CN116970665B - 一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法及其应用 - Google Patents
一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116970665B CN116970665B CN202311226231.XA CN202311226231A CN116970665B CN 116970665 B CN116970665 B CN 116970665B CN 202311226231 A CN202311226231 A CN 202311226231A CN 116970665 B CN116970665 B CN 116970665B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- golden
- tremella aurantialba
- polysaccharide
- fungus
- culture medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 90
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 90
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 90
- 241000117280 Naematelia aurantialba Species 0.000 title claims abstract description 83
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims abstract description 80
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 41
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 41
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 29
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 42
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 27
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 22
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 20
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 20
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 20
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 18
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 10
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 10
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 10
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 claims description 5
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 4
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 3
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 claims 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 abstract description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 abstract description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 5
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- 244000028550 Auricularia auricula Species 0.000 description 15
- 235000000023 Auricularia auricula Nutrition 0.000 description 15
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 description 14
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 12
- 241001506047 Tremella Species 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 8
- 241001205401 Aspergillus cristatus Species 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 description 6
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 6
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 description 6
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 3
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 3
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 3
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 Milan Chemical compound 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YVNQAIFQFWTPLQ-UHFFFAOYSA-O [4-[[4-(4-ethoxyanilino)phenyl]-[4-[ethyl-[(3-sulfophenyl)methyl]amino]-2-methylphenyl]methylidene]-3-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]-ethyl-[(3-sulfophenyl)methyl]azanium Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C(=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S(O)(=O)=O)C)C=2C(=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S(O)(=O)=O)C)C=C1 YVNQAIFQFWTPLQ-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 2
- FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitro-1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C2=C1 FFRBMBIXVSCUFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000221377 Auricularia Species 0.000 description 1
- 235000017166 Bambusa arundinacea Nutrition 0.000 description 1
- 235000017491 Bambusa tulda Nutrition 0.000 description 1
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 1
- 102000030523 Catechol oxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010031396 Catechol oxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- 241001136487 Eurotium Species 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000082204 Phyllostachys viridis Species 0.000 description 1
- 235000015334 Phyllostachys viridis Nutrition 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001136486 Trichocomaceae Species 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000011425 bamboo Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000011449 brick Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004192 high performance gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 239000011546 protein dye Substances 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000194 supercritical-fluid extraction Methods 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
- A61K8/73—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/36—Adaptation or attenuation of cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，具体步骤包括准备菌种、制备种子液、接种发酵以及过滤、干燥等后处理步骤。本发明通过金花菌进行发酵，合理控制加工工艺可减小金耳多糖的分子量，使金耳多糖在化妆品应用中更加便于吸收。本发明提取方法简单，提取条件温和，避免了使用各类有机试剂，既安全环保，又减少外界因素对生物活性的影响；提取得到的金耳多糖纯度高，多糖分子量小，且能有效保持多糖的生物活性；可广泛使用于化妆品产品中，具有优异的抗氧化、保湿作用，促进了金耳深加工产业的发展，为人民创造经济效益。
Description
技术领域
本发明涉及微生物提取技术领域，具体涉及一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法及其应用。
背景技术
金耳(Tremella aurantialba)，隶属于异担子菌纲、银耳目、银耳科、银耳属，因其颜色金黄，又称金黄银耳，形似人脑，又称脑耳，还有黄耳、黄木耳等称谓，是珍贵的食药用真菌，为我国特有菌种。金耳含有丰富的脂肪、蛋白质以及磷、硫、锰、铁等微量元素，并且含有18种氨基酸，其营养价值非常高。
冠突散囊菌(Eurotium cristatum)是一种有益真菌，属于散囊菌目发菌科散囊属，其子囊孢子金黄色，形似米兰，在成品茯砖中肉眼可见，在茯砖茶的生产过程中是产生“金花”的优势菌，因此俗称为“金花”菌。同时冠突散囊菌也是形成茯砖茶独特品质的主要因素。由于冠突散囊菌的作用，使得茯砖茶的色、香、味不同于其他茶类，发酵后具有多种新增物质，赋予茯砖茶多种功效，如抗氧化、促消化、降脂减肥、抑菌、抗癌等。2016年12月7日，国家卫计委新食品原料受理***接受了冠突散囊菌(CGMCC NO.8730)新食品原料申请。
冠突散囊菌产生多酚氧化酶、果胶酶、纤维素酶、蛋白酶等胞外酶，催化金耳中物质的氧化、聚合、降解、转化；可将纤维素和多糖等大分子物质转化成小分子物质。
研究表明食用菌及其多糖可同时预防治疗多种人类疾病，已有大量关于食用菌多糖保健功效的研究报道，其中已经很多商品化生产，这些保健功效与食用菌的生物活性化合物有关，其中包括多糖。活性多糖表现出了潜在的对抗肥胖、抗糖尿病、抗癌、抗微生物和抗病毒等多种药理作用。人们在脂肪细胞水平、啮齿动物水平和人类水平探讨了其相关的抗氧化、抗炎和免疫调节活性。多糖作用机制还包括对肠道微生物群的作用，其可以作为消化***中的益生元。金耳多糖具有调节免疫、抗辐射、抗溃疡和抗炎作用，可降低机体血糖、血脂等。目前市场上金耳加工产品种类较少，金耳产业发展较慢，金耳多糖相关产品的研发，能够增加金耳的附加值，促进金耳产业发展。多糖提取的方法主要有水提醇沉法、酸碱浸提法、酶法、超声波法、微波法和超临界流体萃取法等，但是较难保持多糖的生物活性及多糖分子量大，不易吸收的问题。中国专利CN115746158A公开了一种金耳多糖及其制备方法和应用，其制得的多糖产率高，工艺简单可行，但是该专利使用水提醇沉法，使用大量的有机溶剂进行多糖成分的提取，并且较难以保持多糖的生物活性且多糖分子量大。
发明内容
针对上述问题，本发明提供一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，克服现有提取方法的不足，保持金耳多糖的生物活性，降低金耳多糖分子量。
本发明一方面提供一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其具体步骤包括：
步骤S1：准备菌种：对茯砖茶中生长的金花菌进行分离纯化、驯化，得到驯化后的菌株；
步骤S2：制备种子液：将驯化后的菌株接入液体培养基，培养2-5天；
步骤S3：接种发酵：将干燥金耳粉碎过40-80目筛后置于发酵罐，加入料液比为1:60-100的水，灭菌，将金花菌种子液接种至发酵罐中，在温度为25-35℃、搅拌转速为100-300r/min条件下发酵2-7天后得到发酵液；
步骤S4：后处理：将发酵液离心，取上清液并过滤，干燥即得所述金耳多糖。
作为一种优选的技术方案，所述步骤S1中，分离纯化的具体步骤为：将茯砖茶样品切开，从中挑取一块长有金花孢子的茶叶，在无菌条件下接种至PDA培养基上，选择金花菌菌株进行传代培养，直至培养基中只有金花菌，达到纯化的目的。
作为一种优选的技术方案，所述PDA培养基的原料包括：马铃薯200.0g，葡萄糖20.0g，琼脂20.0g，蒸馏水1000mL。
通过分离纯化获得的金花菌，可使用常规鉴定方法进行鉴定，确定其为金花菌。例如可列举的鉴定方法有：形态学鉴定法、分子生物学鉴定法。
本发明的步骤S1中通过驯化，使金花菌从PDA培养基阶段快速适应主要由金耳成分组成的培养基，金花菌能在金耳上更快生长。
作为一种优选的技术方案，所述步骤S1中驯化的操作步骤为：将在PDA培养基上纯化的金花菌，接种到含有蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于28℃—30℃中培养，待金花菌长满整个平板。
作为一种优选的技术方案，所述金耳水溶液培养基的原料包括：200g金耳，1000ml蒸馏水，琼脂30g，蔗糖。
优选的，所述蔗糖的质量含量为培养基原料总量的0%-2%。例如，可列举的有：0%、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%。本发明中并不仅限于所列举的数值，该数值范围内其他未列举的数值同样适用。
所述金耳水溶液培养基的制备方法为：将金耳和蒸馏水混合煮开，过滤，加入琼脂，加入蔗糖，灭菌锅中115℃灭菌20min，倒平板，冷却即得。
作为一种更优选的技术方案，所述步骤S1中驯化的操作步骤为：
（1）将在PDA培养基上纯化的金花菌，接种到含有2％蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于28℃—30℃中培养，待金花菌长满整个平板；（2）将上述金花菌接种到含有1.5％蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于28℃—32℃中培养，待金花菌长满整个平板；（3）将上述金花菌接种到含有1％蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于28℃—32℃中培养，待金花菌长满整个平板；（4）将上述金花菌接种到含有0.5％蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于28℃—32℃中培养，待金花菌长满整个平板；（5）将上述金花菌接种到不含蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于28℃—32℃中培养，待金花菌长满整个平板。
发明人在实验中发现，将经分离纯化鉴定得到的金花菌直接接种至含金耳的发酵罐中，金花菌很难生长，长满至少需要1个月。本发明中通过对金花菌进行驯化处理，能使金花菌菌种逐步适应不含蔗糖的发酵环境，使发酵更为快速，减少发酵时间，驯化后的金花菌，在相同条件下，长满只需5天，大大减少了生长时间，提高制备效率。
作为一种优选的技术方案，所述步骤S2中，驯化后的菌种的接种量为1%-3%。
在进行菌种接种时，若接种量过小，菌丝生长发育缓慢，菌丝群体发育的世代多，群体中各个体间年轻和衰老程度差异大，繁殖后代时，不容易接近同步生长，不稳定，影响产物产量。接种量过大则前期代谢迅速，菌丝提前衰老，产物合成后劲不足，后期单位不高，又容易造成菌丝浓度过大，破坏了发酵液应有的物理性状，也影响产物合成。
作为一种优选的技术方案，所述步骤S2中，液体培养基的制备方法为：将200g金耳，1000ml蒸馏水混合煮开，过滤，灭菌锅中115℃灭菌20min，倒平板，冷却即得。
作为一种更优选的技术方案，所述步骤S2中，制备种子液的具体步骤为：于液体培养基中装量 100ml/300ml，pH7.0， 115℃灭菌20min，降温后备用，然后将驯化好的金花菌菌株的菌苔表面挑取菌种，接入灭菌后的液体培养液中，摇床培养，摇床发酵温度28℃，转速140r/min，培养时间2-5天，得到金花菌种子液。
作为一种优选的技术方案，所述步骤S2中所得到的金花菌种子液的浓度为1×105 ～8cfu/ml。
作为一种优选的技术方案，所述步骤S3中，灭菌的条件为62-65℃，保持30min。
作为一种优选的技术方案，所述步骤S3中，金花菌种子液的接种量为5-10%。
作为一种优选的技术方案，所述步骤S4中，离心速率为 8000 r/min。
作为一种优选的技术方案，所述步骤S4中，过滤使用的过滤器孔径为0.1-1μm。
为了更好的保持多糖成分的结构和活性，作为一种优选的技术方案，所述步骤S4中，干燥为真空冷冻干燥。真空度＜10Pa，温度为-50 ℃，干燥时间为12-24 h。本发明的干燥时间可根据物料的量进行合理调整。
本发明中，采用真空冷冻干燥，避免了高温干燥对多糖结构成分和活性的影响，产品的含水量更低。
本发明另一方面提供一种金耳多糖在化妆品中的应用。将金耳多糖用于化妆品中，具有抗氧化、保湿作用，促进了金耳深加工产业的发展，为人民创造经济效益。
本申请中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备，均来自市售产品。本申请中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
有益效果
本发明使用金花菌进行金耳多糖的发酵提取，提取方法简单，提取条件温和，避免了使用各类有机试剂，既安全环保，又减少外界因素对生物活性的影响；提取得到的金耳多糖纯度高，多糖分子量小，且能有效保持多糖的生物活性；可广泛使用于化妆品产品中，具有优异的抗氧化、保湿作用，促进了金耳深加工产业的发展，为人民创造经济效益。
附图说明
图1为本发明实施例3的金耳多糖样品图；
图2为本发明实施例3的金耳多糖样品图；
图3为本发明进行硫酸苯酚法测试多糖含量时的葡萄糖标准曲线图；
图4为本发明进行考马斯亮蓝法测蛋白含量时的蛋白标准曲线图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例
实施例1
本实施例提供一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其具体步骤包括：
步骤S1：准备菌种：对茯砖茶中生长的金花菌进行分离纯化、驯化 ，得到驯化后的菌株；
将茯砖茶样品切开，从中挑取一块长有金花孢子的茶叶，在无菌条件下接种至PDA培养基上，选择金花菌菌株进行传代培养，直至培养基中只有金花菌，达到纯化的目的；通过分离纯化获得的金花菌，使用常规鉴定方法进行鉴定，确定其为金花菌。
PDA培养基的原料包括：马铃薯200.0g，葡萄糖20.0g，琼脂20.0g，蒸馏水1000mL；
驯化的具体步骤为：（1）将在PDA培养基上纯化的金花菌，接种到含有2％蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于30℃中培养，待金花菌长满整个平板；（2）将上述金花菌接种到含有1.5％蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于30℃中培养，待金花菌长满整个平板；（3）将上述金花菌接种到含有1％蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于30℃中培养，待金花菌长满整个平板；（4）将上述金花菌接种到含有0.5％蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于30℃中培养，待金花菌长满整个平板；（5）将上述金花菌接种到不含蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于30℃中培养，待金花菌长满整个平板。
步骤S2：制备种子液：于液体培养基中装量 100ml/300ml，pH7.0， 115℃灭菌20min，降温后备用，然后将驯化好的金花菌菌株的菌苔表面挑取菌种，以1%的接种量接入灭菌后的液体培养液中，摇床培养，摇床发酵温度28℃，转速140r/min，培养时间4天，得到金花菌种子液；
液体培养基的制备方法为：将200g金耳，1000ml蒸馏水混合煮开，过滤，灭菌锅中115℃灭菌20min，倒平板，冷却即得。
步骤S3：接种发酵：将干燥金耳粉碎过60目筛后置于发酵罐，加入料液比为1:60的水，加热到65℃，灭菌30min，冷却后将金花菌种子液接种至发酵罐中，接种量为5%，在温度为30℃、搅拌转速为200r/min 条件下发酵5天后得到发酵液。
步骤S4：后处理：将发酵液在8000 r/ min条件下离心30 min，取上清液并通过孔径为1μm的过滤器过滤，真空冷冻干燥即得所述金耳多糖，真空度＜10Pa，温度为-50 ℃，干燥时间为20 h。
实施例2
本实施例提供一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其具体实施方式同实施例1，与实施例1的区别在于，步骤S3的接种发酵中，料液比为1：70。
实施例3
本实施例提供一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其具体实施方式同实施例1，与实施例1的区别在于，步骤S3的接种发酵中，料液比为1：80。
如图1、图2所示，本实施例制得的金耳多糖为淡黄色粉末。
实施例4
本实施例提供一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其具体实施方式同实施例1，与实施例1的区别在于，步骤S3的接种发酵中，料液比为1：100。
实施例5
本实施例提供一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其具体实施方式同实施例3，与实施例3的区别在于，步骤S3的接种发酵中，种子液接种量为6%。
实施例6
本实施例提供一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其具体实施方式同实施例3，与实施例3的区别在于，步骤S3的接种发酵中，种子液接种量为8%。
实施例7
本实施例提供一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其具体实施方式同实施例3，与实施例3的区别在于，步骤S3的接种发酵中，种子液接种量为10%。
对比例1
干燥金耳粉碎，过60目筛，以料液比1:55 加入去离子水，转入提取罐，95℃提取3.5h；6000-10000r/min离心20-30min，取上清液，最终通过孔径为0.1-1μm的过滤器，得到过滤液。将过滤液进行真空冷冻干燥处理，即得。
对比例2
本实施例提供一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其具体实施方式同实施例3，与实施例3的区别在于，步骤S3的接种发酵中，料液比为1：40。
对比例3
本实施例提供一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其具体实施方式同实施例3，与实施例3的区别在于，步骤S3的接种发酵中，料液比为1：110。
对比例4
本实施例提供一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其具体实施方式同实施例3，与实施例3的区别在于，步骤S3的接种发酵中，种子液接种量为12%。
对比例5
本实施例提供一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其具体实施方式同实施例3，与实施例3的区别在于，步骤S3的接种发酵中，种子液接种量为3%。
性能测试
硫酸苯酚法测多糖含量
取1.00mL的待测样品于试管中，加入5.00mL显色液，振荡均匀。置于沸水浴中保温30~35min，取出，放在冷水浴中，冷却至室温。于490nm处测定其吸光度值。
葡萄糖标准曲线（如图3）的测定：分别取 0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7和0.8mL 的 0.1 mg/mL 葡萄糖溶液置具塞试管中，各用蒸馏水补至 1mL，然后分别加入5.00mL显色液，振荡均匀。置于沸水浴中保温30~35min，取出，放在冷水浴中，冷却至室温。于490nm处测定其吸光度值。
分子量测试：高效凝胶渗透色谱法
金耳多糖分子量的测定采用高效液相凝胶渗透色谱法（HPGPC）。
测试条件为：Shimadzu LC-2010A 高效液相色谱仪；示差折光检测器（RID）；TSK-Gel G4000 SWXL（7.8 mm × 300 mm）凝胶色谱柱；流动相为 0.1 mol/L NaN3；流速 0.7mL/min柱箱温度 30 °C；进样量 15 μL。标准品分子量的测定：将系列不同分子量的葡聚糖标准品（10、40、70、150、270和410kDa）溶解于超纯水中配制成浓度为 2mg/mL的标准品溶液，经0.22μm水相滤膜过滤后按HPGPC测试条件上机测试，记录其保留时间。以保留时间（min）为横坐标 x，葡聚糖标准品分子量的对数值（LogMW）为纵坐标y绘制标准曲线，经拟合回归方程，得到标准曲线。
金耳多糖分子量的测定：将 4 mg 金耳多糖样品溶解于 2 mL 超纯水中，使其充分溶解后配制成浓度为 2 mg/mL 的多糖溶液，经 0.22 μm 水相滤膜过滤后按 HPGPC 测试条件上机分析，记录各竹笋多糖组分的色谱图，依据各多糖样品在色谱图上的保留时间对照葡聚糖标准品分子量标准曲线计算其分子量。
考马斯亮蓝法测蛋白含量
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量是利用蛋白质-染料相结合的原理。考马斯亮蓝G-250 染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。通过测定 595nm 处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。
蛋白标准曲线（如图4）的测定：准确吸取 0、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05和0.06mL 的标准蛋白溶液于1 mL 具塞试管中，用0.15mol/L NaCl溶液补至0.1mL，再分别加入 5mL 的考马斯亮蓝 G-250 溶液，充分摇匀，室温放置 10 min，于波长 595 nm 处测定吸光度值。
样品蛋白含量的测定：取 0.5 mL 样品液加0.15mol/L NaCl溶液补足至 1 mL，依据标曲制备步骤进行操作，测吸光度值并计算蛋白含量。
将实施例1-7、对比例1-5制得的金耳多糖进行以上多糖含量测试、蛋白含量测试，将实施例3、对比例1的金耳多糖进行分子量测试，测得结果如下表1所示。
表1
| 实施例 | 多糖含量 | 分子量 | 蛋白含量 |
| 实施例1 | 86% | / | 2% |
| 实施例2 | 95% | / | 0.5% |
| 实施例3 | 98% | 7.6×105 | 0.1% |
| 实施例4 | 97% | / | 0.5% |
| 实施例5 | 89% | / | 1.2% |
| 实施例6 | 86% | / | 1.3% |
| 实施例7 | 85% | / | 2.5% |
| 对比例1 | 80% | 1.35×106 | 3.0% |
| 对比例2 | 86% | / | 2.8% |
| 对比例3 | 82% | / | 1.8% |
| 对比例4 | 92% | / | 0.5% |
| 对比例5 | 83% | / | 3.0% |
由上表1可知，本发明制得的金耳多糖的多糖含量为85%~98%；蛋白质含量在0.1%~3%；显然的，本发明制得的金耳多糖纯度高，具有高多糖含量、较低的蛋白含量和分子量低的特点。本发明通过冠突散囊菌进行发酵，合理控制加工工艺可减小金耳多糖的分子量，使金耳多糖在化妆品应用中更加便于吸收。
保湿性能测试
将金耳多糖和透明质酸钠的0.5%的水溶液置于恒温低湿（干燥硅胶）干燥器中，75h后测定各自失水率。
将实施例3的金耳多糖进行保湿性能测试，测得结果如下表2。
表2
| 金耳多糖 | 透明质酸钠 | |
| 初始值 | 30.05 | 30 |
| 75h后 | 22.98 | 23.56 |
| 失水率 | 23.5% | 24.47% |
吸湿性能测试
将真空冻干至恒重的金耳多糖、透明质酸钠粉末、甘油0.5g置入恒温恒湿的干燥器内（25℃，43%相对湿度）。剩余粉末置于室温湿度下，测定72h后吸收水分的质量。
将实施例3的金耳多糖进行吸湿性能测试，测得结果如下表3。
表3
| 金耳多糖 | 透明质酸钠 | 甘油 | |
| 初始值 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 75h后 | 0.55 | 0.55 | 0.65 |
| 吸水率 | 10% | 10% | 22% |
由上表3可知，金耳多糖的吸湿性与透明质酸钠、银耳多糖的吸湿性能相当，在低湿度（43%）下72h后可以吸收自身10%质量的水，略低于甘油（22%）
抗氧化效果测试
(1) 样品溶液的制备
称取金耳多糖0.5g，蒸馏水溶解，过滤沉淀，定容于100mL容量瓶中。
样品测定
精密量取样品溶液1.0mL，置于10mL具塞刻度试管中，加ABTS+自由基工作液3.0mL，避光放置6min。以PBS 缓冲液为空白，在734nm波长处测定吸光度。
金耳多糖抗氧化性计算
金耳多糖抗氧化性能，按式（1）计算：
自由基清除率 ………………（1）
式中：
A0——1mLPBS溶液与3.0mL ABTS+自由基工作液混合后的吸光度
A——1mL样品溶液与3.0mL ABTS+自由基工作液混合后的吸光度
将实施例3的金耳多糖进行抗氧化效果测试，测得结果如下表4。
表4
| 金耳多糖 | 稀释250倍VC | 空白对照 | |
| 自由基清除率 | 91.22% | 99.71% | 0.00% |
由上表4可知，金耳多糖具有良好的抗氧化性能，其抗氧化性能与1/314的同等浓度VC的抗氧化性能相当。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (5)
1.一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其特征在于，具体步骤包括：
步骤S1：准备菌种：对茯砖茶中生长的金花菌进行分离纯化、驯化，得到驯化后的菌株；
步骤S2：制备种子液：将驯化后的菌株接入液体培养基，培养2-5天，得到金花菌种子液；
步骤S3：接种发酵：将干燥金耳粉碎过40-80目筛后置于发酵罐，加入料液比为1:70-100的水，灭菌，将金花菌种子液接种至发酵罐中，在温度为25-35℃、搅拌转速为100-300r/min 条件下发酵2-7天后得到发酵液；
步骤S4：后处理：将发酵液离心，取上清液并过滤，干燥即得所述金耳多糖；
所述步骤S1中驯化的操作步骤为：
（1）将在PDA培养基上纯化的金花菌，接种到含有2％蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于28℃—30℃中培养，待金花菌长满整个平板；（2）将步骤（1）中的金花菌接种到含有1.5％蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于28℃—32℃中培养，待金花菌长满整个平板；（3）将步骤（2）中的金花菌接种到含有1％蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于28℃—32℃中培养，待金花菌长满整个平板；（4）将步骤（3）中的金花菌接种到含有0.5％蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于28℃—32℃中培养，待金花菌长满整个平板；（5）将步骤（4）中的金花菌接种到不含蔗糖的金耳水溶液培养基中，置于28℃—32℃中培养，待金花菌长满整个平板；
所述步骤S2中，驯化后的菌株的接种量为1%-3%；所述步骤S3中，金花菌种子液的接种量为5%。
2.根据权利要求1所述的一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤S1中，分离纯化的具体步骤为：将茯砖茶样品切开，从中挑取一块长有金花孢子的茶叶，在无菌条件下接种至PDA培养基上，选择金花菌菌株进行传代培养，直至培养基中只有金花菌。
3.根据权利要求2所述的一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其特征在于，所述PDA培养基的原料包括：马铃薯200.0g，葡萄糖20.0g，琼脂20.0g，蒸馏水1000mL。
4.根据权利要求1所述的一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其特征在于，所述金耳水溶液培养基的原料包括：200g金耳，1000ml蒸馏水，琼脂30g，占培养基总质量0-2%的蔗糖。
5.根据权利要求1所述的一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤S4中，干燥为真空冷冻干燥；真空度＜10Pa，温度为-50℃，干燥时间为12-24 h。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311226231.XA CN116970665B (zh) | 2023-09-22 | 2023-09-22 | 一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311226231.XA CN116970665B (zh) | 2023-09-22 | 2023-09-22 | 一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116970665A CN116970665A (zh) | 2023-10-31 |
| CN116970665B true CN116970665B (zh) | 2023-12-19 |
Family
ID=88485324
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311226231.XA Active CN116970665B (zh) | 2023-09-22 | 2023-09-22 | 一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116970665B (zh) |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101225421A (zh) * | 2007-01-16 | 2008-07-23 | 浙江大学 | 分步酶法提取金耳多糖的新工艺 |
| CN102961297A (zh) * | 2012-12-19 | 2013-03-13 | 李卫旗 | 一种含天然金耳多糖的新型补水抗衰护肤品 |
| CN103408672A (zh) * | 2013-07-15 | 2013-11-27 | 上海家化联合股份有限公司 | 一种低分子量金耳多糖及其制备方法 |
| CN106496343A (zh) * | 2016-10-20 | 2017-03-15 | 广东真丽斯化妆品有限公司 | 一种金耳多糖提取物及其在化妆品中的应用 |
| CN108142598A (zh) * | 2018-01-04 | 2018-06-12 | 陕西乾宁健康食品有限公司 | 基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法 |
| CN112501027A (zh) * | 2019-12-28 | 2021-03-16 | 西北大学 | 一种冠突散囊菌菌株及驯化和发酵方法 |
| CN113150179A (zh) * | 2021-04-15 | 2021-07-23 | 临沂欣宇辉生物科技有限公司 | 一种金耳多糖提取制备工艺 |
| CN116064685A (zh) * | 2022-12-26 | 2023-05-05 | 大连工业大学 | 一种冠突散囊菌发酵食用中药的制备工艺及其应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109549211A (zh) * | 2018-12-20 | 2019-04-02 | 江南大学 | 利用食药用菌对大豆或其他油料作物进行发酵处理的方法 |
-
2023
- 2023-09-22 CN CN202311226231.XA patent/CN116970665B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101225421A (zh) * | 2007-01-16 | 2008-07-23 | 浙江大学 | 分步酶法提取金耳多糖的新工艺 |
| CN102961297A (zh) * | 2012-12-19 | 2013-03-13 | 李卫旗 | 一种含天然金耳多糖的新型补水抗衰护肤品 |
| CN103408672A (zh) * | 2013-07-15 | 2013-11-27 | 上海家化联合股份有限公司 | 一种低分子量金耳多糖及其制备方法 |
| CN106496343A (zh) * | 2016-10-20 | 2017-03-15 | 广东真丽斯化妆品有限公司 | 一种金耳多糖提取物及其在化妆品中的应用 |
| CN108142598A (zh) * | 2018-01-04 | 2018-06-12 | 陕西乾宁健康食品有限公司 | 基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法 |
| CN112501027A (zh) * | 2019-12-28 | 2021-03-16 | 西北大学 | 一种冠突散囊菌菌株及驯化和发酵方法 |
| CN113150179A (zh) * | 2021-04-15 | 2021-07-23 | 临沂欣宇辉生物科技有限公司 | 一种金耳多糖提取制备工艺 |
| CN116064685A (zh) * | 2022-12-26 | 2023-05-05 | 大连工业大学 | 一种冠突散囊菌发酵食用中药的制备工艺及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| "金花"菌对四种茶叶下脚料中茶多糖含量 及抗氧化活性的影响;高琛等;《茶叶通讯》;第49卷(第3期);第363-368页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116970665A (zh) | 2023-10-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109939027B (zh) | 一种猴头菌发酵制备含麦角硫因的化妆品原液的方法 | |
| CN113337545B (zh) | 裂褶菌发酵产物及其制备方法、护肤品、裂褶菌培养基 | |
| JP2023097375A (ja) | ２菌株の共発酵によるシゾフィランとエルゴチオネインの調製方法 | |
| CN111249218B (zh) | 一种雪莲发酵原液及其制备方法和应用 | |
| CN113564212B (zh) | 一种利用微生物发酵法提取杜仲叶多糖的方法 | |
| CN105695347A (zh) | 一种产普鲁兰多糖菌种及其应用、普鲁兰多糖的生产方法 | |
| CN111334440B (zh) | 米根霉ch5及其在提取紫芝多糖中的应用 | |
| CN112353800B (zh) | 透明质酸或其盐和/或海藻糖的组合物及其在稳定麦角硫因中的用途 | |
| CN112691125B (zh) | 一种用于美白或者抗衰老的药物组合物及其制备方法、护肤品 | |
| CN112245343B (zh) | 灵芝发酵牛蒡根的方法、复合发酵牛蒡根的方法及发酵产品和应用 | |
| CN101455257A (zh) | 一种用发酵法制备茶褐素的方法 | |
| CN116970665B (zh) | 一种金花菌发酵金耳多糖的提取方法及其应用 | |
| CN112322508A (zh) | 一种提高灵芝多糖含量的灵芝菌丝体培养方法 | |
| CN112522118A (zh) | 杂色曲霉在制备单宁酶和降解单宁中的应用 | |
| CN114790438B (zh) | 一种提高牛樟芝胞外多糖产量及其抗氧化性的方法 | |
| CN108588142B (zh) | 利用真菌多糖提高灵芝菌丝体多糖含量的方法及所得灵芝制品 | |
| CN105535035A (zh) | 一种桦褐孔菌发酵培养组合物及其制备方法 | |
| CN116970664B (zh) | 一种金花菌发酵桃胶多糖的制备方法与应用 | |
| CN115569096A (zh) | 一种山茶花发酵滤液及发酵工艺 | |
| CN110123826B (zh) | 一种蓝莓花色苷-壳寡糖复合物及其制备方法和应用 | |
| CN113403206A (zh) | 一种小规模化生产富硒荷叶离褶伞菌丝体的方法及应用 | |
| CN115025033A (zh) | 一种桑叶发酵组合物、制备方法、应用 | |
| CN115181192B (zh) | 一种香水莲花茎多糖的提取方法 | |
| CN116158535B (zh) | 一种桑叶蛋白-桑葚花青素复合乳液及其制备方法 | |
| JP4359017B2 (ja) | キトサンの溶解方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |