CN116930481A - 一种磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物材料技术领域。本发明提供一种磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法。该方法包括:首先合成三种尺寸的微纳米马达,然后分别在其表面修饰不同的捕获单元,以实现对微纳米马达的生物功能化,从而得到不同生物活性的微纳米马达。随后通过磁泳分离,将不同生物活性的微纳米马达进行分离,最后再结合相应检测技术,实现对免疫标记物、核酸和生物代谢物的一体化检测。本发明通过将不同生物活性的微纳米马达置于同一反应体系中,通过给该反应体系施加磁场的方式,利用磁泳运动下的尺寸分离原理,实现了同时对免疫标记物、核酸分子和生物代谢物的有效分离,并结合荧光检测探针,进一步实现了对检测样本中不同类别物质的跨分子检测。
Description
技术领域
本发明涉及生物材料技术领域,尤其涉及一种磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法。
背景技术
不同类型的生物分子检测,如免疫标记物、核酸分子以及生物代谢物等的检测,在基础生命科学研究、药物研发、疾病诊治和疗效评估中具有重要的研究意义。例如,在临床实践中,一种疾病通常与多种类型的标志物相关,而多种标志物的检测结果能够为临床医生提供更为全面的疾病信息,从而帮助他们准确识别疾病患者,并降低误诊、漏诊率。然而,由于不同标志物的理化性质不同,常规实验室或医疗单位很难在同一平台上完成在同一体系中同时对多种标志物进行检测以实现跨分子类别检测。
因此,为满足多元生物分子跨分子检测的需求,开发一种能够在同一体系中同时检测不同生物分子的方法显得尤为重要。
发明内容
本发明的目的在于解决上述现有技术存在的缺陷,提供一种磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法。
一种磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法,包括:
步骤一:分别制备不同尺寸的磁性棒状微纳米马达;
步骤二:分别给所述不同尺寸的磁性棒状微纳米马达对应偶联不同的生物分子,以得到对应不同生物活性的微纳米马达;
所述不同的生物分子包括:免疫标记物、核酸分子和生化代谢物;所述不同生物活性的微纳米马达包括:免疫标记物微纳米马达、核酸分子微纳米马达、生化代谢物微纳米马达;
步骤三:将所述不同生物活性的微纳米马达加入生物样本中,以形成检测样本;
步骤四:给所述检测样本施加旋转磁场,使所述不同生物活性的微纳米马达进行旋转搅拌运动,以加速检测样本对生物分子的捕获;
步骤五:给所述旋转搅拌运动后的检测样本施加复合磁场,通过复合磁场使所述不同生物活性的微纳米马达进行分离,从而分别得到对应生物活性的微纳米马达;
步骤六:将所述对应生物活性的微纳米马达利用相应的荧光检测探针进行探测,以实现跨分子的原位检测。
进一步地,如上所述的磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法,步骤一中所述磁性棒状微纳米马达的制备包括:
步骤11:将FeCl3·6H2O加入乙二醇并用超声分散,然后向其中加入乙酸铵并搅拌溶解,得到FeCl3溶液;
步骤12:将溶解好的FeCl3溶液转移至反应釜中,高温反应12 h,冷却至室温,得到Fe3O4反应产物;
步骤13:用磁铁富集合成的所述Fe3O4反应产物,并用乙醇和去离子水分别洗涤、干燥,得到纯净的Fe3O4反应产物;
步骤14:将所述纯净的Fe3O4反应产物加入去离子水和异丙醇两者形成的混合溶液中,超声处理30 min;
步骤15:给超声处理后的所述混合溶液中施加1.6 mT的磁场,再加入氨水,震荡10min;
步骤16:加入TEOS,室温反应6 h,反应结束后,得到棒状Fe3O4@SiO2产物;
步骤17:将所述棒状Fe3O4@SiO2产物通过磁铁富集,并用乙醇和去离子水分别洗涤产物,最终得到一维磁性棒状结构的Fe3O4@SiO2;
步骤18:将所述一维磁性棒状结构的Fe3O4@SiO2超声分散在乙醇中,然后向其中加入APTES,搅拌24 h后,得到氨基化的微纳米马达Fe3O4@SiO2-NH2,并用乙醇洗涤该产物,最终得到所述磁性棒状微纳米马达。
进一步地,如上所述的磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法,所述免疫标记物微纳米马达的制备包括:
将所述磁性棒状微纳米马达溶于DMF,再加入琥珀酸酐SAA和三乙胺TEA,搅拌24h,乙醇洗涤3次后,得到Fe3O4@SiO2-COOH,并将其超声分散在等离子水中保存;
称取所述Fe3O4@SiO2-COOH,将其超声分散于pH=6.5的乙磺酸MES缓冲液中,再加入EDC和NHS,室温反应1 h以活化羧基;
反应结束后,将MES缓冲液替换成pH=7.4的磷酸盐PBS缓冲液(137 mM NaCl,2.7mM KCl,8 mM Na2HPO4和2 mM KH2PO4,pH=7.4),再加入抗体Ab,室温反应4 h;
将所述磷酸盐PBS缓冲液替换成2 mL 1% 牛血清白蛋白BSA,反应1 h,以封闭未反应的羧基位点;
封闭结束后,收集反应产物Fe3O4@SiO2-Ab,最终得到所述免疫标记物微纳米马达。
进一步地,如上所述的磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法,所述核酸分子微纳米马达的制备包括:
称取所述磁性棒状微纳米马达,并将其加入含戊二醛的PBS溶液(戊二醛0.5 M,137 mM NaCl,2.7 mM KCl,8 mM Na2HPO4和2 mM KH2PO4,pH7.2-7.4)中,反应4h;
反应结束后,磷酸盐PBS缓冲液洗涤三次,再加入亲和素,反应4 h;
反应结束后,磷酸盐PBS缓冲液洗涤三次,再分散于磷酸盐PBS缓冲液中,得到亲和素化的微纳米马达;
取所述亲和素化的微纳米马达,加入生物素化的核酸捕获探针DNA,37 ℃反应2h,然后用磷酸盐PBS缓冲液洗涤3次,得到Fe3O4@SiO2-DNA,即所述核酸分子微纳米马达。
进一步地,如上所述的磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法,所述生化代谢物微纳米马达的制备包括:
将所述磁性棒状微纳米马达溶于DMF,再加入琥珀酸酐SAA和三乙胺TEA,搅拌24h,乙醇洗涤3次后,得到Fe3O4@SiO2-COOH,并将其超声分散在等离子水中保存;
将所述Fe3O4@SiO2-COOH用磷酸盐PBS缓冲液洗涤3次后,将其加入到含NHS和EDC的PBS溶液中,反应15 min以活化羧基;
反应结束后,磷酸盐PBS缓冲液洗涤3次,加入氨基化的DNA单链适体aptamer反应4h,得到Fe3O4@SiO2-Apt,即所述生化代谢物微纳米马达。
进一步地,如上所述的磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法,在步骤三之后、步骤四之前,还包括:
给检测样本施加震荡分散磁场,以除去非特异结合在微纳米马达表面的生物分子。
有益效果:本发明通过制备不同尺寸的磁性棒状微纳米马达,并在不同尺寸的磁性棒状微纳米马达上分别偶联对应不同的生物分子,以得到不同生物活性的微纳米马达,最后将不同生物活性的微纳米马达置于同一反应体系中,通过给该反应体系施加磁场的方式,利用磁泳运动下的尺寸分离原理,实现同时对免疫标记物、核酸分子和生物代谢物的有效分离,并结合荧光检测探针,进一步实现检测样本中不同类别物质的跨分子检测。而且,为了能够使免疫标记物、核酸分子和生物代谢物能够有效分离,本发明通过制备磁性的棒状微纳米马达,从而实现对免疫标记物、核酸分子和生物代谢物的有效分离。
此外,本发明利用羧基化Fe3O4@SiO2与抗体的脱水缩合制备了一类用于免疫标记物捕获的微纳米马达,基于抗原-抗体的特异性结合,实现了该微纳米马达对免疫标记物的捕获;本发明利用亲和素与生物素化核酸捕获探针的特异性结合制备了一类用于核酸分子捕获的微纳米马达,基于碱基互补配对的原则,实现了该微纳米马达对核酸分子的捕获;本发明利用羧基化Fe3O4@SiO2与氨基化核酸适体的脱水缩合制备了一类用于生物代谢物捕获的微纳米马达,基于适体-配体的特异性识别,实现了该微纳米马达对生物代谢物的捕获。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
为了解决现有技术中难以在同一平台上对不同生物分子的同时检测,本发明提供了一种磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法。首先,合成三种不同尺寸的微纳米马达,进一步分别在其表面修饰不同的捕获单元(免疫标记物捕获单元、核酸分子捕获单元、生物代谢物捕获单元),以实现对微纳米马达的生物功能化,从而得到用于对免疫标记物、核酸分子以及生物代谢物的标记微纳米马达。随后通过磁泳分离,将不同生物活性的微纳米马达分离至不同的检测槽,再结合相应检测技术,实现对免疫标记物、核酸和生物代谢物的一体化检测。
本发明实施例提供的磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法,包括以下步骤:
步骤一:分别制备不同尺寸的磁性棒状微纳米马达
(11)采用水热法合成Fe3O4纳米微球:称取一定量的FeCl3·6H2O加入30 mL乙二醇并用超声分散,然后向其中加入1.925 g乙酸铵并搅拌溶解。将溶解好的溶液转移至反应釜中,高温反应12 h,冷却至室温,再用磁铁富集合成的反应产物,用乙醇和去离子水各洗涤3次。随后,将产物置于空气中干燥,得到Fe3O4纳米微球,常温干燥保存。
(12)采用溶胶-凝胶法制备Fe3O4@SiO2棒状微纳米马达:称取50 mg上一步保存的Fe3O4纳米微球,将其加至40 mL去离子水和100 mL异丙醇的混合溶液中,超声处理30 min。然后向反应体系施加1.6 mT的磁场,再加入500 μL氨水,震荡10 min;接着,再向其中加入500 μL正硅酸乙酯(tetraethylorthosilicate,TEOS),室温反应6 h。反应结束后,通过磁铁富集,用乙醇和去离子水分别洗涤2次反应产物,收集得到Fe3O4@SiO2一维磁性棒状结构,乙醇中保存备用。
本发明通过控制FeCl3·6H2O的加入量,可制备出不同粒径的Fe3O4纳米微球,本发明实施例选用0.5 g、0.6 g和0.7 g的加入量来制备三种粒径的Fe3O4纳米微球;然后再将三种粒径的Fe3O4纳米微球分别氨基化,从而得到三种尺寸的氨基化的微纳米马达Fe3O4@SiO2-NH2。
其中,棒状结构的形成是因为Fe3O4纳米微球在外加磁场中自组装成棒状,然后氨水催化水解的正硅酸乙酯在棒状结构表面缩合成SiO2壳层,以固化稳定该结构。
(13)为实现微纳米马达的生物功能化,首先需要对一维磁性棒状结构的Fe3O4@SiO2表面进行氨基化:
分别将得到的三种尺寸的棒状微纳米马达Fe3O4@SiO2超声分散在乙醇中,然后向其中加入100 μL 3-氨基丙基三乙氧基硅烷(3-aminopropyltriethoxysilane,APTES),搅拌24 h后,得到产物Fe3O4@SiO2-NH2,并用乙醇将该产物洗涤三次;随后,将Fe3O4@SiO2-NH2分散在二甲基甲酰胺(Dimethylformamide,DMF)中,4 ℃保存备用。
步骤二:分别给所述不同尺寸的磁性棒状微纳米马达偶联对应不同的生物分子,以得到对应不同生物活性的微纳米马达,从而实现微纳米马达的生物功能化。所述不同的生物分子包括:免疫标记物、核酸分子和生化代谢物;所述不同生物活性的微纳米马达包括:免疫标记物微纳米马达、核酸分子微纳米马达、生化代谢物微纳米马达。
其中,免疫标记物微纳米马达的制备包括:
借助1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺于N-羟基琥珀酰亚胺(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide,EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide,NHS)的共价结合反应,将用于免疫标记物捕获的单克隆抗体偶联于微纳米马达表面,其原理为:利用EDC提供的-NH2与Fe3O4@SiO2-COOH发生脱水缩合,形成中间产物,该中间产物在NHS的催化下与抗体的-NH2反应,将抗体偶联在微纳米马达表面。具体步骤如下:
首先,将15 mg Fe3O4@SiO2-NH2溶于5 mL DMF,再加入17 μL琥珀酸酐(Succinicanhydride,SAA)和17 mg三乙胺(Triethylamine,TEA),搅拌24 h,乙醇洗涤3次后,得到Fe3O4@SiO2-COOH,超声分散在等离子水中保存。随后,称取1mgFe3O4@SiO2-COOH,超声分散于pH=6.5的乙磺酸(MES)缓冲液中,再加入1.5 mg EDC和1.2mgNHS,室温反应1 h以活化羧基。反应结束后,将MES缓冲液替换成pH=7.4的磷酸盐PBS(phosphate buffered saline,PBS)缓冲液(137 mM NaCl,2.7 mM KCl,8 mM Na2HPO4和2 mM KH2PO4),再加入0.3mg抗体(antibody,Ab),室温反应4 h。接下来,将磷酸盐PBS缓冲液替换成2mL质量分数为 1% 牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA),反应1 h,以封闭未反应的羧基位点。封闭结束后,收集反应物,将得到的Fe3O4@SiO2-Ab分散于1% BSA溶液中,4 ℃保存备用。
本发明实施例中选用NGAL抗体作为偶联磁性棒状微纳米马达的对象。
核酸分子微纳米马达的制备包括:
利用生物素与亲和素的特异性结合,将生物素化的核酸捕获探针偶联在亲和素化的微纳米马达表面。具体方法如下:
称取15mg步骤(3)得到的Fe3O4@SiO2-NH2,加入25mL含5%戊二醛的PBS溶液(戊二醛0.5 M,137 mM NaCl,2.7 mM KCl,8 mM Na2HPO4和2 mM KH2PO4,pH7.2-7.4)中,反应4h;反应结束后,磷酸盐PBS缓冲液洗涤三次,再加入300 μL浓度为1 mg/mL亲和素,反应4 h;反应结束后,磷酸盐PBS缓冲液洗涤三次,再分散于磷酸盐PBS缓冲液中,得到亲和素化的微纳米马达。取100 μL上述浓度为1 mg/mL亲和素化Fe3O4@SiO2,加入20 μL浓度为50 nM生物素化的核酸捕获探针(DNA),37 ℃反应2 h,然后用磷酸盐PBS缓冲液洗涤3次,得到Fe3O4@SiO2-DNA,超声分散于PBS中,4 ℃保存备用。
本发明实施例中选用miR-188互补片段作为偶联磁性棒状微纳米马达的对象。
生化代谢物微纳米马达的制备包括:
将15 mg Fe3O4@SiO2-NH2溶于5 mL DMF,再加入17 μL琥珀酸酐(Succinicanhydride,SAA)和17 mg三乙胺(Triethylamine,TEA),搅拌24 h,乙醇洗涤3次后,得到Fe3O4@SiO2-COOH,超声分散在等离子水中保存。
取10 μL(5 mg/mL)Fe3O4@SiO2-COOH,用pH=6.2的PBS缓冲液(137 mM NaCl,2.7 mMKCl,8 mM Na2HPO4和2 mM KH2PO4)洗涤3次,再将其加入到200 μL 含NHS和EDC的PBS溶液(100 mM NHS,400 mM EDC,pH6.2)中,反应15 min以活化羧基;反应结束后,PBS洗涤3次,加入氨基化的DNA单链适体(aptamer),反应4 h,得到Fe3O4@SiO2-Apt,去离子水洗涤3次并分散于去离子水中,-4 ℃保存备用。
本发明实施例中选用Cys C适体作为偶联磁性棒状微纳米马达的对象。
步骤三:将所述不同生物活性的微纳米马达加入生物样本中,以形成检测样本。
(31)将偶联了NGAL抗体、miR-188互补片段、Cys C适体的不同尺寸的微纳米马达与血清样本依次加入反应槽中;
(32)施加旋转磁场,使微纳米马达进行旋转搅拌运动,加速对样本中NGAL、miR-188和Cys C的捕获;
(33)施加梯度磁场,使微纳米马达从反应槽进入清洗槽;
(34)施加震荡分散磁场,用于除去非特异结合在马达表面的生物分子;
(35)施加平行和垂直于马达运动方向的梯度磁场(复合磁场),利用平行于马达的磁场使马达从清洗槽进入分离槽,利用垂直于马达的磁场,基于磁泳运动下的尺寸分离原理,将捕获了不同类别物质的微纳米马达分选到不同的检测槽;
(36)在检测槽中加入相应的荧光检测探针,用于血清样本中NGAL、miR-188和CysC的检测。
本发明提供的方法具有如下优势:
(1)本发明利用磁场操控不同尺寸微纳米马达的分选,搭建了一种用于液体检测样本中免疫标记物、核酸分子和生物代谢物捕获的平台;通过耦合传统光学检测方法,实现了单一样本中不同类别生物标记物的跨分子检测;
(2)采用本发明方法可制备出不同尺寸的磁性棒状微纳米马达,本发明方法涉及的主要原料Fe3O4易于获取、成本低廉,所得产物稳定性高、易于修饰性,制备方法操作简单、重复性好,易于实现大规模批量生产;
(3)本发明提供的制备不同生物活性的微纳米马达的方法操作简单、具有较高的通用性,通过替换免疫标记物、核酸分子和生物代谢物的种类,可制备出针对不同生物分子的捕获探针,在生物样本中多元生物分子的检测方面具有巨大的应用前景;
(4)本发明制备的微纳米马达为运动可控的磁性棒状结构,可将其应用于器官水平的物质检测,利用磁场导向,引导其定向运动,再结合相应的检测技术,可在指定区域精准定位不同物质的分布状况,进一步实现跨分子类别物质的原位检测和动态监测。此外,还可利用微纳米马达的集群运动,进行待测物的快速分离、提取和富集,不仅省去了离心处理等繁琐操作,还能避免复杂样本中基质成分的干扰,增强了检测的灵敏度和特异度。
最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (6)
1.一种磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法,其特征在于,包括:
步骤一:分别制备不同尺寸的磁性棒状微纳米马达;
步骤二:分别给所述不同尺寸的磁性棒状微纳米马达对应偶联不同的生物分子,以得到对应不同生物活性的微纳米马达;
所述不同的生物分子包括:免疫标记物、核酸分子和生化代谢物;所述不同生物活性的微纳米马达包括:免疫标记物微纳米马达、核酸分子微纳米马达、生化代谢物微纳米马达;
步骤三:将所述不同生物活性的微纳米马达加入生物样本中,以形成检测样本;
步骤四:给所述检测样本施加旋转磁场,使所述不同生物活性的微纳米马达进行旋转搅拌运动,以加速微纳米马达对检测样本中生物分子的捕获;
步骤五:给所述旋转搅拌运动后的检测样本施加复合磁场,通过复合磁场使所述不同生物活性的微纳米马达进行分离,从而分别得到对应生物活性的微纳米马达;
步骤六:将所述对应生物活性的微纳米马达利用相应的荧光检测探针进行探测,以实现跨分子的原位检测。
2.根据权利要求1所述的磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法,其特征在于,步骤一中所述磁性棒状微纳米马达的制备包括:
步骤11:将FeCl3·6H2O加入乙二醇并用超声分散,然后向其中加入乙酸铵并搅拌溶解,得到FeCl3溶液;
步骤12:将溶解好的FeCl3溶液转移至反应釜中,高温反应12 h,冷却至室温,得到Fe3O4反应产物;
步骤13:用磁铁富集合成的所述Fe3O4反应产物,并用乙醇和去离子水分别洗涤、干燥,得到纯净的Fe3O4反应产物;
步骤14:将所述纯净的Fe3O4反应产物加入去离子水和异丙醇两者形成的混合溶液中,超声处理30 min;
步骤15:给超声处理后的所述混合溶液中施加1.6 mT的磁场,再加入氨水,震荡10min;
步骤16:加入TEOS,室温反应6 h,反应结束后,得到棒状Fe3O4@SiO2产物;
步骤17:将所述棒状Fe3O4@SiO2产物通过磁铁富集,并用乙醇和去离子水分别洗涤产物,最终得到一维磁性棒状结构的Fe3O4@SiO2;
步骤18:将所述一维磁性棒状结构的Fe3O4@SiO2超声分散在乙醇中,然后向其中加入APTES,搅拌24 h后,得到氨基化的微纳米马达Fe3O4@SiO2-NH2,并用乙醇洗涤,最终得到所述磁性棒状微纳米马达。
3.根据权利要求2所述的磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法,其特征在于,所述免疫标记物微纳米马达的制备包括:
将所述磁性棒状微纳米马达溶于DMF,再加入琥珀酸酐SAA和三乙胺TEA,搅拌24 h,乙醇洗涤3次后,得到Fe3O4@SiO2-COOH,并将其超声分散在等离子水中保存;
将所述Fe3O4@SiO2-COOH,超声分散于pH=6.5的乙磺酸MES缓冲液中,再加入EDC和NHS,室温反应1 h以活化羧基;
反应结束后,将所述MES缓冲液替换成磷酸盐PBS缓冲液,再加入抗体Ab,室温反应4 h;
将所述磷酸盐PBS缓冲液替换成质量分数为1% 牛血清白蛋白BSA,反应1 h,以封闭未反应的羧基位点;
封闭结束后,收集反应产物Fe3O4@SiO2-Ab,以所述反应产物Fe3O4@SiO2-Ab作为所述免疫标记物微纳米马达。
4.根据权利要求2所述的磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法,其特征在于,所述核酸分子微纳米马达的制备包括:
将所述磁性棒状微纳米马达加入质量分数为5%戊二醛的PBS溶液中,反应4 h;
反应结束后,磷酸盐PBS缓冲液洗涤三次,再加入亲和素,反应4 h;
反应结束后,磷酸盐PBS缓冲液洗涤三次,再分散于磷酸盐PBS缓冲液中,得到亲和素化的微纳米马达;
取所述亲和素化的微纳米马达,加入生物素化的核酸捕获探针DNA,37 ℃反应2 h,然后用磷酸盐PBS缓冲液洗涤3次,得到Fe3O4@SiO2-DNA,即所述核酸分子微纳米马达。
5.根据权利要求2所述的磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法,其特征在于,所述生化代谢物微纳米马达的制备包括:
将所述磁性棒状微纳米马达溶于DMF,再加入琥珀酸酐SAA和三乙胺TEA,搅拌24 h,乙醇洗涤3次后,得到Fe3O4@SiO2-COOH,并将其超声分散在等离子水中保存;
将所述Fe3O4@SiO2-COOH用磷酸盐PBS缓冲液洗涤3次后,将其加入到含NHS和EDC的PBS溶液中,反应15 min以活化羧基;
反应结束后,磷酸盐PBS缓冲液洗涤3次,加入氨基化的DNA单链适体aptamer反应4 h,得到Fe3O4@SiO2-Apt,即所述生化代谢物微纳米马达。
6.根据权利要求1-5任一所述的磁场驱动微纳米马达的跨分子检测方法,其特征在于,在步骤三之后、步骤四之前,还包括:
给检测样本施加震荡分散磁场,以除去非特异结合在微纳米马达表面的生物分子。
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