；并且
RA2为H或F。
4.根据权利要求1所述的化合物，其具有式(IB)的结构：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其中：
RB为H或Me；
RC为-CH＝CH2或-C≡C-CH3；
RA为
其中
RA1为-H、-F、-Cl、-CH3或-CN；并且
RA2为H或F。
5.根据权利要求1所述的化合物，其具有式I-B-(S)或I-B-(R)的结构：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其中：
RB为H或Me；
RC为-CH＝CH2或-C≡C-CH3；
RA为
其中
RA1为-H、-F、-Cl、-CH3或-CN；并且
RA2为H或F。
6.根据权利要求1所述的化合物，其具有式(IC)的结构：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其中：
RB为H或Me；
RC为-CH＝CH2或-C≡C-CH3；
RA为
其中
RA1为-H、-F、-Cl、-CH3或-CN；并且
RA2为H或F。
7.根据权利要求1所述的化合物，其具有式I-C-(S)或I-C-(R)的结构：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其中：
RB为H或Me；
RC为-CH＝CH2或-C≡C-CH3；
RA为
其中
RA1为-H、-F、-Cl、-CH3或-CN；并且
RA2为H或F。
8.根据权利要求1所述的化合物，其具有式1-C-(1R,3S)、1-C-(1S,3R)、1-C-(1R,3R)或1-C-(1S,3S)的结构：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其中：
RB为H或Me；
RC为-CH＝CH2或-C≡C-CH3；
RA为
其中
RA1为-H、-F、-Cl、-CH3或-CN；并且
RA2为H或F。
9.根据权利要求1所述的化合物，其具有式(ID)的结构：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其中：
RB为H或Me；
RC为-CH＝CH2或-C≡C-CH3；
RA为
其中
RA1为-H、-F、-Cl、-CH3或-CN；并且
RA2为H或F。
10.根据权利要求1所述的化合物，其具有式1-D-(1R,3S)、1-D-(1S,3R)、
1-D-(1R,3R)或1-D-(1S,3S)的结构：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其中：
RB为H或Me；
RC为-CH＝CH2或-C≡C-CH3；
RA为
其中
RA1为-H、-F、-Cl、-CH3或-CN；并且
RA2为H或F。
11.根据权利要求1所述的化合物，其中RB为H。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中RB为Me。
13.根据权利要求1所述的化合物，其中RC为-CH＝CH2。
14.根据权利要求1所述的化合物，其中RC为-C≡C-CH3。
15.根据权利要求1所述的化合物，其中RA1为-Cl、-F、-CH3或-CN。
16.根据权利要求1所述的化合物，其中RA1为-Cl。
17.根据权利要求1所述的化合物，其中RA2为-H。
18.根据权利要求1所述的化合物，其中RA2为-F。
19.根据权利要求1所述的化合物，其中
RA1为-Cl；
RA2为-H；并且
RC为-C≡C-CH3。
20.根据权利要求1所述的化合物，其中
RA1为-CN；
RA2为-F；并且
RC为-C≡C-CH3。
21.根据权利要求2、4、6或9中任一项所述的化合物，其中
RA1为-Cl、-CH3；
RA2为-H或-F；
RB为-H或-Me；并且
RC为-C≡C-CH3。
22.一种具有表1、或表2、或表3、或表4中所列的结构的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素。
23.一种化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其具有以下结构之一：
24.一种化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其具有以下结构之一：
25.一种化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，其具有以下结构之一：
26.一种根据权利要求1至25中任一项所述的化合物的药学上可接受的盐。
27.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体或同位素，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
28.一种抑制蛋白激酶的方法，所述方法包括使所述蛋白激酶与有效量的根据权利要求1至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体、同位素、或药物组合物接触。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述蛋白激酶是BTK。
30.一种用于治疗BTK依赖性病症的方法，所述方法包括向对其有需要的受试者施用有效量的根据权利要求1至25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体、同位素、或药物组合物。
31.根据权利要求30所述的方法，其中，其中所述BTK依赖性病症是癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病或血栓栓塞性疾病。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是多发性硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣、干燥综合征或***性红斑狼疮。
33.根据权利要求26所述的方法，其中所述炎性疾病是荨麻疹。
34.根据权利要求1至25中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、互变异构体、外消旋体、同位素、或药物组合物在制造药物中的用途。
35.根据权利要求34所述的用途，其中所述药物用于治疗癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病或血栓栓塞性疾病。
36.根据权利要求35所述的用途，其中所述自身免疫性疾病是多发性硬化、类风湿性关节炎、牛皮癣、干燥综合征或***性红斑狼疮。
37.根据权利要求35所述的用途，其中所述炎性疾病是荨麻疹。
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