CN116903591A - 一种嘧啶胺类nuak抑制剂及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本申请提供了一种嘧啶胺类化合物，其特征在于所述嘧啶胺类化合物为由式I表示的化合物，或其立体异构体、互变异构体、同位素衍生物、水合物、溶剂化物、前药以及药学上可接受的盐。本申请所述嘧啶胺类化合物具有优异的NUAK1/NUAK2激酶抑制活性，可通过抑制NUAK1/NUAK2用于预防或治疗以下疾病：神经精神类疾病、代谢性疾病、肿瘤、内脏纤维化疾病、皮肤纤维化疾病。

Description

一种嘧啶胺类NUAK抑制剂及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于小分子化合物领域，具体地，涉及一种嘧啶胺类NUAK抑制剂及其制备方法和用途。所述化合物通过抑制NUAK1/NUAK2，可用于预防或治疗以下疾病：神经精神类疾病、代谢性疾病、肿瘤、内脏纤维化疾病、皮肤纤维化疾病，或单独用于减轻外伤和手术后疤痕。
背景技术
蛋白激酶是一组参与调节细胞代谢、极性、生长、***和分化的重要功能性蛋白，人类基因组编码500多种蛋白激酶，这些激酶能将ATP(adenosine triphosphate)上的磷酸基团转移到底物蛋白的特定丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基上而使之磷酸化；大部分蛋白激酶为丝氨酸/苏氨酸激酶，酪氨酸激酶不到100种。单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosinemonophosphate-activated protein kinase，AMPK)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine kinases，STK)，是哺乳动物体内细胞能量稳态(cellular energyhomeostasis)的重要调节因子，通过感应代谢压力(如缺氧，热休克)下细胞内AMP(Adenosine monophosphate)/ATP、或ADP(adenosine diphosphate)/ATP比例变化来调节糖和脂类代谢、细胞增生和细胞极性，可谓代谢感应蛋白(metabolic sensor protein)。AMPK在进化上非常保守，是一种异三聚体蛋白，由含有激酶结构域(kinase domain，KD)的α亚单位、以及调节激酶活性的β亚单位和γ亚单位组成，γ亚单位上含有四个CBS功能域(Cystathionine-β-synthase(CBS)domains)，负责检测细胞内AMP/ATP和ADP/ATP比例的变化(Hardie DG,Trends in Cell Biology.2016,26:190)。
AMPK功能紊乱会导致肥胖、糖尿病、炎症性疾病和肿瘤等多种疾病，因此机体对AMPK功能的调控非常关键。首先AMPK的激活需要上游激酶对其α亚单位第172位上的苏氨酸(T172)进行磷酸化，目前已知的AMPK上游激酶有三种：肝激酶B1(liver kinase B1，LKB1)，钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶2(Ca2+/calmodulin-dependent PK kinase 2，CaMKK2)，以及转化生长因子β激活激酶1(transforming growth factor-β-activated kinase 1，TAK1)。与上游激酶通过磷酸化T172位点激活AMPK相对应，已知有三种蛋白磷酸酶能通过移除T172上的磷酸基来抑制AMPK的活性，包括蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)，蛋白磷酸酶2C(protein phosphatase 2C,PP2C)，以及镁/锰依赖性蛋白磷酸酶1E(Mg2+-/Mn2+-dependent protein phosphatase 1E，PPM1E)。当细胞处于低能状态时(高AMP/ATP或ADP/ATP比例)，AMPK的α亚单位KD和γ亚单位紧密交联，同时β亚单位豆蔻酰化，确保蛋白磷酸酶无法接触到T172位点而保持激活状态。而当细胞处于高能状态时，KD和γ亚单位松开，T172暴露给磷酸酶而导致AMPK失活(Steinberg GR,Nature Reviews DrugDiscovery.2019,18:527)。
除去AMPK上游激酶和蛋白磷酸酶能分别激活和灭活AMPK，还有一类AMPK相关性激酶(AMPK-related kinases，ARKs)参与调节AMPK的功能，目前一共发现有12种ARKs(BRSK1，BRSK2，NUAK1，NUAK2，QIK，QSK，SIK，MARK1，MARK2，MARK3，MARK4和MELK)，都属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，ARKs的激酶结构域和AMPK的α亚单位有很高的同源性，除MELK外都能被LKB1激活，并且其激酶活化的磷酸化位点也和AMPK的T172相当，功能上也都参与细胞代谢、增生和极性的调控。不过由于不像AMPK具备调控亚单位，ARKs不能直接被细胞内AMP/ATP比例所调控(Bright NJ,Acta Physiologica.2009,196:15)。
ARKs又因蛋白结构和功能特征的不同而分成数个ARK亚家族，其中NUAK(Nu(novel)and AMPK-related kinase)ARK亚家族含有NUAK1(最早被命名为ARK5)和NUAK2(最早被命名为sucrose nonfermenting-like/AMPK related kinase，SNARK)两个成员，两者的氨基酸序列大约55％同源，根据氨基酸序列，NUAK1和NUAK2的推测分子量分别为76和69kDa；其蛋白结构很相近，氨基端为激酶结构域，羧基端为泛素交联域(ubiquitin-associated domain)，目前尚不清楚NUAK是否和AMPKs一样也是异三聚体结构。NUAK1和NUAK2在大部分组织中有表达，其中NUAK1在脑、皮肤、肌肉、消化道上段、内分泌等器官组织中表达明显高于其它部位，NUAK2表达最高的器官组织为消化道、女性生殖***、皮肤、骨骼、脑和内分泌等，其中NUAK2的表达更多地显示出组织特异性。值得一提的是，NUAK1和其它ARKs及AMPK蛋白主要分布在细胞浆内，而NUAK2则主要分布在细胞核内，并有迹象表明NUAK2作为转录调节因子参与代谢压力相关的基因表达(Sun X,J of MolecularEndocrinology.2013,51:R15)。
作为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，NUAK1和NUAK2可磷酸化多种蛋白底物，包括参与细胞信号传导、代谢、细胞增殖、细胞凋亡、自噬和细胞骨架组织的蛋白质。已知NUAK1可以磷酸化AMPK，LATS1/2，p53肿瘤抑制蛋白，以及调节肌动蛋白细胞骨架组织的肌球蛋白磷酸酶靶亚基1(Mypt1)等。NUKA2能磷酸化Hedghog信号通路的转录因子Gli3，FoxO1，驱动蛋白轻链1(KLC1)，以及Rho GDP解离抑制剂α(Rho GDIα)等。
NUAK1和NUAK2的功能调控涉及多种细胞内信号***，除了能被LKB1磷酸化激活(T211，相当于AMPK的T172)和被钙离子/PKC活化，NUAK1是AMPK相关蛋白家族里唯一能被Akt激活的成员，NUAK1活性升高也见于一些生长因子如***1(insulin-likegrowth factor 1,IGF1)信号通路的激活，骨骼肌细胞处于收缩状态时也伴随NUAK1的活性增强。NUAK1和NUAK2都能被LKB1激活(T211/NUAK1，T208/NUAK2,相当于AMPK的T172)，但是NUAK2可以进行自磷酸化活化，NUAK2能与X染色体上的泛素特异性蛋白酶9(ubiquitin-specific protease 9，X chromosome，USP9X)进行交互作用，后者是一种去泛素化酶，能够维持NUAK2的活性。在不同的细胞内，低渗透压、DNA损伤、氧化、营养不足等刺激均可导致NUAK2的激活，NUAK2的活化也见于骨骼肌细胞细胞的收缩(Brooks D,Data inBrief.2022,43:108482)。
多项研究表明NUAK在代谢性疾病、肿瘤、神经退行性疾病和纤维化疾病等疾病的发病过程中扮演重要的角色，NUAK1和NUAK2纯合敲除基因鼠基本都导致胚胎期死亡，NUAK1杂合缺失小鼠导致机体和神经组织(如脑皮质和外周神经元)发育不良，人NUAK1杂合基因突变与孤独症(autism spectrum disorders,ASD)，认知缺陷，多动症(attentiondeficit/hyperactivity disorder,AD/HD)及精神***症(schizophrenia)相关。人NUAK2基因缺失导致无脑儿的形成，是一种引起胎儿发育缺陷的严重神经管畸形，其机理和YAP的功能丧失有关(Bonnard C,J Exp Med.2020,217:e20191561)。骨骼肌细胞特异性敲除NUAK1基因可以避免高脂饮食诱导的亚临床糖尿病；而NUAK2杂合缺失小鼠出现的表型则与人二型糖尿病伴肥胖的一系列临床表现相近，这些现象可能与细胞自噬机制失衡有关(Bennison SA,Cellular Signaling.2022,100:110472；Blazejewski SM,ScientificReports.2011,11:8156)。
Akt和其它蛋白激酶导致的NUAK1激活能促进肿瘤细胞在能量不足的环境下生存并保护肿瘤细胞免于发生凋亡，NUAK2也通过类似的机制抑制TNFα和CD95诱导的细胞凋亡。此外，NUAK1激活后通过上调机制金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMP)促进肿瘤细胞的侵袭和转移，NUAK2则通过加强肿瘤细胞的活动性参与肿瘤转移的发生(Hou X,Oncogen.201,30:2933；Chen Y,Cell Death and Disease.2020,11:712；Molina E,Cells.10:2760；Humbert N,The EMBO Journal.2010,29:376)。很多证据表明NUAK1和NUAK2在肿瘤形成和转移中发挥作用，比起NUAK1，NUAK2存在更强的促进肿瘤形成和转移的作用，NUAK2抑制剂应该比NUAK1抑制剂更有可能成为新的靶向抗肿瘤药物。
最新研究表明NUAK通过和转化生长因子-β(TGF-β)信号通路交互影响在组织纤维化的发展中起着关键作用。首先TGF-β能在多种上皮细胞如角质形成细胞(keratinocytes)和人皮肤纤维母细胞(dermal fibroblasts)内上调NUAK1和NUAK2的基因转录，而MAPK(ERK1/2and p38)信号失活抑制TGF-β依赖性NUAK2表达；此外，NUAK2通过和TGF-β的细胞内信号中介SMAD3蛋白结构上的交联域和MH2域结合来抑制SMAD3在细胞内的降解，类似的机制在NUAK2和TβRI之间也存在。TGF-β诱导的编码纤连蛋白(fibronectin，FN),纤溶酶原激活物抑制剂1(plasminogen activator inhibitor 1,PAI1)，组织金属蛋白酶抑制蛋白1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP1)等促纤维化分子的基因表达依赖于NUAK2的存在，可见NUAK2促进纤维化的发生。研究也表明NUAK1通过上调TGF-β和YAP两个信号通路促进肾、肺和肝纤维化，动物试验中抑制NUAK1能减轻新创伤引起的瘢痕和陈旧性瘢痕组织(Gill MK,Nature Communications.2018.9:3510)。有趣的是，研究发现NUAK1敲基因的角质形成细胞内编码FN的基因表达上调，NUAK1可能通过负反馈机制影响TGF-β信号传导从而抑制纤维化(van de Vis RAJ,Cancers.2021,13：3377)。总体来讲，抑制NUAK可能可以有效抑制参与组织器官的纤维化进程。
由于激酶从结构和功能上一直是理想的小分子药物靶点，而NUAK1和NUAK2又参与多种疾病的发生，目前已经有一些NUAK抑制剂处于早期研发阶段，其有效性和安全性依然存疑(Banerjee S,The Biochemical Journal.2014,457:215)。因此开发NUAK选择性抑制剂和NUAK1/2双靶点抑制剂有望为神经精神类疾病(如帕金森氏病，阿尔茨海默氏病)、代谢性疾病(如糖尿病，高脂血症，肥胖)、肿瘤(如肝癌，白血病，淋巴瘤，肿瘤转移)、内脏纤维化疾病(如肝硬化，肾纤维化，肺纤维化，和心肌炎后遗症)以及皮肤纤维化疾病(如硬皮病，瘢痕疙瘩，肥厚性瘢痕，或单纯用于减轻外伤和手术后瘢痕)等提供创新治疗的新方向，开发新一代NUAK抑制剂具有巨大的潜在临床应用价值。
发明内容
本发明的目的旨在获得有效的NUAK1/NUAK2抑制剂，可用于制备预防或治疗以下疾病的药物：神经精神类疾病(如帕金森氏病，阿尔茨海默病)、代谢性疾病(如糖尿病，高脂血症，肥胖)、肿瘤(如肝癌，白血病，淋巴瘤，肿瘤转移)、内脏纤维化疾病(如肝硬化，肾纤维化，肺纤维化，和心肌炎后遗症)以及皮肤纤维化疾病(如硬皮病，瘢痕疙瘩，肥厚性瘢痕，或单纯用于减轻外伤和手术后瘢痕)。
为了实现上述目的，在一方面，本发明提供了一种嘧啶胺类化合物，所述嘧啶胺类化合物为由如下所示的式I表示的化合物，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、同位素衍生物、水合物、溶剂化物、前药以及药学上可接受的盐：
其中，A为可被m个R3取代的苯基，或可被p个R4取代的5元杂芳基；
B为任选取代的3-10元环烷基或任选取代的3-10元杂环烷基；
A或B上的取代基选自卤素、氨基、羟基、硝基、氰基、巯基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C1-8烷基氧基、任选取代的C1-8烷基硫基、任选取代的C1-8烷基氨基的一个或多个；
D为X为N或CH，X为CH时，H可被R5或R6取代；
E为-C(O)-NHR7R8、-C(O)-R7R8、-NR7-C(O)R8、-NR7-S(O)2-R8、-任选取代的C3-8杂环烷基-S(O)2-R8、-任选取代的C3-8环烷基-S(O)2-R8，R8为任选取代的C1-8烷基、任选取代的C3-8环烷基、任选取代的C3-8环烷基C1-8烷基，环烷基或杂环烷基上的取代基选自卤素，氨基、羟基、硝基、氰基、巯基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C1-8烷基氧基、任选取代的C1-8烷基硫基、任选取代的C1-8烷基氨基的一个或多个；
R1、R7各自独立地为H、任选取代的C1-8烷基；
R2、R3、R4、R5、R6各自独立地为卤素、氨基、羟基、硝基、氰基、巯基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C1-8烷基氧基、任选取代的C1-8烷基硫基、任选取代的C1-8烷基氨基；
C1-8烷基上的取代基选自卤素、氨基、羟基、硝基、氰基、巯基中的一个或多个；
n为0、1或2，m为0、1、2、3或4，p、q、r分别为0、1、2或3。
在一组实施方式中，E为下式之一：
在一组实施方式中，B为任选取代的3-6元环烷基，优选任选取代的5-6元环烷基，更优选为任选取代的哌啶基、任选取代的哌嗪基、任选取代的吡咯烷基。
进一步地，B为下式之一：
R9为卤素、氨基、羟基、硝基、氰基、巯基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C1-8烷基氧基、任选取代的C1-8烷基硫基、任选取代的C1-8烷基氨基；
R10为H或任选取代的C1-8烷基；
C1-8烷基上的取代基选自卤素、氨基、羟基、硝基、氰基、巯基中的一个或多个；
s、t分别为0、1、2、3或4，u为0、1、2或3。
更进一步地，B为下式之一：
在一组实施方式中，A为任选取代的以下基团之一：
其中A上方与氨基相连，A下方与B基团相连。
进一步地，A为任选取代的苯基；更进一步地，A被甲氧基取代，优选取代在氨基的邻位。
在一组实施方式中，R2为氯，优选取代在氨基的对位。
在一组实施方式中，所述式I表示的化合物为以下化合物之一：
在一组实施方式中，所述药学上可接受的盐为甲酸盐。
在一组实施方式中，所述同位素衍生物为氘代物。
另一方面，本申请还提供了所述嘧啶胺类化合物的制备方法，其包含以下步骤：
由式II化合物和式III化合物制备式I化合物；
或
当D为时，也可以由式IV与式II化合物制备式V化合物，再由式V化合物制备式I化合物；
其中，Y为离去基团，优选Y为卤素，更优选Y为Cl，其他各基团的定义如上所述。
在一组实施方式中，先对式II中B环上的氨基或亚氨基进行保护，与式III化合物偶联后，再脱除保护基制备式I化合物。
在一组实施方式中，当D为时，对式IV化合物中D环上的亚氨基进行保护，任选对式II中B环上的氨基或亚氨基进行保护，之后经保护的式IV化合物与任选保护的式II化合物偶联、脱除D环上的取代基制备式V化合物，最后经偶联反应、任选脱除B环上的保护基得到式I化合物。
本申请提供了一种药物组合物，以本申请以上所述的嘧啶胺类化合物作为有效成分；药物组合物进一步包含药学上可接受的载体或赋形剂。
本申请提供了所述嘧啶胺类化合物用于制备NUAK1或NUAK2抑制剂的用途。
本申请提供了所述嘧啶胺类化合物用于制备药物的用途，其特征在于所述化合物通过抑制NUAK1或NUAK2用于预防或治疗以下疾病：神经精神类疾病、代谢性疾病、肿瘤、内脏纤维化疾病、皮肤纤维化疾病。
在一个实施方式中，所述疾病为帕金森氏病、阿尔茨海默病、糖尿病、高脂血症、肥胖、肝癌、白血病、淋巴瘤、肿瘤转移、肝硬化、肾纤维化、肺纤维化、心肌炎后遗症、硬皮病、瘢痕疙瘩、肥厚性瘢痕、或单独用于减轻外伤和手术后疤痕。
本发明的有益效果为：
本发明提供了一类嘧啶胺类化合物，体外激酶活性抑制试验显示，本发明化合物对NUAK1/NUAK2激酶具有优异的抑制活性。可通过抑制NUAK1或NUAK2用于预防或治疗以下疾病：神经精神类疾病、代谢性疾病、肿瘤、内脏纤维化疾病、皮肤纤维化疾病。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
在详细描述本发明前，应了解，在此使用的术语只在于描述特定的实施方式，而不希望限制本发明的范围，本发明的范围仅由所附权利要求书限定。为了更完全地了解在此描述的本发明，采用以下术语，它们的定义如下所示。除非另外定义，在此使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员所理解的相同的含义。
定义
除另有规定外，本发明所指的以下术语具有下述定义。
作为一个实施方式或一组实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式或另一组实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
本发明中，环基团上相连的代表可有n个R2、q个R5、r个R6、s个R9、t个R9、u个R9连接在所述环基团的任意可能位置。
本发明中部分取代基中处表示连接位点。D为/>时，D左侧与嘧啶相连，D右侧与E基团相连。
除非另有说明，所述“任选取代”是指被取代基团上的氢未被取代或取代基团的一个或多个可取代位点独立地被取代基取代，取代基独立地选自一个或多个氘、卤素、氨基、羟基、硝基、氰基、巯基、氧代、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C1-8烷基氧基、任选取代的C1-8烷基硫基、任选取代的C1-8烷基氨基的一个或多个；C1-8烷基上的取代基选自氘、卤素、氨基、羟基、硝基、氰基、巯基中的一个或多个；取代基选自“氧代”的情况是指同一取代位置的两个氢原子被氧原子所取代。
术语“杂芳基”表示含有5-10元结构，或优选5-8元结构，更优选5-6元结构的芳香单环或者多环环状***，其中1个、2个、3个、4个或更多个环原子为杂原子且其余原子为碳，杂原子独立地选自O、N或S，杂原子数量优选为1个、2个、3个或4个。杂芳基可为含有1-2个选自N或S的5元结构的芳香单环，可为含有1-2个N的5元结构的芳香单环。杂芳基的实例包括但不限于呋喃基、噻吩基、噁唑基、噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、***基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、硫代二唑基、三嗪基、酞嗪基、喹啉基、异喹啉基、喋啶基、嘌呤基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并吡啶基、苯并嘧啶基、苯并吡嗪基、苯并咪唑基、苯并酞嗪基、吡咯并[2,3-b]吡啶基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、[1,2,4]***并[4,3-b]哒嗪基、[1,2,4]***并[1,5-a]嘧啶基、[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶基等。
术语“环烷基”表示含有3-10个碳原子的，饱和单环、双环或者三环体系，其中单环、双环或三环中不包含芳香环。双环基包括桥环基、螺环基、并环基等。优选地包含3-10个碳原子(C3-10环烷基)，进一步优选3-8个碳原子(C3-8环烷基)、3-6个碳原子(C3-6环烷基)、4-6个碳原子(C4-6环烷基)、5-6个碳原子(C5-6环烷基)。实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、甲基环丙基、2-乙基-环戊基、二甲基环丁基等。
术语“杂环烷基”是指饱和的单环、双环或多环环状烃基团，优选包含3-10个环原子，其中1个、2个、3个或更多个环原子选自N、O或S，其余环原子为C，包括桥环基、螺环基、并环基等。优选包含3～8个环原子(3-8元杂环烷基)，或3-6个环原子(3-6元杂环烷基)，或4-6个环原子(4-6元杂环烷基)，或5-6个环原子(5-6元杂环烷基)。杂原子优选1-4个，更优选1～3个(即1个、2个或3个)。杂环烷基可为含有1-2个N的5-6元单环杂环烷基。杂环烷基的实例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、吡喃基、氮杂环丙烷基、氧杂环丙烷基、硫杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、氧杂环己烷、吗啉基、硫代吗啉基、二噁烷基、二硫杂环己基、噁唑烷基、噻唑烷基、吡唑烷基、咪唑啉啶等。
术语“烷基”指一价饱和脂肪族烃基团，优选包含1-8个碳原子(C1-8烷基)直链或支链基团(碳原子数量在1-8之间，具体地为1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或8个)，更优选包含1-6个碳原子(即C1-6烷基，碳原子数量在1-6之间，具体地为1个、2个、3个、4个、5个或6个)。实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、新戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、正庚基、正辛基等。
术语“烷基氧基”、“烷基硫基”、“烷基氨基”分别指-O-烷基、-S-烷基、-NH-烷基或二烷基氨基，所述烷基的定义同上。代表的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、1-甲基丙氧基、2-甲基丙氧基、叔丁氧基等；甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、丁硫基、1-甲基丙硫基、2-甲基丙硫基、叔丁硫基等；甲氨基、乙氨基、丙氨基、二甲氨基、二乙氨基、二丙氨基、甲基乙基氨基等。
术语“卤素”是指F、Cl、Br、I。
本发明所述的活性化合物，解释为包括所述化合物及其立体异构体、互变异构体、同位素衍生物、水合物、溶剂化物、前药或其药学上可接受的盐。所述化合物的立体异构体、互变异构体、同位素衍生物、水合物、溶剂化物、前药、同位素衍生物或其药学上可接受的盐通过本领域常规技术手段获得，在体内外以与所述化合物基本相同的作用机理，发挥相同或相似的效用。
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括构型异构体和构象异构体，其中，构型异构体又包括几何异构体(或顺反异构体)和光学异构体(包含对映异构体和非对映异构体)。几何异构体可以存在于本化合物中。光学异构体指的是分子结构完全相同，物理化学性质相近，但旋光性不同的物质。本发明的化合物在R或S构型中可以含有不对称取代的碳原子，其中术语“R”和“S”如IUPAC1974Recommendations for Section E,Fundamental Stereochemistry,Pure Appl.Chem.(1976)45,13-10所定义。具有不对称取代的碳原子的化合物(具有相等数量的R和S构型)在那些碳原子处是外消旋的。具有过量的一种构型(相对于另一个)的原子使该构型存在更高数量，优选过量大约85％-90％，更优选过量大约95％-99％，更加优选过量大于大约99％。相应地，本发明包括外消旋混合物、相对和绝对光学异构体和相对与绝对光学异构体的混合物。
术语“互变异构体”是指具有不同能量的可通过低能垒互相转化的结构异构体。若互变异构是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体包括通过一些成键电子的重组来进行的互相转化。
术语“同位素衍生物”是指本发明的化合物可以以同位素示踪的或富集形式存在，含有一个或多个原子，这些原子的原子量或质量数不同于自然界中发现的最大量的原子的原子量或质量数。同位素可以是放射性或非放射性的同位素。原子例如氢、碳、磷、硫、氟、氯和碘的同位素包括但不局限于：2H,3H,13C,14C,15N,18O,32P,35S,18F,36Cl和125I。含有这些和/或其它原子的其它同位素的化合物在本发明范围之内。本发明的同位素标记的化合物可以利用本领域普通技术人员熟知的一般方法来制备。
术语“水合物”是指一个或多个水分子与本发明的化合物所形成的缔合物。
术语“溶剂化物”是指一个或多个溶剂分子与本发明的化合物所形成的缔合物。
术语“前药”是设计的活性药物的衍生物，其可以改善一些确定的、不合需要的物理或生物学性质。物理性能通常是相关的溶解度(过高或不足的脂质或水溶性)或稳定性，而有问题的生物学特性包括代谢太快或生物利用率差，这本身可能与物理化性质相关。
术语“药学上可接受的盐”是指在合理医学判断范围内适用于与哺乳动物特别是人的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应等并与合理的效益/风险比相称的盐。如果所述化合物为碱性，则药学上可接受的盐包含选自无机酸制备的盐，也包括选自有机酸制备的盐。如果所述化合物为酸性的，则药学上可接受的盐包括无机碱和/或有机碱制备的盐。
术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”包括但不限于任何被相关的政府管理部门许可为可接受供人类或家畜使用的佐剂、载体、赋形剂、助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、矫味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂等。
如本文所用，术语“治疗”是指根据治疗性方案的治疗性试剂的任何施用，所述治疗性方案达到所需效果，即部分或完全减轻、改善、缓解、抑制、延迟发作、降低严重程度和/或降低特定疾病、障碍和/或病症的一种或多种症状或特征的发生率；在一些实施方式中，根据治疗性方案的治疗性试剂的施用与所需效果的实现相关。这种治疗可以针对没有表现出相关疾病、障碍和/或病症的受试者和/或针对仅表现出疾病、障碍和/或病症的早期迹象的受试者。替代地或另外地，这种治疗可以针对表现出相关疾病、障碍和/或病症的一种或多种所确定迹象的受试者。在一些实施方式中，治疗可以针对已被诊断患有相关疾病、障碍和/或病症的受试者。在一些实施方式中，治疗可以针对已知具有一种或多种易感因素的受试者，所述易感因素在统计学上与相关疾病、障碍和/或病症发展的风险增加相关。
根据本发明，本申请所述制药用途中制得的药物除了可以包含本发明的嘧啶胺类化合物作为有效成分之外，还可以包含其他可用于预防或治疗相关疾病的药剂作为另一种有效成分。当该药物包含多种有效成分时，各有效成分可以根据医师的判断同时、依次或分开施用。
以下，将通过实施例对本发明的特定化合物的效果进行详细描述。
实施例
实施例1合成化合物534的一般方法(TDM-181134)
步骤1:化合物534c
4-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯
向100mL的三口烧瓶中加入化合物534a(1g，6.7mmol),化合物534b(1.97g，6.7mmol),1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(490mg，0.67mmol),碳酸铯(4.4g，2mmol)，1,4-二氧六环(60mL)和水(6mL)，反应液用氩气置换数次，升温至70℃搅拌一小时，检测反应完全，后处理：将反应液倒入冰水(200mL)，水相用乙酸乙酯(3*100mL)萃取两次，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:(PE/EA)＝0～30％]，得到黄色固体目标化合物(化合物534c，900mg，产率47.8％)，LCMS[M+1]+＝282。
步骤2:化合物534d
2-氯-4-(1H-吡唑-4-基)嘧啶
向化合物534c(1g，3.56mmol)的二氯甲烷(80mL)和甲醇(8mL)溶液中加入盐酸-二氧六环(8.9mL，35.6mmol)溶液，反应液升温至40℃搅拌6小时，检测反应完全，后处理：反应液直接拉干，得到白色固体目标化合物(化合物534d，850mg，产率68％)，LCMS[M+1]+＝181。
步骤3:化合物534f
3-(4-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
向化合物534d(755.2mg，4.18mmol)的乙腈(150mL)溶液中加入化合物534e(1.255g，5.02mmol)和碳酸铯(4.08g，12.54mmol)。反应液升温至50℃搅拌过夜，检测反应完全。后处理：将反应液直接拉干，加入水和乙酸乙酯萃取，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:EA/PE＝0～50％]，得到白色固体目标化合物(化合物534f，136mg，产率9.3％)，LCMS[M+1]+＝350。
步骤4:化合物534g
2-氯-4-(1-(吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶
向化合物534f(136mg，0.39mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中加入盐酸-二氧六环(1.5mL，0.86mmol)溶液，反应液室温搅拌2小时，检测反应完全。后处理：将反应液直接拉干，得到白色固体目标化合物(化合物534g，97mg，产率93％)，LCMS[M+1]+＝250。
步骤5:化合物534i
2-氯-4-(1-(乙基磺酰基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶
向化合物534g(97.38mg，0.39mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(6mL)溶液中加入三乙胺(78.9mg，0.78mmol)和化合物534h(75.2mg，0.59mmol)，反应液室温搅拌2小时，检测反应完全。后处理：将反应液倒入水中，水相用乙酸乙酯(3*50mL)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:EA/PE＝0～50％]，得到白色固体目标化合物(化合物534i，70mg，yield 52.5％)，LCMS[M+1]+＝342。
步骤6:化合物534k
叔丁基-4-(4-((4-(1-(乙基磺酰基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H--吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸酯
向100mL的三口烧瓶中加入化合物534i(48.5mg，0.14mmol)，化合物534j(45.3mg，0.17mmol),醋酸钯(6.37mg，0.03mmol),4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(32.84mg，0.06mmol)，碳酸铯(92.46mg，0.28mmol)，1,4-dioxane二氧六环(8mL)，反应液用氩气置换数次，升温至100℃搅拌2小时，检测反应完全。后处理：将反应液拉干，加入乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:(二氯甲烷:甲醇＝10:1)/DCM＝0～50％]，得到白色固体目标化合物(化合物534k，59mg，产率50.5％)，LCMS[M+1]+＝573。
步骤7:化合物534
4-(1-(1-(乙基磺酰基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-4-基)-N-(1-(哌啶-4-基]-1H-吡啶-4-基]嘧啶-2-胺
向化合物534k(59.1mg，0.1mmol)的二氯甲烷(5mL)和甲醇(1mL)溶液中加入盐酸-二氧六环(0.52mL，2.07mmol)溶液，反应液室温搅拌两小时，检测反应完全。后处理：将反应液拉干，粗品通过制备纯化，得到白色固体目标化合物(化合物534，7.7mg，产率5.5％)，LCMS[M+1]+＝472.3。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.37(s,1H),8.53(s,1H),8.35(d,J＝5.0Hz,2H),8.16(s,1H),7.97(s,1H),7.57(s,1H),7.00(d,J＝5.1Hz,1H),5.20-5.09(m,1H),4.31(s,1H),3.84-3.79(m,2H),3.63(d,J＝6.3Hz,1H),3.53(d,J＝5.6Hz,2H),3.21-3.11(m,4H),2.77(t,J＝11.9Hz,2H),2.47-2.38(m,2H),2.03(d,J＝11.2Hz,2H),1.92(d,J＝11.1Hz,2H),1.22(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例2合成化合物535的一般方法(TDM-181135)
步骤1:化合物535c
2-氯-4-硝基吡唑嘧啶
向化合物535a(2g，0.013mol)，化合物535b(1.44g，0.013mol)的乙腈(24mL)溶液中加入化合物N,N-二异丙基乙胺(1.91g，0.01mol)，将反应溶液在室温下搅拌16小时。反应结束将混合物在减压下浓缩，向残余物中加入水(60mL)并用乙酸乙酯(3*30mL)萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥。滤液减压浓缩，残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝0～24/76)，得到白色固体化合物(化合物535c，713.3mg，23.6％收率)。LCMS[M+1]+＝226.0。
步骤2:化合物535d
2-氯嘧啶-4-基吡唑胺
向化合物535c(50mg，0.222mmol)，氯化铵(59.27mg，1.11mmol)和铁粉(61.89mg，1.108mmol)的四氢呋喃(7.4mL)的溶液中加入水(7.4mL)，将反应溶液在65℃下搅拌16小时。反应结束将混合物在减压下浓缩，向残余物中加入水(60mL)并用乙酸乙酯(3*30mL)萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥。滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚＝0～38/62)纯化，得到黄色固体产物(化合物535d，45mg，粗品)，LCMS[M+1]+＝196.0。
步骤3:化合物535f
1-(2-氯嘧啶-4-基)-4-吡唑基丙烷磺酰胺
向化合物535d(43.36mg，0.222mmol)的二氯甲烷溶液中加入三乙胺(67.29mg，0.67mmol)和化合物535e(63.17mg，0.443mmol)，将混合物在40℃下搅拌16小时。反应结束将混合物在减压下浓缩，向残余物添加水(30mL)，并用乙酸乙酯(40mL*3)萃取，合并有机层，用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，将滤液在减压下浓缩，将残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：含10％甲醇的二氯甲烷＝0～44/56)，得到白色固体化合物(化合物535f，42.9mg，收率64％)，LCMS[M+1]+＝302.1。
步骤4:化合物535h
叔丁基4-(4-(4-丙基磺酰胺基)-1H-吡唑-1-基嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸酯
向化合物535f(50mg，0.166mmol)，化合物535g(53.05mg，0.2mmol)的盐酸二氧六环(3mL)溶液中加入4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(40.5mg，0.07mmol)，醋酸钯(6.74mg，0.03mmol)和碳酸铯(107.52mg，0.33mmol)，将混合物在真空下脱气，用Ar置换，并将反应溶液在100℃下搅拌2h。反应结束将混合物在减压下浓缩，将残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：含10％甲醇的二氯甲烷＝0～60/40)，得到黄色固体产物(化合物535h，64.9mg，73.5％产率)，LCMS[M+1]+＝532.2。
步骤5:化合物535
2-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基嘧啶-4-基)-1H-吡唑-4-基丙烷磺酰胺
向化合物535h(64.90mg，0.122mmol)的溶液A(二氯甲烷:甲醇＝10:1)中加入盐酸二氧六环(0.61mL)，并将反应溶液在常温下搅拌2h。反应结束将混合物减压浓缩，残余物通过制备型(甲酸)纯化，得到白色固体化合物(化合物535，19.8mg。产率37.6％)。LCMS[M+1]+＝532.2。
1H NMR(400,DMSO)δ9.73(s,1H),8.48(d,J＝4.6Hz,1H),8.35(d,J＝5.8Hz,2H),7.95(s,1H),7.73(s,1H),7.56(s,1H),7.12(d,J＝5.4Hz,1H),4.36-4.27(m,2H),3.22(d,J＝12.6Hz,3H),3.11-3.06(m,2H),2.82(t,J＝11.8Hz,3H),2.06(s,2H),1.98(s,2H),1.70(dd,J＝15.1,7.5Hz,2H),0.96(t,J＝7.4Hz,4H).
以实施例2类似方法合成2-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-苯基)氨基嘧啶-4-基)-1H-吡唑-4-基丙烷磺酰胺(TDM-181136)，黄色固体(16.9mg，21％收率)；以及2-(2-(2-甲氧基-4-哌啶基苯基)氨基嘧啶-4-基)-4-基吡唑基丙烷-1-磺酰胺(TDM-181138)，白色固体(7.5mg，16.3％产率)。
实施例3合成化合物539的一般方法(TDM-181139)
步骤1:化合物539c
N-(氰基甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
向化合物539b(124mg，1.338mmol)的乙腈(5mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(472mg，3.65mmol)，搅拌混合物，然后加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(407mg，1.07mmol)和化合物539a(100mg，0.892mmol)，混合物在室温下搅拌2小时。减压浓缩混合物，通过硅胶色谱法(10％甲醇(NH3)的二氯甲烷/二氯甲烷＝0～80/20)纯化残余物，得到黄色油状产物(化合物539c，402mg，粗品)。LCMS[M+1]+＝151。
步骤2：化合物539e
1-(2-氯嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
向化合物539d(133mg，0.892mmol)和化合物539c(粗品)的乙腈(10mL)溶液中加入碳酸钾(370mg，2.676mmol)，将混合物加热至50度并搅拌过夜。将混合物加入水(100mL)，用乙酸乙酯(40mL*3)萃取，合并有机层，用盐水洗涤，硫酸钠干燥，滤液在减压下浓缩，残余物通过硅胶色谱法(乙酸乙酯/石油醚＝0～40/60)纯化，得到白色固体产物(化合物539e，91mg，产率38.8％)。LCMS[M+1]+＝249。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.28–9.22(m,2H),8.89(d,J＝5.5Hz,1H),8.34(s,1H),7.98(d,J＝5.5Hz,1H),4.34(d,J＝5.5Hz,2H).
步骤3:化合物539
N-(氰基甲基)-1-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
向化合物539e(45mg，0.171mmol)、化合物539f(45.4mg，0.206mmol)、醋酸钯(7.7mg，0.034mmol)、xantphos(40mg，0.068mmol)和碳酸铯(111mg，0.342mmol)的混合物中加入二氧六环(5mL)。将混合物在真空下脱气，用氩气置换数次，加热至100度并搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩，残余物通过硅胶色谱(10％甲醇的二氯甲烷/二氯甲烷＝0～40/60)和制备HPLC(流动相含千分之五的甲酸)纯化，得到棕色固体产物(化合物539，TDM-181139，7.6mg，9％产率)。LCMS[M+1]+＝448。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.25(t,J＝5.4Hz,1H),8.99(s,1H),8.50(d,J＝5.3Hz,1H),8.35(s,1H),8.26(s,1H),8.15(s,1H),7.66(t,J＝8.9Hz,1H),7.19(d,J＝5.3Hz,1H),6.66(d,J＝2.3Hz,1H),6.54(dd,J＝8.7,2.3Hz,1H),4.37-4.28(m,2H),3.81(s,3H),3.20-3.14(m,4H),2.53(s,4H),2.27(s,3H).
实施例4合成化合物540的一般方法(TDM-181140)
步骤1:化合物540c
叔丁基-4-(4-((4-(4-(氰基甲基)氨基甲酰基)-1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-基)氨基)-1H-吡啶-1-基)哌啶-1-甲酸酯
向化合物540a(100mg，0.381mmol)、化合物540b(122mg，0.457mmol)、醋酸钯(17mg，0.076mmol)、xantphos(88mg，0.152mmol)和碳酸铯(248mg，0.762mmol)的混合物中加入二氧六环(8mL)。将混合物在真空下脱气，用氩气置换数次，加热至100度并搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩，残余物通过硅胶色谱(10％甲醇的二氯甲烷/二氯甲烷＝0～45/55)纯化，得到黄色固体产物(化合物540c，146mg，77.8％产率)。LCMS[M+1-100]+＝393。
步骤2:化合物540
N-(氰基甲基)-1-(2-((1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)1H-吡唑-4-甲酰胺
在氩气氛围下向化合物540c(60mg，0.122mmol)在二氯甲烷(5mL)和甲醇(1mL)的溶液中加入溴化锌(220mg，0.976mmol)，将混合物在室温下搅拌2小时。减压浓缩混合物，通过制备HPLC(甲酸)纯化残余物，得到黄色固体产物(化合物540，TDM-181140，17.4mg，36.3％产率)。LCMS[M+1]+＝393。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ9.09(s,1H),8.50(d,J＝5.3Hz,1H),8.17(s,1H),8.12(s,1H),7.67(s,1H),7.28(d,J＝5.4Hz,1H),4.60(s,1H),4.34(s,2H),3.58(d,J＝13.0Hz,2H),3.28-3.17(m,2H),2.41-2.20(m,4H).
实施例5合成化合物545的一般方法(TDM-181145)
/>
步骤1:化合物545c
3-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-2，5-二氢吡咯-1-甲酸叔丁酯
向化合物545a(534.6mg，2.85mmol)，化合物545b(842.0mg，2.85mmol)，1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(104.63mg，0.14mmol)和碳酸钠(694.76mg，6.56mmol)的混合物中加入二氧六环(20mL)和水(5mL)，然后在真空下将混合物脱气，用氮气置换，将混合物加热到102℃并搅拌16小时。反应结束将混合物在减压下浓缩，向残余物中添加水(100mL)，并用乙酸乙酯(60*3)萃取，合并有机层，将滤液在减压下浓缩，将残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝0～44/56)，反应结束将混合物在减压下浓缩，残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝0～76/24)，得到黄色固体化合物(化合物545c，478.3mg，52.4％收率)。LCMS[M+1-56]+＝265.1。
步骤2:化合物545d
3-甲氧基-4-硝基苯基-2，5-二氢吡咯
向化合物545c(378.3mg，1.181mmol)的溶液A(二氯甲烷:甲醇＝10:1)(15mL)中加入盐酸二氧六环(5.91mL)，并将反应溶液在常温下搅拌2小时。反应结束将混合物在减压下浓缩，向残余物中添加水(60mL)，并用乙酸乙酯(30*3)萃取，合并有机层，用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥。将滤液在减压下浓缩，反应结束将混合物减压浓缩，得到棕色固体化合物(化合物545d，194.6mg，74.8％产率)。LCMS[M+1]+＝221.2。
步骤3:化合物545e
3-甲氧基-4-硝基苯基-2，5-二氢吡咯
向化合物545d(194.6mg，0.884mmol)的甲醇(12mL)溶液中加入甲醛(214.86mg)，该混合液先常温搅拌半小时，然后再加入醋酸硼氢化钠(749.1mg，3.53mmol)，反应液继续搅拌十分钟。反应结束将混合物在减压下浓缩，残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝0％～100％)，得到黄色固体化合物(化合物545e，85.3mg，产率41.2％)。LCMS[M+1]+＝235.2。
步骤4:化合物545f
2-甲氧基-4-(1-甲基吡咯烷-3-基)苯胺
在室温下向化合物545e(85.3mg，0.36mmol)的甲醇(3mL)溶液中加入钯碳(20mg)，然后在真空下将混合物脱气，用氢气置换，将混合物搅拌3小时。反应结束将混合物在减压下浓缩，将残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：含10％甲醇的二氯甲烷＝0～77/23)得到黄色固体化合物(化合物545f，29mg，产率38.7％)反应结束减压浓缩混合物，残余物直接用于下一步反应，LCMS[M+1]+＝207.2。
步骤5:化合物545
N-氰甲基-1-(2-甲氧基-4-(1-甲基吡咯烷-3-苯基)氨基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
向化合物545f(36.76mg，0.14mmol)，化合物545g(29mg，0.14mmol)的二氧六环(4mL)溶液中加入4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(32.4mg，0.06mmol)，醋酸钯(6.27mg，0.028mmol)和碳酸铯(91.23mg，0.28mmol)，将混合物在真空下脱气，用氩气置换，并将反应溶液在100℃下搅拌2小时。反应结束将混合物在减压下浓缩，向残余物中添加水(30mL)，并用乙酸乙酯(30*3)萃取，合并有机层，用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥。将滤液在减压下浓缩，反应结束将混合物在减压下浓缩，将残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：含10％甲醇的二氯甲烷＝0～100/0)，再通过制备型HPLC(甲酸)纯化，得到白色固体化合物(化合物545，6.5mg，10.7％产率)。LCMS[M+1]+＝433.2。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.28(s,1H),9.06(s,1H),8.57(d,J＝5.3Hz,1H),8.39(s,1H),8.26(d,J＝11.4Hz,2H),7.94(d,J＝8.1Hz,1H),7.27(d,J＝5.3Hz,1H),7.01(s,1H),6.94(d,J＝8.1Hz,1H),4.34(d,J＝5.2Hz,2H),3.86(s,3H),3.42-3.33(m,1H),3.04(t,J＝8.6Hz,1H),2.80(t,J＝6.9Hz,2H),2.64(t,J＝8.5Hz,1H),2.43(s,3H),2.36-2.22(m,1H),1.87(dd,J＝12.6,7.6Hz,1H),1.23(s,1H).
实施例6合成化合物546的一般方法(TDM-181146)
步骤1:化合物546c
1-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-吡咯-3-羧酸甲酯
在0℃下向化合物546b(1g，9.59mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中加入钠氢(384mg，9.59mmol)，反应液升温至室温搅拌30分钟，然后降温至0℃，将化合物546a(1.43g，9.59mmol)加入到上述溶液中，反应液室温搅拌3h。检测反应完全，后处理：将反应液倒入水中，加入乙酸乙酯(60mL*3)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:(EA:PE)＝0～15％]，得到白色固体目标化合物(化合物546c，987mg，yield 41％)，LCMS[M+1]+＝238。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.83(d,J＝5.7Hz,1H),8.39(s,1H),8.08(d,J＝5.7Hz,1H),7.88-7.79(m,1H),6.74(dd,J＝3.1,1.4Hz,1H),3.79(s,3H).
步骤2:化合物546d
1-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-吡咯-3-羧酸
将化合物546c(550mg,2.3mmol)的醋酸(17.5mL)和浓盐酸(8.75mL)溶液升温至50℃搅拌7小时，检测反应完全，后处理：将反应液倒入水中，水相用乙酸乙酯(2*100mL)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:(二氯甲烷:甲醇＝10:1)/二氯甲烷＝0～80％]，得到白色固体目标化合物(化合物546d，95.8mg，产率18.6％)，LCMS[M+1]+＝224。
步骤3:化合物546f
1-(2-氯嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
向化合物546d(64mg，0.29mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(163.1mg，0.43mmol),N,N-二异丙基乙胺(92.4mg，0.72mmol)和化合物546e(26.4mg，0.29mmol)，反应液室温搅拌2小时，检测反应完全。后处理：将反应液倒入水中，加入乙酸乙酯(3*100mL)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:(二氯甲烷:甲醇＝10:1)/二氯甲烷＝0～80％]，得到白色固体目标化合物(化合物546f，59.7mg，产率53.3％)，LCMS[M+1]+＝262。
步骤4:化合物546
N-(氰基甲基)-1-(2-((2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
向100mL的三口烧瓶中加入化合物546f(30mg，0.12mmol),化合物546g(30.5mg，0.14mmol),醋酸钯(5.16mg，0.02mmol),4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(26.6mg，0.05mmol)，碳酸铯(75mg，0.23mmol)，1,4-二氧六环(6mL)，反应液用氩气置换数次，升温至100℃搅拌2小时，检测反应完全。后处理：将反应液浓缩拉干，加入乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)分层萃取，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，拉干，得到的粗品制备纯化，得到白色固体目标化合物(化合物546，59mg，产率50.5％)，LCMS[M+1]+＝447.2。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.84(t,J＝5.6Hz,1H),8.42(d,J＝5.5Hz,1H),8.25(s,2H),8.17(s,1H),7.72-7.67(m,1H),7.64(d,J＝8.7Hz,1H),7.10(d,J＝5.5Hz,1H),6.74(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),6.65(d,J＝2.4Hz,1H),6.53(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),4.27(d,J＝5.5Hz,2H),3.81(s,3H),3.19-3.12(m,4H),2.49(d,J＝5.1Hz,4H),2.25(s,3H).
以实施例6类似方法合成N-(氰甲基)-1-(2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺(TDM-181147)，白色固体(11.8mg,产率24.6％)。
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实施例7合成化合物548的一般方法(TDM-181148)
步骤1:化合物548c
叔丁基-4-(4-((4-(4-(氰基甲基)氨基甲酰基)-1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸酯
向化合物548a(70mg，0.266mmol)、化合物548b(98mg，0.319mmol)，醋酸钯(12mg，0.053mmol)，xantphos(61.6mg，0.106mmol)和碳酸铯(173mg，0.532mmol)的混合物中加入二氧六环(5mL)。将混合物在真空下脱气，用氩气置换数次，加热至100度并搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩，残余物通过硅胶色谱(10％甲醇的二氯甲烷/二氯甲烷＝0～14/86)纯化，得到黄色固体产物(化合物548c，81mg，57.2％产率)。LCMS[M+1]+＝533。
步骤2:化合物548
N-(氰基甲基)-1-(2-((2-甲氧基-4-(哌啶-4-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺
在氩气氛围下向化合物548c(73mg，0.137mmol)在二氯甲烷(5mL)和甲醇(0.5mL)溶液中加入溴化锌(247mg，1.096mmol)，将混合物在室温下搅拌2小时。在减压下浓缩混合物，通过制备HPLC(甲酸)纯化残余物，得到无色油状的所需产物(化合物548，TDM-181148，6mg，10.1％产率)。LCMS[M+1]+＝433。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.46(s,1H),9.08(s,1H),8.57(d,J＝5.4Hz,1H),8.48(s,1H),8.40(s,1H),8.28(d,J＝6.2Hz,1H),7.98(d,J＝8.2Hz,1H),7.28(d,J＝5.4Hz,1H),6.96(s,1H),6.88(d,J＝8.2Hz,1H),4.34(d,J＝4.9Hz,2H),3.87(s,3H),3.67(s,1H),3.32(d,J＝11.6Hz,2H),2.92(t,J＝11.5Hz,2H),2.80(t,J＝11.5Hz,1H),1.98–1.76(m,4H).
实施例8:合成化合物552的一般方法(TDM-181152)
步骤1:化合物552c
叔丁基4-(4-((4-(3-((氰基甲基)氨基甲酰基)-1H-吡咯-1-基)嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌啶-1-甲酸酯
向化合物552a(80mg，0.306mmol)、化合物552b(112mg，0.367mmol)、醋酸钯(14mg，0.061mmol)、xantphos(70.8mg，0.112mmol)和碳酸铯(199mg，0.612mmol)的混合物中加入二氧六环(5mL)。将混合物在真空下脱气，用氩气置换数次，加热至100度并搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩，残留物通过硅胶色谱法(10％甲醇的二氯甲烷/二氯甲烷＝0～55/45)纯化，得到黄色固体产物(化合物552c，96mg，59％产率)。LCMS[M+1]+＝532。
步骤2:化合物552
N-(氰基甲基)-1-(2-((2-甲氧基-4-(哌啶-4-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
在氩气氛围下向化合物552c(96mg，0.181mmol)在二氯甲烷(10mL)和甲醇(1mL)中的溶液中加入溴化锌(325mg，1.445mmol)，将混合物在室温下搅拌2h。减压下浓缩混合物，通过制备HPLC(甲酸)纯化残余物，得到白色固体产物(化合物552，TDM-181152，20mg，25.6％产率)。LCMS[M+1]+＝432。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.91(t,J＝5.3Hz,1H),8.49(d,J＝5.5Hz,1H),8.40(s,1H),8.31(d,J＝6.7Hz,2H),7.94(d,J＝8.2Hz,1H),7.74(s,1H),7.19(d,J＝5.5Hz,1H),6.93(s,1H),6.85(d,J＝8.1Hz,1H),6.77(s,1H),4.28(d,J＝5.4Hz,2H),3.86(s,3H),3.66(s,1H),3.28(d,J＝11.7Hz,2H),2.87(t,J＝11.7Hz,2H),2.77(t,J＝11.8Hz,1H),1.89(d,J＝12.3Hz,2H),1.78(dd,J＝22.6,12.1Hz,2H).
以实施例8类似方法合成N-(氰基甲基)-1-(2-((1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)1H-吡咯-3-甲酰胺(TDM-181153)，类白色固体(8.5mg，产率，9％)；以及N-(氰甲基)-1-(2-((4-(哌啶-4-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基]-1H-吡咯-3-甲酰胺(TDM-181154)，白色固体(25.2mg，产率28.6％)。
实施例9:合成化合物555的一般方法(TDM-181155)
1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吡咯-3-羧酸甲酯
向化合物555a(500mg，2.73mmol)和化合物555b(341mg，2.73mmol)的乙腈(50mL)溶液中加入碳酸钾(1131.9mg，8.19mmol)，反应液升温至50℃搅拌过夜，检测反应完全。后处理：将反应液倒入水中，加入乙酸乙酯(2*50mL)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:TLC，PE/EA＝3:1，过柱时，PE/EA＝100:0-85:15]，得到白色固体目标化合物(化合物555c，510mg，产率68.72％)，LCMS[M+1]+＝272。
步骤2:化合物555d
1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吡咯-3-羧酸甲酯
将化合物555c(1.1g，4.04mmol)加入到醋酸(30mL)和浓盐酸(15mL)溶液中，反应液升温至50℃搅拌10小时，检测反应完全。后处理：将反应液倒入水中，水相用乙酸乙酯(2*100mL)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:TLC，二氯甲烷/甲醇＝10:1，过柱时，二氯甲烷/甲醇＝100:0-20:80]，得到白色固体目标化合物(化合物555d，315mg，产率30％)，LCMS[M+1]+＝258,260。
步骤3:化合物555f
1-(2-氯嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
向化合物555d(170mg，0.66mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(17mL)溶液中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(375.7mg，0.99mmol),N,N-二异丙基乙胺(212.5mg，1.65mmol)和化合物555e(61.2mg，0.66mmol)，反应液在室温下搅拌10分钟，检测反应完全。后处理：将反应液倒入水中，水相用乙酸乙酯(3*100mL)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:TLC，PE/EA＝10:1，过柱时，PE/EA＝100:0-50:50]，得到白色固体目标化合物(化合物555f，117mg，产率54％)，LCMS[M+1]+＝296,298。
步骤4:化合物555
1-(5-氯-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)-1H-吡咯-3-甲酰胺
向100mL的三口烧瓶中加入化合物555f(20mg，0.07mmol)，化合物555g(15mg，0.07mmol)，醋酸钯(3mg，0.01mmol),4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(15.6mg，0.03mmol)，碳酸铯(44mg，0.14mmol)，1,4-二氧六环(4mL)。反应液用氩气置换数次，升温至100℃搅拌2小时。检测反应完全，后处理：反应液浓缩拉干，残留物加入乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)分层萃取，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，拉干，得到的粗品制备纯化得到黄色固体目标化合物(化合物555，3.2mg，产率9.8％)，LCMS[M+1]+＝481,483。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.86(t,J＝5.6Hz,1H),8.71(s,1H),8.53(s,1H),8.16(s,1H),8.14(s,1H),7.53(s,1H),7.41(d,J＝8.7Hz,1H),6.73(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),6.63(d,J＝2.4Hz,1H),6.50(dd,J＝8.7,2.5Hz,1H),4.27(d,J＝5.5Hz,2H),3.78(s,3H),3.17–3.12(m,4H),2.47(d,J＝4.9Hz,4H),2.24(s,3H).
以实施例9类似方法合成N-(氰甲基)-1-(2-((2-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基-1H-吡咯-3-甲酰胺(TDM-181156)，白色固体(7.4mg，产率，16.8％)；1-(5-氯-2-((2-甲氧基-4-(哌啶-4-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基]-N-(氰甲基)-1H-吡咯-3-甲酰胺(TDM-181157)，白色固体(27.7mg，产率47％)；N-氰甲基-1-(2-甲氧基-4-甲基吡咯烷-3-苯基)氨基)嘧啶-4-基吡咯-3-甲酰胺(TDM-181158)，白色固体(6.2mg,3.4％产率)。
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实施例10:合成化合物559的一般方法(TDM-181159)
步骤1:化合物559c
2-氯-4-硝基吡唑嘧啶
向化合物559a(3g，0.02mol)、化合物559b(430.74mg，2.01mmol)的乙腈(36mL)溶液中加入化合物N,N-乙基二异丙胺(2.84g，0.03mol)，将反应溶液在常温下搅拌16小时。反应结束后将混合物在减压下浓缩，向残余物中加入水(100mL)，并用乙酸乙酯(3*50毫升)萃取，合并有机层，用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥。滤液减压浓缩，残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝0～76/24)，得到无色固体化合物(化合物559c，1.334g，29.6％收率)。LCMS[M+1]+＝226.1。
步骤2:化合物559e
叔丁基4-(4-(4-硝基吡唑-1-基)氨基嘧啶-1-氨基)-1H-吡唑-1-基哌啶-1-羧酸酯
向化合物559c(50mg,0.23mmol)、化合物559d(50.2mg,0.23mmol)的二氧六环(2mL)溶液中再加入4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(53.3mg，0.09mmol)，醋酸钯(10.3mg，0.046mmol)和碳酸铯(149.9mg，0.46mmol)，将混合物在真空下脱气，用氩气置换，并将反应溶液在100℃下搅拌2h。反应结束后将混合物在减压下浓缩，向残余物中加入水(30mL)，并用碳酸钾溶液调碱，再加入乙酸乙酯(3*20毫升)萃取，合并有机层。滤液减压浓缩，将残余物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝0～50/50)到黄色化合物(化合物559e，55.7mg，55.2％产率)，LCMS[M+1-56]+＝400.1。
步骤3:化合物559f
4-(4-(4-(4-氨基吡唑-1-基)氨基嘧啶-2-基)氨基-1H-吡唑-1-基哌啶-1-羧酸叔丁酯
向化合物559e(390.4mg，0.86mmol)的四氢呋喃(25mL)溶液中加入氯化胺(229.24mg，4.29mmol)、铁粉(239.35mg，4.29mmol)和水(25mL)，将混合物在65℃下搅拌6小时。反应结束将混合物过滤，减压下浓缩，向残余物中添加水(60mL)，并用乙酸乙酯(40*3)萃取，合并有机层，用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，将滤液在减压下浓缩，将残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：含10％甲醇的二氯甲烷＝0～43/57)，得到白色固体化合物(化合物559f，203.7mg，收率55.7％)，LCMS[M+1]+＝426.2。
步骤4:化合物559h
4-(4-(4-(4-(2，2-二氟环丙烷-1-甲酰胺基)-1H-吡唑-1-基氨基嘧啶)-1H-吡唑-1-基氨基哌啶
向化合物559g(34.4mg，0.28mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(107.2mg，0.28mmol)和N,N-二异丙基乙胺(36.4mg，0.28mmol)，将混合物在常温下搅拌反应10分钟。然后再加入化合物559f(80mg，0.19mmol)，将混合物在常温下搅拌反应1小时。反应结束将混合物过滤，减压下浓缩，向残余物中添加水(30mL)，并用乙酸乙酯(20*5)萃取，合并有机层，用盐水(3*30mL)洗涤，用硫酸钠干燥，将滤液在减压下浓缩，将残余物用硅胶柱层析纯化反应结束将混合物在减压下浓缩，将残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：含10％甲醇的二氯甲烷＝0～37/63)，得到黄色固体产物(化合物559h，84.3mg，86.6％产率)。LCMS[M+1]+＝530.3。
步骤5:化合物559
2，2-二氟-N-(1-2-(1-哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-氨基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)环丙烷-1-甲酰胺
向化合物559f(36.76mg，0.14mmol)的溶液A(二氯甲烷:甲醇＝10:1)(3mL)中加入盐酸二氧六环(0.38mL)，并将反应溶液在常温下搅拌2h。反应结束将混合物减压浓缩，残余物通过制备型HPLC(甲酸)纯化，得到白色固体化合物(TDM-181159，化合物559，18.1mg,49.5％产率)。LCMS[M+1]+＝430.1。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.94(s,1H),8.54(s,1H),8.40(d,J＝5.5Hz,1H),8.20(s,1H),7.76(s,1H),7.57(s,1H),7.22(d,J＝5.5Hz,1H),4.51(t,J＝11.1Hz,1H),3.51(dd,J＝7.8,3.6Hz,2H),3.21–3.12(m,2H),2.73–2.64(m,1H),2.38(s,2H),2.24(dd,J＝24.6,12.9Hz,2H),2.09(dt,J＝13.7,6.9Hz,1H),1.96–1.86(m,1H).
实施例11：合成化合物569的一般方法(TDM-181169)
步骤1:化合物569c
1-甲基-4-(4-硝基-1H-吡唑-1-基)哌啶
在氮气保护下向100mL的三口烧瓶中加入化合物569b(146.6mg，1.3mmol)，化合物569a(149.3mg，1.3mmol),三苯基膦(682mg，2.6mmol)，无水四氢呋喃(10mL)。随后降温至0℃加入偶氮二羧酸二异丙酯(0.46mL，2.6mmol)，反应液在室温下搅拌过夜。检测反应完全，后处理：将反应液倒入水中，加入乙酸乙酯(3*50mL)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，抽滤，拉干，得到的粗品过柱[洗脱剂:(二氯甲烷:甲醇＝10:1)/DCM＝0～40％]，得到黄色油状目标化合物(化合物569c，110mg，产率40.3％)，LCMS[M+1]+＝211。
步骤2:化合物569d
1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-胺
向化合物569c(120mg，0.57mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入钯炭(10mg)，反应液用氢气球置换数次，室温搅拌两小时，检测反应完全。后处理：将反应液抽滤，滤饼用甲醇洗涤，滤液浓缩拉干，得到白色固体目标化合物(化合物569d，83.7mg，产率81.5％)，LCMS[M+H]+＝181。
步骤3:化合物569g
4-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯
向一个100mL的三口烧瓶中加入化合物569e(500mg，3.36mmol)，化合物569f(988mg，3.36mol)，1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(254.80mg，0.34mmol)，碳酸铯(2189.3mg，6.72mmol),1,4-二氧六环(25mL)和水(2.5mL)。反应液用氩气置换数次，升温至70℃搅拌1小时，检测反应完全。后处理：将反应液倒入水中，用乙酸乙酯(3*400mL)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:(PE/EA)＝0～30％]得到白色固体目标化合物(化合物569g，588.1mg，收率62.4％)，LCMS[M+H]+＝281。
步骤4:化合物569h
叔丁基-4-(2-((1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)1H-吡唑-1-甲酸酯
向一个100mL的三口烧瓶中加入化合物569g(504.8mg，1.8mmol)，化合物569d(389mg，2.16mmol)，醋酸钯(80.8mg，0.36mmol)，4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(416.6mg，0.72mmol)，碳酸铯(1173mg，3.6mmol)，1,4-二氧六环(25mL)，反应液用氩气置换数次，升温至100℃搅拌两小时，检测反应完全。后处理：将反应液浓缩拉干，加入乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)，分层萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:(二氯甲烷:甲醇＝10:1)/DCM＝0-100％]，得到黄色固体目标化合物(化合物569h，225.8mg，产率29％)，LCMS[M+H]+＝425。
步骤5:化合物569i
N-(1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)-4-(1H-吡唑-4-)嘧啶-2-胺
向化合物569h(225.8mg，0.53mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入三氟乙酸(2.2mL)，反应液在室温下搅拌一小时，检测反应完全。后处理：将反应液倒入水中，加入乙酸乙酯(2*100mL)萃取两次，合并水相，并调pH至碱性，水相用乙酸乙酯(2*100mL)萃取两次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，拉干，得到白色固体目标化合物(化合物569i，172.5mg，产率92％)，LCMS[M+H]+＝325。
步骤6:化合物569
环丙基(4-(2-((1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-4-基)1H-吡唑-1-基)甲酮
向化合物569j(61.1mg，0.71mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(270mg，0.71mmol)，N,N-二异丙基乙胺(92mg，0.71mmol)和化合物569i(152.5mg，0.47mmol)。反应液升温至50℃搅拌2小时，检测反应完全。后处理：将反应液倒入水中，加入乙酸乙酯(3*100mL)萃取三次，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:(二氯甲烷:甲醇＝10:1)/DCM＝0-50％]，得到的粗品再通过甲醇重结晶，得到白色固体目标化合物(化合物569，11.7mg，产率9.2％)，LCMS[M+H]+＝393.2。
1H NMR(400MHz,)δ9.56(s,1H),9.34(s,1H),9.12(s,1H),8.54(s,1H),8.46(d,J＝5.1Hz,1H),8.04(s,1H),7.62(s,1H),7.28(d,J＝5.1Hz,1H),4.48(s,1H),3.57(d,J＝12.1Hz,2H),3.12(ddd,J＝12.3,7.8,4.6Hz,3H),2.85(s,3H),2.21(d,J＝31.1Hz,4H),1.35-1.12(m,4H).
实施例12：合成化合物570的一般方法(TDM-181170)
步骤1:化合物570c
1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吡咯-3-羧酸甲酯
向化合物570a(1.46g，8mmol)和化合物570b(1g，8mmol)的乙腈(100mL)溶液中加入碳酸钾(2.21g，16mmol)，反应液升温至50℃搅拌过夜，检测反应完全。后处理：将反应液倒入水(150mL)中，加入乙酸乙酯(2*200mL)萃取两次，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:TLC：PE/EA ＝3:1，过柱时，PE:EA＝100:0-85:15]，得到白色固体目标化合物(化合物570c，1.89g，产率87.5％)，LCMS[M+1]+＝272。
步骤2:化合物570d
1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吡咯-3-羧酸
向化合物570c(1.89g，6.95mmol)的醋酸(40mL)溶液中加入浓盐酸(20mL)，反应液升温至50℃搅拌15小时，检测反应完全。后处理：将反应液倒入水中，加入乙酸乙酯(2*100mL)萃取两次，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:(二氯甲烷:甲醇＝10:1)/二氯甲烷＝0～15％]，得到白色固体目标化合物(化合物570d，495mg，产率26.7％)，LCMS[M+1]+＝258，260。
步骤3:化合物570f
1-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N-甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺
向化合物570d(158.6mg，0.62mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(353.6mg，0.93mmol)，N,N-二异丙基乙胺(200mg，1.55mmol)和化合物570e(41.8mg，0.62mmol)。反应液在室温下搅拌10分钟，检测反应完全。后处理：将反应液倒入水中，加入乙酸乙酯(3*100mL)萃取三次，合并有机相，并用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:(二氯甲烷:甲醇＝10:1)/二氯甲烷＝0～15％]，得到黄色固体目标化合物(化合物570f，129.8mg，产率65％)，LCMS[M+1]+＝271，273。
步骤4:化合物570
1-(5-氯-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺
向一个100mL的三口烧瓶中加入化合物570f(104.8mg，0.39mmol)，化合物570g(88.7mg，0.46mmol)，醋酸钯(17.4mg，0.08mmol)，4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(89.6mg，0.16mmol)，碳酸铯(252.2mg，0.77mmol)，1,4-二氧六环(20mL)。反应液用氩气置换数次，升温至100℃搅拌两小时，检测反应完全。后处理：将反应液浓缩拉干，得到的粗品过柱，[洗脱剂:(二氯甲烷:甲醇＝10:1)/二氯甲烷＝0～50％]，得到的粗品再通过制备纯化，得到黄色固体目标化合物(化合物570，48.9mg，产率24％)，LCMS[M+1]+＝426.2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.79(s,1H),8.59(s,1H),8.16(s,1H),8.09(q,J＝2.4,2.0Hz,2H),7.56(dd,J＝3.3,2.3Hz,1H),7.54-7.46(m,2H),6.98-6.86(m,2H),6.73(dd,J＝3.3,1.7Hz,1H),3.08(dd,J＝6.4,3.6Hz,4H),2.74(d,J＝4.5Hz,3H),2.46(d,J＝4.9Hz,4H),2.23(s,3H).
以实施例12类似方法合成1-(5-氯-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-(环丙基甲基)-1H-吡咯-3-甲酰胺(TDM-181171)，黄色固体(65mg，产率，26％)。
实施例13:合成化合物577的一般方法(TDM-181177)
步骤1:化合物577c
2，5-二氯-4-(4-硝基吡唑-1-基)嘧啶
向化合物577a(1.02g，0.006mol)的乙腈(20mL)溶液中加入化合物577b(0.6g，0.0052mol)，再加入N,N-二异丙基乙胺(0.78g，0.006mol)。反应液升温至30℃搅拌3小时。LCMS[M+1]+＝260，检测反应完全。后处理：反应液浓缩拉干，粗品加乙酸乙酯(120mL)和水(60mL)分层，分出的有机相用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，得到的粗品过柱，[洗脱剂:EA/PE＝0～30％]，得到白色固体目标化合物(化合物577c，1.02g，产率65.4％)，LCMS[M+1]+＝260。
步骤2:化合物577d
1-(2，5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吡唑-4-胺
向化合物577c(917.80mg，3.53mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液中加入氯化铵(944.10mg，17.65mmol)和铁粉(985.64mg，17.65mmol)，再加入水(30mL)。反应液升温至65℃搅拌3小时。LCMS[M+1]+＝230.1，检测反应完全。后处理：抽滤，有机相加乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)分层，分出的有机相用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，得到的粗品过柱，[洗脱剂:EA/PE＝0～50％]得到黄色固体目标化合物(化合物577d，741mg，产率82％)，LCMS[M+1]+＝230.1。
步骤3:化合物577f
N-(1-(2，5-二氯嘧啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)丙烷-1-磺酰胺
在0℃向化合物577d(400mg，1.74mmol)的无水四氢呋喃(20mL)溶液中加入吡啶(275.07mg，3.48mmol)和化合物577e(488.80mg，3.43mmol)，反应液在室温下搅拌一小时，用N2置换数次，然后反应液升温至40℃搅拌一晚。LCMS[M+1]+＝336，检测反应完全。后处理：反应液浓缩拉干，粗品加乙酸乙酯(100mL)和水(50mL)分层，分出的有机相用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，得到的粗品过柱，[洗脱剂:EA/PE＝0～40％]得到黄色液体目标化合物(化合物577f，531mg，产率86％)，LCMS[M+1]+＝336。
步骤4:化合物577h
4-((5-氯-4-(4-丙基磺酰胺基)-1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-基氨基)-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
向化合物577f(100mg，0.297mmol)中加入化合物577g(79.10mg，0.297mmol)，醋酸钯(13.34mg，0.059mmol),4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(68.74mg，0.119mmol)和碳酸铯(193.53mg，0.594mmol),反应液用氩气置换数次，再加入无水1,4二氧六环(10mL)。反应液用氩气置换三次。升温至100℃搅拌二小时。LCMS[M-100]+＝466.2，检测反应完全。后处理：反应液加水(30mL)和乙酸乙酯(60mL)分层，分出的有机相用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，得到的粗品过柱，[洗脱剂:EA/PE＝0～50％]得到黄色液体目标化合物(化合物577h，41mg，产率24.39％)，LCMS[M-100]+＝466.2。
步骤5:化合物577
N-(1-(5-氯-2-(1-(4-哌啶基)-1H-吡唑-4-氨基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)丙烷-1-磺酰胺
在0℃向化合物577h(31.9mg，0.06mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入三氟乙酸(0.3mL)。反应液升温至室温后搅拌一小时。LCMS[M+1]+＝466.1，检测反应完全。后处理：反应液浓缩拉干后得到粗品，粗品再通过制备纯化得到黄色固体目标化合物(化合物577，19.8mg，收率70.82％)，LCMS[M+1]+＝466.1。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.99(s,1H),8.59(s,1H),8.29(d,J＝50.1Hz,2H),7.93(s,1H),7.77(s,1H),7.58(s,1H),4.39(s,1H),3.29(s,2H),3.13-3.07(m,2H),2.93(t,J＝11.1Hz,2H),2.17-1.95(m,5H),1.78-1.65(m,2H),0.97(t,J＝7.4Hz,3H).
实施例14:合成化合物579的一般方法(TDM-181179)
步骤1:化合物579c
苄基4-(5-((5-氯-4-(4-(丙基磺酰胺基)-1H-吡唑-1-基)嘧啶-2-基)氨基)噻唑-2-基)哌啶-1-甲酸酯
向化合物579a(39mg，0.117mmol)、化合物579b(37mg，0.115mmol)、醋酸钯(5mg，0.023mmol)、xantphos(27mg，0.047mmol)和碳酸铯(76mg，0.233mmol)的混合物中加入二氧六环(5mL)。将混合物在真空下脱气，用氩气置换数次，加热至100℃并搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩，残留物通过硅胶色谱法(10％甲醇的二氯甲烷/二氯甲烷＝0～25/75)纯化，得到棕色固体产物(化合物579c，40mg，55.4％产率)LCMS[M+1]+＝617。
步骤2:化合物579
N-(1-(5-氯-2-((2-(哌啶-4-基)噻唑-5-基)氨基)嘧啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)丙烷-1-磺酰胺
在0℃下把化合物579c(40mg，0.065mmol)溶于HBr-AcOH(2mL)中，将混合物在0℃搅拌30分钟。混合物在45℃减压浓缩，残余物通过制备HPLC(甲酸)纯化，得到黄色固体产物(化合物579，TDM-181179，7mg，22.3％产率)。LCMS[M+1]+＝483。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.68(s,1H),8.48(s,1H),8.37(s,1H),7.79(s,1H),7.41(s,1H),3.20(d,J＝12.2Hz,2H),3.16(s,1H),3.12-3.07(m,2H),2.85(t,J＝11.4Hz,2H),2.52(s,1H),2.09(d,J＝12.2Hz,2H),1.84(s,2H),1.71(dq,J＝14.9,7.5Hz,2H),0.96(t,J＝7.4Hz,3H).
测试例NUAK1/NUAK2激酶抑制剂的酶活性抑制检测
本申请涉及的嘧啶胺类小分子对NUAK1和NUAK2激酶抑制活性的效应采用了基于P81滤纸结合热点技术的激酶活性测试方法(Nat Biotechnol.2011,29:1039)，简述如下：
测试缓冲液体系含20mM Hepes(pH 7.5)，10mM MgCl2，1mM EGTA，0.01％ Brij35(L23聚氧乙烯月桂醚)，0.02mg/ml BSA(小牛血清白蛋白)，0.1mM Na3VO4，2mM DTT，1％DMSO。
测试步骤:
1.用新配制的测试缓冲液配制20μM的底物溶液，底物为CHKtide多肽片段(Sanchez Y.Science.1997,277:1497-1501)；
2.加入激酶并轻轻混匀(NUAK1的终浓度为10nM；NUAK2的终浓度为50nM)；
3.用声波移液技术(Echo550；纳升级)向上述激酶反应混合液加入溶于100％DMSO中的测试化合物，室温孵育5分钟；
4.加入33P标记的ATP(非标记ATP/标记ATP比例为25:1或2.5:1)；
5.室温孵育2小时；
6.通过P81滤纸结合热点技术检测激酶活性。
根据上述检测计算测试化合物对NUAK1/NUAK2的IC50，具体结果参见表1。
IC50计算采用S形剂量-反应曲线(可变斜率)得到的公式：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogEC50-X)*斜率，其中X是化合物浓度的Log值，Y是反应(激酶活性的抑制率)，Y随着浓度的升高从bottom沿S形曲线升到top。
表1本申请测试化合物对NUAK1/NUAK2的IC50(nM)
测试化合物 NUAK1 NUAK2
TDM-181134 122 622
TDM-181135 34 265
TDM-181139 474 991
TDM-181140 305 210
TDM-181146 260 602
TDM-181147 19 77
TDM-181152 977 未测试
TDM-181153 84 107
TDM-181154 58 239
TDM-181155 43 69
TDM-181156 607 未测试
TDM-181157 194 487
TDM-181158 394 未测试
TDM-181159 337 419
TDM-181169 209 495
TDM-181170 14 78
TDM-181171 9 50
TDM-181177 9 72
TDM-181179 6 42
从表1的结果可以看出，本申请的嘧啶胺类化合物对NUAK1/NUAK2均具有优异的抑制活性，是一种双靶点小分子激酶抑制剂，所述化合物对NUAK1/NUAK2的IC50可达到几nM/几十nM。因此，通过以上实验已经证明了本申请的嘧啶胺类化合物能够作为NUAK1/NUAK2抑制剂使用。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (20)

1.一种嘧啶胺类化合物，其特征在于，所述嘧啶胺类化合物为由如下所示的式I表示的化合物，或其立体异构体、互变异构体、同位素衍生物、水合物、溶剂化物、前药以及药学上可接受的盐；
其中，A为可被m个R3取代的苯基，或可被p个R4取代的5元杂芳基；
B为任选取代的3-10元环烷基或任选取代的3-10元杂环烷基；
A或B上的取代基选自卤素、氨基、羟基、硝基、氰基、巯基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C1-8烷基氧基、任选取代的C1-8烷基硫基、任选取代的C1-8烷基氨基的一个或多个；
D为X为N或CH，X为CH时，H可被R5或R6取代；
E为-C(O)-NHR7R8、-C(O)-R7R8、-NR7-C(O)R8、-NR7-S(O)2-R8、-任选取代的C3-8杂环烷基-S(O)2-R8、-任选取代的C3-8环烷基-S(O)2-R8，R8为任选取代的C1-8烷基、任选取代的C3-8环烷基、任选取代的C3-8环烷基C1-8烷基；环烷基或杂环烷基上的取代基选自卤素、氨基、羟基、硝基、氰基、巯基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C1-8烷基氧基、任选取代的C1-8烷基硫基、任选取代的C1-8烷基氨基的一个或多个；
R1、R7各自独立地为H、任选取代的C1-8烷基；
R2、R3、R4、R5、R6各自独立地为卤素、氨基、羟基、硝基、氰基、巯基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C1-8烷基氧基、任选取代的C1-8烷基硫基、任选取代的C1-8烷基氨基；
C1-8烷基上的取代基选自卤素、氨基、羟基、硝基、氰基、巯基中的一个或多个；
n为0、1或2，m为0、1、2、3或4，p、q、r分别为0、1、2或3。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，E为下式之一：
3.根据权利要求1-2所述的化合物，其特征在于，B为任选取代的3-6元杂环烷基。
4.根据权利要求3所述的化合物，其特征在于，B为任选取代的5-6元杂环烷基。
5.根据权利要求4所述的化合物，其特征在于，B为任选取代的哌啶基、任选取代的哌嗪基、任选取代的吡咯烷基。
6.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于，B为下式之一：
R9为卤素、氨基、羟基、硝基、氰基、巯基、任选取代的C1-8烷基、任选取代的C1-8烷基氧基、任选取代的C1-8烷基硫基、任选取代的C1-8烷基氨基；
R10为H或任选取代的C1-8烷基；
C1-8烷基上的取代基选自卤素、氨基、羟基、硝基、氰基、巯基中的一个或多个；
s、t分别为0、1、2、3或4，u为0、1、2或3。
7.根据权利要求6所述的化合物，其特征在于，B为下式之一：
8.根据权利要求1-7任一所述的化合物，其特征在于，A为任选取代的以下基团之一，
9.根据权利要求8所述的化合物，其特征在于，A为任选取代的苯基。
10.根据权利要求9所述的化合物，其特征在于，A被甲氧基取代，优选取代在氨基的邻位。
11.根据权利要求1-10任一所述的化合物，其特征在于，R2为氯，优选取代在氨基的对位。
12.根据权利要求1-11任一所述的化合物，其特征在于，所述式I表示的化合物为以下化合物之一：
13.根据权利要求1-12任一所述的化合物，所述药学上可接受的盐为甲酸盐。
14.根据权利要求1-13任一所述的化合物，所述同位素衍生物为氘代物。
15.根据权利要求1-14任一所述的化合物的制备方法，其包含以下步骤：
由式II化合物和式III化合物制备式I化合物；
或
当D为时，也可以由式IV与式II化合物制备式V化合物，再由式V化合物制备式I化合物；
任选地，制备过程中包含必要的保护和脱保护步骤；
其中，Y为离去基团，优选Y为卤素，更优选Y为Cl，其他各基团的定义同权利要求1-14中所定义。
16.一种药物组合物，其特征在于以权利要求1-14任一所述的化合物作为有效成分。
17.根据权利要求16所述的药物组合物，其特征在于包含药学上可接受的载体或赋形剂。
18.权利要求1-14任一项所述的化合物用于制备NUAK1或NUAK2抑制剂的用途。
19.权利要求1-14任一项所述的化合物用于制备药物的用途，其特征在于所述化合物通过抑制NUAK1或NUAK2用于预防或治疗以下疾病：神经精神类疾病、代谢性疾病、肿瘤、内脏纤维化疾病、皮肤纤维化疾病。
20.根据权利要求19所述的用途，其特征在于，所述疾病为帕金森氏病、阿尔茨海默病、糖尿病、高脂血症、肥胖、肝癌、白血病、淋巴瘤、肿瘤转移、肝硬化、肾纤维化、肺纤维化、心肌炎后遗症、硬皮病、瘢痕疙瘩、肥厚性瘢痕、或单独用于减轻外伤和手术后疤痕。
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